冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶抑制用組成物
本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶抑制用組成物ならびに皮膚疾患予防及び治療用組成物に関する。本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片に対する抗体の生成を有意に抑制し、体重変化などの副作用を起こない。天然物由来であるため本組成物は毒性がなく人体に無害なので、臓器移植時の免疫抑制剤として使用することができる。また、ただれからの滲出を抑制することから、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、および天然痘を含む皮膚疾患の予防及び治療にも有用に使用することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
移植片の受容者の免疫系によって、移植された臓器または組織が攻撃される場合、移植片拒絶がおこる。効果的な免疫反応の抑制が臓器移植の成否を決定する主要要因として知られている。このような観点から、免疫抑制剤の開発は、臓器および組織の移植と自己免疫疾患の治療において画期的な発展を可能にし、移植された臓器または組織に対する生体内免疫反応の作用機序研究に多くの寄与をしてきた。
【０００３】
このように、移植された臓器の拒絶反応を抑制したり減少させたりするための方法として、免疫抑制剤が開発されたが、その例として土壌カビの一種であるトリポクラジウム・インフラタム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ ｉｎｆｌａｔｕｍ）から生産されたシクロスポリンＡ（米国特許第４，１１７，１１８号（特許文献１））などを挙げることができる。このような免疫抑制剤の開発は、臨床的に成功的な臓器移植を可能にしたのみならず、自己免疫疾患治療における利用性も提示した。しかし、従来の免疫抑制剤は、Ｔ−細胞にのみ選択的で、特異的に作用しなければならないにもかかわらず、一般的なシグナル伝達系を含む細胞機能にまで広範囲に影響を及ぼすことによって、健康な他の臓器に対する副作用を誘発していた（参照：Ｓ．−Ｈ．Ｌｅｅ等，Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７年，第１９巻，ｐ．３７５〜３８９（非特許文献１））。一例として、シクロスポリンＡは、慢性的な肝臓疾患と心臓移植後に高血圧症状を誘発するなどの副作用があることが知られている（参照：Ｊ．Ｅ．Ｆ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ等，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｙａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９６年，第３１巻，ｐ．５５７〜５６２（非特許文献２））。したがって、副作用がない新しい免疫抑制剤を開発するために多くの努力がなされてきて、その結果、最近では、ＦＫ−５０６が免疫抑制剤として発見されて市販されているが、この薬剤の副作用が見いだされている（Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９９７年，第１１巻，ｐ．２３７〜２４２（非特許文献３））。
【０００４】
一方、冬虫夏草は、中国では昔から漢方の薬膳料理の貴重な素材として、高麗人参とともに一部貴族階級の人々に常用されてきたもので、冬虫夏草は、昆虫に寄生して形成される一種の薬用キノコである。カビである冬虫夏草菌が、温度および湿度が高くなる時期に、生きている昆虫の体中に入って行って発育増殖しながら宿主昆虫を殺して子実体を宿主昆虫上に形成する。元々、コウモリガ科（Ｈｅｐｉａｌｉｄａｅ）の幼虫に寄生するシネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）を指していたが、今日では、蜘蛛などの節足動物から出るキノコを総称して、本明細書において「冬虫夏草」と呼ぶ。
【０００５】
シネンシス冬虫夏草には、水分１０．８％、脂肪８．４％、粗蛋白質２５〜３２％、炭水化物２３．９％、粗繊維１８．５％が含有されていて、８種の必須アミノ酸を含み、１７種の各種アミノ酸が入っている。また薬理作用を示す有効活性物質としては、微量のコルディセピン、７．６％のＤ−マンニトール、１１．２％の多糖体がある。ヌクレオシドの誘導体であるコルディセピンは、キナ酸の異性体として抗癌作用に関与するといわれている。
【０００６】
冬虫夏草抽出物の種々の薬理作用としては、抗菌作用（ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、鼻疽菌（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｌｌｅｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、パスツレラ スイセプチカ（Ｐａｓｔｕｅｒｅｌｌａ ｓｕｉｓｅｐｔｉｃａ）、ミクロスポルム ギプセウム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｅｕｍ）、およびミクロスポルム ラノサム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｌａｎｏｓｕｍ））、中枢神経系作用（鎮静作用、抗痙攣作用）、呼吸系統作用（気管支喘息治癒作用、去痰作用）、心臓血管系作用（心臓拍動安定化作用、コレステロール低下作用、抗低酸素作用）、抗癌作用、免疫増強作用、抗疲労作用、抗老化作用などがある。
【０００７】
しかし、前記冬虫夏草抽出物が免疫抑制剤として使用されたことは、まだ報告されたことがない。
【０００８】
本発明者等は、副作用がない免疫抑制剤を徹底的に研究し、冬虫夏草菌糸体抽出物が臓器または組織移植時の免疫反応を有意に抑制することを確認して本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第４，１１７，１１８号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓ．−Ｈ．Ｌｅｅ等，Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７年，第１９巻，ｐ．３７５〜３８９
【非特許文献２】Ｊ．Ｅ．Ｆ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ等，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｙａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９６年，第３１巻，ｐ．５５７〜５６２
【非特許文献３】Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９９７年，第１１巻，ｐ．２３７〜２４２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶の予防に有用な免疫抑制用組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の他の目的は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記目的を達成するために本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む免疫抑制用組成物を移植片拒絶の予防のために提供する。
【００１４】
