悪臭の抑制
【課題】汚染した衛生製品から放たれる悪臭の抑制。
【解決手段】本発明は汚染した衛生製品から放たれる悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。本発明は更に汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品にも関連する。
【解決手段】本発明は汚染した衛生製品から放たれる悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。本発明は更に汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品にも関連する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は汚染した衛生製品から放たれる悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。本発明は更に汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
悪臭は揮発性硫化化合物（ＶＳＣ）、窒素含有化合物及び短鎖脂肪酸等の数多くの化合物により生じうることが確立されている。
【０００３】
窒素含有化合物、例えばアンモニアの起源は尿、糞及び血液であり、汚染したおむつ又はその他の衛生製品、例えば成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン、タンポン等からほとんどの人々により認識される悪臭を供与する。
【０００４】
おむつ等から発生する悪臭は少なくともある程度は会陰（肛門と外部性殖器官との間の領域）における皮膚の上に載っている細菌、特に大腸菌（Escherichia coli）、エンテロコッカス（Enterococcus）種及びプロテウス（Proteus ）種の増殖の結果である。プロテウス種の株全てがその代謝中に酵素ウレアーゼを生成する。ウレアーゼは尿素（ヒト尿の約２％を占める）を嫌な臭いのアンモニアに急速分解する能力を有する。
【０００５】
衛生製品中の悪臭の除去又は抑制
論文の中には数多くの臭気抑制剤及び系が発表されている。例えば、活性炭形態における炭素等が悪臭分子を吸着する能力についてよく知られている。
【０００６】
米国特許第５，５９３，３９８号は悪臭抑制剤として活性炭を含んで成る悪臭放屁フィルターの付いた保護下着を開示する。
【０００７】
ゼオライト材料は体液に関わる悪臭に対して有効であることが示されている。
【０００８】
日本国特許出願平成２年０６８１１７号はゼオライト、銅及び活性チャーコールを含む例えばおむつ用の脱臭手段に関する。
【０００９】
米国特許第３，９０３，２５９号はおむつ及びヒト排泄物を脱臭するための方法であって、おむつ又は排泄物に、最も単純な形態において酸性物質、抗生物質及び溶媒から成る化学組成物を適用することを含んで成る方法に関する。この含浸組成物は更に錯形成剤及び湿潤剤を含みうる。おむつの処理は排泄物から嫌な臭いのめざましい低下をもたらし、それ故汚染したおむつの交換の負担は軽減される。
【００１０】
米国特許第３，９３５，８６２号は少なくとも０．００１ｇ／in2 の量でアミノポリカルボン酸化合物を中に含むアンモニア形成を阻害するための手段を含んで成る使い捨ておむつを開示する。
【００１１】
米国特許第４，３８５，６３２号は血液、糞及び尿を回収するための殺菌吸収体に関連し、それは細菌増殖を防ぎ、尿素のアンモニアへの分解を防ぎ、そしてアンモニアと錯体形成し、悪臭の発生を防ぐ水溶性銅塩を含む。
【発明の概要】
【００１２】
本発明の目的は汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品の提供にある。
【００１３】
第一の観点において、本発明は衛生製品の悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。
【００１４】
第二の観点において、本発明は例えば吸収材料の中にハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源を有する衛生製品に関する。特に考慮されるのは、おむつ、成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン、タンポン等の衛生製品である。
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明の目的は汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品の提供にある。
【００１６】
「衛生製品」なる語は尿、糞、血液等を吸収又は回収するために適当な任意の製品を包括する。考えられる衛生製品の例はおむつ、成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン及びタンポンである。
【００１７】
衛生製品は典型的には体液等を回収するための吸収材を含んで成る。今日ポリアクリル酸超吸収材がよく利用される。このような超吸収材は自重の何倍もの液体、例えば尿を吸収でき、流体が漏れるまで大量の液体を保持できる薄く且つかさ高くない衛生製品の提供が可能となる。衛生製品における液体の量のかかる増大は悪臭の問題を大きくし、かかる課題の解決をより必須なものとする。
【００１８】
本発明との関連で、「悪臭」とは例えば窒素含有化合物、例えばアンモニアにより生ずる嫌な臭いを意味する。
【００１９】
「吸収材」とは液体を保持できるあらゆる材料を包括する。
【００２０】
本発明者はハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せが汚染された衛生製品の悪臭の抑制のために利用出ることを発見した。
【００２１】
「悪臭の抑制」又は「抑制された悪臭」とはテストパネルにより決定された悪臭が対応の目かくしサンプルと比べて弱まったものと評価されたことを意味する。
【００２２】
汚染した衛生製品から放たれる悪臭は典型的には窒素含有化合物の結果物である。尿、糞、血液等は衛生製品により包まれる皮膚の上で生育する細菌により生成される酵素により分解される。例えば、尿をアンモニアへと変換することのできる酵素ウレアーゼは会陰（肛門と外部性殖器官との間にある領域）における皮膚の上で生育するプロテウス種由来の細菌により生成される。
