二機能性ポリマーに結合させたインフルエンザウイルス阻害剤
ポリマーに結合した２種類以上の抗ウイルス剤を含む抗菌組成物、並びに該組成物を製造する方法及び使用する方法を本明細書に記載する。一実施形態においては、２種類以上の抗ウイルス剤がポリマーに共有結合している。適切な抗ウイルス剤としては、シアル酸、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。ポリマーは、好ましくは水溶性生体適合性ポリマーである。適切なポリマーとしては、ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）（ＰＩＢＭＡ）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（ｌ−グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体が挙げられるが、それだけに限定されない。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は一般に、殺ウイルス性および／またはウイルス抑止性の活性を示す、ポリマー組成物の分野にある。
【０００２】
（関連出願の引用）
本願は、２００７年８月２７日に出願した米国出願第６０／９６８，２１３号の利益およびそれに対する優先権を主張する。
【０００３】
政府支援
米国政府は、Ａｒｍｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｆｆｉｃｅとの契約ＤＡＡＤ−１９−０２−Ｄ−０００２の下でＭＩＴのＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｓｏｌｄｉｅｒ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを介した米国陸軍による財政支援、並びにＪｉａｎｚｈｕ ＣｈｅｎへのＮＩＨ助成金ＡＩ５６２６７（６８９５４８１）及びＡＩ０７４４４３（６９１５７３９）に基づいて、この技術における一定の権利を有することができる。
【背景技術】
【０００４】
Ａ型インフルエンザウイルスは、人間集団において流行及び汎発流行を引き起こし、膨大な苦痛及び経済的損失を与える。現在、２つの異なる戦略、すなわちワクチン及び小分子治療薬を使用して、ウイルスの蔓延を抑制することが試みられている。しかし、ワクチン接種は、防御が限られており、将来広まる系統を正確に予測すること、大集団に十分な量のワクチンを短期間で製造すること、リスクがある集団にワクチンを投与することなどの幾つかの物流の問題が足かせになっている。
【０００５】
小分子治療薬に関しては、現在、インフルエンザの治療及び／又は防御のために４種類の抗ウイルス薬、すなわちアマンタジン、リマンタジン、ザナミビル及びオセルタミビルがある。これらの薬剤は、インフルエンザ感染症の重症度及び期間を減少させ得るが、有効であるためには、発症後２４〜４８時間以内に投与されなければならない。さらに、安定な伝染性薬剤耐性インフルエンザ系統の出現は、これらの薬剤を無効にするおそれがある。
【０００６】
薬剤耐性に打ち勝つために、微生物の異なる生命維持プロセスを同時に妨げる２種類以上の薬剤を含む併用療法を使用しなければならない。アマンタジン及びリマンタジンはＭ２イオンチャネルタンパク質を阻害するのに対して、ザナミビル及びオセルタミビルはノイラミニダーゼ酵素（ＮＡ）を阻害する。残念ながら、広まっているインフルエンザウイルスの大部分は、Ｍ２阻害剤に対して既に抵抗性であるので、これら４種類の薬剤を含む伝統的併用療法は、インフルエンザ抑制に対してほとんど付加価値がない。微生物の耐性の発生を阻止又は防止しつつ、ウイルス感染症を治療するのに有効である抗ウイルス組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の一目的は、ウイルスの耐性の発生を阻止又は防止しつつ、インフルエンザなどのウイルス感染症を治療するのに有効である抗ウイルス組成物、並びにその製造方法及び使用方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ポリマーに結合した１種類以上の抗ウイルス剤を含む抗ウイルス組成物、並びに該組成物の製造方法及び使用方法を本明細書に記載する。１種類以上の抗ウイルス剤がポリマーに共有結合し、それによって薬剤耐性の発生を防止又は減少させる。適切な抗ウイルス剤としては、シアル酸、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。ポリマーは、好ましくは水溶性生体適合性ポリマーである。適切なポリマーとしては、ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）（ＰＩＢＭＡ）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸（ｐｌｙａｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン、並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体が挙げられるが、それだけに限定されない。別の一実施形態においては、組成物は、１種類の抗ウイルス剤を含むポリマーと第２の抗ウイルス剤を含むポリマーとの物理的混合物を含む。一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸、ザナミビルなどの２種類の抗菌剤を含む。別の一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸などの第１の抗菌剤とＰＩＢＭＡに結合したザナミビルなどの第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。
【０００９】
抗ウイルス剤（単数又は複数）の濃度は、ポリマーの約５重量％から約２５重量％である。一実施形態においては、各抗ウイルス剤の濃度は独立にポリマーの５重量％、ポリマーの８重量％、ポリマーの１０重量％、ポリマーの１５重量％、ポリマーの１８重量％、ポリマーの２０重量％又はポリマーの２５重量％である。
【００１０】
組成物は、経腸投与又は非経口投与用に調合することができる。適切な経口剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤及びロゼンジが挙げられるが、それだけに限定されない。鼻腔内に適した剤形としては、液剤、懸濁剤、散剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。非経口投与に適した剤形としては、液剤、懸濁剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００１１】
本明細書に記載の組成物は、耐性の発生を阻止又は防止しつつ、インフルエンザ、呼吸器合胞体（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｈｉａｌ）ウイルス、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルスなどの種々のウイルス感染症及び他の呼吸器疾患を治療するのに有効である。例えば、ポリ（イソブイレン（ｉｓｏｂｕｙｌｅｎｅ）−ａｌｔ−無水マレイン酸）、１０％ザナミビル及び１０％シアル酸を含む複合体は、ＩＣ５０値が７ｎＭであり、これは単量体ザナミビルと比較して９０倍の増加である。別の例においては、単機能性薬剤の等モル濃度の組合せ（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）は、野生型系統であろうと変異体系統であろうと、単機能性多価薬剤よりも少なくとも１桁強力なＡ型インフルエンザウイルス阻害剤であった。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１−１】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図１−２】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図１−３】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図２】図２は、ザナミビルの活性化誘導体をポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図３】図３は、シアル酸のＯ−グリコシドの合成のための反応スキームを示す。
【図４】図４は、シアル酸のＯ−グリコシドをポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図５】図５は、ザナミビルの活性化誘導体とシアル酸のＯ−グリコシドの両方をポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図６】図６は、マウス肺におけるインフルエンザウイルス産生のＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡによる阻害を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
Ｉ．定義
本明細書で用いる「殺ウイルス性」（ｖｉｒｕｃｉｄａｌ）とは、ウイルスを中和するか又は破壊する能力のあることを意味する。
【００１４】
本明細書で用いる「ウイルス抑止性」（ｖｉｒｕｓｔａｔｉｃ）とは、ウイルスの複製を阻害することを意味する。
【００１５】
本明細書で用いる「生体適合性」とは、材料が生組織に対して傷害反応も毒性反応も免疫反応も生じないことを意味する。
【００１６】
本明細書で用いる「水溶性ポリマー」とは、水又は単相の水性−有機混合物に少なくとも幾らかの測定可能な溶解性、例えば、室温で１ｍｇ／リットルを超える溶解性を有するポリマーを意味する。
【００１７】
本明細書で用いる「ＩＣ５０」とは、共に同一条件下のプラーク減少アッセイで測定して、ポリマー結合薬剤（ｒｕｇ）の非存在下で観察されたプラーク数と比較してプラーク数を５０％減少させるポリマー結合薬剤の濃度を意味する。ＩＣ５０は、感染症防止の尺度になる。
【００１８】
本明細書で用いる「薬剤耐性を阻害又は減少させる」とは、耐性ウイルスの発生率を低下させること、又はザナミビルなどの抗ウイルス薬に対して既に抵抗性であるインフルエンザウイルスを阻害することを指す。
【００１９】
ＩＩ．組成物
水溶性ポリマーに共有結合した１種類以上の抗ウイルス剤を含む抗ウイルス組成物を本明細書に記載する。一実施形態においては、２種類以上の抗ウイルス剤が水溶性ポリマーに結合している。別の一実施形態においては、組成物は、第１の抗ウイルス剤に結合した第１の水溶性ポリマーと第２の抗ウイルス剤に結合した第２の水溶性ポリマーとのブレンドを含む。
【００２０】
抗ウイルス剤
抗ウイルス剤は、ポリマーに結合後もその活性の一部を保持するのであれば、いずれの抗ウイルス剤も使用することができる。例示的クラスの抗ウイルス薬としては、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２阻害剤、プロテイナーゼ阻害剤、イノシン５’−一リン酸塩（ＩＭＰ）デヒドロゲナーゼ（細胞酵素）阻害剤、ウイルスＲＮＡポリメラーゼ阻害剤及びｓｉＲＮＡが挙げられるが、それだけに限定されない。適切な薬剤としては、シアル酸、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。ザナミビル及びオセルタミビルはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）酵素（ＮＡ）を阻害し、アマンタジン及びリマンタジンはＭ２イオンチャネルタンパク質を阻害する。
【００２１】
ザナミビルは、ウイルスＮＡの触媒作用部位に結合してその活性を阻害する比較的小さい分子（ＭＷ１，０００Ｄａ）である。共有結合性リンカーを介してザナミビルに結合したポリマーは、ポリマー中のザナミビル部分が依然として触媒作用部位に結合してＮＡ活性を阻害することができるように、調製することができる。かかるポリマー結合抗ウイルス剤は、インフルエンザなどのウイルス感染症の阻止と薬剤耐性ウイルスの出現の防止の両方に有効であるはずである。
【００２２】
特定の理論に拘泥するものではないが、ポリマー結合抗ウイルス剤は、多価結合のために単量体抗ウイルス剤よりも強力な阻害剤であると仮定される。インフルエンザビリオンは、３０〜５０個のＮＡ分子と３００〜５００個のＨＡ分子を含む。したがって、同一ポリマー骨格に結合した複数のザナミビル及び複数のシアル（ＳＡ）部分が存在すると、同一ビリオン上の複数のＮＡ及びヘマグルチニン（ＨＡ）に同時に結合することができる。ポリマー結合抗ウイルス部分とＮＡ／ＨＡとのアビディティのこのかなりの増加によって、ポリマー−抗ウイルス剤複合体はより強力な競合的阻害剤になるはずである。第二に、ＮＡ／ＨＡの変化が酵素の活性部位への単量体抗ウイルス剤の結合をかなり弱める場合でも、多価結合のために、ポリマー結合抗ウイルス剤はＮＡ／ＨＡの強力な阻害剤のままであるはずである。例えば、ザナミビルは、ＮＡの活性部位に親和定数１０−１０Ｍから１０−９Ｍ（０．１ｎＭ〜１．０ｎＭ）で結合する。結合親和性が１／１０６から１／１０４に低下した場合でも、同一ポリマー骨格に結合した３個を超えるザナミビル部分が同一ビリオン上のＮＡに同時に結合するのであれば、複合体は、依然として強力な阻害剤であるはずである。これは、ザナミビルが大部分のザナミビル耐性ウイルスのＮＡの触媒作用部位に依然として結合するという事実（ＩＣ５０ １５ｎＭから６４５ｎＭ）によって裏付けられる。最後に、複数のＮＡ分子に大きいポリマーが結合すると、感染細胞からのウイルス放出の妨害に加えてウイルスの感染を妨害する立体障害又はウイルス凝集体を生成することができる。
【００２３】
異なる標的を介してインフルエンザウイルスを阻害する２種類以上の別の阻害剤を同一ポリマー骨格に結合させること、及び／又は単機能性ポリマー結合リガンドの組合せは、ウイルスの耐性をより有効に抑制するはずである。例えば、インフルエンザウイルス感染中に、細胞表面の糖タンパク質のシアル酸（ＳＡ）残基へのヘマグルチニン（ＨＡ）の結合は、細胞へのウイルス侵入に極めて重要である。ＳＡはインフルエンザウイルスに対する細胞受容体であるので、ＳＡ自体の使用は、ウイルスの耐性を抑制するのに役立ち得る。というのは、シアル酸に結合しないウイルスＨＡは、宿主細胞に感染する能力の低下である可能性があるからである。
