免疫を改善するためのプロバイオティックエンテロコッカス
動物で免疫及びワクチンの有効性を調節する組成物及び方法を開示する。この組成物及び方法は、プロバイオティック生物、具体的にはプロバイオティックエンテロコッカス株を利用し、特にネコに適用可能である。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、哺乳動物の栄養及び免疫応答に及ぼすその効果に関する。特に、本発明は、動物に投与して動物における自然免疫と適応免疫の両方を改善し、ワクチンの有効性を増強するプロバイオティックス生物を利用する。
【０００２】
［発明の背景］
特許、公開出願、技術的論文及び学術的論文を含む種々の刊行物が、本明細書全体にわたって引用されている。これらの引用された刊行物の各々は、本明細書中で参考としてその全体が援用される。本明細書内で完全には引用されていない刊行物の完全な引用は、本明細書の終わりに示す。
【０００３】
プロバイオティックスは、適切な量で投与されるとき、宿主に健康効果をもたらす生きた微生物として定義されている（Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ Ｊら（２００１））。プロバイオティックスは、病原細菌による粘膜表面の集落形成に対する耐性を増加させることによるか（集落形成耐性）（Ｓａｎｄｅｒｓ ＭＥ（２００３））、又は消化管関連リンパ系組織（ＧＡＬＴ）に直接に影響を及ぼすことにより、免疫調節性物質の産生をもたらすプロバイオティックスの有益な健康効果を与え得ると理論付けられている。（Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅら（２００１ａ）、及びＭａｃｐｈｅｒｓｏｎ ＡＪら（２００４））。
【０００４】
プロバイオティックスは、ヒト医療での種々の感染症の経過を調節するために使用されてきた。（Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ（２００１ｂ））。対照的に、大部分の獣医学研究が大動物で行われる獣医学では、プロバイオティックスを糞便性病原体の排泄の変更（Ｋｉｍ ＬＭら（２００１））又は体重増加、飼料要求率及び死亡率減少などの産生パラメータを改善する試みに用いる研究はほとんど行われていない。１つの動物試験で、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）株ＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）を、イヌ汎白血球減少症ウイルス（ＣＤＶ）でワクチン接種した子イヌの１群に与え、ワクチン接種のみを受けた対照群と比較した（Ｂｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））。ＳＦ６８が補充された子イヌでは、対照の子イヌと比べて血清及び糞便の総ＩｇＡ濃度が増加し、ＣＤＶ特異的ＩｇＧ及びＩｇＡの血清濃度が増加し、そして循環血中のＢリンパ球のパーセンテージが増加して、このプロバイオティックにより誘導される免疫増強効果が立証された。
【０００５】
ネコ汎白血球減少症（ＦＰＶ）は、ウイルス血症に引き続き重篤な胃腸疾患を引き起こすウイルスであり、適切にワクチン接種された子ネコは殺菌免疫を有する（Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｊら（２００１））。しかし、ウイルスの上気道感染症は、ネコの医療における大きな問題であり続けている（Ｓｙｋｅｓ ＪＥら（１９９９））。ネコの鼻腔気管炎（ＦＨＶ−１）及びネコカリシウイルス（ＦＣＶ）は、この症候群に関係する２つのウイルス病原体である。病原性のチャレンジ株を接種後、ワクチン非接種対照と比較した場合、ＦＣＶワクチンはワクチン接種を受けた動物で、＞９５％の相対的有効性を誘導するが、ＦＨＶ−１ワクチンは、約６０％の相対的有効性のみを誘導する。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら、２００２））。したがって、ＦＨＶ−１は、広範なワクチン接種にもかかわらず深刻な問題であり続ける。（Ｓｙｋｅｓ ＪＥら（１９９９））。ワクチン接種の有効性を改善する以前の試みは、より大きな副作用を導く鼻腔内投与（Ｓｃｏｔｔ ＦＷら（１９９９））と疾患の重篤度の低下には導くがキャリア状態の有病率は低下させない病原性株の遺伝子操作とを含んでいた。（Ｓｌａｔｅｒ Ｅら（１９７６）） キャリア状態は、宿主の再発又は再感染並びに同居する動物に対する伝染に導く場合がある。インターフェロンアルファ、頭蓋開口術、抗ウイルス剤、鼻切開術、グルココルチコイド、局所的鬱血除去剤、及び細菌の二次感染に対する抗生物質を含む慢性ＦＨＶ−１感染症に対する複数の治療が試みられた（Ｖａｎ Ｐｅｌｔ ＤＲら（１９９４））。しかし、これらのいずれも慢性ウイルス感染症を治すことができなかった。したがって、ウイルス排泄及び臨床的な疾病の再発は一般的である。細胞媒介性の免疫応答とＩｇＡ粘膜免疫応答との両方が、α−ヘルペスウイルス感染の予防及び制御に重要であると考えられる（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２）、及びＳｌａｔｅｒ Ｅら（１９７６））。改善されたＦＨＶ−１ワクチン又はワクチン接種に対する応答が、この病原体により誘導される罹患率を減らすために必要である。
【０００６】
［発明の概要］
本発明の１つの態様は、動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を特徴とする。免疫応答を調節し、ワクチンの有効性を増強することは、動物の保護に役立ち、病原体により誘導される罹患率及び死亡率を減らすのに役立つ。
【０００７】
特定の実施形態では、組成物はペット若しくは動物食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品である。種々の実施形態では、プロバイオティック生物は、少なくとも１つをエンテロコッカス属種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）を単独で、又は他のプロバイオティック生物、たとえばストレプトコッカス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、ラクトバシラス属種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクトコッカス属種（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ビフィドバクテリウム属種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、又はサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）との組合せで含んでいる。好ましい実施形態においては、プロバイオティック生物は、エンテロコッカス・フェシウムＮＣＩＭＢ１０４１５（ＳＦ６８）である。この組成物は、追加成分を含み得る。たとえば、７−オキソデヒドロエピアンドロステロンなどのさらに免疫を増強する１つ又は複数の化合物が含まれる。
【０００８】
特定の実施形態では、この組成物は、ネコのようなコンパニオン動物用に製剤化される。他の実施形態では、組成物は非コンパニオン動物用に、特にネコ科のメンバー用に製剤化される。他の実施形態では、この組成物は、ヒトの食用に製剤化される。
【０００９】
本発明の別の態様は、動物で免疫を調節するのに有効な量で上記のように１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を定期的に動物に投与することを含む、動物で免疫を調節する方法を特徴とする。特定の実施形態では、この方法はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この方法は非コンパニオン動物、特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この方法はヒトに適用される。
【００１０】
本発明の別の態様では、上記のように動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を定期的に動物に投与することを含む、動物でワクチンの有効性を増強する方法を特徴とする。好ましい実施形態においては、このワクチンはネコ鼻腔気管炎ウイルス、ネコカリシウイルス又はネコ汎白血球減少症ウイルスに対するものである。特定の実施形態では、この方法はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この方法は非コンパニオン動物で特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この方法はヒトに適用される。
【００１１】
本発明の別の態様は、上記のように動物で免疫を調節する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティック生物の使用を特徴とする。特定の実施形態では、この組成物は、機能性食品又は栄養補助食品である。この組成物は、ネコなどのコンパニオン動物に給餌することができる。他の実施形態では、この組成物は非コンパニオン動物で特にネコ科のメンバーに適用することができる。他の実施形態では、ヒトへの適用に用いることができる。
【００１２】
本発明の別の態様では、上記のように、動物でワクチンの有効性を増強する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティック生物の使用を特徴とする。特定の実施形態では、この組成物は、機能性食品又は栄養補助食品である。この組成物を、その動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で定期的に動物に投与することができる。好ましい実施形態においては、ワクチンはネコ鼻腔気管炎ウイルス、ネコカリシウイルス、又はネコ汎白血球減少症ウイルスに対するものである。特定の実施形態では、この組成物はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この組成物は非コンパニオン動物で、特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この組成物はヒトに適用される。
【００１３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の図面、詳細な説明及び実施例を参照することにより明らかになるであろう。
【００１４】
［例示的な実施形態の詳細な説明］
定義：
本発明の方法及び他の態様に関する種々の用語は、本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられる。特記しない限り、このような用語は、当技術分野における用語の通常の意味を与えられるべきである。他の特に定義した用語は、本明細書で提供されるこの定義での一致した様式で解釈されるべきである。
【００１５】
本明細書及び実施例で以下の略語が用いられる。ＦＨＶ−１、ネコ鼻腔気管炎ウイルス；ＦＣＶ、ネコカリシウイルス；ＦＰＶ、ネコ汎白血球減少症ウイルス；ｓｐｐ．、種；ＥＬＩＳＡ、酵素結合免疫吸着検定法；ＤＭ、乾物；ＣＦＵ、コロニー形成単位；ｋｇ、キログラム；ＢＷ、体重。
【００１６】
「有効量」とは、特定の生物学的結果を達成するために有効な本明細書に記載されるような、化合物、物質、又は組成物の量を意味する。このような結果は、限定されるものではないが、動物で免疫を改善する、又はワクチンの有効性を増強することを含む。このような有効な活性は、たとえば、動物に本発明の組成物を投与することにより達成され得る。
【００１７】
この明細書の文脈中で、用語「約」は、場合によってはプラスマイナス２０％を、より好ましくは場合によってはプラスマイナス１０％を、さらに好ましくは場合によってはプラスマイナス５％を、さらにより好ましくは場合によってはプラスマイナス２％を、もっとも好ましくは場合によってはプラスマイナス１％を意味すると解釈される。
【００１８】
「…を含む」とは、「特に、…を含む」を意味すると解釈され、「…のみから成る」を意味することを意図していない。
【００１９】
「適応免疫」又は「適応免疫応答」とは、本明細書で相互に交換可能に広義に使用され、免疫記憶の発現を含む抗原チャレンジに対する免疫応答を意味する。適応免疫応答は、限定されるものではないが、体液性及び細胞性免疫を含む。
【００２０】
「体液性免疫」又は「体液性免疫応答」とは、本明細書で相互に交換可能に使用され、抗原チャレンジに応答する免疫グロブリン分子の産生を意味する。
【００２１】
「細胞性免疫」又は「細胞性免疫応答」又は「細胞媒介性免疫」とは、本明細書で相互に交換可能に使用され、抗原チャレンジに応答する細胞障害性又はヘルパーＴリンパ球、単核細胞、及びサイトカインの活性化を意味する。この用語は、抗体を用いて天然レシピエントへ移入することができない全ての適応免疫を包含する。
【００２２】
「自然免疫」とは、特定の抗原によるその後のチャレンジにより増強されない、病原体に対する体の耐性の非特異的なメカニズムを意味する。
【００２３】
「免疫を調節する」又は「免疫の調節」とは、当技術分野の適切な任意の手段により測定されるような、抗原チャレンジに対する自然免疫応答又は適応免疫応答を生じる体の能力のすべての増強又は抑制を意味する。
【００２４】
「ワクチンの有効性」とは、特定の病原体に対し、動物に及ぼす所望の治療又は保護効果を生じるワクチンの能力を意味する。「増強されたワクチンの有効性」とは、当技術分野の適切な任意の手段により測定されるような、特定の病原体に対して動物に及ぼす所望の治療又は保護効果を生じるワクチンの能力のすべての改善を意味する。
【００２５】
「プロバイオティック生物」とは、宿主動物に有益な効果を及ぼす、たとえば疾患に対する健康又は耐性を増加するすべての生物、特に微生物を意味する。プロバイオティック生物は、１つ又は複数の以下の非限定的な特性を示すことができる。すなわち、宿主に対する非病原性又は無毒性；生存細胞として、好ましくは多数存在し；腸環境（たとえば、低いｐＨ、及び胃腸酸、及び分泌物に対する耐性）で生存し、代謝し、存続でき；上皮細胞、特に胃腸管の上皮細胞への付着；殺菌若しくは静菌活性又は病原細菌に対する効果；抗発癌性活性；免疫調節活性、特に免疫の増強；内在微生物叢に対する調節的活性；尿生殖路の健康状態の増強；創傷又はその周囲の殺菌活性及び創傷治癒の増強；下痢の減少；アレルギー性反応の減少；新生児壊死性全腸炎の減少；炎症性腸疾患の減少；並びに腸管透過性の減少である（Ｒｅｉｄ Ｇら（２００３）；Ｄｒｉｓｋｏ ＪＡら（２００３）；及びＯｙｅｔａｙｏ ＶＯら（２００４））。
【００２６】
本発明は、すべての動物、好ましくは哺乳動物に関し、１つの実施形態ではコンパニオン動物に関する。「コンパニオン動物」とは、すべての飼いならされた動物であり、限定するものではないが、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、フェレット、ハムスター、マウス、スナネズミ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ブタなどが挙げられる。イヌとネコが最も好ましく、ネコが本明細書で例示される。特定の実施形態では、「動物」はヒトであり得る。別の実施形態においては、本発明はコンパニオン動物以外の動物に関する。特にこの方法は、ネコ科（Ｆｅｌｉｄａｅ）のメンバーに関し、ネコがプロバイオティック組成物の投与を受けることができる場合、本発明を適用し得るネコ科に関する（たとえば、動物園、獣医学施設、猟鳥獣保護区など）。イエネコ（Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｔｕｓ）に加えて、ネコ科は、（１）チーター属（Ａｃｉｎｏｎｙｘ）、たとえばチーター（Ａ．ｊｕｂａｔｕｓ）、（２）ウンピョウ属（Ｎｅｏｆｅｌｉｓ）、たとえばウンピョウ（Ｎ．ｎｅｂｕｌｏｓａ）、（３）ヒョウ属（Ｐａｎｔｈｅｒａ）、たとえばライオン（Ｐ．ｌｅｏ）、ジャガー（Ｐ．ｏｎｃａ）、ヒョウ（Ｐ．ｐａｒｄｕｓ）、トラ（Ｐ．ｔｉｇｒｉｓ）；（３）ユキヒョウ属（Ｕｎｃｉａ）、たとえばユキヒョウ（Ｕ．ｕｎｃｉａ）；（４）ピューマ属（Ｐｕｍａ）、たとえばクーガー、マウンテンライオン又はピューマ（Ｐ．ｃｏｎｃｏｌｏｒ）並びに（５）さまざまな種の野生のネコ（ネコ属（Ｆｅｌｉｓ））、これらには限定されないが、たとえばボルネオヤマネコ（Ｆ．ｂａｄｉａ）、カラカル（Ｆ．ｃａｒａｃａｌ）、ハイイロネコ（Ｆ．ｂｉｅｔｉ）、ジャングルキャット（Ｆ．ｃｈａｕｓ）、サンドキャット（Ｆ．ｍａｒｇａｒｉｔａ）、クロアシネコ（Ｆ．ｎｉｇｒｉｐｅｓ）、ヤマネコ（Ｆ．ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ、Ｆ．ｌｙｂｉｃａ）、ジャガランディ（Ｆ．ｙａｇｏｕｒａｒｏｕｎｄｉ）、オセロット（Ｆ．ｐａｒｄａｌｉｓ）、ジャガーネコ（Ｆ．ｔｉｇｒｉｎａ）、トラネコ（Ｆ．ｗｉｅｌｄｉ）、サーバルキャット（Ｆ．ｓｅｒｖａｌ）、オオヤマネコ（Ｆ．ｌｙｎｘ）、ボブキャット（Ｆ．ｒｕｆｕｓ）、パンパスキャット（Ｆ．ｃｏｌｏｃｏｌｏ）、ジェフリーキャット（Ｆ．ｇｅｏｆｆｒｏｙｉ）、アンデスネコ（Ｆ．ｊａｃｏｂｉｔａ）、パラスキャット（Ｆ．ｍａｎｕｌ）、コドコド（Ｆ．ｇｕｉｇｎａ）、レオパードキャット（Ｆ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ、Ｆ．ｉｒｉｏｍｏｔｅｎｓｉｓ）、フラットヘッドキャット（Ｆ．ｐｌａｎｉｃｅｐｓ）、サビイロヤマネコ（Ｆ．ｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ）、スナドリネコ（Ｆ．ｖｉｖｅｒｒｉｎａ）、及びアフリカゴールデンキャット（Ｆ．ａｕｒａｔａ）などの属のメンバーを含む。本明細書中で用いられる用語「ネコ」又は「ネコ科動物」は、特に明記しない限りネコ科の全てのメンバーを意味する。
【００２７】
本明細書中で用いられる用語「ペット食品」、「ペット食品組成物」、「動物食品」又は「動物食品組成物」とは、動物による、そして好ましくはコンパニオン動物による摂取が意図される組成物を意味する。「栄養的に完全にバランスのとれたペット又は動物食品」とは、動物栄養分野で認められた専門家の勧告に基づく適切な量及び割合で全ての既知の必要な栄養素を含み、したがって食事摂取の唯一の供給源として用いて補助的な栄養供給源の追加なしで生命の維持又は産生を促進することができる食品である。栄養的にバランスのとれたペット食品及び動物食品組成物は、当技術分野で広く知られ広く使用されている。