また、本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片に対する抗体の生成を有意に抑制し、体重変化などの副作用を起こさない。また、天然物由来であるので毒性がなく人体に無害なので、臓器移植時の免疫抑制剤として有用に使用することができる。また、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、ただれからの滲出を抑制することから、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、および天然痘を含む皮膚疾患の予防及び治療にも有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一態様による本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物または生理食塩水投与時の臓器移植後マウスの脾臓細胞に対する抗体の生成量を示すグラフ（△：実験群、■：対照群）。
【図２】本発明の一態様による本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および生理食塩水投与時のマウスの体重の変化を示すグラフ（△：実験群、■：対照群）。
【図３】本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および生理食塩水投与時のマウスの皮膚状態を示す写真（パネルａ：実験群、パネルｂ：対照群）。
【図４】本発明の他の態様による、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物または他の比較化合物投与時の、マウスに臓器移植した脾臓細胞に対する抗体の生成量を示すグラフ。
【図５】本発明の他の態様による、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および他の比較化合物投与時の臓器移植後マウスの体重の変化を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の局面によると、移植片拒絶の抑制のために、冬虫夏草菌糸体抽出物に基づく免疫抑制用組成物を提供する。
【００１８】
前記冬虫夏草菌糸体抽出物は、培養したものまたは市販のものなど、使用することができ、一例として健康食品として販売されている冬虫夏草の粉末を、冬虫夏草の子実体粉末、冬虫夏草の菌糸体粉末またはこれらの混合物のいずれであっても、使用することができる。
【００１９】
本発明で有用な冬虫夏草は、ミリタリス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）、コウモリガ科の幼虫に寄生するシネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ヤンマタケ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ ｏｄｏｎａｔａｅ）、カメムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｎｕｔａｎｓ）、オサムシタケ（Ｔｉｌａｃｈｌｉｄｉｏｐｓｉｓ ｎｉｇｒａ）、雪花冬虫夏草（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）、アワフキムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｔｒｉｃｅｎｔｒｉ）、蜂冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｐｈｅｃｏｃｅｐｈａｌａ）を含む。
【００２０】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の免疫抑制効果を確認するために、天然痘モデルマウスに脾臓細胞を移植した後、前記冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した。マウスモデルにおいて、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定した。その結果、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物は、抗体の生成を有意に抑制することが分かった（図１、図４参照）。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片拒絶予防用の免疫抑制剤として使用しうることが分かる。
【００２１】
また、冬虫夏草菌糸体抽出物が生体内で副作用を起こすかどうかを観察した結果、脾臓細胞を移植した以降のマウスの体重変化がほとんどないことが分かった（図２、図５参照）。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、臓器移植時の体重変化などの副作用を起こさない免疫抑制剤として移植片拒絶の予防のために使用することができる。
【００２２】
本発明の別の局面によると、本発明は冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供する。
【００２３】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の皮膚疾患治療効果を確認するために、天然痘モデルマウスに投与した結果、天然痘のただれからの滲出が抑制されることが分かった（図３参照）。これと対照的に、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物を投与しない対照群は、天然痘のただれからの滲出があり、ただれの部位において脱毛がそのまま残っていることが分かった。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、皮膚疾患、例えばアトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘などの治療に使用することができる。
【００２４】
医薬品または健康食品に使用する場合、本組成物は、前記冬虫夏草菌糸体抽出物と類似の機能を示す有効成分を１種以上さらに含むことができる。
【００２５】
本発明の前記冬虫夏草菌糸体抽出物は、経口または非経口で投与が可能で、一般的な医薬品製剤の形態で使用することができる。
【００２６】
すなわち、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物は、実際臨床投与時に経口及び非経口の剤形で投与することができ、製剤化する場合には、普通使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。本発明の抽出物の経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸薬、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物に少なくとも一つの賦形剤、例えば、デキストリン、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、またはゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤なども添加しうる。経口投与のための液状製剤では、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当し、よく使用する単純希釈剤の水、リキッドパラフィン以外にさまざまな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味料、芳香剤、保存剤などを含むことができる。本発明の抽出物の非経口投与のための製剤では、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐薬が含まれ、非水性溶剤、懸濁溶剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐薬の基剤には、ウィテップゾール、マクロゴ−ル、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロールおよびゼラチンなどを使用することができる。
