メチル化を利用したトランスジェニック生物を作製する方法およびシステム
本発明は、トランスポゾンを用いて外来遺伝子を効率よく細胞に導入する技術に関する。より詳細には、本発明は、トランスポゾンを含む配列をメチル化することによって、トランスポゾンの転移活性を飛躍的に向上させ、効率よくトランスジェニック生物を作製する技術に関する。メチル化は、ゲノムに組み込まれた後も保持されており、実際のゲノムへの遺伝子の組み込みにも利用することが可能になった。本発明を用いれば、従来のトランスポゾンを用いたトランスジェニック生物の作製方法よりも、格段に効率よく遺伝子を形質転換することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子。
【請求項２】
さらに、所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項２に記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項９】
前記宿主は、真核生物を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１０】
前記宿主は、哺乳動物を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
前記宿主は、げっ歯類を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
前記核酸分子が挿入されるゲノム上の位置においてトランスポザーゼが作用する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項１３】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する遺伝子カセットであって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、遺伝子カセット。
【請求項１４】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有するベクターであって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、ベクター。
【請求項１５】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１６】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１７】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１８】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１９】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２０】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２１】
前記細胞は、真核生物細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
前記細胞は、哺乳動物細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２３】
前記細胞は、げっ歯類細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２４】
前記核酸配列が挿入されるゲノム上の位置においてトランスポザーゼが作用する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２５】
ゲノム上に挿入される外来核酸分子に対してトランスポザーゼを作用させるための組成物であって、該組成物は、トランスポゾンをコードする核酸配列、および該外来核酸分子を含み、該トランスポゾンをコードする配列はメチル化されている、組成物。
【請求項２６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む細胞であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、細胞。
【請求項２７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３２】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３３】
前記細胞は、真核生物細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞は、哺乳動物細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３５】
前記細胞は、げっ歯類細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む組織であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、組織。
【請求項３７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項３６に記載の組織。
【請求項３８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項３６に記載の組織。
【請求項３９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項３６に記載の組織。
【請求項４０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項３６に記載の組織。
【請求項４１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項３６に記載の組織。
【請求項４２】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項３６に記載の組織。
【請求項４３】
前記組織は、真核生物組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４４】
前記組織は、哺乳動物組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４５】
前記組織は、げっ歯類組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む生物であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、生物。
【請求項４７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項４６に記載の生物。
【請求項４８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項４６に記載の生物。
【請求項４９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項４６に記載の生物。
【請求項５０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結される、請求項４６に記載の生物。
【請求項５２】
前記生物は、真核生物を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５３】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５４】
前記生物は、げっ歯類を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５５】