【００２４】
ザナミビルとシアル酸の両方は、ビリオン上の特定の標的（それぞれＮＡ及びＨＡ）に結合することによってその効果を発揮する。したがって、これらの薬剤が同一ポリマー骨格に結合すると、その阻害効果を発揮するために細胞に取り込まれる必要がない組成物が得られるはずである。同一ポリマー骨格に共有結合したザナミビルとシアル酸の両方を含むか又はザナミビルを含むポリマーとシアル酸を含むポリマーとの物理的混合物を含むかの二機能性ポリマーは、薬剤耐性ウイルスの出現を防止するのに特に有効であることが判明し得る。ザナミビルとシアル酸は、異なる標的を介してインフルエンザウイルスを阻害し、したがって併用療法の利点があるはずである。さらに、多価結合のために、重合体阻害剤は、単量体阻害剤に対して抵抗性であるウイルスに対して有効なままであり得る。
【００２５】
抗ウイルス剤の濃度は、ポリマーの約５重量％から約２５重量％である。一実施形態においては、各抗ウイルス剤の濃度は独立にポリマーの５重量％、ポリマーの８重量％、ポリマーの１０重量％、ポリマーの１５重量％、ポリマーの１８重量％、ポリマーの２０重量％又はポリマーの２５重量％である。
【００２６】
Ｂ．ポリマー
２種類以上の抗菌剤が任意の水溶性生体適合性ポリマーに結合することができる。一実施形態においては、２種類以上の抗菌剤が同一ポリマーに結合する。別の一実施形態においては、組成物は、第１の水溶性生体適合性ポリマーに結合した第１の抗菌剤と第２の水溶性生体適合性ポリマーに結合した第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。ポリマーは、同じポリマー（すなわち、同じ化学組成及び分子量を有する。）でも異なるポリマー（すなわち、異なる化学組成及び／又は分子量）でもよい。
【００２７】
ポリマーは、好ましくは無毒で非免疫原性であり、生きている生物体から容易に排出される。一実施形態においては、ポリマーは生分解性である。好ましくは、抗ウイルス剤（単数又は複数）は、抗ウイルス剤とウイルスの結合に関与しないことが示された官能基を介してポリマーに結合する。例えば、インフルエンザＮＡに結合したザナミビルのＸ線結晶構造によれば、糖の７−ヒドロキシル基はＮＡと直接接触せず、したがって７位を介したポリマーへの薬剤の結合は結合相互作用を損なわないはずである。７−ヒドロキシル基をアミノ基、またはスルフヒドリル基などの別の反応性官能基に変換することもできる。したがって、ヒドロキシ基、アミノ基若しくはスルフヒドリル基と反応する官能基、又はヒドロキシ基、アミノ基若しくはスルフヒドリル基と反応する官能基に変換可能である基を含むポリマーを使用して、本明細書に記載の組成物を調製することができる。あるいは、ポリマーは、抗菌剤上の求電子基と反応するヒドロキシ基、アミノ基、またはチオール基などの求核基を含むことができる。
【００２８】
適切なポリマーとしては、ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）（ＰＩＢＭＡ）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体が挙げられるが、それだけに限定されない。ポリマーは、典型的には、１，０００から１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００から１，０００，０００ダルトンの分子量を有する。一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸、ザナミビルなどの２種類の抗菌剤を含む。別の一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸などの第１の抗菌剤とＰＩＢＭＡに結合したザナミビルなどの第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。
【００２９】
ＩＩＩ．製造方法
本明細書に記載の組成物は、抗ウイルス剤又はその誘導体を水溶性生体適合性ポリマーに共有結合することによって調製することができる。例えば、ポリマーに結合させる抗ウイルス剤を、当技術分野で公知の種々の化学反応によって活性化して、反応性誘導体を形成する。抗菌剤の反応性誘導体は、ポリマーと反応して、抗ウイルス剤をポリマーに共有結合的に連結させる。反応性誘導体は、ポリマー上の求電子基又は求核基と反応する求核基又は求電子基を含むことができる。
【００３０】
一実施形態においては、シアル酸を抗ウイルス剤ザナミビルの活性化誘導体に変換する。図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームである。図２は、ザナミビル中の糖の７−ヒドロキシル基を介して活性化ザナミビルをＰＩＢＭＡに結合させる反応スキームである。インフルエンザＮＡに結合したザナミビルのＸ線結晶構造によれば、糖の７−ヒドロキシル基はＮＡと直接接触せず、したがって７位を介したポリマーへの薬剤の結合は結合相互作用を損なわないはずである。図３は、シアル酸のＯ−グリコシドの合成のための反応スキームである。シアル酸のＯ−グリコシドは、図４に示すようにＰＩＢＭＡに結合する。図５は、活性化ザナミビル誘導体とシアル酸のＯ−グリコシドの両方をＰＩＢＭＡに同時に結合させる反応スキームである。
【００３１】
投与すべき投与量は、当業者が容易に決定することができ、患者の年齢及び体重並びに治療すべき感染症に応じて決まる。ポリマーに結合される抗ウイルス剤分子の量は、ポリマー上の反応基数に依存する。例えば、重量平均分子量１６５ｋＤａのＰＩＢＭＡは、約１，０７０個の繰り返し単位を有する。ポリマー鎖１本当たりの平均シアル酸残基数は、５％、１０％、１２％、１６％及び３３％占有率であり、それぞれ５３、１０６、１２８、１７１及び３５３である。同様に、５〜２５％ザナミビルを含むＰＩＢＭＡ（１６５ｋＤａ）は、ポリマー鎖１本当たり５３〜２６７個のザナミビル部分を含む。１０％シアル酸と１０％ザナミビルを有するＰＩＢＭＡ重合体鎖は、２個の糖部分の各々ほぼ１０６単位を含む。
【００３２】
ＩＶ．使用方法及び投与方法
本明細書に記載の組成物は、ヒトなどのほ乳動物における感染症の治療及び／又は防止に使用することができる。治療すべき感染症としては、インフルエンザなどのウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、又はそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。本明細書に記載の組成物は、非経口投与用又は経腸投与用に調合することができる。一実施形態においては、感染症は、トリ又はヒトインフルエンザＡ型又はＢ型などのウイルス感染症である。組成物は、野生型又は変異型のトリ及びヒトインフルエンザウイルスに対して有効である。
【００３３】
Ａ．剤形
本明細書に記載の組成物は、経腸製剤、非経口製剤又は局所製剤用に調合することができる。一実施形態においては、組成物を経腸投与用又は非経口投与用に調合する。製剤は、１種類以上の薬学的に許容される賦形剤、担体及び／又は添加剤を含むことができる。経腸剤形及び非経口剤形を調製する方法は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６ｔｈ Ｅｄ．，Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９５）に記載されている。
【００３４】
ａ．経腸剤形
適切な経口剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤及びロゼンジが挙げられる。錠剤は、当技術分野で周知である圧縮技術又は成形技術によって製造することができる。ゼラチンカプセル剤又は非ゼラチンカプセル剤は、当技術分野で周知である技術によって、液体、固体及び半固体充填材料を封入することができる硬カプセルシェル又は軟カプセルシェルとして調製することができる。
【００３５】
製剤は、安全で有効と考えられる材料で構成される薬学的に許容される担体を用いて調製することができ、望ましくない生物学的副作用も不必要な相互作用も起こさずに個体に投与することができる。担体は、医薬製剤中に存在する、活性成分又は複数の活性成分以外の全成分である。本明細書において一般に使用する「担体」としては、希釈剤、ｐＨ調節剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、充填剤及びコーティング組成物が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３６】
担体は、可塑剤、色素、着色剤、安定剤及び流動化剤を含み得るコーティング組成物の全成分も含む。放出遅延製剤は、”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ ｔａｂｌｅｔｓ”，ｅｄｓ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ ｅｔ．ａｌ．（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９８９）、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ−Ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２０００、および”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ”，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，（Ｍｅｄｉａ，ＰＡ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５）などの標準的参考文献に記載のように調製することができる。これらの参考文献は、錠剤及びカプセル剤並びに錠剤、カプセル剤及び顆粒剤の放出遅延剤形を調製するための担体、材料、装置及びプロセスに関する情報を提供する。
【００３７】
適切なコーティング材料の例としては、セルロースアセタートフタラート、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナートなどのセルロースポリマー；ポリビニルアセタートフタラート、アクリル酸ポリマー及びコポリマー、商品名ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）（Ｒｏｔｈ Ｐｈａｒｍａ，Ｗｅｓｔｅｒｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で市販されているメタクリル樹脂、ゼイン、シェラック、並びに多糖が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３８】
さらに、コーティング材料は、可塑剤、色素、着色剤、流動化剤、安定剤、ポア形成剤、界面活性剤などの従来の担体を含むことができる。
【００３９】
任意選択の薬学的に許容される賦形剤としては、希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、安定剤及び界面活性剤が挙げられるが、それだけに限定されない。希釈剤は、「充填剤」とも称され、典型的には、錠剤の圧縮又はビーズ及び顆粒の形成のために実用的なサイズを用意するように固体剤形の体積を増加させるのに必要である。適切な希釈剤としては、リン酸二カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、加水分解デンプン、アルファ化デンプン、二酸化ケイ素、酸化チタン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム及び粉糖が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４０】
結合剤を使用して固体投与製剤に凝集性を付与し、かくして錠剤、ビーズ又は顆粒剤が剤形調合後に確実に完全なままであるようにする。適切な結合剤材料としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、（スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース及びソルビトールを含めた）糖、ポリエチレングリコール、ワックス、アラビアゴム、トラガカントなどの天然ゴム及び合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース及びＶｅｅｇｕｍを含めたセルロース、並びにアクリル酸とメタクリル酸の共重合体、メタクリル酸共重合体、メタクリル酸メチル共重合体、メタクリル酸アミノアルキル共重合体、ポリアクリル酸／ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドンなどの合成ポリマーが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４１】
滑沢剤は、錠剤製造を容易にするのに使用される。適切な滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、グリセロールベヘナート、ポリエチレングリコール、タルク及び鉱油が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４２】
崩壊剤は、投与後に剤形の崩壊又は「分解」を容易にするのに使用され、一般に、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、アルファ化デンプン、クレイ、セルロース、アルギニン（ａｌｇｉｎｉｎｅ）、ゴム、又は架橋ＰＶＰ（ＧＡＦ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ製Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）ＸＬ）などの架橋ポリマーが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４３】
