レボホリナート含有水溶液製剤
【課題】レボホリナートまたはその塩が安定に溶解し、長期間保存可能なレボホリナート含有高濃度水溶液製剤、並びにレボホリナート含有高濃度水溶液の安定化方法を提供する。
【解決手段】次の成分（Ａ）および（Ｂ）：
（Ａ）レボホリナートまたはその塩
（Ｂ）（ｉ）４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩
（ii）ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、および
（iii）ニコチン酸アミド
の群から選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とするレボホリナート含有水溶液製剤。
【解決手段】次の成分（Ａ）および（Ｂ）：
（Ａ）レボホリナートまたはその塩
（Ｂ）（ｉ）４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩
（ii）ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、および
（iii）ニコチン酸アミド
の群から選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とするレボホリナート含有水溶液製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レボホリナートまたはその塩を有効成分とする安定化された水溶液製剤、並びにレボホリナート含有水溶液の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
レボホリナート（ｌ−ＬＶ）は、化学名（６Ｓ）−Ｎ−［４−［［（２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸で、葉酸代謝拮抗薬メトトレキセートの解毒剤、およびフルオロウラシルの抗腫瘍効果増強剤として使用されている。
【０００３】
レボホリナートの化学合成過程においては、６位の炭素原子の立体配置によって、ｄ体および１体を等量含有しているラセミ体（ロイコボリン）が得られるが、生物活性を有するのは１体のみであることが報告されており、ロイコボリンから非活性体であるｄ体を除いた化合物のカルシウム塩である、レボホリナートカルシウムが上市されている（商品名：アイソボリン注（武田薬品工業））。
【０００４】
しかし、レボホリナートカルシウムは通常水溶液中では極めて不安定なため、これまで上市されている製剤は凍結乾燥製剤のみであり、投与する際には水溶液製剤を用時調製しなければならないため、レボホリナートまたはその塩を安定に溶解し、長期間保存可能な水溶液製剤の開発が望まれていた。
【０００５】
また、レボホリナートカルシウムは有効濃度が比較的高いにもかかわらず、１バイアル中に十分量の有効成分を含有する製剤が上市されていなかった。よって、有効濃度の水溶液製剤を用時調製する際には、複数本のバイアルを用いることとなるが、この作業は極めて煩雑なため、レボホリナートを高濃度に含有する水溶液製剤の開発が望まれていた。
【０００６】
ホリナート類またはその塩の水溶液中での安定性を向上させる試みとしては、ロイコボリン塩類、トロメタミン（緩衝剤）、およびモノチオグリセロール（酸化防止剤）を含んでなる混合物（特許文献１）、ホリナート類を有効成分とする水溶液が充填されているプレフィルドシリンジ製剤（特許文献２）、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸またはその塩を有効成分とし、ｐＨ調整剤と抗酸化剤とが配合された注射用水溶液製剤（特許文献３）等が報告されているが、これらのいずれについても未だ十分な効果は得られていない。
【特許文献１】特開平３−９００２６号公報
【特許文献２】特開２００６−２５９５３号公報
【特許文献３】特開２００６−１１１６１４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、レボホリナートまたはその塩が安定に溶解し、長期間保存可能なレボホリナート含有高濃度水溶液製剤、並びにレボホリナート含有高濃度水溶液の安定化方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、全く意外なことに、レボホリナートまたはその塩に、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（以下、ＨＥＰＥＳという）またはその塩、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（以下、ＰＩＰＥＳという）またはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を配合すると、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性が向上し、長期間保存可能なレボホリナート含有水溶液製剤が得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）および（Ｂ）；
（Ａ）レボホリナートまたはその塩、（Ｂ）(ｉ)ＨＥＰＥＳまたはその塩、(ii)ＰＩＰＥＳまたはその塩、および(iii)ニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とする、レボホリナート含有水溶液製剤を提供するものである。
【００１０】
また、本発明は、レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液にＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することを特徴とするレボホリナート含有水溶液の安定化方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の水溶液製剤には、レボホリナートまたはその塩を高濃度且つ安定に溶解し、長期間保存することができ、臨床に用いる際にも、時間をかけてあらためて固形製剤を溶解する必要がなく、患者に直ちに投与でき、或いは希釈液で適当な濃度に希釈するだけで投与が可能となる。また、保存時の水溶液のｐＨ値の低下が抑制される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の水溶液製剤で使用する成分（Ａ）レボホリナートまたはその塩は、水溶液製剤の有効成分であり、本発明では塩の形態で使用することが好ましい。
【００１３】
本発明で使用するレボホリナートの塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、またはカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩を好適に用いることができ、特にカルシウム塩が好ましい。またこれらの塩には、無水物である無水塩、水和物である含水塩をともに包含する。
【００１４】
本発明で使用する成分レボホリナートの塩は、レボホリナートおよびアルカリ剤を添加して、水溶液製剤中で生成させてもよい。この場合、アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等が挙げられ、このうち水酸化カルシウムが好ましい。また、水溶液製剤中において、他の化合物との塩交換によってレボホリナートの塩を形成してもよい。
【００１５】
本発明の水溶液製剤で使用する成分（Ｂ）は、ＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上であり、このうちＨＥＰＥＳまたはその塩、ニコチン酸アミドが好ましい。
【００１６】