【００２７】
本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率によってその範囲が多様であり、経口投与する場合、冬虫夏草菌糸体抽出物の５５０〜２，２００ｍｇ／日を投与しうる。
【００２８】
また、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物を皮膚疾患治療用に使用する場合、単独でまたは手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び／または生物学的反応調節剤を使用する方法等と併用して使用することができる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は、本発明を説明するために提供するだけのものであって、これによって本発明の内容が限定されるのではない。
【００３０】
実施例１ 天然痘モデルマウスに対する免疫抑制実験
天然痘モデルマウス（慶応大学医学部微生物学・免疫学教室から得た）を用いて本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の免疫抑制実験を行なった。
【００３１】
天然痘モデルマウス５匹に、脾臓細胞（Ｄｓｇ３−／−）の移植２日前から、冬虫夏草菌糸体抽出物粉末（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）を１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経口投与した。以後、脾臓細胞を移植した後、３５日（５週）間、冬虫夏草菌糸体抽出物を１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経口投与した。一方、対照群には、抽出物の代わりに生理食塩水を投与した。
【００３２】
次に、移植後７日（１週）、１４日（２週）、２１日（３週）、２８日（４週）及び３５日（５週）にそれぞれマウスから採血して、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定し、毎日、体重及び皮膚状態を観察した。
【００３３】
前記実験結果を図１〜図３に示した。
【００３４】
図１は、実験群及び対照群における脾臓細胞に対する抗体の生成量を時間に対するプロットで示し、図２は実験群及び対照群における体重変化を示す。図３では、実験群及び対照群の皮膚状態を互いに比較したもの示す。
【００３５】
図１に示したように、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物をマウス投与時の脾臓細胞に対する抗体生成量はほとんど０に近く示された。このことから本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片に対する抗体生成を効果的に抑制することが分かる。
【００３６】
図２に示したように、体重変化において生理食塩水を投与した対照群は、移植した直後には少し体重が増加するが、移植後７日経過後から移植片拒絶反応が発生しながら体重が急激に減少することが示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した場合には、マウスの体重変化がほとんどないことが分かる。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を含む組成物は、移植片拒絶を効果的に抑制して体重が増加などの副作用がなく、臓器または組織の移植に対し免疫抑制剤として有用に使用することができる。
【００３７】
さらに、図３に示したように、マウスにおいて対照群では、天然痘によるただれが示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した場合には、皮膚疾患が抑制された。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘などの皮膚疾患の治療に使用することができる。
【００３８】
実施例１ 天疱瘡モデルマウスに対する免疫抑制実験
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の、天疱瘡モデルマウスに対する免疫抑制効果実験を以下のように行なった。
【００３９】
移植ドナーとしてＳ１２９ Ｄｓｇ３−／−マウスを２匹、レシピエントとしてＳ１２９ Ｒａｇ２−／−マウスを２４匹準備し、前記レシピエントは、対照群（ＣＭＣ投与群）、比較群（シクロホスファミド（ＣＰＡ）投与群）、実験群１、実験群２（冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）投与群）の、6匹づつ４群に分けた。移植ドナーは、下記の方法でＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質を投与して、以下のように免疫反応を起こした。まず、マウスＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質１０μｇを同量の完全フロインド・アジュバント（ＣＦＡ）と乳化させてマウスに皮下注射した（１回目）。1回目の免疫化の１週間後、マウスＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質１０μｇを同量の不完全フロインド・アジュバントと乳化させて皮下注射した（２回目）。２回目の免疫化の１週間後、前記２回目の免疫化と同じ方法で皮下注射した（３回目）。１週間後、蛋白質１０μｇを腹腔内投与した（４回目）。4回目の免疫化の１週間後、前記４回目の免疫化と同じ方法で腹腔内投与した（５回目）。移植３日前に４回目の免疫化と同じ方法で腹腔内投与した。
【００４０】
脾臓細胞（Ｄｓｇ３−／−）の移植１日前から、各群当り実験群には冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）を１ｍｌ、対照群にはＣＭＣを１ｍｌ、比較群にはシクロホスファミドを１ｍｌ経口投与した。以後、マウス１匹当たり、５００μｌ中に１．５×１０６個になるように脾臓細胞を移植した後、０、１、４、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８日に各群ごとにマウスに試験物質を１ｍｌを経口投与した。次に、移植後０、１、４、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８日にマウスから採血して、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定し、実験期間中、マウスの体重及び皮膚状態を毎日観察した。
【００４１】
ここで、実験群１に投与された冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）は、イサリア・ジャポニカ（Ｉｓａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）の粉末を５００ｍｇ秤量して１５ｍｌチューブに入れて０．５％ＣＭ−Ｎａ溶液（以下ＣＭＣ）を添加して全量を５ｍｌにした後、超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったもの（投与量：２０００ｍｇ／ｋｇ／投与）で、実験群２に関しては、冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）は、前記実験群１に投与された冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）から０．５ｍｌを取ってＣＭＣ４．５ｍｌと混合した後、超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったものである（投与量：２００ｍｇ／ｋｇ／投与）。