安定剤は、薬物分解反応を阻害又は遅延させるのに使用される。薬物分解反応としては、例として、酸化反応が挙げられる。
【００４４】
界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤とすることができる。適切な陰イオン界面活性剤としては、カルボン酸イオン、スルホン酸イオン及び硫酸イオンを含むものが挙げられるが、それだけに限定されない。陰イオン性界面活性剤の例としては、長鎖スルホン酸アルキル及びスルホン酸アルキルアリール（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなど）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどのジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、ビス−（２−エチルチオキシル）−スルホコハク酸ナトリウムなどのジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、並びにラウリル硫酸ナトリウムなどの硫酸アルキルのナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩が挙げられる。陽イオン性界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウムなどの第四級アンモニウム化合物、ポリオキシエチレン及びココナツアミンが挙げられるが、それだけに限定されない。非イオン性界面活性剤の例としては、エチレングリコールモノステアラート、プロピレングリコールミリスタート、グリセリルモノステアラート、グリセリルステアラート、ポリグリセリル−４−オレアート、ソルビタンアシラート（ａｃｙｌａｔｅ）、スクロースアシラート、ＰＥＧ−１５０ラウラート、ＰＥＧ−４００モノラウラート、ポリオキシエチレンモノラウラート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、ステアロイルモノイソプロパノールアミド及びポリオキシエチレン水素化獣脂アミドが挙げられる。両性界面活性剤の例としては、Ｎ−ドデシル−β−アラニンナトリウム、Ｎ−ラウリル−β−イミノジプロピオン酸ナトリウム、ミリストアンホアセタート（ｍｙｒｉｓｔｏａｍｐｈｏａｃｅｔａｔｅ）、ラウリルベタイン及びラウリルスルホベタインが挙げられる。
【００４５】
ｂ．非経口剤形
適切な非経口剤形としては、液剤、懸濁剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。非経口投与用製剤は、界面活性剤、塩、緩衝剤、ｐＨ調節剤、乳化剤、防腐剤、抗酸化剤、重量オスモル濃度／張性調節剤及び水溶性ポリマーを含めて、ただしそれだけに限定されない１種類以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。
【００４６】
乳剤は、典型的には、再構成後の非経口投与のためにｐＨ３〜８に緩衝化されている。適切な緩衝剤としては、リン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤及びクエン酸塩緩衝剤が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４７】
水溶性ポリマーは、非経口投与用製剤に使用されることが多い。適切な水溶性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース及びポリエチレングリコールが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４８】
防腐剤は、真菌及び微生物の増殖を防止するのに使用することができる。適切な抗真菌剤及び抗菌剤としては、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチピリジニウム（ｃｅｔｙｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール及びチメロサールが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４９】
別の剤形としては、液剤、懸濁剤、散剤及び乳剤を含めて、ただしそれだけに限定されない鼻腔内剤形が挙げられる。剤形は、１種類以上の薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含むことができる。適切な賦形剤及び担体は上述されている。
【実施例】
【００５０】
（実施例１：ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）−ザナミビル（ＰＩＭＢＡ−ＺＡ）複合体の合成）
ザナミビル誘導体の合成
以下の公表手順を一部変更して使用して単量体ザナミビル類似体を合成した：ａ）Ｃｈａｎｄｌｅｒ，Ｍ．，ＭＪ．Ｂａｍｆｏｒｄ，Ｒ．Ｃｏｎｒｏｙ，Ｂ．Ｌａｍｏｎｔ，Ｂ．Ｐａｔｅｌ，Ｖ．Ｋ．Ｐａｔｅｌ，Ｉ．Ｐ．Ｓｔｅｅｐｌｅｓ，Ｒ．Ｓｔｏｒｅｒ，Ｎ．Ｇ．Ｗｅｉｒ，Ｍ．Ｗｒｉｇｈｔ，ａｎｄ Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ．１９９５．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ４−ｇｕａｎｉｄｉｎｏ Ｎｅｕ５Ａｃ２ｅｎ．Ｘ−Ｒａｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４−ａｍｉｎｏ−２，６−ａｎｈｙｄｒｏ−３，４，５−ｔｒｉｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｅｒｙｔｒｏ−Ｌ−ｇｌｕｃｏ−ｎｏｎｏｎｉｃ ａｃｉｄ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：１１７３−１１８０。ｂ）Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｄ．Ｍ．，Ｐ．Ｃ．Ｃｈｅｒｒｙ，Ｄ．Ｃ．Ｈｕｍｂｅｒ，Ｐ．Ｓ．Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｐ．Ｋｅｅｌｉｎｇ，Ｐ．Ｆ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．Ｄ．Ｓｈａｗ，ａｎｄ Ｓ．Ｓｗａｎｓｏｎ．１９９９．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｓｉａｌｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ４−Ｇｕａｎｉｄｉｎｏ−Ｎｅｕ５Ａｃ２ｅｎ（Ｚａｎａｍｉｖｉｒ）ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：５６３−５７４。合成を図１に示す。
【００５１】
ＰＩＭＢＡ含有ザナミビル誘導体の合成
上で調製した単量体ザナミビル誘導体２８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＰＩＭＢＡ（１００ｍｇ、単量体基準で０．６５ｍｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）とピリジン（０．５ｍＬ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いでＮＨ４ＯＨ（２８％、１０ｍＬ）溶液を用いて室温で２４時間クエンチした。生成した混合物を蒸留水で４８時間透析し（分子量カットオフ３，５００ダルトン）、次いで凍結乾燥させて、白色粉末を得た。ポリマーは５％ＺＡを含んだ。８％ＺＡ、１８％ＺＡ及び２５％ＺＡを含む各ポリマーも調製した。ＰＩＭＢＡ−ＺＡの形成の反応スキームを図２に示す。ポリマー骨格に結合したザナミビル誘導体の量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化１】
【００５２】
（実施例２：ＰＩＭＢＡ−ＺＡ複合体の抗ウイルス活性）
ＰＩＭＢＡ−ＺＡの抗ウイルス活性を測定するために、プラーク減少アッセイを実施した。阻害剤の１０倍連続希釈物１２５μｌを等体積のインフルエンザＡ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５（Ｈ３Ｎ２）のリン酸塩緩衝化溶液（「ＰＢＳ」）（８００プラーク形成単位（ｐｆｕ）／ｍＬ）と混合することによってアッセイを実施した。室温で１時間インキュベーション後、反応混合物２００μｌを６ウェル細胞培養プレート中のコンフルエントなＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（「ＭＤＣＫ」）細胞に添加し、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、溶液を吸引除去した。次いで、細胞にＦ１２プラーク培地２ｍｌを載せ、３７℃で３日間インキュベートした。培養物を１％ホルムアルデヒドを用いて室温で１時間固定し、細胞を１％クリスタルバイオレット色素溶液で染色し、プラークを数えた。対照として、阻害剤なし、単量体ザナミビル誘導体、又は裸のＰＩＭＢＡを使用した。プラーク数を対照実験（阻害剤なし）で観察されたプラーク数と比較することによって、ウイルスプラーク数を５０％低減させるのに必要な阻害剤濃度（ＩＣ５０）を計算した。比較を容易にするために、ＩＣ５０値をポリマー又はザナミビル誘導体の濃度として計算した。結果を表１に示す。
【００５３】
【表１】
【００５４】
表１に示すように、ＰＩＢＭＡ自体は、検出可能な抗ウイルス活性をほとんど持たない。ザナミビル誘導体のＩＣ５０は約６３０ｎＭである。対照的に、ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、（ザナミビル複合化の百分率に応じて）約５ｎＭであり、ほぼ１００倍の効力向上である。さらに、ポリマーに複合化されたザナミビルの割合の変動は、ＩＣ５０値に対しわずかな効果しか有さない。これらの結果は、水溶性ＰＩＢＭＡがザナミビル誘導体と容易に複合化することができ、ザナミビルは有効なままであることを示唆している。ザナミビル含有量５〜２５％は、ポリマー鎖１本当たりに平均５３から２６７個のザナミビル部分に相当することに注意されたい。ビリオン１個当たり３５〜５０個のＮＡ分子しか存在しないので、これはかなり過剰のザナミビル部分である。ザナミビル含有量を減少させることによって凝集体形成を促進することができ、したがってより強力なＰＩＢＭＡ−ＺＡ阻害剤を生成することができる。
【００５５】
（実施例３：ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）−シアル酸（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ）複合体の合成）
シアル酸のＯ−グリコシドの合成
シアル酸を以下の公表手順によってリンカーに結合させた：ａ）Ｂａｕｍｂｅｒｇｅｒ，Ｆ．，Ａ．Ｖａｓｅｌｌａ，ａｎｄ Ｒ．Ｓｃｈａｕｅｒ．１９８６．４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３，４，５−ｔｒｉｄｅｏｘｙ−−Ｄ−ｍａｎｎｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｏｎｉｃ Ａｃｉｄ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ６９：１９２７−１９３５。ｂ）Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｇ．，ａｎｄ Ｌ．Ｌａｕｒａ．１９８８．Ａｎ ａｚｉｄｏａｒｙｌ ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｏｆ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ．Ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｂｅ ｏｆ ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ ａｎｄ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７６：２１１−２１８。ｃ）Ｂｙｒａｍｏｖａ，Ｎ．Ｅ．，Ｌ．Ｖ．Ｍｏｃｈａｌｏｖａ，Ｉ．Ｍ．Ｂｅｌｙａｎｃｈｉｋｏｖ，Ｍ．Ｎ．Ｍａｔｒｏｓｏｖｉｃｈ，ａｎｄ Ｎ．Ｖ．Ｂｏｖｉｎ．１９９１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ｓｐａｃｅｒ−ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ Ｎｅｕ５Ａｃ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒ．Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．１０：６９１−７００。合成を図３に示す。
【００５６】
芳香族、ポリマー
シアル酸のＯ−グリコシドのポリマーの合成
上で調製したシアル酸のＯ−グリコシドの複合化は、ザナミビル誘導体とＰＩＢＭＡの複合化の場合の上記同じ方法論に従う。ポリマーは５％ＳＡを含んだ。１０％ＳＡ、１２％ＳＡ、１６％ＳＡ及び３３％ＳＡを含む各ポリマーも調製した。ＰＩＭＢＡ−ＳＡの形成の反応スキームを図４に示す。ポリマー骨格に結合したシアル酸誘導体の量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化２】
【００５７】
（実施例４：ＰＩＭＢＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性）