【００２３】
第一の観点において、本発明は衛生製品の悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。
【００２４】
下記の実施例に示す通り、ハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せは、ウレアーゼ活性の阻害を介して、又は尿素等の悪臭化合物への分解を司る化合物、特に酵素を産生する微生物、例えば細菌を殺傷もしくは少なくともその増殖を阻害することを介して、汚染された衛生製品において生ずる悪臭を有意に抑制するために利用できる。
【００２５】
ハロペルオキシダーゼが尿中のハライドイオン（特にＣｌ- ）と接触すると、このハライドイオンは次ハロゲン化酸（例えば次亜塩素酸（即ち、ＣｌＯ- ））（そしておそらくは更にその他の酸化性化合物）へと酸化され、それがウレアーゼの活性を阻害するか、又は微生物細胞、例えば細菌細胞を殺傷するもしくは少なくともその増殖を阻害できる。
【００２６】
ハロペルオキシダーゼは衛生製品の吸収材の中に組込んでよい。衛生製品の当業者はハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源をどこに、且つどうやって組込むかを知る。唯一の必須基準はハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源が例えば尿の中に存在するハライドイオンと接触して反応できるように組込むことである。
【００２７】
ハロペルオキシダーゼ
ハロペルオキシダーゼは過酸化水素又は過酸化水素生成系の存在下でハライド（Ｃｌ- ，Ｂｒ- ，Ｉ- ）を次式に従って対応の次ハロゲン化酸へと酸化できる酵素クラスを構成する：
Ｈ2 Ｏ2 ＋Ｘ−＋Ｈ＋ → Ｈ2 Ｏ＋ＨＯＸ
【００２８】
慣用の求核受容体が存在するなら、ＨＯＸとの反応が起こり、そしてハロゲン化化合物が生成されるであろう。
【００２９】
ハライドイオンに対するその特異性に従って分類される３タイプのハロペルオキシダーゼがある：化合物の塩素化、臭素化及びヨウ素化を触媒するクロロペルオキシダーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１１．１．１０）；臭化物及びヨウ化物イオンに対して特異性を示すブロモペルオキシダーゼ；並びにヨウ化物イオンの酸化のみを触媒するヨードペルオキシダーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１１．１．８）。
【００３０】
ハロペルオキシダーゼは様々な生物から単離されている：哺乳動物、海洋動物、植物、藻類、地衣類、菌類及び細菌（Biochimica et Biophysica Acta 1161, 1993, pp.249-256参照）。ハロペルオキシダーゼは自然におけるハロゲン化化合物の形成を司る酵素であると一般に認識されているが、その他の酵素も関与しうる。
【００３１】
ハロペルオキシダーゼは様々な菌類、特に菌類グループデマチウスヒフォマイセテス（dematiaceous hyphomyctes）、例えばカルダリオマイセス、例えばＣ．フマゴ（C. fumago ）、アルテルナリア、カーブラリア、例えばＣ．ベルクロサ及びＣ．イネクアリス（C. inaequalis ）、ドレヒスラ、ウロクラジウム及びボツリチスから単離されうる（米国特許第４，９３７，１９２号参照）。
【００３２】
本発明に従うと、カーブラリア、特にＣ．ベルクロサ、例えばＣ．ベルクロサＣＢＳ１４７．６３又はＣ．ベルクロサＣＢＳ４４４．７０から得られるハロペルオキシダーゼ、が好ましい。カーブラリアハロペルオキシダーゼ及びその組換産物はＷＯ９７／０４１０２に記載されている。
【００３３】
ハロペルオキシダーゼは細菌、例えばシュードモナス、例えばＰ．ピロシニア（P. pyrrocinia)(The Journal of Biological Chemistry 263, 1988, pp.13725〜13732 参照）及びストレプトマイセス、例えばＳ．オーレオファシエンス（S. aureofaciens)(Structural Biology 1, 1994, pp.532-537 参照）からも単離されうる。
【００３４】
ブロミドペルオキシダーゼは藻類から単離される（米国特許第４，９３７，１９２号参照のこと）。
【００３５】
使用の際、ハロペルオキシダーゼの濃度を所望の効果が所望の時間枠内で達成されるようにするために変えてよい。しかしながら、本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼはリッター当り０．０１〜１００mgの酵素タンパク質の濃度、好ましくはリッター当り０．１〜５０mgの酵素タンパク質の濃度、より好ましくはリッター当り０．２〜１０mgの酵素タンパク質の濃度で添加するのが通常であろう。
【００３６】
好適な態様において、ハロペルオキシダーゼはカーブラリア種、特にＣ．ベルクロサ及びＣ．イネクアリスに由来する。
【００３７】
過酸化水素起源
本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼとの反応に必要とされる過酸化水素は様々な方法で得られうる：それは過酸化水素又は過酸化水素前駆体、例えば過炭酸塩又は過硼酸塩、又はペルオキシカルボン酸又はその塩、又は過酸化水素生成系、例えばオキシダーゼとその基質であってよい。有用なオキシダーゼは例えばグルコースオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ又はアミノ酸オキシダーゼでありうる。アミノ酸オキシダーゼの例がＷＯ９４／２５５７４号に示されている。
【００３８】
酵素的に生成された過酸化水素を使用することが有利であり、なぜならこの起源は生物学的に関連する条件下で比較的低濃度の過酸化水素をもたらすからである。低濃度の過酸化水素はハロペルオキシダーゼ触媒反応の速度の上昇をもたらす。
【００３９】
