免疫活性化剤及び免疫活性化剤配合物
【課題】優れた免疫活性化作用を有する飼料、食品、化粧品、農業用資材及び医薬品を提供すること。
【解決手段】パントエア・アグロメランス由来のＬＰＳ及びキノコ又は酵母由来のβグルカンが配合されている免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている飼料、食品、化粧品、農業用資材又は医薬品。
【解決手段】パントエア・アグロメランス由来のＬＰＳ及びキノコ又は酵母由来のβグルカンが配合されている免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている飼料、食品、化粧品、農業用資材又は医薬品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動植物の免疫機能を高め、病気の予防・改善を行うのに好適な免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている免疫活性化剤配合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代社会において、若年層ではアレルギー、中高年ではメタボリックシンドローム、高齢層では癌や感染症、アルツハイマーなどの罹患率が高くなっている。これら疾患の発症には、直接的・間接的、あるいは習慣的・遺伝的要因があるが、共通して言えることは、ストレスや加齢によって免疫力が落ちた時に発症や進行が加速されることである。したがって、免疫力を活性化する技術は、環境が変化し、食生活が欧米化し、運動量が低下している現代社会において、「健康で長生き」を支えるために必要とされる。
【０００３】
免疫活性化素材としては、ラクトフェリンなど蛋白性の因子もあるが、乳酸菌を主体とした発酵食品、キノコ類、酵母等、微生物が主役になっているものが圧倒的に多い。実は、動植物の免疫系は微生物など環境中の外来異物が自然な形で体内に入ることで活性化される。活性化の仕組みは「自然免疫」と呼ばれ、この１０年の間に、分子レベルでの細胞内シグナルトランスダクション経路の詳細が明らかになってきた。
【０００４】
さて、酵母やキノコの免疫賦活の有効成分はβグルカンである。βグルカンは、グルコースがβ１，３結合あるいはβ１，６結合で連なったものである。分子量は加水分解しないものでは数百万ダルトンであり、水溶物は高い粘性を持つ。一方、グラム陰性細菌由来のＬＰＳ（リポ多糖）も自然免疫を活性化する（例えば、特許文献１参照。）。ＬＰＳは脂質にオリゴ糖ユニットが連なった構造で、オリゴ糖ユニットの結合数によって、分子量は５千から数万ダルトンのラダー分布を見せる。ちなみにパントエア菌のＬＰＳは、分子量５０００と分子量４５０００付近にピークを持つ分子量分布を示す。
【０００５】
免疫活性化作用を免疫担当細胞であるマクロファージの活性化によって評価すると、ＬＰＳがβグルカンに比較して優位性が高い。比活性が高いことは、微量で有効であることを意味する。
【０００６】
例えば動物用飼料として与える場合、ＬＰＳでは１０μｇ〜２０μｇ／ｋｇ体重という微量で有効性が見られるが、βグルカンでは５０〜２００ｍｇ／ｋｇ体重で用いられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３０９３８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、βグルカンは、マクロファージなど自然免疫担当細胞の細胞膜上の外来異物レセプターデクチン１に結合することで、免疫担当細胞を活性化する。一方ＬＰＳは、ＴＬＲ４と呼ばれる別のレセプターに結合することで、やはり免疫担当細胞を活性化する。両者は別々のレセプターに結合することより、両者を同時に用いれば、免疫担当細胞の活性化は相加的に上がることが予想される。しかし、本発明者らによって、ＬＰＳとβグルカンはマクロファージの活性化について相乗効果を示すことが明らかとなった。
【０００９】
本発明は、優れた免疫活性化作用を有する免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている免疫活性化剤配合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の免疫活性化剤は、ＬＰＳ及びβグルカンが配合されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、飼料、食品、化粧品、農業用資材及び医薬品などに優れた免疫活性化作用を付与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】マクロファージ活性化におけるβグルカンと糖脂質の相乗効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、添付図面を参照しながら本発明を実施するための形態について詳細に説明する。
【実施例１】
【００１４】
ＬＰＳ（パントエア・アグロメランス由来、特許文献１参照）とβグルカン（パン酵母由来）のマクロファージ活性化能をマクロファージからの一酸化窒素（ＮＯ）誘導を指標として比較した。
【００１５】
マクロファージ細胞として、ラットの肺胞マクロファージ細胞株ＮＲ８３８３を用いた。