【００２８】
本明細書中で用いられる「栄養補助食品」とは、動物の通常の食餌に加えて摂取されることを意図した製品である。
【００２９】
本明細書中で用いられる「ヒトの食用に製剤化された食料製品」とは、ヒトによる摂取が意図されたすべての組成物である。
【００３０】
わかりやすい簡潔な明細書を書く目的で、特定の実施形態を本明細書に記載したが、これらの実施形態の特徴は、本発明の範囲内でさまざまに組み合わせることができるか又は分離することができることは理解されるであろう。
【００３１】
説明：
本発明者らは、子ネコにおいてエンテロコッカス・フェシウムＮＣＩＭＢ１０４１５（ＳＦ６８）などのプロバイオティック生物による食餌の補充は、ＣＤ４＋リンパ球の数を増加させることを観察した。したがって本発明のさまざまな態様では、動物で免疫を改善し、動物でワクチンの有効性を増強するための食餌組成物及び方法を提供することによりこれらの発見を利用する。
【００３２】
組成物
本発明の１つの態様は、動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を特徴とする。１つの好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物で自然免疫を調節する。さらに好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物で適応免疫応答を調節する。別の好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物でＦＨＶ−１、ＦＣＶ、及びＦＰＶに対するワクチンの有効性を増強する。
【００３３】
このプロバイオティック生物は、成分又は添加物として組成物中に存在できる。このプロバイオティック生物は、原核生物、真核生物、又は古細菌であってもよい。この組成物のさまざまな実施形態では、このプロバイオティック生物は、エンテロコッカス属の任意の適切な株又は亜種の少なくとも１つを単独で、或いはストレプトコッカス属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、バチルス属、ビフィドバクテリウム属、又はサッカロミセス属のような属中に含まれる他のプロバイオティック生物との組合せで含んでいる。エンテロコッカス属種は、これに限定されるものではないが、エンテロコッカス・フェシウム、特に、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８、並びに他のエンテロコッカス属、たとえば、Ｅ．フェシウムＤＳＭ１０６６３（Ｍ７４）、Ｅ．フェシウムＧＨＲ０１７ ＤＳＭ７１３４、Ｅ．フェシウムＣＥＣＴ４５１５、Ｅ．フェシウムＣＬ１５／ＡＴＣＣ１９４３４、Ｅ．フェシウムＮＣＩＭＢ１１１８１／ＤＳＭ５４６４、Ｅ．フェシウムＩＭＢ５２／ＤＳＭ３５３０、Ｅ．フェシウムＣＮＣＭ ＭＡ１７／５Ｕ、Ｅ．フェシウム２０２ ＤＳＭ４７８８／ＡＴＣＣ５３５１９、Ｅ．フェシウム３０１ ＤＳＭ４７８９／ＡＴＣＣ５５５９３、Ｅ．フェシウムＡＴＣＣ１９４３４、Ｅ．フェシウムＥＦ−１０１ ＡＴＣＣ１９４３４、及びＥ．フェシウムＡＫ２２０５ ＢＣＣＭ／ＬＭＧ Ｓ−１６５５５を含む。ストレプトコッカス属種は、これに限定されるものではないが、ストレプトコッカス・フェシウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）及びストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）を含む。ラクトバシラス属種は、これに限定されるものではないが、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシラス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバシラス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバシラス・ケロビオスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバシラス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバシラス・クルヴァトス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバシラスＧＧ（ラクトバシラス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）又はラクトバシラス・カゼイ亜種ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ））、ラクトバシラス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバシラス・ヨーンソニィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバシラス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシラス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）、ラクトバシラス・ロイテリー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバシラス・ヨーンソニィＬＡ１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＬＡ１）、ラクトバシラス・アシドフィラスＮＣＦＢ１７４８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＦＢ １７４８）、ラクトバシラス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバシラス・アシドフィラスＮＣＦＭ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＦＭ）、ラクトバシラス・アシドフィラスＤＤＳ−１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＤＤＳ−１）、ラクトバシラス・デルブリュッキー亜種デルブリュッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバシラス・デルブリュッキー亜種ブルガリカスタイプ２０３８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ｔｙｐｅ ２０３８）、ラクトバシラス・アシドフィラス ＳＢＴ−２０６２（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ−２０６２）、ラクトバシラス・サリバリウスＵＣＣ１１８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ ＵＣＣ １１８）、ラクトバシラス・パラカゼイＳＴ１１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＴ１１）、及びラクトバシラス・パラカゼイ亜種パラカゼイＦ１９（Ｌａｃｔｏｂａｄｌｌｎｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ ｐａｒａｃａｓｅｉ Ｆ１９）を含む。ラクトコッカス属種は、これに限定されるものではないが、ラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）及びラクトコッカス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を含む。バチルス属種は、これに限定されるものではないが、バシラス サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を含む。ビフィドバクテリウム属種は、これに限定されるものではないが、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム・ラクチス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）を含む。サッカロミセス属種は、これに限定されるものではないが、サッカロミセス・ブラウディ（セルビジエ）（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））を含む。
【００３４】
１つの好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ペット又は動物食品組成物である。これらは必要な栄養所要量を供給することを意図した食品、及びごちそう(ｔｒｅａｔ)（たとえば、ビスケット）又は他の栄養補助食品を含むのが有利である。場合によって、ペット又は動物食品組成物は、乾燥組成物（たとえば粒キブル（ｋｉｂｂｌｅ））、やや湿った組成物、湿性組成物、又はこれらの任意の混合物であってもよい。特定の実施形態においては、組成物はイエネコを含むが、これに限定されないネコ科動物による摂取用に製剤化される。
【００３５】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物はヒトの食用に製剤化された食料製品である。これらはヒトの必要な栄養所要量を供給することを意図した食品及び栄養素、並びに他のヒトの栄養補助食品を含むのが有利である。詳細な実施形態において、ヒトの食用に製剤化された食料製品は栄養的に完全にバランスがとれている。
【００３６】
別の好ましい実施形態では、この組成物は、たとえば肉汁、飲料水、飲物、液体濃縮物、ヨーグルト、粉末、顆粒、ペースト、懸濁液、チュー（ｃｈｅｗ）、小片(ｍｏｒｓｅｌ)、ごちそう、スナック、ペレット、ピル、カプセル、錠剤、又はその他の送達形態などの栄養補助食品である。この栄養補助食品は、コンパニオン動物又は非コンパニオン動物などの特定の動物、特にネコ又はヒトでの摂取用に特別に製剤化されてもよい。１つの詳細な実施形態では、この栄養補助食品は、この補助食品を動物に小量投与できるように高濃度のプロバイオティック生物を含んでいてもよく、また代替形態において、動物投与の前に希釈されてもよい。栄養補助食品は、動物に投与する前に水と混合する必要がある場合もある。
【００３７】
この組成物は冷蔵又は凍結できる。このプロバイオティック生物は、必要とする利益をもたらす量を提供するために、この組成物の他の成分とブレンド済みであり得、ペット食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品の上にコーティングされ得るか或いは、たとえば、粉末又は混合物を用いて動物にこれを提供する前にこの組成物に添加され得る。
【００３８】
本発明の組成物は、この組成物は投与された動物で免疫を調節する又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量でプロバイオティック生物を含む。ペット食品及びヒトの食用に配合された食料製品は、この組成物の１グラム当り約１０２から約１０１１の範囲のコロニー形成単位（ＣＦＵ）でプロバイオティック生物を含むように製剤化することができる。栄養補助食品は、数倍高濃度のプロバイオティック生物を含むように、錠剤、カプセル、液体濃縮物の形態、又は他の類似した剤形での動物投与に馴染みやすいように、或いは、たとえば水での希釈、ペット食品上への噴霧又は吹掛け、他の類似の投与形態など、投与前に希釈されるように製剤化され得る。
【００３９】
１つの実施形態では、この組成物のプロバイオティック生物の濃度は、免疫機能調節に必要とされる量の関数であり、動物の血液中のＣＤ４＋リンパ球の割合及び／又は数の増加を含んでいる。別の実施形態においては、この組成物のプロバイオティック生物の濃度は、血清、糞便、分泌物たとえば、乳汁、涙、及び唾液中の特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリンの濃度を増加させるために必要な量の関数である。ＣＤ４＋リンパ球のレベル並びに動物の血清、糞便、分泌物、たとえば乳汁、涙、及び唾液中の免疫グロブリンの濃度は、当業者に認識され認められた任意の手段により測定され得る。
【００４０】
本発明の組成物は、場合によっては、補助物質、たとえば、ミネラル、ビタミン、塩類、調味料、着色剤、及び保存料を含むことができる。補助のミネラルの非限定例は、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、鉄、塩化物、ホウ素、銅、亜鉛、マグネシウム、マンガン、ヨウ素、セレニウムなどを含む。補助のビタミンの非限定例は、ビタミンＡ、種々のＢビタミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、及びビタミンＫを含む。また追加の栄養補助食品は、たとえば、ナイアシン、パントテン酸、イヌリン、葉酸、ビオチン、アミノ酸などを含み得る。
【００４１】
本発明の組成物は、場合によっては、健全な免疫系を促進するか若しくは持続する又はさらに免疫を調節する１つ又は複数の補助物質を含むことができる。このような物質は、これらに限定されるものではないが、Ｌ−アルギニン、７−オキソデヒドロエピアンドロステロン（７−オキソＤＨＥＡ）などのステロイド、アルファ及びベータカロテンなどのカロテノイド、抗酸化剤、並びにハーブ又はアストラガルス及びエキナセアなどのハーブの抽出液を含む。
【００４２】
種々の実施形態で、本発明の動物食品又は栄養補助食品組成物は、乾物ベースで組成物の約１５重量％から約５０重量％までの粗タンパク質を含むことができる。この粗タンパク質物質は、植物性タンパク質、たとえば、ダイズ、綿実、及びピーナッツ、又は動物タンパク質、たとえば、カゼイン、アルブミン、及び食肉タンパク質を含み得る。本明細書で有用な食肉タンパク質の非限定例は、ポーク、ラム、ウマ、鳥肉、魚類、及びこれらの混合物を含む。
【００４３】
この組成物は、乾物ベースで組成物の約５重量％から約４０重量％までの脂肪をさらに含み得る。この組成物は、炭水化物の供給源をさらに含み得る。この組成物は、乾物ベースで組成物の約１５重量％から約６０重量％までの炭水化物を含み得る。このような炭水化物の非限定例は、穀粒又は穀物、たとえば、米、トウモロコシ、モロコシ、アルファルファ、オオムギ、ダイズ、アブラナ、オート麦、小麦、及びこれらの混合物を含む。この組成物は、他の物質を、たとえば乾燥ホエー及び他の酪農副産物を場合によっては含み得る。
【００４４】
またこの組成物は、少なくとも１つの繊維質供給源を含み得る。さまざまな可溶性又は不溶性繊維質が利用され得ることは当業者の知るところである。繊維質供給源は、甜菜パルプ、（糖ビート由来の）、アラビアゴム、タルハガム、オオバコ、米糠、イナゴマメガム、シトラスパルプ、ペクチン、短鎖オリゴ果糖に付加されたフルクトオリゴ糖、マンナンオリゴ果糖、大豆繊維質、ハウチワマメ由来の繊維質、アラビノガラクタン、ガラクトオリゴ糖、アラビノキシラン、又はこれらの混合物であってもよい。或いはこの繊維質供給源は、発酵性繊維質であってもよい。発酵性繊維質は、コンパニオン動物の免疫系に利益を提供するために以前に記載されている。また腸内でプロバイオティック微生物の増殖を増強できるプロバイオティック組成物を提供する当業者には周知の発酵性繊維質又は他の組成物も、本発明により動物の免疫系に提供される利益の増強を助成するために、この組成物に組み込まれ得る。
【００４５】
詳細な実施形態では、この組成物は栄養的に完全にバランスがとれたペット又は動物食品である。この文脈において、ペット食品の製剤及び製造の当業者により認識されるように、ペット食品は、湿性の食品、乾燥食品、又は中程度の含水量の食品であり得る。「湿性の食品」は、典型的には缶又はホイルバッグで販売され、典型的には約７０％から約９０％の範囲の含水量を有するペット食品を表わす。「乾燥食品」は、湿性の食品に類似した組成物であるが、典型的には約５％から約１５％の範囲の限定された含水量を含んでおり、したがって、たとえば、小さいビスケット様のキブル粒として与えられるペット食品を表わす。この組成物及び栄養補助食品は、成体動物用に、又は老いた動物若しくは若い動物用に、たとえば、「子イヌの食べ物」、「子ネコ食べ物」、又は「シニア」製剤用に特別に製剤化され得る。一般に、特殊化した製剤は、成長又は年齢の種々の段階での動物に適切なエネルギー及び栄養所要量を含むであろう。
【００４６】
本発明の特定の態様では、完全にバランスのとれた食品と組み合わせて使用されるのが好ましい（たとえば、全米研究評議会（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ）、２００６、イヌ及びネコの栄養所要量、ナショナルアカデミープレス（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、又はアメリカ飼料検査官協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｆｅｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ）公式出版 １９９６に記載されているように）。すなわち、本発明の特定の態様に基づくプロバイオティック生物を含む組成物は、高品質の市販食品と共に使用されるのが好ましい。本明細書中で用いられる「高品質の市販食品」は、たとえば、イヌ及びネコに対する上記の全米研究評議会の勧告中で述べられるように、又はアメリカ飼料検査官協会によりガイドラインで述べられているように、８０％以上の重要な栄養素の消化率を生じるように製造された食物を表す。同様の高い栄養素規格が他の動物のために使用されるであろう。
【００４７】
当業者は、どのように所与の組成物に添加されるプロバイオティック生物の適切な量を決定するかを理解するであろう。考慮され得るそのような要素は、組成物のタイプ（たとえば、ペット食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品）、種々の動物による特異的タイプの組成物の平均摂取量及び組成物が調製される製造条件を含む。組成物に添加されるプロバイオティック生物の濃度は、動物のエネルギー及び栄養所要量に基づき算出することができる。本発明の特定の態様によれば、プロバイオティック生物は、製造及び／又は組成物の加工中の任意の時点に添加してもよい。これは、限定されるものではないが、ペット食品組成物、栄養補助食品、若しくはヒトの食用に製剤化した食料製品の製剤の１部として、又はペット食品組成物、栄養補助食品、若しくはヒトの食用に製剤化した食料製品に適用されるコーティングとして含む。
