メニエール病治療薬
【課題】 糖又は糖アルコールを有効成分とする従来のメニエール病治療薬は独特の苦みがある上、大量に内服しなくてはならなかった。さらに、効果発現までに長時間を要し、長期投与に適さないなどの問題点があった。その理由を解明し、従来品の問題点を解決することにある。
【解決手段】 主薬である、糖又は糖アルコールの内耳に対する効果を、術側、正常側の双方で観測し、個々の糖又は糖アルコールの特性を考慮して、２種以上の糖又は糖アルコールを組み合わせることで、正常側への影響を小さくしつつ、術側には確実な治療効果を発現する治療薬の開発に成功した。このことにより、主薬の投与量を削減することができ、血漿浸透圧、血漿ＡＶＰの上昇を阻止して、内リンパ水腫減荷効果が安全に確実に発現することを確認した。糖又は糖アルコールを２種にすることで、単一の糖又は糖アルコールを大量投与する場合と比較し、主薬自体の副作用発現も阻止できた。
【解決手段】 主薬である、糖又は糖アルコールの内耳に対する効果を、術側、正常側の双方で観測し、個々の糖又は糖アルコールの特性を考慮して、２種以上の糖又は糖アルコールを組み合わせることで、正常側への影響を小さくしつつ、術側には確実な治療効果を発現する治療薬の開発に成功した。このことにより、主薬の投与量を削減することができ、血漿浸透圧、血漿ＡＶＰの上昇を阻止して、内リンパ水腫減荷効果が安全に確実に発現することを確認した。糖又は糖アルコールを２種にすることで、単一の糖又は糖アルコールを大量投与する場合と比較し、主薬自体の副作用発現も阻止できた。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は２種以上の単糖類、又はその糖アルコール、または２種以上の単糖類、少糖類、又はその糖アルコールと１種または２種以上の多糖類からなるメニエール病治療薬であって、単糖類、又はその糖アルコールの瀉下作用がある場合には多糖類によって解消する。と同時に、添加物の配合を極力少量にすることにより、確実な内リンパ水腫減荷効果を発現させ、さらに増強し、かつ全身及び局所における副作用を抑制したメニエール病治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
メニエール病の病因は未だ不明の部分が多いが、その病態が内リンパ水腫であることはメニエール病患者の剖検例の組織学的検討の結果から、広く知られている（非特許文献１）。この内リンパ水腫は、内リンパ液の産生過剰や吸収障害など、内耳の水代謝の異常によって内リンパ液が貯留することで形成され、耳鳴、難聴、めまい、耳閉感等のメニエール病の特徴的な症状が発現するとされる。したがって、この内リンパ水腫を減荷することがメニエール病治療の目標となると考えられている（非特許文献２）。
【０００３】
歴史的には、メニエール病の治療薬として、内リンパ水腫の減荷を目的として、尿素や浸透圧利尿剤であるグリセロール、マンニトールなどの糖アルコールが用いられてきた。糖及び糖アルコールの多くは、投与後浸透圧作用を発現することから、浸透圧利尿剤、浸透圧下剤として用いられてきた。浸透圧効果による脱水作用を有する薬剤として、瀉下作用を有するソルビトール、マンニトール、浸透圧利尿剤としてのマンニトール、グリセオール等がある。病態が内リンパ水腫であるメニエール病の治療においても、この脱水作用により水腫軽減が可能であると考えられた。すなわち、これらの薬剤は、経口投与後に内外リンパ液の浸透圧勾配を生じることから、内リンパ腔の容積が減少し、内リンパ腔虚脱効果、または内リンパ水腫減荷効果が生じるのではないかと考えられたのである。
【０００４】
しかし、現在まで糖アルコールを治療に用いようとして、多くの試行錯誤がなされているにもかかわらず、臨床応用されるだけの成果を得るには到っていない（非特許文献３、４、５）。
【０００５】
１９９０年代以降、水チャネルの存在が各臓器において次々と確認された。腎臓と比較的よく似た組織構造を有する内耳においても、内耳液の産生、吸収の機序解明に関する研究が進み、内耳にもアクアポリン（水チャネルタンパク質）の存在が確認された（非特許文献６）。近年、内耳の水代謝を司るものの１つとして、アルギニンバゾプレシンーアクアポリン２（arginine vasopressin-aquaporin 2）システムが注目されている（非特許文献７）。ところが、バゾプレシンＩＩ型受容体拮抗剤であるＯＰＣ３１２６０を全身投与したところ、期待されたほどの内リンパ水腫減荷効果は認められず、逆に正常耳に内リンパ水腫を形成する結果となった。これは強い利尿作用により脱水状態に陥ったためであると判った（非特許文献８）。
【０００６】
臨床的にはメニエール病患者では、急性期に抗利尿ホルモン(Antidiuretic hormone, ADH)のアルギニンバゾプレシン（arginine vasopressin、以後ＡＶＰ）の上昇が報告されている（非特許文献９）。ＡＶＰはストレスホルモンの１つであり、この結果は、メニエール病はストレス時に発症しやすいとされる疫学的事実によく符合する。また、プライエル反射正常のモルモットの皮下にミニポンプでＡＶＰ１ｍｕ／ｋｇ／分を連続投与したところ、明らかな内リンパ水腫が形成された(非特許文献１０)。表１に示すとおり、ＡＶＰ皮内投与量に比例して血漿ＡＶＰが上昇し、組織学的には内リンパ腔の面積が増加（内リンパ水腫の形成）した。ＡＶＰ１ｍｕ／ｋｇ連続投与の場合、血清ＡＶＰは正常人の血漿ＡＶＰの数倍（メニエール病の急性期の血清ＡＶＰとほぼ同値）に上昇し、極めて危険な状態になった (非特許文献１０)。
【０００７】
【表１】
【０００８】
上記のように血漿ＡＶＰを上昇させることにより、正常な内耳においても内リンパ水腫を生じた事実から考えて、内リンパ液の吸収障害など、何らかの素因を有するメニエール病患者においては、治療にあたっては、ストレスや脱水などによりＡＶＰが上昇しないよう、特に留意しなくてはならない。
【０００９】
元来、糖又は糖アルコールは浸透圧下剤として用いられてきたことからも推測されるように、糖又は糖アルコールは、一度に大量を経口投与すると消化器官において浸透圧勾配を生じ、下痢など胃腸症状を発現し、一般的な胃腸薬が効果を示さない重篤な下痢が生じる。この場合には脱水症状が続発し、抗利尿ホルモンのＡＶＰが１０〜１５倍にも上昇することが報告されている（非特許文献１１）。上記の通り、ＡＶＰ上昇は内リンパ水腫を形成することから、糖又は糖アルコールの止瀉に成功しなければ、その内リンパ水腫減荷効果は下痢に続発する脱水により相殺されると考えられる。したがって、糖又は糖アルコールをメニエール病治療に用いる場合には、下痢などの消化器症状を発現させないように、細心の注意が必要である。
【００１０】
特許文献１には、４単糖アルコールであるエリスリトール単味を有効成分とするメニエール病治療薬が記載されている。発明者らは、エリスリトールを添加したスポーツ飲料を大量に摂取したことで一過性の激しい下痢が発現したことが報告されていることから、止瀉を図らずには治療効果は到底期待できないと考えた。
【００１１】
研究の結果、エリスリトールに限らず、糖又は糖アルコールの多くは単味で大量投与すると、その瀉下作用ゆえに、内リンパ水腫減荷効果は発現しないことを見出した（特許文献２、３、４)。糖又は糖アルコールに多糖類を添加することで、糖又は糖アルコールの止瀉を実現でき、そのことで血漿ＡＶＰの急激な上昇を阻止して、その結果内リンパ水腫の減荷に成功したことを確認した。単糖類又はそのアルコール類に多糖類を添加した場合、投与後３時間で作用が発現し、迅速に作用発現するメニエール病治療薬の開発に成功した（特許文献２、３、４)。
【００１２】
さらに糖又は糖アルコールは浸透圧利尿剤としても作用し、脱水を助長して、結果としてＡＶＰが上昇する。腎臓は内耳とよく似た構造で、１０種類以上確認されているアクアポリンのうち、ほぼ共通のアクアポリンが存在し、水代謝を司っている（非特許文献１２）。したがって、内耳にのみ糖又は糖アルコールを作用させようとすると、手術により内耳に直接薬物を注入又は持続点滴するような局所投与以外は考えられない。内服による全身投与が患者にとって好ましいが、現時点では利尿効果のみを的確に遮断する方法はないので、止瀉を完全にすることは重要な意味がある。
【００１３】
糖又は糖アルコールには、各々に固有の最大無作用量（下痢のＥＤ５０）が知られており、０．２〜０．５ｇ／ｋｇの範囲にあって、これを超えなければ下痢は起こりにくいとされている。従来のメニエール病治療薬は、大量（１回量２１〜３０ｇ）を１日に３回内服するが、これはまさに最大無作用量を超える量を、治療のために毎回摂取していることを意味する。投与量を少なくして、確実な治療効果を発現させることが望まれている。ところが、メニエール病治療の場合に限らず、糖または糖アルコールを医薬として用いる場合に特徴的なことは、大量投与を必要とすることである。大量投与に伴い、副作用も心配される。単糖類又はそのアルコール類はそれぞれ、その分子の大きさや化学的、生物学的性質で消化吸収には違いがあり、消化器症状を含め、副作用は一様ではない。
【００１４】
例えば、炭素数が３の糖アルコールであるグリセロールは作用部位に到達するのが早く、投与後約２時間で内リンパ腔減荷作用が生じるが、約６時間後にはリバウンド現象（内リンパ水腫形成）が生じ、内服による治療効果は期待できない（非特許文献５）。また、全身的な副作用として肝障害が生じることが知られている。
【００１５】
炭素数４の糖アルコールであるエリスリトールは約９０％が小腸で吸収され、代謝されることなく尿に排泄される。残りの１０％が大腸に移動するが、大腸の微生物は発酵させることができず、そのまま排泄されると報告されている（非特許文献１４）。人体だけなく、腸内微生物によっても代謝されないことは「ノンカロリー」（最大カロリー０．２Kcal/g）という点で好ましいが、大量に服用した場合には、未分解の糖は全体量の１０％といえども重篤な下痢を引き起こすことになる。しかし、多糖類を添加することで止瀉に成功すれば、投与後２〜３時間で減荷作用を生じた（特許文献２）。作用部位に達するのが、グリセロールに次いで早いと思われる。さらに膨満感など、他の胃腸症状も生じず、リバウンド現象もなかった。（特許文献２)。
【００１６】
糖又は糖アルコールの多くがすぐれた甘味を有し、ショ糖の代替甘味料として用いれば、口腔内で細菌、酵素による有機酸の生成がほとんど無いので虫歯の発生原因とならず、抗ウ触効果（並びにウ蝕予防効果）が期待できる。中でも、炭素数５のキシリトールはすぐれた甘味を有し、さらにウ触を直接防止する作用が報告されているが、全身的な副作用として、イヌなどの動物では肝障害が報告されている（非特許文献１５）。
【００１７】
現在、メニエール病治療薬として我が国で臨床応用されている糖アルコールは、イソソルビド（１，２：３，６−ジアンヒドロ−Ｄ−ソルビトール）で炭素数が６の糖アルコールであるが、２カ所の架橋があるため、分子径が短い部位が存在し、同じ炭素数６のマンニトール、ソルビトールなどと比較すると生体膜を透過しやすいとされ、減荷作用発現に好ましいと考えられる(非特許文献１３)。
【００１８】
イソソルビトールは瀉下作用が比較的弱いもので、重大な副作用も報告されていないが、独特の苦みがある。イソソルビトール製剤（興和創薬（株）製：一般名イソソルビド）は、イソソルビトール含有率は７０％の水溶液である。１回服用量が３０ｍｌ以上で、１日３回服用する必要があり、服用量が大量であることから、服用に困難を感じる患者が多く、服用を中断する例もある。苦みを和らげるために甘味成分、風味を添加しているが、味の改善に必ずしも成功していない。
【００１９】
イソソルビトール製剤のさらに重大な問題点の１つは作用発現まで、経口投与後約６時間を要する（非特許文献１３）ことである。３単糖であるグリセロールが効果発現まで約２時間（非特許文献５）、４単糖であるエリスリトールは、止瀉に成功すれば３時間で効果が発現する（特許文献２）ことに比べて、作用発現まで長時間を要する。この理由は分子径や瀉下作用のみでは説明ができない。
【００２０】
減荷作用は浸透圧作用によるものであるから、作用の強さは投与する薬剤のモル数に比例するが、作用発現には作用部位に到達する必要があり、作用発現の速さは糖または糖アルコールの分子径、分子構造を考慮しなくてはならない。また、糖又は糖アルコールの大量投与に伴い、副作用の危険も高まるため、選択する場合には、その性質を詳細に検討しなくてはならない。さらに、添加物にも留意しなくてはならない。
【００２１】
そこで、従来のイソソルビトール製剤がなぜ作用発現までに長時間を要するのか、その原因を調べ、その問題点を改良して、より迅速に効果が発現し、且つリバウンド現象のない薬剤の開発を試みた。
【特許文献１】特開平１１−１８０８６３
【特許文献２】特許第３９４７７９６号
【特許文献３】特許４０８１１３１号
【特許文献４】特許４１０５７３２号
【非特許文献１】切替一郎、耳鼻咽喉科学
【非特許文献２】小松崎篤編、Client 21、
【非特許文献３】Angelborg C. et al: Hyperosmotic Solutions and hearing in Meniere’s disease. Am J Otol. 3: 200-2(1982)
【非特許文献４】Matsubara H et al: Rebound phenomenon in glycerol test. Acta Otolaryngol Suppl. 419: 115-22(1984)
【非特許文献５】Takeda T et al: The rebound phenomenon of glycerol-induced changes in the endolymphatic space. Acta Otolaryngol 119: 341-4(1999)
【非特許文献６】Sawada S et al： Aquaporin-1 (AQP1) is expressed in the stria vascularis of rat cochlea. 1216256016421_1.');181:15-9（2003）
【非特許文献７】Sawada S et al: Aquaporin-2 regulation by vasopressin in the rat inner ear. Neuroreport 13: 1127-9(2002)
【非特許文献８】Takeda T：The effects of V2 antagonist (OPC-31260) on endolymphatic hydrops. Hear Res. 183: 9-18, (2003)
【非特許文献９】Takeda T et el: Antidiuretic hormone (ADH) and endolymphatic hydrops. Acta Otolaryngol Suppl 519: 219-22，(1995)
【非特許文献１０】Takeda T et al: Endolymphatic hydrops induced by chronic administration of vasopressin. Hear Res. 140:1-6, (2000)
【非特許文献１１】Safwate A et al: Renin-aldosterone system and arginine vasopressin in diarrhoeic calves. Br Vet J 147：533-7,(1991)
【非特許文献１２】Kwon TH, Nielsen S. et al.: Physiology and pathophysiology of renal aquaporins. Semin Nephrol 21:231-8, (2001)
【非特許文献１３】Kakigi A et al：Time course of dehydratic effects of isosorbide on experimentally induced endolymphatic hydrops in guinea pigs. ＯＲL J Otorhinolaryngol Relat Spec 66：291-296 (2004)
【非特許文献１４】1216256016421_2.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Arrigoni+E%22%5BAuthor%5D, Human gut microbiota does not ferment erythritol. 1216256016421_3.');2005 Nov;94(5):643-6.
【非特許文献１５】1216256016421_4.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Dunayer+EK%22%5BAuthor%5D, 1216256016421_5.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Gwaltney%2DBrant+SM%22%5BAuthor%5D. Acute hepatic failure and coagulopathy associated with xylitol ingestion in eight dogs. 1216256016421_6.'); 229(7):1113-7. (2006).
【非特許文献１６】Robertson GＬ et al：The osmoregulation of vasopressin. Kidney International 10：25-37．(1976)
【非特許文献１７】Wise B L. et al： The effects of isosorbide on serum and cerebrospinal fluid osmolality and on the spinal fluid pressure in man. J Neuro-surg. 28:124-8(1968).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
糖又は糖アルコールを有効成分とする従来のメニエール病治療薬は、減荷効果発現までに長時間を要するものやリバウンド現象が生じるものであった。そこで、本発明が解決しようとする課題の第１は、従来の治療薬が作用発現までに長時間要する理由を突き止め、その改良を図ることにある。
【００２３】
従来のメニエール病治療薬は、大量（１回量２１〜３０ｇ）を１日に３回内服するが、これは、糖又は糖アルコールの最大無作用量（下痢のＥＤ５０）又はそれを超える量を、治療のために毎回摂取していることになり、特有の瀉下作用がみられる。さらに、２週間程度にわたって経口投与するため、糖又は糖アルコール固有の副作用のおそれがあった。さらに、大量投与を長期に続けると血漿浸透圧及び血漿ＡＶＰが上昇して、治療に逆行する。本願発明者は、多糖類を添加することで糖又は糖アルコールの止瀉を実現し、その結果水腫減荷作用を発現させることに成功した（特許文献２）が、正常側に虚脱（内リンパ腔容積の減少）又は水腫（内リンパ腔容積の増加）を生じる場合があり、その程度は糖又は糖アルコールにより程度に違いがあることも判った。
【００２４】
そこで、本発明が解決しようとする課題の第２は、各々の糖又は糖アルコールの性質を考慮して、出来る限りその投与量を削減することで、安全で、しかしながら確実に、且つ迅速に作用を発現し、長期投与にも適したメニエール病治療薬を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究の結果、従来のメニエール病治療薬は溶解補助剤、甘味料などの添加剤を安易に配合していた事実を突き止めた(［参考例１−１］)。添加剤の配合された薬剤は、術側には減価効果を生じるものの、実験動物の正常側には軽度ながら、内リンパ水腫を生じることを発見した(［参考例１−４］)。メニエール病は片側性のものが多いが、吸収障害など内耳に発症の素因を有すると考えられるので、実験動物の正常側に水腫を生じることは、患者の健側にも水腫を発症させるおそれがあり、危険である。
【００２６】
発明者らは、この理由を次のように考えた。すなわち、薬剤が血中に移行すると血漿浸透圧が上昇し、連動して血漿ＡＶＰが上昇する（非特許文献１６、１７）。浸透圧作用を有し、下痢や利尿を起こす糖又は糖アルコールを可能な限り削減することが好ましい。添加剤も主薬と同様、血中に移行すると血漿ＡＶＰを上昇させる。したがって、メニエール病の治療に直接関係のない添加剤は必要最小限にとどめるべきであることが分かった。そこで、例えば担体、賦形剤、希釈剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味・着色剤などを排除し、次のようにして、課題を解決した。
【００２７】
１）糖又は糖アルコールを複数種組み合わせることで単一の糖又は糖アルコールの投与量の削減に成功し、その結果、糖又は糖アルコール類の大量投与による全身的副作用の発現を回避した。２）内耳に与える作用の異なる糖または糖アルコールを、複数種組み合わせることで、好ましい治療効果が発現した。また、局所的な副作用の発現を回避し、正常耳に水腫、虚脱、又はリバウンドなどが発現することを阻止した。３）糖を複数種組合せ、一定範囲量の多糖類を1種又は２種以上配合することで、少量の添加で糖又は糖アルコールの止瀉に成功し、術側（ヒトの患側に相当）の内リンパ水腫減荷に加え、正常側（ヒトの健側に相当）の内リンパ水腫発現を阻止した。以上によって、確実で迅速な作用を有し、かつ副作用の少なく、安全で、長期投与にも適したメニエール病治療効果を実現して、本発明を完成した。
【００２８】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）２種以上の、単糖類又はその糖アルコールを含有するメニエール病治療薬。
（２）２種以上が２種である、（１）に記載のメニエール病治療薬。
（３）２種以上の、単糖類又はその糖アルコール、及び１種又は２種以上の多糖類を含有するメニエール病治療薬。
（４）２種以上が２種である、（３）に記載のメニエール病治療薬。
（５）２種の、単糖類又はその糖アルコールが、４単糖と６単糖である、（１）ないし（４）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
（６）２種の、単糖類又はその糖アルコールの一方が、イソソルビトールである、（１）ないし（５）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
（７）２種の、単糖類又はその糖アルコールが、エリスリトールとイソソルビトールである、（１）ないし（６）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のメニエール病治療薬は、１）単糖類又はその糖アルコール（以下、「糖アルコール類」ということもある。）を２種以上組み合わせること、さらに添加物はメニエール病治療に直接有効な成分に限定し、且つ添加量を必要最小限に抑えて、投与量を大幅に削減することにより、血漿浸透圧上昇を抑えた。結果として、従来のメニエール病治療薬が作用発現まで６時間要していたところを３時間に短縮した。また、従来の治療薬は投与後２〜６時間目に、正常耳に軽度の内リンパ水腫を生じるというメニエール病治療にとっては不都合な作用を示したが、この阻止にも成功した。さらにリバウンド現象の阻止にも成功した。
【００３０】
２）糖アルコール類を複数種組み合わせることにより、単独の場合に比べ、糖アルコール類自体の胃腸障害、肝障害など全身の副作用発現が阻止または軽減できる。３）糖アルコール類の瀉下作用に関しては、最大無作用量を超えないように糖アルコール類を組み合わせることで、止瀉を図るために添加する多糖類が少量で済む。
【００３１】
さらに、４）糖アルコール類に必要量の多糖類を添加することで止瀉を図れ、メニエール病治療の目標である内リンパ水腫の減荷を有効にかつ的確に達成することができたが、単一の糖アルコール類の場合は、ともすれば、正常側にも虚脱を生じる傾向が認められた。この不都合な作用の阻止に、２種以上の糖アルコール類を組み合わせることで成功した。
【００３２】
該配合物はゲル剤とすることによって嵩を圧縮することが可能であるため、保存・携行・服用が容易であり、さらに、ゲル剤を乾燥後、粉砕、造粒などによって粉剤、顆粒剤などの任意の製剤とすれば、保存・携行・服用が一層簡便となる。粉剤又は顆粒剤等の乾燥製剤は、服用時に少量の水を加えれば、直ちに服用のしやすいゲル剤（ゼリー状）とすることが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明において、２種以上の糖アルコール類としては、グリセロール、エリスリトール、キシリトール、キシロース、ソルビトール、イソソルビトール、マンニトールなどの単糖類又はそのアルコールが挙げられる。
【００３４】
その組成は、目的に応じて、種々の組合せと比率が可能である。例えば２種の糖を組み合わせる場合は５：９５〜９５：５、１０：９０〜９０：１０、２０：８０〜８０：２０、３０：７０〜７０：３０などとすることができる。
【００３５】
糖アルコール類の組合せは、以下に記す参考例から、糖アルコール類の分子の大きさにより作用発現の速さに差があると推測されることから、次のような組合せが考えられる。
【００３６】
例えば、３単糖のグリセロール（［参考例５］）は投与後２時間目に作用が発現するが、リバウンド現象が生じる（非特許文献５、［００１４］）。発明者はこの現象を以下のような過程によるものと考えた。分子径の小さいグリセロール分子は、２時間後には外リンパ腔に到達し、外リンパ液の浸透圧が上昇する。低張な内リンパ液から水分子が外リンパ腔に移動し、内リンパ腔容積は減少（減荷効果を発揮）する。その後、グリセロール分子は時間経過と共に内リンパ液と外リンパ液を隔てるライスネル膜を通過し、内リンパ腔に達して、内リンパ液が高張となる。そのため水が外リンパ腔から内リンパ腔に移動し、内リンパ腔容積は増加して、リバウンド（水腫の再形成）する。
【００３７】
６単糖のイソソルビトールは作用発現が遅く、３〜６時間目に減荷作用を発揮する（非特許文献１３、［参考例１−２］、［参考例１−４］）ことから、グリセロールとイソソルビトールを組み合わせると、作用発現が早く、効果は長時間持続し、且つリバウンド現象をも阻止できると予想される。イソソルビトールは分子が大きく、外リンパ腔に留まり続けるため、外リンパ腔の浸透圧が高く保たれる。その結果、グリセロールのリバウンド効果が相殺されるであろうと考えるからである。
【００３８】
同様に、３単糖のグリセロール、４単糖のエリスリトールに６単糖のイソソルビトール、ソルビトール、マンニトールなど、分子の大きさに着目した組合せが効果的であると考えられる。
【００３９】
さらに糖アルコールの瀉下作用の強弱には差があって、強力な瀉下作用を有する糖アルコールは、術側には内リンパ水腫減荷作用を示さず、正常側に内リンパ水腫を発現することが判った。多糖類添加により止瀉を図った後には、正常側における内リンパ腔水腫発現は阻止できるが、内リンパ腔虚脱が認められ、その作用には固有差があることが判った。
【００４０】
まず、瀉下作用が強いものは、エリスリトール（Ery、［参考例３−２−ｂ］）で、それに次いで瀉下作用が強いのはグリセロール（Gly、［参考例５］）、キシリトール（ＸＬ、［参考例６］）、キシロース（ＸＳ、［参考例７］）、他にソルビトール（ＳＯ［参考例９−２］）、マンニトール（［参考例９−１］）などで、弱いものにはイソソルビトール（ＩＢ、［参考例１−２］）がある。瀉下作用の弱いＩＢを除いて、血漿ＡＶＰの急激な上昇を招くため、正常側には内リンパ水腫を生じ、手術側において内リンパ水腫減荷効果は生じなかった（［参考例３−１］、［参考例１−４］）。
【００４１】
瀉下作用の強いEryの１回投与量を最大無作用量（ＥＤ５０）以下とするように削減し、瀉下作用の殆ど認められないＩＢを組合せることが好ましいと考えられる。他の組合せとしては、瀉下作用の強いEryに、Eryより瀉下作用の弱い３単糖のGly、５単糖のＸＬ、ＸＳ、６単糖のＳＯ、マンニトールなどを組み合わせる他に、瀉下作用の比較的強いGly、ＸＬ、ＸＳ、ＳＯ、マンニトールなどに、瀉下作用の殆ど認められない６単糖のＩＢの組み合わせも好ましいと考えられる。このようにＥＤ５０以下に止めることで、止瀉を図るために添加する多糖類の添加が少なくて済むことは好ましい。
【００４２】
＜止瀉を図った後の虚脱の違い＞
次に、止瀉を図ると糖アルコール類の作用は変化し、メニエール病治療効果を発揮する。４単糖のEryは３時間目に非常に強力な作用が発現するが、６時間目にはやや減弱する（特許文献２）。したがってEryの量を削減し、６単糖を組み合わせれば、作用が平均的に且つ持続的になると推測される。５単糖のＸＳはEryに次いで強い減荷作用（治療効果）を発現した。これはＸＳの消化管からの独特な吸収過程によるものとも考えられる。ＸＳ、ＸＬに、６単糖のＳＯ、マンニトール、ＩＢを組み合わせても、同様の効果が期待できる。
【００４３】