【００１６】
パン酵母抽出物の粉末品を５０ｍｇ秤量し、生理食塩水にて５０ｍｇ／ｍｌのパン酵母抽出物懸濁液を調製した。この懸濁液に、酸アルカリ処理したガラスビーズを約５００ｍｇ加え、ボルテックスミキサーを用いて攪拌（１分間の攪拌を２０回程度）し、パン酵母抽出物の凝集塊を粉砕したものを調製した。具体的には、凝集塊の粉砕の程度は顕微鏡観察（４００倍）により確認した。顕微鏡観察により、凝集塊が認められず、約５〜１０ミクロン程度のパン酵母の均一懸濁液になるまで粉砕した。これを１分間放置し、上清を粉砕処理したパン酵母抽出物懸濁液原液とした。
【００１７】
ＬＰＳは、パントエア・アグロメランスより精製したものを用いた。生理食塩水にて希釈した。
【００１８】
ＮＯの量は、グリース試薬にて測定した。３％（ｗ／ｖ）スルファニルアミドを含む７．５％リン酸水溶液（Ａ液）と、０．１５％（ｗ／ｖ）ナフチルエチレンジアミン水溶液（Ｂ液）をそれぞれ調製し、Ａ液を１に対してＢ液を２の割合で混合して用いた。
【００１９】
８×１０５個／ｍｌに細胞数を調整したＮＲ８３８３細胞を１００μｌずつ９６穴平底プレートの各ウエルに加えた。３７℃５％ＣＯ２のインキュベータにて２時間前培養を行った。βグルカンとＬＰＳの希釈溶液を１００μｌずつウエルに加えた。添加後、プレートシェーカーを用いて１０秒間攪拌した後、３７℃５％ＣＯ２のインキュベータにて、２４時間培養を行った。培養終了後、各ウエルの培養上清中の亜硝酸（Ｎｉｔｒｉｔｅ）濃度をグリース試薬にて測定した。
【００２０】
図１に示すように、マクロファージからのＮＯの誘導（ここでは亜硝酸として検出）は、βグルカン又はＬＰＳ単独よりも組み合わせることにより、相加を著しく上回る相乗効果が得られた。
【００２１】
なお、本発明は上記実施例に限定されるものではない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、動植物の免疫機能を高め、病気の予防・改善を行うのに好適な免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている免疫活性化剤配合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現代社会において、若年層ではアレルギー、中高年ではメタボリックシンドローム、高齢層では癌や感染症、アルツハイマーなどの罹患率が高くなっている。これら疾患の発症には、直接的・間接的、あるいは習慣的・遺伝的要因があるが、共通して言えることは、ストレスや加齢によって免疫力が落ちた時に発症や進行が加速されることである。したがって、免疫力を活性化する技術は、環境が変化し、食生活が欧米化し、運動量が低下している現代社会において、「健康で長生き」を支えるために必要とされる。
【０００３】
免疫活性化素材としては、ラクトフェリンなど蛋白性の因子もあるが、乳酸菌を主体とした発酵食品、キノコ類、酵母等、微生物が主役になっているものが圧倒的に多い。実は、動植物の免疫系は微生物など環境中の外来異物が自然な形で体内に入ることで活性化される。活性化の仕組みは「自然免疫」と呼ばれ、この１０年の間に、分子レベルでの細胞内シグナルトランスダクション経路の詳細が明らかになってきた。
【０００４】
さて、酵母やキノコの免疫賦活の有効成分はβグルカンである。βグルカンは、グルコースがβ１，３結合あるいはβ１，６結合で連なったものである。分子量は加水分解しないものでは数百万ダルトンであり、水溶物は高い粘性を持つ。一方、グラム陰性細菌由来のＬＰＳ（リポ多糖）も自然免疫を活性化する（例えば、特許文献１参照。）。ＬＰＳは脂質にオリゴ糖ユニットが連なった構造で、オリゴ糖ユニットの結合数によって、分子量は５千から数万ダルトンのラダー分布を見せる。ちなみにパントエア菌のＬＰＳは、分子量５０００と分子量４５０００付近にピークを持つ分子量分布を示す。
【０００５】
免疫活性化作用を免疫担当細胞であるマクロファージの活性化によって評価すると、ＬＰＳがβグルカンに比較して優位性が高い。比活性が高いことは、微量で有効であることを意味する。
【０００６】
例えば動物用飼料として与える場合、ＬＰＳでは１０μｇ〜２０μｇ／ｋｇ体重という微量で有効性が見られるが、βグルカンでは５０〜２００ｍｇ／ｋｇ体重で用いられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２００５／０３０９３８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ところで、βグルカンは、マクロファージなど自然免疫担当細胞の細胞膜上の外来異物レセプターデクチン１に結合することで、免疫担当細胞を活性化する。一方ＬＰＳは、ＴＬＲ４と呼ばれる別のレセプターに結合することで、やはり免疫担当細胞を活性化する。両者は別々のレセプターに結合することより、両者を同時に用いれば、免疫担当細胞の活性化は相加的に上がることが予想される。しかし、本発明者らによって、ＬＰＳとβグルカンはマクロファージの活性化について相乗効果を示すことが明らかとなった。
【０００９】