ＨＥＰＥＳおよびＰＩＰＥＳの塩としてはナトリウム塩等のアルカリ金属塩を好適に用いることができ、ナトリウム塩が好ましく、特にＨＥＰＥＳ−１ナトリウム塩（以下、ＨＥＰＥＳ−Ｎａという）、ＰＩＰＥＳ−１ナトリウム塩（以下、ＰＩＰＥＳ−Ｎａという）、ＰＩＰＥＳ−１．５ナトリウム塩（以下、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａという）等が好ましい。
【００１７】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ＨＥＰＥＳまたはその塩（ＨＥＰＥＳ換算）は０．１ｍｇ〜飽和量、さらに０．１〜６７０ｍｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると０．１〜５０ｍｇ、さらに０．１〜６ｍｇ、特に０．１〜１．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００１８】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ＰＩＰＥＳまたはその塩（ＰＩＰＥＳ換算）は１ｍｇ〜飽和量、さらに１ｍｇ〜７ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１〜５００ｍｇ、さらに１〜４０ｍｇ含有するのが好ましい。
【００１９】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ニコチン酸アミドは１０ｍｇ〜飽和量、さらに１０ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１０ｍｇ〜１ｇ、さらに１０〜２５０ｍｇ、特に１０〜６２．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２０】
本発明の水溶液製剤には、さらにレボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性を向上させる目的で、トリエタノールアミン、メグルミンおよびトロメタモールの群から選ばれる、１種以上の化合物を含有させるのが好ましい。
さらに好ましくは、ＨＥＰＥＳならびにトリエタノールアミン、ニコチン酸アミドおよびトロメタモールの群から選ばれる１種以上の化合物を含有させるのがよく、特に好ましくはＨＥＰＥＳ、トリエタノールアミンおよびニコチン酸アミドを含有させるのがよい。
【００２１】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、トリエタノールアミンは１．５ｍｇ〜飽和量、さらに１．５ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１．５〜５００ｍｇ、さらに１．５〜３０ｍｇ、特に１．５〜７．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２２】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、メグルミンは１００ｍｇ〜飽和量、さらに１００ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１００ｍｇ〜１５．４ｇ、さらに１００ｍｇ〜３．８５ｇ含有するのが好ましい。
【００２３】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、トロメタモールは３．５ｍｇ〜飽和量、さらに３．５ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると３．５ｍｇ〜１ｇ、さらに３．５〜７２ｍｇ、特に３．５〜１８ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２４】
本発明の水溶液製剤のｐＨは、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点から９〜１１、さらに９〜１０、さらに９．２〜１０、特に９．５とするのが好ましい。ここで水溶性製剤のｐＨとは、製剤調製時のｐＨを意味し、室温（２５℃）の値である。ｐＨ調整は、酢酸、塩酸、硫酸等の酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリを用いて行うのが好ましい。
【００２５】
本発明の水溶液製剤中の溶存酸素濃度は１ｍｇ／Ｌ以下、特に０．５ｍｇ／Ｌ以下であるのがレボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましい。溶存酸素を除去するためには、容器空間部および水溶液製剤中の酸素を窒素などの不活性ガスで置換することが好ましい。例えば、水溶液製剤を窒素バブリングし、容器への充填を窒素雰囲気下行う方法等が好適に用いられる。不活性ガスとしては、例えば、窒素、またはヘリウム、アルゴン、ネオン等の希ガスが挙げられ、特に窒素が好ましい。
【００２６】
本発明の水溶液製剤は、有効成分であるレボホリナートまたはその塩が優れたフルオロウラシルの増強効果を有することから、活性型葉酸製剤として有用である。対象悪性腫瘍としては、胃癌、結腸・直腸癌等が挙げられる。
【００２７】
また、本発明の水溶液製剤の剤形としては、注射用製剤、特に静脈内投与用製剤が好ましい。当該注射用製剤とするにあたって、上記成分以外に注射用蒸留水、グルコース、マンノース、乳糖、イノシトールに代表される糖類、食塩等に代表される無機塩類、その他通常注射剤に用いる安定剤、賦形剤、緩衝剤等の成分を用いても良い。注射用製剤中にレボホリナートまたはその塩は、レボホリナート換算量で２〜５０ｍｇ／ｍＬ、さらに５〜５０ｍｇ／ｍＬ含有するのが好ましい。また、本発明の水溶液製剤は、レボホリナートまたはその塩を高濃度配合しても安定なので、レボホリナートまたはその塩をレボホリナート換算で５ｍｇ／ｍＬ以上とすることができる。
【００２８】
本発明の水溶液製剤には、さらに前記以外のグット緩衝剤、例えば２−モルホリノエタンスルホン酸，一水和物（以下、ＭＥＳという）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（以下、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓという）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（以下、ＡＤＡという）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＡＣＥＳという）、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下、ＭＯＰＳＯという）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＢＥＳという）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下、ＭＯＰＳという）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＴＥＳという）、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（以下、ＤＩＰＳＯという）、２−ヒドロキシ−Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＴＡＰＳＯという）、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸），二水和物（以下、ＰＯＰＳＯという）、２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸，一水和物（以下、ＨＥＰＰＳＯという）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（以下、ＥＰＰＳという）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（以下、Ｔｒｉｃｉｎｅという）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（以下、Ｂｉｃｉｎｅという）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＴＡＰＳという）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＣＨＥＳという）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＣＡＰＳＯという）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＣＡＰＳという）等が挙げられる。