一方で、例えば４単糖のEryは止瀉を図ると、正常側にも虚脱が生じる傾向が認められた。止瀉に成功した場合、内リンパ腔虚脱効果（正常側）が強いものはEry（［参考例３−２−ｂ］）、ＸＳ（［参考例３］）、弱いものはＩＢ（［参考例１−２］、［参考例１−３］）があり、Gly（［参考例１］）、ＸＬ（［参考例６］）はその中間的な作用が認められた。たとえ水腫減荷作用が強くても、正常側に虚脱を生じることは好ましくない。
【００４４】
虚脱効果（正常側）が強い３炭糖のGly、４炭糖のEry、５単糖のＸＳと、比較的弱い６炭糖、例えばＩＢ、他にＳＯ、マンニトールを組み合わせることが好ましい。このようにして、治療効果発現を迅速にし、効果持続時間を適度に延長させ、同時に正常側への影響も相殺できると考えられる。
【００４５】
ＩＢは瀉下作用が少ないため、止瀉のための添加物を特に必要としない（［参考例１−２］、［参考例１−４］）。しかし、添加物を加えることで血漿浸透圧が上がり、それに同期して血漿ＡＶＰが上昇することで、ＩＢの減荷作用を相殺するおそれがあることが分かった（［参考例１−３］）。しかし、多糖類を添加しても、正常側に虚脱を生じない（［参考例３］、［参考例８］）ことは安全性が高いことを意味しており、好ましい。
【００４６】
正常側の水腫、又は虚脱は好ましくないと発明者が考える理由は以下のとおりである。発明者は実験動物において、開頭手術直後などに内リンパ水腫を観察してきた。これらは健常な（プライエル反射正常な）動物では、２日以内の比較的短時間で消失する。このことから推測されるように、健常人ではライスネル膜が伸張し、または軽度の水腫を形成することがあっても速やかに正常に復するものと思われるが、メニエール病患者は内リンパ液の吸収障害などの素因を有する可能性が高く、糖アルコール類の強い作用で内リンパ腔容積が大きく変化することは好ましくないと考えられるからである。イソソルビトールは正常側では虚脱効果が殆ど認められないにもかかわらず、術側（実験的内リンパ水腫形成術）では減荷効果が認められた（非特許文献１３）。これはライスネル膜（内リンパ腔と外リンパ腔を隔てる半透性膜）が大きく伸張していることなど、何らかの器質的、機能的変化が起きていることが関連しているのではないかと考えられる。
【００４７】
上記の要素、分子の大きさによる作用発現の早さ、持続時間の違い、瀉下作用の強弱による内リンパ腔容積の変化（減荷又は水腫形成）の違い、止瀉を図った後の内リンパ腔の容積変化（虚脱など）の違いを考慮して、例えば、瀉下作用の強く、止瀉を図ると虚脱現象を示すEryと弱いＩＢを組合せると患側には十分な減荷作用を発揮しつつ、且つ正常側には水腫を生じず、多糖類を加えた場合にも虚脱を生じない治療薬を得られる。他の組合せとしてはGlyとＸＬ、ＸＳ、ＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、EryとＸＬ、ＳＯ、マンニトールなど、ＸＬとＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、ＸＳとＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、ＳＯとＩＢ、マンニトールとＩＢなどが好ましい。
【００４８】
独特の苦みを有するＩＢに対して味の改良のため優れた甘味を有するGly、Ery、ＸＬ、ＸＳ、ＳＯ、マンニトールなどを配合することで、内服に適し、かつ治療効果も改善し、より好ましいものになる。
【００４９】
多糖類としては、キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガム、ペクチン、アルジネートナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、寒天、カラギーナンなどが挙げられる。また分子量の大きい多糖類（キサンタンガムなど）の方が少量で強力な止瀉作用を示す傾向が認められた。摂取量が少なくて済むため、摂取が容易で不都合が少ない。
【００５０】
キサンタンガムに代表されるグループには、他にグァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガムなどがあるが、これらは粘度の高いものほど止瀉作用が高い傾向が認められた。しかし、摂取して３〜５時間に便の量が約２分の１〜３分の１に減少し、形態も不整で大きさも小さくなる傾向があり、視診で腹部の膨満感、触診でガスの発生が認められ、ゴロゴロ感があることが推測された。このグループから２種以上を組み合わせると飛躍的に粘度が増すため、止瀉作用も向上した。この現象を利用し、複数種組み合わせることで、より少ない配合量で、十分な止瀉効果を発現させること、同時に、排便が減るという副作用を軽減することが可能となることを見出した。
【００５１】
ペクチンは比較的大量に添加しなくては十分な止瀉作用を現わさなかったが、整腸作用に優れており、便の量は何も投与されていない動物と同程度で、形態や性状も同じであった。大量に添加すると、便の表面はより滑らかになり、排便は容易で腹部の膨満感などの症状も認められなかった。ペクチンに代表されるグループには、アルジネートナトリウム、寒天、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カラギーナンなどがあり、粘度が高いものほど止瀉作用が強い傾向があった。
【００５２】
必要に応じてこれらの多糖類を１種または２種以上を添加して止瀉を図るが、２種以上組み合わせる場合、上記２つのグループから適宜選択して組み合わせ、添加することにより、止瀉と同時に整腸作用をはかることが可能になることを見出した。また、同じグループの中から複数種組み合わせる等、様々の組み合わせが可能で、添加量を少なくしつつ、場合によっては流れをよくすることもできることから、摂取しやすくするなどの優れた性質を新たに発揮させ、それを生かしつつ、同時に胃腸症状の軽減又は消失を目指すことが可能であることも判った。
【００５３】
多糖類の配合量は、糖アルコール類に対し１〜３０重量％、２〜２０重量％、３〜２０重量％であり、また上限値を１５重量％、１０重量％、５重量％として、１〜１５重量％、２〜１０重量％などとすることもできる。多糖類の配合量が上記範囲を外れると瀉下効果が十分に達成され難い場合も生じる。
【００５４】
糖アルコール類と多糖類の規定量を混合し、混合物に対し約１０〜約５５重量％、好ましくは約１５〜約５０％の精製水を加えて、常温又は必要に応じて加熱下に練和すると、練和物はゲル化しゼリー状になる。精製水の量が１０重量％より少ないと粘度が上がりすぎ、また、５５重量％を超えると希薄になりすぎて良質なゲルが得られないため好ましくない。このゲル剤を乾燥、粉砕すれば粉剤が得られる。また、上記練和物を押し出し造粒等の方法で造粒し、乾燥後製粒することによって顆粒剤が得られる。
【００５５】
乾燥、粉砕、及び造粒は、慣用の方法が何れも適用できる。製剤化に際し、好ましいゲル化を促進し、且つ離水の生じにくいゲルを得ることの出来る無機塩を添加することも可能である。
【００５６】
その他に、血漿浸透圧上昇を避けることは本発明の特徴の１つであるが、血漿浸透圧上昇を招かない範囲で、他の薬効成分、例えば制酸作用、整腸作用を有する薬物として乾燥水酸化アルミニウムゲル、天然ケイ酸アルミニウム、沈降炭酸カルシウムなど、内耳循環改善作用を有する薬物として交感神経β作動薬、血管拡張薬あるいは脳循環改善薬、迷路水腫の軽減を図る薬物として利尿剤、鎮静ないし制吐を図る薬物として鎮静剤、自律神経調節剤を配合することも可能である。その添加量の範囲は、糖アルコール類に対し５％以下、より好ましくは３％以下、さらに２％以下が好ましい。
【００５７】
糖アルコール類の投与量は、病態によるが成人１日あたり０．１５〜１．５ｇ／ｋｇ、好ましくは０．１５〜１．０ｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１５〜０．８５ｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．１５〜０．７ｇ／ｋｇであり、これを１ないし数回、例えば３回に分けて投与する。これは従来の６０％以下の量である。
【００５８】
本発明のメニエール病治療薬は、糖アルコール類と多糖類とを練和して得たゲル剤をそのまま服用してもよく、また、ゲル剤から定法で製剤化して得られる粉剤又は顆粒剤を服用してもよい。ゲル剤から得られる粉剤又は顆粒剤は、糖アルコール類原末に比較して嵩が約２０％以上好ましくは５０％以上減少するため、保存、携帯に有利であり、患者にとって服用の負担が軽減される。
【００５９】
また、粉剤又は顆粒剤に用時に約１０〜約５５重量％の水を加えれば、再ゲル化して一塊のゼリー状となるため、服用がさらに容易となる。本発明によるゲル剤は、糖アルコール類原末の飽和水溶液に対し嵩が約３分の１に激減するため、従来の液状製剤と比較しても服用上格段に有利である。
【００６０】
以下に、実施例、参考例を示して本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。実験計画をたてるに当たり、動物愛護が叫ばれる社会的事情にも配慮し、大量の動物を灌流固定（と殺）することは避けるよう工夫した。なお、糖アルコール類、または糖アルコール類に多糖類を配合したものを投与した動物は、一度のみの利用にとどめた。
【実施例１】
【００６１】
個々の糖アルコール類の特徴を考慮し、２種以上を組み合わせ、必要に応じて、多糖類を添加し、止瀉を図ることで、内リンパ水腫減荷効果を確実に発現させ、且つ正常側には内リンパ水腫や虚脱を生じさせないような薬物の開発を試みた。
【００６２】
瀉下作用が小さく、多糖類添加後に虚脱作用が殆ど認められないＩＢと、瀉下作用が強く、単味では正常側の内リンパ腔容積を増加させる傾向があり、多糖類添加後には虚脱作用が生じるEryを選び、多糖類としてPecを添加して投与した。ＩＢ、Eryとも、通常の４分の１の０．７ｇ／ｋｇ、Pecは０．１５ｇ／ｋｇとした。
【００６３】
モルモットの左側のみに内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。内リンパ嚢の閉鎖は内リンパ嚢の骨外部分を双極性電気凝固器（bipolar electrocoagulator）で焼却することで行った。内リンパ液の吸収に重要な役割を演じる内リンパ嚢を焼灼することで内リンパ液の吸収障害がもたらされ、実験的内リンパ水腫が形成される。この水腫は進行的に形成され、その大きさは約２週間ないし１ヶ月後にはほぼ一定となって、数ヶ月間持続する。術式の詳細は既報（非特許文献８）と同様である。内リンパ腔容積の計測は正常側の右側、術側の左側ともに行なった。
【００６４】
ＩＢ、Ery、多糖類の混和剤投与後、指定された時間まで、便の状態と腹部中心に全身状態を観察した。さらに、胃腸症状は灌流固定の際に、大腸、結腸、直腸の状態を精査し、便の形成状況については、１）便の固さと形、２）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態の２点について特に観察し、表２の基準により判定した。
【００６５】
【表２】
【００６６】
蒸留水を３日間以上投与した群の便の固さ及び性状を「正常便」：評価点３として、表２の１）に示すとおり、「やや軟便」：評価点２、「軟便」：評価点１、「泥状便」：評価点０とした。なお、モルモットの場合は飼料の形状から水様便はない。泥状便はヒトでは水様便に当たり、モルモットの軟便はヒトでは泥状便と軟便を含むものに相当する。開腹による消化器内部の詳細な観察と、体外に排出された便の観察を対比すると、便の固さのみの観察では下痢などの消化器症状は判定できないことが判った。したがって、便の固さに加え、量や形、大きさ、表面の滑らかさ等を評価し、腹部の視診、手指による触診で、腹部の膨満感やガスの発生、ガスの移動、さらに下腹部に圧を加えることで容易に排便するかどうかなど、詳細に検討し、評価した。
【００６７】
指定された時間、飼育後、灌流固定して、側頭骨を摘出した。トリクロロ酢酸で脱灰、アルコール系列で脱水、パラフィン・セロイジンの２重包埋を行った。薄切により得た蝸牛軸切片をヘマトキシリン・エオジン染色し、光学顕微鏡で蝸牛組織の観察を行い、ライスネル膜の長さと内リンパ腔の面積の変化を観察、計測を行った。各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を下記の計算式により積分して、蝸牛毎に膜の伸展率、内リンパ嚢の面積増加率を求めた。正常側の右側では内リンパ腔の容積変化から、内リンパ腔虚脱効果又は内リンパ水腫の程度を評価した。術側の左側では内リンパ水腫減荷効果を判定した。組織作成法、計測法、評価法の詳細は非特許文献５（Takeda T et al: Acta Otolaryngol 119: 341-4(1999)と同様である。
【００６８】
【数１】
【００６９】
【数２】
【００７０】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表３に示す。なお、動物群の番号は実験の過程でナンバリングした番号をそのまま用いたため、順不同である。
【００７１】
【表３】
【００７２】
Ery単味の第２０群では全動物が泥状便であったが、Ery+P0.5g/kg投与の第２４群では軟便または泥状便の動物は約半数の動物にとどまり止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定、特許文献２）。従来のイソソルビド製剤（以下、ＩＢ従来品、〈ＩＢ〉ともいう）投与の第１０群では約半数の動物が軟便または泥状便となり、ガスの発生など消化器症状が発現した。それに対し、ＩＢ＋Ｐ＊群は３時間後（第１４群）の便の固さは８匹が正常便で、消化管内での便の排列、ガスの発生など、他の消化器症状も有意な軽回が認められた（止瀉作用、消化器症状は各々Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【００７３】
EryとＩＢを混和、Pecを添加した第３３群（投与後３時間目）では、８匹中６匹が正常便となり泥状便の動物はいなかった。Ery単味の第２０群、〈ＩＢ〉単味の第１０群と比べ、有意な止瀉効果が認められた（各々、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。消化器症状は１匹を除いてごく軽度で、Ery単味の第２０群とのみ有意に軽回していることが判った（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。下痢症状を含め消化器症状は蒸留水を投与した対照群と有意差はなく、ほぼ正常に復したと言える。投与後６時間では全動物が正常な固さの便となったが、便の間隔は半数の動物が一定であって、１匹には消化器症状は依然としていくらか残っていることが判った。
【００７４】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
【００７６】
止瀉を図るためEryにPecを添加した第２４群は、正常側に虚脱を生じる動物が多かったが、ＩＢとEryを混和した第３３群（３時間後）は軽度の虚脱が生じただけであった。第２４群と第３３群の間には有意差はないが、これは第２４群の内リンパ腔容積変化のバラツキが大きいためである。第２４群では、８耳中３耳の内リンパ腔容積が約１０％増加し、水腫を形成したが、その他は、５耳が５〜１０％減少した。１５％減少した例も２耳あり、バラツキが大きかった。対照群との比較では、虚脱を起こす傾向が認められた（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）（本願明細書、参考例［０１５０］）。第２４群では、膜の伸展が対照群と比して著しい（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。一方EryとＩＢを混和した第３３群は対照群と比して膜の伸展に有意差はない。このことは内耳に浸透圧効果が生じる際に緩やかに、且つ一定の作用が生じたことを意味し、非常に好ましい。なお、第３３群と第２４群の膜の伸展度は有意に小さかった（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。
【００７７】
〈ＩＢ〉の第１０群は対照群（蒸留水）と比べ、正常側に水腫を形成した（有意差は０．０５、ｔ−検定）が、第３３群は改善した（有意差は０．０１、ｔ−検定）。この効果は投与後６時間後の第３４群も持続していた。
【００７８】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
モルモットの左側のみに内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。内リンパ液の吸収に重要な役割を演じる内リンパ嚢を焼灼することで内リンパ液の吸収障害がもたらされ、実験的内リンパ水腫が形成される。計測は、Ｂ）と同様に行い、その結果を表５、図１に示す。なお、術側の結果を示す場合には動物番号にＬ（左側を意味する）をつけた。閉鎖術による実験的水腫の形成程度は数％から百数十％とバラツキが大きく、膜の伸展率、面積増加率の平均±標準偏差を比較することでは糖アルコールの効果、その経時変化などを検討することには困難がある。図１は横軸に膜の伸展率、縦軸に面積増加率をとり、各動物群毎に術側の２変数の散布図と回帰直線を示したものである。内リンパ水腫が生ずると、内リンパ腔の体積が増加し、ライスネル膜が伸展する。蒸留水を投与した第１Ｌ群（術側）では、この両者の間に統計学的に１次相関が存在すると推計される。薬剤投与により水腫の減荷が起こると、膜が伸展しているにもかかわらず、内リンパ腔の面積増加が少なくなり、回帰直線が下方に移動することになる。
【００７９】
【表５】
【００８０】
減荷作用の強いEry＋Pec群（第２０Ｌ群）は対照群と比べ強い減荷作用を示した（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。ＩＢ＋Ｐ＊群（第１４Ｌ群）は比較的緩やかな減荷作用を示した（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。またPecを添加した第２４群はEryのみの第２０群と比較すると強力な減荷作用が認められた（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。Pecを添加した第１４Ｌ群と従来品の第１０Ｌ群の減荷作用の間には有意差が存在した（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３３Ｌ群（ＩＢ＋Ery＋Pec、３時間）は対照群と比較し、有意に内リンパ水腫減荷作用が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３４Ｌ群（６時間後）では３時間後とほぼ同様の減荷作用が持続した。なお、減荷作用は第１４Ｌ群（ＩＢ＋Ｐ＊）より強く、有意差が存在した（Ｐ＜０．０５、ＡＮＣＯＶＡ）。しかし、第２４Ｌ群（Ery＋Pec）より弱かった（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。しかし、糖アルコールの投与量を半減（Eryの投与量は第２４群の４分の１、ＩＢの投与量は第１０群の４分の１）したにもかかわらず、十分な減荷作用を発現している点で優れている。
【００８１】
このようにEryとＩＢを混和することにより、糖アルコール類の投与量を削減し、添加物は止瀉を図るもののみに限定することによって、正常側には影響を殆ど与えず、術側には十分な水腫減荷効果を発揮する治療薬の開発に成功した。特に好ましいのは、膜を伸展させないことで、一定の効果が確実に発現したことを意味する。さらに単味の場合よりも多糖類の添加が少なくて良いことである。
【００８２】
［参考例１：従来のイソソルビド製剤についての検討］
現在我が国で臨床に用いられている治療薬はイソソルビトール（興和創薬（株）製：一般名イソソルビド、以下、ＩＢ従来品、〈ＩＢ〉ともいう）で、表示によるとイソソルビトール含有率は７０％の水溶液である。この１回服用量は３０ｍｌで、イソソルビトールの含有量は２１ｇである。この溶液はイソソルビトールを安定に溶解させるため、溶解補助剤、安定化剤が添加され、さらに内服しやすい味に整えるため甘味料、香料などが添加されていると思われる。
【００８３】
イソソルビド製剤とＩＢ単味の水溶液の内リンパ容積に対する影響を調べ、比較した。
【００８４】
［参考例１−１：ＩＢ従来製剤の添加物について］
イソソルビトール２１ｇを蒸留水に溶解させ、安定的に溶解させるためキサンタンガムを必要量添加して、３０ｍｌとした。この水溶液の重量を〈ＩＢ〉３０ｍｌの重量と比較した。
処方１
イソソルビトール ２１ｇ
キサンタンガム ０．１５ｇ
蒸留水
３０ｍｌ
【００８５】
処方１の水溶液の重量は３４．７４ｇで、一方〈ＩＢ〉３０ｍｌの重量は３６．６７ｇであった。添加物の重量は１．９３ｇ（約９．２重量％）と判った。糖アルコール類は消化管から吸収され、血中に移行する。その結果血漿浸透圧が上昇し、その上昇にほぼ比例して血漿ＡＶＰが上昇する（非特許文献１６）。添加物も血漿浸透圧を上昇させ、血漿ＡＶＰの上昇が続発する。
【００８６】
〈ＩＢ〉の問題点を詳細に検討し、合わせて添加物が本来の目的である内リンパ水腫減荷効果にどのような影響を与えるのかを調べた。イソソルビトールなど糖アルコール類投与後、胃腸症状は灌流固定の際に、大腸、結腸、直腸の状態を精査し、便の形成状況については、１）便の固さと形、２）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態の２点について特に観察し、表２の基準により判定した。
【００８７】
［参考例１−２：イソソルビトール（ＩＢ）のみを投与した場合］
モルモット５０匹を６群に分け、各群に次に示すように薬物の投与を行った。ＩＢの投与量は実験的内リンパ水腫動物の減荷に有効な量である２．８ｇ／ｋｇ（非特許文献１３）とした。これは、メニエール病患者に投与される２１〜３０ｇ／回に相当すると考えられる。ＩＢ水溶液は１回投与量が８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１群：対照群 蒸留水 ３時間後
第２群：ＩＢ２Ｈ群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ ２時間後
第３群：ＩＢ３Ｈ群 同 ３時間後
第４群：ＩＢ４Ｈ群 同 ４時間後
第５群：ＩＢ６Ｈ群 同 ６時間後
第６群：ＩＢ１２Ｈ群 同 １２時間後
【００８８】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表６に示す。
【００８９】
【表６】
【００９０】
便の固さは灌流時点に排出された便と直腸部分の便を観察し、評価した。
対照群はすべて正常便であった。ＩＢ２Ｈ群は直腸付近では正常な便が形成されていたが、次第に軟便に移行していた（便の固さ、配列は各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。大きさは不整、間隔もバラバラで不定になっており、不快な胃腸症状の発現が推定された。３、４、６時間後に下痢は重篤になり（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）、便の配列も不規則になった（いずれもＰ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。便の間隔が開いた箇所には、腸管内への穿刺により、ガスの発生が認められた。ＩＢ１２Ｈ群では全動物でほぼ正常な固さの便が形成されていた。
【００９１】
以上から、ＩＢ投与による下痢及び胃腸症状は２〜４時間で重篤なものとなり、６時間後も継続しているが、１２時間後にはおおよそ正常に復することが判った。
【００９２】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各群の正常側における膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を表７に示し、比較検討した。
【００９３】
【表７】
【００９４】
投与後２時間後には内リンパ水腫が形成され、増加率が約１２％を超えるものが８匹中７匹となった（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。しかし、３時間後には対照群と同等程度のものが３匹、５〜８％の虚脱（容積の減少）が認められるものが３匹、容積増加率が約１４％のものが２匹と、内リンパ腔の容積にはバラツキが大きかった。結果として対照群との有意差は認められなかったが、ＩＢ２Ｈ群（第２群）と比較すると容積は有意に減少しており（各々、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、ＩＢによる減荷効果が発現したと言える。４時間後には内リンパ腔の容積の平均は再び増加するが、対照群と比べ、有意差はなかった。同様の状態が１２時間後まで続いた。一方ライスネル膜は２時間目、４時間目で有意に伸展していた（Ｐ＜０．０５）。
【００９５】
ＩＢ単味を２ｇ／ｋｇ（５０％水溶液）内服した場合、内服直後から血清浸透圧が上昇し始め、その後４０ないし９０分後に１７〜３０ｍOsm／liter上昇してピークになり、約６〜７時間で元に復する（非特許文献１７）。Becker（Becker B：Isosorbide: An oral hyperosmotic agent. Arch. Ophthalmol. 78:147-50.）も同様に、経口投与後１〜２時間後に１９〜３０ｍOsm／liter上昇すると報告している。非特許文献１６及び表１（非特許文献１０）を考え合わせると、明らかな水腫が形成されるに十分な上昇である。一方脳脊髄液（以下、ＣＳＦ）浸透圧の上昇は３例のみの観察結果であるが、１〜２時間後から上昇し始め４時間後も高い値を保っている（非特許文献１７）。
【００９６】
表７に示すとおり、経口投与後２時間で内リンパ水腫が形成されたことは、血漿浸透圧と同期して血漿ＡＶＰが上昇したためであると考えられる。また、内耳の構造は、血液脳関門に似た関門が存在するが、ＣＦＳの浸透圧が投与後２時間目以後に上昇し始めること、及び分子の大きさを考慮すると３時間目以降に内リンパ腔虚脱効果が発現することは当然と言える。
【００９７】
［参考例１−３：イソソルビトール（ＩＢ）単味を大量投与した場合］
グリセロールが２時間後に正常側の内リンパ腔容積を減少（虚脱）させる（非特許文献５）にもかかわらず、ＩＢの作用は明らかでないのは、イソソルビトールの投与量が少ない可能性もあると考えた。そこで、ＩＢの量をグリセロール検査に用いられるグリセロールと等しいモル数になるように、８．５ｇ／ｋｇ、さらに倍量の１７ｇ／ｋｇに増量して、消化器症状と正常側の内リンパ腔の容積変化を観察した。結果を表８、９に示す。
【００９８】
【表８】
【００９９】
【表９】
ＩＢ＊:イソソルビトール８．５ｇ／ｋｇ
ＩＢ＊＊:イソソルビトール１７．０ｇ／ｋｇ
【０１００】
ＩＢを増量することにより、半数以上の動物に軟便、泥状便の重度の下痢の症状が認められ、便の間隔も不整になった（いずれも、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＩＢの投与量に比例して症状は重篤になった。腸内にガスの貯留も認められた。内リンパ水腫は蒸留水投与群、ＩＢ通常量投与群（第３群）と比較して著明になった（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。血漿浸透圧が上昇した結果であることが推測され、安全性確保のため、投与量の削減が必要であることは歴然であった。
【０１０１】
［参考例１−４：イソソルビトール従来品を投与した場合］
正常な便をしているモルモット４０匹を４群に分け、第７群〜１０群には〈ＩＢ〉をＩＢが２．８ｇ／ｋｇとなるように投与し、投与後各々３時間目、４時間目、６時間目（〈ＩＢ〉の減荷効果が最大となる投与後６時間後（非特許文献１３）、１２時間目に灌流固定し、組織を採取して内リンパ減荷効果を観察、評価した。消化器症状は灌流時まで継続して行った。便の固さは灌流時のものである。いずれの群も、１回の投与量は８ｍｌ／ｋｇとなるように調製した。
【０１０２】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１０群：〈ＩＢ〉３Ｈ群 イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ含有 ３時間後
第１１群：〈ＩＢ〉４Ｈ群 同 ４時間後
第１２群：〈ＩＢ〉６Ｈ群 同 ６時間後
第１３群：〈ＩＢ〉１２Ｈ群 同 １２時間後
【０１０３】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表１０に示す。
【０１０４】
【表１０】
【０１０５】