【００４８】
この組成物は、当技術分野の適切な任意の方法、たとえば、Ｗａｌｔｈａｍ Ｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｏｇ ａｎｄ Ｃａｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、ＡＴＢ Ｅｄｎｅｙ編、Ａ．Ｒａｉｎｂｉｒｄによる“Ａ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｄｉｅｔ”と題する章、５７頁〜７４頁、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ Ｏｘｆｏｒｄ中で記載される方法によって製造されてもよい。
【００４９】
方法
本発明の別の態様では、動物で免疫を調節するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を動物に投与することを含む、動物で免疫を調節する方法を特徴とする。本発明のさらに別の態様では、動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を動物に投与することを含む、動物でワクチンの有効性を増強する方法を特徴とする。ある実施形態では、ワクチンは、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコ鼻腔気管炎ウイルス、又はネコカリシウイルスに対するものである。
【００５０】
本発明の２つの上述した態様のいずれの詳細な実施形態においても、本明細書中で例証されるように、この組成物はペット若しくは動物食品組成物、栄養補助食品又はヒトの食用に製剤化された食品である。さらに詳細な実施形態では、プロバイオティック生物は、少なくとも１つエンテロコッカス属種を、好ましくはＥ．フェシウムを、最も好ましくはＳＦ６８株を単独で、或いは上記のような１つ又は複数のストレプトコッカス属種、ラクトバシラス属種、ラクトコッカス属種、バチルス属種、ビフィドバクテリウム属種、又はサッカロミセス属種を含む他のプロバイオティック生物と組み合わされて含む。動物は、上記のような任意の飼いならされた又はコンパニオン動物を含んでもよく、或いはヒトを含んでもよい。特定の実施形態では、動物はネコなどのコンパニオン動物である。別の実施形態においては、動物はヒトである。
【００５１】
この組成物は、任意の種々の代替投与経路により動物に投与することができる。そのような経路は、これらに限定されるものではないが、経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、胃内、幽門横断、皮下、直腸などを含む。この組成物は、経口的に投与されるのが好ましい。本明細書中で用いられる用語「経口投与」又は「経口的に投与する」とは、本明細書に記載されている１つ又は複数の本発明の組成物を、動物が摂取するか又はヒトが食べるように指示されるか又は動物に食べさせることを意味する。
【００５２】
ヒトがこの組成物を食べるように指示されるとき、そのような指示は、この組成物の使用によりリファレンス付きの有益性、たとえば動物での免疫を調節又はワクチンの有効性の増強を提供し得る及び／又は提供するであろうことを、ヒトに指導及び／又は通知する指示であり得る。そのような指示は、口頭の指示（たとえば、医師、獣医師、若しくは他の医療従事者からの口頭の指導、又はラジオ若しくはテレビ媒体（すなわち、広告）、又は文書による指示（たとえば、医師、獣医師、若しくは他の医療従事者（たとえば、処方箋）、販売専門家若しくは組織（たとえば、マーケティングブローシャ、パンフレット、若しくは他の指導的用具を介した）からの文書による指示を介した）、筆記媒体（たとえば、インターネット、電子メール、若しくは他のコンピュータ関連媒体）、及び／又は組成物を伴う包装（たとえば、組成物が入っている容器上のラベル）を介する）であり得る。
【００５３】
投与は、必要性に応じて又は所望に応じて、たとえば、月１回、週１回、毎日、又は毎日複数回であってもよい。同様に投与は、１日、１週、又は１カ月おきに、２日、２週、又は２カ月おきに、３日、３週、又は３カ月おきなどであってもよい。投与は１日当り複数回であってもよい。通常の食事所要量に対する補助食品として利用されるとき、この組成物は動物に直接投与されるか、或いはそうでなければ１日の飼料又は食品と接触又は混合され得る。１日の飼料また食品として利用される場合、投与は当業者によく知られている。
【００５４】
また投与は定期的に、たとえば動物における食事療法の１部として実施されてもよい。食事療法は、動物で免疫を調節するか又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で、１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物の動物による定期的な摂取を与えることを含んでもよい。定期的な摂取は、１日に１回、又は毎日若しくは毎週１日に２回、３回、若しくは４回以上であってもよい。同様に定期的な投与は、１日若しくは１週おきに、２日若しくは２週おきに、３日若しくは３週おきに、４日若しくは４週おきに、又は５日若しくは５週おきでもよく、そのような食事療法で、投与は１日に複数回でもよい。定期的な投与の目標は、本明細書中で例証されるように、好ましい１日量のプロバイオティック生物を動物に提供することである。
【００５５】
プロバイオティック生物の１日量は、動物当り１日に投与されるコロニー形成単位（ＣＦＵ）によって測定できる。プロバイオティック生物の１日量は、約１０５から約１０１２ＣＦＵ／日の範囲であってもよい。より好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０７から約１０９ＣＦＵ／日である。より好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０８から約１０９ＣＦＵ／日である。最も好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０８ＣＦＵ／日である。
【００５６】
本発明の方法によれば、食事療法の１部としての投与を含む１つ又は複数のプロバイオティック生物を含むこの組成物の投与は、動物の妊娠から一生に及ぶ期間にわたってもよい。
【００５７】
さらに詳細に本発明を記載するために、以下の実施例を示す。これらは例示のためのものであって、本発明の限定を意図するものではない。
【００５８】
実施例１
動物及び実験パラメータ
ネコ科の実験対象集団。２０匹の生後６週のＳＰＦ子ネコを、Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｉｂｅｒｔｙ、ＮＹ）から購入した。子ネコは、ＥＬＩＳＡによりネコ白血病ウイルス抗原及びネコ免疫不全ウイルス抗体に対して血清反応陰性であることが示された。（Ｓｎａｐ Ｃｏｍｂｏ、ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＭＥ）。
【００５９】
実験設計。１０日の平衡期間の後、子ネコを各々１０匹の子ネコの２群に無作為に分け、投与研究を７週齢で始めた。０．２５と０．２８ｇの間（希釈計数アッセイに基づく約５×１０９ＣＦＵ）の、ＬＢＣ ＭＥ５ ＰＥＴ Ｅ．フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ １０４１５）（Ｃｅｒｂｉｏｓ−Ｐｈａｒｍａ ＳＡ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、それぞれ５０ｍＬの円錐底部ポリプロピレン遠心チューブに添加し、キャップをかぶせて、研究期間の間４℃に保存した。同様の調製物を、チューブ当たり１５０ｍｇ使用して、嗜好促進剤（主な成分として肝臓ダイジェストを含む典型的なペット食品コーティングを用いた）のアリコートに使用した。アリコートを吸水に関してモニターし、プロバイオティック又は嗜好促進剤どちらかの何らかの凝集があるように見える場合には廃棄することとした。投与の直前に、嗜好促進剤の１つのアリコートを保存したＥ．フェシウムＳＦ６８チューブの１本（投与群）又は１本の空のチューブ（プラセボ群）へ移し、室温の水道水を用いて全容量１０ｍＬに希釈した。内容物を少なくとも３分間ボルテックスし、１２ｃｃの注射器中に吸引した。この懸濁液をボルテックスした直後に適切な子ネコに、子ネコが２７週齢になるまで１ｍｌのＥ．フェシウムＳＦ６８（１日当りの総１日量５×１０８ＣＦＵ）又は嗜好促進剤単独（プラセボ子ネコ）を経口投与した。両方の群は、無制限に乾燥子ネコ食品（全てのＡＡＦＣＯの所要量を満たす典型的な子ネコ成長用処方は、鶏肉ベースであり、主な成分として米を使用した）を与え、群を２つの別々の部屋に収容してプロバイオティクスによる相互汚染を避けた。アメリカネコ科開業医協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ）により推奨されるように、９及び１２週齢で、ネコヘルペスウィルス−１、ネコカリシウイルス、及びネコ汎白血球減少症ウイルスに対する改良生組合せワクチン（Ｐｆｉｚｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｅｘｔｏｎ、ＰＡ）で、全ての子ネコの皮下にワクチン接種した。（Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｊ ら（２００１））。
【００６０】
統計的評価。各サンプル採取日に、全ての測定されたパラメータに関する群平均値を算出した。プロバイオティック投与群とプラセボ群間の差異を、反復測定実験に適切な混合ＡＮＯＶＡモデルを用いて分析した。時間は連続変数としてモデルに含まれていた。Ｃ．パーフリンジェンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）のエンテロトキシン又はＣ．ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）トキシンＡ若しくはＢに対して陽性のネコサンプルのパーセンテージ及び細胞表面マーカーに関して陽性のゲート制御された細胞のパーセンテージを、研究期間の間ネコの各群に対して算出し、両側ｔ検定により比較した。（ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｐｒｉｓｍ、ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。統計的有意差は、ｐ＜０．０５であると考えられた。
【００６１】
実施例２
サンプル収集及び臨床的モニタリング
この研究を通して子ネコの態度と行動を毎日モニターした。体重は毎週測定した。血液、唾液、及び糞便を、７週齢のプロバイオティック補充又は嗜好促進剤補充開始前に、並びに９、１５、２１、及び２７週齢に全てのネコから採取した。さらに糞便を２８週齢の投与群の子ネコから採取した。子ネコの各群について、１日当たり５つの糞便サンプルを共用猫用トイレから無作為抽出し、標準化されたグラフィックスコアカードを用いて記録して、毎日の群平均値を測定した。総ＩｇＡ及び総ＩｇＧ測定用の糞便抽出液をＢｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））によって記載されたプロトコルに従って処理した。全てのサンプルは、バッチでアッセイするまで−８０℃に保存した。
【００６２】
全ての子ネコの糞便は、補充期間の当初（７週齢）は正常であった。各群の１匹の子ネコを、この研究とは無関係な理由で研究から除去し、したがって最終のデータ分析から除去した。期間中又は個々の時点で、体重及び糞便スコアに２群間で統計学的に差異が見られなかった（図１）。
【００６３】
この研究を通して全血球数、生化学パラメータ、及び体重は、ネコ群の間で類似していた。糞便スコアは群間で類似しており、同様にここで記載した用量でのＳＦ６８の使用は、顕著な臨床的な異常を誘導しないことも示唆していた。
【００６４】
実施例３
糞便のアッセイ
各サンプル採取日に、各子ネコから糞便を８階段の連続１０倍希釈して、ＫＦストレプトコッカス寒天培地に播種し、好気的に３７℃で４８時間インキュベートした。各形態型の１０コロニーを、無菌のエーゼを用いて釣菌し、１．２ｍＬのブレーンハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）に入れ、分析まで−８０℃に保存した。生存可能なＥ．フェシウムＳＦ６８が投与したネコの糞便中に存在するかどうかを決定するために、及びこのプロバイオティックが投与した子ネコから対照の子ネコに偶発的に伝播したかどうかを評価するために、ＲＡＰＤ−ＰＣＲを各サンプルからの細菌分離株で実施した。サーモサイクラーパラメータは以下の通りであった。すなわち、９５℃で１分の変性、４０℃で１分のアニール、７２℃で４分の伸長を３０サイクルで行った。２５．５μＬの反応混合液は、２．４５μＬ １０×マグネシウム非含有緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ８．３、５００ｍＭ ＫＣ１）、３．２２ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．４μＬ（１ユニット）ＪｕｍｐＳｔａｒｔ Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｉｇｍａ Ｄ−４１８４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、１．９μＬ ｄＮＴＰ混合物（２．５ｍＭ）、１μＬ プライマー（１００μＭ）、１５．４７μＬ ＰＣＲ水、及び１μＬ 細菌培養を含んでいた。用いたプライマーの配列は、５’−ＧＧＴＴＧＧＧＴＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＧ−３’であった。５〜１０μＬのＰＣＲ産物を２パーセントのアガロースゲルで泳動し、バンドのパターンをＳＦ６８陽性対照と比較した。市販のＥＬＩＳＡを、クロストリジウム パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）エンテロトキシン又はたはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）トキシンＡ／Ｂが全ての子ネコの糞便中に存在したかどうかを測定するために使用した。（Ｃ．パーフリンジェンス（ＥＬＩＳＡ、Ｋｉｔ Ｎｏ．９２−０００−２２）及びＣ．ディフィシル（ＥＬＩＳＡ、Ｋｉｔ Ｎｏ．９４−０１５０−ＫＴ）、Ｔｅｃｈｌａｂｓ、Ｂｌａｃｋｓｂｕｒｇ、ＶＡ．）。サルモネラ属種及びカンピロバクター属種のルーチンの好気性糞便培養は、コロラド州立大学診断研究室（ｔｈｅ Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で実施した。
【００６５】
投与したネコ９匹のうち７匹の糞便は、研究の間の少なくとも１つの時点でＳＦ６８陽性だった。しかし、ＳＦ６８ ＤＮＡは、補充をやめた１週後（２８週）、いずれの投与ネコの糞便からも増幅されなかった。サルモネラ属種もカンピロバクター属種のいずれも、糞便から増殖しなかった。プラセボネコからの全サンプルは、ＲＡＰＤ ＰＣＲによりＳＦ６８陰性だった。この研究を通して、Ｃ．ディフィシル トキシンＡ／Ｂ又はＣ．パーフリンジェンス エンテロトキシンに関して陽性のサンプルの数（表１）は、群間で異ならなかった。
【００６６】
サルモネラ属種及びカンピロバクター属種排泄は、ＳＦ６８補充によって誘導されなかった。子ネコの両方の群のいくつかの糞便サンプルは、Ｃ．ディフィシル又はＣ．パーフリンジェンス トキシンについて陽性だったが、群間の陽性サンプル数に有意な差異はなく、陽性の結果は下痢の存在と関連していなかった。ＳＦ６８は補充期間の間に大部分の投与したネコ糞便で検出されたが、補充をやめた１週後の糞便ではもはや検出されなくて、この生物は一過性の状態でのみネコにおいて存続したことを示した。したがって本明細書で記載される用量を用いるＳＦ６８の投与は、有害な影響がなく研究した期間での投与は安全である。
【００６７】
実施例４
免疫学的アッセイ
完全血球数、血清生化学的パネル、及び尿分析はコロラド州立大学（Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）の臨床病理検査室（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で実施した。抗原特異的体液性免疫応答を、血清ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ、ＦＣＶ特異的ＩｇＧ、及びネコ汎白血球減少症特異的ＩｇＧを１０の血清で測定し、並びに既報のＥＬＩＳＡアッセイの適応を用いて唾液でＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ及びＩｇＡレベルを測定することにより算定した。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２）；及びＤｉｔｍｅｒ ＤＡら（１９９８）。ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ及びＩｇＡに関して、結果は各サンプルについて３セットの試験ウェルに対する両方の平均吸光度により算出し、パーセンテージＥＬＩＳＡ単位の算出により算出した（テストサンプル平均吸光度マイナス陰性対照サンプル平均吸光度／陽性対照サンプル平均吸光度マイナス陰性対照サンプル平均吸光度に１００を掛けた）。ＦＣＶ及びＦＰＶについては平均吸光度を使用した。血清、糞便抽出液、及び唾液中の総ＩｇＧ及びＩｇＡ濃度は、市販のＥＬＩＳＡアッセイ又は放射状免疫拡散アッセイを用いて算定した。（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏａｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、ＴＸ）。
【００６８】