本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼとの反応に必要とされる過酸化水素起源は０．０１〜５００mMの範囲、好ましくは０．１〜１００mMの範囲の過酸化水素濃度に担当する濃度で加えてよい。
【００４０】
本発明は例えば吸収材の中にハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源の組込まれた衛生製品にも関連する。
【００４１】
材料及び方法
材料：
酵素
ＷＯ９７／０４１０２（Novo Nordisk）に記載のカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３に由来する組換ハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）
コプリヌス・シネレウス（Coprinus cinereus ）に由来する組換ペルオキシダーゼ（ｒＣＩＰ）
ジャック・ビーン（Jack Beans）由来のIII 型ウレアーゼ（Ｓｉｇｍａ No. Ｕ１５００）
【００４２】
人工尿Ａ
尿素（３００mM）、硫酸カルシウム（２mM）、硫酸マグネシウム（３．５mM）、塩化カリウム（６０mM）及び塩化ナトリウム（１３０mM）
【００４３】
人工尿Ｂ
尿素（３００mM）、塩化ナトリウム（１３０mM）、塩化カリウム（６０mM）、硫酸マグネシウム（３mM）、硫酸カルシウム（２．５mM）、トリトンＸ−１００（１ｇ／ｌ）。この人工尿は１０mMのリン酸バッファーの中で調製し、そしてpH６．０に調整してある。
【００４４】
人工尿Ｃ：
ヒト尿の中に一般に見い出せる一定のアミノ酸を更に加えた人工尿Ｂ：リジン（０．５mM）、グリシン（２mM）、アラニン（０．５mM）及びセリン（０．５mM）。
【００４５】
微生物：
大腸菌（ＤＳＭ１５７６）
エンテロコッカス・フェカリス（E. faecalis ）（ＤＳＭ２５７０）
プロテウス・ミラビリス（P. mirabilis）（ＤＳＭ７８８）
【００４６】
超吸収材：
下記の実施例において使用した超吸収材はSCA Molnlycke, Sweden から入手した顆粒状架橋ポリアクリル酸ナトリウムポリマーとした（バッチNo. ２２７１３１）。
【００４７】
装置：
Malthus Flexi M2060 (Malthus Instrument Limited ）
【００４８】
方法
ＰＯＸＵの決定
１POXUは１分当り１μmol の過酸化水素の変換を触媒する酵素量と規定する。この活性は下記の条件で４１８nmにて吸収を追跡することによる２，２′−アジノビス〔３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホネート〕（ＡＢＴＳ）の酸化として測定する：pH７．０、３０℃、０．８８Ｍの水素ペルオキシダーゼ、１．６７mMのＡＢＴＳ及び６０ｓの反応時間。
【００４９】
Ｍａｌｔｈｕｓ法
Ｍａｌｔｈｕｓ法はJohnson and Jones (1995) Journal of Microbiological Methods 21, p.15-26 及びJohansenら（1995) Journal of Applied Bacteriology 78, p.297-303 に記載の方法に基づく。
【００５０】
ハロペルオキシダーゼ活性の決定
発色剤：
２．９８ｇの臭化カリウムを９６％のＥｔＯＨ中の２mlの０．２％のフェノールレッドと４８mlの０．３ＭのトリスバッファーpH７．０との混合物に溶かす。
【００５１】
バナジン酸塩溶液：
１８．４ｇのオルトバナジン酸ナトリウムを１０mlの脱イオン水に溶かす。
過酸化水素溶液：
０．１mlの３０％の過酸化水素を９．９mlの脱イオン水に加える。
【００５２】
このアッセイを実施するとき、酵素サンプルを所定量のバナジン酸塩溶液と特定時間プレインキュベーションしておき、次いで特定の量の過酸化水素及び発色剤を加え、そしてその活性を５９５nmでの吸収を測定することにより追跡する（色は赤から青味がかった紫色へと変色する）。
【００５３】
臭いの決定
臭いの評価は３人の熟練者のテストパネルにより実施した。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＣＭＰに付着したＥ．フェカリス、大腸菌及びＰ．ミラビリスの混合培養物に対するカーブラリア・ハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）の人工尿における抗菌活性についての応答面プロット。
【図２】プロテウス・ミラビリス（プランクトン状細胞）に対するｒＣＩＰ及びＫＩ（Ｈ2 Ｏ2 ＝０．５mM）の抗菌活性についての応答面プロット。
【図３】人工尿中のＰ．ミラビリスに対するｒＣＩＰ／ＫＩ，ｒＣＩＰ／ＮａＳＣＮ及びハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）の殺菌活性。細胞は人工尿の中で懸濁させるか（プランクトン状）、又はＣＴＭＰに付着させた。
【実施例】
【００５５】
実施例１
パルプ材料に付着させた大腸菌、エンテロコッカス・フェカリス及びプロテウス・ミラビリスに対するペルオキシダーゼの抗菌活性
カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼの抗微生物活性を人工尿Ａの中で、パルプ材料に付着させた大腸菌（ＤＳＭ１５７６）、エンテロコッカス・フェカリス（ＤＳＭ２５７０）及びプロテウス・ミウビリス（ＤＳＭ７８８）に対して評価した。
【００５６】
抗微生物活性はインピダンス測定（Ｍａｌｔｈｕｓ）の利用により、生存細菌細胞の減少（殺菌活性）として決定した。
【００５７】
Ｍａｌｔｈｕｓ装置により測定される検出時間を検量曲線によりcfu ／mlへと変換した。総生存細胞を数える場合、直接又は間接Ｍａｌｔｈｕｓ測定のいずれかを利用した（Malthus Flexi M2060, Malthus Instrument Limited ）。直接測定では、細胞代謝は増殖支持体における電導度測定により決定した。
【００５８】