このうち、ＭＥＳ、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＥＰＰＳ等が好ましい。本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、これらのグッド緩衝剤は０．１ｍｇ〜飽和量、さらに０．１ｍｇ〜１０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると０．１ｍｇ〜１ｇ、さらに０．１〜１００ｍｇ含有するのが特に好ましい。
【００２９】
本発明の水溶液製剤は、さらに必要に応じて、等張化剤（グルコース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール等）、無痛化剤（グルコース、イノシトール、ベンジルアルコール、塩酸メピバカイン、塩酸キシロカイン、塩酸プロカイン、塩酸カルボカイン、グリセリン、プロピレングリコール、塩酸リドカイン等）、防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等のパラオキシ安息香酸エステル、チメロサール、クロロブタノール、ベンジルアルコール等）を用いることができる。これらの添加量は、当業者が公知の技術に従って容易に設定することができる。
【００３０】
本発明の水溶液製剤は光から保護するためにアンバーガラス等の遮光性の容器を用いてもよい。さらに必要に応じて、光安定化剤を添加してもよく、薬学的に許容される光安定化剤は広く利用できるが、例えば、グルコース、ショ糖、フラクトース、マルトース等の糖類、キシリトール、ソルビトール、マンニトール等の糖アルコール、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコールを挙げることができる。その他、ベンゾトリアゾール誘導体、ベンゾフェノン誘導体、サリチル酸誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、桂皮酸誘導体、ウロカニン酸誘導体、リボフラビン、葉酸等も好適な光安定化剤である。本発明の水溶液製剤には、これらの光安定化剤の一種以上を配合することができ、その添加量は、０．０１〜１ｗ／ｖ％、好ましくは０．０５〜０．１ｗ／ｖ％である。
【００３１】
本発明の水溶液製剤は、さらに必要に応じて抗酸化剤を添加してもよい。抗酸化剤としては、アスコルビン酸またはその塩、ピロ亜硫酸ナトリウム、塩酸システイン、亜硫酸水素ナトリウム、チオグリセロール、チオグリコール酸またはその塩、および亜硫酸ナトリウム等が用いられ、その塩としてはその薬学的に許容される塩が例示される。本発明の水溶液製剤には、これらの抗酸化剤の一種以上を配合することができ、その添加量は、当業者が公知の技術に従って容易に設定することができる。
【００３２】
本発明の水溶液製剤は、必要に応じて他の薬物（塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル、ウラシル、マイトマイシン等の抗悪性腫瘍剤等）を含有していてもよく、また他の薬物を別に包装し、本発明の水溶液製剤とキット製品としてもよい。
【００３３】
本発明において、注射用水溶液製剤とは、最終形態での注射剤に限らず、用時に溶解液（希釈液）を用いて最終注射液に調製することができる注射液前駆体製剤（液状注射剤、濃厚注射剤等）をも含む意味に用いる。
【００３４】
本発明の水溶液製剤は、自体公知の方法により製造することができる。例えば、レボホリナートカルシウム、ＨＥＰＥＳ、トリエタノールアミン、ニコチン酸アミドを含む水溶液のｐＨを所定の値に調整後、所定のレボホリナートカルシウム濃度に希釈する。その後、無菌条件下にて除菌ろ過し、アンプル、バイアル、シリンジ（プレフィルドシリンジ）等の容器に充填し、密封することにより製造することができる。
【００３５】
本発明の方法により、レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液にＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することで、レボホリナート含有水溶液を安定化することができる。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例を挙げて本発明の内容をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。
【００３７】
実施例１ 各種添加剤の安定化効果
（１）サンプル調製および試験方法
レボホリナートカルシウムの５ｍｇまたは２０ｍｇ（レボホリナートとして）／ｍＬ水溶液を超音波処理および攪拌により調製する。この液にＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａ、ニコチン酸アミドをそれぞれ添加し、水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨ９に調整し、６０℃で保存し１週間ごとにサンプリングし５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣで分析した。
【００３８】
（２）ＨＰＬＣ分析条件
カラム：内径４．６ｍｍ，長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする（Ｌ−ｃｏｌｕｍｎ ＯＤＳ ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）
カラム温度：４５℃付近の一定温度
移動相：０．００８ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素ナトリウム溶液／メタノール／テトラブチルアンモニウムヒドロキシド試液混液（３８５：１１０：４）にリン酸を加えてｐＨを７．５に調整する
流量：レボホリナートの保持時間が約１０分になるように調整する（約１．０ｍＬ／ｍｉｎ）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２５４ｎｍ）
【００３９】
（３）結果
表１に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液は６０℃で保存して安定性試験を実施した。注射用水のみでは２週間後には沈殿物が認められたが、これに各種添加剤を添加すると顕著に安定性が向上し、特にＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａを添加した場合には４週間後においても極めて優れた安定化効果を奏することが確認された。
【００４０】
【表１】
【００４１】
実施例２ 安定性評価試験（ｐＨの検討）
（１）サンプル調製および試験方法