〈ＩＢ〉投与群では２時間後に便が軟化し始め、３〜４時間後（第１０、１１群）に下痢症状は最悪となり、６時間後（第１２群）にはいくらか改善していた。いずれの群も蒸留水を投与した対照群と比べると下痢症状は有意に悪化（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）し、ＩＢ単味の群（第２〜５群）と比べると有意差は認められなかった（Mann-Whitney Ｕ検定。第１２群（〈ＩＢ〉６Ｈ群）では、形成された便の長さは６０．２±１５．８ｃｍであるが、１０匹中９匹は便の間隔はバラバラまたは泥状で、約２０〜４０ｃｍの間隔が開いている箇所も散見され、腸管内にはガスが発生していたことから、かなりの胃腸症状が現れていたものと推測される。対照群と比較すると、第１０〜１２群で有意差が認められた（いずれもＰ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。下痢等の胃腸症状が出現していたことが分かる。この事実は、〈ＩＢ〉投与後に患者が時折訴える下痢、膨満感、ゴロゴロ感などの消化器症状と符合する。１２時間後には便の固さは正常に戻っていたが、間隔が一定に戻っていたのは１０匹中僅か２匹で、第１群と比較し有意差が認められた（Ｐ＜０．００１Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、最も症状が悪化した３時間後と比較すると回復が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１０６】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化
正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表１１に示す。
【０１０７】
【表１１】
【０１０８】
第１０群（〈ＩＢ〉３時間後）は対照群と有意差はないが、４時間後（第１１群）、６時間後（第１２群）には内リンパ水腫が形成された。第１０群はＩＢのみを投与した第３群と比べると、内リンパ腔の容積は有意に増加していた（Ｐ＜０．０５）。４時間目（第１１群）は内リンパ腔容積の増加傾向がさらに明らかになり、対照群と比べ有意差が存在し（対照群に対しＰ＜０．０５）、内リンパ水腫が認められた。ライスネル膜は３、４時間目に有意に伸展していた（Ｐ＜０．０５）。
【０１０９】
参考例１−２で、ＩＢは瀉下作用の小さいため、わずかながら内リンパ腔容積を減少させる傾向を示した。ところが、参考例１−３でＩＢを３倍、６倍に増量すると、瀉下作用が増し、内リンパ腔容積は増加傾向を示した。ＩＢの大量投与により血漿浸透圧、血漿ＡＶＰが上昇したためと考えられる。また、ＩＢ単味で２．８ｇ／ｋｇ投与すると、３時間後には内リンパ腔の容積は減少傾向を示すにもかかわらず、添加物が配合された〈ＩＢ〉では同量投与しても３時間後には容積が増加傾向にあった（［参考例１−４］）。
【０１１０】
これらの事実こそが、〈ＩＢ〉は下痢が軽度であるにもかかわらず、投与後３時間では虚脱効果が発現しない理由であり、治療効果（内リンパ水腫減荷効果）発現まで６時間（非特許文献１３）かかる理由であると思われる。すなわち、過剰な添加剤により糖アルコール単味の場合よりも血漿浸透圧がさらに上昇するため、血漿ＡＶＰの上昇も大きく（非特許文献１６、１７）、結果として糖アルコール類が元来有する内リンパ腔容積の減少効果が最も著しく現れる２〜３時間後にはその効果を相殺して、内リンパ水腫を形成したと考えられる。添加物は浸透圧の上昇を招くが、分子が大きく内リンパ腔虚脱効果を発現しなかったと考えられる。６時間後に容積が減少したが、これは６時間目には血漿浸透圧が元に復する（非特許文献１７）ためであろう。血漿浸透圧、血漿ＡＶＰが正常範囲に復してから、外リンパ腔に残留する分子の浸透圧作用により、初めて減荷効果を発現すると考えられるのである。
【０１１１】
これは不必要な、または必要以上の添加物に起因するものであり、不必要な添加物は治療に逆行することが判った。この事実は、［参考例３−２−ａ］でもさらに検証する。ＩＢは瀉下作用が小さいため、単味でも一定の減荷作用が発現するが、決して優れた減荷作用を有しているとは言えず、製剤化した〈ＩＢ〉はＩＢ自体が弱いながらも有する減荷作用を発現させることに成功しているとは決して言えないことが分かった。添加剤は極力削減し、必要最小限にとどめるべきである。
【０１１２】
ＩＢを大量に投与すると、血漿浸透圧、血漿ＡＶＰの上昇はより大きくなるため、明らかな内リンパ水腫を形成した（［参考例１−３］）。このことから、主薬である糖アルコール類の投与量も極力削減しなくてはならない。
【０１１３】
発明者はＩＢ以外の糖アルコール類は、止瀉が可能になれば優れた減荷作用を有することを見出した（特許文献２）。これらは優れた甘味を有することから内服しやすく、味を調整するための添加物等も必要としないことから、止瀉のための適切な配合を考えることにより、効果が最大に発現する方法を考案した。
【０１１４】
［参考例２］〜［参考例８］では、糖アルコール類を様々に変えて、さらにその投与量を変え、または多糖類を添加するなどして、それぞれの全身的な影響と局所への効果、内リンパ腔の容積（正常側）と内リンパ水腫減荷作用（術側）、ライスネル膜の進展度などを観察する。
【０１１５】
［参考例２］
モルモットの左側に必要に応じて内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。
【０１１６】
なお、［参考例１］の第１、３、５、１０、１２群の左側には内リンパ嚢閉鎖術を施行しており、内リンパ水腫減荷効果を観察し、計測を行った。結果を以下に示す。これらの結果は［実施例１］、［参考例４］、［参考例８］において、比較検討したに利用した。
【０１１７】
【表１２】
【０１１８】
【表１３】
【０１１９】
正常側から推測できたとおり、ＩＢ単味、〈ＩＢ〉双方とも、３時間後には有意な減荷効果は認められず、６時間後に減荷効果が認められた。
【０１２０】
ＩＢ２．８ｇ／ｋｇにペクチン(Pec)を０．３ｇ／ｋｇ添加し、経口投与して消化器症状を観察し、決められた時間経過後に灌流固定して、内リンパ水腫減荷効果を観察した（ＩＢ＋Ｐ＊群）。さらに、投与量をＩＢ、Pec共に半量にして観察した（ＩＢ＋Ｐ＊＊群）。結果を以下の表１４、１５、１６と術側の測定結果を図２、３、４に示す。
【０１２１】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１４群：ＩＢ＋Ｐ＊３Ｈ群 イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ含有 ３時間後
第１５群：ＩＢ＋Ｐ＊６Ｈ群 同 ６時間後
第１６群：ＩＢ＋Ｐ＊＊３Ｈ群 同 ３時間後
第１７群：ＩＢ＋Ｐ＊＊６Ｈ群 同 ６時間後
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表１４に示す。
【０１２２】
【表１４】
【０１２３】
Pecを添加することで、投与量の多少に関わらず、３時間後、６時間後には、ＩＢ単味の第３群、第５群と比較して止瀉効果が認められた（いずれも、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。便の排列も投与量の多少に関わらず、３時間後、６時間後には、ＩＢ単味の第３群、第５群と比較して、改善が認められた（いずれも、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。
【０１２４】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各群の正常側における膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を表１５に示し、比較検討した。
【０１２５】
【表１５】
【０１２６】
正常側には、いずれの群も軽度の虚脱が認められるが、投与量を半減した１６群では虚脱は認められなかった。また、全ての群で明らかな水腫が認められた例はなく、ＩＢ従来品と比較し、安全であることが確認された。
【０１２７】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表１６、図２、図３、図４に示す。
【０１２８】
【表１６】
【０１２９】
図２はＩＢ＋Ｐ＊の経時的変化（第１４Ｌ、１５Ｌ群）を示す。図３、４はＩＢ、Pecとも半減した場合（第１６群、第１７群）の減荷効果を評価するため、各々３時間後（第１４Ｌ、１６Ｌ群）、６時間後（第１５Ｌ、１７Ｌ群）に分けて、減荷効果を観察、測定した結果である。蒸留水を投与した第１Ｌ群、ＩＢ単味の群との比較も行った。
【０１３０】
Pecを添加した群（ＩＢ＋Ｐ＊）の術側においては、投与後３時間目には減荷効果が認められ、６時間後も継続していた（図２）。有意差は表に示すとおりで、投与量を半減しても、十分な減荷効果が認められた。又、各々対応するＩＢ単味の群と比較すると、有意に減荷作用が優れていた。投与量を削減（ＩＢ＋Ｐ＊＊）しても効果に差は殆どなく、投与量を削減することで、瀉下作用、利尿作用が減弱し、血漿浸透圧の上昇を阻止できた成果であると考えられる。
【０１３１】
［参考例３］
糖アルコール類として４単糖アルコールであるエリスリトールを選び、消化器症状と併せて、内リンパ腔の容積に与える効果、全身への危険性についても観察し、評価した。参考例３は、３グループに分かれる。
【０１３２】
参考例３−１（第１８〜２２群）５０匹、参考例３−２−ａ（第２３、２４群）２０匹、参考例３−２−ｂ（第２５〜２９群）５０匹の３グループに分け、参考例３−１では、Eryのみを投与し、投与後の便、消化器症状の変化と内耳及び内リンパ腔の容積を調べた。参考例３−２−ａでは、Eryに多糖類としてペクチン（Pec）を添加した薬剤を経口投与し、同様の観察を行って、内リンパ腔虚脱効果を発現する量を調べ、血漿浸透圧及び血漿ＡＶＰと虚脱効果には、特許文献３の結果と共通する相関関係があることを見出した。参考例３−２−ｂではその効果の経時的変化、さらに虚脱が生じることは好ましくないため、Ery、Pec共に投与量を２分の１または４分の１に減量して、その効果を観察し、虚脱が小さくなることを見出した。
【０１３３】
［参考例３−１：エリスリトール（Ery）単味を投与した場合］
モルモット６０匹を各群１０匹ずつ６群に分け、各群に次に示すように薬物の投与を行った。Ery水溶液は１回投与量が８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第 １群：対照群 蒸留水８ｍｌ／ｋｇ ３時間後
第１８群：Ｅ１Ｈ群 Ery２．８ｇ／ｋｇ １時間後
第１９群：Ｅ２Ｈ群 同 ２時間後
第２０群：Ｅ３Ｈ群 同 ３時間後
第２１群：Ｅ６Ｈ群 同 ６時間後
第２２群：Ｅ１２Ｈ群 同 １２時間後
【０１３４】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表１７に示す。
【０１３５】
【表１７】
【０１３６】
ア）便の固さの判定
便の固さは灌流時点に排出された便と直腸部分の便を観察し、評価した。対照群はすべて正常便であった。Ｅ１Ｈ、Ｅ２Ｈ群は直腸付近では正常な便が形成されていたが、次第に軟便に移行していた。Ｅ３Ｈ、Ｅ６Ｈ群はすべて泥状便であった。Ｅ６Ｈ群の５匹中１匹は泥状便にわずかな軽回が認められたが、形は形成されていなかった。Ｅ１２Ｈ群では全動物でほぼ正常な固さの便が形成されていた。
【０１３７】
イ）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態
対照群では５５．０±８．８ｃｍで、便の大きさは一定で、その間隔も一定であったが、Ｅ１Ｈ群では一部軟便で、大きさは不整、間隔もバラバラになっているなど不定になっており、不快な胃腸症状の発現が推定された。便の形成された長さは２２．８±６．９ｃｍであった。Ｅ２Ｈ〜Ｅ６Ｈ群では一部軟便に近い部分もあったが、腸内はほぼ泥状便で満たされており、便の形成は０ｃｍであった。投与後１２時間のＥ１２Ｈ群では、ほぼ一定の形をした便が６６．０±１２．１ｃｍ形成されていた。便の間隔は対照群では通常約０．７〜１ｃｍでほぼ一定であるところ、Ｅ１２Ｈ群の一部の動物では８〜１０ｃｍの箇所もあり、不定で、便の間隔が開いた箇所には、腸管内への穿刺により、ガスの発生が認められた。
【０１３８】
以上から、Ery投与による下痢は２〜３時間で重篤なものとなり、６時間後も継続しているが、１２時間後にはおおよそ正常に復することが判った。
【０１３９】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
特許文献２に示したとおり、術側においてはEryは単味では全く減荷作用を示さなかった。表１８に正常側の膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を示し、比較検討した。
【０１４０】
【表１８】
【０１４１】
Ery投与後１時間目にはライスネル膜が伸展し、２時間目には明らかな内リンパ水腫が形成されて、６時間後まで継続しており、対照群と比し、有意差が存在した（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。１２時間後には水腫が存在する動物もいたが、正常に復したものもあり、有意差は認められなかった。
【０１４２】
糖アルコール類投与により期待された減荷効果は、単味で投与した場合には術側には認められず（特許文献２）、正常側には内リンパ水腫が形成されたことが判った。その理由としては、瀉下効果に随伴する脱水による、血漿ＡＶＰの上昇（非特許文献１１）、血漿浸透圧の上昇に伴う血漿ＡＶＰの上昇（非特許文献１６、１７）が考えられる。
【０１４３】
［３−２：エリスリトール（Ery）にペクチン（Ｐ）を添加し投与した場合］
モルモット２０匹を各群１０匹ずつ２群に分け、各群に次に示すように薬物投与を行い、一定時間経過後に灌流固定した。
【０１４４】
［３−２−ａ：ペクチン（Ｐ）の添加量による効果の違いを観察する］
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第２３群：Ｅ＋Ｐ0.1ｇ群 Ery2.8g/kg+P0.1g/kg ３時間後
第２４群：Ｅ＋Ｐ３Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg ３時間後
灌流固定の際、大腸、結腸、直腸の状態、特に便の形成状況を観察した。
【０１４５】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、間隔の判定と便の形成された長さは上記の２グループに分けて観察した。その結果を表１９に示す。
【０１４６】
【表１９】
【０１４７】
参考例３−１のＥ３Ｈ群（Pecを添加せずEryのみ投与、３時間後）は１０匹すべてが泥状便であったが、第２３群（Ｅ＋Ｐ0.1ｇ群：Pec０．１ｇ／ｋｇ添加）では１０匹中、泥状便の動物が５匹、軟便の動物が３匹で、肛門から２〜３ｃｍ程度の便の形がみられた。残りの２匹はやや軟便で、２３ｃｍ、４２ｃｍの便が形成されていたが、その間隔は不定で、間隔が１０ｃｍ以上開いているところもあった。１０匹の平均は７．３±１３．３ｃｍであった。第２４群（Ｅ＋Ｐ３Ｈ群：Pec０．５ｇ／ｋｇ添加）では３匹が泥状便、他の７匹のうち軟便、やや軟便が各１匹、３匹は正常な固さで止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、これら７匹の便の間隔はいずれも不定であった。形成された便の長さの平均（１０匹）は１９．２±２１．７であった。
【０１４８】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
術側にはPecを０．５ｇ／ｋｇ添加することでEryの減荷効果が発現することを確認した（特許文献２）。そこで、本発明においては正常側において、Pecの添加量の差による内リンパ腔の容積の変化の違いを検討するため、各群の膜の伸展率、面積変化率の平均と標準偏差を比較検討した。結果は表２０に示す。
【０１４９】
【表２０】
【０１５０】
第２３群（Pec０．１ｇ／ｋｇ添加、約３．６重量％添加）は内リンパ水腫を形成していた（対照群と比較し有意差が認められた。Ｐ＜０．０５）が、Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加した第２４群は内リンパ腔の容積は減少（虚脱）した（対照群に対し、Ｐ＜０．０５。Ery単味の第２０群に対し、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。
【０１５１】
多糖類のペクチンの添加量は０．１ｇ／ｋｇでは、十分な止瀉を図れず、内リンパ水腫減荷効果は発現しなかった（特許文献２）。正常側では内リンパ水腫を形成した（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加すると、８耳中３耳の内リンパ腔容積が約１０％増加し、水腫を形成したが、その他は、５耳が５〜１０％減少した。１５％減少した例も２耳あり、バラツキが大きかったが、虚脱を起こす傾向が認められ（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、投与量の削減が望ましいと思われた。そこで、投与量を半量にしたところ、十分な効果を得た（［参考例３−３−ｂ］）。
【０１５２】
Ｃ）全身状態への影響の検討
対象と方法）体重２８０〜３２０ｍｇのモルモットで、正常な便をしている２０匹を、４グループに分け、第１グループには生理食塩水のみ、第２グループにはEry単味、第３グループにはEry＋Pec０．１ｇ／ｋｇ、第４グループにはEry＋Pec０．５ｇ／ｋｇを投与した。投与後、３時間でギロチンを用いて断頭、採血し、明細書中の非特許文献８に記載された方法で、血中ＡＶＰを測定した。投与薬剤と検査結果を表２１に示す。Ery投与量はいずれも２．８ｇ／ｋｇで、水溶液の１回の投与量は８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
【０１５３】
【表２１】
【０１５４】
ア）下痢と血漿ＡＶＰ値の検討
多糖類を糖アルコールに対し約３．６重量％配合（Pec０．１ｇ／ｋｇ）した場合は、重度の下痢症状が発現し（表１９）、血漿ＡＶＰが高値をとる（表２１）が、一方、１７．９重量％配合（Pec０．５ｇ／ｋｇ）した場合は、５匹中３匹は便は正常で、血漿ＡＶＰも低下する（表２１）。非特許文献１０、表１に示したとおり、血漿ＡＶＰの値と内リンパ容積の増加率は比例する。表２１（血漿ＡＶＰの値）と、先の表２０に示す組織学検討結果、すなわち、Ery単味の群は血漿ＡＶＰが高値をとり、内リンパ水腫を形成したという事実は、非特許文献１０、表１と整合性がある。
【０１５５】
Pec０．５ｇ／ｋｇでは血漿ＡＶＰが比較的低く、糖アルコールの浸透圧効果が発現し、虚脱現象が認められたものと考えられる。多糖類の添加量が少ない場合には下痢が生じ、脱水が続発するが、十分な添加により内リンパ腔の容積減荷効果が認められた。
【０１５６】
血漿浸透圧は特殊な要因がなければ、投与薬剤のモル数に比例して上昇する。Ery単味の群では浸透圧は５８ｍOsm／liter、Pecを０．１ｇ／ｋｇ添加した群では４５ｍOsm／liter上昇したが、０．５ｇ／ｋｇ添加した群では３７ｍOsm／literの上昇でとどまっている。Pecの添加が不十分な場合の浸透圧上昇は激しい下痢による脱水に起因するものである。しかしながら治療に必要な量のEryとPecの投与により血漿浸透圧が大きく上昇することも分かった。したがって、添加物も含め薬剤の投与量の削減は、治療効果発現のための重要な課題である。
【０１５７】
［参考例３−２−ｂ：ペクチン（Ｐ）を０．５ｇ／ｋｇ添加し、投与後の経時的変化を観察、さらにEry、Pec共に投与量を１／２、１／４に減量して効果を観察する］
第３−２−ａグループの結果から、Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加することで、脱水状態に陥るおそれもなく、安全に確実な内リンパ水腫減荷効果の発現が期待できることが判った（特許文献２）ので、次にモルモット５０匹を各群１０匹ずつ５群に分け、次に示すように薬物投与を行い、消化器症状を観察して、一定時間経過後に灌流固定した。第２７〜２９群は、EryとPecの混和懸濁液を２倍又は４倍に希釈し、EryとPecの投与量を２分の１、４分の1に減量した。なお、第２５、２７、２８群の左側は内リンパ嚢閉鎖術を施行している。薬剤の１回投与量は全群とも８ｍｌ／ｋｇである。
【０１５８】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第２５群：Ｅ＋Ｐ６Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg ６時間後
第２６群：Ｅ＋Ｐ１２Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg １２時間後
第２７群：Ｅ＋Ｐ/２・３Ｈ群 Ery1.4g/kg+P0.25g/kg ３時間後
第２８群：Ｅ＋Ｐ/２・６Ｈ群 Ery1.4g/kg+P0.25g/kg ６時間後
第２９群：Ｅ＋Ｐ/４・３Ｈ群 Ery0.7g/kg+P0.125g/kg ３時間後
【０１５９】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表２２に示す。
【０１６０】
【表２２】
【０１６１】
３−２−ａの第２４群（３時間後）では泥状便は３匹、投与後６時間で灌流した第２５群では、１匹が泥状便、２匹が軟便で下痢症状が軽回した。参考例３−１のEryのみの第２０群（３時間後）では、１０匹とも泥状便、第２５群（６時間後）では７匹が泥状便であることからすると、下痢の防止効果は顕著である（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。６時間後の第２５群は３時間後の第２４群と比較すると有意差はなかった（Mann-Whitney Ｕ検定）が、形成された便の長さは３０．８±２３．６ｃｍ（１０匹の平均）で明らかな回復が認められた。第２６群（１２時間後）では全動物が正常便であった。注目すべきは便の間隔が１０匹中９匹で一定であることで、Eryのみの第２２群(Ｅ１２Ｈ群：１２時間後)と比べ、有意に胃腸症状の改善が認められた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１６２】
EryとPecの量を２分の１または４分の１にすると、Eryの瀉下作用はさらに軽くなり、消化管内の便の配列も規則的で、自覚症状も軽いものと推測された。Eryのみの群（２０群、２１群）と比較すると、いずれも有意な改善が見られた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。EryとPecを通常量投与した２４群、２５群と比較すると、２分の１に減量した２７群、２８群には明らかな有意差は認められず、４分の１に減量した２９群と２４群との間には認められた（便の形成した長さ、固さ、間隔、各々Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１６３】
Pecを添加することで、３時間後、６時間後の結果が示すとおり、腸内のガスも認められず、ガス発生も抑制されて、不快な胃腸症状を極力抑えることができ、かつ早期に正常に復していたことが１２時間後（第２６群）の結果からも確認できた。
【０１６４】
EryとPecを２分の１または４分の１に減ずると、通常量を投与した場合と比較して、下痢症状はさらに軽回した。特に便が形成されており、便の配列が規則的になる傾向が認められたことから、消化器症状が改善したことが推測された。
【０１６５】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化：正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
表２３に各群の伸展率と面積増加率の平均と標準偏差を示す。
【０１６６】
【表２３】
【０１６７】
［参考例３−２−ａ］に示したとおり、第２４群（３時間後）は対照群（蒸留水）、Ｅ３Ｈ群（Eryのみ）と比べ容積が有意に減少、すなわち虚脱が生じていた（各々Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。さらに第２５群（６時間後）も対照群、Ｅ３Ｈ群と比較し、有意に虚脱している（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。第２６群（１２時間後）は対照群と比較し有意差が認められなかった。以上から、投与後３時間で虚脱が明らかとなり、６時間後にも継続していたが、１２時間後にはほぼ正常に復していたことが判った。
【０１６８】
Eryの瀉下作用は投与後３時間をピークに、６時間後には軽回する。したがって下痢による脱水で血漿ＡＶＰは３時間後には上昇し、６時間後には下がるものと考えられる。さらに、血漿浸透圧も考慮しなくてはならない。血漿浸透圧は内服直後から上昇し始め、その後４０ないし９０分後にピークになり、約６〜７時間で元に復する。それに伴い血漿ＡＶＰも同期して変動するものと思われる。
【０１６９】
一方作用発現に必要な内耳の浸透圧は、１〜２時間後から上昇し始め４時間後も高い値を保っていると思われる。その間は、血漿ＡＶＰが上昇し、下痢による脱水による上昇と相まって、Eryの減荷作用を相殺するものと考えられる（第１９〜２１群、後述の第２０Ｌ、２１Ｌ群）。
【０１７０】
EryとPecの量を２分の１または４分の１にすると、同様に内リンパの虚脱が生じる。第２７〜２９群のいずれも蒸留水投与群、Eryのみの投与群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。Ery＋Pecの通常量投与した群と比べ、有意差は認められないが、Ery投与量が少ないにもかかわらず、同等の虚脱作用が発現した。その理由は、Eryの瀉下作用は殆ど認められなくなること、さらに投与量が少ないことから血漿浸透圧の上昇が僅かで済むことで、減荷作用発現に好ましいと考えられる。
【０１７１】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表２４、図５に示す。
【０１７２】
【表２４】
【０１７３】
第２７Ｌ群（１／２に減量、３時間後）は対照群、Ery単味のＥ３Ｈ群と比べ、有意に減荷効果が認められた（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。第２８Ｌ群（１／２、６時間後）も対照群、Ｅ６Ｈ群と比べ有意差が存在し（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）、依然として減荷効果が認められた。さらに、Ery＋Pecを通常量の投与した第２４Ｌ、２５Ｌ群と比較すると、これらの間には有意差は認められなかった（ＡＮＣＯＶＡ）。このことから投与量を２分の1に減量しても、通常量投与した場合と同等の、強力な減荷効果を発現し、約６時間継続することが判った。また、第２７Ｌ群と第２８Ｌ群の間には有意差（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）が存在することから、減荷効果は持続しているものの、次第に減弱していることか判る。この結果は［参考例３−２−ｂ］の正常側の結果から予想されるものであった。
【０１７４】
［参考例４：ＩＢ＋アルジネートナトリウム（Ａｌ）］
ＩＢにアルジネートナトリウム（Ａｌ）を添加し投与して、様々な添加物が配合されている従来品の〈ＩＢ〉と比較を行なった。
【０１７５】
正常な便をしているモルモット３０匹を３群に分け、第３０、３１群には、アルジネートナトリウム０．１１ｇ／ｋｇ、無機塩０．０９ｇ／ｋｇを添加して調整したゲル製剤（イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ）の投与を行ない、投与後３時間目と６時間目（〈ＩＢ〉の減荷効果が最大となる投与後６時間後（非特許文献１３））に灌流固定した（以下、ＩＢ＋Ａｌ＊群ともいう）。第３２群にはＡｌを０．３ｇ／ｋｇを添加し、３時間後に灌流固定して（以下、ＩＢ＋Ａｌ＊＊群ともいう）、各々の組織を採取して内リンパ容積変化を観察、評価した。消化器症状は灌流時まで継続して行った。便の固さは灌流時のものである。いずれの群も、１回の投与量は４ｍｌ／ｋｇとなるように調製した。組織作成などの手順、及び計測は、非特許文献４と同様の方法で行なった。
【０１７６】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第３０群：ＩＢ＋Ａｌ＊群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ＋Ａｌ＋無機塩 ３時間後
第３１群：ＩＢ＋Ａｌ＊群 同 ６時間後
第３２群：ＩＢ＋Ａｌ＊＊群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ＋Ａｌ０．３ｇ／ｋｇ ３時間後
【０１７７】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表２５に示す。
【０１７８】
【表２５】
【０１７９】