間接測定では、３mlの増殖培地を間接Ｍａｌｔｈｕｓセルの外部チャンバーに移し、そして０．５mlの無菌ＫＯＨ（０．１Ｍ）を内部チャンバーに移す。この細胞懸濁物を酵素処理の後にＭａｌｔｈｕｓセルの外部チャンバーに移す。細胞が外部チャンバーの中で増殖するに従い、それらはＣＯ2 を生成し、それは内部チャンバー内のＫＯＨに溶け、それ故ＫＯＨの電導度を変える。酵素処理を経て生存する吸収細胞により生成されるＣＯ2 の量を生存細胞数の評価のために用いた。電導度変化がＭａｌｔｈｕｓにより測定可能なら、検出時間（dt）を記録する。dtを、cfu ／mlをdtに対応させる検量曲線の利用によりコロニーカウント数へと変換した。
【００５９】
株をBrain Heart Infusion (BHI)(Oxoid CM225）の中で定常増殖期となるまで増殖し（３０℃、２０時間）、ペプトン水に希釈し、そして化学−熱−機械パルプＣＴＭＰに対して約１０4cfu／０．０１ｇ ＣＴＭＰの最終細胞濃度で接種した。ＣＴＭＰは単一培養物又は３種の株の混合培養物のいずれかで接種を施した。
【００６０】
ハロペルオキシダーゼの抗微生物活性は３５℃にて３０分かけて、ハロペルオキシダーゼを過酸化水素（０．５mM）及び人工尿と一緒にＣＴＭＰに付着させた細菌細胞に添加することにより決定した。生存細胞の数はＣＴＭＰのＭａｌｔｈｕｓセルへの移動により決定した。
【００６１】
ハロペルオキシダーゼ（０〜２mgの酵素タンパク質／ｌの尿）の活性を人工尿の中で、電子供与体抜きで評価し、かくして酵素活性は尿中のＣｌ- により開始されるものとした。
【００６２】
ハロペルオキシダーゼは３種類の試験生物、Ｅ．フェカリス、大腸菌及びＰ．ミラビリスの総合的な殺傷を及ぼした。
【００６３】
更に、ハロペルオキシダーゼの抗微生物活性はバッファー系と比べ、人工尿の中では一定であった（pH６）。混合培養物の総合的な殺傷は１．５mg／ｌ超のハロペルオキシダーゼ濃度及び０．７５mM超の過酸化水素濃度で認められた（図１）。
【００６４】
実施例２
ペルオキシダーゼ及び電子供与体としてのチオシアネート又はヨージドの利用と、ハロペルオキシダーゼ系の利用との差
電気供与体としての人工尿Ａ由来の塩化物及び電子受容体としての過酸化水素を伴うハロペルオキシダーゼ系（実施例１）の抗菌活性を、電子供与体としてのチオシアネート（２０mM）又はヨージド（１mM）のいずれかと電子受容体としての過酸化水素（０．５mM）を伴うペルオキシダーゼ系の抗菌活性と比較した。
【００６５】
コプリヌス・ペルオキシダーゼはヨージド又はチオシアネートのいずれかの酸化を介する抗菌活性を有する。抗菌活性は実施例１に記載の通りＭａｌｔｈｕｓにより測定し、活性は人工尿に懸濁したプランクトン状細胞及びＣＴＭＰ材料上の細胞の双方に対して決定した。周知のラクトペルオキシダーゼ系と同等の抗菌活性を有するコプリヌス・ペルオキシダーゼ（Novo Nordisk A/S)(ｒＣＩＰ）を０〜４POXU／mlの濃度で使用した。
【００６６】
ｒＣＩＰ／チオシアネート系は人工尿中の高塩濃度により阻害され、一方ｒＣＩＰ／ヨージド系は人工尿で活性が認められた（図２）。
【００６７】
しかしながら、チオシアネート及びヨージド系の双方はＣＴＭＰが人工尿の中に入っているとき有意に阻害され（図３）、その理由はパルプ材料とチオシアネート及びヨージドのそれぞれの相互作用にあり、従ってこれらの系はおむつに使用されるＣＴＭＰ材料において強まった活性を有していた。
【００６８】
ハロペルオキシダーゼ系はＣＴＭＰ材料により阻害されず（図１及び３）、なぜならＣＴＭＰ上の細菌の総合的な殺傷が測定されたからである。
【００６９】
実施例３
ハロペルオキシダーゼを利用してウレアーゼを阻害することによる悪臭生成の阻害
１０mlの人工尿Ｂを利用して実験を行った。まず、過酸化水素を１mMの最終濃度にまで加え、次いで組換カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼを所望の濃度にまで加えた。
【００７０】
実験はウレアーゼの添加により開始した。サンプルを振盪湯浴上で２５℃で密閉槽の中でインキュベーションした。
【００７１】
サンプルのウレアーゼ活性は所定の時間間隔でpHを追跡し（Radiometer PHM85プレジションpHメーターを使用）、そしてアンモニアの生成を特徴的な悪臭の発生により追跡することにより評価した。
【００７２】
【表１】
【００７３】
本実施例はハロペルオキシダーゼ／Ｈ2 Ｏ2 系が、用量依存式に、ウレアーゼを完全に失活させ、それ故サンプルからの悪臭の発生を防ぐことを示した。
【００７４】
実施例４
超吸収性ポリマーに対するハロペルオキシダーゼの固定
２mlの組換カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼ（０．３７５mg／ml）の溶液をガラスビーカー中の２０ｇの強力に撹拌した超吸収性ポリマーに滴下した。次いで、この材料の真空オーブン中での２５℃での一夜の乾燥により水を除去した。
【００７５】
固定化ハロペルオキシダーゼの活性は８０μｌのバナジン酸塩溶液を１００mgの超吸収材に加え、次いでＷｈｉｒｌミキサー上で強力に混合することにより追跡した。
【００７６】
１分後、８００μｌの発色溶液及び８０μｌの過酸化水素溶液を加え、そしてこのサンプルを再び混合した。未処理の超吸収性ポリマーのブランクサンプルにおいては、色は明るい黄色のままであり、一方固定化ハロペルオキシダーゼを含むサンプルではすばやく暗い紫色へと変色した。
【００７７】
固定化ハロペルオキシダーゼ製剤を２本の当量サンプルに分け、そして一方は５℃で保存し、他方は室温で保存した。
【００７８】
１０日後、２本のサンプルの活性を上記の通りにしてアッセイし、そして固定化直後にアッセイをサンプルに対してこれらのサンプルとの間で有意な差は認められなかった。
【００７９】
活性は、若干改良したアッセイ、即ち、発色剤を０．３ＭのトリスバッファーpH７の代わりに人工尿Ｃを利用して調製するアッセイを利用して追跡した。この場合、発色剤は明るい黄色であるが、このアッセイを実施すると固定化ハロペルオキシダーゼサンプルに添加した場合に同じ暗い紫色が発色した。
【００８０】
本例はハロペルオキシダーゼが衛生製品に使用される超吸収性ポリマー上に効率的に固定されることを示す。更に、この固定化酵素は人工尿の存在下でも活性を有し、そして室温でさえも高い安定性を発揮する。
【００８１】
実施例５
固定化ハロペルオキシダーゼを利用する悪臭生成の阻害