細胞性免疫応答は、フローサイトメトリー及び全血増殖アッセイによって評価した。フローサイトメトリーは、赤血球溶血緩衝液（０．１５５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ／０．０１０Ｍ ＫＨＣＯ３／５×１０−４％フェノールレッド（０．５％）中、室温でインキュベートした５００μＬの抗凝固処理（ＥＤＴＡ）血液を使用して、血液採集の１２時間以内に実施した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、得られた細胞ペレットを、ＰＢＳ、０．１％アジ化ナトリウム及び２％ウシ胎児血清を含むＦＡＣＳ緩衝液に、可能ならば１×１０６細胞／１００μＬの濃度を達成するように再懸濁した。上記の懸濁液の少なくとも５００μＬについて不十分な細胞を有するサンプルをカウントし、細胞濃度を記録した。免疫染色するために、各細胞懸濁液１００μＬを丸底９６穴プレートのそれぞれのウェルに添加した。非特異的結合を、１０％正常ネコ血清の添加によりブロックした。（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）。免疫染色は、暗所、４℃でＦＡＣＳ緩衝液中で実施した。リンパ球は、ＣＤ４及びＣＤ８の発現（ｖｐｇ３４；抗ＣＤ４−ｆｉｔｃ、ｖｐｇ９；抗ＣＤ８−ｒｐｅ抗体；Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ））並びにＣＤ４４の発現（ＩＭ７；抗ＣＤ４４−ｐｅ／ｃｙ５抗体；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）について染色した。Ｂ細胞の分析については、溶解した全血を、Ｂ２２０（ｒａ３−ｂ６２；抗Ｂ２２０−ビオチニル化抗体；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＣＤ２１（ｂ−ｌｙ４；抗ＣＤ２１−ａｐｃ抗体；ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、及びＭＨＣクラスＩＩ（抗ＭＨＣクラスＩＩ−ｆｉｔｃ抗体；クローンＣＡＧ５−３Ｄ１、Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ））に交差反応性抗体で免疫染色した。分析用の細胞を、前方及び側面分散特性に基づき生きているリンパ球集団でゲート制御した。データは、Ｃｙａｎ ＭＬＥ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｐで収集し、Ｓｕｍｍｉｔソフトウェアを用いて分析した。（Ｄａｋｏ−Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｆｏｒｔ Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ）。
【００６９】
増殖アッセイは、マイトジェン又は抗原の添加前に５％ＣＯ２、３７℃で３０分間、１００μＬの完全腫瘍培地（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｕｍｏｒ ｍｅｄｉａ）でインキュベートしてプレ条件付けした１０μＬの全ヘパリン添加血を用いて３回反復して実施した。（完全腫瘍培地：必須及び可欠アミノ酸＋１０％ＦＢＳを補充した改変Ｅａｇｌｅ培地）。細胞を培地単独で維持する（刺激していない）か又は、コンカナバリンＡ（１０μｇ／ｍＬ：Ｃｏｎ ＡＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、若しくはＦＨＶ−１抗原調製物（１μＬ／ウェル、研究開始前に調製し、等分して−８０℃で保存した）で、５％ＣＯ２、３７℃で９６時間刺激した。（Ｖｅｉｒ ＪＫら（２００５））。細胞は、ウェル当り１μＣｉのトリチウムチミジンでパルス標識し、１８時間後にガラス繊維フィルターマット上に採取した。（Ｗａｌｌａｃ−Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｐｅｒｋｉｎ −Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）。マットをＭｉｃｒｏＢｅｔａｓ液体シンチレーションカウンターを用いて読み取った。平均刺激指数（非刺激サンプル当りの平均最大カウントで割った刺激したサンプル当りの平均最大カウント）を、全てのサンプルに対して算出した。
【００７０】
完全血球数及び生化学的プロフィールは、全ての時点で全てのネコの年齢群について正常範囲内であった。分析したこのアッセイ間で期間中又は個々の時点で、この群間で統計的な差異はなかった。２１及び２７週齢で、血清及び唾液中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＡの平均レベルは、プラセボ群と比べた場合投与群で数値的により大きかったが、この差異は統計学的差異ではなかった（図２）。１５、２１及び２７週齢で、平均ＦＨＶ−１特異的血清ＩｇＧレベルは、両方のアッセイを用いるプラセボ群と比べた場合、投与群で数値的により大きかったが、この差異は統計学的に有意な差異ではなかった（図３）。ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧは、唾液中に検出されなかった。血清中のＦＣＶ特異的ＩｇＧレベルは、群間で同程度だった（図４）。１５週齢で、投与群血清平均ＦＰＶ特異的ＩｇＧレベルは、プラセボ群のレベルより数値的により大きかったが、この差異は統計学的に有意な差異ではなかった（図５）。
【００７１】
血清中の総ＩｇＧ及びＩｇＡ濃度は、群間で同程度だった（データは示さず）。総ＩｇＧは唾液で検出されなく、唾液中の総ＩｇＡ濃度は群間で同程度だった（データは示さず）。２７週齢で、糞便抽出液中の投与群平均総ＩｇＧ濃度は、プラセボ群の濃度より数値的に大きかったが、この差異は統計学的差異ではなかった（図６）。糞便抽出液中の総ＩｇＡ濃度は、群間で同程度だった（図６）。
【００７２】
刺激剤として１０μｇ／ｍＬのコンカナバリンＡ又は１／μＬのＦＨＶ−１抗原調製物のどちらかを用いる増殖アッセイでは、どの時点でも群間で有意に異なる平均最大カウントを生じなかった。最初の４つの時点で、任意の細胞表面マーカーについて群間で統計的な差異はなかった（図７）。２７週齢でこの投与群（平均１３．８７％）は、プラセボ群よりもゲート制御されたＣＤ４陽性リンパ球の有意に高パーセンテージを有していた（平均１０．６１％、ｐ＝０．０２２０）。他の比較で有意な群間差はなかった。
【００７３】
２７週齢でＣＤ８＋カウントの付随した増加を伴わないプラセボ群と比較した投与群でのＣＤ４＋カウントの増加は、プロバイオティックによる全身性免疫の調節効果を示している。いくつかの回収時の、数値的により大きな体液性免疫応答パラメータの検出は、Ｔｈ１応答刺激が生じたことを示唆している。この仮説は、子イヌにおけるＳＦ６８補充研究の知見により裏付けられている。（Ｂｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））。
【００７４】
ワクチン接種後、各々の子ネコは、他の研究と同様なＦＨＶ−１、ＦＣＶ、及びＦＰＶ特異的血清抗体応答を発現し、これらの子ネコは免疫応答性であり、使用した改良生ワクチンは実用的であることを示していた。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２））。この結果のいくつかは、プロバイオティックの給餌は、これらの子ネコの体液性及び細胞性免疫応答に影響を与えたことを示している。これらはプラセボ群に比較した場合、２７週齢で統計学的に有意により大きいＣＤ４＋リンパ球カウントの検出と、２１及び２７週齢で血清及び唾液中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ、１５、２１及び２７週齢で血清中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＧレベル、１５週齢で血清中のＦＰＶ特異的ＩｇＧレベル、並びに２７週齢で糞便抽出液中の総ＩｇＧ濃度に関する数値的により大きな平均値の検出とを含んでいる。
【００７５】
参考文献
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【００７６】
本発明は上記に記載し例示した実施形態に限定されるものではなく、添付されている特許請求の範囲内で変更及び修正可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１ａ】７週齢で開始し２７週齢まで毎日、１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストＰＯ（プラセボ、ｎ＝９）又は５×１０８ｃｆｕ／日のエンテロコッカス・フェシウム株ＳＦ６８を混合した（投与、ｎ＝９）１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストで補充した子ネコの経時的な体重（ａ）及び糞便スコア（ｂ）を示すグラフである。子ネコは、９及び１２週齢で市販の改良生ＦＨＶ−１ワクチンｄで皮下にワクチン接種した。箱ひげ図は、この最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図１ｂ】７週齢で開始し２７週齢まで毎日、１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストＰＯ（プラセボ、ｎ＝９）又は５×１０８ｃｆｕ／日のエンテロコッカス・フェシウム株ＳＦ６８を混合した（投与、ｎ＝９）１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストで補充した子ネコの経時的な体重（ａ）及び糞便スコア（ｂ）を示すグラフである。子ネコは、９及び１２週齢で市販の改良生ＦＨＶ−１ワクチンｄで皮下にワクチン接種した。箱ひげ図は、この最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図２ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清（ａ）及び唾液（ｂ）における、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図２ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清（ａ）及び唾液（ｂ）における、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図３】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清おける、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図４】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコからの、ＦＣＶ特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図５】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコからの、ＦＰＶ特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図６ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコの糞便抽出液の総ＩｇＧ（ａ）及びＩｇＡ（ｂ）を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図６ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコの糞便抽出液の総ＩｇＧ（ａ）及びＩｇＡ（ｂ）を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図７ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコで、フローサイトメトリーによる末梢血におけるゲート制御されたＣＤ４（ａ）及びＣＤ８（ｂ）陽性のリンパ球のパーセントを示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。＊は、投与群がプラセボ群よりも有意に高かった時点を示す。
【図７ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコで、フローサイトメトリーによる末梢血におけるゲート制御されたＣＤ４（ａ）及びＣＤ８（ｂ）陽性のリンパ球のパーセントを示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。＊は、投与群がプラセボ群よりも有意に高かった時点を示す。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、哺乳動物の栄養及び免疫応答に及ぼすその効果に関する。特に、本発明は、動物に投与して動物における自然免疫と適応免疫の両方を改善し、ワクチンの有効性を増強するプロバイオティックス生物を利用する。
【０００２】
［発明の背景］
特許、公開出願、技術的論文及び学術的論文を含む種々の刊行物が、本明細書全体にわたって引用されている。これらの引用された刊行物の各々は、本明細書中で参考としてその全体が援用される。本明細書内で完全には引用されていない刊行物の完全な引用は、本明細書の終わりに示す。
【０００３】
プロバイオティックスは、適切な量で投与されるとき、宿主に健康効果をもたらす生きた微生物として定義されている（Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ Ｊら（２００１））。プロバイオティックスは、病原細菌による粘膜表面の集落形成に対する耐性を増加させることによるか（集落形成耐性）（Ｓａｎｄｅｒｓ ＭＥ（２００３））、又は消化管関連リンパ系組織（ＧＡＬＴ）に直接に影響を及ぼすことにより、免疫調節性物質の産生をもたらすプロバイオティックスの有益な健康効果を与え得ると理論付けられている。（Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅら（２００１ａ）、及びＭａｃｐｈｅｒｓｏｎ ＡＪら（２００４））。
【０００４】
プロバイオティックスは、ヒト医療での種々の感染症の経過を調節するために使用されてきた。（Ｉｓｏｌａｕｒｉ Ｅ（２００１ｂ））。対照的に、大部分の獣医学研究が大動物で行われる獣医学では、プロバイオティックスを糞便性病原体の排泄の変更（Ｋｉｍ ＬＭら（２００１））又は体重増加、飼料要求率及び死亡率減少などの産生パラメータを改善する試みに用いる研究はほとんど行われていない。１つの動物試験で、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）株ＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）を、イヌ汎白血球減少症ウイルス（ＣＤＶ）でワクチン接種した子イヌの１群に与え、ワクチン接種のみを受けた対照群と比較した（Ｂｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））。ＳＦ６８が補充された子イヌでは、対照の子イヌと比べて血清及び糞便の総ＩｇＡ濃度が増加し、ＣＤＶ特異的ＩｇＧ及びＩｇＡの血清濃度が増加し、そして循環血中のＢリンパ球のパーセンテージが増加して、このプロバイオティックにより誘導される免疫増強効果が立証された。
【０００５】
ネコ汎白血球減少症（ＦＰＶ）は、ウイルス血症に引き続き重篤な胃腸疾患を引き起こすウイルスであり、適切にワクチン接種された子ネコは殺菌免疫を有する（Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｊら（２００１））。しかし、ウイルスの上気道感染症は、ネコの医療における大きな問題であり続けている（Ｓｙｋｅｓ ＪＥら（１９９９））。ネコの鼻腔気管炎（ＦＨＶ−１）及びネコカリシウイルス（ＦＣＶ）は、この症候群に関係する２つのウイルス病原体である。病原性のチャレンジ株を接種後、ワクチン非接種対照と比較した場合、ＦＣＶワクチンはワクチン接種を受けた動物で、＞９５％の相対的有効性を誘導するが、ＦＨＶ−１ワクチンは、約６０％の相対的有効性のみを誘導する。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら、２００２））。したがって、ＦＨＶ−１は、広範なワクチン接種にもかかわらず深刻な問題であり続ける。（Ｓｙｋｅｓ ＪＥら（１９９９））。ワクチン接種の有効性を改善する以前の試みは、より大きな副作用を導く鼻腔内投与（Ｓｃｏｔｔ ＦＷら（１９９９））と疾患の重篤度の低下には導くがキャリア状態の有病率は低下させない病原性株の遺伝子操作とを含んでいた。（Ｓｌａｔｅｒ Ｅら（１９７６）） キャリア状態は、宿主の再発又は再感染並びに同居する動物に対する伝染に導く場合がある。インターフェロンアルファ、頭蓋開口術、抗ウイルス剤、鼻切開術、グルココルチコイド、局所的鬱血除去剤、及び細菌の二次感染に対する抗生物質を含む慢性ＦＨＶ−１感染症に対する複数の治療が試みられた（Ｖａｎ Ｐｅｌｔ ＤＲら（１９９４））。しかし、これらのいずれも慢性ウイルス感染症を治すことができなかった。したがって、ウイルス排泄及び臨床的な疾病の再発は一般的である。細胞媒介性の免疫応答とＩｇＡ粘膜免疫応答との両方が、α−ヘルペスウイルス感染の予防及び制御に重要であると考えられる（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２）、及びＳｌａｔｅｒ Ｅら（１９７６））。改善されたＦＨＶ−１ワクチン又はワクチン接種に対する応答が、この病原体により誘導される罹患率を減らすために必要である。
【０００６】
［発明の概要］
本発明の１つの態様は、動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を特徴とする。免疫応答を調節し、ワクチンの有効性を増強することは、動物の保護に役立ち、病原体により誘導される罹患率及び死亡率を減らすのに役立つ。
【０００７】