【００４２】
比較群に投与されたシクロホスファミドは、塩野義製薬から市販されるエンドキサンＰ錠５０ｍｇを粉砕した後、ＣＭＣ１６．７ｍｌを混合して超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったものである（投与量：６０ｍｇ／ｋｇ／投与）。
【００４３】
皮膚状態は、腹側、背側、右側、左側の水疱形成、脱毛、膨張を肉眼で確認し、腹側全体像と顔３方向（右側、左側、顎）をデジタルカメラで撮ってより精密に記録した。
【００４４】
前記実験結果を図４〜５に示した。
【００４５】
図４は実験群、対照群及び比較群における脾臓細胞に対する抗体の生成量を時間に対するプロットで示し、図５は実験群、対照群及び比較群における体重変化を示す。
【００４６】
図４に示したように、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与したマウスにおける、移植された脾臓細胞に対する抗体生成量が、ＣＭＣのみを投与したマウスの場合（対照群）より減少することが示された。ＥＬＩＳＡ値に関して、ＰＢＳ群を基準にしてＤｕｎｎｅｔｔ法を用いた多重比較検定を実施した結果、移植後１１日目では、実験群１は有意差があって（ｐ＜０．０５）、実験群２は有意差がなく、１４日目では、実験群１は有意差があって（ｐ＜０．０１）、実験群２も有意差があった（ｐ＜０．０５）。しかし、１８日目以後には、両方とも有意差を示さなかった。このことから、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、２０００ｍｇ／ｋｇ投与群で移植後１１日目、１４日目に対照群と比べて有意な差を示すので、移植片拒絶に関する抗体生成を効果的に抑制することが分かる。
【００４７】
また、図５に示したように、体重変化において対照群を基準にしてＤｕｎｎｅｔｔ法を用いた多重比較検定を実施した結果、移植後１１日目では実験群１は有意差があり（ｐ＜０．０５）、実験群２は有意差がなく、１４日目では実験群１も有意差があって（ｐ＜０．０５）、実験群２も有意差があった（ｐ＜０．０５）。しかし、１８日目以後には両方とも有意差を示さなかった。このことから、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、２０００ｍｇ／ｋｇ投与群で移植後１１日目、１４日目に対照群と比べて有意な差を示すので、移植片拒絶を効果的に抑制することが分かる。
【００４８】
さらに、対照群では天疱瘡によるただれ、脱毛などの皮膚疾患が示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与したマウスではこのような皮膚疾患が抑制された。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘、などの皮膚疾患の治療に使用することができる。
【００４９】
本発明の組成物は下記のように製剤できる。
【００５０】
製剤例１ 薬学的製剤の製造
１−１．散剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 １ｇ
−デキストリン ０．１ｇ
前記成分を混合して気密包に充填して散剤を製造した。
【００５１】
１−２．錠剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５００ｍｇ
−デキストリン ４５ｍｇ
−ステアリン酸マグネシウム ５ｍｇ
前記成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法にしたがって錠剤を製造した。
【００５２】
１−３．カプセル剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５００ｍｇ
−デキストリン ５０ｍｇ
前記成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法にしたがってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００５３】
１−４．注射液剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５０ｍｇ／ｍｌ
−薄い塩酸ＢＰ ｐＨ３．５になるまで添加
−注射用塩化ナトリウムＢＰ 最大１ｍｌ
適当な体積の注射用塩化ナトリウムＢＰ中に冬虫夏草菌糸体抽出物を溶解させて、生成された溶液のｐＨを薄い塩酸ＢＰを使用してｐＨ３．５に調節し、注射用塩化ナトリウムＢＰを使用して体積を調節して充分に混合した。溶液を透明な５ｍｌタイプＩアンプル中に充填し、溶解させることで密封し、１２０℃で１５分オートクレーブして注射液剤を製造した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶抑制用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
移植片の受容者の免疫系によって、移植された臓器または組織が攻撃される場合、移植片拒絶がおこる。効果的な免疫反応の抑制が臓器移植の成否を決定する主要要因として知られている。このような観点から、免疫抑制剤の開発は、臓器および組織の移植と自己免疫疾患の治療において画期的な発展を可能にし、移植された臓器または組織に対する生体内免疫反応の作用機序研究に多くの寄与をしてきた。
【０００３】
このように、移植された臓器の拒絶反応を抑制したり減少させたりするための方法として、免疫抑制剤が開発されたが、その例として土壌カビの一種であるトリポクラジウム・インフラタム（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ ｉｎｆｌａｔｕｍ）から生産されたシクロスポリンＡ（米国特許第４，１１７，１１８号（特許文献１））などを挙げることができる。このような免疫抑制剤の開発は、臨床的に成功的な臓器移植を可能にしたのみならず、自己免疫疾患治療における利用性も提示した。しかし、従来の免疫抑制剤は、Ｔ−細胞にのみ選択的で、特異的に作用しなければならないにもかかわらず、一般的なシグナル伝達系を含む細胞機能にまで広範囲に影響を及ぼすことによって、健康な他の臓器に対する副作用を誘発していた（参照：Ｓ．−Ｈ．Ｌｅｅ等，Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７年，第１９巻，ｐ．３７５〜３８９（非特許文献１））。一例として、シクロスポリンＡは、慢性的な肝臓疾患と心臓移植後に高血圧症状を誘発するなどの副作用があることが知られている（参照：Ｊ．Ｅ．Ｆ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ等，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｙａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９６年，第３１巻，ｐ．５５７〜５６２（非特許文献２））。したがって、副作用がない新しい免疫抑制剤を開発するために多くの努力がなされてきて、その結果、最近では、ＦＫ−５０６が免疫抑制剤として発見されて市販されているが、この薬剤の副作用が見いだされている（Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９９７年，第１１巻，ｐ．２３７〜２４２（非特許文献３））。