前記所望の遺伝子は、前記生物に由来しない、請求項４６に記載の生物。
【請求項５６】
トランスジェニック生物を作製するための方法であって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子を提供する工程；
Ｂ．該核酸分子で、所望の生物の生殖細胞を形質転換する工程；
Ｃ．該生殖細胞において該トランスポゾンをコードする核酸配列がメチル化している個体を選択する工程；
Ｄ．形質転換された該生殖細胞を用いて生物を再生する工程、
を包含する、方法。
【請求項５７】
前記生物は、真核生物を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
トランスジェニック生物を作製するための方法であって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子を提供する工程；
Ｂ．該核酸分子で、所望の生物の生殖細胞を形質転換する工程；ならびに
Ｃ．形質転換された該生殖細胞を用いて生物を再生する工程、
を包含する、方法。
【請求項６０】
前記生物は、真核生物を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項５９に記載の方法。。
【請求項６２】
前記生物は、げっ歯類を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
トランスジェニック生物を作製するためのキットであって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子；
Ｂ．トランスポザーゼ、を包含する、キット。
【請求項６４】
さらに、前記核酸分子およびトランスポザーゼの使用法を記載する説明書を含む、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子の、トランスジェニック生物の作製のための使用。
【請求項６６】
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント。
【請求項６７】
前記核酸配列は、外来遺伝子の少なくとも一部を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項６８】
前記核酸配列は、少なくとも一つの発現制御領域を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項６９】
前記発現制御領域は、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーからなる群より選択される、請求項６８に記載のフラグメント。
【請求項７０】
外来遺伝子の少なくとも一部をさらに含み、前記核酸配列は、該外来遺伝子の少なくとも一部をコードする配列と作動可能に連結される、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７１】
前記細胞は、動物由来である、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７２】
前記細胞が脊椎動物から得られたものである、請求項７１に記載の核酸フラグメント。
【請求項７３】
前記脊椎動物は、哺乳動物である、請求項７２に記載の核酸フラグメント。
【請求項７４】
前記哺乳動物は、霊長類またはげっ歯類である、請求項７３に記載の核酸フラグメント。
【請求項７５】
前記細胞のＤＮＡは、細胞ゲノム、エピソームおよびプラスミドからなる群より選択される、請求項６６に記載される核酸フラグメント。
【請求項７６】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列は、配列番号２０もしくは２１、またはその一部を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７７】
前記トランスポザーゼは、ＳＢタンパク質である、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７８】
前記トランスポザーゼは、配列番号３に対して少なくとも８０％のアミノ酸相同性を有する、請求項７７に記載の核酸フラグメント。
【請求項７９】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列が少なくとも１つの直列反復配列を含み、該直列反復配列は、配列番号２６に記載される塩基配列または該塩基配列に対して少なくとも８０％相同な塩基配列を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項８０】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列が少なくとも１つの直列反復配列を含み、該直列反復配列は、配列番号２２〜２５に記載される核酸配列からなる群より選択される、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項８１】
細胞中のＤＮＡに別のＤＮＡを導入するための核酸導入システムであって、該システムは：
Ａ）少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント；および
Ｂ）トランスポザーゼまたはトランスポザーゼをコードする核酸、
を含む、核酸導入システム。
【請求項８２】
前記トランスポザーゼは、ＳＢタンパク質である、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８３】
前記トランスポザーゼは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列またはその改変体を有するか、または前記トランスポザーゼをコードする核酸配列は、配列番号２に記載される核酸配列またはその改変体を有する、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８４】
前記トランスポザーゼをコードする核酸は、細胞ゲノムに組み込まれる、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８５】
プラスミドまたはウイルスベクターをさらに含み、該プラスミドまたはウイルスベクターは、前記核酸フラグメントをその一部として含む、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８６】
前記核酸フラグメントは、外来遺伝子をコードする配列の少なくとも一部を含む、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８７】
前記核酸フラグメントは、前記細胞の中に、粒子ボンバードメント；エレクトロポレーション；マイクロインジェクション；遺伝子導入試薬の利用；およびウイルスベクターの利用からなる群より選択される方法を用いて導入される、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８８】
トランスジェニック生物を生産するための方法であって、
核酸フラグメントおよびトランスポザーゼを多能性細胞に導入する工程であって、該核酸フラグメントは、少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメントである、工程；
該細胞を生物体へと成長させる工程；
を包含する、方法。
【請求項８９】
前記多能性細胞は、卵母細胞、胚細胞、卵および幹細胞からなる群より選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記生物は、げっ歯類または霊長類である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記生物は、マウスまたはラットである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