表２に示す各添加剤の水溶液にレボホリナートカルシウムを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。これに水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨを８．０、９．０、１０．０および１１．０に調整する。この液を６０℃で２週間保存し、１週間ごとにサンプリングした。サンプリングした液は、５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣにより分析した（ＨＰＬＣ条件は実施例１に従う）。
【００４２】
（２）結果
表２に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液は６０℃で保存して安定性試験を実施した。ＨＥＰＥＳを単独で添加した場合と、さらにニコチン酸アミドを組み合わせて添加した場合では、全てのｐＨ領域において後者の処方による安定化効果の方が向上する傾向が見られたが、両者ともｐＨ９．０〜１０．０の場合に極めて優れた安定化効果を示した。また２０ｍｇ／ｍＬという高濃度なレボホリナート含有水溶液に対しても十分な安定化効果を奏することが確認された。
【００４３】
【表２】
【００４４】
実施例３ 安定性評価試験（処方の検討）
（１）サンプル調製および試験方法
表３〜５に示す各添加剤の水溶液にレボホリナートカルシウムを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。これに水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨ９．５に調整する。この液を６０℃で１ヶ月間保存し、１週間ごとにサンプリングした。サンプリングした液は、５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣにより分析した（ＨＰＬＣ条件は実施例１に従う）。
【００４５】
（２）結果
表３に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液（レボホリナートとして５ｍｇ／ｍＬ）は６０℃で保存して安定性試験を実施した。注射用水のみでは２週間後にはレボホリナートの残存率が約７０％以下になり、３週間後には沈殿物が認められた。これにＨＥＰＥＳを添加すると４週間後にも沈殿は認められずレボホリナートの残存率は９０％以上であった。ＨＥＰＥＳに加えトリエタノールアミンを添加することで、４週間目の残存率が９２％以上に上昇し、さらにニコチン酸アミドの添加でより高い残存率（約９４％）が得られた。
【００４６】
表４および５に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液（レボホリナートとして１０ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬ）についても同様に６０℃で保存して安定性試験を実施した。高濃度になるにしたがって残存率が低下する傾向は見られたものの、添加剤なし（注射用水のみ）の場合と比較すると、ＨＥＰＥＳ単独添加により極めて優れた安定化効果が認められ、さらに他の１種以上の添加剤を組み合わせて添加することで、より安定化効果が向上した。
【００４７】
【表３】
【００４８】
【表４】
【００４９】
【表５】
【００５０】
実施例４
次の製法により、下記の例１〜６の注射剤を得た。
０．０６７ｍｇ／ｍＬ濃度に調整したＨＥＰＥＳ水溶液の１８ｍＬにレボホリナートカルシウム１２２ｍｇを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。この液に添加剤を加えて攪拌して溶かした。この液に各添加剤を加えて溶かした後、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを９．５に調整し、ＨＥＰＥＳ水溶液を加えて２０ｍＬとした。
【００５１】
例１
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５２】
例２
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５３】
例３
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
ニコチン酸アミド ５７．３ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５４】
例４
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５５】
例５
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
ニコチン酸アミド ５７．３ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５６】
例６
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａ ２０ｍｇ
メグルミン １０００ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５７】
例１〜６のレボホリナート含有水溶液製剤（注射剤）は、いずれも微黄色澄明な水溶液であって、レボホリナートの結晶析出および分解は認められなかった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レボホリナートまたはその塩を有効成分とする安定化された水溶液製剤、並びにレボホリナート含有水溶液の安定化方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
レボホリナート（ｌ−ＬＶ）は、化学名（６Ｓ）−Ｎ−［４−［［（２−アミノ−５−ホルミル−１，４，５，６，７，８−ヘキサヒドロ−４−オキソ−６−プテリジニル）メチル］アミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸で、葉酸代謝拮抗薬メトトレキセートの解毒剤、およびフルオロウラシルの抗腫瘍効果増強剤として使用されている。
【０００３】
レボホリナートの化学合成過程においては、６位の炭素原子の立体配置によって、ｄ体および１体を等量含有しているラセミ体（ロイコボリン）が得られるが、生物活性を有するのは１体のみであることが報告されており、ロイコボリンから非活性体であるｄ体を除いた化合物のカルシウム塩である、レボホリナートカルシウムが上市されている（商品名：アイソボリン注（武田薬品工業））。
【０００４】
しかし、レボホリナートカルシウムは通常水溶液中では極めて不安定なため、これまで上市されている製剤は凍結乾燥製剤のみであり、投与する際には水溶液製剤を用時調製しなければならないため、レボホリナートまたはその塩を安定に溶解し、長期間保存可能な水溶液製剤の開発が望まれていた。
【０００５】
また、レボホリナートカルシウムは有効濃度が比較的高いにもかかわらず、１バイアル中に十分量の有効成分を含有する製剤が上市されていなかった。よって、有効濃度の水溶液製剤を用時調製する際には、複数本のバイアルを用いることとなるが、この作業は極めて煩雑なため、レボホリナートを高濃度に含有する水溶液製剤の開発が望まれていた。
【０００６】
ホリナート類またはその塩の水溶液中での安定性を向上させる試みとしては、ロイコボリン塩類、トロメタミン（緩衝剤）、およびモノチオグリセロール（酸化防止剤）を含んでなる混合物（特許文献１）、ホリナート類を有効成分とする水溶液が充填されているプレフィルドシリンジ製剤（特許文献２）、５−ホルミル−（６Ｓ）−テトラヒドロ葉酸またはその塩を有効成分とし、ｐＨ調整剤と抗酸化剤とが配合された注射用水溶液製剤（特許文献３）等が報告されているが、これらのいずれについても未だ十分な効果は得られていない。