【０００４】
一方、冬虫夏草は、中国では昔から漢方の薬膳料理の貴重な素材として、高麗人参とともに一部貴族階級の人々に常用されてきたもので、冬虫夏草は、昆虫に寄生して形成される一種の薬用キノコである。カビである冬虫夏草菌が、温度および湿度が高くなる時期に、生きている昆虫の体中に入って行って発育増殖しながら宿主昆虫を殺して子実体を宿主昆虫上に形成する。元々、コウモリガ科（Ｈｅｐｉａｌｉｄａｅ）の幼虫に寄生するシネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）を指していたが、今日では、蜘蛛などの節足動物から出るキノコを総称して、本明細書において「冬虫夏草」と呼ぶ。
【０００５】
シネンシス冬虫夏草には、水分１０．８％、脂肪８．４％、粗蛋白質２５〜３２％、炭水化物２３．９％、粗繊維１８．５％が含有されていて、８種の必須アミノ酸を含み、１７種の各種アミノ酸が入っている。また薬理作用を示す有効活性物質としては、微量のコルディセピン、７．６％のＤ−マンニトール、１１．２％の多糖体がある。ヌクレオシドの誘導体であるコルディセピンは、キナ酸の異性体として抗癌作用に関与するといわれている。
【０００６】
冬虫夏草抽出物の種々の薬理作用としては、抗菌作用（ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、鼻疽菌（Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｌｌｅｉ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、パスツレラ スイセプチカ（Ｐａｓｔｕｅｒｅｌｌａ ｓｕｉｓｅｐｔｉｃａ）、ミクロスポルム ギプセウム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｅｕｍ）、およびミクロスポルム ラノサム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｌａｎｏｓｕｍ））、中枢神経系作用（鎮静作用、抗痙攣作用）、呼吸系統作用（気管支喘息治癒作用、去痰作用）、心臓血管系作用（心臓拍動安定化作用、コレステロール低下作用、抗低酸素作用）、抗癌作用、免疫増強作用、抗疲労作用、抗老化作用などがある。
【０００７】
しかし、前記冬虫夏草抽出物が免疫抑制剤として使用されたことは、まだ報告されたことがない。
【０００８】
本発明者等は、副作用がない免疫抑制剤を徹底的に研究し、冬虫夏草菌糸体抽出物が臓器または組織移植時の免疫反応を有意に抑制することを確認して本発明を完成した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第４，１１７，１１８号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓ．−Ｈ．Ｌｅｅ等，Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７年，第１９巻，ｐ．３７５〜３８９
【非特許文献２】Ｊ．Ｅ．Ｆ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ等，Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ Ｔｈｅ Ｅｘｔｒａ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ，Ｒｏｙａｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｌｏｎｄｏｎ，１９９６年，第３１巻，ｐ．５５７〜５６２
【非特許文献３】Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，１９９７年，第１１巻，ｐ．２３７〜２４２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む移植片拒絶の予防に有用な免疫抑制用組成物を提供することにある。
【００１２】
本発明の他の目的は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
前記目的を達成するために本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む免疫抑制用組成物を移植片拒絶の予防のために提供する。
【００１４】
また、本発明は、冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片に対する抗体の生成を有意に抑制し、体重変化などの副作用を起こさない。また、天然物由来であるので毒性がなく人体に無害なので、臓器移植時の免疫抑制剤として有用に使用することができる。また、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、ただれからの滲出を抑制することから、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、および天然痘を含む皮膚疾患の予防及び治療にも有用に使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本発明の一態様による本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物または生理食塩水投与時の臓器移植後マウスの脾臓細胞に対する抗体の生成量を示すグラフ（△：実験群、■：対照群）。
【図２】本発明の一態様による本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および生理食塩水投与時のマウスの体重の変化を示すグラフ（△：実験群、■：対照群）。
【図３】本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および生理食塩水投与時のマウスの皮膚状態を示す写真（パネルａ：実験群、パネルｂ：対照群）。
【図４】本発明の他の態様による、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物または他の比較化合物投与時の、マウスに臓器移植した脾臓細胞に対する抗体の生成量を示すグラフ。
【図５】本発明の他の態様による、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物および他の比較化合物投与時の臓器移植後マウスの体重の変化を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の局面によると、移植片拒絶の抑制のために、冬虫夏草菌糸体抽出物に基づく免疫抑制用組成物を提供する。
【００１８】
前記冬虫夏草菌糸体抽出物は、培養したものまたは市販のものなど、使用することができ、一例として健康食品として販売されている冬虫夏草の粉末を、冬虫夏草の子実体粉末、冬虫夏草の菌糸体粉末またはこれらの混合物のいずれであっても、使用することができる。
【００１９】
本発明で有用な冬虫夏草は、ミリタリス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）、コウモリガ科の幼虫に寄生するシネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ヤンマタケ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ ｏｄｏｎａｔａｅ）、カメムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｎｕｔａｎｓ）、オサムシタケ（Ｔｉｌａｃｈｌｉｄｉｏｐｓｉｓ ｎｉｇｒａ）、雪花冬虫夏草（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）、アワフキムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｔｒｉｃｅｎｔｒｉ）、蜂冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｐｈｅｃｏｃｅｐｈａｌａ）を含む。