本発明は、優れた免疫活性化作用を有する免疫活性化剤及び該免疫活性化剤が配合されている免疫活性化剤配合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の免疫活性化剤は、ＬＰＳ及びβグルカンが配合されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、飼料、食品、化粧品、農業用資材及び医薬品などに優れた免疫活性化作用を付与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】マクロファージ活性化におけるβグルカンと糖脂質の相乗効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、添付図面を参照しながら本発明を実施するための形態について詳細に説明する。
【実施例１】
【００１４】
ＬＰＳ（パントエア・アグロメランス由来、特許文献１参照）とβグルカン（パン酵母由来）のマクロファージ活性化能をマクロファージからの一酸化窒素（ＮＯ）誘導を指標として比較した。
【００１５】
マクロファージ細胞として、ラットの肺胞マクロファージ細胞株ＮＲ８３８３を用いた。
【００１６】
パン酵母抽出物の粉末品を５０ｍｇ秤量し、生理食塩水にて５０ｍｇ／ｍｌのパン酵母抽出物懸濁液を調製した。この懸濁液に、酸アルカリ処理したガラスビーズを約５００ｍｇ加え、ボルテックスミキサーを用いて攪拌（１分間の攪拌を２０回程度）し、パン酵母抽出物の凝集塊を粉砕したものを調製した。具体的には、凝集塊の粉砕の程度は顕微鏡観察（４００倍）により確認した。顕微鏡観察により、凝集塊が認められず、約５〜１０ミクロン程度のパン酵母の均一懸濁液になるまで粉砕した。これを１分間放置し、上清を粉砕処理したパン酵母抽出物懸濁液原液とした。
【００１７】
ＬＰＳは、パントエア・アグロメランスより精製したものを用いた。生理食塩水にて希釈した。
【００１８】
ＮＯの量は、グリース試薬にて測定した。３％（ｗ／ｖ）スルファニルアミドを含む７．５％リン酸水溶液（Ａ液）と、０．１５％（ｗ／ｖ）ナフチルエチレンジアミン水溶液（Ｂ液）をそれぞれ調製し、Ａ液を１に対してＢ液を２の割合で混合して用いた。
【００１９】
８×１０５個／ｍｌに細胞数を調整したＮＲ８３８３細胞を１００μｌずつ９６穴平底プレートの各ウエルに加えた。３７℃５％ＣＯ２のインキュベータにて２時間前培養を行った。βグルカンとＬＰＳの希釈溶液を１００μｌずつウエルに加えた。添加後、プレートシェーカーを用いて１０秒間攪拌した後、３７℃５％ＣＯ２のインキュベータにて、２４時間培養を行った。培養終了後、各ウエルの培養上清中の亜硝酸（Ｎｉｔｒｉｔｅ）濃度をグリース試薬にて測定した。
【００２０】
図１に示すように、マクロファージからのＮＯの誘導（ここでは亜硝酸として検出）は、βグルカン又はＬＰＳ単独よりも組み合わせることにより、相加を著しく上回る相乗効果が得られた。
【００２１】
なお、本発明は上記実施例に限定されるものではない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＰＳ（リポ多糖）及びβグルカンが配合されていることを特徴とする免疫活性化剤。
【請求項２】
前記ＬＰＳは、グラム陰性細菌由来であることを特徴とする免疫活性化剤。
【請求項３】
前記グラム陰性細菌は、パントエア・アグロメランスであることを特徴とする請求項２記載の免疫活性化剤。
【請求項４】
請求項１乃至３いずれかに記載の免疫活性化剤が配合されていることを特徴とする免疫活性化剤配合物。
【請求項５】
前記免疫活性化剤配合物は、飼料、食品、化粧品、農業用資材又は医薬品であることを特徴とする請求項４記載の免疫活性化剤配合物。
【請求項１】
ＬＰＳ（リポ多糖）及びβグルカンが配合されていることを特徴とする免疫活性化剤。
【請求項２】
前記ＬＰＳは、グラム陰性細菌由来であることを特徴とする免疫活性化剤。
【請求項３】
前記グラム陰性細菌は、パントエア・アグロメランスであることを特徴とする請求項２記載の免疫活性化剤。
【請求項４】
請求項１乃至３いずれかに記載の免疫活性化剤が配合されていることを特徴とする免疫活性化剤配合物。
【請求項５】
前記免疫活性化剤配合物は、飼料、食品、化粧品、農業用資材又は医薬品であることを特徴とする請求項４記載の免疫活性化剤配合物。
【図１】
【公開番号】特開２０１２−８２１５６（Ｐ２０１２−８２１５６Ａ）
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２２９１５８（Ｐ２０１０−２２９１５８）
【出願日】平成２２年１０月９日（２０１０．１０．９）
【出願人】（５００３１５０２４）有限会社バイオメディカルリサーチグループ (12)
【出願人】（５０８０９８３９４）自然免疫応用技研株式会社 (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年４月２６日（２０１２．４．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月９日（２０１０．１０．９）
【出願人】（５００３１５０２４）有限会社バイオメディカルリサーチグループ (12)
【出願人】（５０８０９８３９４）自然免疫応用技研株式会社 (4)
【Ｆターム（参考）】
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