【特許文献１】特開平３−９００２６号公報
【特許文献２】特開２００６−２５９５３号公報
【特許文献３】特開２００６−１１１６１４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、レボホリナートまたはその塩が安定に溶解し、長期間保存可能なレボホリナート含有高濃度水溶液製剤、並びにレボホリナート含有高濃度水溶液の安定化方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、全く意外なことに、レボホリナートまたはその塩に、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（以下、ＨＥＰＥＳという）またはその塩、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）（以下、ＰＩＰＥＳという）またはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を配合すると、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性が向上し、長期間保存可能なレボホリナート含有水溶液製剤が得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）および（Ｂ）；
（Ａ）レボホリナートまたはその塩、（Ｂ）(ｉ)ＨＥＰＥＳまたはその塩、(ii)ＰＩＰＥＳまたはその塩、および(iii)ニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とする、レボホリナート含有水溶液製剤を提供するものである。
【００１０】
また、本発明は、レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液にＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することを特徴とするレボホリナート含有水溶液の安定化方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の水溶液製剤には、レボホリナートまたはその塩を高濃度且つ安定に溶解し、長期間保存することができ、臨床に用いる際にも、時間をかけてあらためて固形製剤を溶解する必要がなく、患者に直ちに投与でき、或いは希釈液で適当な濃度に希釈するだけで投与が可能となる。また、保存時の水溶液のｐＨ値の低下が抑制される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の水溶液製剤で使用する成分（Ａ）レボホリナートまたはその塩は、水溶液製剤の有効成分であり、本発明では塩の形態で使用することが好ましい。
【００１３】
本発明で使用するレボホリナートの塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、またはカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩を好適に用いることができ、特にカルシウム塩が好ましい。またこれらの塩には、無水物である無水塩、水和物である含水塩をともに包含する。
【００１４】
本発明で使用する成分レボホリナートの塩は、レボホリナートおよびアルカリ剤を添加して、水溶液製剤中で生成させてもよい。この場合、アルカリ剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等が挙げられ、このうち水酸化カルシウムが好ましい。また、水溶液製剤中において、他の化合物との塩交換によってレボホリナートの塩を形成してもよい。
【００１５】
本発明の水溶液製剤で使用する成分（Ｂ）は、ＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上であり、このうちＨＥＰＥＳまたはその塩、ニコチン酸アミドが好ましい。
【００１６】
ＨＥＰＥＳおよびＰＩＰＥＳの塩としてはナトリウム塩等のアルカリ金属塩を好適に用いることができ、ナトリウム塩が好ましく、特にＨＥＰＥＳ−１ナトリウム塩（以下、ＨＥＰＥＳ−Ｎａという）、ＰＩＰＥＳ−１ナトリウム塩（以下、ＰＩＰＥＳ−Ｎａという）、ＰＩＰＥＳ−１．５ナトリウム塩（以下、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａという）等が好ましい。
【００１７】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ＨＥＰＥＳまたはその塩（ＨＥＰＥＳ換算）は０．１ｍｇ〜飽和量、さらに０．１〜６７０ｍｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると０．１〜５０ｍｇ、さらに０．１〜６ｍｇ、特に０．１〜１．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００１８】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ＰＩＰＥＳまたはその塩（ＰＩＰＥＳ換算）は１ｍｇ〜飽和量、さらに１ｍｇ〜７ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１〜５００ｍｇ、さらに１〜４０ｍｇ含有するのが好ましい。
【００１９】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、ニコチン酸アミドは１０ｍｇ〜飽和量、さらに１０ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１０ｍｇ〜１ｇ、さらに１０〜２５０ｍｇ、特に１０〜６２．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２０】
本発明の水溶液製剤には、さらにレボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性を向上させる目的で、トリエタノールアミン、メグルミンおよびトロメタモールの群から選ばれる、１種以上の化合物を含有させるのが好ましい。
さらに好ましくは、ＨＥＰＥＳならびにトリエタノールアミン、ニコチン酸アミドおよびトロメタモールの群から選ばれる１種以上の化合物を含有させるのがよく、特に好ましくはＨＥＰＥＳ、トリエタノールアミンおよびニコチン酸アミドを含有させるのがよい。
【００２１】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、トリエタノールアミンは１．５ｍｇ〜飽和量、さらに１．５ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１．５〜５００ｍｇ、さらに１．５〜３０ｍｇ、特に１．５〜７．５ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２２】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、メグルミンは１００ｍｇ〜飽和量、さらに１００ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると１００ｍｇ〜１５．４ｇ、さらに１００ｍｇ〜３．８５ｇ含有するのが好ましい。
【００２３】
本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、トロメタモールは３．５ｍｇ〜飽和量、さらに３．５ｍｇ〜２０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると３．５ｍｇ〜１ｇ、さらに３．５〜７２ｍｇ、特に３．５〜１８ｍｇ含有するのが好ましい。