【００２０】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の免疫抑制効果を確認するために、天然痘モデルマウスに脾臓細胞を移植した後、前記冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した。マウスモデルにおいて、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定した。その結果、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物は、抗体の生成を有意に抑制することが分かった（図１、図４参照）。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片拒絶予防用の免疫抑制剤として使用しうることが分かる。
【００２１】
また、冬虫夏草菌糸体抽出物が生体内で副作用を起こすかどうかを観察した結果、脾臓細胞を移植した以降のマウスの体重変化がほとんどないことが分かった（図２、図５参照）。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、臓器移植時の体重変化などの副作用を起こさない免疫抑制剤として移植片拒絶の予防のために使用することができる。
【００２２】
本発明の別の局面によると、本発明は冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む皮膚疾患予防及び治療用組成物を提供する。
【００２３】
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の皮膚疾患治療効果を確認するために、天然痘モデルマウスに投与した結果、天然痘のただれからの滲出が抑制されることが分かった（図３参照）。これと対照的に、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物を投与しない対照群は、天然痘のただれからの滲出があり、ただれの部位において脱毛がそのまま残っていることが分かった。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、皮膚疾患、例えばアトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘などの治療に使用することができる。
【００２４】
医薬品または健康食品に使用する場合、本組成物は、前記冬虫夏草菌糸体抽出物と類似の機能を示す有効成分を１種以上さらに含むことができる。
【００２５】
本発明の前記冬虫夏草菌糸体抽出物は、経口または非経口で投与が可能で、一般的な医薬品製剤の形態で使用することができる。
【００２６】
すなわち、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物は、実際臨床投与時に経口及び非経口の剤形で投与することができ、製剤化する場合には、普通使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を使用して調剤される。本発明の抽出物の経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸薬、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物に少なくとも一つの賦形剤、例えば、デキストリン、澱粉、炭酸カルシウム、スクロース、ラクトース、またはゼラチンなどを混ぜて調剤される。また、ステアリン酸マグネシウム、タルクのような潤滑剤なども添加しうる。経口投与のための液状製剤では、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが該当し、よく使用する単純希釈剤の水、リキッドパラフィン以外にさまざまな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味料、芳香剤、保存剤などを含むことができる。本発明の抽出物の非経口投与のための製剤では、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐薬が含まれ、非水性溶剤、懸濁溶剤には、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルのような植物性油、オレイン酸エチルのような注射可能なエステルなどを使用することができる。坐薬の基剤には、ウィテップゾール、マクロゴ−ル、ツイーン６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロールおよびゼラチンなどを使用することができる。
【００２７】
本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率によってその範囲が多様であり、経口投与する場合、冬虫夏草菌糸体抽出物の５５０〜２，２００ｍｇ／日を投与しうる。
【００２８】
また、本発明の冬虫夏草菌糸体抽出物を皮膚疾患治療用に使用する場合、単独でまたは手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療及び／または生物学的反応調節剤を使用する方法等と併用して使用することができる。
【実施例】
【００２９】
以下、本発明の理解を助けるために好ましい実施例を提示する。しかし、下記の実施例は、本発明を説明するために提供するだけのものであって、これによって本発明の内容が限定されるのではない。
【００３０】
実施例１ 天然痘モデルマウスに対する免疫抑制実験
天然痘モデルマウス（慶応大学医学部微生物学・免疫学教室から得た）を用いて本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の免疫抑制実験を行なった。
【００３１】
天然痘モデルマウス５匹に、脾臓細胞（Ｄｓｇ３−／−）の移植２日前から、冬虫夏草菌糸体抽出物粉末（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）を１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経口投与した。以後、脾臓細胞を移植した後、３５日（５週）間、冬虫夏草菌糸体抽出物を１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で経口投与した。一方、対照群には、抽出物の代わりに生理食塩水を投与した。
【００３２】
次に、移植後７日（１週）、１４日（２週）、２１日（３週）、２８日（４週）及び３５日（５週）にそれぞれマウスから採血して、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定し、毎日、体重及び皮膚状態を観察した。
【００３３】
前記実験結果を図１〜図３に示した。
【００３４】
図１は、実験群及び対照群における脾臓細胞に対する抗体の生成量を時間に対するプロットで示し、図２は実験群及び対照群における体重変化を示す。図３では、実験群及び対照群の皮膚状態を互いに比較したもの示す。
【００３５】
図１に示したように、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物をマウス投与時の脾臓細胞に対する抗体生成量はほとんど０に近く示された。このことから本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、移植片に対する抗体生成を効果的に抑制することが分かる。
