リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に有効な新規化合物およびその測定方法
【課題】リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に使用される新規化合物およびその測定法を提供すること。
【解決手段】リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した新規化合物が提供される。本発明の方法によれば、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、該新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加え、一定時間反応させた後、ジスルフィド交換により生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性が測定される。
【解決手段】リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した新規化合物が提供される。本発明の方法によれば、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、該新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加え、一定時間反応させた後、ジスルフィド交換により生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性が測定される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規硫黄置換リン脂質化合物およびリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リゾホスホリパーゼＤは、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の結合を切断して、主にリゾホスファチジン酸（以下、ＬＰＡと称する）を産生する酵素である。この酵素活性は、以前から動物の血液中に存在することが知られていた。ＬＰＡは、癌細胞の浸潤促進、細胞増殖の制御、平滑筋収縮、血小板凝集、神経突起の退縮、ストレスファイバーの形成、細胞接着因子の誘導などの種々の生理活性を有する脂質である。近年、ＬＰＡをリガンドとする受容体が相次いで発見されており、上記の生理活性の多くは、これらの受容体を介して示されるものと考えられる。さらに、卵巣癌、子宮体癌、および子宮頚癌の患者の血漿中ＬＰＡレベルが、健常者と比して高値であることも報告されている。
【０００３】
２００２年に初めて、血清成分からリゾホスホリパーゼＤ活性を示すタンパク質が精製・同定された（非特許文献１および２）。このタンパク質は、既に同定されていたオートタキシンであり、以前から癌細胞運動性亢進因子として知られていたタンパク質である。オートタキシンは、ヌクレオチドを分解するヌクレオチドホスホジエステラーゼ／ホスファターゼ活性を有することが知られていたが、リン脂質を分解することは知られていなかった。その後、オートタキシンは、ＬＰＡだけでなく、環状ホスファチジン酸やスフィンゴシン−１−リン酸の産生にも寄与していることが報告されている（非特許文献３および４）。
【０００４】
ところで、これまでに報告されているリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、放射標識したリゾホスファチジルコリン（以下、ＬＰＣと称する）を試料と混合し、一定時間反応させ、脂質を抽出し、薄層クロマトグラフィーにて分離して、目的のバンドの放射活性を測定する方法；試料とＬＰＣとを混合して一定時間反応させ、生じた遊離コリンを測定する方法などがある。しかしながら、これらの方法は、放射性物質の使用、煩雑な手順などのため、簡便な方法ではない。
【０００５】
また、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロールとは反対側に発色基を付加した基質を用い、酵素反応による生成物、すなわち、遊離した発色性物質を測定することによって、リゾホスホリパーゼＤの活性測定方法が開発されている（特許文献１）。しかし、このような基質は、その構造が生理的な内在性基質の構造とはかなり異なっており、必ずしも生理的な反応を反映しているとは言い難い。
【０００６】
一方、他の種類の酵素の活性の測定方法として、硫黄化合物と５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とを競合させ、生じた５−チオ−２−ニトロ安息香酸に依存した吸光度を測定する方法があり、例えば、コリンエステラーゼ活性測定法などに利用されている。また、スフィンゴミエリンの硫黄置換体を用いた、スフィンゴミエリナーゼ活性の測定方法についても記載されている（特許文献２）。しかし、これまでのところ、ＬＰＣのリン酸基の酸素分子を硫黄分子に置換した化合物、およびこのような化合物を利用したリゾホスホリパーゼＤの活性測定方法は知られていない。
【特許文献１】国際公開第２００２／０５３５６９号パンフレット
【特許文献２】特開２００６−１４６０６号公報
【非特許文献１】A. Tokumuraら、J. Biol. Chem.，2002年，277巻，pp.39436-39442
【非特許文献２】M. Umezu-Gotoら、J. Cell Biol., 2002年, 158巻, pp.227-233
【非特許文献３】J. Dennisら、J. Neurosci. Res.，2005年，82巻，pp.737-742
【非特許文献４】S. Tsudaら、J. Biol. Chem., 2006年, 281巻, pp.26081-26088
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、より簡便で迅速な試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法、およびこのような測定を可能にするための新たなリゾリン脂質の硫黄置換化合物、さらにその化合物を含有するリゾホスホリパーゼＤ活性の測定試薬およびその測定キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成するため、鋭意検討した結果、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した新規化合物の合成に成功した。そして、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、該新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加え、生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００１０】
【化１】
【００１１】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表されるリゾリン脂質の硫黄置換化合物を提供する。
【００１２】
１つの実施態様では、上記Ｘを含むＸ−ＯＨは、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される。
【００１３】
さらなる実施態様では、上記Ｘ−ＯＨは、コリンである。
【００１４】
ある実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、飽和脂肪酸の脂肪酸残基である。
【００１５】
さらなる実施態様では、上記飽和脂肪酸は、炭素数８から２０である。
【００１６】
好適な実施態様では、上記飽和脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される。
【００１７】
ある実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である。
【００１８】
さらなる実施態様では、上記不飽和脂肪酸は、炭素数８から２２である。
【００１９】
好適な実施態様では、上記不飽和脂肪酸は、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される。
【００２０】
別の実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２は、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基である。
【００２１】
本発明はまた、リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法を提供し、該方法は、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、上記いずれかのリゾリン脂質の硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する。
【００２２】
１つの実施態様では、上記ジスルフィド化合物は、以下の式（ＩＩＩ）：
【００２３】
【化２】
【００２４】
で表される化合物であり、そして上記生成したチオール化合物は、以下の式（ＩＶ）：
【００２５】
【化３】
【００２６】
で表される化合物であり、該式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である。
【００２７】
さらなる実施態様では、上記Ｒ３は、水素原子である。
【００２８】
１つの実施態様では、上記リゾホスホリパーゼＤを含有する試料は、血清、血漿、尿、唾液、涙液、精液、糞便溶解液、脊髄液、細胞培養液、細胞抽出液、および組換えオートタキシン溶解液からなる群より選択される。
【００２９】
さらなる実施態様では、上記リゾホスホリパーゼＤの活性は、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標である。
【００３０】
本発明はさらに、上記のいずれかのリゾリン脂質の硫黄置換化合物を含む、リゾホスホリパーゼＤの活性測定用キットを提供する。
【００３１】
１つの実施態様では、上記キットは、さらに、ジスルフィド化合物を含む。
【００３２】
さらなる実施態様では、上記ジスルフィド化合物は、以下の式（ＩＩＩ）：
【００３３】
【化４】
【００３４】
で表される化合物（式（ＩＩＩ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を含む。
【００３５】
ある実施態様では、上記キットは、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標の測定に用いられる。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によれば、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をより簡便で迅速に測定することができる。また、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をリアルタイムで活性を測定することもできる。そのため、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患の診断や治療効果の判定、あるいは被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響または効果を調べるためのスクリーニングに利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
（新規硫黄置換化合物）
本発明の新規硫黄置換化合物は、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した化合物であり、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００３８】
【化５】
【００３９】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基（アシル基）であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表される化学構造を有する。
【００４０】
ここで、Ｘは、極性基であればよく、好ましくは、通常のリン脂質の親水性部分を構成する基が挙げられる。具体的には、このＸを含むＸ−ＯＨが、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される。さらに好ましくは、Ｘ−ＯＨはコリンである。
【００４１】
また、Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸の脂肪酸残基であり、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基であり得る。
【００４２】
Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が飽和脂肪酸の脂肪酸残基である場合、この飽和脂肪酸は、好ましくは、炭素数８から２０であり、より好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される飽和脂肪酸である。
【００４３】
Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である場合、この不飽和脂肪酸は、好ましくは、炭素数８から２２であり、より好ましくは、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される不飽和脂肪酸である。
【００４４】
本発明の新規硫黄置換化合物は、以下で詳述するリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に用いられる新規な試薬として有用である。
【００４５】
本発明において、リゾホスホリパーゼＤとは、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の結合を切断して、主にリゾホスファチジン酸（以下、ＬＰＡと称する）を産生する酵素である。リゾホスホリパーゼＤの活性とは、オートタキシン活性をいう場合がある。好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、リゾホスファチジルコリンを分解し、リゾホスファチジン酸およびコリンを産生する活性を有する。また、好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、リゾホスファチジルコリンを分解し、環状ホスファチジン酸およびコリンを産生する活性を有する。また、好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、スフィンゴシルホスホリルコリンを分解し、スフィンゴシン−１−リン酸およびコリンを産生する活性を有する。
【００４６】
（新規硫黄置換化合物の合成）
本発明の新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、例えば、以下のスキーム１または２で示される製造工程で合成され得る。スキーム１は、Ｒ１が水素原子であり、そしてＲ２が脂肪酸残基である場合の製造工程を示し、一方、スキーム２はＲ１が脂肪酸残基であり、そしてＲ２が水素原子である場合の製造工程を示す。スキーム１において、Ｒ２はＲ２’−ＣＯ−として、そしてスキーム２において、Ｒ１はＲ１’−ＣＯ−として表されている。
【００４７】
【化６】
【００４８】
【化７】
【００４９】
なお、上記スキーム１および２において、Ｂｎ、ＴＢＳ、およびＴＥＳは、それぞれ、ベンジル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシリル基、およびトリエチルシリル基を表す。これらはいずれも、水酸基の保護基の例であり、これらに限定されない。水酸基の保護に用いられる試薬としては、トリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、トリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネートなどのハロゲン化シリル、およびシリルスルホン酸エステル試薬が挙げられる。
【００５０】
また、上記スキーム１および２は、出発物質である化合物１がＲ体の場合を例示するが、立体異性体であるＳ体の場合も、同様に合成可能である。
【００５１】
（リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法）
本発明のリゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法は、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、上記の新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物（Ｉ）または（ＩＩ）とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する。
【００５２】
まず、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料と上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される新規硫黄置換化合物とを混合し、一定時間反応させると、リゾホスホリパーゼＤの作用によって、新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）からＸ−ＳＨで表されるチオール化合物が遊離される。さらに、リゾホスホリパーゼＤの作用によって遊離したチオール化合物Ｘ−ＳＨが、共存しているジスルフィド化合物と選択的に反応し（チオール−ジスルフィド交換）、新たなチオール化合物を定量的に生成する。生成した新たなチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中に含まれるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。
【００５３】
上記反応工程は、すべての反応を一つの反応系で行っても、二工程以上の複数の工程に分けて行ってもよい。例えば、試料中のリゾホスホリパーゼＤによる新規硫黄置換化合物の切断反応工程；切断により生じたチオール化合物とジスルフィド化合物とのジスルフィド交換工程；および、新たに生成されたチオール化合物に由来する波長での比色工程を単一工程内で行ってもよい。あるいは、リゾホスホリパーゼＤによる新規硫黄置換化合物の切断反応のみを最初に行い、その後、残りの比色に関わる工程を一工程内で行ってもよい。また、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とを同一工程で行う場合には、反応時間に依存して吸光度が経時的に増加するため、単位時間あたりの吸光度変化率をリゾホスホリパーゼＤ活性の指標として用いることが一般的である。一方、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とを別々の工程で行う場合には、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程によって合成されたチオール化合物を、続いて行われる比色に関わる工程によって定量するため、吸光度変化量をリゾホスホリパーゼＤ活性の指標として用いることが一般的である。
【００５４】
（試料）
本発明における「試料」とは、リゾホスホリパーゼＤの存在の有無、あるいはその活性の程度を測定する対象すべてを意味し、リゾホスホリパーゼＤ活性が存在する可能性がある各種生体試料、および当該測定のための標準試料や管理試料もこれに含まれる。具体的には、全血、血清、血漿、尿、糞便、唾液、腹水、涙液、精液、精漿、髄液などの体液成分；動物細胞、植物細胞、細菌などの微生物の細胞培養上清および細胞抽出液；動物の組織培養液などが挙げられる。例えば、組換えオートタキシン溶解液も含まれる。
【００５５】
（ジスルフィド化合物）
上記のリゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法に用いられるジスルフィド化合物は、チオールとのジスルフィド交換が可能であり、そしてジスルフィド結合の切断により遊離されるチオール化合物が、特徴的な吸収極大を有する化合物であれば、特に限定されない。本発明においては、式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物：
【００５６】
【化８】
【００５７】
（式中、Ｒ３は、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）が好適に用いられる。この場合、リゾホスホリパーゼＤの作用によって遊離したチオール化合物Ｘ−ＳＨが、ジスルフィド化合物（ＩＩＩ）と選択的に反応し、式（ＩＶ）で表される新たなチオール化合物：
【００５８】
【化９】
【００５９】
（式中、Ｒ３は、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を定量的に生成する。そして、生成した新たなチオール化合物（ＩＶ）に由来する吸光度を測定することによって、試料中に含まれるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。
【００６０】
上記式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物としては、例えば、５，５’−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ、エルマン試薬とも呼ばれる）が挙げられる。この場合、ジスルフィド結合が切断されて遊離するチオール化合物は、２−ニトロ−５−チオ安息香酸であり、この化合物はキノイド構造をとり、４１２ｎｍに強い吸収を有する。そのため、この波長の近傍の吸光度を測定することによって、リゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。他のジスルフィド化合物として、２，２’−ジチオジピリジン、４，４’−ジチオジピリジン、６，６’−ジチオジニコチン酸などが挙げられる。
【００６１】
（反応温度）
上記の測定方法において、新規硫黄置換化合物、ジスルフィド化合物などの各試薬が安定であり、かつリゾホスホリパーゼＤ活性を維持し得る温度であれば、反応温度は特に限定されない。また、反応温度は、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と、比色に関わる工程で異なっていてもよい。簡便性や自動化測定機器の利用を考慮すれば、全工程を通して一定であることが好ましく、通常２５〜４０℃、好ましくは３５〜４０℃である。
【００６２】
（反応時間）
上記の測定方法において、反応時間は、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性によって、検出するに十分なチオール化合物が最終的に生成される時間であれば特に限定されない。通常、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に要する反応時間は、約５分〜３時間、好ましくは約５分〜３０分間である。
【００６３】
（反応ｐＨ）
上記の測定方法において、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程、および比色に関わる工程を実施し得るｐＨであれば反応ｐＨは特に限定されない。リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とが別工程で行われる場合には、各工程に適した、異なったｐＨで実施してもよい。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程では弱アルカリ性（例えば、ｐＨ７．５〜９．５）、および比色に関わる工程では中性付近（例えば、ｐＨ６〜８）で実施してもよい。
【００６４】
（測定機器）
本発明の方法によれば、リゾホスホリパーゼＤ活性は、用手法によって測定することができる。より簡便に、かつ再現性よく測定するためには、自動分析装置を用いることもできる。ここで使用される自動分析装置は、測定に関わるすべての工程が自動化されているものでもよく、一部の工程のみが自動化されているものであってもよい。望ましくは、臨床検査で使用される生化学用自動分析装置が用いられる。具体的には、株式会社日立ハイテクノロジーズ製Ｈ７０７０型、Ｈ７１７０型、Ｈ７１８０型自動分析装置、東芝メディカルシステムズ株式会社製ＴＢＡ−２００ＦＲ、ＴＢＡ−８０ＦＲ ＮＥＯ２などが挙げられる。
【００６５】
（疾患の診断に用いる指標）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の診断またはリスクの評価に利用できる。このような疾患としては、例えば、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患が挙げられる。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性によって合成されるＬＰＡは癌細胞浸潤促進因子として知られている。そのため、血中リゾホスホリパーゼＤ活性が高いという測定結果が得られたヒトにおいては、何らかの癌に罹患している可能性があることが予測される。したがって、本発明の方法により測定されるリゾホスホリパーゼＤの活性は、これらの疾患の指標となり得る。
【００６６】
（治療の効果判定）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の治療効果判定に利用できる。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性が高い患者に対して、リゾホスホリパーゼＤ活性阻害を作用機序とする治療薬を投与し、経時的に患者の血中リゾホスホリパーゼＤ活性を測定する。その結果、治療薬の投与によってリゾホスホリパーゼＤ活性が低下していれば改善に向かっており、一方、リゾホスホリパーゼＤ活性が上昇もしくは変化していなければ治療が不十分であると評価することが可能である。したがって、本発明の方法により測定されるリゾホスホリパーゼＤの活性は、これらの疾患治療効果の判定のための指標となり得る。
【００６７】
（スクリーニング）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響あるいは効果を調べるためのスクリーニングにも利用できる。例えば、このスクリーニング方法によって見いだされたリゾホスホリパーゼＤ活性を阻害あるいは減少させる物質は、ＬＰＡ、環状ホスファチジン酸、スフィンゴシン−１−リン酸、コリンなどの産生を抑制することができ、これらの過剰な産生に起因すると考えられる種々の疾患に好適な予防薬あるいは治療薬として有用であると考えられる。また、このスクリーニング方法によって見いだされたリゾホスホリパーゼＤ活性を惹起あるいは増加させる物質は、ＬＰＡ、環状ホスファチジン酸、スフィンゴシン−１−リン酸、コリンなどの産生を高めることができ、これらの不足に起因すると考えられる種々の疾患に好適な予防薬あるいは治療薬として有用であると考えられる。
【００６８】
（リゾホスホリパーゼＤ活性の測定用キット）
本発明においては、上記のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に利用可能なリゾホスホリパーゼＤ活性の測定用キットも提供される。このキットは、上記の新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を含む。さらに、ジスルフィド化合物、好ましくは式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物を含むことが好ましい。
【００６９】
このキットは、測定方法の各工程に応じて、一試薬のみであってもよく、あるいは二試薬以上の試薬から構成されてもよい。例えば、試料中のリゾホスホリパーゼＤによる硫黄置換化合物の切断反応工程、切断により生じたチオール化合物とジスルフィド化合物とのジスルフィド交換工程、および新たに合成されたチオール化合物に由来した比色工程を単一工程内で行う場合には、一試薬系であり得る。あるいは、リゾホスホリパーゼＤによる硫黄置換化合物の切断反応工程のみを最初に行い、その後、残りの比色に関わる工程を一工程内で行う場合には、二試薬系であり得る。
【実施例】
【００７０】
以下、実施例によって、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００７１】
なお、実施例において、無水条件を必要とする反応、および酸素または水分に敏感な試薬の取り扱いは、不活性ガス（アルゴンまたは窒素）雰囲気下で行った。ジクロロメタンおよびメタノールＭｅＯＨは、市販のものを必要に応じて蒸留して使用した。その他の試薬および溶媒は、市販の試薬および無水溶媒（和光純薬工業株式会社）を使用した。
【００７２】
測定機器は、以下のものを用いた：
ＮＭＲ：日本電子 ４００ＭＨｚ ＮＭＲ、
ＩＲ：日本分光 ＦＴ／ＩＲ−５３００、
旋光度：日本分光 ＤＩＰ−３７０、および
シリカゲルクロマトグラフィー：富士シリシア ＢＷ−２００。
【００７３】
（実施例１：化合物Ｋ０１の合成）
【００７４】
【化１０】
【００７５】
（実施例１−１：化合物２の合成）
【００７６】
【化１１】
【００７７】
Ｓ−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（化合物１：５ｇ，３７．８３３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ：７０ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．８１６ｇ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した後、ベンジルブロミド（５．４０ｍｌ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加えて室温に昇温し、２０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え中和した後、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２（７．７７９ｇ，収率９３％）を得た。
【００７８】
化合物２の物性データ：［α］Ｄ２４．０ ＋１９．７（ｃ＝１．１１，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３７（ｍ，５Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．１，１１０．０，７４．９，７３．７，７１．２，６７．０，２６．９，２５．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２４５．１１５４，実測値：２４５．１１５６。