【００２４】
本発明の水溶液製剤のｐＨは、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点から９〜１１、さらに９〜１０、さらに９．２〜１０、特に９．５とするのが好ましい。ここで水溶性製剤のｐＨとは、製剤調製時のｐＨを意味し、室温（２５℃）の値である。ｐＨ調整は、酢酸、塩酸、硫酸等の酸、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリを用いて行うのが好ましい。
【００２５】
本発明の水溶液製剤中の溶存酸素濃度は１ｍｇ／Ｌ以下、特に０．５ｍｇ／Ｌ以下であるのがレボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましい。溶存酸素を除去するためには、容器空間部および水溶液製剤中の酸素を窒素などの不活性ガスで置換することが好ましい。例えば、水溶液製剤を窒素バブリングし、容器への充填を窒素雰囲気下行う方法等が好適に用いられる。不活性ガスとしては、例えば、窒素、またはヘリウム、アルゴン、ネオン等の希ガスが挙げられ、特に窒素が好ましい。
【００２６】
本発明の水溶液製剤は、有効成分であるレボホリナートまたはその塩が優れたフルオロウラシルの増強効果を有することから、活性型葉酸製剤として有用である。対象悪性腫瘍としては、胃癌、結腸・直腸癌等が挙げられる。
【００２７】
また、本発明の水溶液製剤の剤形としては、注射用製剤、特に静脈内投与用製剤が好ましい。当該注射用製剤とするにあたって、上記成分以外に注射用蒸留水、グルコース、マンノース、乳糖、イノシトールに代表される糖類、食塩等に代表される無機塩類、その他通常注射剤に用いる安定剤、賦形剤、緩衝剤等の成分を用いても良い。注射用製剤中にレボホリナートまたはその塩は、レボホリナート換算量で２〜５０ｍｇ／ｍＬ、さらに５〜５０ｍｇ／ｍＬ含有するのが好ましい。また、本発明の水溶液製剤は、レボホリナートまたはその塩を高濃度配合しても安定なので、レボホリナートまたはその塩をレボホリナート換算で５ｍｇ／ｍＬ以上とすることができる。
【００２８】
本発明の水溶液製剤には、さらに前記以外のグット緩衝剤、例えば２−モルホリノエタンスルホン酸，一水和物（以下、ＭＥＳという）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン（以下、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓという）、Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（以下、ＡＤＡという）、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＡＣＥＳという）、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下、ＭＯＰＳＯという）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＢＥＳという）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（以下、ＭＯＰＳという）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＴＥＳという）、３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（以下、ＤＩＰＳＯという）、２−ヒドロキシ−Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＴＡＰＳＯという）、ピペラジン−１，４−ビス（２−ヒドロキシ−３−プロパンスルホン酸），二水和物（以下、ＰＯＰＳＯという）、２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸，一水和物（以下、ＨＥＰＰＳＯという）、３−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］プロパンスルホン酸（以下、ＥＰＰＳという）、Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］グリシン（以下、Ｔｒｉｃｉｎｅという）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（以下、Ｂｉｃｉｎｅという）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＴＡＰＳという）、Ｎ−シクロヘキシル−２−アミノエタンスルホン酸（以下、ＣＨＥＳという）、Ｎ−シクロヘキシル−２−ヒドロキシ−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＣＡＰＳＯという）、Ｎ−シクロヘキシル−３−アミノプロパンスルホン酸（以下、ＣＡＰＳという）等が挙げられる。このうち、ＭＥＳ、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ、ＡＣＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＴＡＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＨＥＰＰＳＯ、ＥＰＰＳ等が好ましい。本発明の水溶液製剤中のレボホリナートまたはその塩１００ｍｇ（レボホリナート換算）に対して、これらのグッド緩衝剤は０．１ｍｇ〜飽和量、さらに０．１ｍｇ〜１０ｇ含有するのが、レボホリナートまたはその塩の水溶液中での安定性向上の点で好ましく、医薬品としての安全性を考慮すると０．１ｍｇ〜１ｇ、さらに０．１〜１００ｍｇ含有するのが特に好ましい。
【００２９】
本発明の水溶液製剤は、さらに必要に応じて、等張化剤（グルコース、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトール等）、無痛化剤（グルコース、イノシトール、ベンジルアルコール、塩酸メピバカイン、塩酸キシロカイン、塩酸プロカイン、塩酸カルボカイン、グリセリン、プロピレングリコール、塩酸リドカイン等）、防腐剤（パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等のパラオキシ安息香酸エステル、チメロサール、クロロブタノール、ベンジルアルコール等）を用いることができる。これらの添加量は、当業者が公知の技術に従って容易に設定することができる。
【００３０】
本発明の水溶液製剤は光から保護するためにアンバーガラス等の遮光性の容器を用いてもよい。さらに必要に応じて、光安定化剤を添加してもよく、薬学的に許容される光安定化剤は広く利用できるが、例えば、グルコース、ショ糖、フラクトース、マルトース等の糖類、キシリトール、ソルビトール、マンニトール等の糖アルコール、グリセリン、プロピレングリコール等の多価アルコールを挙げることができる。その他、ベンゾトリアゾール誘導体、ベンゾフェノン誘導体、サリチル酸誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、桂皮酸誘導体、ウロカニン酸誘導体、リボフラビン、葉酸等も好適な光安定化剤である。本発明の水溶液製剤には、これらの光安定化剤の一種以上を配合することができ、その添加量は、０．０１〜１ｗ／ｖ％、好ましくは０．０５〜０．１ｗ／ｖ％である。
【００３１】
本発明の水溶液製剤は、さらに必要に応じて抗酸化剤を添加してもよい。抗酸化剤としては、アスコルビン酸またはその塩、ピロ亜硫酸ナトリウム、塩酸システイン、亜硫酸水素ナトリウム、チオグリセロール、チオグリコール酸またはその塩、および亜硫酸ナトリウム等が用いられ、その塩としてはその薬学的に許容される塩が例示される。本発明の水溶液製剤には、これらの抗酸化剤の一種以上を配合することができ、その添加量は、当業者が公知の技術に従って容易に設定することができる。