【００３６】
図２に示したように、体重変化において生理食塩水を投与した対照群は、移植した直後には少し体重が増加するが、移植後７日経過後から移植片拒絶反応が発生しながら体重が急激に減少することが示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した場合には、マウスの体重変化がほとんどないことが分かる。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を含む組成物は、移植片拒絶を効果的に抑制して体重が増加などの副作用がなく、臓器または組織の移植に対し免疫抑制剤として有用に使用することができる。
【００３７】
さらに、図３に示したように、マウスにおいて対照群では、天然痘によるただれが示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与した場合には、皮膚疾患が抑制された。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘などの皮膚疾患の治療に使用することができる。
【００３８】
実施例１ 天疱瘡モデルマウスに対する免疫抑制実験
本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物の、天疱瘡モデルマウスに対する免疫抑制効果実験を以下のように行なった。
【００３９】
移植ドナーとしてＳ１２９ Ｄｓｇ３−／−マウスを２匹、レシピエントとしてＳ１２９ Ｒａｇ２−／−マウスを２４匹準備し、前記レシピエントは、対照群（ＣＭＣ投与群）、比較群（シクロホスファミド（ＣＰＡ）投与群）、実験群１、実験群２（冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）投与群）の、6匹づつ４群に分けた。移植ドナーは、下記の方法でＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質を投与して、以下のように免疫反応を起こした。まず、マウスＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質１０μｇを同量の完全フロインド・アジュバント（ＣＦＡ）と乳化させてマウスに皮下注射した（１回目）。1回目の免疫化の１週間後、マウスＤｓｇ３−Ｈｉｓ蛋白質１０μｇを同量の不完全フロインド・アジュバントと乳化させて皮下注射した（２回目）。２回目の免疫化の１週間後、前記２回目の免疫化と同じ方法で皮下注射した（３回目）。１週間後、蛋白質１０μｇを腹腔内投与した（４回目）。4回目の免疫化の１週間後、前記４回目の免疫化と同じ方法で腹腔内投与した（５回目）。移植３日前に４回目の免疫化と同じ方法で腹腔内投与した。
【００４０】
脾臓細胞（Ｄｓｇ３−／−）の移植１日前から、各群当り実験群には冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）を１ｍｌ、対照群にはＣＭＣを１ｍｌ、比較群にはシクロホスファミドを１ｍｌ経口投与した。以後、マウス１匹当たり、５００μｌ中に１．５×１０６個になるように脾臓細胞を移植した後、０、１、４、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８日に各群ごとにマウスに試験物質を１ｍｌを経口投与した。次に、移植後０、１、４、７、１１、１４、１８、２１、２５、２８日にマウスから採血して、ＥＬＩＳＡ法によって脾臓細胞に対する抗体の生成量を測定し、実験期間中、マウスの体重及び皮膚状態を毎日観察した。
【００４１】
ここで、実験群１に投与された冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）は、イサリア・ジャポニカ（Ｉｓａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）の粉末を５００ｍｇ秤量して１５ｍｌチューブに入れて０．５％ＣＭ−Ｎａ溶液（以下ＣＭＣ）を添加して全量を５ｍｌにした後、超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったもの（投与量：２０００ｍｇ／ｋｇ／投与）で、実験群２に関しては、冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）は、前記実験群１に投与された冬虫夏草菌糸体抽出物（Ｃｏｒｄｙｍａ（登録商標）；韓国新薬）から０．５ｍｌを取ってＣＭＣ４．５ｍｌと混合した後、超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったものである（投与量：２００ｍｇ／ｋｇ／投与）。
【００４２】
比較群に投与されたシクロホスファミドは、塩野義製薬から市販されるエンドキサンＰ錠５０ｍｇを粉砕した後、ＣＭＣ１６．７ｍｌを混合して超音波浴槽内に３０分間入れて懸濁液を作ったものである（投与量：６０ｍｇ／ｋｇ／投与）。
【００４３】
皮膚状態は、腹側、背側、右側、左側の水疱形成、脱毛、膨張を肉眼で確認し、腹側全体像と顔３方向（右側、左側、顎）をデジタルカメラで撮ってより精密に記録した。
【００４４】
前記実験結果を図４〜５に示した。
【００４５】
図４は実験群、対照群及び比較群における脾臓細胞に対する抗体の生成量を時間に対するプロットで示し、図５は実験群、対照群及び比較群における体重変化を示す。
【００４６】
図４に示したように、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与したマウスにおける、移植された脾臓細胞に対する抗体生成量が、ＣＭＣのみを投与したマウスの場合（対照群）より減少することが示された。ＥＬＩＳＡ値に関して、ＰＢＳ群を基準にしてＤｕｎｎｅｔｔ法を用いた多重比較検定を実施した結果、移植後１１日目では、実験群１は有意差があって（ｐ＜０．０５）、実験群２は有意差がなく、１４日目では、実験群１は有意差があって（ｐ＜０．０１）、実験群２も有意差があった（ｐ＜０．０５）。しかし、１８日目以後には、両方とも有意差を示さなかった。このことから、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、２０００ｍｇ／ｋｇ投与群で移植後１１日目、１４日目に対照群と比べて有意な差を示すので、移植片拒絶に関する抗体生成を効果的に抑制することが分かる。
【００４７】
また、図５に示したように、体重変化において対照群を基準にしてＤｕｎｎｅｔｔ法を用いた多重比較検定を実施した結果、移植後１１日目では実験群１は有意差があり（ｐ＜０．０５）、実験群２は有意差がなく、１４日目では実験群１も有意差があって（ｐ＜０．０５）、実験群２も有意差があった（ｐ＜０．０５）。しかし、１８日目以後には両方とも有意差を示さなかった。このことから、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、２０００ｍｇ／ｋｇ投与群で移植後１１日目、１４日目に対照群と比べて有意な差を示すので、移植片拒絶を効果的に抑制することが分かる。
【００４８】
さらに、対照群では天疱瘡によるただれ、脱毛などの皮膚疾患が示されたが、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物を投与したマウスではこのような皮膚疾患が抑制された。したがって、本発明による冬虫夏草菌糸体抽出物は、アトピー、アレルギー反応、蓐瘡、天疱瘡、天然痘、などの皮膚疾患の治療に使用することができる。
【００４９】
本発明の組成物は下記のように製剤できる。
【００５０】
製剤例１ 薬学的製剤の製造