【００７９】
（実施例１−２：化合物３の合成）
【００８０】
【化１２】
【００８１】
化合物２（２３．５４１ｇ，１０５．９０７ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２．０１４ｇ，１０．５９１ｍｍｏｌ）を加えて１２時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物３（１４．４８１ｇ，収率７５％）を得た。
【００８２】
化合物３の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −０．６（ｃ＝１．１４，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８７０，１６３９，１４５４，１２０９，６９８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：７．２３−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｔｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝６．０，９．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．６，１２８．５，１２７．９，１２７．８，７３．６，７１．７，７０．６，６４．０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１０Ｈ１４Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２０５．０８４１，実測値：２０５．０８４９。
【００８３】
（実施例１−３：化合物４の合成）
【００８４】
【化１３】
【００８５】
化合物３（１４．４８１ｇ，７９．４７０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２００ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（１４．３７３ｇ，９５．３６４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１０．８２０ｇ，１５８．９４０ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に水を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜９％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物４（２１．３４８ｇ，収率９１％）を得た。
【００８６】
化合物４の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋１．２（ｃ＝１．０６，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５２，２９３０，１４６４，１２５５，１０９７，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３７（ｍ，５Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），３．８２−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），０．８９（ｓ，１Ｈ），０．０６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．０，１２８．３，１２７．７，１２７．６，７３．４，７０．９，７０．７，６４．０，２５．８，１８．３，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１６Ｈ２８Ｏ３Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３１９．１７０５，実測値：３１９．１７１６。
【００８７】
（実施例１−４：化合物５の合成）
【００８８】
【化１４】
【００８９】
化合物４（７．９１３ｇ，２６．６９０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍｌ）溶液に、０℃でミリスチン酸（６．９５０ｇ，３４．６９７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．６３０ｇ，１３．３４５ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（６．１４０ｇ，３２．０２８ｍｍｏｌ）を順次加えて１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物５（１０．６６１ｇ，収率７９％）を得た。
【００９０】
化合物５の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −４．０（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９２６，１７３９，１２５３，１１１１，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．５８−１．６４（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．３０（ｍ，２０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．５，６１．６，３４．５，３１．９，２９．７，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４０，−５．４３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３０Ｈ５４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２９．３６８９，実測値：５２９．３６８３。
【００９１】
（実施例１−５：化合物６の合成）
【００９２】
【化１５】
【００９３】
化合物５（１０．６６１，２１．０３５ｍｍｏｌ）に、活性化パラジウム炭素（１．６００ｇ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ：４２ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物６（２．３２２ｇ，収率２７％）を得た。
【００９４】
化合物６の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −９．７（ｃ＝１．０１，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５２，２９２８，１７３９，１４６６，１２５３，１１１１，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８０−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２３Ｈ４８Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４３９．３２２０，実測値：４３９．３２１２。
【００９５】
（実施例１−６：化合物８の合成）
【００９６】
【化１６】
【００９７】
メチルジクロロホスファイト（０．６５ｍｌ，６．６８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（２．９２ｍｌ）および化合物６（２．３２２ｇ，５．５７２ｍｍｏｌ）を順次加えて１時間撹拌後、同温でメタノール（０．４５ｍｌ，１１．１４４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【００９８】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．３ｇ）およびジクロロメタン（２０ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（２．２１７ｇ，６．６８６ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（１．１８４ｇ，８．３５８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．８９ｍｌ，２２．２８８ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１９ｍｌ，１．６７２ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチルからクロロホルム中％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物８（１．８１１ｇ，収率５４％）を得た。
【００９９】
化合物８の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −４．０（ｃ＝０．９３，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４６４，２９２８，１７４１，１４６２，１２５７，１０１８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０３（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−４．３３（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．５７（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．４，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．１，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ５９８．３７２６，実測値：５９８．３７００。
【０１００】
（実施例１−７：化合物９の合成）
【０１０１】
【化１７】
【０１０２】
化合物８（１．８１１ｇ，３．０２９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（２．０９３ｇ，１５．１４５ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（１．８９ｍｌ，３０．２８９ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）のメタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）の水および３８％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物９（１．９６４ｇ，収率７２％）を得た。
【０１０３】
化合物９の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −６．９（ｃ＝０．９８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３９８，２９２６，１７３９，１４６７，１２５１，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１６（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），７３．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６６．９，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝１．９Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），５３．８，３５．２，３３．０，３０．７，３０．７，３０．５，３０．４，３０．４，３０．１，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６３Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６１２．３８８３，実測値：６１２．３８８３。
【０１０４】
（実施例１−８：化合物１０の合成）
【０１０５】
【化１８】
【０１０６】
化合物９（１．２７４ｇ，１．９６５ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（３ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物１０（１．０１５ｇ，収率８７％）を得た。
【０１０７】
化合物１０の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋１．７（ｃ＝１．０８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３８１，２９２６，１７２８，１６４９，１２４９，１０７６，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．１０（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０６−４．１２（ｍ，１Ｈ），３．９６−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６３−３．６７（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．１３（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．８，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．６，６５．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６３．１，５３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），５３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．２，３３．０，３０．７，３０．５，３０．４，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６２０．３５４６，実測値：６２０．３５２７。
【０１０８】
（実施例１−９：化合物Ｋ０１（２−Ｏ−テトラデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０１０９】
【化１９】
【０１１０】
化合物１０（０．４０５ｇ，０．６７８ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（６．７ｍｌ）に室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０６４ｇ，０．３３９ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、Ｋ０１（０．２８４ｇ，収率８７％）を得た。
【０１１１】
化合物Ｋ０１の物性データ：［α］Ｄ２４．５＋６．８（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｓ，９Ｈ），３．００−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．３，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．１，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２２Ｈ４６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０６．２６８１，実測値：５０６．２６９０。
【０１１２】
（実施例２：化合物Ｋ０２合成）
【０１１３】
【化２０】
【０１１４】
（実施例２−１：化合物１８の合成）
【０１１５】
【化２１】
【０１１６】
Ｒ−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（化合物１７：５ｇ，３７．８３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１１３ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．８１６ｇ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した後、ベンジルブロミド（５．４０ｍｌ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加えて室温に昇温し、３０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え中和した後、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１８（７．６３３ｇ，収率９１％）を得た。
【０１１７】
化合物１８の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −２１．７（ｃ＝１．０７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９８８，２８５６，１３８１，１０９７，７３８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５９（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．９，１２８．４，１２７．７，１０９．４，７４．７，７３．５，７１．１，６６．９，２６．８，２５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２４５．１１５４，実測値：２４５．１１５２。
【０１１８】
（実施例２−２：化合物１９の合成）
【０１１９】
【化２２】
【０１２０】
化合物１８（５．２５７ｇ，２３．６５０ｍｍｏｌ）のメタノール（４６ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．９００ｇ，４．７３０ｍｍｏｌ）を加えて１５時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え中和した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１６％（ｖ／ｖ）〜１％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１９（２．８１１ｇ，収率６５％）を得た。
【０１２１】
化合物１９の物性データ：［α］Ｄ２（ｃ＝，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８６８，１６５５，１４５４，１２０７，６９８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：７．２４−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｔｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，９．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．６，１２８．４，１２７．９，１２７．７，７３．５，７１．７，７０．６，６４．０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１０Ｈ１４Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２０５．０８４１，実測値：２０５．０８３９。
【０１２２】
（実施例２−３：化合物２０の合成）
【０１２３】
【化２３】
【０１２４】
化合物１９（２．８１１ｇ，１５．４２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４５ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（２．１００ｇ，３０．８５２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（２．７９０ｇ，１８．５１１ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に水を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜９％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２０（４．３０４ｇ，収率９４％）を得た。
【０１２５】
化合物２０の物性データ：［α］Ｄ２４．５ −１．７（ｃ＝１．４６，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），３．８２−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．０６（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．０，１２８．４，１２７．７，１２７．６，７３．４，７０．９，７０．７，６４．０，２５．８，１８．３，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１６Ｈ２８Ｏ３Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３１９．１７０５，実測値：３１９．１６９５。
【０１２６】
（実施例２−４：化合物２１の合成）
【０１２７】
【化２４】
【０１２８】
化合物２０（２３．７８８ｇ，８０．２３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２４０ｍｌ）溶液に、０℃でラウリン酸（２０．８９４ｇ，１０４．３０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（４．９０１ｇ，４０．１１８ｍｍｏｌ）、およびジシクロへキシルカルボジイミド（１９．８６６ｇ，９６．２８２ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２１（３４．５７８ｇ，収率９０％）を得た。
【０１２９】
化合物２１の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋３．７（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５４，２９２８，１７３９，１４６４，１２５３，１１１１，８４１ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２７−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，１６Ｈ），０．８６−０．９０（ｍ，１２Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．４，６１．６，３４．５，３１．９，２９．６，２９．５，２９．３，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ５０Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０１．３３７６，実測値：５０１．３３６３。
【０１３０】
（実施例２−５：化合物２２の合成）
【０１３１】
【化２５】
【０１３２】
化合物２１（１０．０００ｇ，２０．８８６ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（２．０００ｇ）およびＴＨＦ（４０ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で２４時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２２（６．９１５ｇ，収率８５％）を得た。
【０１３３】
化合物２２の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋８．８（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４４７，２９２８，１７４０，１４５８，１２５５，１１０９，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｓ，１６Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．６，２９．５，２９．３，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２１Ｈ４４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４１１．２９０７，実測値：４１１．２８９７。
【０１３４】
（実施例２−６：化合物２４の合成）
【０１３５】
【化２６】
【０１３６】
メチルジクロロホスファイト（０．４０ｍｌ，４．１０６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｍｌ，１０．２６６ｍｍｏｌ）および化合物２２（１．３３０ｇ，３．４２２ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．２８ｍｌ，６．８４４ｍｍｏｌ）を加えて３５分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１３７】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．２６６ｇ）およびジクロロメタン（１２ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．３６２ｇ，４．１０６ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．７２７ｇ，５．１３３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｍｌ，１０．２６６ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１１ｍｌ，１．０２７ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２４（０．８４４ｇ，収率４３％）を得た。
【０１３８】
化合物２４の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋４．８（ｃ＝１．１２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４４７，２９２８，１７３４，１４５８，１２５２，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．３４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．４，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．５，７３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．２，３５．２，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２８．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９２．３２３３，実測値：５９２．３２０７。
【０１３９】
（実施例２−７：化合物２５の合成）
【０１４０】
【化２７】
【０１４１】
化合物２４（０．７９８ｇ，１．４００ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７．０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．９６７ｇ，７．０００ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．８７ｍｌ，１４．００３ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２５（０．７５３ｇ，収率８７％）を得た。
【０１４２】
化合物２５の物性データ：［α］Ｄ２３．０ ＋５．７（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３９３，２９２８，１７３４，１４５８，１２５２，１１１５，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．３１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１，Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９２（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６６．９，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．８Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５３．７，３５．２，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．５，３０．４，３０．１，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２７Ｈ５９Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ５８４．３５７０，実測値：５８４．３５４２。
【０１４３】
（実施例２−８：化合物２６の合成）
【０１４４】
【化２８】
【０１４５】
化合物２５（０．７１９ｇ，１．０１０ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１．５ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２６（０．５６４ｇ，収率９８％）を得た。
【０１４６】