ＩＢ単味の群、〈ＩＢ〉投与群では約半数の動物が軟便または泥状便となり、ガスの発生など消化器症状が発現した。それに対し、ＩＢ＋Ａｌ＊群は３時間後（第３０群）の便の固さは、やや軟便がわずかに２匹で、他の８匹は正常便で、便の間隔も不整、バラバラなものは〈ＩＢ〉と比べ少なかった事から、〈ＩＢ〉（第１０群）と比べ、止瀉作用が有意に優れ（Ｐ＜０．０５）、消化器症状も軽かったことが推測される（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。６時間後（第３１群）には全ての動物が正常な固さの便で、その間隔は６匹が一定であり、消化器症状は〈ＩＢ〉（第１２群）と比べ有意に軽かったことが分かった（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１８０】
ＩＢ＋Ａｌ＊＊群は３時間後（第３２群）の便の固さは、やや軟便が７匹中わずかに１匹で、便の間隔も不整、バラバラなものは〈ＩＢ〉と比べ少なかった（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＩＢ＋Ａｌ＊群（第３０群）と比較し、Ａｌの添加量は多いが、有意差は認められなかった（Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１８１】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化：正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表２６に示す。
【０１８２】
【表２６】
【０１８３】
第１０群、第１１群、第１２群（各々〈ＩＢ〉３、４、６時間後）は対照群と比較すると、容積が増加する傾向があり、特に第１１群（４時間後）は有意差が存在した（［参考例１−４］）。しかし、Ａｌを０．１１ｇ／ｋｇ添加した第３０群、第３１群は、容積が減少する傾向が現れた。対照群とは有意差が存在し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、軽度ではあるが虚脱が認められた。投与後３時間目の第３０群はＩＢ単味の第３群と比べ有意差は認められなかったが、〈ＩＢ〉の第１０群と比べると明らかに容積が減少していた（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。６時間目の３１群は〈ＩＢ〉の第１２群と比較し有意差が存在した（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。Ａｌを０．３ｇ／ｋｇ添加した第３２群では、容積はさらに減少した。対照群とは有意差が存在し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、〈ＩＢ〉の第１０群との間でも有意差が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。しかしＩＢ＋Ａｌ＊群（第３０群）の間には有意差はなかった（ｔ−検定）。
【０１８４】
これらの事実から、ＩＢ＋Ａｌ＊群の虚脱（減荷）効果は、投与後３時間で確実に出現し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、６時間が経過しても効果は持続していた（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）。従来品の〈ＩＢ〉と比較しても投与後３時間における効果が有意に大きく（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、作用の発現が迅速であることが分かった。ＩＢ＋Ａｌ＊＊群は、さらに減荷作用は強い傾向があったが、ＩＢ＋Ａｌ＊群を比べ、有意差はなかった。
【０１８５】
６時間後では有意差はないが、従来品と比べ容積は減少しており、便の性状と消化管内のガスの発生状況から、瀉下作用を含め、胃腸症状の改善に成功したことが明らかであるので、より少ない量で消化器官に負担をかけることなく、十分な効果が期待できることが予想される。しかしながら、Eryと比較するとＩＢの減荷効果は小さいことが判った。
【０１８６】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表２７に示す。
【０１８７】
【表２７】
【０１８８】
第３０Ｌ群（３時間後）は対照群、ＩＢ従来品投与後３時間目の第１０Ｌ群と比べ、有意に減荷効果が認められた（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３１Ｌ群（６時間後）も対照群、〈ＩＢ〉６Ｈ群と比べ有意差が存在し（いずれもＰ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）、依然として減荷効果が認められた。
【０１８９】
［参考例５］
糖アルコール類としてグリセロールを選び、多糖類としてカルボキシメチルセルロースナトリウムと組み合わせて、内リンパ腔の容積に与える効果を観察した。非特許文献４ではグリセロールをグリセロールテストを行う場合の投与量（非特許文献１、２）である１２ｍｌ／ｋｇ投与し、経時的変化を観察した。結果は表２８に示すとおりである。
【０１９０】
【表２８】
【０１９１】
グリセロールを投与すると、分子径が小さいため、２時間後には外リンパ腔に達し、外リンパ圧が上昇することから、浸透圧効果により内リンパ腔は有意に虚脱した（対照群と比し、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。その後グリセロール分子はライスネル膜を通過し、内リンパ腔に入るため、内リンパ圧が上昇してリバウンド現象が発現すると考えられる。
【０１９２】
〔グリセロール（Ｇｌｙ）とカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）〕
上記のGlyの量は検査に用いる量である。そこで、Glyを約３分の１のに減じ、経時的変化を観察した。モルモット１２匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の結果を表２９、組織学的検討結果を表３０に示す。
【０１９３】
【表２９】
【０１９４】
ＣＭＣを添加（１０重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０１９５】
【表３０】
【０１９６】
多糖類としてＣＭＣを添加した群においては、正常側ではグリセロール単味の群と比較し、有意に内リンパ腔の虚脱が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。術側ではＣＭＣを添加した群では、Gly単味の群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）
【０１９７】
〔参考例６：キシリトール（ＸＬ）とキサンタンガム（ＸＧ）〕
モルモット１２匹を６匹ずつ２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の評価結果を表３１、組織学的検討結果を表３２に示す。
【０１９８】
【表３１】
【０１９９】
ＸＧ添加（７．１重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０２００】
【表３２】
【０２０１】
多糖類として、ＸＧを添加した群では、ＸＬ単味の群と比較し、内リンパ腔の容積の減少が認められた（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。なお、術側ではＸＬ単味の群と比較し、明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）。
【０２０２】
［参考例７：キシロース（ＸＳ）とキサンタンガム（ＸＧ）〕
モルモット１２匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間間経過後に灌流固定した。これらの結果のうち、止瀉効果の結果を表３３、組織学的検討結果を表３４に示す。
【０２０３】
【表３３】
【０２０４】
ＸＧを添加（７．１重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。３時間目には手指により、下腹部に圧を加えても排便しにくくなった。便の配列は一定ではなかったが、２−３ｃｍの間隔が空いている程度で、ガスの発生は顕著ではなかった。
【０２０５】
【表３４】
【０２０６】
多糖類として、ＸＧを添加した群（ＸＳ＋ＸＧ群）では、正常側では、ＸＳ単味の群と比較し、著明な虚脱が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。これは、ＸＳの消化管からの独特な吸収過程によるものとも考えられるが、吸収過程に関しては異論もあり、今後の検討課題である。術側でも、ＸＳ＋ＸＧ群はＸＳ単味の群と比較し、著明な減荷効果が認められた（Ｐ＜０．００１、特許文献３）。
【０２０７】
［参考例８：イソソルビトール（ＩＢ）と寒天〕
モルモット７匹に、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の結果を表３５、組織学的検討結果を表３６に示す。
【０２０８】
【表３５】
【０２０９】
寒天を添加（１０．７重量％）することにより、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０２１０】
【表３６】
【０２１１】
寒天の添加によりＩＢ単味、〈ＩＢ〉と比較し、内リンパ腔の容積減少（虚脱）に有意差は認められなかった（ｔ−検定）。なお、術側ではＩＢ単味の群と比べ明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）。さらに、〈ＩＢ〉群と比べても明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。
【０２１２】
［参考例９］
下痢をすれば血漿ＡＶＰが上昇し（非特許文献１１）、血漿ＡＶＰが上昇すると内リンパ水腫を形成することは、非特許文献１０で示したとおりであるが、参考例３の３−２−ａグループの結果から、先の段落［０１５３］〜［０１５６］で述べたように、止瀉に成功すれば血漿ＡＶＰの上昇はわずかで、内リンパ減荷効果が確実に発現することが確認された。これらのことを踏まえれば、止瀉効果が図ることができれば、内リンパ水腫減荷効果は発現することは明らかである。
【０２１３】
糖アルコール類と多糖類の組み合わせをさらに換えて止瀉に成功するかどうかを調べた。糖アルコール類として、エリスリトール、ソルビトール、イソソルビトール、マンニトールに、多糖類として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラギーナン、グァーガム、アラビアガムを任意に組み合わせた。
【０２１４】
〔９−１: マンニトールとカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）〕
正常な便をしているモルモット８匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察した。
結果を表３７に示す。
【０２１５】
【表３７】
【０２１６】
マンニトールによる下痢は、約７．１重量％のＣＭＣの添加により、有意に軽回した（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。腹部の膨満感、ガスの発生は殆ど認められなかった。
【０２１７】
〔９−２: ソルビトールとグァーガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表３８に示した。
【０２１８】
【表３８】
【０２１９】
グァーガムを１０重量％添加して、２匹が正常便、２匹がやや軟便となり、ソルビトールによる下痢を止瀉することにほぼ成功した（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、投与後３〜４時間目で、便の量は３分の1程度に減り、視診、触診により腹部に軽度の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れた。下腹部を圧迫すると、形が不整で、通常の２分の１以下の小さい便が少しずつ排泄された。
【０２２０】
〔９−３: エリスリトールとアラビアガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表３９に示し、Ｅ３Ｈ群と比較検討した。
【０２２１】
【表３９】
【０２２２】
アラビアガムを２０重量％添加しても、エリスリトールによる下痢を止瀉することは出来なかった（有意差なし）。４０重量％添加すると、下痢はいくらか軽回した（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）が、より確実な止瀉が望まれるところである。両群とも、投与後３〜４時間目で、便の量は3分の1程度に減り、視診、触診により腹部の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れたが、泥状便がわずかに排泄されるだけで、不快な状態が推測された。
【０２２３】
〔９−４: エリスリトールとグァーガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１５匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表４０に示し、Ｅ３Ｈ群と比較検討した。
【０２２４】
【表４０】
【０２２５】
グァーガムを５重量％、１０重量％添加してもエリスリトールによる下痢を止瀉することは出来なかった。２０重量％添加して、２匹が正常便、２匹がやや軟便でほぼ止瀉に成功した（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、投与後３〜４時間目で、便の量は3分の1程度に減り、視診、触診により腹部の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れた。下腹部を圧迫すると、形が不整で、通常の２分の１以下の小さい便が少しずつ排泄されるだけで、不快な状態が推測された。
【０２２６】
〔９−５: イソソルビトール（ＩＢ）とカラギーナン〕
正常な便をしているモルモット７匹に、１０．７重量％のカラギーナンを添加したＩＢ水溶液（８ｍｌ／ｋｇ）を投与し、その後６時間、便を観察した。結果を表４1に示す。
【０２２７】
【表４１】
【０２２８】
ＩＢによる下痢症状は約１０．７重量％のカラギーナンを添加することによって改善した。イソソルビトールは単味でも瀉下作用が他の糖アルコール類ほど強くないが、カラギーナン添加により、泥状便、軟便が認められなかったことは有効であったと考えられる。視診触診により、腹部の膨満は認められず、消化器症状は軽かったものと推定された。
【０２２９】
多糖類にはイ）キサンタンガム（ＸＧ）に代表されるように止瀉効果に優れたものと、ロ）ペクチン（Pec）に代表される整腸作用に優れたものがある。
【０２３０】
〔イ）ＸＧに代表されるグループ〕について
キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガムなどがこのグループに属する。止瀉作用は、キサンタンガムが最も強く、アラビアガムが緩やかで、懸濁液の粘度が高くなると一般に止瀉作用も強力になった。一方で、摂取後３〜５時間後には便の量が減少する傾向がある。
【０２３１】
〔ロ）ペクチン（Pec）に代表されるグループ〕について
ペクチン、アルジネートナトリウム、寒天、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラギーナン、ヒドロキシプロピルセルロースなどがある。Pecはじめ、このグループの多糖類は整腸作用が優れているが、止瀉に比較的大量を要するため、添加量が多くなる欠点がある。しかし、大量を添加しても、便の表面は滑らかで排泄量も通常かそれ以上で、排便に障害はなく、視診、触診でも腹部の膨満感、ゴロゴロ感が生じず、動物も苦しがる様子がなかった。Pecより粘性の高い寒天、アルジネートナトリウムはPecより止瀉効果に優れ、ＣＭＣはPecとほぼ同程度の止瀉作用を示した。
【０２３２】
〔イ）ＸＧに代表されるグループとロ）Pecに代表されるグループから１種ずつ選び、組み合わせた場合〕
各々の多糖類の特質を吟味し、異なった特徴を持つイ）、ロ）の２つのグループの多糖類を１種ずつ組み合わせることで、より少量で的確な止瀉効果を発現させつつ、胃腸症状を生じずに、形の整った便を通常量排泄させることを可能にすることを見出した。さらに、ＸＧ＋ＣＭＣ、ＧＧ＋ＣＭＣなど、組み合わせによっては流れを良くすることも見出した。これは嚥下が困難な患者への投与に適しており、経管栄養の患者への投与にも、水溶液にして微小チューブで支障なく投与することが可能である。
【０２３３】
〔イ）ＸＧに代表されるグループから２種以上組み合わせた場合〕
イ）ＸＧに代表されるグループの多糖類は、２種以上を組み合わせると飛躍的に粘度が増すことが出来る。例えば同じ０．５％の溶液の場合、グァーガム単味の粘度に対し、ＸＧ１：グァーガム３の粘度は数倍〜数十倍と、飛躍的に高くなり、０．５％ＸＧ溶液とほぼ同じまたはそれ以上に粘調になることが知られている。同様の現象は他の多糖類の組み合わせでも、粘性を飛躍的に高めることも知られている。これによって、投与量を削減することが可能である。実際に複数種組み合わせたところ、少ない添加量でも、止瀉作用を向上させ、且つ腹部の膨満感、ゴロゴロ感も軽くすることを見出した。
【０２３４】
〔ロ）Pecに代表されるグループから２種以上組み合わせた場合〕
Pecを単独に加えた場合の問題点は、止瀉を実現するために大量に添加しなくてはならないことである。Pecのグループから２種以上を組み合わせることで各々の特質を生かしながら、添加量も比較的少量で止瀉作用を発現することを見出した。また、Pecやアルジネートナトリウム等を糖アルコール溶液に混和するとゲル状になり、添加量が増えるとパサパサして一体感がなくなり、嚥下が困難になる場合もあるが、ＣＭＣを加えることでその問題点が解決することを見出した。
【０２３５】
他に、３種以上の多糖類を組み合わせて、〔イ）ＸＧに代表されるグループから２種とロ）Pecに代表されるグループから１種選び、組み合わせた場合〕、〔イ）ＸＧに代表されるグループから１種とロ）Pecに代表されるグループから２種選び、組み合わせた場合〕があり、各々の利点を生かし、欠点を補うことが可能である。
【０２３６】
［参考例１０］
２種以上の多糖類を添加することにより、１種の多糖類の添加量より少量で確実な止瀉効果を得られるかどうかを調べた。
【０２３７】
〔エリスリトールとＸＧ＋ペクチン（Pec)〕
正常な便をしているモルモット１５匹を３群に分け、粘度が非常に高いＸＧと親水性の高いPecとを表４２のように組み合わせEryに添加して、６時間目まで便と消化器症状の観察を行った。
【０２３８】
【表４２】
【０２３９】
ＸＧ０．０９ｇ／ｋｇ＋Pec０．２ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で１０．４重量％）で、Pecのみ添加した場合（１７．８％）より少量で、ＸＧの止瀉作用とPecの整腸作用とを同時に発現させることが出来た。ＸＧだけを添加した場合、止瀉作用は強力であるが、腹部膨満が認められ、便の排泄量が減るが、２種を組み合わせることで下腹部に強く圧を加えても、動物は苦しむこともなく、表面の滑らかな便が出てきたことで、目的を達したことが確認出来た（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０２４０】
〔６−２：エリスリトールとキサンタンガム（ＸＧ）＋グァーガム（ＧＧ）（ＸＧグループから２種選び、組み合わせた場合）〕
正常な便をしているモルモット１５匹を３群に分け、ＸＧグループで粘度が非常に高いＸＧと比較的粘度の低いＧＧを表４３のように組み合わせエリスリトールに添加し、６時間目まで便と消化器症状の観察を行った。
【０２４１】
【表４３】
【０２４２】
ＸＧ０．０３ｇ／ｋｇ、ＧＧ０．０６ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で３．２重量％）では十分な止瀉効果は認められず、いずれも増量して、ＸＧ０．０６ｇ／ｋｇ、ＧＧ０．０９ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で５．４重量％）で、有意な止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。便は形が不整で、排泄量は約２分の１に減少したが、腹部膨満は認められず、下腹部に強く圧を加えても、動物は苦しむこともなかった。
【０２４３】
［参考例１１：エリスリトールとキサンタンガム（ＸＧ）＋ペクチン（Pec)＋カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、Eryに、ＸＧ、Pec、ＣＭＣとを表４４のように組み合わせ添加して、３時間目まで便と消化器症状の観察後、３時間目に灌流、便の配列などと共に、消化器官の観察を行い、側頭骨を取り出して組織学的に検討した。
【０２４４】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表４４に示す。
【０２４５】
【表４４】
ＸＧ：０．０６ｇ／ｋｇ，Pec： ０．１５ｇ／ｋｇ，ＣＭＣ：０．２ｇ／ｋｇ
便の固さは灌流時に判定したものである
【０２４６】
ＸＧ０．０６ｇ／ｋｇ＋Pec０．１５ｇ／ｋｇ＋ＣＭＣ０．２ｇ／ｋｇ（多糖類合計で１４．６重量％）で、ほぼ完全な止瀉を達成できた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＸＧ単独を添加した場合には投与後便の量が減少し、腸内でガス発生が認められたが、ペクチンに代表されるグループから２種を加えることで、そのような問題点が生じることなく、止瀉に成功した。消化管内の観察においても、便の配列は、６匹中２匹は形成された便の間隔が４〜７ｃｍのところもあり、僅かながらガスの発生も認められたが、全体的には、ほぼ規則的になり、胃腸症状は軽回したものと推測された（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。形成された便の長さも５７．０±１９．６ｃｍで、蒸留水のみ投与の５５．０± ８．８ｃｍに近い値となった。
【０２４７】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側）及び内リンパ水腫減荷効果（術側）
各群の伸展率と面積増加率の平均と標準偏差の結果を表４５に示す。
【０２４８】
【表４５】
【０２４９】
エリスリトールのみを投与した第２０群（３時間後）と比較し、３種の多糖類を添加したＥ＋３Ｐ群では有意に減荷されている（Ｐ＜０．０５、特許文献３）。
また、多糖類としてPec１種のみを０．５ｇ（１７．９重量％）添加した第２４群と比較するとわずかに上方に移動しているが、有意差はなく、十分な減荷効果を発揮していることが判った（特許文献３）。
【０２５０】
Pecは整腸作用に優れるが、止瀉を図るには添加量が多くなりがちであり、粘度が高くなることは避けられないが、ＣＭＣを添加することで、流れがよくなり、摂取時の口当たり、舌触りなどに優れた材質になった。違和感なく摂取でき、経管栄養や、飲料に応用範囲が広がる。
【０２５１】
単糖又はその糖アルコール類に対し、多糖類を複数種組み合わせることで、多糖類１種類を添加する場合と比べ、飛躍的に止瀉効果を高め、かつ不快な胃腸症状の軽減、又は防止をはかることができた。添加物を削減する目的を達成することができた。
【図面の簡単な説明】
【０２５２】
【図１】イソソルビトール（ＩＢ）及びエリスリトール（Ｅ）の双方とも、投与量を4分の１に減量して投与し、３時間目の内リンパ水腫減荷効果を、ＩＢ＋Pec及びEry＋Pecの散布図と回帰直線と比較した図である。４分の１に減量した群の回帰直線は通常量の群と同等の減荷作用を発揮していることから、減量しても十分な減荷作用が期待できる。○：IR-S(蒸留水) = 4.011 + 1.212 * IR-L(蒸留水); R^2 = .987、×：IR-S(IBのみ3時間) = 6.241 + .968 * IR-L(IBのみ)膜； R^2 = .945、●： IR-S(IB＋P,3hr) = .303 + .701 * (IB＋P,3hr)； R^2 = .794、■：IR-S(E+P,3hr) = -15.925 + .79 * IR-L(E+P,3hr); R^2 = .771、×：IR-S(IB+E,3hr) = -6.557 + .931 * IR-L(IB+E,3hr); R^2 = R^2 = .966。
【０２５３】
【図２】イソソルビトール（ＩＢ）の内リンパ水腫減荷効果の経時的変化を、散布図と回帰直線により示した図である。ＩＢ投与後３時間目では、回帰直線は蒸留水と比較して下方に移動するが、有意差は認められない（ＡＮＣＯＶＡ）。投与後６時間後には有意な減荷作用が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、■：IR-S(IB単味,３hr)= 6.542 + 1.011 * IR-B(IB単味,３hr); R^2 = .987、□：IR-S(IB単味,6hr) = 7.347 + .742 *IR-L (IB単味,6hr); R^2 = .901
【０２５４】
【図３】イソソルビトール（ＩＢ）にびペクチン（Ｐ）を添加し、通常投与量、及び半量投与し、３時間目の内リンパ水腫減荷効果を比較した。散布図と回帰直線を示す。ＩＢ単味の投与では、蒸留水と比較し有意差は認められなかったが、Pecを添加した群の減荷効果は蒸留水、ＩＢ単味群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。半量に減量しても同程度の減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、●：IR-S(IB単味,3hr)= 6.542 + 1.011 * IR-B(IB単味,3hr); R^2 = .987、■：IR-S(IB＋P,3hr) = .303 + .701 * (IB＋P,3hr)； R^2 = .794、□：IR-S(IB+P2分の1,3hr) =1.429 + .761 * IR-L(IB+P2分の1,3hr); R^2 = .858
【０２５５】
【図４】イソソルビトール（ＩＢ）にペクチン（Ｐ）を添加し、通常投与量、及び半量投与し、６時間目の内リンパ水腫減荷効果を比較した。散布図と回帰直線を示す。ＩＢ単味の投与では、蒸留水と比較し減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１）。Pecを添加した群では蒸留水、ＩＢ単味群と比較し、有意差が認められた（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５、ＡＮＣＯＶＡ）。半量に減量しても、同程度の減荷効果が認められたことから、効果は持続していることが判る（いずれもＰ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。減量することによって減荷効果は損なわれることがなかった。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、●：IR-S(IB単味,6hr)= 3.11 + .914 * IR-B(IB単味,6hr); R^2 = .961、■：IR-S(IB＋P,6hr) = -2.141 + .862* (IB＋P,6hr)； R^2 = .874。□：IR-S(IB+P2分の1,6hr) = -8.778 + .973 * IR-L(IB+P2分の1,6hr); R^2 = .945
【０２５６】
【図５】エリスリトール（Ｅ）及びペクチン（Ｐ）の投与量を２分の１に減量して、内リンパ水腫減荷効果の経時変化を、散布図と回帰直線により示した図である。２分の１に減量した群の回帰直線は通常量の群と有意差は認められなかったことから、減量しても十分な減荷作用が期待できる。投与後６時間後にも蒸留水と比較して有意な減荷作用が認められた。：IR-S(蒸留水) = 4.011 + 1.212 * IR-L(蒸留水); R^2 = .987、●：IR-S(E単味) = 2.407 + 1.309 * IR-L(E単味); R^2 = .974、■：IR-S(E+P,3hr) = -15.925 + .79 * IR-L(E+P,3hr); R^2 = .771、×：IR-S(E+P6時間) = -16.508 + 1.314 * IR-L(E+P6時間); R^2 = .784、□：IR-S(E+P2分の1,3hr) = -1.834 + .559 * IR-L(E+P2分の1,3hr); R^2 = .547 。