特定の実施形態では、組成物はペット若しくは動物食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品である。種々の実施形態では、プロバイオティック生物は、少なくとも１つをエンテロコッカス属種（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）を単独で、又は他のプロバイオティック生物、たとえばストレプトコッカス属種（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、ラクトバシラス属種（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ラクトコッカス属種（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）、バチルス属種（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．）、ビフィドバクテリウム属種（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、又はサッカロミセス属種（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．）との組合せで含んでいる。好ましい実施形態においては、プロバイオティック生物は、エンテロコッカス・フェシウムＮＣＩＭＢ１０４１５（ＳＦ６８）である。この組成物は、追加成分を含み得る。たとえば、７−オキソデヒドロエピアンドロステロンなどのさらに免疫を増強する１つ又は複数の化合物が含まれる。
【０００８】
特定の実施形態では、この組成物は、ネコのようなコンパニオン動物用に製剤化される。他の実施形態では、組成物は非コンパニオン動物用に、特にネコ科のメンバー用に製剤化される。他の実施形態では、この組成物は、ヒトの食用に製剤化される。
【０００９】
本発明の別の態様は、動物で免疫を調節するのに有効な量で上記のように１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を定期的に動物に投与することを含む、動物で免疫を調節する方法を特徴とする。特定の実施形態では、この方法はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この方法は非コンパニオン動物、特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この方法はヒトに適用される。
【００１０】
本発明の別の態様では、上記のように動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を定期的に動物に投与することを含む、動物でワクチンの有効性を増強する方法を特徴とする。好ましい実施形態においては、このワクチンはネコ鼻腔気管炎ウイルス、ネコカリシウイルス又はネコ汎白血球減少症ウイルスに対するものである。特定の実施形態では、この方法はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この方法は非コンパニオン動物で特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この方法はヒトに適用される。
【００１１】
本発明の別の態様は、上記のように動物で免疫を調節する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティック生物の使用を特徴とする。特定の実施形態では、この組成物は、機能性食品又は栄養補助食品である。この組成物は、ネコなどのコンパニオン動物に給餌することができる。他の実施形態では、この組成物は非コンパニオン動物で特にネコ科のメンバーに適用することができる。他の実施形態では、ヒトへの適用に用いることができる。
【００１２】
本発明の別の態様では、上記のように、動物でワクチンの有効性を増強する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティック生物の使用を特徴とする。特定の実施形態では、この組成物は、機能性食品又は栄養補助食品である。この組成物を、その動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で定期的に動物に投与することができる。好ましい実施形態においては、ワクチンはネコ鼻腔気管炎ウイルス、ネコカリシウイルス、又はネコ汎白血球減少症ウイルスに対するものである。特定の実施形態では、この組成物はネコなどのコンパニオン動物に適用される。他の実施形態では、この組成物は非コンパニオン動物で、特にネコ科のメンバーに適用される。他の実施形態では、この組成物はヒトに適用される。
【００１３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の図面、詳細な説明及び実施例を参照することにより明らかになるであろう。
【００１４】
［例示的な実施形態の詳細な説明］
定義：
本発明の方法及び他の態様に関する種々の用語は、本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられる。特記しない限り、このような用語は、当技術分野における用語の通常の意味を与えられるべきである。他の特に定義した用語は、本明細書で提供されるこの定義での一致した様式で解釈されるべきである。
【００１５】
本明細書及び実施例で以下の略語が用いられる。ＦＨＶ−１、ネコ鼻腔気管炎ウイルス；ＦＣＶ、ネコカリシウイルス；ＦＰＶ、ネコ汎白血球減少症ウイルス；ｓｐｐ．、種；ＥＬＩＳＡ、酵素結合免疫吸着検定法；ＤＭ、乾物；ＣＦＵ、コロニー形成単位；ｋｇ、キログラム；ＢＷ、体重。
【００１６】
「有効量」とは、特定の生物学的結果を達成するために有効な本明細書に記載されるような、化合物、物質、又は組成物の量を意味する。このような結果は、限定されるものではないが、動物で免疫を改善する、又はワクチンの有効性を増強することを含む。このような有効な活性は、たとえば、動物に本発明の組成物を投与することにより達成され得る。
【００１７】
この明細書の文脈中で、用語「約」は、場合によってはプラスマイナス２０％を、より好ましくは場合によってはプラスマイナス１０％を、さらに好ましくは場合によってはプラスマイナス５％を、さらにより好ましくは場合によってはプラスマイナス２％を、もっとも好ましくは場合によってはプラスマイナス１％を意味すると解釈される。
【００１８】
「…を含む」とは、「特に、…を含む」を意味すると解釈され、「…のみから成る」を意味することを意図していない。
【００１９】
「適応免疫」又は「適応免疫応答」とは、本明細書で相互に交換可能に広義に使用され、免疫記憶の発現を含む抗原チャレンジに対する免疫応答を意味する。適応免疫応答は、限定されるものではないが、体液性及び細胞性免疫を含む。
【００２０】
「体液性免疫」又は「体液性免疫応答」とは、本明細書で相互に交換可能に使用され、抗原チャレンジに応答する免疫グロブリン分子の産生を意味する。
【００２１】
「細胞性免疫」又は「細胞性免疫応答」又は「細胞媒介性免疫」とは、本明細書で相互に交換可能に使用され、抗原チャレンジに応答する細胞障害性又はヘルパーＴリンパ球、単核細胞、及びサイトカインの活性化を意味する。この用語は、抗体を用いて天然レシピエントへ移入することができない全ての適応免疫を包含する。
【００２２】
「自然免疫」とは、特定の抗原によるその後のチャレンジにより増強されない、病原体に対する体の耐性の非特異的なメカニズムを意味する。
【００２３】
「免疫を調節する」又は「免疫の調節」とは、当技術分野の適切な任意の手段により測定されるような、抗原チャレンジに対する自然免疫応答又は適応免疫応答を生じる体の能力のすべての増強又は抑制を意味する。
【００２４】
「ワクチンの有効性」とは、特定の病原体に対し、動物に及ぼす所望の治療又は保護効果を生じるワクチンの能力を意味する。「増強されたワクチンの有効性」とは、当技術分野の適切な任意の手段により測定されるような、特定の病原体に対して動物に及ぼす所望の治療又は保護効果を生じるワクチンの能力のすべての改善を意味する。
【００２５】
「プロバイオティック生物」とは、宿主動物に有益な効果を及ぼす、たとえば疾患に対する健康又は耐性を増加するすべての生物、特に微生物を意味する。プロバイオティック生物は、１つ又は複数の以下の非限定的な特性を示すことができる。すなわち、宿主に対する非病原性又は無毒性；生存細胞として、好ましくは多数存在し；腸環境（たとえば、低いｐＨ、及び胃腸酸、及び分泌物に対する耐性）で生存し、代謝し、存続でき；上皮細胞、特に胃腸管の上皮細胞への付着；殺菌若しくは静菌活性又は病原細菌に対する効果；抗発癌性活性；免疫調節活性、特に免疫の増強；内在微生物叢に対する調節的活性；尿生殖路の健康状態の増強；創傷又はその周囲の殺菌活性及び創傷治癒の増強；下痢の減少；アレルギー性反応の減少；新生児壊死性全腸炎の減少；炎症性腸疾患の減少；並びに腸管透過性の減少である（Ｒｅｉｄ Ｇら（２００３）；Ｄｒｉｓｋｏ ＪＡら（２００３）；及びＯｙｅｔａｙｏ ＶＯら（２００４））。
【００２６】
本発明は、すべての動物、好ましくは哺乳動物に関し、１つの実施形態ではコンパニオン動物に関する。「コンパニオン動物」とは、すべての飼いならされた動物であり、限定するものではないが、ネコ、イヌ、ウサギ、モルモット、フェレット、ハムスター、マウス、スナネズミ、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ブタなどが挙げられる。イヌとネコが最も好ましく、ネコが本明細書で例示される。特定の実施形態では、「動物」はヒトであり得る。別の実施形態においては、本発明はコンパニオン動物以外の動物に関する。特にこの方法は、ネコ科（Ｆｅｌｉｄａｅ）のメンバーに関し、ネコがプロバイオティック組成物の投与を受けることができる場合、本発明を適用し得るネコ科に関する（たとえば、動物園、獣医学施設、猟鳥獣保護区など）。イエネコ（Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｔｕｓ）に加えて、ネコ科は、（１）チーター属（Ａｃｉｎｏｎｙｘ）、たとえばチーター（Ａ．ｊｕｂａｔｕｓ）、（２）ウンピョウ属（Ｎｅｏｆｅｌｉｓ）、たとえばウンピョウ（Ｎ．ｎｅｂｕｌｏｓａ）、（３）ヒョウ属（Ｐａｎｔｈｅｒａ）、たとえばライオン（Ｐ．ｌｅｏ）、ジャガー（Ｐ．ｏｎｃａ）、ヒョウ（Ｐ．ｐａｒｄｕｓ）、トラ（Ｐ．ｔｉｇｒｉｓ）；（３）ユキヒョウ属（Ｕｎｃｉａ）、たとえばユキヒョウ（Ｕ．ｕｎｃｉａ）；（４）ピューマ属（Ｐｕｍａ）、たとえばクーガー、マウンテンライオン又はピューマ（Ｐ．ｃｏｎｃｏｌｏｒ）並びに（５）さまざまな種の野生のネコ（ネコ属（Ｆｅｌｉｓ））、これらには限定されないが、たとえばボルネオヤマネコ（Ｆ．ｂａｄｉａ）、カラカル（Ｆ．ｃａｒａｃａｌ）、ハイイロネコ（Ｆ．ｂｉｅｔｉ）、ジャングルキャット（Ｆ．ｃｈａｕｓ）、サンドキャット（Ｆ．ｍａｒｇａｒｉｔａ）、クロアシネコ（Ｆ．ｎｉｇｒｉｐｅｓ）、ヤマネコ（Ｆ．ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ、Ｆ．ｌｙｂｉｃａ）、ジャガランディ（Ｆ．ｙａｇｏｕｒａｒｏｕｎｄｉ）、オセロット（Ｆ．ｐａｒｄａｌｉｓ）、ジャガーネコ（Ｆ．ｔｉｇｒｉｎａ）、トラネコ（Ｆ．ｗｉｅｌｄｉ）、サーバルキャット（Ｆ．ｓｅｒｖａｌ）、オオヤマネコ（Ｆ．ｌｙｎｘ）、ボブキャット（Ｆ．ｒｕｆｕｓ）、パンパスキャット（Ｆ．ｃｏｌｏｃｏｌｏ）、ジェフリーキャット（Ｆ．ｇｅｏｆｆｒｏｙｉ）、アンデスネコ（Ｆ．ｊａｃｏｂｉｔａ）、パラスキャット（Ｆ．ｍａｎｕｌ）、コドコド（Ｆ．ｇｕｉｇｎａ）、レオパードキャット（Ｆ．ｂｅｎｇａｌｅｎｓｉｓ、Ｆ．ｉｒｉｏｍｏｔｅｎｓｉｓ）、フラットヘッドキャット（Ｆ．ｐｌａｎｉｃｅｐｓ）、サビイロヤマネコ（Ｆ．ｒｕｂｉｇｉｎｏｓｕｓ）、スナドリネコ（Ｆ．ｖｉｖｅｒｒｉｎａ）、及びアフリカゴールデンキャット（Ｆ．ａｕｒａｔａ）などの属のメンバーを含む。本明細書中で用いられる用語「ネコ」又は「ネコ科動物」は、特に明記しない限りネコ科の全てのメンバーを意味する。
【００２７】
本明細書中で用いられる用語「ペット食品」、「ペット食品組成物」、「動物食品」又は「動物食品組成物」とは、動物による、そして好ましくはコンパニオン動物による摂取が意図される組成物を意味する。「栄養的に完全にバランスのとれたペット又は動物食品」とは、動物栄養分野で認められた専門家の勧告に基づく適切な量及び割合で全ての既知の必要な栄養素を含み、したがって食事摂取の唯一の供給源として用いて補助的な栄養供給源の追加なしで生命の維持又は産生を促進することができる食品である。栄養的にバランスのとれたペット食品及び動物食品組成物は、当技術分野で広く知られ広く使用されている。
【００２８】
本明細書中で用いられる「栄養補助食品」とは、動物の通常の食餌に加えて摂取されることを意図した製品である。
【００２９】
本明細書中で用いられる「ヒトの食用に製剤化された食料製品」とは、ヒトによる摂取が意図されたすべての組成物である。
【００３０】
わかりやすい簡潔な明細書を書く目的で、特定の実施形態を本明細書に記載したが、これらの実施形態の特徴は、本発明の範囲内でさまざまに組み合わせることができるか又は分離することができることは理解されるであろう。
【００３１】
説明：
本発明者らは、子ネコにおいてエンテロコッカス・フェシウムＮＣＩＭＢ１０４１５（ＳＦ６８）などのプロバイオティック生物による食餌の補充は、ＣＤ４＋リンパ球の数を増加させることを観察した。したがって本発明のさまざまな態様では、動物で免疫を改善し、動物でワクチンの有効性を増強するための食餌組成物及び方法を提供することによりこれらの発見を利用する。
【００３２】
組成物
本発明の１つの態様は、動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を特徴とする。１つの好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物で自然免疫を調節する。さらに好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物で適応免疫応答を調節する。別の好ましい実施形態では、このプロバイオティック生物は、動物でＦＨＶ−１、ＦＣＶ、及びＦＰＶに対するワクチンの有効性を増強する。
【００３３】
このプロバイオティック生物は、成分又は添加物として組成物中に存在できる。このプロバイオティック生物は、原核生物、真核生物、又は古細菌であってもよい。この組成物のさまざまな実施形態では、このプロバイオティック生物は、エンテロコッカス属の任意の適切な株又は亜種の少なくとも１つを単独で、或いはストレプトコッカス属、ラクトバシラス属、ラクトコッカス属、バチルス属、ビフィドバクテリウム属、又はサッカロミセス属のような属中に含まれる他のプロバイオティック生物との組合せで含んでいる。エンテロコッカス属種は、これに限定されるものではないが、エンテロコッカス・フェシウム、特に、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８、並びに他のエンテロコッカス属、たとえば、Ｅ．フェシウムＤＳＭ１０６６３（Ｍ７４）、Ｅ．フェシウムＧＨＲ０１７ ＤＳＭ７１３４、Ｅ．フェシウムＣＥＣＴ４５１５、Ｅ．フェシウムＣＬ１５／ＡＴＣＣ１９４３４、Ｅ．フェシウムＮＣＩＭＢ１１１８１／ＤＳＭ５４６４、Ｅ．フェシウムＩＭＢ５２／ＤＳＭ３５３０、Ｅ．フェシウムＣＮＣＭ ＭＡ１７／５Ｕ、Ｅ．フェシウム２０２ ＤＳＭ４７８８／ＡＴＣＣ５３５１９、Ｅ．フェシウム３０１ ＤＳＭ４７８９／ＡＴＣＣ５５５９３、Ｅ．フェシウムＡＴＣＣ１９４３４、Ｅ．フェシウムＥＦ−１０１ ＡＴＣＣ１９４３４、及びＥ．フェシウムＡＫ２２０５ ＢＣＣＭ／ＬＭＧ Ｓ−１６５５５を含む。ストレプトコッカス属種は、これに限定されるものではないが、ストレプトコッカス・フェシウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）及びストレプトコッカス・サリバリウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）を含む。ラクトバシラス属種は、これに限定されるものではないが、ラクトバシラス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバシラス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバシラス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバシラス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバシラス・ケロビオスス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌｏｂｉｏｓｕｓ）、ラクトバシラス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバシラス・クルヴァトス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｕｒｖａｔｕｓ）、ラクトバシラス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）、ラクトバシラスＧＧ（ラクトバシラス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）又はラクトバシラス・カゼイ亜種ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ））、ラクトバシラス・ガッセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバシラス・ヨーンソニィ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバシラス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバシラス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ）、ラクトバシラス・ロイテリー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバシラス・ヨーンソニィＬＡ１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＬＡ１）、ラクトバシラス・アシドフィラスＮＣＦＢ１７４８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＦＢ １７４８）、ラクトバシラス・カゼイ・シロタ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）、ラクトバシラス・アシドフィラスＮＣＦＭ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＮＣＦＭ）、ラクトバシラス・アシドフィラスＤＤＳ−１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＤＤＳ−１）、ラクトバシラス・デルブリュッキー亜種デルブリュッキー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバシラス・デルブリュッキー亜種ブルガリカスタイプ２０３８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ ｔｙｐｅ ２０３８）、ラクトバシラス・アシドフィラス ＳＢＴ−２０６２（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ＳＢＴ−２０６２）、ラクトバシラス・サリバリウスＵＣＣ１１８（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｕｓ ＵＣＣ １１８）、ラクトバシラス・パラカゼイＳＴ１１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ＳＴ１１）、及びラクトバシラス・パラカゼイ亜種パラカゼイＦ１９（Ｌａｃｔｏｂａｄｌｌｎｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ ｐａｒａｃａｓｅｉ Ｆ１９）を含む。