核酸を細胞中のＤＮＡに導入するための方法であって、
核酸フラグメントを細胞に導入する工程であって、該核酸フラグメントは、少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、該トランスポザーゼの存在下で細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメントである、工程、
を包含する、方法。
【請求項９３】
さらに、トランスポザーゼを前記細胞中に導入する工程を包含する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記トランスポザーゼは、配列番号３と少なくとも８０％の相同性を有する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
前記細胞は、前記トランスポザーゼをコードする核酸を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記トランスポザーゼをコードする核酸は、細胞ゲノムに組み込まれる、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記トランスポザーゼは、細胞中で安定に発現される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記トランスポザーゼは、誘導性プロモーターに制御下にあるように作動可能に連結される、請求項９５記載の方法。
【請求項９９】
前記核酸配列は、タンパク質をコードする、請求項９２に記載の方法。
【請求項１００】
前記核酸配列は、マーカータンパク質をコードする、請求項９２に記載の方法。
【請求項１０１】
細胞内の核酸配列を移動させるための方法であって：
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント、を含む細胞の中に、トランスポザーゼを導入する工程、
を包含し、該トランスポザーゼは、該細胞のＤＮＡ中の第一の位置から該ＤＮＡの第二の位置に該核酸配列を移動させる、
方法。
【請求項１０２】
前記細胞のＤＮＡは、ゲノムＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記第一の位置は、染色体外ＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記第二の位置は、染色体外ＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記トランスポザーゼは、前記細胞中に核酸として導入する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
細胞内の遺伝子を同定するための方法であって：
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント、およびトランスポザーゼを、細胞の中に導入する工程；
該細胞中のＤＮＡを、該核酸配列を切断することができる制限エンドヌクレアーゼで消化する工程；
該逆方向反復配列を同定する工程；
該逆方向反復配列に近い核酸の配列を決定する工程；および
該配列と配列情報データーベース内の配列情報と比較する工程、
を包含する、方法。
【請求項１】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子。
【請求項２】
さらに、所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項２に記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項９】
前記宿主は、真核生物を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１０】
前記宿主は、哺乳動物を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１１】
前記宿主は、げっ歯類を含む、請求項８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１２】
前記核酸分子が挿入されるゲノム上の位置においてトランスポザーゼが作用する、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項１３】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する遺伝子カセットであって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、遺伝子カセット。
【請求項１４】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有するベクターであって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、ベクター。
【請求項１５】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１６】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１７】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１８】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項１４に記載のベクター。
【請求項１９】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２０】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２１】
前記細胞は、真核生物細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
前記細胞は、哺乳動物細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２３】
前記細胞は、げっ歯類細胞を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２４】
前記核酸配列が挿入されるゲノム上の位置においてトランスポザーゼが作用する、請求項１４に記載のベクター。
【請求項２５】
ゲノム上に挿入される外来核酸分子に対してトランスポザーゼを作用させるための組成物であって、該組成物は、トランスポゾンをコードする核酸配列、および該外来核酸分子を含み、該トランスポゾンをコードする配列はメチル化されている、組成物。
【請求項２６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む細胞であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、細胞。
【請求項２７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項２６に記載の細胞。
【請求項２９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３２】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３３】
前記細胞は、真核生物細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３４】
前記細胞は、哺乳動物細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３５】
