本明細書は、組成物を誘導するＳＮＡＰ−２５免疫反応、ＢｏＮＴ／Ａ開裂部位切断可能結合のＰ_１残基にカルボキシル末端を有するＳＮＡＰ−２５を含むエピトープに選択的に結合するα−ＳＮＡＰ−２５抗体の作成方法、ＢｏＮＴ／Ａ開裂部位切断可能結合のＰ_１残基にカルボキシル末端を有するＳＮＡＰ−２５を含むエピトープに選択的に結合するα−ＳＮＡＰ−２５抗体、再標的化エンドペプチダーゼ活性の検出方法、及び中和α−再標的化エンドペプチダーゼ抗体の検出方法を開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．確立された細胞株由来の細胞を再標的化エンドペプチダーゼを含む試料を用いて処理すること、ここで該確立された細胞株由来の細胞は、約５００ｐＭ以下の再標的化エンドペプチダーゼによる再標的化エンドペプチダーゼ活性に感受性である；
ｂ．前記処理した細胞から、ＢｏＮＴ／Ａ切断部位切断可能結合のカルボキシル末端グルタミンを有するＳＮＡＰ−２５開裂産物を含むＳＮＡＰ−２５成分を単離すること；
ｃ．前記ＳＮＡＰ−２５成分を、固相担体に結合させたα−ＳＮＡＰ−２５抗体に接触させる工程であって、ここで前記α−ＳＮＡＰ−２５抗体はＳＮＡＰ−２５開裂産物由来のＢｏＮＴ／Ａ切断部位切断可能結合のカルボキシル末端グルタミンを含むエピトープに結合し、前記α−ＳＮＡＰ−２５抗体はＳＮＡＰ−２５開裂産物由来のＢｏＮＴ／Ａ切断部位切断可能結合のカルボキシル末端グルタミンを含まないＳＮＡＰ−２５のエピトープに対して１ｘ１０^−１Ｍ^−１ｓ^−１未満の結合速度定数を有し、かつ、α−ＳＮＡＰ−２５抗体は前記エピトープに対して０．４５０ｎＭ未満の平衡解離定数を有すること；
ｄ．前記α−ＳＮＡＰ−２５抗体、及び前記ＢｏＮＴ／Ａ切断部位切断可能結合由来のカルボキシル末端グルタミンを有する前記ＳＮＡＰ−２５開裂産物を含む抗体−抗原複合体の存在を検出すること、ここで該抗体−抗原複合体による検出が、再標的化エンドペプチダーゼの活性を示す、
を含む、再標的化エンドペプチダーゼ活性を検出する方法。
【請求項２】
前記ＳＮＡＰ−２５開裂産物がＳＮＡＰ−２５_１９７である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体−抗原複合体の存在がサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて検出される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、少なくとも３：１の下側の漸近線でのシグナル対ノイズ比、及び少なくとも１０：１の上側の漸近線でのシグナル対ノイズ比を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記試料が最大で１００ｐＭの再標的化エンドペプチダーゼを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
確立された細胞株由来の前記細胞が、約１００ｐＭ未満の再標的化エンドペプチダーゼよるエキソサイトーシスの再標的化エンドペプチダーゼ阻害を受けやすい、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記方法が単体様式（singleplex）又は多重様式(multiplex)で実施される、請求項１に記載の方法。

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【公表番号】特表２０１２−５２０４７０（Ｐ２０１２−５２０４７０Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５４２６０（Ｐ２０１１−５５４２６０）
【出願日】平成２２年３月１２日（２０１０．３．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２７２４４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０５２３６
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５９１０１８２６８）アラーガン、インコーポレイテッド (293)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＬＥＲＧＡＮ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】