【００３２】
本発明の水溶液製剤は、必要に応じて他の薬物（塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル、ウラシル、マイトマイシン等の抗悪性腫瘍剤等）を含有していてもよく、また他の薬物を別に包装し、本発明の水溶液製剤とキット製品としてもよい。
【００３３】
本発明において、注射用水溶液製剤とは、最終形態での注射剤に限らず、用時に溶解液（希釈液）を用いて最終注射液に調製することができる注射液前駆体製剤（液状注射剤、濃厚注射剤等）をも含む意味に用いる。
【００３４】
本発明の水溶液製剤は、自体公知の方法により製造することができる。例えば、レボホリナートカルシウム、ＨＥＰＥＳ、トリエタノールアミン、ニコチン酸アミドを含む水溶液のｐＨを所定の値に調整後、所定のレボホリナートカルシウム濃度に希釈する。その後、無菌条件下にて除菌ろ過し、アンプル、バイアル、シリンジ（プレフィルドシリンジ）等の容器に充填し、密封することにより製造することができる。
【００３５】
本発明の方法により、レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液にＨＥＰＥＳまたはその塩、ＰＩＰＥＳまたはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することで、レボホリナート含有水溶液を安定化することができる。
【実施例】
【００３６】
以下、実施例を挙げて本発明の内容をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより何ら制約されるものではない。
【００３７】
実施例１ 各種添加剤の安定化効果
（１）サンプル調製および試験方法
レボホリナートカルシウムの５ｍｇまたは２０ｍｇ（レボホリナートとして）／ｍＬ水溶液を超音波処理および攪拌により調製する。この液にＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａ、ニコチン酸アミドをそれぞれ添加し、水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨ９に調整し、６０℃で保存し１週間ごとにサンプリングし５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣで分析した。
【００３８】
（２）ＨＰＬＣ分析条件
カラム：内径４．６ｍｍ，長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフ用オクタデシルシリル化シリカゲルを充てんする（Ｌ−ｃｏｌｕｍｎ ＯＤＳ ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）
カラム温度：４５℃付近の一定温度
移動相：０．００８ｍｏｌ／Ｌリン酸二水素ナトリウム溶液／メタノール／テトラブチルアンモニウムヒドロキシド試液混液（３８５：１１０：４）にリン酸を加えてｐＨを７．５に調整する
流量：レボホリナートの保持時間が約１０分になるように調整する（約１．０ｍＬ／ｍｉｎ）
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２５４ｎｍ）
【００３９】
（３）結果
表１に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液は６０℃で保存して安定性試験を実施した。注射用水のみでは２週間後には沈殿物が認められたが、これに各種添加剤を添加すると顕著に安定性が向上し、特にＨＥＰＥＳ、ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａを添加した場合には４週間後においても極めて優れた安定化効果を奏することが確認された。
【００４０】
【表１】
【００４１】
実施例２ 安定性評価試験（ｐＨの検討）
（１）サンプル調製および試験方法
表２に示す各添加剤の水溶液にレボホリナートカルシウムを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。これに水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨを８．０、９．０、１０．０および１１．０に調整する。この液を６０℃で２週間保存し、１週間ごとにサンプリングした。サンプリングした液は、５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣにより分析した（ＨＰＬＣ条件は実施例１に従う）。
【００４２】
（２）結果
表２に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液は６０℃で保存して安定性試験を実施した。ＨＥＰＥＳを単独で添加した場合と、さらにニコチン酸アミドを組み合わせて添加した場合では、全てのｐＨ領域において後者の処方による安定化効果の方が向上する傾向が見られたが、両者ともｐＨ９．０〜１０．０の場合に極めて優れた安定化効果を示した。また２０ｍｇ／ｍＬという高濃度なレボホリナート含有水溶液に対しても十分な安定化効果を奏することが確認された。
【００４３】
【表２】
【００４４】
実施例３ 安定性評価試験（処方の検討）
（１）サンプル調製および試験方法
表３〜５に示す各添加剤の水溶液にレボホリナートカルシウムを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。これに水酸化ナトリウム溶液を加えｐＨ９．５に調整する。この液を６０℃で１ヶ月間保存し、１週間ごとにサンプリングした。サンプリングした液は、５０％メタノールで希釈しＨＰＬＣにより分析した（ＨＰＬＣ条件は実施例１に従う）。
【００４５】
（２）結果
表３に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液（レボホリナートとして５ｍｇ／ｍＬ）は６０℃で保存して安定性試験を実施した。注射用水のみでは２週間後にはレボホリナートの残存率が約７０％以下になり、３週間後には沈殿物が認められた。これにＨＥＰＥＳを添加すると４週間後にも沈殿は認められずレボホリナートの残存率は９０％以上であった。ＨＥＰＥＳに加えトリエタノールアミンを添加することで、４週間目の残存率が９２％以上に上昇し、さらにニコチン酸アミドの添加でより高い残存率（約９４％）が得られた。
【００４６】
表４および５に示したようにレボホリナートカルシウムの水溶液（レボホリナートとして１０ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬ）についても同様に６０℃で保存して安定性試験を実施した。高濃度になるにしたがって残存率が低下する傾向は見られたものの、添加剤なし（注射用水のみ）の場合と比較すると、ＨＥＰＥＳ単独添加により極めて優れた安定化効果が認められ、さらに他の１種以上の添加剤を組み合わせて添加することで、より安定化効果が向上した。
【００４７】
【表３】
【００４８】
【表４】
【００４９】
【表５】
【００５０】
実施例４
次の製法により、下記の例１〜６の注射剤を得た。
０．０６７ｍｇ／ｍＬ濃度に調整したＨＥＰＥＳ水溶液の１８ｍＬにレボホリナートカルシウム１２２ｍｇを加え、５０℃の温水中で攪拌し良く溶かす。この液に添加剤を加えて攪拌して溶かした。この液に各添加剤を加えて溶かした後、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを９．５に調整し、ＨＥＰＥＳ水溶液を加えて２０ｍＬとした。
【００５１】
例１