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性を測定するために、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ複合体の場合に上述したようにプラーク減少アッセイを実施した。結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
【００５９】
表２に示すように、リンカーで改変されたシアル酸は、検出可能な抗ウイルス活性を持たなかった。ＰＩＢＭＡ−ＳＡのＩＣ５０値は、ポリマーと複合化されたＳＡの割合に応じて１１４ｎＭから３ｎＭの範囲である。ポリマー中の利用可能な部位の５％又は１０％がシアル酸誘導体と複合化された状態で、ＩＣ５０値は約１００ｎＭである。占有率１２％では、ＩＣ５０値はほぼ１／５の２２ｎＭに低下した。占有率１６％では、ＩＣ５０値はさらに１／７に低下して３ｎＭになった。しかし、占有率３３％では、ＩＣ５０値は１７ｎＭに上昇した。シアル酸含有量の関数としてのＩＣ５０値のこれらの変動は、ＳＡ複合化の最適量が存在することを示唆している。
【００６０】
ＰＩＢＭＡ骨格の重量平均分子量は１６５ｋＤａであり、これは１，０７０個の繰り返し単位に対応する。占有率５％、１０％、１２％、１６％及び３３％におけるポリマー鎖１本当たりの平均シアル酸残基数は、それぞれ５３、１０６、１２８、１７１及び３５３である。各インフルエンザビリオンは３５０〜５００個のＨＡ分子を有するので、ＩＣ５０値とポリマー鎖と複合化されたシアル酸の数との間に単純な相関があるようには見えない。
【００６１】
（実施例５：ザナミビルとシアル酸の両方を有するＰＩＢＭＡの合成）
シアル酸とザナミビル誘導体の両方の同一ＰＩＢＭＡポリマーへの複合化は、ザナミビルとＰＩＢＭＡの複合化の場合の上記同じ方法論によって実施することができる。シアル酸のＯ−グリコシドを、無水ＤＭＦとピリジン中のＰＩＢＭＡ溶液に添加した。ザナミビル類似体を添加し、反応混合物をＮＨ４ＯＨでクエンチした。得られた溶液を蒸留水で透析し、凍結乾燥させて白色粉末を得た。ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの形成の反応スキームを図５に示す。ポリマー骨格に結合したシアル酸及びザナミビルの量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化３】
【００６２】
（実施例６：ＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性）
パイロット研究では、１０％シアル酸と１０％ザナミビルを含む二機能性ポリマーを調製し、そのＩＣ５０値をプラーク減少アッセイによって測定した。結果を表３に示す。
【００６３】
【表３】
【００６４】
表３に示すように、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡのＩＣ５０値は７ｎＭであり、これは単量体ザナミビル誘導体と比較して９０倍の増加である。プラーク減少アッセイは、ＰＢＳ（対照）に比較して、５００ｎｇ／ｍｌから０．０５ｎｇ／ｍｌまでの漸減濃度のＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡを含むＭＤＣＫ細胞培養物においてＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡによるインフルエンザウイルス（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）感染の阻害を示した。
【００６５】
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ、ＰＩＢＭＡ−ＳＡ−ＺＡ、及びＰＩＢＭＡ−ＳＡとＰＩＢＭＡ−ＺＡの組合せをヒトインフルエンザＡ型（Ａ／Ｗｕｈａｎ／３５９／９５（Ｈ３Ｎ２）及びオセルタミビルに抵抗性であるその変異体バージョン）及びインフルエンザＢ型（ザナミビルとオセルタミビルの両方に抵抗性であるＢ／Ｈｏｎｇ−Ｋｏｎｇ／３６／０５変異体系統）に対しても試験した。表４に示すように、ＰＩＢＭＡ−ＳＡは、インフルエンザＡ型とインフルエンザＢ型の両方に対してシアル酸誘導体（単量体）よりも＞１０２〜１０３倍活性である。ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、Ａ型インフルエンザウイルスの野生型及び変異体系統に対してそれぞれ７７ｎＭ及び２５０ｎＭであり、ザナミビル誘導体のＩＣ５０値１３μＭ及び１２０μＭよりもはるかに低い。
【００６６】
単機能性薬剤の等モル濃度の組合せ（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）は、最良の単機能性多価薬剤、すなわちＰＩＢＭＡ−ＺＡ単体（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ単体と比較してはなおさら）よりも少なくとも１桁強力な（野生型であろうと変異体系統であろうと）Ａ型インフルエンザウイルスの阻害剤であり、効果が相加的であるよりも大きいことを示している。抗ウイルス効力の同様に顕著な増強は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ（１０％）−ＳＡ（１０％）、すなわち、同一ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）鎖に共有結合した等モル濃度のシアル酸誘導体とザナミビル誘導体でも得ることができた。二機能性ポリマー結合リガンド（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）とＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの両方は、インフルエンザＡ型（Ｗｕｈａｎ系統）に対してＰＩＢＭＡ−ＺＡよりも更に約１０倍強力であることは注目すべきである（表４）。一方、インフルエンザＢ型の場合、ＰＩＢＭＡ−ＺＡが最高の抗ウイルス活性（ＩＣ５０＝４１ｎＭ）を示した。
【００６７】
【表４】
【００６８】
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ及びＰＩＢＭＡ−ＳＡ−ＺＡをトリインフルエンザウイルスＡ型（Ａ／シチメンチョウ／ＭＮ／８３３／８０（Ｈ４Ｎ２）、及びザナミビルに対して抵抗性であるその変異体バージョン）に対しても試験した。表５に示すように、シアル酸誘導体は、何ら抗ウイルス活性を示さなかった（１０６ｎＭ濃度でも対照と比較してプラーク数の認めうるほどの減少がない）が、ＰＩＢＭＡ−ＳＡのＩＣ５０値は野生型及び変異体系統に対してそれぞれ３２μＭ及び８９μＭであった。ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、野生型及び変異体系統に対してそれぞれ３μＭ及び３１μＭであった。これは、ザナミビル誘導体のＩＣ５０値よりも４倍及び１７倍低い。ＰＩＢＭＡ−ＺＡは、ＰＩＢＭＡ誘導体中で最も有効な抗ウイルス活性を示した。
【００６９】
【表５】
【００７０】
インフルエンザウイルス感染をｉｎ ｖｉｖｏで阻害するＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの効力を測定するために、インフルエンザウイルス感染のマウスモデルを開発した。結果を図６に示す。８〜１２週齢のマウスにＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡ ２５μｇ、７５μｇ又は２００μｇを含むＰＢＳ ５０μｌを鼻腔内投与した。対照として、マウスにＰＢＳのみを投与した。４時間後、マウスにインフルエンザウイルスＡ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５ １２，０００ｐｆｕを鼻腔内感染させた。感染２４時間後、マウスを屠殺し、肺ホモジネートのウイルス力価（ｔｉｔｔｅｒｓ）をプラーク形成アッセイによって測定した。ＰＢＳ処置マウスでは、肺におけるウイルス力価は２．７×１０５ｐｆｕ／マウスであった。対照的に、肺ウイルス力価は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡを１回投与したマウスにおいて用量依存的様式で約１／７から１／２０に低下した。これらの結果は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡがインフルエンザウイルス感染をｉｎ ｖｉｖｏで阻害するのに有効であることを示唆している。
【００７１】
別段の記載がない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【００７２】
当業者は、本明細書に記載した本発明の具体的実施形態の多数の均等形態を、せいぜい定常的な実験法によって、認識するか、又は確認することができる。かかる均等形態も以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は一般に、殺ウイルス性および／またはウイルス抑止性の活性を示す、ポリマー組成物の分野にある。
【０００２】
（関連出願の引用）
本願は、２００７年８月２７日に出願した米国出願第６０／９６８，２１３号の利益およびそれに対する優先権を主張する。
【０００３】
政府支援
米国政府は、Ａｒｍｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｏｆｆｉｃｅとの契約ＤＡＡＤ−１９−０２−Ｄ−０００２の下でＭＩＴのＩｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｓｏｌｄｉｅｒ Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを介した米国陸軍による財政支援、並びにＪｉａｎｚｈｕ ＣｈｅｎへのＮＩＨ助成金ＡＩ５６２６７（６８９５４８１）及びＡＩ０７４４４３（６９１５７３９）に基づいて、この技術における一定の権利を有することができる。
【背景技術】
【０００４】
Ａ型インフルエンザウイルスは、人間集団において流行及び汎発流行を引き起こし、膨大な苦痛及び経済的損失を与える。現在、２つの異なる戦略、すなわちワクチン及び小分子治療薬を使用して、ウイルスの蔓延を抑制することが試みられている。しかし、ワクチン接種は、防御が限られており、将来広まる系統を正確に予測すること、大集団に十分な量のワクチンを短期間で製造すること、リスクがある集団にワクチンを投与することなどの幾つかの物流の問題が足かせになっている。
【０００５】
小分子治療薬に関しては、現在、インフルエンザの治療及び／又は防御のために４種類の抗ウイルス薬、すなわちアマンタジン、リマンタジン、ザナミビル及びオセルタミビルがある。これらの薬剤は、インフルエンザ感染症の重症度及び期間を減少させ得るが、有効であるためには、発症後２４〜４８時間以内に投与されなければならない。さらに、安定な伝染性薬剤耐性インフルエンザ系統の出現は、これらの薬剤を無効にするおそれがある。
【０００６】
薬剤耐性に打ち勝つために、微生物の異なる生命維持プロセスを同時に妨げる２種類以上の薬剤を含む併用療法を使用しなければならない。アマンタジン及びリマンタジンはＭ２イオンチャネルタンパク質を阻害するのに対して、ザナミビル及びオセルタミビルはノイラミニダーゼ酵素（ＮＡ）を阻害する。残念ながら、広まっているインフルエンザウイルスの大部分は、Ｍ２阻害剤に対して既に抵抗性であるので、これら４種類の薬剤を含む伝統的併用療法は、インフルエンザ抑制に対してほとんど付加価値がない。微生物の耐性の発生を阻止又は防止しつつ、ウイルス感染症を治療するのに有効である抗ウイルス組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の一目的は、ウイルスの耐性の発生を阻止又は防止しつつ、インフルエンザなどのウイルス感染症を治療するのに有効である抗ウイルス組成物、並びにその製造方法及び使用方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
ポリマーに結合した１種類以上の抗ウイルス剤を含む抗ウイルス組成物、並びに該組成物の製造方法及び使用方法を本明細書に記載する。１種類以上の抗ウイルス剤がポリマーに共有結合し、それによって薬剤耐性の発生を防止又は減少させる。適切な抗ウイルス剤としては、シアル酸、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。ポリマーは、好ましくは水溶性生体適合性ポリマーである。適切なポリマーとしては、ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）（ＰＩＢＭＡ）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸（ｐｌｙａｇｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン、並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体が挙げられるが、それだけに限定されない。別の一実施形態においては、組成物は、１種類の抗ウイルス剤を含むポリマーと第２の抗ウイルス剤を含むポリマーとの物理的混合物を含む。一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸、ザナミビルなどの２種類の抗菌剤を含む。別の一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸などの第１の抗菌剤とＰＩＢＭＡに結合したザナミビルなどの第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。
【０００９】
抗ウイルス剤（単数又は複数）の濃度は、ポリマーの約５重量％から約２５重量％である。一実施形態においては、各抗ウイルス剤の濃度は独立にポリマーの５重量％、ポリマーの８重量％、ポリマーの１０重量％、ポリマーの１５重量％、ポリマーの１８重量％、ポリマーの２０重量％又はポリマーの２５重量％である。
【００１０】