化合物２６の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −２．７（ｃ＝１．０９，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９９，２９２８，１７３４，１４７３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０８（ｔｔ，Ｊ＝４．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，８．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．９，６５．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．３，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９２．３２３３，実測値：５９２．３２２０。
【０１４７】
（実施例２−９：化合物Ｋ０２（２−Ｏ−ドデカノイル−ｓｎ−グリセロ−１−ホスホリオコリン）の合成）
【０１４８】
【化２９】
【０１４９】
化合物２６（０．４５９ｇ，０．８０５ｍｍｏｌ）のメタノール（８．１ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０７７ｇ，０．４０３ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０２（０．２６８ｇ，収率７３％）を得た。
【０１５０】
化合物Ｋ０２の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −６．８（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），３．００−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．９，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．７，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６１．３，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．１，３３．０，３０．７，３０．６，３０．４，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２０Ｈ４２Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４７８．２３６８，実測値：４７８．２３５９。
【０１５１】
（実施例３：化合物Ｋ０３の合成）
【０１５２】
【化３０】
【０１５３】
（実施例３−１：化合物２７の合成）
【０１５４】
【化３１】
【０１５５】
化合物４（１０．０００ｇ，３３．７２９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６５ｍｌ）溶液に、０℃でアラキジン酸（８．７８４ｇ，４３．８４８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．０６０ｇ，１６．８６５ｍｍｏｌ）、およびジシクロへキシルカルボジイミド（８．３５１ｇ，４０．４７５ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、濾液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をヘキサンに溶かし、セライトろ過後、再び減圧濃縮を行った。残査をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２７（１４．９４７ｇ，収率７５％）を得た。
【０１５６】
化合物２７の物性データ：［α］Ｄ２３．０ −４．９（ｃ＝１．３０，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９２８，１７３９，１２５３，１１１１，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，３２Ｈ），０．８６−０．８８（ｍ，１２Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．４，６１．６，３４．５，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４０，−５．４３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３６Ｈ６６Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６１３．４６２８，実測値６１３．４６０８。
【０１５７】
（実施例３−２：化合物２８の合成）
【０１５８】
【化３２】
【０１５９】
化合物２７（４．７９０，８．１０５ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（１．４３７ｇ）およびＴＨＦ（１６ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２８（２．６６１ｇ，収率６６％）を得た。
【０１６０】
化合物２８の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −７．２（ｃ＝１．２５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，３２Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６０Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２３．４１５９，実測値：５２３．４１５５。
【０１６１】
（実施例３−３：化合物３０の合成）
【０１６２】
【化３３】
【０１６３】
メチルジクロロホスファイト（０．４６ｍｌ，４．７９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（２．０９ｍｌ）および化合物２８（２．０００ｇ，３．９９３ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でＭｅＯＨ（０．３２ｍｌ，７．９８６ｍｍｏｌ）を加えて３０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１６４】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．４ｇ）およびジクロロメタン（１５ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．５８９ｇ，４．７９２ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、２０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（１．１３１ｇ，７．９８６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．４９ｍｌ，１９．９６５ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１３ｍｌ，１．１９８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３０（１．７２１ｇ，収率６３％）を得た。
【０１６５】
化合物３０の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −４．１（ｃ＝０．９８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２９２４，１７３４，１４６７，１２４８，１０７６，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．３４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．３，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６６．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．２，３３．１，３０．８，３０．６，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．６，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３４Ｈ７２Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ６８２．４６６５，実測値：６８２．４６７５。
【０１６６】
（実施例３−４：化合物３１の合成）
【０１６７】
【化３４】
【０１６８】
化合物３０（１．８１１ｇ，１．２６１ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．８７１ｇ，６．３０２ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．７９ｍｌ，５．５６６ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３１（０．７１５ｇ，収率７８％）を得た。
【０１６９】
化合物３１の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６５−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．０，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），５３．７，３５．２，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３５Ｈ７５Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６９６．４８２２，実測値：６９６．４８０２。
【０１７０】
（実施例３−５：化合物３２の合成）
【０１７１】
【化３５】
【０１７２】
化合物３１（０．７１５ｇ，１．０２６ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍｌ）およびトルエン（１ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１．５ｍｌ）を加え、室温に昇温して３時間３０分間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３２（０．５８８ｇ，収率８４％）を得た。
【０１７３】
化合物３２の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９（ｔｔ，Ｊ＝４．６，５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，７．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝０．９，７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．７，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．８，６５．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．３，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．５，３０．３，２６．４，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．８，１９．１，１４．６，−５．１。
【０１７４】
（実施例３−６：化合物Ｋ０３（２−Ｏ−エイコサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０１７５】
【化３６】
【０１７６】
化合物３２（０．１００ｇ，０．１４７ｍｍｏｌ）のメタノール（２．０ｍｌ）溶液に室温でＤｏｗｅｘ ５０ＷをｐＨ＝４になるまで加え、２分間撹拌した。反応混合物をろ過してＤｏｗｅｘを除去し、ろ液をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０３（０．０２５ｇ，収率３０％）を得た。
【０１７７】
化合物Ｋ０３の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．９，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），３．０１−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２８（ｓ，３２Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．４，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．２，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ５８Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９０．３６２０，実測値：５９０．３６１８。
【０１７８】
（実施例４：化合物Ｋ０４の合成）
【０１７９】
【化３７】
【０１８０】
（実施例４−１：化合物１１の合成）
【０１８１】
【化３８】
【０１８２】
化合物３（４．３４８ｇ，２３．８６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６９ｍｌ）溶液に、０℃でミリスチン酸（５．９９４ｇ，２６．２４７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．４５８ｇ，１１．９３１ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（５．０３２ｇ，２６．２４７ｍｍｏｌ）を加えて３時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１１（４．８５７ｇ，収率５２％）を得た。
【０１８３】
化合物１１の物性データ：［α］Ｄ２５．５ ＋１．８（ｃ＝０．９４，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５４，２９２４，１７３８，１４５６，１１１３，７３６ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２８−７．３８（ｍ，５Ｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝６．２，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝４．３，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．９，１３７．６，１２８．５，１２７．９，１２７．７，７３．５，７０．９，６８．９，６５．３，３４．２，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２４．９，２２．７，１４．１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２４Ｈ４０Ｏ４Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４１５．２８２４，実測値：４１５．２８０８。
【０１８４】
（実施例４−２：化合物１２の合成）
【０１８５】
【化３９】
【０１８６】
化合物１１（４．５８０ｇ，１１．６６７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液に、室温でイミダゾール（２．３８３ｇ，３５．００１ｍｍｏｌ）およびトリエチルシリルクロライド（２．３４ｍｌ，１４．０００ｍｍｏｌ）を順次加えて１０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１２（５．８５６ｇ，収率９９％）を得た。
【０１８７】
化合物１２の物性データ：［α］Ｄ２５．５ ＋９．８（ｃ＝１．３７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９２６，１７４１，１４５８，１１１４，１００６，７４０ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．００−４．０６（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６０（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６１（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．４，７１．７，６９．５，６６．１，３４．３，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．２，２４．９，２２．７，１４．１，６．７，４．８；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３０Ｈ５４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２９．３６８９，実測値：５２９．３６７４。
【０１８８】
（実施例４−３：化合物１３の合成）
【０１８９】
【化４０】
【０１９０】
化合物１２（３．９２９ｇ，７．７５２ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（０．７８６ｇ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１３（２．６２２ｇ，収率８１％）を得た。
【０１９１】
化合物１３の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −６．１（ｃ＝１．２７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４７２，２９２６，１７４１，１４６０，１１１６，１００５，７４４ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．１１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｔｔ，Ｊ＝４．６，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，５．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．３，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０１−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｓ，２０Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６４（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．８，７０．４，６４．８，６３．９，３４．２，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．２，２４．９，２２．７，１４．１，６．７，４．８；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２３Ｈ４８Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４３９．３２２０，実測値：４３９．３２０８。
【０１９２】
（実施例４−４：化合物１５の合成）
【０１９３】
【化４１】
【０１９４】
メチルジクロロホスファイト（０．３５ｍｌ，３．５９１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（１．５７ｍｌ）および化合物１３（１．２４７ｇ，２．９９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．２４ｍｌ，５．９８４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１９５】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．２４ｇ）およびジクロロメタン（１０ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．１９１ｇ，３．５９０ｍｍｏｌ）、先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．８４８ｇ，５．９８４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２．６１ｍｌ，１４．９６０ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１０ｍｌ，０．８９８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物１５（１．１２６ｇ，収率６３％）を得た。
【０１９６】
化合物１５の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋６．９（ｃ＝１．２２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９２６，２７７３，１７４１，１４６０，１２６３，１１４５，１０２２，７４６ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．０２−４．２０（ｍ，５Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），２．９８（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６８（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９８．３７２６，実測値：５９８．３７１８。
【０１９７】
（実施例４−５：化合物１６の合成）
【０１９８】
【化４２】
【０１９９】
化合物１５（０．５７５ｇ，０．９６２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．６６５ｇ，４．８１２ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．６０ｍｌ，９．６１７ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物１６（０．５０３ｇ，収率７１％）を得た。
【０２００】
化合物１６の物性データ：ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３８９，２９２４，１７３６，１４６６，１２３８，１０７４，７４０ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．０６−４．２１（ｍ，５Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．６７（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６３Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６１２．３８８３，実測値：６１２．３８９１。
【０２０１】
（実施例４−６：化合物Ｋ０４（１−Ｏ−テトラデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０２０２】
【化４３】
【０２０３】
化合物１６（０．５０３ｇ，０．６８０ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（２ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０１３ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０４（０．２５０ｇ，収率７６％）を得た。
【０２０４】
化合物Ｋ０４の物性データ：ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３４１０，２９２４，１７３６，１４７７，１２２４，１０７２ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：４．１８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｓ，９Ｈ），３．０４（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．３，６９．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．７−６７．８（ｍ，２Ｃ），６６．３，５３．６，５３．６，５３．６，３４．９，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２２Ｈ４６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０６．２６８１，実測値：５０６．２６５７。
【０２０５】
（実施例５：化合物Ｋ０６の合成）
【０２０６】
【化４４】
【０２０７】
（実施例５−１：化合物３９の合成）
【０２０８】
【化４５】
【０２０９】
化合物４（６．５７８ｇ，２２．１８７ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（０．９８７ｇ）およびＴＨＦ（４５ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で７７時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３％（ｖ／ｖ）〜５０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物３９（２．５８２ｇ，収率５６％）を得た。
【０２１０】
化合物３９の物性データ：ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８５８，１４６４，１２５７，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：３．５９−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．５３（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：７３．９，６５．５，６４．４，２６．４，−５．３。
【０２１１】
（実施例５−２：化合物４０の合成）
【０２１２】
【化４６】
【０２１３】
化合物３９（２．４５０ｇ，１１．８７３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（１．６１７ｇ，２３．７４６ｍｍｏｌ）およびトリエチルシリルクロライド（２．１９ｍｌ，１３．０６０ｍｍｏｌ）を順次加えて、室温で２０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残査をシリカゲルクロマトグラフィー（３％（ｖ／ｖ）トリエチルアミンを含むヘキサン中０％（ｖ／ｖ）〜２％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物４０（２．７１４ｇ，収率７１％）を得た。
【０２１４】
化合物４０の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −１．９（ｃ＝１．１０，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９５，２９５５，１４６４，１０９５，８３７ ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：３．５９−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，１Ｈ），２．４９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．６１（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：７１．９，６３．６，６３．３，２５．９，６．７，４．４，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１５Ｈ３６Ｏ３Ｓｉ２Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３４３．２１０１，実測値：３４３．２１０８。
【０２１５】
（実施例５−３：化合物４１の合成）
【０２１６】
【化４７】
【０２１７】
化合物４０（０．７８１ｇ，２．４３６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７．３ｍｌ）溶液に、０℃でリノール酸（０．９７ｍｌ，３．１６７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．１４９ｇ，１．２１８ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（０．５６０ｇ，２．９２３ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）酢酸エチル）で精製し、化合物４１（１．２６３ｇ，収率８９％）を得た。
【０２１８】
化合物４１の物性データ：［α］Ｄ２２．５ −０．４（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９５５，１７４０，１４６４，１２５２，１１０３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：５．２９−５．４０（ｍ，４Ｈ），４．８８（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５−１．３７（ｍ，１４Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８−０．８９（ｍ，１２Ｈ），０．５９（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ），０．０５（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．６，１３０．５，１３０．３，１２８．３，１２８．２，７５．１，６１．６，６１．４，３４．８，３１．９，２９．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２７．５，２６．１，２５．９，２５．３，２２．９，１８．６，１４．４，７．０，４．７，−５．０９，−５．１３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３３Ｈ６６Ｏ４Ｓｉ２Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６０５．４３９７，実測値：６０５．４３９４。