前記細胞は、げっ歯類細胞を含む、請求項２６に記載の細胞。
【請求項３６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む組織であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、組織。
【請求項３７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項３６に記載の組織。
【請求項３８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項３６に記載の組織。
【請求項３９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項３６に記載の組織。
【請求項４０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項３６に記載の組織。
【請求項４１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結されるか、または細胞内に導入されると該トランスポゾンに作動可能に連結され得る、請求項３６に記載の組織。
【請求項４２】
外来遺伝子を宿主内に導入するために使用される、請求項３６に記載の組織。
【請求項４３】
前記組織は、真核生物組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４４】
前記組織は、哺乳動物組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４５】
前記組織は、げっ歯類組織を含む、請求項４２に記載の組織。
【請求項４６】
トランスポゾンをコードする核酸配列、および所望の遺伝子をコードする核酸配列を有する核酸分子を含む生物であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、生物。
【請求項４７】
前記メチル化は、少なくとも、ＣＧ配列におけるＣにおいて存在する、請求項４６に記載の生物。
【請求項４８】
前記トランスポゾンはＤＮＡ型である、請求項４６に記載の生物。
【請求項４９】
前記トランスポゾンはＴｃ１／ｍａｒｉｎｅｒ型に属する、請求項４６に記載の生物。
【請求項５０】
前記トランスポゾンはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙを含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５１】
前記所望の遺伝子は、前記トランスポゾンに作動可能に連結される、請求項４６に記載の生物。
【請求項５２】
前記生物は、真核生物を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５３】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５４】
前記生物は、げっ歯類を含む、請求項４６に記載の生物。
【請求項５５】
前記所望の遺伝子は、前記生物に由来しない、請求項４６に記載の生物。
【請求項５６】
トランスジェニック生物を作製するための方法であって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子を提供する工程；
Ｂ．該核酸分子で、所望の生物の生殖細胞を形質転換する工程；
Ｃ．該生殖細胞において該トランスポゾンをコードする核酸配列がメチル化している個体を選択する工程；
Ｄ．形質転換された該生殖細胞を用いて生物を再生する工程、
を包含する、方法。
【請求項５７】
前記生物は、真核生物を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
トランスジェニック生物を作製するための方法であって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子を提供する工程；
Ｂ．該核酸分子で、所望の生物の生殖細胞を形質転換する工程；ならびに
Ｃ．形質転換された該生殖細胞を用いて生物を再生する工程、
を包含する、方法。
【請求項６０】
前記生物は、真核生物を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記生物は、哺乳動物を含む、請求項５９に記載の方法。。
【請求項６２】
前記生物は、げっ歯類を含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
トランスジェニック生物を作製するためのキットであって、
Ａ．トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子；
Ｂ．トランスポザーゼ、を包含する、キット。
【請求項６４】
さらに、前記核酸分子およびトランスポザーゼの使用法を記載する説明書を含む、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
トランスポゾンをコードする核酸配列を有する、単離された核酸分子であって、該核酸配列は、少なくとも１つのヌクレオチドがメチル化されている、単離された核酸分子の、トランスジェニック生物の作製のための使用。
【請求項６６】
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント。
【請求項６７】
前記核酸配列は、外来遺伝子の少なくとも一部を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項６８】
前記核酸配列は、少なくとも一つの発現制御領域を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項６９】
前記発現制御領域は、プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサーからなる群より選択される、請求項６８に記載のフラグメント。
【請求項７０】
外来遺伝子の少なくとも一部をさらに含み、前記核酸配列は、該外来遺伝子の少なくとも一部をコードする配列と作動可能に連結される、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７１】
前記細胞は、動物由来である、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７２】
前記細胞が脊椎動物から得られたものである、請求項７１に記載の核酸フラグメント。
【請求項７３】
前記脊椎動物は、哺乳動物である、請求項７２に記載の核酸フラグメント。
【請求項７４】
前記哺乳動物は、霊長類またはげっ歯類である、請求項７３に記載の核酸フラグメント。
【請求項７５】
前記細胞のＤＮＡは、細胞ゲノム、エピソームおよびプラスミドからなる群より選択される、請求項６６に記載される核酸フラグメント。
【請求項７６】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列は、配列番号２０もしくは２１、またはその一部を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７７】
前記トランスポザーゼは、ＳＢタンパク質である、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項７８】
前記トランスポザーゼは、配列番号３に対して少なくとも８０％のアミノ酸相同性を有する、請求項７７に記載の核酸フラグメント。
【請求項７９】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列が少なくとも１つの直列反復配列を含み、該直列反復配列は、配列番号２６に記載される塩基配列または該塩基配列に対して少なくとも８０％相同な塩基配列を含む、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項８０】