ウレアーゼを失活させ、それ故悪臭生成を阻害する固定化ハロペルオキシダーゼの能力を、１００mg超吸収材をそのまま又は固定化ペルオキシダーゼ（実施例４の通りに調製）と共に用いることにより追跡した。
【００８２】
サンプルは、５mgの過硼酸三水和物（Merck, Art. １．０６５６０）と強く混合し、次いで１００μｌの人工尿Ｃに加えるか、又はサンプルに１２５μｌの０．３％の過酸化水素の混合された１０００μｌの人工尿Ｃを加えた。
【００８３】
Ｗｈｉｒｌミキサーで強く混合後、５００μｌのウレアーゼ溶液（１０Ｕ／ml）を直ちに加え、次いで再び混合した。
【００８４】
サンプルを振盪湯浴上で２５℃で密閉槽の中でインキュベーションし、そしてウレアーゼ活性を、所定の時間間隔においてサンプル中のpHを、そのサンプルの一部をpH指示紙（Merck Neutralit pH５〜１０；Art.１−０９５３３）に接触させることにより追跡することを介して、及び特徴的な悪臭を追跡することによりアンモニアの生成を評価することを介して、追跡した。
【００８５】
【表２】
【００８６】
本例は超吸収性ポリマー上に固定されたハロペルオキシダーゼが過酸化水素との組合せにおいて、通常尿に対するウレアーゼ作用の結果物である悪臭の生成を完全に防ぐことができることを明確に示す。
【００８７】
本例は更に、過酸化水素が固定過硼酸塩の生成においてこの系に好適に添加できることも示す。
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は汚染した衛生製品から放たれる悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。本発明は更に汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
悪臭は揮発性硫化化合物（ＶＳＣ）、窒素含有化合物及び短鎖脂肪酸等の数多くの化合物により生じうることが確立されている。
【０００３】
窒素含有化合物、例えばアンモニアの起源は尿、糞及び血液であり、汚染したおむつ又はその他の衛生製品、例えば成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン、タンポン等からほとんどの人々により認識される悪臭を供与する。
【０００４】
おむつ等から発生する悪臭は少なくともある程度は会陰（肛門と外部性殖器官との間の領域）における皮膚の上に載っている細菌、特に大腸菌（Escherichia coli）、エンテロコッカス（Enterococcus）種及びプロテウス（Proteus ）種の増殖の結果である。プロテウス種の株全てがその代謝中に酵素ウレアーゼを生成する。ウレアーゼは尿素（ヒト尿の約２％を占める）を嫌な臭いのアンモニアに急速分解する能力を有する。
【０００５】
衛生製品中の悪臭の除去又は抑制
論文の中には数多くの臭気抑制剤及び系が発表されている。例えば、活性炭形態における炭素等が悪臭分子を吸着する能力についてよく知られている。
【０００６】
米国特許第５，５９３，３９８号は悪臭抑制剤として活性炭を含んで成る悪臭放屁フィルターの付いた保護下着を開示する。
【０００７】
ゼオライト材料は体液に関わる悪臭に対して有効であることが示されている。
【０００８】
日本国特許出願平成２年０６８１１７号はゼオライト、銅及び活性チャーコールを含む例えばおむつ用の脱臭手段に関する。
【０００９】
米国特許第３，９０３，２５９号はおむつ及びヒト排泄物を脱臭するための方法であって、おむつ又は排泄物に、最も単純な形態において酸性物質、抗生物質及び溶媒から成る化学組成物を適用することを含んで成る方法に関する。この含浸組成物は更に錯形成剤及び湿潤剤を含みうる。おむつの処理は排泄物から嫌な臭いのめざましい低下をもたらし、それ故汚染したおむつの交換の負担は軽減される。
【００１０】
米国特許第３，９３５，８６２号は少なくとも０．００１ｇ／in2 の量でアミノポリカルボン酸化合物を中に含むアンモニア形成を阻害するための手段を含んで成る使い捨ておむつを開示する。
【００１１】
米国特許第４，３８５，６３２号は血液、糞及び尿を回収するための殺菌吸収体に関連し、それは細菌増殖を防ぎ、尿素のアンモニアへの分解を防ぎ、そしてアンモニアと錯体形成し、悪臭の発生を防ぐ水溶性銅塩を含む。
【発明の概要】
【００１２】
本発明の目的は汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品の提供にある。
【００１３】
第一の観点において、本発明は衛生製品の悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。
【００１４】
第二の観点において、本発明は例えば吸収材料の中にハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源を有する衛生製品に関する。特に考慮されるのは、おむつ、成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン、タンポン等の衛生製品である。
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明の目的は汚染状態において悪臭の抑制された衛生製品の提供にある。
【００１６】
「衛生製品」なる語は尿、糞、血液等を吸収又は回収するために適当な任意の製品を包括する。考えられる衛生製品の例はおむつ、成人失禁用製品、トレーニングパンツ、婦人用ナプキン及びタンポンである。
【００１７】
衛生製品は典型的には体液等を回収するための吸収材を含んで成る。今日ポリアクリル酸超吸収材がよく利用される。このような超吸収材は自重の何倍もの液体、例えば尿を吸収でき、流体が漏れるまで大量の液体を保持できる薄く且つかさ高くない衛生製品の提供が可能となる。衛生製品における液体の量のかかる増大は悪臭の問題を大きくし、かかる課題の解決をより必須なものとする。
【００１８】
本発明との関連で、「悪臭」とは例えば窒素含有化合物、例えばアンモニアにより生ずる嫌な臭いを意味する。
【００１９】
「吸収材」とは液体を保持できるあらゆる材料を包括する。
【００２０】
本発明者はハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せが汚染された衛生製品の悪臭の抑制のために利用出ることを発見した。