【０２１９】
（実施例５−４：化合物４２の合成）
【０２２０】
【化４８】
【０２２１】
化合物４１（１．２６３，２．１６６ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）およびクロロホルム（１ｍｌ）溶液に、室温でＰＰＴＳ（０．０５４ｇ，０．２１７ｍｍｏｌ）を加え、同温で１０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）酢酸エチル）で精製し、化合物４２（０．８１０ｇ，収率８０％）を得た。
【０２２２】
化合物４２の物性データ：［α］Ｄ２５．５ −９．２（ｃ＝１．１５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９５５，１７４０，１４６４，１２５３，１１０３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：５．３０−５．４２（ｍ，４Ｈ），４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８０−３．８２（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝０．９，７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０５（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｍ，２Ｈ），１．２６−１．３９（ｍ，１４Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｍ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．６，１３０．２，１３０．０，１２８．０，１２７．９，７４．３，６２．９，６２．５，３４．４，３１．５，２９．６，２９．４，２９．２，２９．１，２７．２，２５．８，２５．６，２５．０，２２．６，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２７Ｈ５２Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４９１．３５３３，実測値：４９１．３５１３。
【０２２３】
（実施例５−５：化合物４４の合成）
【０２２４】
【化４９】
【０２２５】
メチルジクロロホスファイト（０．２０ｍｌ，２．０７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８．５ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｍｌ）および化合物４２（０．８１０ｇ，１．７２８ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．１４ｍｌ，５．１８４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０２２６】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．１６０ｇ）存在下、四臭化炭素（０．６８８ｇ，２．０７４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液に、先ほど調製した化合物のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液を加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．３６７ｇ，２．５９２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．０６ｍｌ，６．０４８ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．０６ｍｌ，０．５１８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４４（０．７５３ｇ，収率６７％）を得た。
【０２２７】
化合物４４の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −４．５（ｃ＝１．２７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４７０，２８５６，１７４３，１４６４，１２５７，１１１８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．２８−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．３３（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，３／２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，３／２Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ ２Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｍ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．４，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ，１／２Ｃ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ，１／２Ｃ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．１，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２８．２，２６．６，２６．３，２６．０，２３．７，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３２Ｈ６４Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ６７２．３８５９，実測値：６７２．３８３２。
【０２２８】
（実施例５−６：化合物４５の合成）
【０２２９】
【化５０】
【０２３０】
化合物４４（０．７５３ｇ，１．１５８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．８００ｇ，５．７９０ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（０．７２ｍｌ，１１．５８０ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４５（０．５２９ｇ，収率６５％）を得た。
【０２３１】
化合物４５の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −３．３（ｃ＝０．８７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３７９，２９２８，１７４０，１４６６，１２５２，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．３２−５．３９（ｍ，２Ｈ），５．０９−５．１６（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，３／２Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，３／２Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６４−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．３２（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，９Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．６，６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｍ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３３Ｈ６７Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６６４．４１９６，実測値：６６４．４１６７。
【０２３２】
（実施例５−７：化合物４６の合成）
【０２３３】
【化５１】
【０２３４】
化合物４５（０．４１１ｇ，０．５１９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４６（０．２７４ｇ，収率８１％）を得た。
【０２３５】
化合物４６の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋２．７（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９３，２９２８，１７３２，１４６６，１２５０，１０７８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．３０−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０９（ｔｔ，Ｊ＝４．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｍ，２Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７４．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．９，６５．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６，５３．６，５３．６，３５．３，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，２８．６，２６．６，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．６，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３２Ｈ６４Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６７２．３８５９，実測値：６７２．３８４２。
【０２３６】
（実施例５−８：２−Ｏ−（シス−９，シス−１２−オクタデカジエノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン（Ｋ０６）の合成）
【０２３７】
【化５２】
【０２３８】
化合物４６（０．２７４ｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）のメタノール（４．２ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０４０ｇ，０．２１１ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０６（０．１５０ｇ，収率６６％）を得た。
【０２３９】
化合物Ｋ０６の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋６．３（ｃ＝１．１３，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３３９，２９２６，１７２８，１４８１，１２４０，１０７２，８１２ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．２８−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝５．７，７．３，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｓ，９Ｈ），３．０１−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．４，６．４Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３６−１．４０（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．９，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．４，５３．６，３５．１，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，３０．２，２８．２，２６．５，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．６，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５５８．２９９４，実測値：５５８．２９６８。
【０２４０】
（実施例６：反応時間および吸光度変化の検討）
以下の試薬ＡおよびＢを調製した：
試薬Ａ（ｐＨ８．５）：
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン １００ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
塩化マグネシウム ５ｍｍｏｌ／Ｌ；および
ＤＴＮＢ ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
試薬Ｂ（ｐＨ６．５）：
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン １０ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
メタノール １％（ｖ／ｖ）；および
１−ヒドロキシ−２−ミリストイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０１） １０ｍｍｏｌ／Ｌ。
【０２４１】
試料として生理食塩水、組換えオートタキシン（ｒＡＴＸ：特許文献１参照）、または市販管理血清である液状コントロール血清IIワコー（和光純薬工業）を１０μＬずつマイクロプレートに取り、試薬Ａを１６０μＬ加えて、３７℃で１５分間加温した。これに試薬Ｂを４０μＬ加えて反応を開始し、３７℃で１５分間反応させた。生化学用自動分析装置ＴＢＡ−８０ＦＲ ＮＥＯ２（東芝メディカルシステムズ株式会社）を使用し、主波長４１２ｎｍおよび副波長５４８ｎｍの吸光度を約１分ごとに測定した。図１に、試薬Ｂを加えて反応を開始した後の吸光度の変化を示す。
【０２４２】
図１に示すように、ｒＡＴＸおよび血清では、吸光度は、反応時間とともに直線的に大きく上昇した。一方、リゾホスホリパーゼＤの活性を全く有していない生理食塩水の吸光度は、直線的にわずかに変化することがわかった。そこで、１分間当たりの吸光度変化率を算出した。結果を図２に示す。
【０２４３】
図２に示す各試料の吸光度変化率から、リゾホスホリパーゼＤの活性を全く有していない生理食塩水の吸光度変化率を差し引いた値が、真のリゾホスホリパーゼＤ活性を表す値となることがわかった。
【０２４４】
（実施例７：ｐＨの検討）
次に、上記実施例６の試薬Ａにおいて種々のｐＨを有する試薬Ａを調製した、ｐＨは、それぞれ７．０、７．５、８．０、８．５、および９．０に調整した。
【０２４５】
試料として生理食塩水およびｒＡＴＸを用い、上記実施例６と同様の操作を行って、各ｐＨでの吸光度変化率を算出した。結果を図３に示す。
【０２４６】
図３においては、各ｐＨにおいてｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いた値をプロットした。その結果、ｐＨが高い方が、吸光度変化率が高いことがわかった。
【０２４７】
（実施例８：基質の検討）
上記実施例６の試薬Ｂにおいて、以下の４種類のいずれかの基質を１０ｍｍｏｌ／Ｌ含む試薬Ｂを調製した：
基質１：１−ヒドロキシ−２−ミリストイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０１）；
基質２：１−ヒドロキシ−２−ラウロイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体の立体異性体（化合物Ｋ０２）；
基質３: １−ミリストイル−２−ヒドロキシ−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０４）；および
基質４：１−ヒドロキシ−２−リノレオイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０６）。
【０２４８】
試料として生理食塩水およびｒＡＴＸを用い、上記実施例６と同様の操作を行って、吸光度変化を測定した。ｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いたものを図４に示す。
【０２４９】
図４に示すように、基質の脂肪酸の位置、脂肪酸の種類、あるいは立体構造の違いに関わらず、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定が可能であることがわかった。
【０２５０】
（実施例９：基質濃度の検討）
以下の試薬を調製した：
試薬Ａ（ｐＨ８．５）：
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン １００ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
塩化マグネシウム ５ｍｍｏｌ／Ｌ；および
ＤＴＮＢ ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
試薬Ｂ（ｐＨ６．５）：
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン １０ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
メタノール １％（ｖ／ｖ）；
基質１（化合物Ｋ０１） １０ｍｍｏｌ／Ｌあるいは基質３（化合物Ｋ０４） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
【０２５１】
試料として生理食塩水、ならびにｒＡＴＸの原液および１／２希釈液を用い、上記実施例６と同様の操作を行って、吸光度変化を測定した。ｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いたものを図５に示す。
【０２５２】
図５に示すように、各基質とも、ｒＡＴＸの濃度依存的に吸光度変化率が上昇し、リゾホスホリパーゼＤ活性の定量が可能であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０２５３】
本発明によれば、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に有用な新規硫黄置換化合物が提供される。この新規化合物を用いることにより、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をより簡便で迅速に測定することができ、リアルタイムで活性を測定することもできる。したがって、本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の診断またはリスクの評価に利用できる。このような疾患としては、例えば、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患が挙げられる。さらに、本発明の方法は、これらの疾患の治療効果判定の判定や、被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響あるいは効果を調べるためのスクリーニングにも利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０２５４】
【図１】各試料に本発明の硫黄置換化合物を添加した後の吸光度の経時変化を示すグラフである（実施例６）。
【図２】各試料における１分間当たりの吸光度変化率を示すグラフである（実施例６）。
【図３】ｐＨと吸光度変化率との関係を示すグラフである（実施例７）。
【図４】種々の基質における吸光度変化率を示すグラフである（実施例８）。
【図５】ｒＡＴＸの希釈率と吸光度変化率との関係を示すグラフである（実施例９）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規硫黄置換リン脂質化合物およびリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リゾホスホリパーゼＤは、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の結合を切断して、主にリゾホスファチジン酸（以下、ＬＰＡと称する）を産生する酵素である。この酵素活性は、以前から動物の血液中に存在することが知られていた。ＬＰＡは、癌細胞の浸潤促進、細胞増殖の制御、平滑筋収縮、血小板凝集、神経突起の退縮、ストレスファイバーの形成、細胞接着因子の誘導などの種々の生理活性を有する脂質である。近年、ＬＰＡをリガンドとする受容体が相次いで発見されており、上記の生理活性の多くは、これらの受容体を介して示されるものと考えられる。さらに、卵巣癌、子宮体癌、および子宮頚癌の患者の血漿中ＬＰＡレベルが、健常者と比して高値であることも報告されている。
【０００３】
２００２年に初めて、血清成分からリゾホスホリパーゼＤ活性を示すタンパク質が精製・同定された（非特許文献１および２）。このタンパク質は、既に同定されていたオートタキシンであり、以前から癌細胞運動性亢進因子として知られていたタンパク質である。オートタキシンは、ヌクレオチドを分解するヌクレオチドホスホジエステラーゼ／ホスファターゼ活性を有することが知られていたが、リン脂質を分解することは知られていなかった。その後、オートタキシンは、ＬＰＡだけでなく、環状ホスファチジン酸やスフィンゴシン−１−リン酸の産生にも寄与していることが報告されている（非特許文献３および４）。
【０００４】
ところで、これまでに報告されているリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、放射標識したリゾホスファチジルコリン（以下、ＬＰＣと称する）を試料と混合し、一定時間反応させ、脂質を抽出し、薄層クロマトグラフィーにて分離して、目的のバンドの放射活性を測定する方法；試料とＬＰＣとを混合して一定時間反応させ、生じた遊離コリンを測定する方法などがある。しかしながら、これらの方法は、放射性物質の使用、煩雑な手順などのため、簡便な方法ではない。
【０００５】
また、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロールとは反対側に発色基を付加した基質を用い、酵素反応による生成物、すなわち、遊離した発色性物質を測定することによって、リゾホスホリパーゼＤの活性測定方法が開発されている（特許文献１）。しかし、このような基質は、その構造が生理的な内在性基質の構造とはかなり異なっており、必ずしも生理的な反応を反映しているとは言い難い。
【０００６】
一方、他の種類の酵素の活性の測定方法として、硫黄化合物と５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ）とを競合させ、生じた５−チオ−２−ニトロ安息香酸に依存した吸光度を測定する方法があり、例えば、コリンエステラーゼ活性測定法などに利用されている。また、スフィンゴミエリンの硫黄置換体を用いた、スフィンゴミエリナーゼ活性の測定方法についても記載されている（特許文献２）。しかし、これまでのところ、ＬＰＣのリン酸基の酸素分子を硫黄分子に置換した化合物、およびこのような化合物を利用したリゾホスホリパーゼＤの活性測定方法は知られていない。
【特許文献１】国際公開第２００２／０５３５６９号パンフレット
【特許文献２】特開２００６−１４６０６号公報
【非特許文献１】A. Tokumuraら、J. Biol. Chem.，2002年，277巻，pp.39436-39442
【非特許文献２】M. Umezu-Gotoら、J. Cell Biol., 2002年, 158巻, pp.227-233
【非特許文献３】J. Dennisら、J. Neurosci. Res.，2005年，82巻，pp.737-742
【非特許文献４】S. Tsudaら、J. Biol. Chem., 2006年, 281巻, pp.26081-26088
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、より簡便で迅速な試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法、およびこのような測定を可能にするための新たなリゾリン脂質の硫黄置換化合物、さらにその化合物を含有するリゾホスホリパーゼＤ活性の測定試薬およびその測定キットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記目的を達成するため、鋭意検討した結果、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した新規化合物の合成に成功した。そして、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、該新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加え、生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本発明は、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００１０】
【化１】
【００１１】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表されるリゾリン脂質の硫黄置換化合物を提供する。
【００１２】
１つの実施態様では、上記Ｘを含むＸ−ＯＨは、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される。
【００１３】
さらなる実施態様では、上記Ｘ−ＯＨは、コリンである。
【００１４】
ある実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、飽和脂肪酸の脂肪酸残基である。
【００１５】
さらなる実施態様では、上記飽和脂肪酸は、炭素数８から２０である。
【００１６】
好適な実施態様では、上記飽和脂肪酸は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される。
【００１７】
ある実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である。
【００１８】
さらなる実施態様では、上記不飽和脂肪酸は、炭素数８から２２である。
【００１９】
好適な実施態様では、上記不飽和脂肪酸は、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される。
【００２０】
別の実施態様では、上記Ｒ１またはＲ２は、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基である。
【００２１】
本発明はまた、リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法を提供し、該方法は、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、上記いずれかのリゾリン脂質の硫黄置換化合物とジスルフィド化合物とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する。
【００２２】
１つの実施態様では、上記ジスルフィド化合物は、以下の式（ＩＩＩ）：
【００２３】
【化２】
【００２４】
で表される化合物であり、そして上記生成したチオール化合物は、以下の式（ＩＶ）：
【００２５】
【化３】
【００２６】
で表される化合物であり、該式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である。
【００２７】
さらなる実施態様では、上記Ｒ３は、水素原子である。
【００２８】
１つの実施態様では、上記リゾホスホリパーゼＤを含有する試料は、血清、血漿、尿、唾液、涙液、精液、糞便溶解液、脊髄液、細胞培養液、細胞抽出液、および組換えオートタキシン溶解液からなる群より選択される。
【００２９】
さらなる実施態様では、上記リゾホスホリパーゼＤの活性は、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標である。
【００３０】
本発明はさらに、上記のいずれかのリゾリン脂質の硫黄置換化合物を含む、リゾホスホリパーゼＤの活性測定用キットを提供する。
【００３１】
１つの実施態様では、上記キットは、さらに、ジスルフィド化合物を含む。
【００３２】
さらなる実施態様では、上記ジスルフィド化合物は、以下の式（ＩＩＩ）：
【００３３】
【化４】
【００３４】
で表される化合物（式（ＩＩＩ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を含む。
【００３５】
ある実施態様では、上記キットは、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標の測定に用いられる。
【発明の効果】
【００３６】
本発明によれば、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をより簡便で迅速に測定することができる。また、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をリアルタイムで活性を測定することもできる。そのため、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患の診断や治療効果の判定、あるいは被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響または効果を調べるためのスクリーニングに利用できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