【技術分野】
【０００１】
本発明は２種以上の単糖類、又はその糖アルコール、または２種以上の単糖類、少糖類、又はその糖アルコールと１種または２種以上の多糖類からなるメニエール病治療薬であって、単糖類、又はその糖アルコールの瀉下作用がある場合には多糖類によって解消する。と同時に、添加物の配合を極力少量にすることにより、確実な内リンパ水腫減荷効果を発現させ、さらに増強し、かつ全身及び局所における副作用を抑制したメニエール病治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
メニエール病の病因は未だ不明の部分が多いが、その病態が内リンパ水腫であることはメニエール病患者の剖検例の組織学的検討の結果から、広く知られている（非特許文献１）。この内リンパ水腫は、内リンパ液の産生過剰や吸収障害など、内耳の水代謝の異常によって内リンパ液が貯留することで形成され、耳鳴、難聴、めまい、耳閉感等のメニエール病の特徴的な症状が発現するとされる。したがって、この内リンパ水腫を減荷することがメニエール病治療の目標となると考えられている（非特許文献２）。
【０００３】
歴史的には、メニエール病の治療薬として、内リンパ水腫の減荷を目的として、尿素や浸透圧利尿剤であるグリセロール、マンニトールなどの糖アルコールが用いられてきた。糖及び糖アルコールの多くは、投与後浸透圧作用を発現することから、浸透圧利尿剤、浸透圧下剤として用いられてきた。浸透圧効果による脱水作用を有する薬剤として、瀉下作用を有するソルビトール、マンニトール、浸透圧利尿剤としてのマンニトール、グリセオール等がある。病態が内リンパ水腫であるメニエール病の治療においても、この脱水作用により水腫軽減が可能であると考えられた。すなわち、これらの薬剤は、経口投与後に内外リンパ液の浸透圧勾配を生じることから、内リンパ腔の容積が減少し、内リンパ腔虚脱効果、または内リンパ水腫減荷効果が生じるのではないかと考えられたのである。
【０００４】
しかし、現在まで糖アルコールを治療に用いようとして、多くの試行錯誤がなされているにもかかわらず、臨床応用されるだけの成果を得るには到っていない（非特許文献３、４、５）。
【０００５】
１９９０年代以降、水チャネルの存在が各臓器において次々と確認された。腎臓と比較的よく似た組織構造を有する内耳においても、内耳液の産生、吸収の機序解明に関する研究が進み、内耳にもアクアポリン（水チャネルタンパク質）の存在が確認された（非特許文献６）。近年、内耳の水代謝を司るものの１つとして、アルギニンバゾプレシンーアクアポリン２（arginine vasopressin-aquaporin 2）システムが注目されている（非特許文献７）。ところが、バゾプレシンＩＩ型受容体拮抗剤であるＯＰＣ３１２６０を全身投与したところ、期待されたほどの内リンパ水腫減荷効果は認められず、逆に正常耳に内リンパ水腫を形成する結果となった。これは強い利尿作用により脱水状態に陥ったためであると判った（非特許文献８）。
【０００６】
臨床的にはメニエール病患者では、急性期に抗利尿ホルモン(Antidiuretic hormone, ADH)のアルギニンバゾプレシン（arginine vasopressin、以後ＡＶＰ）の上昇が報告されている（非特許文献９）。ＡＶＰはストレスホルモンの１つであり、この結果は、メニエール病はストレス時に発症しやすいとされる疫学的事実によく符合する。また、プライエル反射正常のモルモットの皮下にミニポンプでＡＶＰ１ｍｕ／ｋｇ／分を連続投与したところ、明らかな内リンパ水腫が形成された(非特許文献１０)。表１に示すとおり、ＡＶＰ皮内投与量に比例して血漿ＡＶＰが上昇し、組織学的には内リンパ腔の面積が増加（内リンパ水腫の形成）した。ＡＶＰ１ｍｕ／ｋｇ連続投与の場合、血清ＡＶＰは正常人の血漿ＡＶＰの数倍（メニエール病の急性期の血清ＡＶＰとほぼ同値）に上昇し、極めて危険な状態になった (非特許文献１０)。
【０００７】
【表１】
【０００８】
上記のように血漿ＡＶＰを上昇させることにより、正常な内耳においても内リンパ水腫を生じた事実から考えて、内リンパ液の吸収障害など、何らかの素因を有するメニエール病患者においては、治療にあたっては、ストレスや脱水などによりＡＶＰが上昇しないよう、特に留意しなくてはならない。
【０００９】
元来、糖又は糖アルコールは浸透圧下剤として用いられてきたことからも推測されるように、糖又は糖アルコールは、一度に大量を経口投与すると消化器官において浸透圧勾配を生じ、下痢など胃腸症状を発現し、一般的な胃腸薬が効果を示さない重篤な下痢が生じる。この場合には脱水症状が続発し、抗利尿ホルモンのＡＶＰが１０〜１５倍にも上昇することが報告されている（非特許文献１１）。上記の通り、ＡＶＰ上昇は内リンパ水腫を形成することから、糖又は糖アルコールの止瀉に成功しなければ、その内リンパ水腫減荷効果は下痢に続発する脱水により相殺されると考えられる。したがって、糖又は糖アルコールをメニエール病治療に用いる場合には、下痢などの消化器症状を発現させないように、細心の注意が必要である。
【００１０】
特許文献１には、４単糖アルコールであるエリスリトール単味を有効成分とするメニエール病治療薬が記載されている。発明者らは、エリスリトールを添加したスポーツ飲料を大量に摂取したことで一過性の激しい下痢が発現したことが報告されていることから、止瀉を図らずには治療効果は到底期待できないと考えた。
【００１１】
研究の結果、エリスリトールに限らず、糖又は糖アルコールの多くは単味で大量投与すると、その瀉下作用ゆえに、内リンパ水腫減荷効果は発現しないことを見出した（特許文献２、３、４)。糖又は糖アルコールに多糖類を添加することで、糖又は糖アルコールの止瀉を実現でき、そのことで血漿ＡＶＰの急激な上昇を阻止して、その結果内リンパ水腫の減荷に成功したことを確認した。単糖類又はそのアルコール類に多糖類を添加した場合、投与後３時間で作用が発現し、迅速に作用発現するメニエール病治療薬の開発に成功した（特許文献２、３、４)。
【００１２】
さらに糖又は糖アルコールは浸透圧利尿剤としても作用し、脱水を助長して、結果としてＡＶＰが上昇する。腎臓は内耳とよく似た構造で、１０種類以上確認されているアクアポリンのうち、ほぼ共通のアクアポリンが存在し、水代謝を司っている（非特許文献１２）。したがって、内耳にのみ糖又は糖アルコールを作用させようとすると、手術により内耳に直接薬物を注入又は持続点滴するような局所投与以外は考えられない。内服による全身投与が患者にとって好ましいが、現時点では利尿効果のみを的確に遮断する方法はないので、止瀉を完全にすることは重要な意味がある。
【００１３】
糖又は糖アルコールには、各々に固有の最大無作用量（下痢のＥＤ５０）が知られており、０．２〜０．５ｇ／ｋｇの範囲にあって、これを超えなければ下痢は起こりにくいとされている。従来のメニエール病治療薬は、大量（１回量２１〜３０ｇ）を１日に３回内服するが、これはまさに最大無作用量を超える量を、治療のために毎回摂取していることを意味する。投与量を少なくして、確実な治療効果を発現させることが望まれている。ところが、メニエール病治療の場合に限らず、糖または糖アルコールを医薬として用いる場合に特徴的なことは、大量投与を必要とすることである。大量投与に伴い、副作用も心配される。単糖類又はそのアルコール類はそれぞれ、その分子の大きさや化学的、生物学的性質で消化吸収には違いがあり、消化器症状を含め、副作用は一様ではない。
【００１４】
例えば、炭素数が３の糖アルコールであるグリセロールは作用部位に到達するのが早く、投与後約２時間で内リンパ腔減荷作用が生じるが、約６時間後にはリバウンド現象（内リンパ水腫形成）が生じ、内服による治療効果は期待できない（非特許文献５）。また、全身的な副作用として肝障害が生じることが知られている。
【００１５】
炭素数４の糖アルコールであるエリスリトールは約９０％が小腸で吸収され、代謝されることなく尿に排泄される。残りの１０％が大腸に移動するが、大腸の微生物は発酵させることができず、そのまま排泄されると報告されている（非特許文献１４）。人体だけなく、腸内微生物によっても代謝されないことは「ノンカロリー」（最大カロリー０．２Kcal/g）という点で好ましいが、大量に服用した場合には、未分解の糖は全体量の１０％といえども重篤な下痢を引き起こすことになる。しかし、多糖類を添加することで止瀉に成功すれば、投与後２〜３時間で減荷作用を生じた（特許文献２）。作用部位に達するのが、グリセロールに次いで早いと思われる。さらに膨満感など、他の胃腸症状も生じず、リバウンド現象もなかった。（特許文献２)。
【００１６】
糖又は糖アルコールの多くがすぐれた甘味を有し、ショ糖の代替甘味料として用いれば、口腔内で細菌、酵素による有機酸の生成がほとんど無いので虫歯の発生原因とならず、抗ウ触効果（並びにウ蝕予防効果）が期待できる。中でも、炭素数５のキシリトールはすぐれた甘味を有し、さらにウ触を直接防止する作用が報告されているが、全身的な副作用として、イヌなどの動物では肝障害が報告されている（非特許文献１５）。
【００１７】
現在、メニエール病治療薬として我が国で臨床応用されている糖アルコールは、イソソルビド（１，２：３，６−ジアンヒドロ−Ｄ−ソルビトール）で炭素数が６の糖アルコールであるが、２カ所の架橋があるため、分子径が短い部位が存在し、同じ炭素数６のマンニトール、ソルビトールなどと比較すると生体膜を透過しやすいとされ、減荷作用発現に好ましいと考えられる(非特許文献１３)。
【００１８】
イソソルビトールは瀉下作用が比較的弱いもので、重大な副作用も報告されていないが、独特の苦みがある。イソソルビトール製剤（興和創薬（株）製：一般名イソソルビド）は、イソソルビトール含有率は７０％の水溶液である。１回服用量が３０ｍｌ以上で、１日３回服用する必要があり、服用量が大量であることから、服用に困難を感じる患者が多く、服用を中断する例もある。苦みを和らげるために甘味成分、風味を添加しているが、味の改善に必ずしも成功していない。
【００１９】
イソソルビトール製剤のさらに重大な問題点の１つは作用発現まで、経口投与後約６時間を要する（非特許文献１３）ことである。３単糖であるグリセロールが効果発現まで約２時間（非特許文献５）、４単糖であるエリスリトールは、止瀉に成功すれば３時間で効果が発現する（特許文献２）ことに比べて、作用発現まで長時間を要する。この理由は分子径や瀉下作用のみでは説明ができない。
【００２０】
減荷作用は浸透圧作用によるものであるから、作用の強さは投与する薬剤のモル数に比例するが、作用発現には作用部位に到達する必要があり、作用発現の速さは糖または糖アルコールの分子径、分子構造を考慮しなくてはならない。また、糖又は糖アルコールの大量投与に伴い、副作用の危険も高まるため、選択する場合には、その性質を詳細に検討しなくてはならない。さらに、添加物にも留意しなくてはならない。
【００２１】
そこで、従来のイソソルビトール製剤がなぜ作用発現までに長時間を要するのか、その原因を調べ、その問題点を改良して、より迅速に効果が発現し、且つリバウンド現象のない薬剤の開発を試みた。
【特許文献１】特開平１１−１８０８６３
【特許文献２】特許第３９４７７９６号
【特許文献３】特許４０８１１３１号
【特許文献４】特許４１０５７３２号
【非特許文献１】切替一郎、耳鼻咽喉科学
【非特許文献２】小松崎篤編、Client 21、
【非特許文献３】Angelborg C. et al: Hyperosmotic Solutions and hearing in Meniere’s disease. Am J Otol. 3: 200-2(1982)
【非特許文献４】Matsubara H et al: Rebound phenomenon in glycerol test. Acta Otolaryngol Suppl. 419: 115-22(1984)
【非特許文献５】Takeda T et al: The rebound phenomenon of glycerol-induced changes in the endolymphatic space. Acta Otolaryngol 119: 341-4(1999)
【非特許文献６】Sawada S et al： Aquaporin-1 (AQP1) is expressed in the stria vascularis of rat cochlea. 1216256016421_1.');181:15-9（2003）
【非特許文献７】Sawada S et al: Aquaporin-2 regulation by vasopressin in the rat inner ear. Neuroreport 13: 1127-9(2002)
【非特許文献８】Takeda T：The effects of V2 antagonist (OPC-31260) on endolymphatic hydrops. Hear Res. 183: 9-18, (2003)
【非特許文献９】Takeda T et el: Antidiuretic hormone (ADH) and endolymphatic hydrops. Acta Otolaryngol Suppl 519: 219-22，(1995)
【非特許文献１０】Takeda T et al: Endolymphatic hydrops induced by chronic administration of vasopressin. Hear Res. 140:1-6, (2000)
【非特許文献１１】Safwate A et al: Renin-aldosterone system and arginine vasopressin in diarrhoeic calves. Br Vet J 147：533-7,(1991)
【非特許文献１２】Kwon TH, Nielsen S. et al.: Physiology and pathophysiology of renal aquaporins. Semin Nephrol 21:231-8, (2001)
【非特許文献１３】Kakigi A et al：Time course of dehydratic effects of isosorbide on experimentally induced endolymphatic hydrops in guinea pigs. ＯＲL J Otorhinolaryngol Relat Spec 66：291-296 (2004)
【非特許文献１４】1216256016421_2.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Arrigoni+E%22%5BAuthor%5D, Human gut microbiota does not ferment erythritol. 1216256016421_3.');2005 Nov;94(5):643-6.
【非特許文献１５】1216256016421_4.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Dunayer+EK%22%5BAuthor%5D, 1216256016421_5.fcgi?db=pubmed&cmd=Search&itool=pubmed_AbstractPlus&term=%22Gwaltney%2DBrant+SM%22%5BAuthor%5D. Acute hepatic failure and coagulopathy associated with xylitol ingestion in eight dogs. 1216256016421_6.'); 229(7):1113-7. (2006).
【非特許文献１６】Robertson GＬ et al：The osmoregulation of vasopressin. Kidney International 10：25-37．(1976)
【非特許文献１７】Wise B L. et al： The effects of isosorbide on serum and cerebrospinal fluid osmolality and on the spinal fluid pressure in man. J Neuro-surg. 28:124-8(1968).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
糖又は糖アルコールを有効成分とする従来のメニエール病治療薬は、減荷効果発現までに長時間を要するものやリバウンド現象が生じるものであった。そこで、本発明が解決しようとする課題の第１は、従来の治療薬が作用発現までに長時間要する理由を突き止め、その改良を図ることにある。
【００２３】
従来のメニエール病治療薬は、大量（１回量２１〜３０ｇ）を１日に３回内服するが、これは、糖又は糖アルコールの最大無作用量（下痢のＥＤ５０）又はそれを超える量を、治療のために毎回摂取していることになり、特有の瀉下作用がみられる。さらに、２週間程度にわたって経口投与するため、糖又は糖アルコール固有の副作用のおそれがあった。さらに、大量投与を長期に続けると血漿浸透圧及び血漿ＡＶＰが上昇して、治療に逆行する。本願発明者は、多糖類を添加することで糖又は糖アルコールの止瀉を実現し、その結果水腫減荷作用を発現させることに成功した（特許文献２）が、正常側に虚脱（内リンパ腔容積の減少）又は水腫（内リンパ腔容積の増加）を生じる場合があり、その程度は糖又は糖アルコールにより程度に違いがあることも判った。
【００２４】
そこで、本発明が解決しようとする課題の第２は、各々の糖又は糖アルコールの性質を考慮して、出来る限りその投与量を削減することで、安全で、しかしながら確実に、且つ迅速に作用を発現し、長期投与にも適したメニエール病治療薬を開発することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究の結果、従来のメニエール病治療薬は溶解補助剤、甘味料などの添加剤を安易に配合していた事実を突き止めた(［参考例１−１］)。添加剤の配合された薬剤は、術側には減価効果を生じるものの、実験動物の正常側には軽度ながら、内リンパ水腫を生じることを発見した(［参考例１−４］)。メニエール病は片側性のものが多いが、吸収障害など内耳に発症の素因を有すると考えられるので、実験動物の正常側に水腫を生じることは、患者の健側にも水腫を発症させるおそれがあり、危険である。
【００２６】
発明者らは、この理由を次のように考えた。すなわち、薬剤が血中に移行すると血漿浸透圧が上昇し、連動して血漿ＡＶＰが上昇する（非特許文献１６、１７）。浸透圧作用を有し、下痢や利尿を起こす糖又は糖アルコールを可能な限り削減することが好ましい。添加剤も主薬と同様、血中に移行すると血漿ＡＶＰを上昇させる。したがって、メニエール病の治療に直接関係のない添加剤は必要最小限にとどめるべきであることが分かった。そこで、例えば担体、賦形剤、希釈剤、結合剤、防腐剤、安定剤、香味・着色剤などを排除し、次のようにして、課題を解決した。
【００２７】
１）糖又は糖アルコールを複数種組み合わせることで単一の糖又は糖アルコールの投与量の削減に成功し、その結果、糖又は糖アルコール類の大量投与による全身的副作用の発現を回避した。２）内耳に与える作用の異なる糖または糖アルコールを、複数種組み合わせることで、好ましい治療効果が発現した。また、局所的な副作用の発現を回避し、正常耳に水腫、虚脱、又はリバウンドなどが発現することを阻止した。３）糖を複数種組合せ、一定範囲量の多糖類を1種又は２種以上配合することで、少量の添加で糖又は糖アルコールの止瀉に成功し、術側（ヒトの患側に相当）の内リンパ水腫減荷に加え、正常側（ヒトの健側に相当）の内リンパ水腫発現を阻止した。以上によって、確実で迅速な作用を有し、かつ副作用の少なく、安全で、長期投与にも適したメニエール病治療効果を実現して、本発明を完成した。
【００２８】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）２種以上の、単糖類又はその糖アルコールを含有するメニエール病治療薬。
（２）２種以上が２種である、（１）に記載のメニエール病治療薬。
（３）２種以上の、単糖類又はその糖アルコール、及び１種又は２種以上の多糖類を含有するメニエール病治療薬。
（４）２種以上が２種である、（３）に記載のメニエール病治療薬。
（５）２種の、単糖類又はその糖アルコールが、４単糖と６単糖である、（１）ないし（４）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
（６）２種の、単糖類又はその糖アルコールの一方が、イソソルビトールである、（１）ないし（５）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
（７）２種の、単糖類又はその糖アルコールが、エリスリトールとイソソルビトールである、（１）ないし（６）のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のメニエール病治療薬は、１）単糖類又はその糖アルコール（以下、「糖アルコール類」ということもある。）を２種以上組み合わせること、さらに添加物はメニエール病治療に直接有効な成分に限定し、且つ添加量を必要最小限に抑えて、投与量を大幅に削減することにより、血漿浸透圧上昇を抑えた。結果として、従来のメニエール病治療薬が作用発現まで６時間要していたところを３時間に短縮した。また、従来の治療薬は投与後２〜６時間目に、正常耳に軽度の内リンパ水腫を生じるというメニエール病治療にとっては不都合な作用を示したが、この阻止にも成功した。さらにリバウンド現象の阻止にも成功した。
【００３０】
２）糖アルコール類を複数種組み合わせることにより、単独の場合に比べ、糖アルコール類自体の胃腸障害、肝障害など全身の副作用発現が阻止または軽減できる。３）糖アルコール類の瀉下作用に関しては、最大無作用量を超えないように糖アルコール類を組み合わせることで、止瀉を図るために添加する多糖類が少量で済む。
【００３１】
さらに、４）糖アルコール類に必要量の多糖類を添加することで止瀉を図れ、メニエール病治療の目標である内リンパ水腫の減荷を有効にかつ的確に達成することができたが、単一の糖アルコール類の場合は、ともすれば、正常側にも虚脱を生じる傾向が認められた。この不都合な作用の阻止に、２種以上の糖アルコール類を組み合わせることで成功した。
【００３２】
該配合物はゲル剤とすることによって嵩を圧縮することが可能であるため、保存・携行・服用が容易であり、さらに、ゲル剤を乾燥後、粉砕、造粒などによって粉剤、顆粒剤などの任意の製剤とすれば、保存・携行・服用が一層簡便となる。粉剤又は顆粒剤等の乾燥製剤は、服用時に少量の水を加えれば、直ちに服用のしやすいゲル剤（ゼリー状）とすることが出来る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
本発明において、２種以上の糖アルコール類としては、グリセロール、エリスリトール、キシリトール、キシロース、ソルビトール、イソソルビトール、マンニトールなどの単糖類又はそのアルコールが挙げられる。
【００３４】
その組成は、目的に応じて、種々の組合せと比率が可能である。例えば２種の糖を組み合わせる場合は５：９５〜９５：５、１０：９０〜９０：１０、２０：８０〜８０：２０、３０：７０〜７０：３０などとすることができる。
【００３５】
糖アルコール類の組合せは、以下に記す参考例から、糖アルコール類の分子の大きさにより作用発現の速さに差があると推測されることから、次のような組合せが考えられる。
【００３６】
例えば、３単糖のグリセロール（［参考例５］）は投与後２時間目に作用が発現するが、リバウンド現象が生じる（非特許文献５、［００１４］）。発明者はこの現象を以下のような過程によるものと考えた。分子径の小さいグリセロール分子は、２時間後には外リンパ腔に到達し、外リンパ液の浸透圧が上昇する。低張な内リンパ液から水分子が外リンパ腔に移動し、内リンパ腔容積は減少（減荷効果を発揮）する。その後、グリセロール分子は時間経過と共に内リンパ液と外リンパ液を隔てるライスネル膜を通過し、内リンパ腔に達して、内リンパ液が高張となる。そのため水が外リンパ腔から内リンパ腔に移動し、内リンパ腔容積は増加して、リバウンド（水腫の再形成）する。
【００３７】
６単糖のイソソルビトールは作用発現が遅く、３〜６時間目に減荷作用を発揮する（非特許文献１３、［参考例１−２］、［参考例１−４］）ことから、グリセロールとイソソルビトールを組み合わせると、作用発現が早く、効果は長時間持続し、且つリバウンド現象をも阻止できると予想される。イソソルビトールは分子が大きく、外リンパ腔に留まり続けるため、外リンパ腔の浸透圧が高く保たれる。その結果、グリセロールのリバウンド効果が相殺されるであろうと考えるからである。
【００３８】
同様に、３単糖のグリセロール、４単糖のエリスリトールに６単糖のイソソルビトール、ソルビトール、マンニトールなど、分子の大きさに着目した組合せが効果的であると考えられる。
【００３９】
さらに糖アルコールの瀉下作用の強弱には差があって、強力な瀉下作用を有する糖アルコールは、術側には内リンパ水腫減荷作用を示さず、正常側に内リンパ水腫を発現することが判った。多糖類添加により止瀉を図った後には、正常側における内リンパ腔水腫発現は阻止できるが、内リンパ腔虚脱が認められ、その作用には固有差があることが判った。
【００４０】
まず、瀉下作用が強いものは、エリスリトール（Ery、［参考例３−２−ｂ］）で、それに次いで瀉下作用が強いのはグリセロール（Gly、［参考例５］）、キシリトール（ＸＬ、［参考例６］）、キシロース（ＸＳ、［参考例７］）、他にソルビトール（ＳＯ［参考例９−２］）、マンニトール（［参考例９−１］）などで、弱いものにはイソソルビトール（ＩＢ、［参考例１−２］）がある。瀉下作用の弱いＩＢを除いて、血漿ＡＶＰの急激な上昇を招くため、正常側には内リンパ水腫を生じ、手術側において内リンパ水腫減荷効果は生じなかった（［参考例３−１］、［参考例１−４］）。
【００４１】
瀉下作用の強いEryの１回投与量を最大無作用量（ＥＤ５０）以下とするように削減し、瀉下作用の殆ど認められないＩＢを組合せることが好ましいと考えられる。他の組合せとしては、瀉下作用の強いEryに、Eryより瀉下作用の弱い３単糖のGly、５単糖のＸＬ、ＸＳ、６単糖のＳＯ、マンニトールなどを組み合わせる他に、瀉下作用の比較的強いGly、ＸＬ、ＸＳ、ＳＯ、マンニトールなどに、瀉下作用の殆ど認められない６単糖のＩＢの組み合わせも好ましいと考えられる。このようにＥＤ５０以下に止めることで、止瀉を図るために添加する多糖類の添加が少なくて済むことは好ましい。
【００４２】
＜止瀉を図った後の虚脱の違い＞
次に、止瀉を図ると糖アルコール類の作用は変化し、メニエール病治療効果を発揮する。４単糖のEryは３時間目に非常に強力な作用が発現するが、６時間目にはやや減弱する（特許文献２）。したがってEryの量を削減し、６単糖を組み合わせれば、作用が平均的に且つ持続的になると推測される。５単糖のＸＳはEryに次いで強い減荷作用（治療効果）を発現した。これはＸＳの消化管からの独特な吸収過程によるものとも考えられる。ＸＳ、ＸＬに、６単糖のＳＯ、マンニトール、ＩＢを組み合わせても、同様の効果が期待できる。
【００４３】
一方で、例えば４単糖のEryは止瀉を図ると、正常側にも虚脱が生じる傾向が認められた。止瀉に成功した場合、内リンパ腔虚脱効果（正常側）が強いものはEry（［参考例３−２−ｂ］）、ＸＳ（［参考例３］）、弱いものはＩＢ（［参考例１−２］、［参考例１−３］）があり、Gly（［参考例１］）、ＸＬ（［参考例６］）はその中間的な作用が認められた。たとえ水腫減荷作用が強くても、正常側に虚脱を生じることは好ましくない。
【００４４】
虚脱効果（正常側）が強い３炭糖のGly、４炭糖のEry、５単糖のＸＳと、比較的弱い６炭糖、例えばＩＢ、他にＳＯ、マンニトールを組み合わせることが好ましい。このようにして、治療効果発現を迅速にし、効果持続時間を適度に延長させ、同時に正常側への影響も相殺できると考えられる。
【００４５】
ＩＢは瀉下作用が少ないため、止瀉のための添加物を特に必要としない（［参考例１−２］、［参考例１−４］）。しかし、添加物を加えることで血漿浸透圧が上がり、それに同期して血漿ＡＶＰが上昇することで、ＩＢの減荷作用を相殺するおそれがあることが分かった（［参考例１−３］）。しかし、多糖類を添加しても、正常側に虚脱を生じない（［参考例３］、［参考例８］）ことは安全性が高いことを意味しており、好ましい。
【００４６】
正常側の水腫、又は虚脱は好ましくないと発明者が考える理由は以下のとおりである。発明者は実験動物において、開頭手術直後などに内リンパ水腫を観察してきた。これらは健常な（プライエル反射正常な）動物では、２日以内の比較的短時間で消失する。このことから推測されるように、健常人ではライスネル膜が伸張し、または軽度の水腫を形成することがあっても速やかに正常に復するものと思われるが、メニエール病患者は内リンパ液の吸収障害などの素因を有する可能性が高く、糖アルコール類の強い作用で内リンパ腔容積が大きく変化することは好ましくないと考えられるからである。イソソルビトールは正常側では虚脱効果が殆ど認められないにもかかわらず、術側（実験的内リンパ水腫形成術）では減荷効果が認められた（非特許文献１３）。これはライスネル膜（内リンパ腔と外リンパ腔を隔てる半透性膜）が大きく伸張していることなど、何らかの器質的、機能的変化が起きていることが関連しているのではないかと考えられる。