【００２１】
「悪臭の抑制」又は「抑制された悪臭」とはテストパネルにより決定された悪臭が対応の目かくしサンプルと比べて弱まったものと評価されたことを意味する。
【００２２】
汚染した衛生製品から放たれる悪臭は典型的には窒素含有化合物の結果物である。尿、糞、血液等は衛生製品により包まれる皮膚の上で生育する細菌により生成される酵素により分解される。例えば、尿をアンモニアへと変換することのできる酵素ウレアーゼは会陰（肛門と外部性殖器官との間にある領域）における皮膚の上で生育するプロテウス種由来の細菌により生成される。
【００２３】
第一の観点において、本発明は衛生製品の悪臭を抑制するためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用に関する。
【００２４】
下記の実施例に示す通り、ハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せは、ウレアーゼ活性の阻害を介して、又は尿素等の悪臭化合物への分解を司る化合物、特に酵素を産生する微生物、例えば細菌を殺傷もしくは少なくともその増殖を阻害することを介して、汚染された衛生製品において生ずる悪臭を有意に抑制するために利用できる。
【００２５】
ハロペルオキシダーゼが尿中のハライドイオン（特にＣｌ- ）と接触すると、このハライドイオンは次ハロゲン化酸（例えば次亜塩素酸（即ち、ＣｌＯ- ））（そしておそらくは更にその他の酸化性化合物）へと酸化され、それがウレアーゼの活性を阻害するか、又は微生物細胞、例えば細菌細胞を殺傷するもしくは少なくともその増殖を阻害できる。
【００２６】
ハロペルオキシダーゼは衛生製品の吸収材の中に組込んでよい。衛生製品の当業者はハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源をどこに、且つどうやって組込むかを知る。唯一の必須基準はハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源が例えば尿の中に存在するハライドイオンと接触して反応できるように組込むことである。
【００２７】
ハロペルオキシダーゼ
ハロペルオキシダーゼは過酸化水素又は過酸化水素生成系の存在下でハライド（Ｃｌ- ，Ｂｒ- ，Ｉ- ）を次式に従って対応の次ハロゲン化酸へと酸化できる酵素クラスを構成する：
Ｈ2 Ｏ2 ＋Ｘ−＋Ｈ＋ → Ｈ2 Ｏ＋ＨＯＸ
【００２８】
慣用の求核受容体が存在するなら、ＨＯＸとの反応が起こり、そしてハロゲン化化合物が生成されるであろう。
【００２９】
ハライドイオンに対するその特異性に従って分類される３タイプのハロペルオキシダーゼがある：化合物の塩素化、臭素化及びヨウ素化を触媒するクロロペルオキシダーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１１．１．１０）；臭化物及びヨウ化物イオンに対して特異性を示すブロモペルオキシダーゼ；並びにヨウ化物イオンの酸化のみを触媒するヨードペルオキシダーゼ（Ｅ．Ｃ．１．１１．１．８）。
【００３０】
ハロペルオキシダーゼは様々な生物から単離されている：哺乳動物、海洋動物、植物、藻類、地衣類、菌類及び細菌（Biochimica et Biophysica Acta 1161, 1993, pp.249-256参照）。ハロペルオキシダーゼは自然におけるハロゲン化化合物の形成を司る酵素であると一般に認識されているが、その他の酵素も関与しうる。
【００３１】
ハロペルオキシダーゼは様々な菌類、特に菌類グループデマチウスヒフォマイセテス（dematiaceous hyphomyctes）、例えばカルダリオマイセス、例えばＣ．フマゴ（C. fumago ）、アルテルナリア、カーブラリア、例えばＣ．ベルクロサ及びＣ．イネクアリス（C. inaequalis ）、ドレヒスラ、ウロクラジウム及びボツリチスから単離されうる（米国特許第４，９３７，１９２号参照）。
【００３２】
本発明に従うと、カーブラリア、特にＣ．ベルクロサ、例えばＣ．ベルクロサＣＢＳ１４７．６３又はＣ．ベルクロサＣＢＳ４４４．７０から得られるハロペルオキシダーゼ、が好ましい。カーブラリアハロペルオキシダーゼ及びその組換産物はＷＯ９７／０４１０２に記載されている。
【００３３】
ハロペルオキシダーゼは細菌、例えばシュードモナス、例えばＰ．ピロシニア（P. pyrrocinia)(The Journal of Biological Chemistry 263, 1988, pp.13725〜13732 参照）及びストレプトマイセス、例えばＳ．オーレオファシエンス（S. aureofaciens)(Structural Biology 1, 1994, pp.532-537 参照）からも単離されうる。
【００３４】
ブロミドペルオキシダーゼは藻類から単離される（米国特許第４，９３７，１９２号参照のこと）。
【００３５】
使用の際、ハロペルオキシダーゼの濃度を所望の効果が所望の時間枠内で達成されるようにするために変えてよい。しかしながら、本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼはリッター当り０．０１〜１００mgの酵素タンパク質の濃度、好ましくはリッター当り０．１〜５０mgの酵素タンパク質の濃度、より好ましくはリッター当り０．２〜１０mgの酵素タンパク質の濃度で添加するのが通常であろう。
【００３６】
好適な態様において、ハロペルオキシダーゼはカーブラリア種、特にＣ．ベルクロサ及びＣ．イネクアリスに由来する。
【００３７】
過酸化水素起源
本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼとの反応に必要とされる過酸化水素は様々な方法で得られうる：それは過酸化水素又は過酸化水素前駆体、例えば過炭酸塩又は過硼酸塩、又はペルオキシカルボン酸又はその塩、又は過酸化水素生成系、例えばオキシダーゼとその基質であってよい。有用なオキシダーゼは例えばグルコースオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ又はアミノ酸オキシダーゼでありうる。アミノ酸オキシダーゼの例がＷＯ９４／２５５７４号に示されている。