１−１．散剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 １ｇ
−デキストリン ０．１ｇ
前記成分を混合して気密包に充填して散剤を製造した。
【００５１】
１−２．錠剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５００ｍｇ
−デキストリン ４５ｍｇ
−ステアリン酸マグネシウム ５ｍｇ
前記成分を混合した後、通常の錠剤の製造方法にしたがって錠剤を製造した。
【００５２】
１−３．カプセル剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５００ｍｇ
−デキストリン ５０ｍｇ
前記成分を混合した後、通常のカプセル剤の製造方法にしたがってゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００５３】
１−４．注射液剤の製造
−冬虫夏草菌糸体抽出物 ５０ｍｇ／ｍｌ
−薄い塩酸ＢＰ ｐＨ３．５になるまで添加
−注射用塩化ナトリウムＢＰ 最大１ｍｌ
適当な体積の注射用塩化ナトリウムＢＰ中に冬虫夏草菌糸体抽出物を溶解させて、生成された溶液のｐＨを薄い塩酸ＢＰを使用してｐＨ３．５に調節し、注射用塩化ナトリウムＢＰを使用して体積を調節して充分に混合した。溶液を透明な５ｍｌタイプＩアンプル中に充填し、溶解させることで密封し、１２０℃で１５分オートクレーブして注射液剤を製造した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む、移植片拒絶の抑制のための免疫抑制用組成物。
【請求項２】
前記冬虫夏草が、ミリタリス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）、シネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ヤンマタケ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ ｏｄｏｎａｔａｅ）、カメムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｎｕｔａｎｓ）、オサムシタケ（Ｔｉｌａｃｈｌｉｄｉｏｐｓｉｓ ｎｉｇｒａ）、雪花冬虫夏草（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）、アワフキムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｔｒｉｃｅｎｔｒｉ）および蜂冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｐｈｅｃｏｃｅｐｈａｌａ）からなる群から選択されるいずれかひとつである、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項３】
経口投与、静脈内投与または腹腔内投与されるのに適した投与形態である、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項４】
経口投与時の投与量が、一日あたり５５０〜２，２００ｍｇである、請求項３に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項５】
臓器または組織移植後の移植片拒絶を起こす抗体の生成を抑制する、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項６】
冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む、皮膚疾患の予防及び治療用組成物。
【請求項７】
前記皮膚疾患が、アトピー、蓐瘡、天疱瘡および／または天然痘である、請求項６に記載の組成物。
【請求項１】
冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む、移植片拒絶の抑制のための免疫抑制用組成物。
【請求項２】
前記冬虫夏草が、ミリタリス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）、シネンシス冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、ヤンマタケ（Ｈｙｍｅｎｏｓｔｉｌｂｅ ｏｄｏｎａｔａｅ）、カメムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｎｕｔａｎｓ）、オサムシタケ（Ｔｉｌａｃｈｌｉｄｉｏｐｓｉｓ ｎｉｇｒａ）、雪花冬虫夏草（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）、アワフキムシタケ（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｔｒｉｃｅｎｔｒｉ）および蜂冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｓｐｈｅｃｏｃｅｐｈａｌａ）からなる群から選択されるいずれかひとつである、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項３】
経口投与、静脈内投与または腹腔内投与されるのに適した投与形態である、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項４】
経口投与時の投与量が、一日あたり５５０〜２，２００ｍｇである、請求項３に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項５】
臓器または組織移植後の移植片拒絶を起こす抗体の生成を抑制する、請求項１に記載の免疫抑制用組成物。
【請求項６】
冬虫夏草菌糸体抽出物を有効成分として含む、皮膚疾患の予防及び治療用組成物。
【請求項７】
前記皮膚疾患が、アトピー、蓐瘡、天疱瘡および／または天然痘である、請求項６に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１１−５０６３０８（Ｐ２０１１−５０６３０８Ａ）
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３６８２９（Ｐ２０１０−５３６８２９）
【出願日】平成１９年１２月７日（２００７．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００７／００６３５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７２６８８
【国際公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【出願人】（５０５２４３３５３）ハンコック ファーム．カンパニー インコーポレーティッド (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年３月３日（２０１１．３．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月７日（２００７．１２．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００７／００６３５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７２６８８
【国際公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【出願人】（５０５２４３３５３）ハンコック ファーム．カンパニー インコーポレーティッド (4)
【Ｆターム（参考）】
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