【００４７】
上記の要素、分子の大きさによる作用発現の早さ、持続時間の違い、瀉下作用の強弱による内リンパ腔容積の変化（減荷又は水腫形成）の違い、止瀉を図った後の内リンパ腔の容積変化（虚脱など）の違いを考慮して、例えば、瀉下作用の強く、止瀉を図ると虚脱現象を示すEryと弱いＩＢを組合せると患側には十分な減荷作用を発揮しつつ、且つ正常側には水腫を生じず、多糖類を加えた場合にも虚脱を生じない治療薬を得られる。他の組合せとしてはGlyとＸＬ、ＸＳ、ＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、EryとＸＬ、ＳＯ、マンニトールなど、ＸＬとＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、ＸＳとＩＢ、ＳＯ、マンニトールなど、ＳＯとＩＢ、マンニトールとＩＢなどが好ましい。
【００４８】
独特の苦みを有するＩＢに対して味の改良のため優れた甘味を有するGly、Ery、ＸＬ、ＸＳ、ＳＯ、マンニトールなどを配合することで、内服に適し、かつ治療効果も改善し、より好ましいものになる。
【００４９】
多糖類としては、キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガム、ペクチン、アルジネートナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、寒天、カラギーナンなどが挙げられる。また分子量の大きい多糖類（キサンタンガムなど）の方が少量で強力な止瀉作用を示す傾向が認められた。摂取量が少なくて済むため、摂取が容易で不都合が少ない。
【００５０】
キサンタンガムに代表されるグループには、他にグァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガムなどがあるが、これらは粘度の高いものほど止瀉作用が高い傾向が認められた。しかし、摂取して３〜５時間に便の量が約２分の１〜３分の１に減少し、形態も不整で大きさも小さくなる傾向があり、視診で腹部の膨満感、触診でガスの発生が認められ、ゴロゴロ感があることが推測された。このグループから２種以上を組み合わせると飛躍的に粘度が増すため、止瀉作用も向上した。この現象を利用し、複数種組み合わせることで、より少ない配合量で、十分な止瀉効果を発現させること、同時に、排便が減るという副作用を軽減することが可能となることを見出した。
【００５１】
ペクチンは比較的大量に添加しなくては十分な止瀉作用を現わさなかったが、整腸作用に優れており、便の量は何も投与されていない動物と同程度で、形態や性状も同じであった。大量に添加すると、便の表面はより滑らかになり、排便は容易で腹部の膨満感などの症状も認められなかった。ペクチンに代表されるグループには、アルジネートナトリウム、寒天、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、カラギーナンなどがあり、粘度が高いものほど止瀉作用が強い傾向があった。
【００５２】
必要に応じてこれらの多糖類を１種または２種以上を添加して止瀉を図るが、２種以上組み合わせる場合、上記２つのグループから適宜選択して組み合わせ、添加することにより、止瀉と同時に整腸作用をはかることが可能になることを見出した。また、同じグループの中から複数種組み合わせる等、様々の組み合わせが可能で、添加量を少なくしつつ、場合によっては流れをよくすることもできることから、摂取しやすくするなどの優れた性質を新たに発揮させ、それを生かしつつ、同時に胃腸症状の軽減又は消失を目指すことが可能であることも判った。
【００５３】
多糖類の配合量は、糖アルコール類に対し１〜３０重量％、２〜２０重量％、３〜２０重量％であり、また上限値を１５重量％、１０重量％、５重量％として、１〜１５重量％、２〜１０重量％などとすることもできる。多糖類の配合量が上記範囲を外れると瀉下効果が十分に達成され難い場合も生じる。
【００５４】
糖アルコール類と多糖類の規定量を混合し、混合物に対し約１０〜約５５重量％、好ましくは約１５〜約５０％の精製水を加えて、常温又は必要に応じて加熱下に練和すると、練和物はゲル化しゼリー状になる。精製水の量が１０重量％より少ないと粘度が上がりすぎ、また、５５重量％を超えると希薄になりすぎて良質なゲルが得られないため好ましくない。このゲル剤を乾燥、粉砕すれば粉剤が得られる。また、上記練和物を押し出し造粒等の方法で造粒し、乾燥後製粒することによって顆粒剤が得られる。
【００５５】
乾燥、粉砕、及び造粒は、慣用の方法が何れも適用できる。製剤化に際し、好ましいゲル化を促進し、且つ離水の生じにくいゲルを得ることの出来る無機塩を添加することも可能である。
【００５６】
その他に、血漿浸透圧上昇を避けることは本発明の特徴の１つであるが、血漿浸透圧上昇を招かない範囲で、他の薬効成分、例えば制酸作用、整腸作用を有する薬物として乾燥水酸化アルミニウムゲル、天然ケイ酸アルミニウム、沈降炭酸カルシウムなど、内耳循環改善作用を有する薬物として交感神経β作動薬、血管拡張薬あるいは脳循環改善薬、迷路水腫の軽減を図る薬物として利尿剤、鎮静ないし制吐を図る薬物として鎮静剤、自律神経調節剤を配合することも可能である。その添加量の範囲は、糖アルコール類に対し５％以下、より好ましくは３％以下、さらに２％以下が好ましい。
【００５７】
糖アルコール類の投与量は、病態によるが成人１日あたり０．１５〜１．５ｇ／ｋｇ、好ましくは０．１５〜１．０ｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１５〜０．８５ｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．１５〜０．７ｇ／ｋｇであり、これを１ないし数回、例えば３回に分けて投与する。これは従来の６０％以下の量である。
【００５８】
本発明のメニエール病治療薬は、糖アルコール類と多糖類とを練和して得たゲル剤をそのまま服用してもよく、また、ゲル剤から定法で製剤化して得られる粉剤又は顆粒剤を服用してもよい。ゲル剤から得られる粉剤又は顆粒剤は、糖アルコール類原末に比較して嵩が約２０％以上好ましくは５０％以上減少するため、保存、携帯に有利であり、患者にとって服用の負担が軽減される。
【００５９】
また、粉剤又は顆粒剤に用時に約１０〜約５５重量％の水を加えれば、再ゲル化して一塊のゼリー状となるため、服用がさらに容易となる。本発明によるゲル剤は、糖アルコール類原末の飽和水溶液に対し嵩が約３分の１に激減するため、従来の液状製剤と比較しても服用上格段に有利である。
【００６０】
以下に、実施例、参考例を示して本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。実験計画をたてるに当たり、動物愛護が叫ばれる社会的事情にも配慮し、大量の動物を灌流固定（と殺）することは避けるよう工夫した。なお、糖アルコール類、または糖アルコール類に多糖類を配合したものを投与した動物は、一度のみの利用にとどめた。
【実施例１】
【００６１】
個々の糖アルコール類の特徴を考慮し、２種以上を組み合わせ、必要に応じて、多糖類を添加し、止瀉を図ることで、内リンパ水腫減荷効果を確実に発現させ、且つ正常側には内リンパ水腫や虚脱を生じさせないような薬物の開発を試みた。
【００６２】
瀉下作用が小さく、多糖類添加後に虚脱作用が殆ど認められないＩＢと、瀉下作用が強く、単味では正常側の内リンパ腔容積を増加させる傾向があり、多糖類添加後には虚脱作用が生じるEryを選び、多糖類としてPecを添加して投与した。ＩＢ、Eryとも、通常の４分の１の０．７ｇ／ｋｇ、Pecは０．１５ｇ／ｋｇとした。
【００６３】
モルモットの左側のみに内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。内リンパ嚢の閉鎖は内リンパ嚢の骨外部分を双極性電気凝固器（bipolar electrocoagulator）で焼却することで行った。内リンパ液の吸収に重要な役割を演じる内リンパ嚢を焼灼することで内リンパ液の吸収障害がもたらされ、実験的内リンパ水腫が形成される。この水腫は進行的に形成され、その大きさは約２週間ないし１ヶ月後にはほぼ一定となって、数ヶ月間持続する。術式の詳細は既報（非特許文献８）と同様である。内リンパ腔容積の計測は正常側の右側、術側の左側ともに行なった。
【００６４】
ＩＢ、Ery、多糖類の混和剤投与後、指定された時間まで、便の状態と腹部中心に全身状態を観察した。さらに、胃腸症状は灌流固定の際に、大腸、結腸、直腸の状態を精査し、便の形成状況については、１）便の固さと形、２）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態の２点について特に観察し、表２の基準により判定した。
【００６５】
【表２】
【００６６】
蒸留水を３日間以上投与した群の便の固さ及び性状を「正常便」：評価点３として、表２の１）に示すとおり、「やや軟便」：評価点２、「軟便」：評価点１、「泥状便」：評価点０とした。なお、モルモットの場合は飼料の形状から水様便はない。泥状便はヒトでは水様便に当たり、モルモットの軟便はヒトでは泥状便と軟便を含むものに相当する。開腹による消化器内部の詳細な観察と、体外に排出された便の観察を対比すると、便の固さのみの観察では下痢などの消化器症状は判定できないことが判った。したがって、便の固さに加え、量や形、大きさ、表面の滑らかさ等を評価し、腹部の視診、手指による触診で、腹部の膨満感やガスの発生、ガスの移動、さらに下腹部に圧を加えることで容易に排便するかどうかなど、詳細に検討し、評価した。
【００６７】
指定された時間、飼育後、灌流固定して、側頭骨を摘出した。トリクロロ酢酸で脱灰、アルコール系列で脱水、パラフィン・セロイジンの２重包埋を行った。薄切により得た蝸牛軸切片をヘマトキシリン・エオジン染色し、光学顕微鏡で蝸牛組織の観察を行い、ライスネル膜の長さと内リンパ腔の面積の変化を観察、計測を行った。各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を下記の計算式により積分して、蝸牛毎に膜の伸展率、内リンパ嚢の面積増加率を求めた。正常側の右側では内リンパ腔の容積変化から、内リンパ腔虚脱効果又は内リンパ水腫の程度を評価した。術側の左側では内リンパ水腫減荷効果を判定した。組織作成法、計測法、評価法の詳細は非特許文献５（Takeda T et al: Acta Otolaryngol 119: 341-4(1999)と同様である。
【００６８】
【数１】
【００６９】
【数２】
【００７０】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表３に示す。なお、動物群の番号は実験の過程でナンバリングした番号をそのまま用いたため、順不同である。
【００７１】
【表３】
【００７２】
Ery単味の第２０群では全動物が泥状便であったが、Ery+P0.5g/kg投与の第２４群では軟便または泥状便の動物は約半数の動物にとどまり止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定、特許文献２）。従来のイソソルビド製剤（以下、ＩＢ従来品、〈ＩＢ〉ともいう）投与の第１０群では約半数の動物が軟便または泥状便となり、ガスの発生など消化器症状が発現した。それに対し、ＩＢ＋Ｐ＊群は３時間後（第１４群）の便の固さは８匹が正常便で、消化管内での便の排列、ガスの発生など、他の消化器症状も有意な軽回が認められた（止瀉作用、消化器症状は各々Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【００７３】
EryとＩＢを混和、Pecを添加した第３３群（投与後３時間目）では、８匹中６匹が正常便となり泥状便の動物はいなかった。Ery単味の第２０群、〈ＩＢ〉単味の第１０群と比べ、有意な止瀉効果が認められた（各々、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。消化器症状は１匹を除いてごく軽度で、Ery単味の第２０群とのみ有意に軽回していることが判った（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。下痢症状を含め消化器症状は蒸留水を投与した対照群と有意差はなく、ほぼ正常に復したと言える。投与後６時間では全動物が正常な固さの便となったが、便の間隔は半数の動物が一定であって、１匹には消化器症状は依然としていくらか残っていることが判った。
【００７４】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表４に示す。
【００７５】
【表４】
【００７６】
止瀉を図るためEryにPecを添加した第２４群は、正常側に虚脱を生じる動物が多かったが、ＩＢとEryを混和した第３３群（３時間後）は軽度の虚脱が生じただけであった。第２４群と第３３群の間には有意差はないが、これは第２４群の内リンパ腔容積変化のバラツキが大きいためである。第２４群では、８耳中３耳の内リンパ腔容積が約１０％増加し、水腫を形成したが、その他は、５耳が５〜１０％減少した。１５％減少した例も２耳あり、バラツキが大きかった。対照群との比較では、虚脱を起こす傾向が認められた（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）（本願明細書、参考例［０１５０］）。第２４群では、膜の伸展が対照群と比して著しい（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。一方EryとＩＢを混和した第３３群は対照群と比して膜の伸展に有意差はない。このことは内耳に浸透圧効果が生じる際に緩やかに、且つ一定の作用が生じたことを意味し、非常に好ましい。なお、第３３群と第２４群の膜の伸展度は有意に小さかった（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。
【００７７】
〈ＩＢ〉の第１０群は対照群（蒸留水）と比べ、正常側に水腫を形成した（有意差は０．０５、ｔ−検定）が、第３３群は改善した（有意差は０．０１、ｔ−検定）。この効果は投与後６時間後の第３４群も持続していた。
【００７８】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
モルモットの左側のみに内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。内リンパ液の吸収に重要な役割を演じる内リンパ嚢を焼灼することで内リンパ液の吸収障害がもたらされ、実験的内リンパ水腫が形成される。計測は、Ｂ）と同様に行い、その結果を表５、図１に示す。なお、術側の結果を示す場合には動物番号にＬ（左側を意味する）をつけた。閉鎖術による実験的水腫の形成程度は数％から百数十％とバラツキが大きく、膜の伸展率、面積増加率の平均±標準偏差を比較することでは糖アルコールの効果、その経時変化などを検討することには困難がある。図１は横軸に膜の伸展率、縦軸に面積増加率をとり、各動物群毎に術側の２変数の散布図と回帰直線を示したものである。内リンパ水腫が生ずると、内リンパ腔の体積が増加し、ライスネル膜が伸展する。蒸留水を投与した第１Ｌ群（術側）では、この両者の間に統計学的に１次相関が存在すると推計される。薬剤投与により水腫の減荷が起こると、膜が伸展しているにもかかわらず、内リンパ腔の面積増加が少なくなり、回帰直線が下方に移動することになる。
【００７９】
【表５】
【００８０】
減荷作用の強いEry＋Pec群（第２０Ｌ群）は対照群と比べ強い減荷作用を示した（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。ＩＢ＋Ｐ＊群（第１４Ｌ群）は比較的緩やかな減荷作用を示した（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。またPecを添加した第２４群はEryのみの第２０群と比較すると強力な減荷作用が認められた（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。Pecを添加した第１４Ｌ群と従来品の第１０Ｌ群の減荷作用の間には有意差が存在した（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３３Ｌ群（ＩＢ＋Ery＋Pec、３時間）は対照群と比較し、有意に内リンパ水腫減荷作用が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３４Ｌ群（６時間後）では３時間後とほぼ同様の減荷作用が持続した。なお、減荷作用は第１４Ｌ群（ＩＢ＋Ｐ＊）より強く、有意差が存在した（Ｐ＜０．０５、ＡＮＣＯＶＡ）。しかし、第２４Ｌ群（Ery＋Pec）より弱かった（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。しかし、糖アルコールの投与量を半減（Eryの投与量は第２４群の４分の１、ＩＢの投与量は第１０群の４分の１）したにもかかわらず、十分な減荷作用を発現している点で優れている。
【００８１】
このようにEryとＩＢを混和することにより、糖アルコール類の投与量を削減し、添加物は止瀉を図るもののみに限定することによって、正常側には影響を殆ど与えず、術側には十分な水腫減荷効果を発揮する治療薬の開発に成功した。特に好ましいのは、膜を伸展させないことで、一定の効果が確実に発現したことを意味する。さらに単味の場合よりも多糖類の添加が少なくて良いことである。
【００８２】
［参考例１：従来のイソソルビド製剤についての検討］
現在我が国で臨床に用いられている治療薬はイソソルビトール（興和創薬（株）製：一般名イソソルビド、以下、ＩＢ従来品、〈ＩＢ〉ともいう）で、表示によるとイソソルビトール含有率は７０％の水溶液である。この１回服用量は３０ｍｌで、イソソルビトールの含有量は２１ｇである。この溶液はイソソルビトールを安定に溶解させるため、溶解補助剤、安定化剤が添加され、さらに内服しやすい味に整えるため甘味料、香料などが添加されていると思われる。
【００８３】
イソソルビド製剤とＩＢ単味の水溶液の内リンパ容積に対する影響を調べ、比較した。
【００８４】
［参考例１−１：ＩＢ従来製剤の添加物について］
イソソルビトール２１ｇを蒸留水に溶解させ、安定的に溶解させるためキサンタンガムを必要量添加して、３０ｍｌとした。この水溶液の重量を〈ＩＢ〉３０ｍｌの重量と比較した。
処方１
イソソルビトール ２１ｇ
キサンタンガム ０．１５ｇ
蒸留水
３０ｍｌ
【００８５】
処方１の水溶液の重量は３４．７４ｇで、一方〈ＩＢ〉３０ｍｌの重量は３６．６７ｇであった。添加物の重量は１．９３ｇ（約９．２重量％）と判った。糖アルコール類は消化管から吸収され、血中に移行する。その結果血漿浸透圧が上昇し、その上昇にほぼ比例して血漿ＡＶＰが上昇する（非特許文献１６）。添加物も血漿浸透圧を上昇させ、血漿ＡＶＰの上昇が続発する。
【００８６】
〈ＩＢ〉の問題点を詳細に検討し、合わせて添加物が本来の目的である内リンパ水腫減荷効果にどのような影響を与えるのかを調べた。イソソルビトールなど糖アルコール類投与後、胃腸症状は灌流固定の際に、大腸、結腸、直腸の状態を精査し、便の形成状況については、１）便の固さと形、２）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態の２点について特に観察し、表２の基準により判定した。
【００８７】
［参考例１−２：イソソルビトール（ＩＢ）のみを投与した場合］
モルモット５０匹を６群に分け、各群に次に示すように薬物の投与を行った。ＩＢの投与量は実験的内リンパ水腫動物の減荷に有効な量である２．８ｇ／ｋｇ（非特許文献１３）とした。これは、メニエール病患者に投与される２１〜３０ｇ／回に相当すると考えられる。ＩＢ水溶液は１回投与量が８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１群：対照群 蒸留水 ３時間後
第２群：ＩＢ２Ｈ群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ ２時間後
第３群：ＩＢ３Ｈ群 同 ３時間後
第４群：ＩＢ４Ｈ群 同 ４時間後
第５群：ＩＢ６Ｈ群 同 ６時間後
第６群：ＩＢ１２Ｈ群 同 １２時間後
【００８８】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表６に示す。
【００８９】
【表６】
【００９０】
便の固さは灌流時点に排出された便と直腸部分の便を観察し、評価した。
対照群はすべて正常便であった。ＩＢ２Ｈ群は直腸付近では正常な便が形成されていたが、次第に軟便に移行していた（便の固さ、配列は各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。大きさは不整、間隔もバラバラで不定になっており、不快な胃腸症状の発現が推定された。３、４、６時間後に下痢は重篤になり（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）、便の配列も不規則になった（いずれもＰ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。便の間隔が開いた箇所には、腸管内への穿刺により、ガスの発生が認められた。ＩＢ１２Ｈ群では全動物でほぼ正常な固さの便が形成されていた。
【００９１】
以上から、ＩＢ投与による下痢及び胃腸症状は２〜４時間で重篤なものとなり、６時間後も継続しているが、１２時間後にはおおよそ正常に復することが判った。
【００９２】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各群の正常側における膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を表７に示し、比較検討した。
【００９３】
【表７】
【００９４】
投与後２時間後には内リンパ水腫が形成され、増加率が約１２％を超えるものが８匹中７匹となった（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。しかし、３時間後には対照群と同等程度のものが３匹、５〜８％の虚脱（容積の減少）が認められるものが３匹、容積増加率が約１４％のものが２匹と、内リンパ腔の容積にはバラツキが大きかった。結果として対照群との有意差は認められなかったが、ＩＢ２Ｈ群（第２群）と比較すると容積は有意に減少しており（各々、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、ＩＢによる減荷効果が発現したと言える。４時間後には内リンパ腔の容積の平均は再び増加するが、対照群と比べ、有意差はなかった。同様の状態が１２時間後まで続いた。一方ライスネル膜は２時間目、４時間目で有意に伸展していた（Ｐ＜０．０５）。
【００９５】
ＩＢ単味を２ｇ／ｋｇ（５０％水溶液）内服した場合、内服直後から血清浸透圧が上昇し始め、その後４０ないし９０分後に１７〜３０ｍOsm／liter上昇してピークになり、約６〜７時間で元に復する（非特許文献１７）。Becker（Becker B：Isosorbide: An oral hyperosmotic agent. Arch. Ophthalmol. 78:147-50.）も同様に、経口投与後１〜２時間後に１９〜３０ｍOsm／liter上昇すると報告している。非特許文献１６及び表１（非特許文献１０）を考え合わせると、明らかな水腫が形成されるに十分な上昇である。一方脳脊髄液（以下、ＣＳＦ）浸透圧の上昇は３例のみの観察結果であるが、１〜２時間後から上昇し始め４時間後も高い値を保っている（非特許文献１７）。
【００９６】
表７に示すとおり、経口投与後２時間で内リンパ水腫が形成されたことは、血漿浸透圧と同期して血漿ＡＶＰが上昇したためであると考えられる。また、内耳の構造は、血液脳関門に似た関門が存在するが、ＣＦＳの浸透圧が投与後２時間目以後に上昇し始めること、及び分子の大きさを考慮すると３時間目以降に内リンパ腔虚脱効果が発現することは当然と言える。
【００９７】
［参考例１−３：イソソルビトール（ＩＢ）単味を大量投与した場合］
グリセロールが２時間後に正常側の内リンパ腔容積を減少（虚脱）させる（非特許文献５）にもかかわらず、ＩＢの作用は明らかでないのは、イソソルビトールの投与量が少ない可能性もあると考えた。そこで、ＩＢの量をグリセロール検査に用いられるグリセロールと等しいモル数になるように、８．５ｇ／ｋｇ、さらに倍量の１７ｇ／ｋｇに増量して、消化器症状と正常側の内リンパ腔の容積変化を観察した。結果を表８、９に示す。
【００９８】
【表８】
【００９９】
【表９】
ＩＢ＊:イソソルビトール８．５ｇ／ｋｇ
ＩＢ＊＊:イソソルビトール１７．０ｇ／ｋｇ
【０１００】
ＩＢを増量することにより、半数以上の動物に軟便、泥状便の重度の下痢の症状が認められ、便の間隔も不整になった（いずれも、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＩＢの投与量に比例して症状は重篤になった。腸内にガスの貯留も認められた。内リンパ水腫は蒸留水投与群、ＩＢ通常量投与群（第３群）と比較して著明になった（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。血漿浸透圧が上昇した結果であることが推測され、安全性確保のため、投与量の削減が必要であることは歴然であった。
【０１０１】
［参考例１−４：イソソルビトール従来品を投与した場合］
正常な便をしているモルモット４０匹を４群に分け、第７群〜１０群には〈ＩＢ〉をＩＢが２．８ｇ／ｋｇとなるように投与し、投与後各々３時間目、４時間目、６時間目（〈ＩＢ〉の減荷効果が最大となる投与後６時間後（非特許文献１３）、１２時間目に灌流固定し、組織を採取して内リンパ減荷効果を観察、評価した。消化器症状は灌流時まで継続して行った。便の固さは灌流時のものである。いずれの群も、１回の投与量は８ｍｌ／ｋｇとなるように調製した。
【０１０２】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１０群：〈ＩＢ〉３Ｈ群 イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ含有 ３時間後
第１１群：〈ＩＢ〉４Ｈ群 同 ４時間後
第１２群：〈ＩＢ〉６Ｈ群 同 ６時間後
第１３群：〈ＩＢ〉１２Ｈ群 同 １２時間後
【０１０３】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表１０に示す。
【０１０４】
【表１０】
【０１０５】
〈ＩＢ〉投与群では２時間後に便が軟化し始め、３〜４時間後（第１０、１１群）に下痢症状は最悪となり、６時間後（第１２群）にはいくらか改善していた。いずれの群も蒸留水を投与した対照群と比べると下痢症状は有意に悪化（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）し、ＩＢ単味の群（第２〜５群）と比べると有意差は認められなかった（Mann-Whitney Ｕ検定。第１２群（〈ＩＢ〉６Ｈ群）では、形成された便の長さは６０．２±１５．８ｃｍであるが、１０匹中９匹は便の間隔はバラバラまたは泥状で、約２０〜４０ｃｍの間隔が開いている箇所も散見され、腸管内にはガスが発生していたことから、かなりの胃腸症状が現れていたものと推測される。対照群と比較すると、第１０〜１２群で有意差が認められた（いずれもＰ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。下痢等の胃腸症状が出現していたことが分かる。この事実は、〈ＩＢ〉投与後に患者が時折訴える下痢、膨満感、ゴロゴロ感などの消化器症状と符合する。１２時間後には便の固さは正常に戻っていたが、間隔が一定に戻っていたのは１０匹中僅か２匹で、第１群と比較し有意差が認められた（Ｐ＜０．００１Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、最も症状が悪化した３時間後と比較すると回復が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１０６】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化
正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表１１に示す。
【０１０７】
【表１１】
【０１０８】