（新規硫黄置換化合物）
本発明の新規硫黄置換化合物は、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の酸素原子を硫黄原子に置換した化合物であり、以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【００３８】
【化５】
【００３９】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基（アシル基）であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表される化学構造を有する。
【００４０】
ここで、Ｘは、極性基であればよく、好ましくは、通常のリン脂質の親水性部分を構成する基が挙げられる。具体的には、このＸを含むＸ−ＯＨが、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される。さらに好ましくは、Ｘ−ＯＨはコリンである。
【００４１】
また、Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基は、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸の脂肪酸残基であり、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基であり得る。
【００４２】
Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が飽和脂肪酸の脂肪酸残基である場合、この飽和脂肪酸は、好ましくは、炭素数８から２０であり、より好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される飽和脂肪酸である。
【００４３】
Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である場合、この不飽和脂肪酸は、好ましくは、炭素数８から２２であり、より好ましくは、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される不飽和脂肪酸である。
【００４４】
本発明の新規硫黄置換化合物は、以下で詳述するリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に用いられる新規な試薬として有用である。
【００４５】
本発明において、リゾホスホリパーゼＤとは、リゾリン脂質のリン酸ジエステルのグリセロール骨格とは反対側の結合を切断して、主にリゾホスファチジン酸（以下、ＬＰＡと称する）を産生する酵素である。リゾホスホリパーゼＤの活性とは、オートタキシン活性をいう場合がある。好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、リゾホスファチジルコリンを分解し、リゾホスファチジン酸およびコリンを産生する活性を有する。また、好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、リゾホスファチジルコリンを分解し、環状ホスファチジン酸およびコリンを産生する活性を有する。また、好ましくは、リゾホスホリパーゼＤは、スフィンゴシルホスホリルコリンを分解し、スフィンゴシン−１−リン酸およびコリンを産生する活性を有する。
【００４６】
（新規硫黄置換化合物の合成）
本発明の新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、例えば、以下のスキーム１または２で示される製造工程で合成され得る。スキーム１は、Ｒ１が水素原子であり、そしてＲ２が脂肪酸残基である場合の製造工程を示し、一方、スキーム２はＲ１が脂肪酸残基であり、そしてＲ２が水素原子である場合の製造工程を示す。スキーム１において、Ｒ２はＲ２’−ＣＯ−として、そしてスキーム２において、Ｒ１はＲ１’−ＣＯ−として表されている。
【００４７】
【化６】
【００４８】
【化７】
【００４９】
なお、上記スキーム１および２において、Ｂｎ、ＴＢＳ、およびＴＥＳは、それぞれ、ベンジル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシリル基、およびトリエチルシリル基を表す。これらはいずれも、水酸基の保護基の例であり、これらに限定されない。水酸基の保護に用いられる試薬としては、トリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、トリエチルシリルトリフルオロメタンスルホネートなどのハロゲン化シリル、およびシリルスルホン酸エステル試薬が挙げられる。
【００５０】
また、上記スキーム１および２は、出発物質である化合物１がＲ体の場合を例示するが、立体異性体であるＳ体の場合も、同様に合成可能である。
【００５１】
（リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法）
本発明のリゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法は、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、上記の新規硫黄置換化合物とジスルフィド化合物（Ｉ）または（ＩＩ）とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する。
【００５２】
まず、リゾホスホリパーゼＤを含有する試料と上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される新規硫黄置換化合物とを混合し、一定時間反応させると、リゾホスホリパーゼＤの作用によって、新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）からＸ−ＳＨで表されるチオール化合物が遊離される。さらに、リゾホスホリパーゼＤの作用によって遊離したチオール化合物Ｘ−ＳＨが、共存しているジスルフィド化合物と選択的に反応し（チオール−ジスルフィド交換）、新たなチオール化合物を定量的に生成する。生成した新たなチオール化合物に由来する吸光度を測定することによって、試料中に含まれるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。
【００５３】
上記反応工程は、すべての反応を一つの反応系で行っても、二工程以上の複数の工程に分けて行ってもよい。例えば、試料中のリゾホスホリパーゼＤによる新規硫黄置換化合物の切断反応工程；切断により生じたチオール化合物とジスルフィド化合物とのジスルフィド交換工程；および、新たに生成されたチオール化合物に由来する波長での比色工程を単一工程内で行ってもよい。あるいは、リゾホスホリパーゼＤによる新規硫黄置換化合物の切断反応のみを最初に行い、その後、残りの比色に関わる工程を一工程内で行ってもよい。また、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とを同一工程で行う場合には、反応時間に依存して吸光度が経時的に増加するため、単位時間あたりの吸光度変化率をリゾホスホリパーゼＤ活性の指標として用いることが一般的である。一方、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とを別々の工程で行う場合には、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程によって合成されたチオール化合物を、続いて行われる比色に関わる工程によって定量するため、吸光度変化量をリゾホスホリパーゼＤ活性の指標として用いることが一般的である。
【００５４】
（試料）
本発明における「試料」とは、リゾホスホリパーゼＤの存在の有無、あるいはその活性の程度を測定する対象すべてを意味し、リゾホスホリパーゼＤ活性が存在する可能性がある各種生体試料、および当該測定のための標準試料や管理試料もこれに含まれる。具体的には、全血、血清、血漿、尿、糞便、唾液、腹水、涙液、精液、精漿、髄液などの体液成分；動物細胞、植物細胞、細菌などの微生物の細胞培養上清および細胞抽出液；動物の組織培養液などが挙げられる。例えば、組換えオートタキシン溶解液も含まれる。
【００５５】
（ジスルフィド化合物）
上記のリゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法に用いられるジスルフィド化合物は、チオールとのジスルフィド交換が可能であり、そしてジスルフィド結合の切断により遊離されるチオール化合物が、特徴的な吸収極大を有する化合物であれば、特に限定されない。本発明においては、式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物：
【００５６】
【化８】
【００５７】
（式中、Ｒ３は、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）が好適に用いられる。この場合、リゾホスホリパーゼＤの作用によって遊離したチオール化合物Ｘ−ＳＨが、ジスルフィド化合物（ＩＩＩ）と選択的に反応し、式（ＩＶ）で表される新たなチオール化合物：
【００５８】
【化９】
【００５９】
（式中、Ｒ３は、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を定量的に生成する。そして、生成した新たなチオール化合物（ＩＶ）に由来する吸光度を測定することによって、試料中に含まれるリゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。
【００６０】
上記式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物としては、例えば、５，５’−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ、エルマン試薬とも呼ばれる）が挙げられる。この場合、ジスルフィド結合が切断されて遊離するチオール化合物は、２−ニトロ−５−チオ安息香酸であり、この化合物はキノイド構造をとり、４１２ｎｍに強い吸収を有する。そのため、この波長の近傍の吸光度を測定することによって、リゾホスホリパーゼＤ活性を測定することができる。他のジスルフィド化合物として、２，２’−ジチオジピリジン、４，４’−ジチオジピリジン、６，６’−ジチオジニコチン酸などが挙げられる。
【００６１】
（反応温度）
上記の測定方法において、新規硫黄置換化合物、ジスルフィド化合物などの各試薬が安定であり、かつリゾホスホリパーゼＤ活性を維持し得る温度であれば、反応温度は特に限定されない。また、反応温度は、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と、比色に関わる工程で異なっていてもよい。簡便性や自動化測定機器の利用を考慮すれば、全工程を通して一定であることが好ましく、通常２５〜４０℃、好ましくは３５〜４０℃である。
【００６２】
（反応時間）
上記の測定方法において、反応時間は、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性によって、検出するに十分なチオール化合物が最終的に生成される時間であれば特に限定されない。通常、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に要する反応時間は、約５分〜３時間、好ましくは約５分〜３０分間である。
【００６３】
（反応ｐＨ）
上記の測定方法において、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程、および比色に関わる工程を実施し得るｐＨであれば反応ｐＨは特に限定されない。リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程と比色に関わる工程とが別工程で行われる場合には、各工程に適した、異なったｐＨで実施してもよい。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性に関わる工程では弱アルカリ性（例えば、ｐＨ７．５〜９．５）、および比色に関わる工程では中性付近（例えば、ｐＨ６〜８）で実施してもよい。
【００６４】
（測定機器）
本発明の方法によれば、リゾホスホリパーゼＤ活性は、用手法によって測定することができる。より簡便に、かつ再現性よく測定するためには、自動分析装置を用いることもできる。ここで使用される自動分析装置は、測定に関わるすべての工程が自動化されているものでもよく、一部の工程のみが自動化されているものであってもよい。望ましくは、臨床検査で使用される生化学用自動分析装置が用いられる。具体的には、株式会社日立ハイテクノロジーズ製Ｈ７０７０型、Ｈ７１７０型、Ｈ７１８０型自動分析装置、東芝メディカルシステムズ株式会社製ＴＢＡ−２００ＦＲ、ＴＢＡ−８０ＦＲ ＮＥＯ２などが挙げられる。
【００６５】
（疾患の診断に用いる指標）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の診断またはリスクの評価に利用できる。このような疾患としては、例えば、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患が挙げられる。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性によって合成されるＬＰＡは癌細胞浸潤促進因子として知られている。そのため、血中リゾホスホリパーゼＤ活性が高いという測定結果が得られたヒトにおいては、何らかの癌に罹患している可能性があることが予測される。したがって、本発明の方法により測定されるリゾホスホリパーゼＤの活性は、これらの疾患の指標となり得る。
【００６６】
（治療の効果判定）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の治療効果判定に利用できる。例えば、リゾホスホリパーゼＤ活性が高い患者に対して、リゾホスホリパーゼＤ活性阻害を作用機序とする治療薬を投与し、経時的に患者の血中リゾホスホリパーゼＤ活性を測定する。その結果、治療薬の投与によってリゾホスホリパーゼＤ活性が低下していれば改善に向かっており、一方、リゾホスホリパーゼＤ活性が上昇もしくは変化していなければ治療が不十分であると評価することが可能である。したがって、本発明の方法により測定されるリゾホスホリパーゼＤの活性は、これらの疾患治療効果の判定のための指標となり得る。
【００６７】
（スクリーニング）
本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響あるいは効果を調べるためのスクリーニングにも利用できる。例えば、このスクリーニング方法によって見いだされたリゾホスホリパーゼＤ活性を阻害あるいは減少させる物質は、ＬＰＡ、環状ホスファチジン酸、スフィンゴシン−１−リン酸、コリンなどの産生を抑制することができ、これらの過剰な産生に起因すると考えられる種々の疾患に好適な予防薬あるいは治療薬として有用であると考えられる。また、このスクリーニング方法によって見いだされたリゾホスホリパーゼＤ活性を惹起あるいは増加させる物質は、ＬＰＡ、環状ホスファチジン酸、スフィンゴシン−１−リン酸、コリンなどの産生を高めることができ、これらの不足に起因すると考えられる種々の疾患に好適な予防薬あるいは治療薬として有用であると考えられる。
【００６８】
（リゾホスホリパーゼＤ活性の測定用キット）
本発明においては、上記のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法に利用可能なリゾホスホリパーゼＤ活性の測定用キットも提供される。このキットは、上記の新規硫黄置換化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を含む。さらに、ジスルフィド化合物、好ましくは式（ＩＩＩ）で表されるジスルフィド化合物を含むことが好ましい。
【００６９】
このキットは、測定方法の各工程に応じて、一試薬のみであってもよく、あるいは二試薬以上の試薬から構成されてもよい。例えば、試料中のリゾホスホリパーゼＤによる硫黄置換化合物の切断反応工程、切断により生じたチオール化合物とジスルフィド化合物とのジスルフィド交換工程、および新たに合成されたチオール化合物に由来した比色工程を単一工程内で行う場合には、一試薬系であり得る。あるいは、リゾホスホリパーゼＤによる硫黄置換化合物の切断反応工程のみを最初に行い、その後、残りの比色に関わる工程を一工程内で行う場合には、二試薬系であり得る。
【実施例】
【００７０】
以下、実施例によって、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００７１】
なお、実施例において、無水条件を必要とする反応、および酸素または水分に敏感な試薬の取り扱いは、不活性ガス（アルゴンまたは窒素）雰囲気下で行った。ジクロロメタンおよびメタノールＭｅＯＨは、市販のものを必要に応じて蒸留して使用した。その他の試薬および溶媒は、市販の試薬および無水溶媒（和光純薬工業株式会社）を使用した。
【００７２】
測定機器は、以下のものを用いた：
ＮＭＲ：日本電子 ４００ＭＨｚ ＮＭＲ、
ＩＲ：日本分光 ＦＴ／ＩＲ−５３００、
旋光度：日本分光 ＤＩＰ−３７０、および
シリカゲルクロマトグラフィー：富士シリシア ＢＷ−２００。
【００７３】
（実施例１：化合物Ｋ０１の合成）
【００７４】
【化１０】
【００７５】
（実施例１−１：化合物２の合成）
【００７６】
【化１１】
【００７７】
Ｓ−（＋）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（化合物１：５ｇ，３７．８３３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ：７０ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．８１６ｇ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した後、ベンジルブロミド（５．４０ｍｌ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加えて室温に昇温し、２０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え中和した後、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２（７．７７９ｇ，収率９３％）を得た。
【００７８】
化合物２の物性データ：［α］Ｄ２４．０ ＋１９．７（ｃ＝１．１１，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３７（ｍ，５Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．１，１１０．０，７４．９，７３．７，７１．２，６７．０，２６．９，２５．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２４５．１１５４，実測値：２４５．１１５６。
【００７９】
（実施例１−２：化合物３の合成）
【００８０】
【化１２】
【００８１】
化合物２（２３．５４１ｇ，１０５．９０７ｍｍｏｌ）のメタノール（２００ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２．０１４ｇ，１０．５９１ｍｍｏｌ）を加えて１２時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えて中和した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物３（１４．４８１ｇ，収率７５％）を得た。
【００８２】
化合物３の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −０．６（ｃ＝１．１４，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８７０，１６３９，１４５４，１２０９，６９８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：７．２３−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｔｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝６．０，９．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．６，１２８．５，１２７．９，１２７．８，７３．６，７１．７，７０．６，６４．０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１０Ｈ１４Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２０５．０８４１，実測値：２０５．０８４９。
【００８３】
（実施例１−３：化合物４の合成）
【００８４】
【化１３】
【００８５】
化合物３（１４．４８１ｇ，７９．４７０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２００ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（１４．３７３ｇ，９５．３６４ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（１０．８２０ｇ，１５８．９４０ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に水を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜９％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物４（２１．３４８ｇ，収率９１％）を得た。
【００８６】
化合物４の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋１．２（ｃ＝１．０６，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５２，２９３０，１４６４，１２５５，１０９７，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３７（ｍ，５Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），３．８２−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，９．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４７（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），０．８９（ｓ，１Ｈ），０．０６（ｓ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．０，１２８．３，１２７．７，１２７．６，７３．４，７０．９，７０．７，６４．０，２５．８，１８．３，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１６Ｈ２８Ｏ３Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３１９．１７０５，実測値：３１９．１７１６。
【００８７】
（実施例１−４：化合物５の合成）
【００８８】
【化１４】
【００８９】
化合物４（７．９１３ｇ，２６．６９０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍｌ）溶液に、０℃でミリスチン酸（６．９５０ｇ，３４．６９７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．６３０ｇ，１３．３４５ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（６．１４０ｇ，３２．０２８ｍｍｏｌ）を順次加えて１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物５（１０．６６１ｇ，収率７９％）を得た。
【００９０】
化合物５の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −４．０（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９２６，１７３９，１２５３，１１１１，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．５８−１．６４（ｍ，２Ｈ），１．２４−１．３０（ｍ，２０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．５，６１．６，３４．５，３１．９，２９．７，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４０，−５．４３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３０Ｈ５４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２９．３６８９，実測値：５２９．３６８３。
【００９１】
（実施例１−５：化合物６の合成）
【００９２】
【化１５】
【００９３】
化合物５（１０．６６１，２１．０３５ｍｍｏｌ）に、活性化パラジウム炭素（１．６００ｇ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ：４２ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物６（２．３２２ｇ，収率２７％）を得た。
【００９４】
化合物６の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −９．７（ｃ＝１．０１，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５２，２９２８，１７３９，１４６６，１２５３，１１１１，８３９ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８０−３．８３（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２３Ｈ４８Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４３９．３２２０，実測値：４３９．３２１２。
【００９５】
（実施例１−６：化合物８の合成）
【００９６】
【化１６】
【００９７】
メチルジクロロホスファイト（０．６５ｍｌ，６．６８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（２．９２ｍｌ）および化合物６（２．３２２ｇ，５．５７２ｍｍｏｌ）を順次加えて１時間撹拌後、同温でメタノール（０．４５ｍｌ，１１．１４４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【００９８】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．３ｇ）およびジクロロメタン（２０ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（２．２１７ｇ，６．６８６ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン（１０ｍｌ）溶液を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（１．１８４ｇ，８．３５８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．８９ｍｌ，２２．２８８ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１９ｍｌ，１．６７２ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチルからクロロホルム中％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物８（１．８１１ｇ，収率５４％）を得た。
【００９９】
化合物８の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −４．０（ｃ＝０．９３，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４６４，２９２８，１７４１，１４６２，１２５７，１０１８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０３（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−４．３３（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．５７（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．４，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．１，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ５９８．３７２６，実測値：５９８．３７００。
【０１００】
（実施例１−７：化合物９の合成）
【０１０１】
【化１７】
【０１０２】
化合物８（１．８１１ｇ，３．０２９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（２．０９３ｇ，１５．１４５ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（１．８９ｍｌ，３０．２８９ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）のメタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）の水および３８％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物９（１．９６４ｇ，収率７２％）を得た。
【０１０３】