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５２】
例２
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５３】
例３
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
ニコチン酸アミド ５７．３ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５４】
例４
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５５】
例５
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＨＥＰＥＳ １．３４ｍｇ
トリエタノールアミン ６．８３ｍｇ
ニコチン酸アミド ５７．３ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５６】
例６
レボホリナートカルシウム １２２ｍｇ
ＰＩＰＥＳ−１．５Ｎａ ２０ｍｇ
メグルミン １０００ｍｇ
トロメタモール １５．８ｍｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 全量２０ｍＬ
ｐＨ９．５
溶存酸素濃度０．５ｍｇ／Ｌ
【００５７】
例１〜６のレボホリナート含有水溶液製剤（注射剤）は、いずれも微黄色澄明な水溶液であって、レボホリナートの結晶析出および分解は認められなかった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分（Ａ）および（Ｂ）：
（Ａ）レボホリナートまたはその塩
（Ｂ）（ｉ）４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩
（ii）ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、および
（iii）ニコチン酸アミド
の群から選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とするレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項２】
さらにｐＨが９〜１１であることを特徴とする請求項１記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項３】
さらにトリエタノールアミン、メグルミン、およびトロメタモールの群から選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする請求項１または２記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項４】
レボホリナートの塩が、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である請求項１〜３のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項５】
レボホリナートの塩が、カルシウム塩である請求項１〜４のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項６】
注射用水溶液製剤である請求項１〜５のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項７】
レボホリナートまたはその塩の濃度が、レボホリナート換算で５ｍｇ／ｍＬ以上である請求項１〜６のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項８】
水溶液製剤中の溶存酸素濃度が１ｍｇ／Ｌ以下である請求項１〜７のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項９】
レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液に４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することを特徴とするレボホリナート含有水溶液の安定化方法。
【請求項１０】
さらにｐＨを９〜１１に調整することを特徴とする請求項９記載のレボホリナート含有水溶液の安定化方法。
【請求項１】
次の成分（Ａ）および（Ｂ）：
（Ａ）レボホリナートまたはその塩
（Ｂ）（ｉ）４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩
（ii）ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、および
（iii）ニコチン酸アミド
の群から選ばれる１種以上の化合物
を含有することを特徴とするレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項２】
さらにｐＨが９〜１１であることを特徴とする請求項１記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項３】
さらにトリエタノールアミン、メグルミン、およびトロメタモールの群から選ばれる１種以上の化合物を含有することを特徴とする請求項１または２記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項４】
レボホリナートの塩が、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩である請求項１〜３のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項５】
レボホリナートの塩が、カルシウム塩である請求項１〜４のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項６】
注射用水溶液製剤である請求項１〜５のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項７】
レボホリナートまたはその塩の濃度が、レボホリナート換算で５ｍｇ／ｍＬ以上である請求項１〜６のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項８】
水溶液製剤中の溶存酸素濃度が１ｍｇ／Ｌ以下である請求項１〜７のいずれか１項記載のレボホリナート含有水溶液製剤。
【請求項９】
レボホリナートまたはその塩を含有する水溶液に４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸またはその塩、ピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸）またはその塩、およびニコチン酸アミドから選ばれる１種以上の化合物を添加することを特徴とするレボホリナート含有水溶液の安定化方法。
【請求項１０】
さらにｐＨを９〜１１に調整することを特徴とする請求項９記載のレボホリナート含有水溶液の安定化方法。
【公開番号】特開２００８−２２２６７４（Ｐ２００８−２２２６７４Ａ）
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−６６６２４（Ｐ２００７−６６６２４）
【出願日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【出願人】（０００００６８８４）株式会社ヤクルト本社 (132)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【出願人】（０００００６８８４）株式会社ヤクルト本社 (132)
【Ｆターム（参考）】
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