第１０群（〈ＩＢ〉３時間後）は対照群と有意差はないが、４時間後（第１１群）、６時間後（第１２群）には内リンパ水腫が形成された。第１０群はＩＢのみを投与した第３群と比べると、内リンパ腔の容積は有意に増加していた（Ｐ＜０．０５）。４時間目（第１１群）は内リンパ腔容積の増加傾向がさらに明らかになり、対照群と比べ有意差が存在し（対照群に対しＰ＜０．０５）、内リンパ水腫が認められた。ライスネル膜は３、４時間目に有意に伸展していた（Ｐ＜０．０５）。
【０１０９】
参考例１−２で、ＩＢは瀉下作用の小さいため、わずかながら内リンパ腔容積を減少させる傾向を示した。ところが、参考例１−３でＩＢを３倍、６倍に増量すると、瀉下作用が増し、内リンパ腔容積は増加傾向を示した。ＩＢの大量投与により血漿浸透圧、血漿ＡＶＰが上昇したためと考えられる。また、ＩＢ単味で２．８ｇ／ｋｇ投与すると、３時間後には内リンパ腔の容積は減少傾向を示すにもかかわらず、添加物が配合された〈ＩＢ〉では同量投与しても３時間後には容積が増加傾向にあった（［参考例１−４］）。
【０１１０】
これらの事実こそが、〈ＩＢ〉は下痢が軽度であるにもかかわらず、投与後３時間では虚脱効果が発現しない理由であり、治療効果（内リンパ水腫減荷効果）発現まで６時間（非特許文献１３）かかる理由であると思われる。すなわち、過剰な添加剤により糖アルコール単味の場合よりも血漿浸透圧がさらに上昇するため、血漿ＡＶＰの上昇も大きく（非特許文献１６、１７）、結果として糖アルコール類が元来有する内リンパ腔容積の減少効果が最も著しく現れる２〜３時間後にはその効果を相殺して、内リンパ水腫を形成したと考えられる。添加物は浸透圧の上昇を招くが、分子が大きく内リンパ腔虚脱効果を発現しなかったと考えられる。６時間後に容積が減少したが、これは６時間目には血漿浸透圧が元に復する（非特許文献１７）ためであろう。血漿浸透圧、血漿ＡＶＰが正常範囲に復してから、外リンパ腔に残留する分子の浸透圧作用により、初めて減荷効果を発現すると考えられるのである。
【０１１１】
これは不必要な、または必要以上の添加物に起因するものであり、不必要な添加物は治療に逆行することが判った。この事実は、［参考例３−２−ａ］でもさらに検証する。ＩＢは瀉下作用が小さいため、単味でも一定の減荷作用が発現するが、決して優れた減荷作用を有しているとは言えず、製剤化した〈ＩＢ〉はＩＢ自体が弱いながらも有する減荷作用を発現させることに成功しているとは決して言えないことが分かった。添加剤は極力削減し、必要最小限にとどめるべきである。
【０１１２】
ＩＢを大量に投与すると、血漿浸透圧、血漿ＡＶＰの上昇はより大きくなるため、明らかな内リンパ水腫を形成した（［参考例１−３］）。このことから、主薬である糖アルコール類の投与量も極力削減しなくてはならない。
【０１１３】
発明者はＩＢ以外の糖アルコール類は、止瀉が可能になれば優れた減荷作用を有することを見出した（特許文献２）。これらは優れた甘味を有することから内服しやすく、味を調整するための添加物等も必要としないことから、止瀉のための適切な配合を考えることにより、効果が最大に発現する方法を考案した。
【０１１４】
［参考例２］〜［参考例８］では、糖アルコール類を様々に変えて、さらにその投与量を変え、または多糖類を添加するなどして、それぞれの全身的な影響と局所への効果、内リンパ腔の容積（正常側）と内リンパ水腫減荷作用（術側）、ライスネル膜の進展度などを観察する。
【０１１５】
［参考例２］
モルモットの左側に必要に応じて内リンパ嚢閉鎖術を施行し、「実験的内リンパ水腫モデル動物」を作成した。
【０１１６】
なお、［参考例１］の第１、３、５、１０、１２群の左側には内リンパ嚢閉鎖術を施行しており、内リンパ水腫減荷効果を観察し、計測を行った。結果を以下に示す。これらの結果は［実施例１］、［参考例４］、［参考例８］において、比較検討したに利用した。
【０１１７】
【表１２】
【０１１８】
【表１３】
【０１１９】
正常側から推測できたとおり、ＩＢ単味、〈ＩＢ〉双方とも、３時間後には有意な減荷効果は認められず、６時間後に減荷効果が認められた。
【０１２０】
ＩＢ２．８ｇ／ｋｇにペクチン(Pec)を０．３ｇ／ｋｇ添加し、経口投与して消化器症状を観察し、決められた時間経過後に灌流固定して、内リンパ水腫減荷効果を観察した（ＩＢ＋Ｐ＊群）。さらに、投与量をＩＢ、Pec共に半量にして観察した（ＩＢ＋Ｐ＊＊群）。結果を以下の表１４、１５、１６と術側の測定結果を図２、３、４に示す。
【０１２１】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第１４群：ＩＢ＋Ｐ＊３Ｈ群 イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ含有 ３時間後
第１５群：ＩＢ＋Ｐ＊６Ｈ群 同 ６時間後
第１６群：ＩＢ＋Ｐ＊＊３Ｈ群 同 ３時間後
第１７群：ＩＢ＋Ｐ＊＊６Ｈ群 同 ６時間後
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表１４に示す。
【０１２２】
【表１４】
【０１２３】
Pecを添加することで、投与量の多少に関わらず、３時間後、６時間後には、ＩＢ単味の第３群、第５群と比較して止瀉効果が認められた（いずれも、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。便の排列も投与量の多少に関わらず、３時間後、６時間後には、ＩＢ単味の第３群、第５群と比較して、改善が認められた（いずれも、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）。
【０１２４】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
各群の正常側における膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を表１５に示し、比較検討した。
【０１２５】
【表１５】
【０１２６】
正常側には、いずれの群も軽度の虚脱が認められるが、投与量を半減した１６群では虚脱は認められなかった。また、全ての群で明らかな水腫が認められた例はなく、ＩＢ従来品と比較し、安全であることが確認された。
【０１２７】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表１６、図２、図３、図４に示す。
【０１２８】
【表１６】
【０１２９】
図２はＩＢ＋Ｐ＊の経時的変化（第１４Ｌ、１５Ｌ群）を示す。図３、４はＩＢ、Pecとも半減した場合（第１６群、第１７群）の減荷効果を評価するため、各々３時間後（第１４Ｌ、１６Ｌ群）、６時間後（第１５Ｌ、１７Ｌ群）に分けて、減荷効果を観察、測定した結果である。蒸留水を投与した第１Ｌ群、ＩＢ単味の群との比較も行った。
【０１３０】
Pecを添加した群（ＩＢ＋Ｐ＊）の術側においては、投与後３時間目には減荷効果が認められ、６時間後も継続していた（図２）。有意差は表に示すとおりで、投与量を半減しても、十分な減荷効果が認められた。又、各々対応するＩＢ単味の群と比較すると、有意に減荷作用が優れていた。投与量を削減（ＩＢ＋Ｐ＊＊）しても効果に差は殆どなく、投与量を削減することで、瀉下作用、利尿作用が減弱し、血漿浸透圧の上昇を阻止できた成果であると考えられる。
【０１３１】
［参考例３］
糖アルコール類として４単糖アルコールであるエリスリトールを選び、消化器症状と併せて、内リンパ腔の容積に与える効果、全身への危険性についても観察し、評価した。参考例３は、３グループに分かれる。
【０１３２】
参考例３−１（第１８〜２２群）５０匹、参考例３−２−ａ（第２３、２４群）２０匹、参考例３−２−ｂ（第２５〜２９群）５０匹の３グループに分け、参考例３−１では、Eryのみを投与し、投与後の便、消化器症状の変化と内耳及び内リンパ腔の容積を調べた。参考例３−２−ａでは、Eryに多糖類としてペクチン（Pec）を添加した薬剤を経口投与し、同様の観察を行って、内リンパ腔虚脱効果を発現する量を調べ、血漿浸透圧及び血漿ＡＶＰと虚脱効果には、特許文献３の結果と共通する相関関係があることを見出した。参考例３−２−ｂではその効果の経時的変化、さらに虚脱が生じることは好ましくないため、Ery、Pec共に投与量を２分の１または４分の１に減量して、その効果を観察し、虚脱が小さくなることを見出した。
【０１３３】
［参考例３−１：エリスリトール（Ery）単味を投与した場合］
モルモット６０匹を各群１０匹ずつ６群に分け、各群に次に示すように薬物の投与を行った。Ery水溶液は１回投与量が８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第 １群：対照群 蒸留水８ｍｌ／ｋｇ ３時間後
第１８群：Ｅ１Ｈ群 Ery２．８ｇ／ｋｇ １時間後
第１９群：Ｅ２Ｈ群 同 ２時間後
第２０群：Ｅ３Ｈ群 同 ３時間後
第２１群：Ｅ６Ｈ群 同 ６時間後
第２２群：Ｅ１２Ｈ群 同 １２時間後
【０１３４】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表１７に示す。
【０１３５】
【表１７】
【０１３６】
ア）便の固さの判定
便の固さは灌流時点に排出された便と直腸部分の便を観察し、評価した。対照群はすべて正常便であった。Ｅ１Ｈ、Ｅ２Ｈ群は直腸付近では正常な便が形成されていたが、次第に軟便に移行していた。Ｅ３Ｈ、Ｅ６Ｈ群はすべて泥状便であった。Ｅ６Ｈ群の５匹中１匹は泥状便にわずかな軽回が認められたが、形は形成されていなかった。Ｅ１２Ｈ群では全動物でほぼ正常な固さの便が形成されていた。
【０１３７】
イ）形のある便の形成された長さと便の間隔と配列状態
対照群では５５．０±８．８ｃｍで、便の大きさは一定で、その間隔も一定であったが、Ｅ１Ｈ群では一部軟便で、大きさは不整、間隔もバラバラになっているなど不定になっており、不快な胃腸症状の発現が推定された。便の形成された長さは２２．８±６．９ｃｍであった。Ｅ２Ｈ〜Ｅ６Ｈ群では一部軟便に近い部分もあったが、腸内はほぼ泥状便で満たされており、便の形成は０ｃｍであった。投与後１２時間のＥ１２Ｈ群では、ほぼ一定の形をした便が６６．０±１２．１ｃｍ形成されていた。便の間隔は対照群では通常約０．７〜１ｃｍでほぼ一定であるところ、Ｅ１２Ｈ群の一部の動物では８〜１０ｃｍの箇所もあり、不定で、便の間隔が開いた箇所には、腸管内への穿刺により、ガスの発生が認められた。
【０１３８】
以上から、Ery投与による下痢は２〜３時間で重篤なものとなり、６時間後も継続しているが、１２時間後にはおおよそ正常に復することが判った。
【０１３９】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
特許文献２に示したとおり、術側においてはEryは単味では全く減荷作用を示さなかった。表１８に正常側の膜の伸展率（IR-L）、面積増加率（IR-S）の平均±標準偏差を示し、比較検討した。
【０１４０】
【表１８】
【０１４１】
Ery投与後１時間目にはライスネル膜が伸展し、２時間目には明らかな内リンパ水腫が形成されて、６時間後まで継続しており、対照群と比し、有意差が存在した（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。１２時間後には水腫が存在する動物もいたが、正常に復したものもあり、有意差は認められなかった。
【０１４２】
糖アルコール類投与により期待された減荷効果は、単味で投与した場合には術側には認められず（特許文献２）、正常側には内リンパ水腫が形成されたことが判った。その理由としては、瀉下効果に随伴する脱水による、血漿ＡＶＰの上昇（非特許文献１１）、血漿浸透圧の上昇に伴う血漿ＡＶＰの上昇（非特許文献１６、１７）が考えられる。
【０１４３】
［３−２：エリスリトール（Ery）にペクチン（Ｐ）を添加し投与した場合］
モルモット２０匹を各群１０匹ずつ２群に分け、各群に次に示すように薬物投与を行い、一定時間経過後に灌流固定した。
【０１４４】
［３−２−ａ：ペクチン（Ｐ）の添加量による効果の違いを観察する］
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第２３群：Ｅ＋Ｐ0.1ｇ群 Ery2.8g/kg+P0.1g/kg ３時間後
第２４群：Ｅ＋Ｐ３Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg ３時間後
灌流固定の際、大腸、結腸、直腸の状態、特に便の形成状況を観察した。
【０１４５】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、間隔の判定と便の形成された長さは上記の２グループに分けて観察した。その結果を表１９に示す。
【０１４６】
【表１９】
【０１４７】
参考例３−１のＥ３Ｈ群（Pecを添加せずEryのみ投与、３時間後）は１０匹すべてが泥状便であったが、第２３群（Ｅ＋Ｐ0.1ｇ群：Pec０．１ｇ／ｋｇ添加）では１０匹中、泥状便の動物が５匹、軟便の動物が３匹で、肛門から２〜３ｃｍ程度の便の形がみられた。残りの２匹はやや軟便で、２３ｃｍ、４２ｃｍの便が形成されていたが、その間隔は不定で、間隔が１０ｃｍ以上開いているところもあった。１０匹の平均は７．３±１３．３ｃｍであった。第２４群（Ｅ＋Ｐ３Ｈ群：Pec０．５ｇ／ｋｇ添加）では３匹が泥状便、他の７匹のうち軟便、やや軟便が各１匹、３匹は正常な固さで止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、これら７匹の便の間隔はいずれも不定であった。形成された便の長さの平均（１０匹）は１９．２±２１．７であった。
【０１４８】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側における膜の伸展と面積の増加の関連）
術側にはPecを０．５ｇ／ｋｇ添加することでEryの減荷効果が発現することを確認した（特許文献２）。そこで、本発明においては正常側において、Pecの添加量の差による内リンパ腔の容積の変化の違いを検討するため、各群の膜の伸展率、面積変化率の平均と標準偏差を比較検討した。結果は表２０に示す。
【０１４９】
【表２０】
【０１５０】
第２３群（Pec０．１ｇ／ｋｇ添加、約３．６重量％添加）は内リンパ水腫を形成していた（対照群と比較し有意差が認められた。Ｐ＜０．０５）が、Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加した第２４群は内リンパ腔の容積は減少（虚脱）した（対照群に対し、Ｐ＜０．０５。Ery単味の第２０群に対し、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。
【０１５１】
多糖類のペクチンの添加量は０．１ｇ／ｋｇでは、十分な止瀉を図れず、内リンパ水腫減荷効果は発現しなかった（特許文献２）。正常側では内リンパ水腫を形成した（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加すると、８耳中３耳の内リンパ腔容積が約１０％増加し、水腫を形成したが、その他は、５耳が５〜１０％減少した。１５％減少した例も２耳あり、バラツキが大きかったが、虚脱を起こす傾向が認められ（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、投与量の削減が望ましいと思われた。そこで、投与量を半量にしたところ、十分な効果を得た（［参考例３−３−ｂ］）。
【０１５２】
Ｃ）全身状態への影響の検討
対象と方法）体重２８０〜３２０ｍｇのモルモットで、正常な便をしている２０匹を、４グループに分け、第１グループには生理食塩水のみ、第２グループにはEry単味、第３グループにはEry＋Pec０．１ｇ／ｋｇ、第４グループにはEry＋Pec０．５ｇ／ｋｇを投与した。投与後、３時間でギロチンを用いて断頭、採血し、明細書中の非特許文献８に記載された方法で、血中ＡＶＰを測定した。投与薬剤と検査結果を表２１に示す。Ery投与量はいずれも２．８ｇ／ｋｇで、水溶液の１回の投与量は８ｍｌ／ｋｇとなるように調整した。
【０１５３】
【表２１】
【０１５４】
ア）下痢と血漿ＡＶＰ値の検討
多糖類を糖アルコールに対し約３．６重量％配合（Pec０．１ｇ／ｋｇ）した場合は、重度の下痢症状が発現し（表１９）、血漿ＡＶＰが高値をとる（表２１）が、一方、１７．９重量％配合（Pec０．５ｇ／ｋｇ）した場合は、５匹中３匹は便は正常で、血漿ＡＶＰも低下する（表２１）。非特許文献１０、表１に示したとおり、血漿ＡＶＰの値と内リンパ容積の増加率は比例する。表２１（血漿ＡＶＰの値）と、先の表２０に示す組織学検討結果、すなわち、Ery単味の群は血漿ＡＶＰが高値をとり、内リンパ水腫を形成したという事実は、非特許文献１０、表１と整合性がある。
【０１５５】
Pec０．５ｇ／ｋｇでは血漿ＡＶＰが比較的低く、糖アルコールの浸透圧効果が発現し、虚脱現象が認められたものと考えられる。多糖類の添加量が少ない場合には下痢が生じ、脱水が続発するが、十分な添加により内リンパ腔の容積減荷効果が認められた。
【０１５６】
血漿浸透圧は特殊な要因がなければ、投与薬剤のモル数に比例して上昇する。Ery単味の群では浸透圧は５８ｍOsm／liter、Pecを０．１ｇ／ｋｇ添加した群では４５ｍOsm／liter上昇したが、０．５ｇ／ｋｇ添加した群では３７ｍOsm／literの上昇でとどまっている。Pecの添加が不十分な場合の浸透圧上昇は激しい下痢による脱水に起因するものである。しかしながら治療に必要な量のEryとPecの投与により血漿浸透圧が大きく上昇することも分かった。したがって、添加物も含め薬剤の投与量の削減は、治療効果発現のための重要な課題である。
【０１５７】
［参考例３−２−ｂ：ペクチン（Ｐ）を０．５ｇ／ｋｇ添加し、投与後の経時的変化を観察、さらにEry、Pec共に投与量を１／２、１／４に減量して効果を観察する］
第３−２−ａグループの結果から、Pecを０．５ｇ／ｋｇ添加することで、脱水状態に陥るおそれもなく、安全に確実な内リンパ水腫減荷効果の発現が期待できることが判った（特許文献２）ので、次にモルモット５０匹を各群１０匹ずつ５群に分け、次に示すように薬物投与を行い、消化器症状を観察して、一定時間経過後に灌流固定した。第２７〜２９群は、EryとPecの混和懸濁液を２倍又は４倍に希釈し、EryとPecの投与量を２分の１、４分の1に減量した。なお、第２５、２７、２８群の左側は内リンパ嚢閉鎖術を施行している。薬剤の１回投与量は全群とも８ｍｌ／ｋｇである。
【０１５８】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第２５群：Ｅ＋Ｐ６Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg ６時間後
第２６群：Ｅ＋Ｐ１２Ｈ群 Ery2.8g/kg+P0.5g/kg １２時間後
第２７群：Ｅ＋Ｐ/２・３Ｈ群 Ery1.4g/kg+P0.25g/kg ３時間後
第２８群：Ｅ＋Ｐ/２・６Ｈ群 Ery1.4g/kg+P0.25g/kg ６時間後
第２９群：Ｅ＋Ｐ/４・３Ｈ群 Ery0.7g/kg+P0.125g/kg ３時間後
【０１５９】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表２２に示す。
【０１６０】
【表２２】
【０１６１】
３−２−ａの第２４群（３時間後）では泥状便は３匹、投与後６時間で灌流した第２５群では、１匹が泥状便、２匹が軟便で下痢症状が軽回した。参考例３−１のEryのみの第２０群（３時間後）では、１０匹とも泥状便、第２５群（６時間後）では７匹が泥状便であることからすると、下痢の防止効果は顕著である（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。６時間後の第２５群は３時間後の第２４群と比較すると有意差はなかった（Mann-Whitney Ｕ検定）が、形成された便の長さは３０．８±２３．６ｃｍ（１０匹の平均）で明らかな回復が認められた。第２６群（１２時間後）では全動物が正常便であった。注目すべきは便の間隔が１０匹中９匹で一定であることで、Eryのみの第２２群(Ｅ１２Ｈ群：１２時間後)と比べ、有意に胃腸症状の改善が認められた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１６２】
EryとPecの量を２分の１または４分の１にすると、Eryの瀉下作用はさらに軽くなり、消化管内の便の配列も規則的で、自覚症状も軽いものと推測された。Eryのみの群（２０群、２１群）と比較すると、いずれも有意な改善が見られた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。EryとPecを通常量投与した２４群、２５群と比較すると、２分の１に減量した２７群、２８群には明らかな有意差は認められず、４分の１に減量した２９群と２４群との間には認められた（便の形成した長さ、固さ、間隔、各々Ｐ＜０．００１、Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１６３】
Pecを添加することで、３時間後、６時間後の結果が示すとおり、腸内のガスも認められず、ガス発生も抑制されて、不快な胃腸症状を極力抑えることができ、かつ早期に正常に復していたことが１２時間後（第２６群）の結果からも確認できた。
【０１６４】
EryとPecを２分の１または４分の１に減ずると、通常量を投与した場合と比較して、下痢症状はさらに軽回した。特に便が形成されており、便の配列が規則的になる傾向が認められたことから、消化器症状が改善したことが推測された。
【０１６５】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化：正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
表２３に各群の伸展率と面積増加率の平均と標準偏差を示す。
【０１６６】
【表２３】
【０１６７】
［参考例３−２−ａ］に示したとおり、第２４群（３時間後）は対照群（蒸留水）、Ｅ３Ｈ群（Eryのみ）と比べ容積が有意に減少、すなわち虚脱が生じていた（各々Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。さらに第２５群（６時間後）も対照群、Ｅ３Ｈ群と比較し、有意に虚脱している（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。第２６群（１２時間後）は対照群と比較し有意差が認められなかった。以上から、投与後３時間で虚脱が明らかとなり、６時間後にも継続していたが、１２時間後にはほぼ正常に復していたことが判った。
【０１６８】
Eryの瀉下作用は投与後３時間をピークに、６時間後には軽回する。したがって下痢による脱水で血漿ＡＶＰは３時間後には上昇し、６時間後には下がるものと考えられる。さらに、血漿浸透圧も考慮しなくてはならない。血漿浸透圧は内服直後から上昇し始め、その後４０ないし９０分後にピークになり、約６〜７時間で元に復する。それに伴い血漿ＡＶＰも同期して変動するものと思われる。
【０１６９】
一方作用発現に必要な内耳の浸透圧は、１〜２時間後から上昇し始め４時間後も高い値を保っていると思われる。その間は、血漿ＡＶＰが上昇し、下痢による脱水による上昇と相まって、Eryの減荷作用を相殺するものと考えられる（第１９〜２１群、後述の第２０Ｌ、２１Ｌ群）。
【０１７０】
EryとPecの量を２分の１または４分の１にすると、同様に内リンパの虚脱が生じる。第２７〜２９群のいずれも蒸留水投与群、Eryのみの投与群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。Ery＋Pecの通常量投与した群と比べ、有意差は認められないが、Ery投与量が少ないにもかかわらず、同等の虚脱作用が発現した。その理由は、Eryの瀉下作用は殆ど認められなくなること、さらに投与量が少ないことから血漿浸透圧の上昇が僅かで済むことで、減荷作用発現に好ましいと考えられる。
【０１７１】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表２４、図５に示す。
【０１７２】
【表２４】
【０１７３】
第２７Ｌ群（１／２に減量、３時間後）は対照群、Ery単味のＥ３Ｈ群と比べ、有意に減荷効果が認められた（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。第２８Ｌ群（１／２、６時間後）も対照群、Ｅ６Ｈ群と比べ有意差が存在し（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）、依然として減荷効果が認められた。さらに、Ery＋Pecを通常量の投与した第２４Ｌ、２５Ｌ群と比較すると、これらの間には有意差は認められなかった（ＡＮＣＯＶＡ）。このことから投与量を２分の1に減量しても、通常量投与した場合と同等の、強力な減荷効果を発現し、約６時間継続することが判った。また、第２７Ｌ群と第２８Ｌ群の間には有意差（Ｐ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）が存在することから、減荷効果は持続しているものの、次第に減弱していることか判る。この結果は［参考例３−２−ｂ］の正常側の結果から予想されるものであった。
【０１７４】
［参考例４：ＩＢ＋アルジネートナトリウム（Ａｌ）］
ＩＢにアルジネートナトリウム（Ａｌ）を添加し投与して、様々な添加物が配合されている従来品の〈ＩＢ〉と比較を行なった。
【０１７５】
正常な便をしているモルモット３０匹を３群に分け、第３０、３１群には、アルジネートナトリウム０．１１ｇ／ｋｇ、無機塩０．０９ｇ／ｋｇを添加して調整したゲル製剤（イソソルビトール２．８ｇ／ｋｇ）の投与を行ない、投与後３時間目と６時間目（〈ＩＢ〉の減荷効果が最大となる投与後６時間後（非特許文献１３））に灌流固定した（以下、ＩＢ＋Ａｌ＊群ともいう）。第３２群にはＡｌを０．３ｇ／ｋｇを添加し、３時間後に灌流固定して（以下、ＩＢ＋Ａｌ＊＊群ともいう）、各々の組織を採取して内リンパ容積変化を観察、評価した。消化器症状は灌流時まで継続して行った。便の固さは灌流時のものである。いずれの群も、１回の投与量は４ｍｌ／ｋｇとなるように調製した。組織作成などの手順、及び計測は、非特許文献４と同様の方法で行なった。
【０１７６】
群 投与薬剤 灌流（投与後）
第３０群：ＩＢ＋Ａｌ＊群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ＋Ａｌ＋無機塩 ３時間後
第３１群：ＩＢ＋Ａｌ＊群 同 ６時間後
第３２群：ＩＢ＋Ａｌ＊＊群 ＩＢ２．８ｇ／ｋｇ＋Ａｌ０．３ｇ／ｋｇ ３時間後
【０１７７】
Ａ）胃腸症状についての検討
便の固さ、形状の観察結果を表２５に示す。
【０１７８】
【表２５】
【０１７９】
ＩＢ単味の群、〈ＩＢ〉投与群では約半数の動物が軟便または泥状便となり、ガスの発生など消化器症状が発現した。それに対し、ＩＢ＋Ａｌ＊群は３時間後（第３０群）の便の固さは、やや軟便がわずかに２匹で、他の８匹は正常便で、便の間隔も不整、バラバラなものは〈ＩＢ〉と比べ少なかった事から、〈ＩＢ〉（第１０群）と比べ、止瀉作用が有意に優れ（Ｐ＜０．０５）、消化器症状も軽かったことが推測される（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。６時間後（第３１群）には全ての動物が正常な固さの便で、その間隔は６匹が一定であり、消化器症状は〈ＩＢ〉（第１２群）と比べ有意に軽かったことが分かった（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１８０】
ＩＢ＋Ａｌ＊＊群は３時間後（第３２群）の便の固さは、やや軟便が７匹中わずかに１匹で、便の間隔も不整、バラバラなものは〈ＩＢ〉と比べ少なかった（便の固さ、間隔、各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＩＢ＋Ａｌ＊群（第３０群）と比較し、Ａｌの添加量は多いが、有意差は認められなかった（Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０１８１】
Ｂ）内リンパ腔の容積変化：正常側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
各回転毎にライスネル膜の伸展と内リンパ腔の容積変化を計測し、その結果を表２６に示す。
【０１８２】
【表２６】
【０１８３】