化合物９の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −６．９（ｃ＝０．９８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３９８，２９２６，１７３９，１４６７，１２５１，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１６（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２３−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３１（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），７３．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６６．９，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝１．９Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），５３．８，３５．２，３３．０，３０．７，３０．７，３０．５，３０．４，３０．４，３０．１，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６３Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６１２．３８８３，実測値：６１２．３８８３。
【０１０４】
（実施例１−８：化合物１０の合成）
【０１０５】
【化１８】
【０１０６】
化合物９（１．２７４ｇ，１．９６５ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（３ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、化合物１０（１．０１５ｇ，収率８７％）を得た。
【０１０７】
化合物１０の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋１．７（ｃ＝１．０８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３８１，２９２６，１７２８，１６４９，１２４９，１０７６，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．１０（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０６−４．１２（ｍ，１Ｈ），３．９６−４．０３（ｍ，１Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６３−３．６７（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．１３（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．８，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．６，６５．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６３．１，５３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），５３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．２，３３．０，３０．７，３０．５，３０．４，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６２０．３５４６，実測値：６２０．３５２７。
【０１０８】
（実施例１−９：化合物Ｋ０１（２−Ｏ−テトラデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０１０９】
【化１９】
【０１１０】
化合物１０（０．４０５ｇ，０．６７８ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（６．７ｍｌ）に室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０６４ｇ，０．３３９ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）のメタノール）で精製し、Ｋ０１（０．２８４ｇ，収率８７％）を得た。
【０１１１】
化合物Ｋ０１の物性データ：［α］Ｄ２４．５＋６．８（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｓ，９Ｈ），３．００−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．３，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．１，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２２Ｈ４６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０６．２６８１，実測値：５０６．２６９０。
【０１１２】
（実施例２：化合物Ｋ０２合成）
【０１１３】
【化２０】
【０１１４】
（実施例２−１：化合物１８の合成）
【０１１５】
【化２１】
【０１１６】
Ｒ−（−）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（化合物１７：５ｇ，３７．８３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１１３ｍｌ）溶液に、０℃で水素化ナトリウム（１．８１６ｇ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した後、ベンジルブロミド（５．４０ｍｌ，４５．４０ｍｍｏｌ）を加えて室温に昇温し、３０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え中和した後、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１８（７．６３３ｇ，収率９１％）を得た。
【０１１７】
化合物１８の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −２１．７（ｃ＝１．０７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９８８，２８５６，１３８１，１０９７，７３８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５９（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５５（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄ，Ｊ＝５．７，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．８Ｈｚ，１Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．９，１２８．４，１２７．７，１０９．４，７４．７，７３．５，７１．１，６６．９，２６．８，２５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１３Ｈ１８Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２４５．１１５４，実測値：２４５．１１５２。
【０１１８】
（実施例２−２：化合物１９の合成）
【０１１９】
【化２２】
【０１２０】
化合物１８（５．２５７ｇ，２３．６５０ｍｍｏｌ）のメタノール（４６ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．９００ｇ，４．７３０ｍｍｏｌ）を加えて１５時間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え中和した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１６％（ｖ／ｖ）〜１％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１９（２．８１１ｇ，収率６５％）を得た。
【０１２１】
化合物１９の物性データ：［α］Ｄ２（ｃ＝，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８６８，１６５５，１４５４，１２０７，６９８ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：７．２４−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５４（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｔｔ，Ｊ＝５．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５９（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝４．８，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，９．８Ｈｚ，１Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３７．６，１２８．４，１２７．９，１２７．７，７３．５，７１．７，７０．６，６４．０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１０Ｈ１４Ｏ３Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ２０５．０８４１，実測値：２０５．０８３９。
【０１２２】
（実施例２−３：化合物２０の合成）
【０１２３】
【化２３】
【０１２４】
化合物１９（２．８１１ｇ，１５．４２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４５ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（２．１００ｇ，３０．８５２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルクロロシラン（２．７９０ｇ，１８．５１１ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に水を加えた後、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜９％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２０（４．３０４ｇ，収率９４％）を得た。
【０１２５】
化合物２０の物性データ：［α］Ｄ２４．５ −１．７（ｃ＝１．４６，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５５（ｓ，２Ｈ），３．８２−３．８８（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄｄ，Ｊ＝５．０，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．０６（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１３８．０，１２８．４，１２７．７，１２７．６，７３．４，７０．９，７０．７，６４．０，２５．８，１８．３，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１６Ｈ２８Ｏ３Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３１９．１７０５，実測値：３１９．１６９５。
【０１２６】
（実施例２−４：化合物２１の合成）
【０１２７】
【化２４】
【０１２８】
化合物２０（２３．７８８ｇ，８０．２３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２４０ｍｌ）溶液に、０℃でラウリン酸（２０．８９４ｇ，１０４．３０５ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（４．９０１ｇ，４０．１１８ｍｍｏｌ）、およびジシクロへキシルカルボジイミド（１９．８６６ｇ，９６．２８２ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２１（３４．５７８ｇ，収率９０％）を得た。
【０１２９】
化合物２１の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋３．７（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５４，２９２８，１７３９，１４６４，１２５３，１１１１，８４１ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２７−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，１６Ｈ），０．８６−０．９０（ｍ，１２Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．４，６１．６，３４．５，３１．９，２９．６，２９．５，２９．３，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ５０Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０１．３３７６，実測値：５０１．３３６３。
【０１３０】
（実施例２−５：化合物２２の合成）
【０１３１】
【化２５】
【０１３２】
化合物２１（１０．０００ｇ，２０．８８６ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（２．０００ｇ）およびＴＨＦ（４０ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で２４時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２２（６．９１５ｇ，収率８５％）を得た。
【０１３３】
化合物２２の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋８．８（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４４７，２９２８，１７４０，１４５８，１２５５，１１０９，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−３．８４（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｓ，１６Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．６，２９．５，２９．３，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２１Ｈ４４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４１１．２９０７，実測値：４１１．２８９７。
【０１３４】
（実施例２−６：化合物２４の合成）
【０１３５】
【化２６】
【０１３６】
メチルジクロロホスファイト（０．４０ｍｌ，４．１０６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１７ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｍｌ，１０．２６６ｍｍｏｌ）および化合物２２（１．３３０ｇ，３．４２２ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．２８ｍｌ，６．８４４ｍｍｏｌ）を加えて３５分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１３７】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．２６６ｇ）およびジクロロメタン（１２ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．３６２ｇ，４．１０６ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．７２７ｇ，５．１３３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．７９ｍｌ，１０．２６６ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１１ｍｌ，１．０２７ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２４（０．８４４ｇ，収率４３％）を得た。
【０１３８】
化合物２４の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋４．８（ｃ＝１．１２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４４７，２９２８，１７３４，１４５８，１２５２，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．３４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．０１（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．４，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．５，７３．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．２，３５．２，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２８．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９２．３２３３，実測値：５９２．３２０７。
【０１３９】
（実施例２−７：化合物２５の合成）
【０１４０】
【化２７】
【０１４１】
化合物２４（０．７９８ｇ，１．４００ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７．０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．９６７ｇ，７．０００ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．８７ｍｌ，１４．００３ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２５（０．７５３ｇ，収率８７％）を得た。
【０１４２】
化合物２５の物性データ：［α］Ｄ２３．０ ＋５．７（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３９３，２９２８，１７３４，１４５８，１２５２，１１１５，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．３１（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１，Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９２（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６６．９，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．８Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５３．７，３５．２，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．５，３０．４，３０．１，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２７Ｈ５９Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ５８４．３５７０，実測値：５８４．３５４２。
【０１４３】
（実施例２−８：化合物２６の合成）
【０１４４】
【化２８】
【０１４５】
化合物２５（０．７１９ｇ，１．０１０ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１．５ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物２６（０．５６４ｇ，収率９８％）を得た。
【０１４６】
化合物２６の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −２．７（ｃ＝１．０９，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９９，２９２８，１７３４，１４７３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０８（ｔｔ，Ｊ＝４．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，８．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．９，６５．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．３，３３．１，３０．７，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１９．１，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９２．３２３３，実測値：５９２．３２２０。
【０１４７】
（実施例２−９：化合物Ｋ０２（２−Ｏ−ドデカノイル−ｓｎ−グリセロ−１−ホスホリオコリン）の合成）
【０１４８】
【化２９】
【０１４９】
化合物２６（０．４５９ｇ，０．８０５ｍｍｏｌ）のメタノール（８．１ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０７７ｇ，０．４０３ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０２（０．２６８ｇ，収率７３％）を得た。
【０１５０】
化合物Ｋ０２の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −６．８（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），３．００−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，１６Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．９，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．７，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６１．３，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．１，３３．０，３０．７，３０．６，３０．４，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２０Ｈ４２Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４７８．２３６８，実測値：４７８．２３５９。
【０１５１】
（実施例３：化合物Ｋ０３の合成）
【０１５２】
【化３０】
【０１５３】
（実施例３−１：化合物２７の合成）
【０１５４】
【化３１】
【０１５５】
化合物４（１０．０００ｇ，３３．７２９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６５ｍｌ）溶液に、０℃でアラキジン酸（８．７８４ｇ，４３．８４８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（２．０６０ｇ，１６．８６５ｍｍｏｌ）、およびジシクロへキシルカルボジイミド（８．３５１ｇ，４０．４７５ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、濾液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をヘキサンに溶かし、セライトろ過後、再び減圧濃縮を行った。残査をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２７（１４．９４７ｇ，収率７５％）を得た。
【０１５６】
化合物２７の物性データ：［α］Ｄ２３．０ −４．９（ｃ＝１．３０，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９２８，１７３９，１２５３，１１１１，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），５．０５（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５６（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，３２Ｈ），０．８６−０．８８（ｍ，１２Ｈ），０．０４（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．３，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．２，７２．９，６８．４，６１．６，３４．５，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４０，−５．４３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３６Ｈ６６Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６１３．４６２８，実測値６１３．４６０８。
【０１５７】
（実施例３−２：化合物２８の合成）
【０１５８】
【化３２】
【０１５９】
化合物２７（４．７９０，８．１０５ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（１．４３７ｇ）およびＴＨＦ（１６ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物２８（２．６６１ｇ，収率６６％）を得た。
【０１６０】
化合物２８の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −７．２（ｃ＝１．２５，ＣＨＣｌ３）；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．３，７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，３２Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，７４．３，６２．８，６２．５，３４．４，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２５．８，２５．０，２２．７，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６０Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２３．４１５９，実測値：５２３．４１５５。
【０１６１】
（実施例３−３：化合物３０の合成）
【０１６２】
【化３３】
【０１６３】
メチルジクロロホスファイト（０．４６ｍｌ，４．７９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（２．０９ｍｌ）および化合物２８（２．０００ｇ，３．９９３ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でＭｅＯＨ（０．３２ｍｌ，７．９８６ｍｍｏｌ）を加えて３０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１６４】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．４ｇ）およびジクロロメタン（１５ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．５８９ｇ，４．７９２ｍｍｏｌ）および先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、２０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（１．１３１ｇ，７．９８６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（３．４９ｍｌ，１９．９６５ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１３ｍｌ，１．１９８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３０（１．７２１ｇ，収率６３％）を得た。
【０１６５】
化合物３０の物性データ：［α］Ｄ２３．５ −４．１（ｃ＝０．９８，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２９２４，１７３４，１４６７，１２４８，１０７６，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．３４（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７８（ｍ，２Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．３，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ），６６．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．２，３３．１，３０．８，３０．６，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２６．３，２６．０，２３．８，１９．１，１４．６，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３４Ｈ７２Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ６８２．４６６５，実測値：６８２．４６７５。