組成物は、経腸投与又は非経口投与用に調合することができる。適切な経口剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤及びロゼンジが挙げられるが、それだけに限定されない。鼻腔内に適した剤形としては、液剤、懸濁剤、散剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。非経口投与に適した剤形としては、液剤、懸濁剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００１１】
本明細書に記載の組成物は、耐性の発生を阻止又は防止しつつ、インフルエンザ、呼吸器合胞体（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｈｉａｌ）ウイルス、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルスなどの種々のウイルス感染症及び他の呼吸器疾患を治療するのに有効である。例えば、ポリ（イソブイレン（ｉｓｏｂｕｙｌｅｎｅ）−ａｌｔ−無水マレイン酸）、１０％ザナミビル及び１０％シアル酸を含む複合体は、ＩＣ５０値が７ｎＭであり、これは単量体ザナミビルと比較して９０倍の増加である。別の例においては、単機能性薬剤の等モル濃度の組合せ（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）は、野生型系統であろうと変異体系統であろうと、単機能性多価薬剤よりも少なくとも１桁強力なＡ型インフルエンザウイルス阻害剤であった。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１−１】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図１−２】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図１−３】図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームを示す。
【図２】図２は、ザナミビルの活性化誘導体をポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図３】図３は、シアル酸のＯ−グリコシドの合成のための反応スキームを示す。
【図４】図４は、シアル酸のＯ−グリコシドをポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図５】図５は、ザナミビルの活性化誘導体とシアル酸のＯ−グリコシドの両方をポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）に結合させる反応スキームを示す。
【図６】図６は、マウス肺におけるインフルエンザウイルス産生のＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡによる阻害を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
Ｉ．定義
本明細書で用いる「殺ウイルス性」（ｖｉｒｕｃｉｄａｌ）とは、ウイルスを中和するか又は破壊する能力のあることを意味する。
【００１４】
本明細書で用いる「ウイルス抑止性」（ｖｉｒｕｓｔａｔｉｃ）とは、ウイルスの複製を阻害することを意味する。
【００１５】
本明細書で用いる「生体適合性」とは、材料が生組織に対して傷害反応も毒性反応も免疫反応も生じないことを意味する。
【００１６】
本明細書で用いる「水溶性ポリマー」とは、水又は単相の水性−有機混合物に少なくとも幾らかの測定可能な溶解性、例えば、室温で１ｍｇ／リットルを超える溶解性を有するポリマーを意味する。
【００１７】
本明細書で用いる「ＩＣ５０」とは、共に同一条件下のプラーク減少アッセイで測定して、ポリマー結合薬剤（ｒｕｇ）の非存在下で観察されたプラーク数と比較してプラーク数を５０％減少させるポリマー結合薬剤の濃度を意味する。ＩＣ５０は、感染症防止の尺度になる。
【００１８】
本明細書で用いる「薬剤耐性を阻害又は減少させる」とは、耐性ウイルスの発生率を低下させること、又はザナミビルなどの抗ウイルス薬に対して既に抵抗性であるインフルエンザウイルスを阻害することを指す。
【００１９】
ＩＩ．組成物
水溶性ポリマーに共有結合した１種類以上の抗ウイルス剤を含む抗ウイルス組成物を本明細書に記載する。一実施形態においては、２種類以上の抗ウイルス剤が水溶性ポリマーに結合している。別の一実施形態においては、組成物は、第１の抗ウイルス剤に結合した第１の水溶性ポリマーと第２の抗ウイルス剤に結合した第２の水溶性ポリマーとのブレンドを含む。
【００２０】
抗ウイルス剤
抗ウイルス剤は、ポリマーに結合後もその活性の一部を保持するのであれば、いずれの抗ウイルス剤も使用することができる。例示的クラスの抗ウイルス薬としては、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２阻害剤、プロテイナーゼ阻害剤、イノシン５’−一リン酸塩（ＩＭＰ）デヒドロゲナーゼ（細胞酵素）阻害剤、ウイルスＲＮＡポリメラーゼ阻害剤及びｓｉＲＮＡが挙げられるが、それだけに限定されない。適切な薬剤としては、シアル酸、ザナミビル、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。ザナミビル及びオセルタミビルはノイラミンダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｄａｓｅ）酵素（ＮＡ）を阻害し、アマンタジン及びリマンタジンはＭ２イオンチャネルタンパク質を阻害する。
【００２１】
ザナミビルは、ウイルスＮＡの触媒作用部位に結合してその活性を阻害する比較的小さい分子（ＭＷ１，０００Ｄａ）である。共有結合性リンカーを介してザナミビルに結合したポリマーは、ポリマー中のザナミビル部分が依然として触媒作用部位に結合してＮＡ活性を阻害することができるように、調製することができる。かかるポリマー結合抗ウイルス剤は、インフルエンザなどのウイルス感染症の阻止と薬剤耐性ウイルスの出現の防止の両方に有効であるはずである。
【００２２】
特定の理論に拘泥するものではないが、ポリマー結合抗ウイルス剤は、多価結合のために単量体抗ウイルス剤よりも強力な阻害剤であると仮定される。インフルエンザビリオンは、３０〜５０個のＮＡ分子と３００〜５００個のＨＡ分子を含む。したがって、同一ポリマー骨格に結合した複数のザナミビル及び複数のシアル（ＳＡ）部分が存在すると、同一ビリオン上の複数のＮＡ及びヘマグルチニン（ＨＡ）に同時に結合することができる。ポリマー結合抗ウイルス部分とＮＡ／ＨＡとのアビディティのこのかなりの増加によって、ポリマー−抗ウイルス剤複合体はより強力な競合的阻害剤になるはずである。第二に、ＮＡ／ＨＡの変化が酵素の活性部位への単量体抗ウイルス剤の結合をかなり弱める場合でも、多価結合のために、ポリマー結合抗ウイルス剤はＮＡ／ＨＡの強力な阻害剤のままであるはずである。例えば、ザナミビルは、ＮＡの活性部位に親和定数１０−１０Ｍから１０−９Ｍ（０．１ｎＭ〜１．０ｎＭ）で結合する。結合親和性が１／１０６から１／１０４に低下した場合でも、同一ポリマー骨格に結合した３個を超えるザナミビル部分が同一ビリオン上のＮＡに同時に結合するのであれば、複合体は、依然として強力な阻害剤であるはずである。これは、ザナミビルが大部分のザナミビル耐性ウイルスのＮＡの触媒作用部位に依然として結合するという事実（ＩＣ５０ １５ｎＭから６４５ｎＭ）によって裏付けられる。最後に、複数のＮＡ分子に大きいポリマーが結合すると、感染細胞からのウイルス放出の妨害に加えてウイルスの感染を妨害する立体障害又はウイルス凝集体を生成することができる。
【００２３】
異なる標的を介してインフルエンザウイルスを阻害する２種類以上の別の阻害剤を同一ポリマー骨格に結合させること、及び／又は単機能性ポリマー結合リガンドの組合せは、ウイルスの耐性をより有効に抑制するはずである。例えば、インフルエンザウイルス感染中に、細胞表面の糖タンパク質のシアル酸（ＳＡ）残基へのヘマグルチニン（ＨＡ）の結合は、細胞へのウイルス侵入に極めて重要である。ＳＡはインフルエンザウイルスに対する細胞受容体であるので、ＳＡ自体の使用は、ウイルスの耐性を抑制するのに役立ち得る。というのは、シアル酸に結合しないウイルスＨＡは、宿主細胞に感染する能力の低下である可能性があるからである。
【００２４】
ザナミビルとシアル酸の両方は、ビリオン上の特定の標的（それぞれＮＡ及びＨＡ）に結合することによってその効果を発揮する。したがって、これらの薬剤が同一ポリマー骨格に結合すると、その阻害効果を発揮するために細胞に取り込まれる必要がない組成物が得られるはずである。同一ポリマー骨格に共有結合したザナミビルとシアル酸の両方を含むか又はザナミビルを含むポリマーとシアル酸を含むポリマーとの物理的混合物を含むかの二機能性ポリマーは、薬剤耐性ウイルスの出現を防止するのに特に有効であることが判明し得る。ザナミビルとシアル酸は、異なる標的を介してインフルエンザウイルスを阻害し、したがって併用療法の利点があるはずである。さらに、多価結合のために、重合体阻害剤は、単量体阻害剤に対して抵抗性であるウイルスに対して有効なままであり得る。
【００２５】
抗ウイルス剤の濃度は、ポリマーの約５重量％から約２５重量％である。一実施形態においては、各抗ウイルス剤の濃度は独立にポリマーの５重量％、ポリマーの８重量％、ポリマーの１０重量％、ポリマーの１５重量％、ポリマーの１８重量％、ポリマーの２０重量％又はポリマーの２５重量％である。
【００２６】
Ｂ．ポリマー
２種類以上の抗菌剤が任意の水溶性生体適合性ポリマーに結合することができる。一実施形態においては、２種類以上の抗菌剤が同一ポリマーに結合する。別の一実施形態においては、組成物は、第１の水溶性生体適合性ポリマーに結合した第１の抗菌剤と第２の水溶性生体適合性ポリマーに結合した第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。ポリマーは、同じポリマー（すなわち、同じ化学組成及び分子量を有する。）でも異なるポリマー（すなわち、異なる化学組成及び／又は分子量）でもよい。
【００２７】
ポリマーは、好ましくは無毒で非免疫原性であり、生きている生物体から容易に排出される。一実施形態においては、ポリマーは生分解性である。好ましくは、抗ウイルス剤（単数又は複数）は、抗ウイルス剤とウイルスの結合に関与しないことが示された官能基を介してポリマーに結合する。例えば、インフルエンザＮＡに結合したザナミビルのＸ線結晶構造によれば、糖の７−ヒドロキシル基はＮＡと直接接触せず、したがって７位を介したポリマーへの薬剤の結合は結合相互作用を損なわないはずである。７−ヒドロキシル基をアミノ基、またはスルフヒドリル基などの別の反応性官能基に変換することもできる。したがって、ヒドロキシ基、アミノ基若しくはスルフヒドリル基と反応する官能基、又はヒドロキシ基、アミノ基若しくはスルフヒドリル基と反応する官能基に変換可能である基を含むポリマーを使用して、本明細書に記載の組成物を調製することができる。あるいは、ポリマーは、抗菌剤上の求電子基と反応するヒドロキシ基、アミノ基、またはチオール基などの求核基を含むことができる。
【００２８】
適切なポリマーとしては、ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）（ＰＩＢＭＡ）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体が挙げられるが、それだけに限定されない。ポリマーは、典型的には、１，０００から１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００から１，０００，０００ダルトンの分子量を有する。一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸、ザナミビルなどの２種類の抗菌剤を含む。別の一実施形態においては、組成物は、ＰＩＢＭＡに結合したシアル酸などの第１の抗菌剤とＰＩＢＭＡに結合したザナミビルなどの第２の抗菌剤との物理的混合物を含む。
【００２９】
ＩＩＩ．製造方法
本明細書に記載の組成物は、抗ウイルス剤又はその誘導体を水溶性生体適合性ポリマーに共有結合することによって調製することができる。例えば、ポリマーに結合させる抗ウイルス剤を、当技術分野で公知の種々の化学反応によって活性化して、反応性誘導体を形成する。抗菌剤の反応性誘導体は、ポリマーと反応して、抗ウイルス剤をポリマーに共有結合的に連結させる。反応性誘導体は、ポリマー上の求電子基又は求核基と反応する求核基又は求電子基を含むことができる。
【００３０】
一実施形態においては、シアル酸を抗ウイルス剤ザナミビルの活性化誘導体に変換する。図１は、シアル酸をザナミビルの活性化誘導体に変換する反応スキームである。図２は、ザナミビル中の糖の７−ヒドロキシル基を介して活性化ザナミビルをＰＩＢＭＡに結合させる反応スキームである。インフルエンザＮＡに結合したザナミビルのＸ線結晶構造によれば、糖の７−ヒドロキシル基はＮＡと直接接触せず、したがって７位を介したポリマーへの薬剤の結合は結合相互作用を損なわないはずである。図３は、シアル酸のＯ−グリコシドの合成のための反応スキームである。シアル酸のＯ−グリコシドは、図４に示すようにＰＩＢＭＡに結合する。図５は、活性化ザナミビル誘導体とシアル酸のＯ−グリコシドの両方をＰＩＢＭＡに同時に結合させる反応スキームである。
【００３１】
投与すべき投与量は、当業者が容易に決定することができ、患者の年齢及び体重並びに治療すべき感染症に応じて決まる。ポリマーに結合される抗ウイルス剤分子の量は、ポリマー上の反応基数に依存する。例えば、重量平均分子量１６５ｋＤａのＰＩＢＭＡは、約１，０７０個の繰り返し単位を有する。ポリマー鎖１本当たりの平均シアル酸残基数は、５％、１０％、１２％、１６％及び３３％占有率であり、それぞれ５３、１０６、１２８、１７１及び３５３である。同様に、５〜２５％ザナミビルを含むＰＩＢＭＡ（１６５ｋＤａ）は、ポリマー鎖１本当たり５３〜２６７個のザナミビル部分を含む。１０％シアル酸と１０％ザナミビルを有するＰＩＢＭＡ重合体鎖は、２個の糖部分の各々ほぼ１０６単位を含む。
【００３２】
ＩＶ．使用方法及び投与方法