ラクトコッカス属種は、これに限定されるものではないが、ラクトコッカス・ラクチス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）及びラクトコッカス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）を含む。バチルス属種は、これに限定されるものではないが、バシラス サチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）を含む。ビフィドバクテリウム属種は、これに限定されるものではないが、ビフィドバクテリウム・アドレッセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｉｍａｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｆａｎｔｉｓ）及びビフィドバクテリウム・ラクチス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）を含む。サッカロミセス属種は、これに限定されるものではないが、サッカロミセス・ブラウディ（セルビジエ）（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ（ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））を含む。
【００３４】
１つの好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ペット又は動物食品組成物である。これらは必要な栄養所要量を供給することを意図した食品、及びごちそう(ｔｒｅａｔ)（たとえば、ビスケット）又は他の栄養補助食品を含むのが有利である。場合によって、ペット又は動物食品組成物は、乾燥組成物（たとえば粒キブル（ｋｉｂｂｌｅ））、やや湿った組成物、湿性組成物、又はこれらの任意の混合物であってもよい。特定の実施形態においては、組成物はイエネコを含むが、これに限定されないネコ科動物による摂取用に製剤化される。
【００３５】
別の好ましい実施形態では、本発明の組成物はヒトの食用に製剤化された食料製品である。これらはヒトの必要な栄養所要量を供給することを意図した食品及び栄養素、並びに他のヒトの栄養補助食品を含むのが有利である。詳細な実施形態において、ヒトの食用に製剤化された食料製品は栄養的に完全にバランスがとれている。
【００３６】
別の好ましい実施形態では、この組成物は、たとえば肉汁、飲料水、飲物、液体濃縮物、ヨーグルト、粉末、顆粒、ペースト、懸濁液、チュー（ｃｈｅｗ）、小片(ｍｏｒｓｅｌ)、ごちそう、スナック、ペレット、ピル、カプセル、錠剤、又はその他の送達形態などの栄養補助食品である。この栄養補助食品は、コンパニオン動物又は非コンパニオン動物などの特定の動物、特にネコ又はヒトでの摂取用に特別に製剤化されてもよい。１つの詳細な実施形態では、この栄養補助食品は、この補助食品を動物に小量投与できるように高濃度のプロバイオティック生物を含んでいてもよく、また代替形態において、動物投与の前に希釈されてもよい。栄養補助食品は、動物に投与する前に水と混合する必要がある場合もある。
【００３７】
この組成物は冷蔵又は凍結できる。このプロバイオティック生物は、必要とする利益をもたらす量を提供するために、この組成物の他の成分とブレンド済みであり得、ペット食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品の上にコーティングされ得るか或いは、たとえば、粉末又は混合物を用いて動物にこれを提供する前にこの組成物に添加され得る。
【００３８】
本発明の組成物は、この組成物は投与された動物で免疫を調節する又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量でプロバイオティック生物を含む。ペット食品及びヒトの食用に配合された食料製品は、この組成物の１グラム当り約１０２から約１０１１の範囲のコロニー形成単位（ＣＦＵ）でプロバイオティック生物を含むように製剤化することができる。栄養補助食品は、数倍高濃度のプロバイオティック生物を含むように、錠剤、カプセル、液体濃縮物の形態、又は他の類似した剤形での動物投与に馴染みやすいように、或いは、たとえば水での希釈、ペット食品上への噴霧又は吹掛け、他の類似の投与形態など、投与前に希釈されるように製剤化され得る。
【００３９】
１つの実施形態では、この組成物のプロバイオティック生物の濃度は、免疫機能調節に必要とされる量の関数であり、動物の血液中のＣＤ４＋リンパ球の割合及び／又は数の増加を含んでいる。別の実施形態においては、この組成物のプロバイオティック生物の濃度は、血清、糞便、分泌物たとえば、乳汁、涙、及び唾液中の特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリンの濃度を増加させるために必要な量の関数である。ＣＤ４＋リンパ球のレベル並びに動物の血清、糞便、分泌物、たとえば乳汁、涙、及び唾液中の免疫グロブリンの濃度は、当業者に認識され認められた任意の手段により測定され得る。
【００４０】
本発明の組成物は、場合によっては、補助物質、たとえば、ミネラル、ビタミン、塩類、調味料、着色剤、及び保存料を含むことができる。補助のミネラルの非限定例は、カルシウム、リン、カリウム、ナトリウム、鉄、塩化物、ホウ素、銅、亜鉛、マグネシウム、マンガン、ヨウ素、セレニウムなどを含む。補助のビタミンの非限定例は、ビタミンＡ、種々のＢビタミン、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、及びビタミンＫを含む。また追加の栄養補助食品は、たとえば、ナイアシン、パントテン酸、イヌリン、葉酸、ビオチン、アミノ酸などを含み得る。
【００４１】
本発明の組成物は、場合によっては、健全な免疫系を促進するか若しくは持続する又はさらに免疫を調節する１つ又は複数の補助物質を含むことができる。このような物質は、これらに限定されるものではないが、Ｌ−アルギニン、７−オキソデヒドロエピアンドロステロン（７−オキソＤＨＥＡ）などのステロイド、アルファ及びベータカロテンなどのカロテノイド、抗酸化剤、並びにハーブ又はアストラガルス及びエキナセアなどのハーブの抽出液を含む。
【００４２】
種々の実施形態で、本発明の動物食品又は栄養補助食品組成物は、乾物ベースで組成物の約１５重量％から約５０重量％までの粗タンパク質を含むことができる。この粗タンパク質物質は、植物性タンパク質、たとえば、ダイズ、綿実、及びピーナッツ、又は動物タンパク質、たとえば、カゼイン、アルブミン、及び食肉タンパク質を含み得る。本明細書で有用な食肉タンパク質の非限定例は、ポーク、ラム、ウマ、鳥肉、魚類、及びこれらの混合物を含む。
【００４３】
この組成物は、乾物ベースで組成物の約５重量％から約４０重量％までの脂肪をさらに含み得る。この組成物は、炭水化物の供給源をさらに含み得る。この組成物は、乾物ベースで組成物の約１５重量％から約６０重量％までの炭水化物を含み得る。このような炭水化物の非限定例は、穀粒又は穀物、たとえば、米、トウモロコシ、モロコシ、アルファルファ、オオムギ、ダイズ、アブラナ、オート麦、小麦、及びこれらの混合物を含む。この組成物は、他の物質を、たとえば乾燥ホエー及び他の酪農副産物を場合によっては含み得る。
【００４４】
またこの組成物は、少なくとも１つの繊維質供給源を含み得る。さまざまな可溶性又は不溶性繊維質が利用され得ることは当業者の知るところである。繊維質供給源は、甜菜パルプ、（糖ビート由来の）、アラビアゴム、タルハガム、オオバコ、米糠、イナゴマメガム、シトラスパルプ、ペクチン、短鎖オリゴ果糖に付加されたフルクトオリゴ糖、マンナンオリゴ果糖、大豆繊維質、ハウチワマメ由来の繊維質、アラビノガラクタン、ガラクトオリゴ糖、アラビノキシラン、又はこれらの混合物であってもよい。或いはこの繊維質供給源は、発酵性繊維質であってもよい。発酵性繊維質は、コンパニオン動物の免疫系に利益を提供するために以前に記載されている。また腸内でプロバイオティック微生物の増殖を増強できるプロバイオティック組成物を提供する当業者には周知の発酵性繊維質又は他の組成物も、本発明により動物の免疫系に提供される利益の増強を助成するために、この組成物に組み込まれ得る。
【００４５】
詳細な実施形態では、この組成物は栄養的に完全にバランスがとれたペット又は動物食品である。この文脈において、ペット食品の製剤及び製造の当業者により認識されるように、ペット食品は、湿性の食品、乾燥食品、又は中程度の含水量の食品であり得る。「湿性の食品」は、典型的には缶又はホイルバッグで販売され、典型的には約７０％から約９０％の範囲の含水量を有するペット食品を表わす。「乾燥食品」は、湿性の食品に類似した組成物であるが、典型的には約５％から約１５％の範囲の限定された含水量を含んでおり、したがって、たとえば、小さいビスケット様のキブル粒として与えられるペット食品を表わす。この組成物及び栄養補助食品は、成体動物用に、又は老いた動物若しくは若い動物用に、たとえば、「子イヌの食べ物」、「子ネコ食べ物」、又は「シニア」製剤用に特別に製剤化され得る。一般に、特殊化した製剤は、成長又は年齢の種々の段階での動物に適切なエネルギー及び栄養所要量を含むであろう。
【００４６】
本発明の特定の態様では、完全にバランスのとれた食品と組み合わせて使用されるのが好ましい（たとえば、全米研究評議会（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ）、２００６、イヌ及びネコの栄養所要量、ナショナルアカデミープレス（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ）、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、又はアメリカ飼料検査官協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｆｅｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｏｆｆｉｃｉａｌｓ）公式出版 １９９６に記載されているように）。すなわち、本発明の特定の態様に基づくプロバイオティック生物を含む組成物は、高品質の市販食品と共に使用されるのが好ましい。本明細書中で用いられる「高品質の市販食品」は、たとえば、イヌ及びネコに対する上記の全米研究評議会の勧告中で述べられるように、又はアメリカ飼料検査官協会によりガイドラインで述べられているように、８０％以上の重要な栄養素の消化率を生じるように製造された食物を表す。同様の高い栄養素規格が他の動物のために使用されるであろう。
【００４７】
当業者は、どのように所与の組成物に添加されるプロバイオティック生物の適切な量を決定するかを理解するであろう。考慮され得るそのような要素は、組成物のタイプ（たとえば、ペット食品組成物、栄養補助食品、又はヒトの食用に製剤化された食料製品）、種々の動物による特異的タイプの組成物の平均摂取量及び組成物が調製される製造条件を含む。組成物に添加されるプロバイオティック生物の濃度は、動物のエネルギー及び栄養所要量に基づき算出することができる。本発明の特定の態様によれば、プロバイオティック生物は、製造及び／又は組成物の加工中の任意の時点に添加してもよい。これは、限定されるものではないが、ペット食品組成物、栄養補助食品、若しくはヒトの食用に製剤化した食料製品の製剤の１部として、又はペット食品組成物、栄養補助食品、若しくはヒトの食用に製剤化した食料製品に適用されるコーティングとして含む。
【００４８】
この組成物は、当技術分野の適切な任意の方法、たとえば、Ｗａｌｔｈａｍ Ｂｏｏｋ ｏｆ Ｄｏｇ ａｎｄ Ｃａｔ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、ＡＴＢ Ｅｄｎｅｙ編、Ａ．Ｒａｉｎｂｉｒｄによる“Ａ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｄｉｅｔ”と題する章、５７頁〜７４頁、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ Ｏｘｆｏｒｄ中で記載される方法によって製造されてもよい。
【００４９】
方法
本発明の別の態様では、動物で免疫を調節するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を動物に投与することを含む、動物で免疫を調節する方法を特徴とする。本発明のさらに別の態様では、動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物を動物に投与することを含む、動物でワクチンの有効性を増強する方法を特徴とする。ある実施形態では、ワクチンは、ネコ汎白血球減少症ウイルス、ネコ鼻腔気管炎ウイルス、又はネコカリシウイルスに対するものである。
【００５０】
本発明の２つの上述した態様のいずれの詳細な実施形態においても、本明細書中で例証されるように、この組成物はペット若しくは動物食品組成物、栄養補助食品又はヒトの食用に製剤化された食品である。さらに詳細な実施形態では、プロバイオティック生物は、少なくとも１つエンテロコッカス属種を、好ましくはＥ．フェシウムを、最も好ましくはＳＦ６８株を単独で、或いは上記のような１つ又は複数のストレプトコッカス属種、ラクトバシラス属種、ラクトコッカス属種、バチルス属種、ビフィドバクテリウム属種、又はサッカロミセス属種を含む他のプロバイオティック生物と組み合わされて含む。動物は、上記のような任意の飼いならされた又はコンパニオン動物を含んでもよく、或いはヒトを含んでもよい。特定の実施形態では、動物はネコなどのコンパニオン動物である。別の実施形態においては、動物はヒトである。
【００５１】
この組成物は、任意の種々の代替投与経路により動物に投与することができる。そのような経路は、これらに限定されるものではないが、経口、鼻腔内、静脈内、筋肉内、胃内、幽門横断、皮下、直腸などを含む。この組成物は、経口的に投与されるのが好ましい。本明細書中で用いられる用語「経口投与」又は「経口的に投与する」とは、本明細書に記載されている１つ又は複数の本発明の組成物を、動物が摂取するか又はヒトが食べるように指示されるか又は動物に食べさせることを意味する。
【００５２】
ヒトがこの組成物を食べるように指示されるとき、そのような指示は、この組成物の使用によりリファレンス付きの有益性、たとえば動物での免疫を調節又はワクチンの有効性の増強を提供し得る及び／又は提供するであろうことを、ヒトに指導及び／又は通知する指示であり得る。そのような指示は、口頭の指示（たとえば、医師、獣医師、若しくは他の医療従事者からの口頭の指導、又はラジオ若しくはテレビ媒体（すなわち、広告）、又は文書による指示（たとえば、医師、獣医師、若しくは他の医療従事者（たとえば、処方箋）、販売専門家若しくは組織（たとえば、マーケティングブローシャ、パンフレット、若しくは他の指導的用具を介した）からの文書による指示を介した）、筆記媒体（たとえば、インターネット、電子メール、若しくは他のコンピュータ関連媒体）、及び／又は組成物を伴う包装（たとえば、組成物が入っている容器上のラベル）を介する）であり得る。
【００５３】
投与は、必要性に応じて又は所望に応じて、たとえば、月１回、週１回、毎日、又は毎日複数回であってもよい。同様に投与は、１日、１週、又は１カ月おきに、２日、２週、又は２カ月おきに、３日、３週、又は３カ月おきなどであってもよい。投与は１日当り複数回であってもよい。通常の食事所要量に対する補助食品として利用されるとき、この組成物は動物に直接投与されるか、或いはそうでなければ１日の飼料又は食品と接触又は混合され得る。１日の飼料また食品として利用される場合、投与は当業者によく知られている。
【００５４】
また投与は定期的に、たとえば動物における食事療法の１部として実施されてもよい。食事療法は、動物で免疫を調節するか又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で、１つ又は複数のプロバイオティック生物を含む組成物の動物による定期的な摂取を与えることを含んでもよい。定期的な摂取は、１日に１回、又は毎日若しくは毎週１日に２回、３回、若しくは４回以上であってもよい。同様に定期的な投与は、１日若しくは１週おきに、２日若しくは２週おきに、３日若しくは３週おきに、４日若しくは４週おきに、又は５日若しくは５週おきでもよく、そのような食事療法で、投与は１日に複数回でもよい。定期的な投与の目標は、本明細書中で例証されるように、好ましい１日量のプロバイオティック生物を動物に提供することである。
【００５５】
プロバイオティック生物の１日量は、動物当り１日に投与されるコロニー形成単位（ＣＦＵ）によって測定できる。プロバイオティック生物の１日量は、約１０５から約１０１２ＣＦＵ／日の範囲であってもよい。より好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０７から約１０９ＣＦＵ／日である。より好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０８から約１０９ＣＦＵ／日である。最も好ましくは、プロバイオティック生物の１日量は、約１０８ＣＦＵ／日である。