【０１６６】
（実施例３−４：化合物３１の合成）
【０１６７】
【化３４】
【０１６８】
化合物３０（１．８１１ｇ，１．２６１ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．８７１ｇ，６．３０２ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．７９ｍｌ，５．５６６ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３１（０．７１５ｇ，収率７８％）を得た。
【０１６９】
化合物３１の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９−５．１５（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６５−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．６，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６７．０，６２．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），５５．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ），５３．７，３５．２，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．３，２６．０，２４．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．８，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３５Ｈ７５Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６９６．４８２２，実測値：６９６．４８０２。
【０１７０】
（実施例３−５：化合物３２の合成）
【０１７１】
【化３５】
【０１７２】
化合物３１（０．７１５ｇ，１．０２６ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍｌ）およびトルエン（１ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１．５ｍｌ）を加え、室温に昇温して３時間３０分間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物３２（０．５８８ｇ，収率８４％）を得た。
【０１７３】
化合物３２の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０９（ｔｔ，Ｊ＝４．６，５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．６，７．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝０．９，７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，３２Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．７，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．８，６５．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．３，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．５，３０．３，２６．４，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．８，１９．１，１４．６，−５．１。
【０１７４】
（実施例３−６：化合物Ｋ０３（２−Ｏ−エイコサノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０１７５】
【化３６】
【０１７６】
化合物３２（０．１００ｇ，０．１４７ｍｍｏｌ）のメタノール（２．０ｍｌ）溶液に室温でＤｏｗｅｘ ５０ＷをｐＨ＝４になるまで加え、２分間撹拌した。反応混合物をろ過してＤｏｗｅｘを除去し、ろ液をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０３（０．０２５ｇ，収率３０％）を得た。
【０１７７】
化合物Ｋ０３の物性データ：１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．０，６．９，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），３．０１−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２８（ｓ，３２Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，７４．５（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．４，５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），５３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），３５．２，３３．１，３０．８，３０．７，３０．６，３０．５，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ５８Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９０．３６２０，実測値：５９０．３６１８。
【０１７８】
（実施例４：化合物Ｋ０４の合成）
【０１７９】
【化３７】
【０１８０】
（実施例４−１：化合物１１の合成）
【０１８１】
【化３８】
【０１８２】
化合物３（４．３４８ｇ，２３．８６１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６９ｍｌ）溶液に、０℃でミリスチン酸（５．９９４ｇ，２６．２４７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．４５８ｇ，１１．９３１ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（５．０３２ｇ，２６．２４７ｍｍｏｌ）を加えて３時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１１（４．８５７ｇ，収率５２％）を得た。
【０１８３】
化合物１１の物性データ：［α］Ｄ２５．５ ＋１．８（ｃ＝０．９４，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５４，２９２４，１７３８，１４５６，１１１３，７３６ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２８−７．３８（ｍ，５Ｈ），４．５６（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｄｄ，Ｊ＝４．６，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝６．２，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｍ，１Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝４．３，９．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４９（ｄｄ，Ｊ＝６．２，９．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｂｒ ｓ，１Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．９，１３７．６，１２８．５，１２７．９，１２７．７，７３．５，７０．９，６８．９，６５．３，３４．２，３１．９，２９．７，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．１，２４．９，２２．７，１４．１；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２４Ｈ４０Ｏ４Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４１５．２８２４，実測値：４１５．２８０８。
【０１８４】
（実施例４−２：化合物１２の合成）
【０１８５】
【化３９】
【０１８６】
化合物１１（４．５８０ｇ，１１．６６７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液に、室温でイミダゾール（２．３８３ｇ，３５．００１ｍｍｏｌ）およびトリエチルシリルクロライド（２．３４ｍｌ，１４．０００ｍｍｏｌ）を順次加えて１０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１２（５．８５６ｇ，収率９９％）を得た。
【０１８７】
化合物１２の物性データ：［α］Ｄ２５．５ ＋９．８（ｃ＝１．３７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９２６，１７４１，１４５８，１１１４，１００６，７４０ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：７．２６−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），４．１９（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．００−４．０６（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６０（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６１（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．７，１３８．１，１２８．３，１２７．６，７３．４，７１．７，６９．５，６６．１，３４．３，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．２，２４．９，２２．７，１４．１，６．７，４．８；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３０Ｈ５４Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５２９．３６８９，実測値：５２９．３６７４。
【０１８８】
（実施例４−３：化合物１３の合成）
【０１８９】
【化４０】
【０１９０】
化合物１２（３．９２９ｇ，７．７５２ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（０．７８６ｇ）およびＴＨＦ（２０ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で１３時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物１３（２．６２２ｇ，収率８１％）を得た。
【０１９１】
化合物１３の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −６．１（ｃ＝１．２７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４７２，２９２６，１７４１，１４６０，１１１６，１００５，７４４ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．１１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９３（ｔｔ，Ｊ＝４．６，５．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝４．１，５．３，９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝４．８，７．３，１１．７Ｈｚ，１Ｈ），２．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０１−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），１．２６（ｓ，２０Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６４（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．８，７０．４，６４．８，６３．９，３４．２，３１．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２９．３，２９．２，２４．９，２２．７，１４．１，６．７，４．８；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２３Ｈ４８Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４３９．３２２０，実測値：４３９．３２０８。
【０１９２】
（実施例４−４：化合物１５の合成）
【０１９３】
【化４１】
【０１９４】
メチルジクロロホスファイト（０．３５ｍｌ，３．５９１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（１．５７ｍｌ）および化合物１３（１．２４７ｇ，２．９９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．２４ｍｌ，５．９８４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０１９５】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．２４ｇ）およびジクロロメタン（１０ｍｌ）の入った反応容器に、０℃で四臭化炭素（１．１９１ｇ，３．５９０ｍｍｏｌ）、先ほど調製した化合物のジクロロメタン溶液（５ｍｌ）を順次加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．８４８ｇ，５．９８４ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（２．６１ｍｌ，１４．９６０ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．１０ｍｌ，０．８９８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物１５（１．１２６ｇ，収率６３％）を得た。
【０１９６】
化合物１５の物性データ：［α］Ｄ２４．５ ＋６．９（ｃ＝１．２２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９２６，２７７３，１７４１，１４６０，１２６３，１１４５，１０２２，７４６ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．０２−４．２０（ｍ，５Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），２．９８（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．３５（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６８（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２８Ｈ６０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５９８．３７２６，実測値：５９８．３７１８。
【０１９７】
（実施例４−５：化合物１６の合成）
【０１９８】
【化４２】
【０１９９】
化合物１５（０．５７５ｇ，０．９６２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．６６５ｇ，４．８１２ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（０．６０ｍｌ，９．６１７ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物１６（０．５０３ｇ，収率７１％）を得た。
【０２００】
化合物１６の物性データ：ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３３８９，２９２４，１７３６，１４６６，１２３８，１０７４，７４０ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：４．０６−４．２１（ｍ，５Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．８７（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２／３Ｈ），３．６７（ｍ，２Ｈ），３．２６−３．３４（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，９Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），１．００（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．６７（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２９Ｈ６３Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６１２．３８８３，実測値：６１２．３８９１。
【０２０１】
（実施例４−６：化合物Ｋ０４（１−Ｏ−テトラデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン）の合成）
【０２０２】
【化４３】
【０２０３】
化合物１６（０．５０３ｇ，０．６８０ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（２ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０１３ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を加え、１０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０４（０．２５０ｇ，収率７６％）を得た。
【０２０４】
化合物Ｋ０４の物性データ：ＩＲ（ＫＢｒディスク）：３４１０，２９２４，１７３６，１４７７，１２２４，１０７２ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：４．１８（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８７−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｓ，９Ｈ），３．０４（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｓ，２０Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．３，６９．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．７−６７．８（ｍ，２Ｃ），６６．３，５３．６，５３．６，５３．６，３４．９，３３．１，３０．８，３０．６，３０．５，３０．４，３０．２，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．７，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２２Ｈ４６Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５０６．２６８１，実測値：５０６．２６５７。
【０２０５】
（実施例５：化合物Ｋ０６の合成）
【０２０６】
【化４４】
【０２０７】
（実施例５−１：化合物３９の合成）
【０２０８】
【化４５】
【０２０９】
化合物４（６．５７８ｇ，２２．１８７ｍｍｏｌ）に活性化パラジウム炭素（０．９８７ｇ）およびＴＨＦ（４５ｍｌ）を順次加え、水素ガス雰囲気下室温で７７時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、酢酸エチルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３％（ｖ／ｖ）〜５０％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物３９（２．５８２ｇ，収率５６％）を得た。
【０２１０】
化合物３９の物性データ：ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３８７，２８５８，１４６４，１２５７，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：３．５９−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．６３（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．５３（ｍ，１Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：７３．９，６５．５，６４．４，２６．４，−５．３。
【０２１１】
（実施例５−２：化合物４０の合成）
【０２１２】
【化４６】
【０２１３】
化合物３９（２．４５０ｇ，１１．８７３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２５ｍｌ）溶液に、０℃でイミダゾール（１．６１７ｇ，２３．７４６ｍｍｏｌ）およびトリエチルシリルクロライド（２．１９ｍｌ，１３．０６０ｍｍｏｌ）を順次加えて、室温で２０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残査をシリカゲルクロマトグラフィー（３％（ｖ／ｖ）トリエチルアミンを含むヘキサン中０％（ｖ／ｖ）〜２％（ｖ／ｖ）の酢酸エチル）で精製し、化合物４０（２．７１４ｇ，収率７１％）を得た。
【０２１４】
化合物４０の物性データ：［α］Ｄ２４．０ −１．９（ｃ＝１．１０，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９５，２９５５，１４６４，１０９５，８３７ ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：３．５９−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．６９（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，１Ｈ），２．４９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），０．９６（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．６１（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：７１．９，６３．６，６３．３，２５．９，６．７，４．４，−５．４；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ１５Ｈ３６Ｏ３Ｓｉ２Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ３４３．２１０１，実測値：３４３．２１０８。
【０２１５】
（実施例５−３：化合物４１の合成）
【０２１６】
【化４７】
【０２１７】
化合物４０（０．７８１ｇ，２．４３６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（７．３ｍｌ）溶液に、０℃でリノール酸（０．９７ｍｌ，３．１６７ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．１４９ｇ，１．２１８ｍｍｏｌ）、および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（０．５６０ｇ，２．９２３ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、室温に昇温して２時間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％（ｖ／ｖ）〜３％（ｖ／ｖ）酢酸エチル）で精製し、化合物４１（１．２６３ｇ，収率８９％）を得た。
【０２１８】
化合物４１の物性データ：［α］Ｄ２２．５ −０．４（ｃ＝１．０５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：２９５５，１７４０，１４６４，１２５２，１１０３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：５．２９−５．４０（ｍ，４Ｈ），４．８８（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｄｄ，Ｊ＝５．０，１０．８Ｈｚ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２５−１．３７（ｍ，１４Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，９Ｈ），０．８８−０．８９（ｍ，１２Ｈ），０．５９（ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，６Ｈ），０．０５（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．６，１３０．５，１３０．３，１２８．３，１２８．２，７５．１，６１．６，６１．４，３４．８，３１．９，２９．９，２９．７，２９．６，２９．５，２９．４，２７．５，２６．１，２５．９，２５．３，２２．９，１８．６，１４．４，７．０，４．７，−５．０９，−５．１３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３３Ｈ６６Ｏ４Ｓｉ２Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６０５．４３９７，実測値：６０５．４３９４。
【０２１９】
（実施例５−４：化合物４２の合成）
【０２２０】
【化４８】
【０２２１】
化合物４１（１．２６３，２．１６６ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）およびクロロホルム（１ｍｌ）溶液に、室温でＰＰＴＳ（０．０５４ｇ，０．２１７ｍｍｏｌ）を加え、同温で１０分間撹拌した。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２％（ｖ／ｖ）〜１６％（ｖ／ｖ）酢酸エチル）で精製し、化合物４２（０．８１０ｇ，収率８０％）を得た。
【０２２２】
化合物４２の物性データ：［α］Ｄ２５．５ −９．２（ｃ＝１．１５，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４５６，２９５５，１７４０，１４６４，１２５３，１１０３，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ），δ：５．３０−５．４２（ｍ，４Ｈ），４．８９（ｔｔ，Ｊ＝４．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８０−３．８２（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｄｔ，Ｊ＝０．９，７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．２１（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．０５（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｍ，２Ｈ），１．２６−１．３９（ｍ，１４Ｈ），０．８９（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｍ，３Ｈ），０．０７（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ），δ：１７３．６，１３０．２，１３０．０，１２８．０，１２７．９，７４．３，６２．９，６２．５，３４．４，３１．５，２９．６，２９．４，２９．２，２９．１，２７．２，２５．８，２５．６，２５．０，２２．６，１８．２，１４．１，−５．４６，−５．５０；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２７Ｈ５２Ｏ４Ｓｉ１Ｎａ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ４９１．３５３３，実測値：４９１．３５１３。
【０２２３】
（実施例５−５：化合物４４の合成）
【０２２４】
【化４９】
【０２２５】
メチルジクロロホスファイト（０．２０ｍｌ，２．０７３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８．５ｍｌ）溶液に、−７８℃でジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｍｌ）および化合物４２（０．８１０ｇ，１．７２８ｍｍｏｌ）を順次加え、１時間撹拌後、同温でメタノール（０．１４ｍｌ，５．１８４ｍｍｏｌ）を加えて４０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジエチルエーテルで数回洗浄後、減圧濃縮を行った。濃縮後に析出する白色沈殿物を自然ろ過で除去し、沈殿物をヘキサンで数回洗浄後、再び減圧濃縮を行った。得られた化合物を精製することなく次の反応に用いた。