【００３８】
酵素的に生成された過酸化水素を使用することが有利であり、なぜならこの起源は生物学的に関連する条件下で比較的低濃度の過酸化水素をもたらすからである。低濃度の過酸化水素はハロペルオキシダーゼ触媒反応の速度の上昇をもたらす。
【００３９】
本発明に従うと、ハロペルオキシダーゼとの反応に必要とされる過酸化水素起源は０．０１〜５００mMの範囲、好ましくは０．１〜１００mMの範囲の過酸化水素濃度に担当する濃度で加えてよい。
【００４０】
本発明は例えば吸収材の中にハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源の組込まれた衛生製品にも関連する。
【００４１】
材料及び方法
材料：
酵素
ＷＯ９７／０４１０２（Novo Nordisk）に記載のカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３に由来する組換ハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）
コプリヌス・シネレウス（Coprinus cinereus ）に由来する組換ペルオキシダーゼ（ｒＣＩＰ）
ジャック・ビーン（Jack Beans）由来のIII 型ウレアーゼ（Ｓｉｇｍａ No. Ｕ１５００）
【００４２】
人工尿Ａ
尿素（３００mM）、硫酸カルシウム（２mM）、硫酸マグネシウム（３．５mM）、塩化カリウム（６０mM）及び塩化ナトリウム（１３０mM）
【００４３】
人工尿Ｂ
尿素（３００mM）、塩化ナトリウム（１３０mM）、塩化カリウム（６０mM）、硫酸マグネシウム（３mM）、硫酸カルシウム（２．５mM）、トリトンＸ−１００（１ｇ／ｌ）。この人工尿は１０mMのリン酸バッファーの中で調製し、そしてpH６．０に調整してある。
【００４４】
人工尿Ｃ：
ヒト尿の中に一般に見い出せる一定のアミノ酸を更に加えた人工尿Ｂ：リジン（０．５mM）、グリシン（２mM）、アラニン（０．５mM）及びセリン（０．５mM）。
【００４５】
微生物：
大腸菌（ＤＳＭ１５７６）
エンテロコッカス・フェカリス（E. faecalis ）（ＤＳＭ２５７０）
プロテウス・ミラビリス（P. mirabilis）（ＤＳＭ７８８）
【００４６】
超吸収材：
下記の実施例において使用した超吸収材はSCA Molnlycke, Sweden から入手した顆粒状架橋ポリアクリル酸ナトリウムポリマーとした（バッチNo. ２２７１３１）。
【００４７】
装置：
Malthus Flexi M2060 (Malthus Instrument Limited ）
【００４８】
方法
ＰＯＸＵの決定
１POXUは１分当り１μmol の過酸化水素の変換を触媒する酵素量と規定する。この活性は下記の条件で４１８nmにて吸収を追跡することによる２，２′−アジノビス〔３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホネート〕（ＡＢＴＳ）の酸化として測定する：pH７．０、３０℃、０．８８Ｍの水素ペルオキシダーゼ、１．６７mMのＡＢＴＳ及び６０ｓの反応時間。
【００４９】
Ｍａｌｔｈｕｓ法
Ｍａｌｔｈｕｓ法はJohnson and Jones (1995) Journal of Microbiological Methods 21, p.15-26 及びJohansenら（1995) Journal of Applied Bacteriology 78, p.297-303 に記載の方法に基づく。
【００５０】
ハロペルオキシダーゼ活性の決定
発色剤：
２．９８ｇの臭化カリウムを９６％のＥｔＯＨ中の２mlの０．２％のフェノールレッドと４８mlの０．３ＭのトリスバッファーpH７．０との混合物に溶かす。
【００５１】
バナジン酸塩溶液：
１８．４ｇのオルトバナジン酸ナトリウムを１０mlの脱イオン水に溶かす。
過酸化水素溶液：
０．１mlの３０％の過酸化水素を９．９mlの脱イオン水に加える。
【００５２】
このアッセイを実施するとき、酵素サンプルを所定量のバナジン酸塩溶液と特定時間プレインキュベーションしておき、次いで特定の量の過酸化水素及び発色剤を加え、そしてその活性を５９５nmでの吸収を測定することにより追跡する（色は赤から青味がかった紫色へと変色する）。
【００５３】
臭いの決定
臭いの評価は３人の熟練者のテストパネルにより実施した。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＣＭＰに付着したＥ．フェカリス、大腸菌及びＰ．ミラビリスの混合培養物に対するカーブラリア・ハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）の人工尿における抗菌活性についての応答面プロット。
【図２】プロテウス・ミラビリス（プランクトン状細胞）に対するｒＣＩＰ及びＫＩ（Ｈ2 Ｏ2 ＝０．５mM）の抗菌活性についての応答面プロット。
【図３】人工尿中のＰ．ミラビリスに対するｒＣＩＰ／ＫＩ，ｒＣＩＰ／ＮａＳＣＮ及びハロペルオキシダーゼ（ｒＨＰ）の殺菌活性。細胞は人工尿の中で懸濁させるか（プランクトン状）、又はＣＴＭＰに付着させた。
【実施例】
【００５５】
実施例１
パルプ材料に付着させた大腸菌、エンテロコッカス・フェカリス及びプロテウス・ミラビリスに対するペルオキシダーゼの抗菌活性
カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼの抗微生物活性を人工尿Ａの中で、パルプ材料に付着させた大腸菌（ＤＳＭ１５７６）、エンテロコッカス・フェカリス（ＤＳＭ２５７０）及びプロテウス・ミウビリス（ＤＳＭ７８８）に対して評価した。
【００５６】
抗微生物活性はインピダンス測定（Ｍａｌｔｈｕｓ）の利用により、生存細菌細胞の減少（殺菌活性）として決定した。
【００５７】
Ｍａｌｔｈｕｓ装置により測定される検出時間を検量曲線によりcfu ／mlへと変換した。総生存細胞を数える場合、直接又は間接Ｍａｌｔｈｕｓ測定のいずれかを利用した（Malthus Flexi M2060, Malthus Instrument Limited ）。直接測定では、細胞代謝は増殖支持体における電導度測定により決定した。
【００５８】