前記少なくとも１つの逆方向反復配列が少なくとも１つの直列反復配列を含み、該直列反復配列は、配列番号２２〜２５に記載される核酸配列からなる群より選択される、請求項６６に記載の核酸フラグメント。
【請求項８１】
細胞中のＤＮＡに別のＤＮＡを導入するための核酸導入システムであって、該システムは：
Ａ）少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント；および
Ｂ）トランスポザーゼまたはトランスポザーゼをコードする核酸、
を含む、核酸導入システム。
【請求項８２】
前記トランスポザーゼは、ＳＢタンパク質である、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８３】
前記トランスポザーゼは、配列番号３に記載されるアミノ酸配列またはその改変体を有するか、または前記トランスポザーゼをコードする核酸配列は、配列番号２に記載される核酸配列またはその改変体を有する、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８４】
前記トランスポザーゼをコードする核酸は、細胞ゲノムに組み込まれる、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８５】
プラスミドまたはウイルスベクターをさらに含み、該プラスミドまたはウイルスベクターは、前記核酸フラグメントをその一部として含む、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８６】
前記核酸フラグメントは、外来遺伝子をコードする配列の少なくとも一部を含む、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８７】
前記核酸フラグメントは、前記細胞の中に、粒子ボンバードメント；エレクトロポレーション；マイクロインジェクション；遺伝子導入試薬の利用；およびウイルスベクターの利用からなる群より選択される方法を用いて導入される、請求項８１に記載の核酸導入システム。
【請求項８８】
トランスジェニック生物を生産するための方法であって、
核酸フラグメントおよびトランスポザーゼを多能性細胞に導入する工程であって、該核酸フラグメントは、少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメントである、工程；
該細胞を生物体へと成長させる工程；
を包含する、方法。
【請求項８９】
前記多能性細胞は、卵母細胞、胚細胞、卵および幹細胞からなる群より選択される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記生物は、げっ歯類または霊長類である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記生物は、マウスまたはラットである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
核酸を細胞中のＤＮＡに導入するための方法であって、
核酸フラグメントを細胞に導入する工程であって、該核酸フラグメントは、少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、該トランスポザーゼの存在下で細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメントである、工程、
を包含する、方法。
【請求項９３】
さらに、トランスポザーゼを前記細胞中に導入する工程を包含する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記トランスポザーゼは、配列番号３と少なくとも８０％の相同性を有する、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
前記細胞は、前記トランスポザーゼをコードする核酸を含む、請求項９２に記載の方法。
【請求項９６】
前記トランスポザーゼをコードする核酸は、細胞ゲノムに組み込まれる、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記トランスポザーゼは、細胞中で安定に発現される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記トランスポザーゼは、誘導性プロモーターに制御下にあるように作動可能に連結される、請求項９５記載の方法。
【請求項９９】
前記核酸配列は、タンパク質をコードする、請求項９２に記載の方法。
【請求項１００】
前記核酸配列は、マーカータンパク質をコードする、請求項９２に記載の方法。
【請求項１０１】
細胞内の核酸配列を移動させるための方法であって：
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント、を含む細胞の中に、トランスポザーゼを導入する工程、
を包含し、該トランスポザーゼは、該細胞のＤＮＡ中の第一の位置から該ＤＮＡの第二の位置に該核酸配列を移動させる、
方法。
【請求項１０２】
前記細胞のＤＮＡは、ゲノムＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
前記第一の位置は、染色体外ＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記第二の位置は、染色体外ＤＮＡである、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０５】
前記トランスポザーゼは、前記細胞中に核酸として導入する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０６】
細胞内の遺伝子を同定するための方法であって：
少なくとも２つの逆方向反復配列の間に位置する核酸配列を含む核酸フラグメントであって、該逆方向反復配列は、トランスポザーゼに結合する能力を有し、該核酸フラグメントは、細胞内のＤＮＡに組込まれることができる、少なくとも一つのヌクレオチドがメチル化された核酸フラグメント、およびトランスポザーゼを、細胞の中に導入する工程；
該細胞中のＤＮＡを、該核酸配列を切断することができる制限エンドヌクレアーゼで消化する工程；
該逆方向反復配列を同定する工程；
該逆方向反復配列に近い核酸の配列を決定する工程；および
該配列と配列情報データーベース内の配列情報と比較する工程、
を包含する、方法。
【国際公開番号】ＷＯ２００５／００３３４２
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【発行日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１１４４８（Ｐ２００５−５１１４４８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１００９０
【国際出願日】平成１６年７月８日（２００４．７．８）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年１月１３日（２００５．１．１３）
【発行日】平成１８年８月１７日（２００６．８．１７）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１００９０
【国際出願日】平成１６年７月８日（２００４．７．８）
【出願人】（５０３３６０１１５）独立行政法人科学技術振興機構 (1,734)
【Ｆターム（参考）】
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