本明細書に記載の組成物は、ヒトなどのほ乳動物における感染症の治療及び／又は防止に使用することができる。治療すべき感染症としては、インフルエンザなどのウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、寄生虫感染症、又はそれらの組合せが挙げられるが、それだけに限定されない。本明細書に記載の組成物は、非経口投与用又は経腸投与用に調合することができる。一実施形態においては、感染症は、トリ又はヒトインフルエンザＡ型又はＢ型などのウイルス感染症である。組成物は、野生型又は変異型のトリ及びヒトインフルエンザウイルスに対して有効である。
【００３３】
Ａ．剤形
本明細書に記載の組成物は、経腸製剤、非経口製剤又は局所製剤用に調合することができる。一実施形態においては、組成物を経腸投与用又は非経口投与用に調合する。製剤は、１種類以上の薬学的に許容される賦形剤、担体及び／又は添加剤を含むことができる。経腸剤形及び非経口剤形を調製する方法は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６ｔｈ Ｅｄ．，Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９５）に記載されている。
【００３４】
ａ．経腸剤形
適切な経口剤形としては、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤及びロゼンジが挙げられる。錠剤は、当技術分野で周知である圧縮技術又は成形技術によって製造することができる。ゼラチンカプセル剤又は非ゼラチンカプセル剤は、当技術分野で周知である技術によって、液体、固体及び半固体充填材料を封入することができる硬カプセルシェル又は軟カプセルシェルとして調製することができる。
【００３５】
製剤は、安全で有効と考えられる材料で構成される薬学的に許容される担体を用いて調製することができ、望ましくない生物学的副作用も不必要な相互作用も起こさずに個体に投与することができる。担体は、医薬製剤中に存在する、活性成分又は複数の活性成分以外の全成分である。本明細書において一般に使用する「担体」としては、希釈剤、ｐＨ調節剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、充填剤及びコーティング組成物が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３６】
担体は、可塑剤、色素、着色剤、安定剤及び流動化剤を含み得るコーティング組成物の全成分も含む。放出遅延製剤は、”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ ｔａｂｌｅｔｓ”，ｅｄｓ．Ｌｉｂｅｒｍａｎ ｅｔ．ａｌ．（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９８９）、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ−Ｔｈｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｙ”，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２０００、および”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍｓ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ”，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，（Ｍｅｄｉａ，ＰＡ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９５）などの標準的参考文献に記載のように調製することができる。これらの参考文献は、錠剤及びカプセル剤並びに錠剤、カプセル剤及び顆粒剤の放出遅延剤形を調製するための担体、材料、装置及びプロセスに関する情報を提供する。
【００３７】
適切なコーティング材料の例としては、セルロースアセタートフタラート、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタラート、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセタートスクシナートなどのセルロースポリマー；ポリビニルアセタートフタラート、アクリル酸ポリマー及びコポリマー、商品名ＥＵＤＲＡＧＩＴ（登録商標）（Ｒｏｔｈ Ｐｈａｒｍａ，Ｗｅｓｔｅｒｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で市販されているメタクリル樹脂、ゼイン、シェラック、並びに多糖が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００３８】
さらに、コーティング材料は、可塑剤、色素、着色剤、流動化剤、安定剤、ポア形成剤、界面活性剤などの従来の担体を含むことができる。
【００３９】
任意選択の薬学的に許容される賦形剤としては、希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、安定剤及び界面活性剤が挙げられるが、それだけに限定されない。希釈剤は、「充填剤」とも称され、典型的には、錠剤の圧縮又はビーズ及び顆粒の形成のために実用的なサイズを用意するように固体剤形の体積を増加させるのに必要である。適切な希釈剤としては、リン酸二カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、微結晶セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、加水分解デンプン、アルファ化デンプン、二酸化ケイ素、酸化チタン、ケイ酸アルミニウムマグネシウム及び粉糖が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４０】
結合剤を使用して固体投与製剤に凝集性を付与し、かくして錠剤、ビーズ又は顆粒剤が剤形調合後に確実に完全なままであるようにする。適切な結合剤材料としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、（スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース及びソルビトールを含めた）糖、ポリエチレングリコール、ワックス、アラビアゴム、トラガカントなどの天然ゴム及び合成ゴム、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース及びＶｅｅｇｕｍを含めたセルロース、並びにアクリル酸とメタクリル酸の共重合体、メタクリル酸共重合体、メタクリル酸メチル共重合体、メタクリル酸アミノアルキル共重合体、ポリアクリル酸／ポリメタクリル酸、ポリビニルピロリドンなどの合成ポリマーが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４１】
滑沢剤は、錠剤製造を容易にするのに使用される。適切な滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、グリセロールベヘナート、ポリエチレングリコール、タルク及び鉱油が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４２】
崩壊剤は、投与後に剤形の崩壊又は「分解」を容易にするのに使用され、一般に、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、アルファ化デンプン、クレイ、セルロース、アルギニン（ａｌｇｉｎｉｎｅ）、ゴム、又は架橋ＰＶＰ（ＧＡＦ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ製Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）ＸＬ）などの架橋ポリマーが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４３】
安定剤は、薬物分解反応を阻害又は遅延させるのに使用される。薬物分解反応としては、例として、酸化反応が挙げられる。
【００４４】
界面活性剤は、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性界面活性剤又は非イオン性界面活性剤とすることができる。適切な陰イオン界面活性剤としては、カルボン酸イオン、スルホン酸イオン及び硫酸イオンを含むものが挙げられるが、それだけに限定されない。陰イオン性界面活性剤の例としては、長鎖スルホン酸アルキル及びスルホン酸アルキルアリール（ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなど）、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムなどのジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、ビス−（２−エチルチオキシル）−スルホコハク酸ナトリウムなどのジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、並びにラウリル硫酸ナトリウムなどの硫酸アルキルのナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩が挙げられる。陽イオン性界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウムなどの第四級アンモニウム化合物、ポリオキシエチレン及びココナツアミンが挙げられるが、それだけに限定されない。非イオン性界面活性剤の例としては、エチレングリコールモノステアラート、プロピレングリコールミリスタート、グリセリルモノステアラート、グリセリルステアラート、ポリグリセリル−４−オレアート、ソルビタンアシラート（ａｃｙｌａｔｅ）、スクロースアシラート、ＰＥＧ−１５０ラウラート、ＰＥＧ−４００モノラウラート、ポリオキシエチレンモノラウラート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、ステアロイルモノイソプロパノールアミド及びポリオキシエチレン水素化獣脂アミドが挙げられる。両性界面活性剤の例としては、Ｎ−ドデシル−β−アラニンナトリウム、Ｎ−ラウリル−β−イミノジプロピオン酸ナトリウム、ミリストアンホアセタート（ｍｙｒｉｓｔｏａｍｐｈｏａｃｅｔａｔｅ）、ラウリルベタイン及びラウリルスルホベタインが挙げられる。
【００４５】
ｂ．非経口剤形
適切な非経口剤形としては、液剤、懸濁剤及び乳剤が挙げられるが、それだけに限定されない。非経口投与用製剤は、界面活性剤、塩、緩衝剤、ｐＨ調節剤、乳化剤、防腐剤、抗酸化剤、重量オスモル濃度／張性調節剤及び水溶性ポリマーを含めて、ただしそれだけに限定されない１種類以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。
【００４６】
乳剤は、典型的には、再構成後の非経口投与のためにｐＨ３〜８に緩衝化されている。適切な緩衝剤としては、リン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤及びクエン酸塩緩衝剤が挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４７】
水溶性ポリマーは、非経口投与用製剤に使用されることが多い。適切な水溶性ポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、デキストラン、カルボキシメチルセルロース及びポリエチレングリコールが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４８】
防腐剤は、真菌及び微生物の増殖を防止するのに使用することができる。適切な抗真菌剤及び抗菌剤としては、安息香酸、ブチルパラベン、エチルパラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチピリジニウム（ｃｅｔｙｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール及びチメロサールが挙げられるが、それだけに限定されない。
【００４９】
別の剤形としては、液剤、懸濁剤、散剤及び乳剤を含めて、ただしそれだけに限定されない鼻腔内剤形が挙げられる。剤形は、１種類以上の薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含むことができる。適切な賦形剤及び担体は上述されている。
【実施例】
【００５０】
（実施例１：ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）−ザナミビル（ＰＩＭＢＡ−ＺＡ）複合体の合成）
ザナミビル誘導体の合成
以下の公表手順を一部変更して使用して単量体ザナミビル類似体を合成した：ａ）Ｃｈａｎｄｌｅｒ，Ｍ．，ＭＪ．Ｂａｍｆｏｒｄ，Ｒ．Ｃｏｎｒｏｙ，Ｂ．Ｌａｍｏｎｔ，Ｂ．Ｐａｔｅｌ，Ｖ．Ｋ．Ｐａｔｅｌ，Ｉ．Ｐ．Ｓｔｅｅｐｌｅｓ，Ｒ．Ｓｔｏｒｅｒ，Ｎ．Ｇ．Ｗｅｉｒ，Ｍ．Ｗｒｉｇｈｔ，ａｎｄ Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ．１９９５．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ４−ｇｕａｎｉｄｉｎｏ Ｎｅｕ５Ａｃ２ｅｎ．Ｘ−Ｒａｙ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−４−ａｍｉｎｏ−２，６−ａｎｈｙｄｒｏ−３，４，５−ｔｒｉｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｅｒｙｔｒｏ−Ｌ−ｇｌｕｃｏ−ｎｏｎｏｎｉｃ ａｃｉｄ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１：１１７３−１１８０。ｂ）Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｄ．Ｍ．，Ｐ．Ｃ．Ｃｈｅｒｒｙ，Ｄ．Ｃ．Ｈｕｍｂｅｒ，Ｐ．Ｓ．Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ｐ．Ｋｅｅｌｉｎｇ，Ｐ．Ｆ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｃ．Ｄ．Ｓｈａｗ，ａｎｄ Ｓ．Ｓｗａｎｓｏｎ．１９９９．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｓｉａｌｉｄａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ４−Ｇｕａｎｉｄｉｎｏ−Ｎｅｕ５Ａｃ２ｅｎ（Ｚａｎａｍｉｖｉｒ）ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｇｌｙｃｅｒｏｌ ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：５６３−５７４。合成を図１に示す。