【０２２６】
モレキュラーシーブＭＳ４Å（０．１６０ｇ）存在下、四臭化炭素（０．６８８ｇ，２．０７４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液に、先ほど調製した化合物のジクロロメタン（５．０ｍｌ）溶液を加え、３０分間撹拌した。次に、同温でジメチルアミノエタンチオール塩酸塩（０．３６７ｇ，２．５９２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．０６ｍｌ，６．０４８ｍｍｏｌ）、および２，６−ルチジン（０．０６ｍｌ，０．５１８ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、ジクロロメタンで数回洗浄後、０℃で減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３３％（ｖ／ｖ）酢酸エチルからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４４（０．７５３ｇ，収率６７％）を得た。
【０２２７】
化合物４４の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −４．５（ｃ＝１．２７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３４７０，２８５６，１７４３，１４６４，１２５７，１１１８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．２８−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０７（ｄｄｔ，Ｊ＝３．７，５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．３３（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，３／２Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，３／２Ｈ），３．７８（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ ２Ｈ），２．９３−３．００（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），２．２７（ｓ，６Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｍ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．４，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝７．７Ｈｚ，１／２Ｃ），７３．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝６．７Ｈｚ，１／２Ｃ），６７．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６２．２（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝４．８Ｈｚ），６０．４（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），５４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），４５．３，３５．１，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，２９．０（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２８．２，２６．６，２６．３，２６．０，２３．７，１９．１，１４．５，−５．３；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３２Ｈ６４Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｈ）＋ ６７２．３８５９，実測値：６７２．３８３２。
【０２２８】
（実施例５−６：化合物４５の合成）
【０２２９】
【化５０】
【０２３０】
化合物４４（０．７５３ｇ，１．１５８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１２ｍｌ）溶液に、室温で炭酸カリウム（０．８００ｇ，５．７９０ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（０．７２ｍｌ，１１．５８０ｍｍｏｌ）を順次加え、１０分間撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて中和し、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行った。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中２％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中２％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４５（０．５２９ｇ，収率６５％）を得た。
【０２３１】
化合物４５の物性データ：［α］Ｄ２５．０ −３．３（ｃ＝０．８７，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３７９，２９２８，１７４０，１４６６，１２５２，１０２０，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．３２−５．３９（ｍ，２Ｈ），５．０９−５．１６（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．２９（ｍ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，３／２Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，３／２Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６４−３．６８（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．３２（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｓ，９Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．６，６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．８９（ｍ，３Ｈ），０．０９（ｓ，６Ｈ）；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３３Ｈ６７Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ）＋ ６６４．４１９６，実測値：６６４．４１６７。
【０２３２】
（実施例５−７：化合物４６の合成）
【０２３３】
【化５１】
【０２３４】
化合物４５（０．４１１ｇ，０．５１９ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液に、−７８℃でトリメチルアミン（１ｍｌ）を加え、室温に昇温して４時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮後、酢酸エチルに溶解してセライトろ過を行い、濾液を再び減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中３％（ｖ／ｖ）水および２７％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物４６（０．２７４ｇ，収率８１％）を得た。
【０２３５】
化合物４６の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋２．７（ｃ＝１．０２，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３９３，２９２８，１７３２，１４６６，１２５０，１０７８，８３７ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．３０−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０９（ｔｔ，Ｊ＝４．６，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｄｄ，Ｊ＝４．６，８．０，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７，１１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６２−３．６６（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，９Ｈ），２．９９−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３６（ｄｔ，Ｊ＝１．１，７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．９，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６３（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３２−１．３８（ｍ，１４Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｍ，２Ｈ），０．０８（ｓ，６Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７５．０，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７４．７（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝８．６Ｈｚ），６７．９，６５．３（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６３．１，５３．６，５３．６，５３．６，３５．３，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，２８．６，２６．６，２６．３，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝３．８Ｈｚ），２３．６，１４．５，−５．２；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ３２Ｈ６４Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１Ｓｉ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ６７２．３８５９，実測値：６７２．３８４２。
【０２３６】
（実施例５−８：２−Ｏ−（シス−９，シス−１２−オクタデカジエノイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホチオコリン（Ｋ０６）の合成）
【０２３７】
【化５２】
【０２３８】
化合物４６（０．２７４ｇ，０．４２２ｍｍｏｌ）のメタノール（４．２ｍｌ）溶液に、室温でｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０．０４０ｇ，０．２１１ｍｍｏｌ）を加え、２０分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム中０．５％（ｖ／ｖ）水および２０％（ｖ／ｖ）メタノールからクロロホルム中４％（ｖ／ｖ）水および３８％（ｖ／ｖ）メタノール）で精製し、化合物Ｋ０６（０．１５０ｇ，収率６６％）を得た。
【０２３９】
化合物Ｋ０６の物性データ：［α］Ｄ２５．０ ＋６．３（ｃ＝１．１３，ＣＨＣｌ３）；ＩＲ（ＮａＣｌ，ｎｅａｔ）：３３３９，２９２６，１７２８，１４８１，１２４０，１０７２，８１２ｃｍ−１；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ），δ：５．２８−５．３９（ｍ，４Ｈ），５．０４（ｔｔ，Ｊ＝５．３，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｄｄｄ，Ｊ＝５．７，７．３，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄｄ，Ｊ＝６．６，６．６，１１．４Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｍ，２Ｈ），３．１６（ｓ，９Ｈ），３．０１−３．０９（ｍ，２Ｈ），２．７７（ｄｄ，Ｊ＝６．２，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．３７（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．０６（ｄｔ，Ｊ＝６．４，６．４Ｈｚ，４Ｈ），１．６２（ｔｔ，Ｊ＝７．１，７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３６−１．４０（ｍ，１４Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ），δ：１７４．９，１３０．９，１３０．８，１２９．１，１２９．０，７４．６（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝９．６Ｈｚ），６７．８，６４．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝５．７Ｈｚ），６１．４，５３．６，３５．１，３２．７，３０．７，３０．５，３０．３，３０．２，３０．２，２８．２，２６．５，２６．０，２３．９（ｄ，ＪＣ−Ｐ＝２．９Ｈｚ），２３．６，１４．５；ＥＳＩ−ＨＲＭＳ ｍ／ｚ 計算値：Ｃ２６Ｈ５０Ｎ１Ｏ６Ｐ１Ｓ１（Ｍ＋Ｎａ）＋ ５５８．２９９４，実測値：５５８．２９６８。
【０２４０】
（実施例６：反応時間および吸光度変化の検討）
以下の試薬ＡおよびＢを調製した：
試薬Ａ（ｐＨ８．５）：
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン １００ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
塩化マグネシウム ５ｍｍｏｌ／Ｌ；および
ＤＴＮＢ ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
試薬Ｂ（ｐＨ６．５）：
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン １０ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
メタノール １％（ｖ／ｖ）；および
１−ヒドロキシ−２−ミリストイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０１） １０ｍｍｏｌ／Ｌ。
【０２４１】
試料として生理食塩水、組換えオートタキシン（ｒＡＴＸ：特許文献１参照）、または市販管理血清である液状コントロール血清IIワコー（和光純薬工業）を１０μＬずつマイクロプレートに取り、試薬Ａを１６０μＬ加えて、３７℃で１５分間加温した。これに試薬Ｂを４０μＬ加えて反応を開始し、３７℃で１５分間反応させた。生化学用自動分析装置ＴＢＡ−８０ＦＲ ＮＥＯ２（東芝メディカルシステムズ株式会社）を使用し、主波長４１２ｎｍおよび副波長５４８ｎｍの吸光度を約１分ごとに測定した。図１に、試薬Ｂを加えて反応を開始した後の吸光度の変化を示す。
【０２４２】
図１に示すように、ｒＡＴＸおよび血清では、吸光度は、反応時間とともに直線的に大きく上昇した。一方、リゾホスホリパーゼＤの活性を全く有していない生理食塩水の吸光度は、直線的にわずかに変化することがわかった。そこで、１分間当たりの吸光度変化率を算出した。結果を図２に示す。
【０２４３】
図２に示す各試料の吸光度変化率から、リゾホスホリパーゼＤの活性を全く有していない生理食塩水の吸光度変化率を差し引いた値が、真のリゾホスホリパーゼＤ活性を表す値となることがわかった。
【０２４４】
（実施例７：ｐＨの検討）
次に、上記実施例６の試薬Ａにおいて種々のｐＨを有する試薬Ａを調製した、ｐＨは、それぞれ７．０、７．５、８．０、８．５、および９．０に調整した。
【０２４５】
試料として生理食塩水およびｒＡＴＸを用い、上記実施例６と同様の操作を行って、各ｐＨでの吸光度変化率を算出した。結果を図３に示す。
【０２４６】
図３においては、各ｐＨにおいてｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いた値をプロットした。その結果、ｐＨが高い方が、吸光度変化率が高いことがわかった。
【０２４７】
（実施例８：基質の検討）
上記実施例６の試薬Ｂにおいて、以下の４種類のいずれかの基質を１０ｍｍｏｌ／Ｌ含む試薬Ｂを調製した：
基質１：１−ヒドロキシ−２−ミリストイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０１）；
基質２：１−ヒドロキシ−２−ラウロイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体の立体異性体（化合物Ｋ０２）；
基質３: １−ミリストイル−２−ヒドロキシ−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０４）；および
基質４：１−ヒドロキシ−２−リノレオイル−３−グリセロホスホリルコリンの硫黄置換体（化合物Ｋ０６）。
【０２４８】
試料として生理食塩水およびｒＡＴＸを用い、上記実施例６と同様の操作を行って、吸光度変化を測定した。ｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いたものを図４に示す。
【０２４９】
図４に示すように、基質の脂肪酸の位置、脂肪酸の種類、あるいは立体構造の違いに関わらず、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定が可能であることがわかった。
【０２５０】
（実施例９：基質濃度の検討）
以下の試薬を調製した：
試薬Ａ（ｐＨ８．５）：
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン １００ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
塩化マグネシウム ５ｍｍｏｌ／Ｌ；および
ＤＴＮＢ ０．５ｍｍｏｌ／Ｌ。
試薬Ｂ（ｐＨ６．５）：
ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン １０ｍｍｏｌ／Ｌ；
トリトンＸ−１００ ０．０１％（ｗ／ｖ）；
メタノール １％（ｖ／ｖ）；
基質１（化合物Ｋ０１） １０ｍｍｏｌ／Ｌあるいは基質３（化合物Ｋ０４） １０ｍｍｏｌ／Ｌ
【０２５１】
試料として生理食塩水、ならびにｒＡＴＸの原液および１／２希釈液を用い、上記実施例６と同様の操作を行って、吸光度変化を測定した。ｒＡＴＸの吸光度変化率から生理食塩水の吸光度変化率を差し引いたものを図５に示す。
【０２５２】
図５に示すように、各基質とも、ｒＡＴＸの濃度依存的に吸光度変化率が上昇し、リゾホスホリパーゼＤ活性の定量が可能であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０２５３】
本発明によれば、リゾホスホリパーゼＤ活性の測定に有用な新規硫黄置換化合物が提供される。この新規化合物を用いることにより、試料中のリゾホスホリパーゼＤ活性をより簡便で迅速に測定することができ、リアルタイムで活性を測定することもできる。したがって、本発明のリゾホスホリパーゼＤ活性の測定方法は、リゾホスホリパーゼＤ活性が関与する様々な疾患、あるいはリゾホスホリパーゼＤによって合成または分解される物質の変化に関与する様々な疾患の診断またはリスクの評価に利用できる。このような疾患としては、例えば、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患が挙げられる。さらに、本発明の方法は、これらの疾患の治療効果判定の判定や、被験物質のリゾホスホリパーゼＤ活性に及ぼす影響あるいは効果を調べるためのスクリーニングにも利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０２５４】
【図１】各試料に本発明の硫黄置換化合物を添加した後の吸光度の経時変化を示すグラフである（実施例６）。
【図２】各試料における１分間当たりの吸光度変化率を示すグラフである（実施例６）。
【図３】ｐＨと吸光度変化率との関係を示すグラフである（実施例７）。
【図４】種々の基質における吸光度変化率を示すグラフである（実施例８）。
【図５】ｒＡＴＸの希釈率と吸光度変化率との関係を示すグラフである（実施例９）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【化１】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表されるリゾリン脂質の硫黄置換化合物。
【請求項２】
前記Ｘを含むＸ−ＯＨが、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｘ−ＯＨが、コリンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が、飽和脂肪酸の脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項５】
前記飽和脂肪酸が、炭素数８から２０である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記飽和脂肪酸が、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が、不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項８】
前記不飽和脂肪酸が、炭素数８から２２である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記不飽和脂肪酸が、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記Ｒ１またはＲ２が、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項１１】
リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法であって、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、請求項１から１０のいずれかの項に記載の化合物とジスルフィド化合物とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２】
前記ジスルフィド化合物が、以下の式（ＩＩＩ）：
【化２】
で表される化合物であり、そして前記生成したチオール化合物が、以下の式（ＩＶ）：
【化３】
で表される化合物であり、該式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｒ３が、水素原子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記リゾホスホリパーゼＤを含有する試料が、血清、血漿、尿、唾液、涙液、精液、糞便溶解液、脊髄液、細胞培養液、細胞抽出液、および組換え型オートタキシン溶解液からなる群より選択される、請求項１１から１３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１５】
前記リゾホスホリパーゼＤの活性が、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標である、請求項１１から１３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１０のいずれかの項に記載の化合物を含む、リゾホスホリパーゼＤの活性測定用キット。
【請求項１７】
さらに、ジスルフィド化合物を含む、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
前記ジスルフィド化合物が、以下の式（ＩＩＩ）：
【化４】
で表される化合物（式（ＩＩＩ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記キットが、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標の測定に用いられる、請求項１７または１８に記載のキット。
【請求項１】
以下の式（Ｉ）または（ＩＩ）：
【化１】
（該式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１またはＲ２のいずれか一方が脂肪酸残基であり、他方が水素原子であり、そしてＸが極性基である）で表されるリゾリン脂質の硫黄置換化合物。
【請求項２】
前記Ｘを含むＸ−ＯＨが、コリン、エタノールアミン、セリン、イノシトール、グリセロール、およびスレオニンを含む群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｘ−ＯＨが、コリンである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が、飽和脂肪酸の脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項５】
前記飽和脂肪酸が、炭素数８から２０である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
前記飽和脂肪酸が、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、およびアラキジン酸からなる群より選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｒ１またはＲ２で表される脂肪酸残基が、不飽和脂肪酸の脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項８】
前記不飽和脂肪酸が、炭素数８から２２である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記不飽和脂肪酸が、パルミトイル酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる群より選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記Ｒ１またはＲ２が、アルキル基およびアルケニル基からなる群より選択される脂肪族基を含む脂肪酸残基である、請求項１から３のいずれかの項に記載の化合物。
【請求項１１】
リゾホスホリパーゼＤの活性の測定方法であって、
リゾホスホリパーゼＤを含有する試料に、請求項１から１０のいずれかの項に記載の化合物とジスルフィド化合物とを加えて反応させる工程、および
生成したチオール化合物に由来する吸光度を測定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１２】
前記ジスルフィド化合物が、以下の式（ＩＩＩ）：
【化２】
で表される化合物であり、そして前記生成したチオール化合物が、以下の式（ＩＶ）：
【化３】
で表される化合物であり、該式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記Ｒ３が、水素原子である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記リゾホスホリパーゼＤを含有する試料が、血清、血漿、尿、唾液、涙液、精液、糞便溶解液、脊髄液、細胞培養液、細胞抽出液、および組換え型オートタキシン溶解液からなる群より選択される、請求項１１から１３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１５】
前記リゾホスホリパーゼＤの活性が、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標である、請求項１１から１３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１から１０のいずれかの項に記載の化合物を含む、リゾホスホリパーゼＤの活性測定用キット。
【請求項１７】
さらに、ジスルフィド化合物を含む、請求項１６に記載のキット。
【請求項１８】
前記ジスルフィド化合物が、以下の式（ＩＩＩ）：
【化４】
で表される化合物（式（ＩＩＩ）において、Ｒ３が、水素原子、水酸基、低級アルキル基、低級アルケニル基、またはハロゲン原子である）を含む、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記キットが、癌、腫瘍、および動脈硬化性疾患からなる群より選択される疾患の診断に用いる指標の測定に用いられる、請求項１７または１８に記載のキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００９−１４９５８２（Ｐ２００９−１４９５８２Ａ）
【公開日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−３３０１０６（Ｐ２００７−３３０１０６）
【出願日】平成１９年１２月２１日（２００７．１２．２１）
【出願人】（５０３０９２１８０）学校法人関西学院 (71)
【出願人】（０００２３１３９４）アルフレッサファーマ株式会社 (27)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月２１日（２００７．１２．２１）
【出願人】（５０３０９２１８０）学校法人関西学院 (71)
【出願人】（０００２３１３９４）アルフレッサファーマ株式会社 (27)
【Ｆターム（参考）】
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