【００５６】
本発明の方法によれば、食事療法の１部としての投与を含む１つ又は複数のプロバイオティック生物を含むこの組成物の投与は、動物の妊娠から一生に及ぶ期間にわたってもよい。
【００５７】
さらに詳細に本発明を記載するために、以下の実施例を示す。これらは例示のためのものであって、本発明の限定を意図するものではない。
【００５８】
実施例１
動物及び実験パラメータ
ネコ科の実験対象集団。２０匹の生後６週のＳＰＦ子ネコを、Ｌｉｂｅｒｔｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｌｉｂｅｒｔｙ、ＮＹ）から購入した。子ネコは、ＥＬＩＳＡによりネコ白血病ウイルス抗原及びネコ免疫不全ウイルス抗体に対して血清反応陰性であることが示された。（Ｓｎａｐ Ｃｏｍｂｏ、ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＭＥ）。
【００５９】
実験設計。１０日の平衡期間の後、子ネコを各々１０匹の子ネコの２群に無作為に分け、投与研究を７週齢で始めた。０．２５と０．２８ｇの間（希釈計数アッセイに基づく約５×１０９ＣＦＵ）の、ＬＢＣ ＭＥ５ ＰＥＴ Ｅ．フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ １０４１５）（Ｃｅｒｂｉｏｓ−Ｐｈａｒｍａ ＳＡ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、それぞれ５０ｍＬの円錐底部ポリプロピレン遠心チューブに添加し、キャップをかぶせて、研究期間の間４℃に保存した。同様の調製物を、チューブ当たり１５０ｍｇ使用して、嗜好促進剤（主な成分として肝臓ダイジェストを含む典型的なペット食品コーティングを用いた）のアリコートに使用した。アリコートを吸水に関してモニターし、プロバイオティック又は嗜好促進剤どちらかの何らかの凝集があるように見える場合には廃棄することとした。投与の直前に、嗜好促進剤の１つのアリコートを保存したＥ．フェシウムＳＦ６８チューブの１本（投与群）又は１本の空のチューブ（プラセボ群）へ移し、室温の水道水を用いて全容量１０ｍＬに希釈した。内容物を少なくとも３分間ボルテックスし、１２ｃｃの注射器中に吸引した。この懸濁液をボルテックスした直後に適切な子ネコに、子ネコが２７週齢になるまで１ｍｌのＥ．フェシウムＳＦ６８（１日当りの総１日量５×１０８ＣＦＵ）又は嗜好促進剤単独（プラセボ子ネコ）を経口投与した。両方の群は、無制限に乾燥子ネコ食品（全てのＡＡＦＣＯの所要量を満たす典型的な子ネコ成長用処方は、鶏肉ベースであり、主な成分として米を使用した）を与え、群を２つの別々の部屋に収容してプロバイオティクスによる相互汚染を避けた。アメリカネコ科開業医協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｅｌｉｎｅ Ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒｓ）により推奨されるように、９及び１２週齢で、ネコヘルペスウィルス−１、ネコカリシウイルス、及びネコ汎白血球減少症ウイルスに対する改良生組合せワクチン（Ｐｆｉｚｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｅｘｔｏｎ、ＰＡ）で、全ての子ネコの皮下にワクチン接種した。（Ｒｉｃｈａｒｄｓ Ｊ ら（２００１））。
【００６０】
統計的評価。各サンプル採取日に、全ての測定されたパラメータに関する群平均値を算出した。プロバイオティック投与群とプラセボ群間の差異を、反復測定実験に適切な混合ＡＮＯＶＡモデルを用いて分析した。時間は連続変数としてモデルに含まれていた。Ｃ．パーフリンジェンス（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）のエンテロトキシン又はＣ．ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）トキシンＡ若しくはＢに対して陽性のネコサンプルのパーセンテージ及び細胞表面マーカーに関して陽性のゲート制御された細胞のパーセンテージを、研究期間の間ネコの各群に対して算出し、両側ｔ検定により比較した。（ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｐｒｉｓｍ、ＧＲＡＰＨＰＡＤ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）。統計的有意差は、ｐ＜０．０５であると考えられた。
【００６１】
実施例２
サンプル収集及び臨床的モニタリング
この研究を通して子ネコの態度と行動を毎日モニターした。体重は毎週測定した。血液、唾液、及び糞便を、７週齢のプロバイオティック補充又は嗜好促進剤補充開始前に、並びに９、１５、２１、及び２７週齢に全てのネコから採取した。さらに糞便を２８週齢の投与群の子ネコから採取した。子ネコの各群について、１日当たり５つの糞便サンプルを共用猫用トイレから無作為抽出し、標準化されたグラフィックスコアカードを用いて記録して、毎日の群平均値を測定した。総ＩｇＡ及び総ＩｇＧ測定用の糞便抽出液をＢｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））によって記載されたプロトコルに従って処理した。全てのサンプルは、バッチでアッセイするまで−８０℃に保存した。
【００６２】
全ての子ネコの糞便は、補充期間の当初（７週齢）は正常であった。各群の１匹の子ネコを、この研究とは無関係な理由で研究から除去し、したがって最終のデータ分析から除去した。期間中又は個々の時点で、体重及び糞便スコアに２群間で統計学的に差異が見られなかった（図１）。
【００６３】
この研究を通して全血球数、生化学パラメータ、及び体重は、ネコ群の間で類似していた。糞便スコアは群間で類似しており、同様にここで記載した用量でのＳＦ６８の使用は、顕著な臨床的な異常を誘導しないことも示唆していた。
【００６４】
実施例３
糞便のアッセイ
各サンプル採取日に、各子ネコから糞便を８階段の連続１０倍希釈して、ＫＦストレプトコッカス寒天培地に播種し、好気的に３７℃で４８時間インキュベートした。各形態型の１０コロニーを、無菌のエーゼを用いて釣菌し、１．２ｍＬのブレーンハートインフュージョン培地（ＢＨＩ）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）に入れ、分析まで−８０℃に保存した。生存可能なＥ．フェシウムＳＦ６８が投与したネコの糞便中に存在するかどうかを決定するために、及びこのプロバイオティックが投与した子ネコから対照の子ネコに偶発的に伝播したかどうかを評価するために、ＲＡＰＤ−ＰＣＲを各サンプルからの細菌分離株で実施した。サーモサイクラーパラメータは以下の通りであった。すなわち、９５℃で１分の変性、４０℃で１分のアニール、７２℃で４分の伸長を３０サイクルで行った。２５．５μＬの反応混合液は、２．４５μＬ １０×マグネシウム非含有緩衝液（１００ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ８．３、５００ｍＭ ＫＣ１）、３．２２ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．４μＬ（１ユニット）ＪｕｍｐＳｔａｒｔ Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｉｇｍａ Ｄ−４１８４、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、１．９μＬ ｄＮＴＰ混合物（２．５ｍＭ）、１μＬ プライマー（１００μＭ）、１５．４７μＬ ＰＣＲ水、及び１μＬ 細菌培養を含んでいた。用いたプライマーの配列は、５’−ＧＧＴＴＧＧＧＴＧＡＧＡＡＴＴＧＣＡＣＧ−３’であった。５〜１０μＬのＰＣＲ産物を２パーセントのアガロースゲルで泳動し、バンドのパターンをＳＦ６８陽性対照と比較した。市販のＥＬＩＳＡを、クロストリジウム パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）エンテロトキシン又はたはＣ．ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）トキシンＡ／Ｂが全ての子ネコの糞便中に存在したかどうかを測定するために使用した。（Ｃ．パーフリンジェンス（ＥＬＩＳＡ、Ｋｉｔ Ｎｏ．９２−０００−２２）及びＣ．ディフィシル（ＥＬＩＳＡ、Ｋｉｔ Ｎｏ．９４−０１５０−ＫＴ）、Ｔｅｃｈｌａｂｓ、Ｂｌａｃｋｓｂｕｒｇ、ＶＡ．）。サルモネラ属種及びカンピロバクター属種のルーチンの好気性糞便培養は、コロラド州立大学診断研究室（ｔｈｅ Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で実施した。
【００６５】
投与したネコ９匹のうち７匹の糞便は、研究の間の少なくとも１つの時点でＳＦ６８陽性だった。しかし、ＳＦ６８ ＤＮＡは、補充をやめた１週後（２８週）、いずれの投与ネコの糞便からも増幅されなかった。サルモネラ属種もカンピロバクター属種のいずれも、糞便から増殖しなかった。プラセボネコからの全サンプルは、ＲＡＰＤ ＰＣＲによりＳＦ６８陰性だった。この研究を通して、Ｃ．ディフィシル トキシンＡ／Ｂ又はＣ．パーフリンジェンス エンテロトキシンに関して陽性のサンプルの数（表１）は、群間で異ならなかった。
【００６６】
サルモネラ属種及びカンピロバクター属種排泄は、ＳＦ６８補充によって誘導されなかった。子ネコの両方の群のいくつかの糞便サンプルは、Ｃ．ディフィシル又はＣ．パーフリンジェンス トキシンについて陽性だったが、群間の陽性サンプル数に有意な差異はなく、陽性の結果は下痢の存在と関連していなかった。ＳＦ６８は補充期間の間に大部分の投与したネコ糞便で検出されたが、補充をやめた１週後の糞便ではもはや検出されなくて、この生物は一過性の状態でのみネコにおいて存続したことを示した。したがって本明細書で記載される用量を用いるＳＦ６８の投与は、有害な影響がなく研究した期間での投与は安全である。
【００６７】
実施例４
免疫学的アッセイ
完全血球数、血清生化学的パネル、及び尿分析はコロラド州立大学（Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）の臨床病理検査室（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で実施した。抗原特異的体液性免疫応答を、血清ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ、ＦＣＶ特異的ＩｇＧ、及びネコ汎白血球減少症特異的ＩｇＧを１０の血清で測定し、並びに既報のＥＬＩＳＡアッセイの適応を用いて唾液でＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ及びＩｇＡレベルを測定することにより算定した。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２）；及びＤｉｔｍｅｒ ＤＡら（１９９８）。ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ及びＩｇＡに関して、結果は各サンプルについて３セットの試験ウェルに対する両方の平均吸光度により算出し、パーセンテージＥＬＩＳＡ単位の算出により算出した（テストサンプル平均吸光度マイナス陰性対照サンプル平均吸光度／陽性対照サンプル平均吸光度マイナス陰性対照サンプル平均吸光度に１００を掛けた）。ＦＣＶ及びＦＰＶについては平均吸光度を使用した。血清、糞便抽出液、及び唾液中の総ＩｇＧ及びＩｇＡ濃度は、市販のＥＬＩＳＡアッセイ又は放射状免疫拡散アッセイを用いて算定した。（Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏａｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ、ＴＸ）。
【００６８】
細胞性免疫応答は、フローサイトメトリー及び全血増殖アッセイによって評価した。フローサイトメトリーは、赤血球溶血緩衝液（０．１５５Ｍ ＮＨ４Ｃｌ／０．０１０Ｍ ＫＨＣＯ３／５×１０−４％フェノールレッド（０．５％）中、室温でインキュベートした５００μＬの抗凝固処理（ＥＤＴＡ）血液を使用して、血液採集の１２時間以内に実施した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、得られた細胞ペレットを、ＰＢＳ、０．１％アジ化ナトリウム及び２％ウシ胎児血清を含むＦＡＣＳ緩衝液に、可能ならば１×１０６細胞／１００μＬの濃度を達成するように再懸濁した。上記の懸濁液の少なくとも５００μＬについて不十分な細胞を有するサンプルをカウントし、細胞濃度を記録した。免疫染色するために、各細胞懸濁液１００μＬを丸底９６穴プレートのそれぞれのウェルに添加した。非特異的結合を、１０％正常ネコ血清の添加によりブロックした。（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）。免疫染色は、暗所、４℃でＦＡＣＳ緩衝液中で実施した。リンパ球は、ＣＤ４及びＣＤ８の発現（ｖｐｇ３４；抗ＣＤ４−ｆｉｔｃ、ｖｐｇ９；抗ＣＤ８−ｒｐｅ抗体；Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ））並びにＣＤ４４の発現（ＩＭ７；抗ＣＤ４４−ｐｅ／ｃｙ５抗体；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）について染色した。Ｂ細胞の分析については、溶解した全血を、Ｂ２２０（ｒａ３−ｂ６２；抗Ｂ２２０−ビオチニル化抗体；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ＣＤ２１（ｂ−ｌｙ４；抗ＣＤ２１−ａｐｃ抗体；ＢＤ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、及びＭＨＣクラスＩＩ（抗ＭＨＣクラスＩＩ−ｆｉｔｃ抗体；クローンＣＡＧ５−３Ｄ１、Ｓｅｒｏｔｅｃ、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ（Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ））に交差反応性抗体で免疫染色した。分析用の細胞を、前方及び側面分散特性に基づき生きているリンパ球集団でゲート制御した。データは、Ｃｙａｎ ＭＬＥ ｃｙｔｏｍｅｔｅｒｐで収集し、Ｓｕｍｍｉｔソフトウェアを用いて分析した。（Ｄａｋｏ−Ｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｆｏｒｔ Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ）。
【００６９】
増殖アッセイは、マイトジェン又は抗原の添加前に５％ＣＯ２、３７℃で３０分間、１００μＬの完全腫瘍培地（ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｔｕｍｏｒ ｍｅｄｉａ）でインキュベートしてプレ条件付けした１０μＬの全ヘパリン添加血を用いて３回反復して実施した。（完全腫瘍培地：必須及び可欠アミノ酸＋１０％ＦＢＳを補充した改変Ｅａｇｌｅ培地）。細胞を培地単独で維持する（刺激していない）か又は、コンカナバリンＡ（１０μｇ／ｍＬ：Ｃｏｎ ＡＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、若しくはＦＨＶ−１抗原調製物（１μＬ／ウェル、研究開始前に調製し、等分して−８０℃で保存した）で、５％ＣＯ２、３７℃で９６時間刺激した。（Ｖｅｉｒ ＪＫら（２００５））。細胞は、ウェル当り１μＣｉのトリチウムチミジンでパルス標識し、１８時間後にガラス繊維フィルターマット上に採取した。（Ｗａｌｌａｃ−Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｐｅｒｋｉｎ −Ｅｌｍｅｒ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）。マットをＭｉｃｒｏＢｅｔａｓ液体シンチレーションカウンターを用いて読み取った。平均刺激指数（非刺激サンプル当りの平均最大カウントで割った刺激したサンプル当りの平均最大カウント）を、全てのサンプルに対して算出した。
【００７０】
完全血球数及び生化学的プロフィールは、全ての時点で全てのネコの年齢群について正常範囲内であった。分析したこのアッセイ間で期間中又は個々の時点で、この群間で統計的な差異はなかった。２１及び２７週齢で、血清及び唾液中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＡの平均レベルは、プラセボ群と比べた場合投与群で数値的により大きかったが、この差異は統計学的差異ではなかった（図２）。１５、２１及び２７週齢で、平均ＦＨＶ−１特異的血清ＩｇＧレベルは、両方のアッセイを用いるプラセボ群と比べた場合、投与群で数値的により大きかったが、この差異は統計学的に有意な差異ではなかった（図３）。ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧは、唾液中に検出されなかった。血清中のＦＣＶ特異的ＩｇＧレベルは、群間で同程度だった（図４）。１５週齢で、投与群血清平均ＦＰＶ特異的ＩｇＧレベルは、プラセボ群のレベルより数値的により大きかったが、この差異は統計学的に有意な差異ではなかった（図５）。
【００７１】
血清中の総ＩｇＧ及びＩｇＡ濃度は、群間で同程度だった（データは示さず）。総ＩｇＧは唾液で検出されなく、唾液中の総ＩｇＡ濃度は群間で同程度だった（データは示さず）。２７週齢で、糞便抽出液中の投与群平均総ＩｇＧ濃度は、プラセボ群の濃度より数値的に大きかったが、この差異は統計学的差異ではなかった（図６）。糞便抽出液中の総ＩｇＡ濃度は、群間で同程度だった（図６）。
【００７２】
刺激剤として１０μｇ／ｍＬのコンカナバリンＡ又は１／μＬのＦＨＶ−１抗原調製物のどちらかを用いる増殖アッセイでは、どの時点でも群間で有意に異なる平均最大カウントを生じなかった。最初の４つの時点で、任意の細胞表面マーカーについて群間で統計的な差異はなかった（図７）。２７週齢でこの投与群（平均１３．８７％）は、プラセボ群よりもゲート制御されたＣＤ４陽性リンパ球の有意に高パーセンテージを有していた（平均１０．６１％、ｐ＝０．０２２０）。他の比較で有意な群間差はなかった。