【００５１】
ＰＩＭＢＡ含有ザナミビル誘導体の合成
上で調製した単量体ザナミビル誘導体２８ｍｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をＰＩＭＢＡ（１００ｍｇ、単量体基準で０．６５ｍｍｏｌ）の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）とピリジン（０．５ｍＬ）の溶液に添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いでＮＨ４ＯＨ（２８％、１０ｍＬ）溶液を用いて室温で２４時間クエンチした。生成した混合物を蒸留水で４８時間透析し（分子量カットオフ３，５００ダルトン）、次いで凍結乾燥させて、白色粉末を得た。ポリマーは５％ＺＡを含んだ。８％ＺＡ、１８％ＺＡ及び２５％ＺＡを含む各ポリマーも調製した。ＰＩＭＢＡ−ＺＡの形成の反応スキームを図２に示す。ポリマー骨格に結合したザナミビル誘導体の量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化１】
【００５２】
（実施例２：ＰＩＭＢＡ−ＺＡ複合体の抗ウイルス活性）
ＰＩＭＢＡ−ＺＡの抗ウイルス活性を測定するために、プラーク減少アッセイを実施した。阻害剤の１０倍連続希釈物１２５μｌを等体積のインフルエンザＡ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５（Ｈ３Ｎ２）のリン酸塩緩衝化溶液（「ＰＢＳ」）（８００プラーク形成単位（ｐｆｕ）／ｍＬ）と混合することによってアッセイを実施した。室温で１時間インキュベーション後、反応混合物２００μｌを６ウェル細胞培養プレート中のコンフルエントなＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙイヌ腎臓（「ＭＤＣＫ」）細胞に添加し、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、溶液を吸引除去した。次いで、細胞にＦ１２プラーク培地２ｍｌを載せ、３７℃で３日間インキュベートした。培養物を１％ホルムアルデヒドを用いて室温で１時間固定し、細胞を１％クリスタルバイオレット色素溶液で染色し、プラークを数えた。対照として、阻害剤なし、単量体ザナミビル誘導体、又は裸のＰＩＭＢＡを使用した。プラーク数を対照実験（阻害剤なし）で観察されたプラーク数と比較することによって、ウイルスプラーク数を５０％低減させるのに必要な阻害剤濃度（ＩＣ５０）を計算した。比較を容易にするために、ＩＣ５０値をポリマー又はザナミビル誘導体の濃度として計算した。結果を表１に示す。
【００５３】
【表１】
【００５４】
表１に示すように、ＰＩＢＭＡ自体は、検出可能な抗ウイルス活性をほとんど持たない。ザナミビル誘導体のＩＣ５０は約６３０ｎＭである。対照的に、ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、（ザナミビル複合化の百分率に応じて）約５ｎＭであり、ほぼ１００倍の効力向上である。さらに、ポリマーに複合化されたザナミビルの割合の変動は、ＩＣ５０値に対しわずかな効果しか有さない。これらの結果は、水溶性ＰＩＢＭＡがザナミビル誘導体と容易に複合化することができ、ザナミビルは有効なままであることを示唆している。ザナミビル含有量５〜２５％は、ポリマー鎖１本当たりに平均５３から２６７個のザナミビル部分に相当することに注意されたい。ビリオン１個当たり３５〜５０個のＮＡ分子しか存在しないので、これはかなり過剰のザナミビル部分である。ザナミビル含有量を減少させることによって凝集体形成を促進することができ、したがってより強力なＰＩＢＭＡ−ＺＡ阻害剤を生成することができる。
【００５５】
（実施例３：ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）−シアル酸（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ）複合体の合成）
シアル酸のＯ−グリコシドの合成
シアル酸を以下の公表手順によってリンカーに結合させた：ａ）Ｂａｕｍｂｅｒｇｅｒ，Ｆ．，Ａ．Ｖａｓｅｌｌａ，ａｎｄ Ｒ．Ｓｃｈａｕｅｒ．１９８６．４−ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ ５−ａｃｅｔａｍｉｄｏ−３，４，５−ｔｒｉｄｅｏｘｙ−−Ｄ−ｍａｎｎｏ−２−ｎｏｎｕｌｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｏｎｉｃ Ａｃｉｄ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ．Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ６９：１９２７−１９３５。ｂ）Ｗａｒｎｅｒ，Ｔ．Ｇ．，ａｎｄ Ｌ．Ｌａｕｒａ．１９８８．Ａｎ ａｚｉｄｏａｒｙｌ ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｏｆ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ．Ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｂｅ ｏｆ ｓｉａｌｉｄａｓｅｓ ａｎｄ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １７６：２１１−２１８。ｃ）Ｂｙｒａｍｏｖａ，Ｎ．Ｅ．，Ｌ．Ｖ．Ｍｏｃｈａｌｏｖａ，Ｉ．Ｍ．Ｂｅｌｙａｎｃｈｉｋｏｖ，Ｍ．Ｎ．Ｍａｔｒｏｓｏｖｉｃｈ，ａｎｄ Ｎ．Ｖ．Ｂｏｖｉｎ．１９９１．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ ｐｓｅｕｄｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｂｙ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ｓｐａｃｅｒ−ｃｏｎｎｅｃｔｅｄ Ｎｅｕ５Ａｃ ｗｉｔｈ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒ．Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．１０：６９１−７００。合成を図３に示す。
【００５６】
芳香族、ポリマー
シアル酸のＯ−グリコシドのポリマーの合成
上で調製したシアル酸のＯ−グリコシドの複合化は、ザナミビル誘導体とＰＩＢＭＡの複合化の場合の上記同じ方法論に従う。ポリマーは５％ＳＡを含んだ。１０％ＳＡ、１２％ＳＡ、１６％ＳＡ及び３３％ＳＡを含む各ポリマーも調製した。ＰＩＭＢＡ−ＳＡの形成の反応スキームを図４に示す。ポリマー骨格に結合したシアル酸誘導体の量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化２】
【００５７】
（実施例４：ＰＩＭＢＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性）
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性を測定するために、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ複合体の場合に上述したようにプラーク減少アッセイを実施した。結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
【００５９】
表２に示すように、リンカーで改変されたシアル酸は、検出可能な抗ウイルス活性を持たなかった。ＰＩＢＭＡ−ＳＡのＩＣ５０値は、ポリマーと複合化されたＳＡの割合に応じて１１４ｎＭから３ｎＭの範囲である。ポリマー中の利用可能な部位の５％又は１０％がシアル酸誘導体と複合化された状態で、ＩＣ５０値は約１００ｎＭである。占有率１２％では、ＩＣ５０値はほぼ１／５の２２ｎＭに低下した。占有率１６％では、ＩＣ５０値はさらに１／７に低下して３ｎＭになった。しかし、占有率３３％では、ＩＣ５０値は１７ｎＭに上昇した。シアル酸含有量の関数としてのＩＣ５０値のこれらの変動は、ＳＡ複合化の最適量が存在することを示唆している。
【００６０】
ＰＩＢＭＡ骨格の重量平均分子量は１６５ｋＤａであり、これは１，０７０個の繰り返し単位に対応する。占有率５％、１０％、１２％、１６％及び３３％におけるポリマー鎖１本当たりの平均シアル酸残基数は、それぞれ５３、１０６、１２８、１７１及び３５３である。各インフルエンザビリオンは３５０〜５００個のＨＡ分子を有するので、ＩＣ５０値とポリマー鎖と複合化されたシアル酸の数との間に単純な相関があるようには見えない。
【００６１】
（実施例５：ザナミビルとシアル酸の両方を有するＰＩＢＭＡの合成）
シアル酸とザナミビル誘導体の両方の同一ＰＩＢＭＡポリマーへの複合化は、ザナミビルとＰＩＢＭＡの複合化の場合の上記同じ方法論によって実施することができる。シアル酸のＯ−グリコシドを、無水ＤＭＦとピリジン中のＰＩＢＭＡ溶液に添加した。ザナミビル類似体を添加し、反応混合物をＮＨ４ＯＨでクエンチした。得られた溶液を蒸留水で透析し、凍結乾燥させて白色粉末を得た。ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの形成の反応スキームを図５に示す。ポリマー骨格に結合したシアル酸及びザナミビルの量を１Ｈ−ＮＭＲによって定量化した。収率は８０％を超えた。
【化３】
【００６２】
（実施例６：ＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡ複合体の抗ウイルス活性）
パイロット研究では、１０％シアル酸と１０％ザナミビルを含む二機能性ポリマーを調製し、そのＩＣ５０値をプラーク減少アッセイによって測定した。結果を表３に示す。
【００６３】
【表３】
【００６４】
表３に示すように、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡのＩＣ５０値は７ｎＭであり、これは単量体ザナミビル誘導体と比較して９０倍の増加である。プラーク減少アッセイは、ＰＢＳ（対照）に比較して、５００ｎｇ／ｍｌから０．０５ｎｇ／ｍｌまでの漸減濃度のＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡを含むＭＤＣＫ細胞培養物においてＰＩＭＢＡ−ＺＡ−ＳＡによるインフルエンザウイルス（Ｖｉｃｔｏｒｉａ）感染の阻害を示した。
【００６５】
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ、ＰＩＢＭＡ−ＳＡ−ＺＡ、及びＰＩＢＭＡ−ＳＡとＰＩＢＭＡ−ＺＡの組合せをヒトインフルエンザＡ型（Ａ／Ｗｕｈａｎ／３５９／９５（Ｈ３Ｎ２）及びオセルタミビルに抵抗性であるその変異体バージョン）及びインフルエンザＢ型（ザナミビルとオセルタミビルの両方に抵抗性であるＢ／Ｈｏｎｇ−Ｋｏｎｇ／３６／０５変異体系統）に対しても試験した。表４に示すように、ＰＩＢＭＡ−ＳＡは、インフルエンザＡ型とインフルエンザＢ型の両方に対してシアル酸誘導体（単量体）よりも＞１０２〜１０３倍活性である。ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、Ａ型インフルエンザウイルスの野生型及び変異体系統に対してそれぞれ７７ｎＭ及び２５０ｎＭであり、ザナミビル誘導体のＩＣ５０値１３μＭ及び１２０μＭよりもはるかに低い。
【００６６】
単機能性薬剤の等モル濃度の組合せ（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）は、最良の単機能性多価薬剤、すなわちＰＩＢＭＡ−ＺＡ単体（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ単体と比較してはなおさら）よりも少なくとも１桁強力な（野生型であろうと変異体系統であろうと）Ａ型インフルエンザウイルスの阻害剤であり、効果が相加的であるよりも大きいことを示している。抗ウイルス効力の同様に顕著な増強は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ（１０％）−ＳＡ（１０％）、すなわち、同一ポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）鎖に共有結合した等モル濃度のシアル酸誘導体とザナミビル誘導体でも得ることができた。二機能性ポリマー結合リガンド（ＰＩＢＭＡ−ＳＡ＋ＰＩＢＭＡ−ＺＡ）とＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの両方は、インフルエンザＡ型（Ｗｕｈａｎ系統）に対してＰＩＢＭＡ−ＺＡよりも更に約１０倍強力であることは注目すべきである（表４）。一方、インフルエンザＢ型の場合、ＰＩＢＭＡ−ＺＡが最高の抗ウイルス活性（ＩＣ５０＝４１ｎＭ）を示した。
【００６７】
【表４】
【００６８】