第１０群、第１１群、第１２群（各々〈ＩＢ〉３、４、６時間後）は対照群と比較すると、容積が増加する傾向があり、特に第１１群（４時間後）は有意差が存在した（［参考例１−４］）。しかし、Ａｌを０．１１ｇ／ｋｇ添加した第３０群、第３１群は、容積が減少する傾向が現れた。対照群とは有意差が存在し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、軽度ではあるが虚脱が認められた。投与後３時間目の第３０群はＩＢ単味の第３群と比べ有意差は認められなかったが、〈ＩＢ〉の第１０群と比べると明らかに容積が減少していた（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。６時間目の３１群は〈ＩＢ〉の第１２群と比較し有意差が存在した（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。Ａｌを０．３ｇ／ｋｇ添加した第３２群では、容積はさらに減少した。対照群とは有意差が存在し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、〈ＩＢ〉の第１０群との間でも有意差が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。しかしＩＢ＋Ａｌ＊群（第３０群）の間には有意差はなかった（ｔ−検定）。
【０１８４】
これらの事実から、ＩＢ＋Ａｌ＊群の虚脱（減荷）効果は、投与後３時間で確実に出現し（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）、６時間が経過しても効果は持続していた（Ｐ＜０．０５、ｔ−検定）。従来品の〈ＩＢ〉と比較しても投与後３時間における効果が有意に大きく（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）、作用の発現が迅速であることが分かった。ＩＢ＋Ａｌ＊＊群は、さらに減荷作用は強い傾向があったが、ＩＢ＋Ａｌ＊群を比べ、有意差はなかった。
【０１８５】
６時間後では有意差はないが、従来品と比べ容積は減少しており、便の性状と消化管内のガスの発生状況から、瀉下作用を含め、胃腸症状の改善に成功したことが明らかであるので、より少ない量で消化器官に負担をかけることなく、十分な効果が期待できることが予想される。しかしながら、Eryと比較するとＩＢの減荷効果は小さいことが判った。
【０１８６】
Ｃ）内リンパ水腫減荷効果：術側における膜の伸展率と面積の増加率の関連
結果を、表２７に示す。
【０１８７】
【表２７】
【０１８８】
第３０Ｌ群（３時間後）は対照群、ＩＢ従来品投与後３時間目の第１０Ｌ群と比べ、有意に減荷効果が認められた（いずれもＰ＜０．００１、ＡＮＣＯＶＡ）。第３１Ｌ群（６時間後）も対照群、〈ＩＢ〉６Ｈ群と比べ有意差が存在し（いずれもＰ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）、依然として減荷効果が認められた。
【０１８９】
［参考例５］
糖アルコール類としてグリセロールを選び、多糖類としてカルボキシメチルセルロースナトリウムと組み合わせて、内リンパ腔の容積に与える効果を観察した。非特許文献４ではグリセロールをグリセロールテストを行う場合の投与量（非特許文献１、２）である１２ｍｌ／ｋｇ投与し、経時的変化を観察した。結果は表２８に示すとおりである。
【０１９０】
【表２８】
【０１９１】
グリセロールを投与すると、分子径が小さいため、２時間後には外リンパ腔に達し、外リンパ圧が上昇することから、浸透圧効果により内リンパ腔は有意に虚脱した（対照群と比し、Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。その後グリセロール分子はライスネル膜を通過し、内リンパ腔に入るため、内リンパ圧が上昇してリバウンド現象が発現すると考えられる。
【０１９２】
〔グリセロール（Ｇｌｙ）とカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）〕
上記のGlyの量は検査に用いる量である。そこで、Glyを約３分の１のに減じ、経時的変化を観察した。モルモット１２匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の結果を表２９、組織学的検討結果を表３０に示す。
【０１９３】
【表２９】
【０１９４】
ＣＭＣを添加（１０重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０１９５】
【表３０】
【０１９６】
多糖類としてＣＭＣを添加した群においては、正常側ではグリセロール単味の群と比較し、有意に内リンパ腔の虚脱が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。術側ではＣＭＣを添加した群では、Gly単味の群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）
【０１９７】
〔参考例６：キシリトール（ＸＬ）とキサンタンガム（ＸＧ）〕
モルモット１２匹を６匹ずつ２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の評価結果を表３１、組織学的検討結果を表３２に示す。
【０１９８】
【表３１】
【０１９９】
ＸＧ添加（７．１重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０２００】
【表３２】
【０２０１】
多糖類として、ＸＧを添加した群では、ＸＬ単味の群と比較し、内リンパ腔の容積の減少が認められた（Ｐ＜０．０１、ｔ−検定）。なお、術側ではＸＬ単味の群と比較し、明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）。
【０２０２】
［参考例７：キシロース（ＸＳ）とキサンタンガム（ＸＧ）〕
モルモット１２匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、３時間間経過後に灌流固定した。これらの結果のうち、止瀉効果の結果を表３３、組織学的検討結果を表３４に示す。
【０２０３】
【表３３】
【０２０４】
ＸＧを添加（７．１重量％）により、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）。３時間目には手指により、下腹部に圧を加えても排便しにくくなった。便の配列は一定ではなかったが、２−３ｃｍの間隔が空いている程度で、ガスの発生は顕著ではなかった。
【０２０５】
【表３４】
【０２０６】
多糖類として、ＸＧを添加した群（ＸＳ＋ＸＧ群）では、正常側では、ＸＳ単味の群と比較し、著明な虚脱が認められた（Ｐ＜０．００１、ｔ−検定）。これは、ＸＳの消化管からの独特な吸収過程によるものとも考えられるが、吸収過程に関しては異論もあり、今後の検討課題である。術側でも、ＸＳ＋ＸＧ群はＸＳ単味の群と比較し、著明な減荷効果が認められた（Ｐ＜０．００１、特許文献３）。
【０２０７】
［参考例８：イソソルビトール（ＩＢ）と寒天〕
モルモット７匹に、次に示すように薬物投与を行い、３時間経過後に灌流固定した。止瀉効果の結果を表３５、組織学的検討結果を表３６に示す。
【０２０８】
【表３５】
【０２０９】
寒天を添加（１０．７重量％）することにより、止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）
【０２１０】
【表３６】
【０２１１】
寒天の添加によりＩＢ単味、〈ＩＢ〉と比較し、内リンパ腔の容積減少（虚脱）に有意差は認められなかった（ｔ−検定）。なお、術側ではＩＢ単味の群と比べ明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ、特許文献３）。さらに、〈ＩＢ〉群と比べても明らかな内リンパ水腫減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。
【０２１２】
［参考例９］
下痢をすれば血漿ＡＶＰが上昇し（非特許文献１１）、血漿ＡＶＰが上昇すると内リンパ水腫を形成することは、非特許文献１０で示したとおりであるが、参考例３の３−２−ａグループの結果から、先の段落［０１５３］〜［０１５６］で述べたように、止瀉に成功すれば血漿ＡＶＰの上昇はわずかで、内リンパ減荷効果が確実に発現することが確認された。これらのことを踏まえれば、止瀉効果が図ることができれば、内リンパ水腫減荷効果は発現することは明らかである。
【０２１３】
糖アルコール類と多糖類の組み合わせをさらに換えて止瀉に成功するかどうかを調べた。糖アルコール類として、エリスリトール、ソルビトール、イソソルビトール、マンニトールに、多糖類として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラギーナン、グァーガム、アラビアガムを任意に組み合わせた。
【０２１４】
〔９−１: マンニトールとカルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）〕
正常な便をしているモルモット８匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察した。
結果を表３７に示す。
【０２１５】
【表３７】
【０２１６】
マンニトールによる下痢は、約７．１重量％のＣＭＣの添加により、有意に軽回した（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。腹部の膨満感、ガスの発生は殆ど認められなかった。
【０２１７】
〔９−２: ソルビトールとグァーガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表３８に示した。
【０２１８】
【表３８】
【０２１９】
グァーガムを１０重量％添加して、２匹が正常便、２匹がやや軟便となり、ソルビトールによる下痢を止瀉することにほぼ成功した（Ｐ＜０．０５、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、投与後３〜４時間目で、便の量は３分の1程度に減り、視診、触診により腹部に軽度の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れた。下腹部を圧迫すると、形が不整で、通常の２分の１以下の小さい便が少しずつ排泄された。
【０２２０】
〔９−３: エリスリトールとアラビアガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表３９に示し、Ｅ３Ｈ群と比較検討した。
【０２２１】
【表３９】
【０２２２】
アラビアガムを２０重量％添加しても、エリスリトールによる下痢を止瀉することは出来なかった（有意差なし）。４０重量％添加すると、下痢はいくらか軽回した（Ｐ＜０．０１、Mann-Whitney Ｕ検定）が、より確実な止瀉が望まれるところである。両群とも、投与後３〜４時間目で、便の量は3分の1程度に減り、視診、触診により腹部の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れたが、泥状便がわずかに排泄されるだけで、不快な状態が推測された。
【０２２３】
〔９−４: エリスリトールとグァーガム（Sigma社）〕
正常な便をしているモルモット１５匹を２群に分け、次に示すように薬物投与を行い、その後６時間、便を観察し、その結果を表４０に示し、Ｅ３Ｈ群と比較検討した。
【０２２４】
【表４０】
【０２２５】
グァーガムを５重量％、１０重量％添加してもエリスリトールによる下痢を止瀉することは出来なかった。２０重量％添加して、２匹が正常便、２匹がやや軟便でほぼ止瀉に成功した（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。しかし、投与後３〜４時間目で、便の量は3分の1程度に減り、視診、触診により腹部の膨満感が認められ、手指により腹部を圧迫すると、ガスの発生と移動が触れた。下腹部を圧迫すると、形が不整で、通常の２分の１以下の小さい便が少しずつ排泄されるだけで、不快な状態が推測された。
【０２２６】
〔９−５: イソソルビトール（ＩＢ）とカラギーナン〕
正常な便をしているモルモット７匹に、１０．７重量％のカラギーナンを添加したＩＢ水溶液（８ｍｌ／ｋｇ）を投与し、その後６時間、便を観察した。結果を表４1に示す。
【０２２７】
【表４１】
【０２２８】
ＩＢによる下痢症状は約１０．７重量％のカラギーナンを添加することによって改善した。イソソルビトールは単味でも瀉下作用が他の糖アルコール類ほど強くないが、カラギーナン添加により、泥状便、軟便が認められなかったことは有効であったと考えられる。視診触診により、腹部の膨満は認められず、消化器症状は軽かったものと推定された。
【０２２９】
多糖類にはイ）キサンタンガム（ＸＧ）に代表されるように止瀉効果に優れたものと、ロ）ペクチン（Pec）に代表される整腸作用に優れたものがある。
【０２３０】
〔イ）ＸＧに代表されるグループ〕について
キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、ローカストビーンガム、タラガムなどがこのグループに属する。止瀉作用は、キサンタンガムが最も強く、アラビアガムが緩やかで、懸濁液の粘度が高くなると一般に止瀉作用も強力になった。一方で、摂取後３〜５時間後には便の量が減少する傾向がある。
【０２３１】
〔ロ）ペクチン（Pec）に代表されるグループ〕について
ペクチン、アルジネートナトリウム、寒天、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カラギーナン、ヒドロキシプロピルセルロースなどがある。Pecはじめ、このグループの多糖類は整腸作用が優れているが、止瀉に比較的大量を要するため、添加量が多くなる欠点がある。しかし、大量を添加しても、便の表面は滑らかで排泄量も通常かそれ以上で、排便に障害はなく、視診、触診でも腹部の膨満感、ゴロゴロ感が生じず、動物も苦しがる様子がなかった。Pecより粘性の高い寒天、アルジネートナトリウムはPecより止瀉効果に優れ、ＣＭＣはPecとほぼ同程度の止瀉作用を示した。
【０２３２】
〔イ）ＸＧに代表されるグループとロ）Pecに代表されるグループから１種ずつ選び、組み合わせた場合〕
各々の多糖類の特質を吟味し、異なった特徴を持つイ）、ロ）の２つのグループの多糖類を１種ずつ組み合わせることで、より少量で的確な止瀉効果を発現させつつ、胃腸症状を生じずに、形の整った便を通常量排泄させることを可能にすることを見出した。さらに、ＸＧ＋ＣＭＣ、ＧＧ＋ＣＭＣなど、組み合わせによっては流れを良くすることも見出した。これは嚥下が困難な患者への投与に適しており、経管栄養の患者への投与にも、水溶液にして微小チューブで支障なく投与することが可能である。
【０２３３】
〔イ）ＸＧに代表されるグループから２種以上組み合わせた場合〕
イ）ＸＧに代表されるグループの多糖類は、２種以上を組み合わせると飛躍的に粘度が増すことが出来る。例えば同じ０．５％の溶液の場合、グァーガム単味の粘度に対し、ＸＧ１：グァーガム３の粘度は数倍〜数十倍と、飛躍的に高くなり、０．５％ＸＧ溶液とほぼ同じまたはそれ以上に粘調になることが知られている。同様の現象は他の多糖類の組み合わせでも、粘性を飛躍的に高めることも知られている。これによって、投与量を削減することが可能である。実際に複数種組み合わせたところ、少ない添加量でも、止瀉作用を向上させ、且つ腹部の膨満感、ゴロゴロ感も軽くすることを見出した。
【０２３４】
〔ロ）Pecに代表されるグループから２種以上組み合わせた場合〕
Pecを単独に加えた場合の問題点は、止瀉を実現するために大量に添加しなくてはならないことである。Pecのグループから２種以上を組み合わせることで各々の特質を生かしながら、添加量も比較的少量で止瀉作用を発現することを見出した。また、Pecやアルジネートナトリウム等を糖アルコール溶液に混和するとゲル状になり、添加量が増えるとパサパサして一体感がなくなり、嚥下が困難になる場合もあるが、ＣＭＣを加えることでその問題点が解決することを見出した。
【０２３５】
他に、３種以上の多糖類を組み合わせて、〔イ）ＸＧに代表されるグループから２種とロ）Pecに代表されるグループから１種選び、組み合わせた場合〕、〔イ）ＸＧに代表されるグループから１種とロ）Pecに代表されるグループから２種選び、組み合わせた場合〕があり、各々の利点を生かし、欠点を補うことが可能である。
【０２３６】
［参考例１０］
２種以上の多糖類を添加することにより、１種の多糖類の添加量より少量で確実な止瀉効果を得られるかどうかを調べた。
【０２３７】
〔エリスリトールとＸＧ＋ペクチン（Pec)〕
正常な便をしているモルモット１５匹を３群に分け、粘度が非常に高いＸＧと親水性の高いPecとを表４２のように組み合わせEryに添加して、６時間目まで便と消化器症状の観察を行った。
【０２３８】
【表４２】
【０２３９】
ＸＧ０．０９ｇ／ｋｇ＋Pec０．２ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で１０．４重量％）で、Pecのみ添加した場合（１７．８％）より少量で、ＸＧの止瀉作用とPecの整腸作用とを同時に発現させることが出来た。ＸＧだけを添加した場合、止瀉作用は強力であるが、腹部膨満が認められ、便の排泄量が減るが、２種を組み合わせることで下腹部に強く圧を加えても、動物は苦しむこともなく、表面の滑らかな便が出てきたことで、目的を達したことが確認出来た（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。
【０２４０】
〔６−２：エリスリトールとキサンタンガム（ＸＧ）＋グァーガム（ＧＧ）（ＸＧグループから２種選び、組み合わせた場合）〕
正常な便をしているモルモット１５匹を３群に分け、ＸＧグループで粘度が非常に高いＸＧと比較的粘度の低いＧＧを表４３のように組み合わせエリスリトールに添加し、６時間目まで便と消化器症状の観察を行った。
【０２４１】
【表４３】
【０２４２】
ＸＧ０．０３ｇ／ｋｇ、ＧＧ０．０６ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で３．２重量％）では十分な止瀉効果は認められず、いずれも増量して、ＸＧ０．０６ｇ／ｋｇ、ＧＧ０．０９ｇ／ｋｇを組み合わせること（多糖類合計で５．４重量％）で、有意な止瀉効果が認められた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。便は形が不整で、排泄量は約２分の１に減少したが、腹部膨満は認められず、下腹部に強く圧を加えても、動物は苦しむこともなかった。
【０２４３】
［参考例１１：エリスリトールとキサンタンガム（ＸＧ）＋ペクチン（Pec)＋カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）〕
正常な便をしているモルモット１０匹を２群に分け、Eryに、ＸＧ、Pec、ＣＭＣとを表４４のように組み合わせ添加して、３時間目まで便と消化器症状の観察後、３時間目に灌流、便の配列などと共に、消化器官の観察を行い、側頭骨を取り出して組織学的に検討した。
【０２４４】
Ａ）胃腸症状についての検討
結果を表４４に示す。
【０２４５】
【表４４】
ＸＧ：０．０６ｇ／ｋｇ，Pec： ０．１５ｇ／ｋｇ，ＣＭＣ：０．２ｇ／ｋｇ
便の固さは灌流時に判定したものである
【０２４６】
ＸＧ０．０６ｇ／ｋｇ＋Pec０．１５ｇ／ｋｇ＋ＣＭＣ０．２ｇ／ｋｇ（多糖類合計で１４．６重量％）で、ほぼ完全な止瀉を達成できた（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。ＸＧ単独を添加した場合には投与後便の量が減少し、腸内でガス発生が認められたが、ペクチンに代表されるグループから２種を加えることで、そのような問題点が生じることなく、止瀉に成功した。消化管内の観察においても、便の配列は、６匹中２匹は形成された便の間隔が４〜７ｃｍのところもあり、僅かながらガスの発生も認められたが、全体的には、ほぼ規則的になり、胃腸症状は軽回したものと推測された（Ｐ＜０．００１、Mann-Whitney Ｕ検定）。形成された便の長さも５７．０±１９．６ｃｍで、蒸留水のみ投与の５５．０± ８．８ｃｍに近い値となった。
【０２４７】
Ｂ）内リンパ腔容積に与える影響（正常側）及び内リンパ水腫減荷効果（術側）
各群の伸展率と面積増加率の平均と標準偏差の結果を表４５に示す。
【０２４８】
【表４５】
【０２４９】
エリスリトールのみを投与した第２０群（３時間後）と比較し、３種の多糖類を添加したＥ＋３Ｐ群では有意に減荷されている（Ｐ＜０．０５、特許文献３）。
また、多糖類としてPec１種のみを０．５ｇ（１７．９重量％）添加した第２４群と比較するとわずかに上方に移動しているが、有意差はなく、十分な減荷効果を発揮していることが判った（特許文献３）。
【０２５０】
Pecは整腸作用に優れるが、止瀉を図るには添加量が多くなりがちであり、粘度が高くなることは避けられないが、ＣＭＣを添加することで、流れがよくなり、摂取時の口当たり、舌触りなどに優れた材質になった。違和感なく摂取でき、経管栄養や、飲料に応用範囲が広がる。
【０２５１】
単糖又はその糖アルコール類に対し、多糖類を複数種組み合わせることで、多糖類１種類を添加する場合と比べ、飛躍的に止瀉効果を高め、かつ不快な胃腸症状の軽減、又は防止をはかることができた。添加物を削減する目的を達成することができた。
【図面の簡単な説明】
【０２５２】
【図１】イソソルビトール（ＩＢ）及びエリスリトール（Ｅ）の双方とも、投与量を4分の１に減量して投与し、３時間目の内リンパ水腫減荷効果を、ＩＢ＋Pec及びEry＋Pecの散布図と回帰直線と比較した図である。４分の１に減量した群の回帰直線は通常量の群と同等の減荷作用を発揮していることから、減量しても十分な減荷作用が期待できる。○：IR-S(蒸留水) = 4.011 + 1.212 * IR-L(蒸留水); R^2 = .987、×：IR-S(IBのみ3時間) = 6.241 + .968 * IR-L(IBのみ)膜； R^2 = .945、●： IR-S(IB＋P,3hr) = .303 + .701 * (IB＋P,3hr)； R^2 = .794、■：IR-S(E+P,3hr) = -15.925 + .79 * IR-L(E+P,3hr); R^2 = .771、×：IR-S(IB+E,3hr) = -6.557 + .931 * IR-L(IB+E,3hr); R^2 = R^2 = .966。
【０２５３】
【図２】イソソルビトール（ＩＢ）の内リンパ水腫減荷効果の経時的変化を、散布図と回帰直線により示した図である。ＩＢ投与後３時間目では、回帰直線は蒸留水と比較して下方に移動するが、有意差は認められない（ＡＮＣＯＶＡ）。投与後６時間後には有意な減荷作用が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、■：IR-S(IB単味,３hr)= 6.542 + 1.011 * IR-B(IB単味,３hr); R^2 = .987、□：IR-S(IB単味,6hr) = 7.347 + .742 *IR-L (IB単味,6hr); R^2 = .901
【０２５４】
【図３】イソソルビトール（ＩＢ）にびペクチン（Ｐ）を添加し、通常投与量、及び半量投与し、３時間目の内リンパ水腫減荷効果を比較した。散布図と回帰直線を示す。ＩＢ単味の投与では、蒸留水と比較し有意差は認められなかったが、Pecを添加した群の減荷効果は蒸留水、ＩＢ単味群と比較し、有意差が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。半量に減量しても同程度の減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、●：IR-S(IB単味,3hr)= 6.542 + 1.011 * IR-B(IB単味,3hr); R^2 = .987、■：IR-S(IB＋P,3hr) = .303 + .701 * (IB＋P,3hr)； R^2 = .794、□：IR-S(IB+P2分の1,3hr) =1.429 + .761 * IR-L(IB+P2分の1,3hr); R^2 = .858
【０２５５】
【図４】イソソルビトール（ＩＢ）にペクチン（Ｐ）を添加し、通常投与量、及び半量投与し、６時間目の内リンパ水腫減荷効果を比較した。散布図と回帰直線を示す。ＩＢ単味の投与では、蒸留水と比較し減荷効果が認められた（Ｐ＜０．０１）。Pecを添加した群では蒸留水、ＩＢ単味群と比較し、有意差が認められた（各々Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．０５、ＡＮＣＯＶＡ）。半量に減量しても、同程度の減荷効果が認められたことから、効果は持続していることが判る（いずれもＰ＜０．０１、ＡＮＣＯＶＡ）。減量することによって減荷効果は損なわれることがなかった。○：IR-S(蒸留水) = 3.276 + 1.22 * IR-L(蒸留水); R^2 = .983、●：IR-S(IB単味,6hr)= 3.11 + .914 * IR-B(IB単味,6hr); R^2 = .961、■：IR-S(IB＋P,6hr) = -2.141 + .862* (IB＋P,6hr)； R^2 = .874。□：IR-S(IB+P2分の1,6hr) = -8.778 + .973 * IR-L(IB+P2分の1,6hr); R^2 = .945
【０２５６】
【図５】エリスリトール（Ｅ）及びペクチン（Ｐ）の投与量を２分の１に減量して、内リンパ水腫減荷効果の経時変化を、散布図と回帰直線により示した図である。２分の１に減量した群の回帰直線は通常量の群と有意差は認められなかったことから、減量しても十分な減荷作用が期待できる。投与後６時間後にも蒸留水と比較して有意な減荷作用が認められた。：IR-S(蒸留水) = 4.011 + 1.212 * IR-L(蒸留水); R^2 = .987、●：IR-S(E単味) = 2.407 + 1.309 * IR-L(E単味); R^2 = .974、■：IR-S(E+P,3hr) = -15.925 + .79 * IR-L(E+P,3hr); R^2 = .771、×：IR-S(E+P6時間) = -16.508 + 1.314 * IR-L(E+P6時間); R^2 = .784、□：IR-S(E+P2分の1,3hr) = -1.834 + .559 * IR-L(E+P2分の1,3hr); R^2 = .547 。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２種以上の、単糖類又はその糖アルコールを含有するメニエール病治療薬。
【請求項２】
２種以上が２種である、請求項１に記載のメニエール病治療薬。
【請求項３】
２種以上の、単糖類又はその糖アルコール、及び１種又は２種以上の多糖類を含有するメニエール病治療薬。
【請求項４】
２種以上が２種である、請求項３に記載のメニエール病治療薬。
【請求項５】
２種の、単糖類又はその糖アルコールが、４単糖と６単糖である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【請求項６】
２種の、単糖類又はその糖アルコールの一方が、イソソルビトールである、請求項１ないし５のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【請求項７】
２種の、単糖類又はその糖アルコールが、エリスリトールとイソソルビトールである、請求項１ないし６のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【請求項１】
２種以上の、単糖類又はその糖アルコールを含有するメニエール病治療薬。
【請求項２】
２種以上が２種である、請求項１に記載のメニエール病治療薬。
【請求項３】
２種以上の、単糖類又はその糖アルコール、及び１種又は２種以上の多糖類を含有するメニエール病治療薬。
【請求項４】
２種以上が２種である、請求項３に記載のメニエール病治療薬。
【請求項５】
２種の、単糖類又はその糖アルコールが、４単糖と６単糖である、請求項１ないし４のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【請求項６】
２種の、単糖類又はその糖アルコールの一方が、イソソルビトールである、請求項１ないし５のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【請求項７】
２種の、単糖類又はその糖アルコールが、エリスリトールとイソソルビトールである、請求項１ないし６のいずれか１項に記載のメニエール病治療薬。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００９−２５６３０３（Ｐ２００９−２５６３０３Ａ）
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１８５６２８（Ｐ２００８−１８５６２８）
【出願日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【出願人】（５０５２７３６６０）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１７日（２００８．７．１７）
【出願人】（５０５２７３６６０）
【Ｆターム（参考）】
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