【００７３】
２７週齢でＣＤ８＋カウントの付随した増加を伴わないプラセボ群と比較した投与群でのＣＤ４＋カウントの増加は、プロバイオティックによる全身性免疫の調節効果を示している。いくつかの回収時の、数値的により大きな体液性免疫応答パラメータの検出は、Ｔｈ１応答刺激が生じたことを示唆している。この仮説は、子イヌにおけるＳＦ６８補充研究の知見により裏付けられている。（Ｂｅｎｙａｃｏｕｂ Ｊら（２００３））。
【００７４】
ワクチン接種後、各々の子ネコは、他の研究と同様なＦＨＶ−１、ＦＣＶ、及びＦＰＶ特異的血清抗体応答を発現し、これらの子ネコは免疫応答性であり、使用した改良生ワクチンは実用的であることを示していた。（Ｌａｐｐｉｎ ＭＲら（２００２））。この結果のいくつかは、プロバイオティックの給餌は、これらの子ネコの体液性及び細胞性免疫応答に影響を与えたことを示している。これらはプラセボ群に比較した場合、２７週齢で統計学的に有意により大きいＣＤ４＋リンパ球カウントの検出と、２１及び２７週齢で血清及び唾液中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ、１５、２１及び２７週齢で血清中のＦＨＶ−１特異的ＩｇＧレベル、１５週齢で血清中のＦＰＶ特異的ＩｇＧレベル、並びに２７週齢で糞便抽出液中の総ＩｇＧ濃度に関する数値的により大きな平均値の検出とを含んでいる。
【００７５】
参考文献
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Ｖｅｉｒ ＪＫ， Ｌａｐｐｉｎ ＭＲ， Ｒａｄｅｃｋｅ Ｓ． Ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｔｏ ＦＨＶ−１． Ｊ Ｖｅｔ． Ｄｉａｇｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ２００５． （Ｉｎ Ｐｒｅｓｓ）
【００７６】
本発明は上記に記載し例示した実施形態に限定されるものではなく、添付されている特許請求の範囲内で変更及び修正可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１ａ】７週齢で開始し２７週齢まで毎日、１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストＰＯ（プラセボ、ｎ＝９）又は５×１０８ｃｆｕ／日のエンテロコッカス・フェシウム株ＳＦ６８を混合した（投与、ｎ＝９）１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストで補充した子ネコの経時的な体重（ａ）及び糞便スコア（ｂ）を示すグラフである。子ネコは、９及び１２週齢で市販の改良生ＦＨＶ−１ワクチンｄで皮下にワクチン接種した。箱ひげ図は、この最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図１ｂ】７週齢で開始し２７週齢まで毎日、１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストＰＯ（プラセボ、ｎ＝９）又は５×１０８ｃｆｕ／日のエンテロコッカス・フェシウム株ＳＦ６８を混合した（投与、ｎ＝９）１５０ｍｇの鶏肉ダイジェストで補充した子ネコの経時的な体重（ａ）及び糞便スコア（ｂ）を示すグラフである。子ネコは、９及び１２週齢で市販の改良生ＦＨＶ−１ワクチンｄで皮下にワクチン接種した。箱ひげ図は、この最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図２ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清（ａ）及び唾液（ｂ）における、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図２ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清（ａ）及び唾液（ｂ）における、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＡ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図３】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコ由来の血清おける、ＦＨＶ−１特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図４】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコからの、ＦＣＶ特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図５】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコからの、ＦＰＶ特異的ＩｇＧ結果を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図６ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコの糞便抽出液の総ＩｇＧ（ａ）及びＩｇＡ（ｂ）を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図６ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコの糞便抽出液の総ＩｇＧ（ａ）及びＩｇＡ（ｂ）を示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。全ての時点で、ｐ＞０．０５。
【図７ａ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコで、フローサイトメトリーによる末梢血におけるゲート制御されたＣＤ４（ａ）及びＣＤ８（ｂ）陽性のリンパ球のパーセントを示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。＊は、投与群がプラセボ群よりも有意に高かった時点を示す。
【図７ｂ】ＳＦ６８補充（投与）あり又はＳＦ６８補充なし（プラセボ）の子ネコで、フローサイトメトリーによる末梢血におけるゲート制御されたＣＤ４（ａ）及びＣＤ８（ｂ）陽性のリンパ球のパーセントを示すグラフである。箱ひげ図は、最小、最大、中央並びに２５及び７５パーセンタイルを示す。＊は、投与群がプラセボ群よりも有意に高かった時点を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネコ科動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）細菌を含む組成物。
【請求項２】
食品組成物又は栄養補助食品である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）株ＳＦ６８である請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１コロニー形成単位（ＣＦＵ）の量で存在する請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
７−オキソ−ＤＨＥＡをさらに含む請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
プロバイオティック生物の少なくとも１つの他の種類をさらに含む請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
改善される免疫が、ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
ネコ科動物で免疫を調節する方法であって、前記動物で免疫を調節するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌を含む組成物を前記動物に定期的に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記改善される免疫が、ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫を含む請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
動物でワクチンの有効性を増強する方法であって、前記動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌を含む組成物を前記動物に定期的に投与することを含む方法。
【請求項１７】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物でＣＤ４＋リンパ球の産生増加をもたらす請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物の血清、糞便、乳汁、涙、唾液、気道上皮、又は胃腸上皮中で、特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリン濃度の増加をもたらす請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
動物で免疫を調節する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌の使用。
【請求項２５】
前記動物がネコである請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項２４又は２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
前記動物がイエネコである請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫が改善される請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
動物でワクチンの有効性を増強する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌の使用。
【請求項３２】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項３１又は３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記動物がネコである請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
前記動物がイエネコである請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物でＣＤ４＋リンパ球の産生増加をもたらす請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物の血清、糞便、乳汁、涙、唾液、気道上皮、又は胃腸上皮中で、特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリン濃度の増加をもたらす請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１】
ネコ科動物で免疫を調節する、又はワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）細菌を含む組成物。
【請求項２】
食品組成物又は栄養補助食品である請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）株ＳＦ６８である請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１コロニー形成単位（ＣＦＵ）の量で存在する請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
７−オキソ−ＤＨＥＡをさらに含む請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
プロバイオティック生物の少なくとも１つの他の種類をさらに含む請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
改善される免疫が、ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
ネコ科動物で免疫を調節する方法であって、前記動物で免疫を調節するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌を含む組成物を前記動物に定期的に投与することを含む方法。
【請求項１１】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記改善される免疫が、ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫を含む請求項１０〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
動物でワクチンの有効性を増強する方法であって、前記動物でワクチンの有効性を増強するのに有効な量で１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌を含む組成物を前記動物に定期的に投与することを含む方法。
【請求項１７】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ネコ科動物がイエネコである請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物でＣＤ４＋リンパ球の産生増加をもたらす請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物の血清、糞便、乳汁、涙、唾液、気道上皮、又は胃腸上皮中で、特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリン濃度の増加をもたらす請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
動物で免疫を調節する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌の使用。
【請求項２５】
前記動物がネコである請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項２４又は２５に記載の使用。
【請求項２７】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
前記動物がイエネコである請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
ＦＶＨ、ＦＣＶ又はＦＰＶに対する免疫が改善される請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
動物でワクチンの有効性を増強する薬剤又は組成物の製造における１つ又は複数のプロバイオティックエンテロコッカス属細菌の使用。
【請求項３２】
前記組成物が、動物食品組成物又は栄養補助食品である請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、Ｅ．フェシウム株ＳＦ６８である請求項３１又は３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記プロバイオティックエンテロコッカス属が、製剤の１グラム当り少なくとも約１０２から約１０１１ＣＦＵの量で存在する請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記動物がネコである請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３６】
前記動物がイエネコである請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
前記ワクチンが、ＦＶＨ−１ワクチン、ＦＣＶワクチン、又はＦＰＶワクチンである請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３８】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物でＣＤ４＋リンパ球の産生増加をもたらす請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
前記動物でのワクチンの有効性の増強が、前記動物の血清、糞便、乳汁、涙、唾液、気道上皮、又は胃腸上皮中で、特定の病原体の抗原に対して反応する免疫グロブリン濃度の増加をもたらす請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の使用。
【図１ａ】
【図１ｂ】
【図２ａ】
【図２ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【図１ｂ】
【図２ａ】
【図２ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６ａ】
【図６ｂ】
【図７ａ】
【図７ｂ】
【公表番号】特表２００９−５１０１５３（Ｐ２００９−５１０１５３Ａ）
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３３９４５（Ｐ２００８−５３３９４５）
【出願日】平成１８年１０月６日（２００６．１０．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００９６９５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３９３１３
【国際公開日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月６日（２００６．１０．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００９６９５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３９３１３
【国際公開日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
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