ＰＩＢＭＡ−ＳＡ、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ及びＰＩＢＭＡ−ＳＡ−ＺＡをトリインフルエンザウイルスＡ型（Ａ／シチメンチョウ／ＭＮ／８３３／８０（Ｈ４Ｎ２）、及びザナミビルに対して抵抗性であるその変異体バージョン）に対しても試験した。表５に示すように、シアル酸誘導体は、何ら抗ウイルス活性を示さなかった（１０６ｎＭ濃度でも対照と比較してプラーク数の認めうるほどの減少がない）が、ＰＩＢＭＡ−ＳＡのＩＣ５０値は野生型及び変異体系統に対してそれぞれ３２μＭ及び８９μＭであった。ＰＩＢＭＡ−ＺＡのＩＣ５０値は、野生型及び変異体系統に対してそれぞれ３μＭ及び３１μＭであった。これは、ザナミビル誘導体のＩＣ５０値よりも４倍及び１７倍低い。ＰＩＢＭＡ−ＺＡは、ＰＩＢＭＡ誘導体中で最も有効な抗ウイルス活性を示した。
【００６９】
【表５】
【００７０】
インフルエンザウイルス感染をｉｎ ｖｉｖｏで阻害するＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡの効力を測定するために、インフルエンザウイルス感染のマウスモデルを開発した。結果を図６に示す。８〜１２週齢のマウスにＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡ ２５μｇ、７５μｇ又は２００μｇを含むＰＢＳ ５０μｌを鼻腔内投与した。対照として、マウスにＰＢＳのみを投与した。４時間後、マウスにインフルエンザウイルスＡ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５ １２，０００ｐｆｕを鼻腔内感染させた。感染２４時間後、マウスを屠殺し、肺ホモジネートのウイルス力価（ｔｉｔｔｅｒｓ）をプラーク形成アッセイによって測定した。ＰＢＳ処置マウスでは、肺におけるウイルス力価は２．７×１０５ｐｆｕ／マウスであった。対照的に、肺ウイルス力価は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡを１回投与したマウスにおいて用量依存的様式で約１／７から１／２０に低下した。これらの結果は、ＰＩＢＭＡ−ＺＡ−ＳＡがインフルエンザウイルス感染をｉｎ ｖｉｖｏで阻害するのに有効であることを示唆している。
【００７１】
別段の記載がない限り、本明細書で使用するすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。
【００７２】
当業者は、本明細書に記載した本発明の具体的実施形態の多数の均等形態を、せいぜい定常的な実験法によって、認識するか、又は確認することができる。かかる均等形態も以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１種類以上の水溶性生体適合性ポリマーに結合した２種類以上の抗ウイルス剤を含む、殺ウイルス性組成物。
【請求項２】
前記２種類以上のウイルス剤がザナミビル、シアル酸、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記２種類以上の抗ウイルス剤が同一の生体適合性ポリマーに共有結合した、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ポリマーの分子量が１，０００ダルトンから１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００ダルトンから１，０００，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記２種類以上の抗ウイルス剤がシアル酸及びザナミビルであり、前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記２種類以上の抗ウイルス剤の各々の濃度が前記ポリマーの約５重量％から約２５重量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
シアル酸とザナミビルの濃度が、前記ポリマーの５重量％、前記ポリマーの８重量％、前記ポリマーの１０重量％、前記ポリマーの１８重量％及び前記ポリマーの２５重量％からなる群から独立に選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
シアル酸の濃度が前記ポリマーの１０重量％であり、ザナミビルの濃度が前記ポリマーの１０重量％である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、第１の抗ウイルス剤に結合した第１の水溶性生体適合性ポリマーと第２の抗ウイルス剤に結合した第２の水溶性生体適合性ポリマーとの物理的混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１のポリマーと前記第２のポリマーとが同じ化学組成を有するか又は異なる化学組成を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記第１のポリマーと前記第２のポリマーとが同じ化学組成を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
第１の抗ウイルス剤及び第２の抗ウイルス剤がシアル酸及びザナミビルであり、前記ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
混合物中の機能性ポリマーの濃度が等モル濃度である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
シアル酸及びザナミビルの濃度が前記ポリマーの１０重量％である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
２種類以上の抗ウイルス剤又はその誘導体を水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程を含む、請求項１から請求項１０のいずれかに記載の組成物を製造する方法。
【請求項１８】
第１の抗ウイルス剤を第１の水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程、第２の抗ウイルス剤を第２の水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程、及びそれらのポリマーを混合して一緒にする工程を含む、請求項１１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を製造する方法。
【請求項１９】
ウイルス感染症の治療または防止を必要とする患者に有効量の請求項１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を投与する工程を含む、ウイルス感染症を治療又は防止する方法。
【請求項２０】
前記ウイルス感染症が、野生型ヒトインフルエンザ又は野生型トリインフルエンザ、変異型ヒトインフルエンザ又は変異型トリインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を薬学的に許容される担体中に含む、医薬組成物。
【請求項２２】
前記担体が経腸投与に適する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記担体が非経口投与に適する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項１】
１種類以上の水溶性生体適合性ポリマーに結合した２種類以上の抗ウイルス剤を含む、殺ウイルス性組成物。
【請求項２】
前記２種類以上のウイルス剤がザナミビル、シアル酸、オセルタミビル、アマンタジン、リマンタジン及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記２種類以上の抗ウイルス剤が同一の生体適合性ポリマーに共有結合した、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）、ポリ（アスパラギン酸）、ポリ（グルタミン酸）、ポリリシン、ポリ（アクリル酸）、プリアギニック酸、キトサン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルデキストラン、ポリエチレンイミン並びにそれらのブレンド及びそれらの共重合体からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ポリマーの分子量が１，０００ダルトンから１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００ダルトンから１，０００，０００ダルトンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記２種類以上の抗ウイルス剤がシアル酸及びザナミビルであり、前記水溶性生体適合性ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記２種類以上の抗ウイルス剤の各々の濃度が前記ポリマーの約５重量％から約２５重量％である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
シアル酸とザナミビルの濃度が、前記ポリマーの５重量％、前記ポリマーの８重量％、前記ポリマーの１０重量％、前記ポリマーの１８重量％及び前記ポリマーの２５重量％からなる群から独立に選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
シアル酸の濃度が前記ポリマーの１０重量％であり、ザナミビルの濃度が前記ポリマーの１０重量％である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、第１の抗ウイルス剤に結合した第１の水溶性生体適合性ポリマーと第２の抗ウイルス剤に結合した第２の水溶性生体適合性ポリマーとの物理的混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１のポリマーと前記第２のポリマーとが同じ化学組成を有するか又は異なる化学組成を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記第１のポリマーと前記第２のポリマーとが同じ化学組成を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
第１の抗ウイルス剤及び第２の抗ウイルス剤がシアル酸及びザナミビルであり、前記ポリマーがポリ（イソブチレン−ａｌｔ−無水マレイン酸）である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
混合物中の機能性ポリマーの濃度が等モル濃度である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
シアル酸及びザナミビルの濃度が前記ポリマーの１０重量％である、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
２種類以上の抗ウイルス剤又はその誘導体を水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程を含む、請求項１から請求項１０のいずれかに記載の組成物を製造する方法。
【請求項１８】
第１の抗ウイルス剤を第１の水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程、第２の抗ウイルス剤を第２の水溶性生体適合性ポリマーに結合させる工程、及びそれらのポリマーを混合して一緒にする工程を含む、請求項１１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を製造する方法。
【請求項１９】
ウイルス感染症の治療または防止を必要とする患者に有効量の請求項１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を投与する工程を含む、ウイルス感染症を治療又は防止する方法。
【請求項２０】
前記ウイルス感染症が、野生型ヒトインフルエンザ又は野生型トリインフルエンザ、変異型ヒトインフルエンザ又は変異型トリインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から請求項１６のいずれかに記載の組成物を薬学的に許容される担体中に含む、医薬組成物。
【請求項２２】
前記担体が経腸投与に適する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記担体が非経口投与に適する、請求項２１に記載の組成物。
【図１−１】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１０−５３７９９７（Ｐ２０１０−５３７９９７Ａ）
【公表日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２３０７６（Ｐ２０１０−５２３０７６）
【出願日】平成２０年８月２５日（２００８．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４２４４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３２６０５
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５９６０６０６９７）マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー (233)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月９日（２０１０．１２．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月２５日（２００８．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４２４４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３２６０５
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５９６０６０６９７）マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー (233)
【Ｆターム（参考）】
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