間接測定では、３mlの増殖培地を間接Ｍａｌｔｈｕｓセルの外部チャンバーに移し、そして０．５mlの無菌ＫＯＨ（０．１Ｍ）を内部チャンバーに移す。この細胞懸濁物を酵素処理の後にＭａｌｔｈｕｓセルの外部チャンバーに移す。細胞が外部チャンバーの中で増殖するに従い、それらはＣＯ2 を生成し、それは内部チャンバー内のＫＯＨに溶け、それ故ＫＯＨの電導度を変える。酵素処理を経て生存する吸収細胞により生成されるＣＯ2 の量を生存細胞数の評価のために用いた。電導度変化がＭａｌｔｈｕｓにより測定可能なら、検出時間（dt）を記録する。dtを、cfu ／mlをdtに対応させる検量曲線の利用によりコロニーカウント数へと変換した。
【００５９】
株をBrain Heart Infusion (BHI)(Oxoid CM225）の中で定常増殖期となるまで増殖し（３０℃、２０時間）、ペプトン水に希釈し、そして化学−熱−機械パルプＣＴＭＰに対して約１０4cfu／０．０１ｇ ＣＴＭＰの最終細胞濃度で接種した。ＣＴＭＰは単一培養物又は３種の株の混合培養物のいずれかで接種を施した。
【００６０】
ハロペルオキシダーゼの抗微生物活性は３５℃にて３０分かけて、ハロペルオキシダーゼを過酸化水素（０．５mM）及び人工尿と一緒にＣＴＭＰに付着させた細菌細胞に添加することにより決定した。生存細胞の数はＣＴＭＰのＭａｌｔｈｕｓセルへの移動により決定した。
【００６１】
ハロペルオキシダーゼ（０〜２mgの酵素タンパク質／ｌの尿）の活性を人工尿の中で、電子供与体抜きで評価し、かくして酵素活性は尿中のＣｌ- により開始されるものとした。
【００６２】
ハロペルオキシダーゼは３種類の試験生物、Ｅ．フェカリス、大腸菌及びＰ．ミラビリスの総合的な殺傷を及ぼした。
【００６３】
更に、ハロペルオキシダーゼの抗微生物活性はバッファー系と比べ、人工尿の中では一定であった（pH６）。混合培養物の総合的な殺傷は１．５mg／ｌ超のハロペルオキシダーゼ濃度及び０．７５mM超の過酸化水素濃度で認められた（図１）。
【００６４】
実施例２
ペルオキシダーゼ及び電子供与体としてのチオシアネート又はヨージドの利用と、ハロペルオキシダーゼ系の利用との差
電気供与体としての人工尿Ａ由来の塩化物及び電子受容体としての過酸化水素を伴うハロペルオキシダーゼ系（実施例１）の抗菌活性を、電子供与体としてのチオシアネート（２０mM）又はヨージド（１mM）のいずれかと電子受容体としての過酸化水素（０．５mM）を伴うペルオキシダーゼ系の抗菌活性と比較した。
【００６５】
コプリヌス・ペルオキシダーゼはヨージド又はチオシアネートのいずれかの酸化を介する抗菌活性を有する。抗菌活性は実施例１に記載の通りＭａｌｔｈｕｓにより測定し、活性は人工尿に懸濁したプランクトン状細胞及びＣＴＭＰ材料上の細胞の双方に対して決定した。周知のラクトペルオキシダーゼ系と同等の抗菌活性を有するコプリヌス・ペルオキシダーゼ（Novo Nordisk A/S)(ｒＣＩＰ）を０〜４POXU／mlの濃度で使用した。
【００６６】
ｒＣＩＰ／チオシアネート系は人工尿中の高塩濃度により阻害され、一方ｒＣＩＰ／ヨージド系は人工尿で活性が認められた（図２）。
【００６７】
しかしながら、チオシアネート及びヨージド系の双方はＣＴＭＰが人工尿の中に入っているとき有意に阻害され（図３）、その理由はパルプ材料とチオシアネート及びヨージドのそれぞれの相互作用にあり、従ってこれらの系はおむつに使用されるＣＴＭＰ材料において強まった活性を有していた。
【００６８】
ハロペルオキシダーゼ系はＣＴＭＰ材料により阻害されず（図１及び３）、なぜならＣＴＭＰ上の細菌の総合的な殺傷が測定されたからである。
【００６９】
実施例３
ハロペルオキシダーゼを利用してウレアーゼを阻害することによる悪臭生成の阻害
１０mlの人工尿Ｂを利用して実験を行った。まず、過酸化水素を１mMの最終濃度にまで加え、次いで組換カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼを所望の濃度にまで加えた。
【００７０】
実験はウレアーゼの添加により開始した。サンプルを振盪湯浴上で２５℃で密閉槽の中でインキュベーションした。
【００７１】
サンプルのウレアーゼ活性は所定の時間間隔でpHを追跡し（Radiometer PHM85プレジションpHメーターを使用）、そしてアンモニアの生成を特徴的な悪臭の発生により追跡することにより評価した。
【００７２】
【表１】
【００７３】
本実施例はハロペルオキシダーゼ／Ｈ2 Ｏ2 系が、用量依存式に、ウレアーゼを完全に失活させ、それ故サンプルからの悪臭の発生を防ぐことを示した。
【００７４】
実施例４
超吸収性ポリマーに対するハロペルオキシダーゼの固定
２mlの組換カーブラリア・ベルクロサハロペルオキシダーゼ（０．３７５mg／ml）の溶液をガラスビーカー中の２０ｇの強力に撹拌した超吸収性ポリマーに滴下した。次いで、この材料の真空オーブン中での２５℃での一夜の乾燥により水を除去した。
【００７５】
固定化ハロペルオキシダーゼの活性は８０μｌのバナジン酸塩溶液を１００mgの超吸収材に加え、次いでＷｈｉｒｌミキサー上で強力に混合することにより追跡した。
【００７６】
１分後、８００μｌの発色溶液及び８０μｌの過酸化水素溶液を加え、そしてこのサンプルを再び混合した。未処理の超吸収性ポリマーのブランクサンプルにおいては、色は明るい黄色のままであり、一方固定化ハロペルオキシダーゼを含むサンプルではすばやく暗い紫色へと変色した。
【００７７】
固定化ハロペルオキシダーゼ製剤を２本の当量サンプルに分け、そして一方は５℃で保存し、他方は室温で保存した。
【００７８】
１０日後、２本のサンプルの活性を上記の通りにしてアッセイし、そして固定化直後にアッセイをサンプルに対してこれらのサンプルとの間で有意な差は認められなかった。
【００７９】
活性は、若干改良したアッセイ、即ち、発色剤を０．３ＭのトリスバッファーpH７の代わりに人工尿Ｃを利用して調製するアッセイを利用して追跡した。この場合、発色剤は明るい黄色であるが、このアッセイを実施すると固定化ハロペルオキシダーゼサンプルに添加した場合に同じ暗い紫色が発色した。
【００８０】
本例はハロペルオキシダーゼが衛生製品に使用される超吸収性ポリマー上に効率的に固定されることを示す。更に、この固定化酵素は人工尿の存在下でも活性を有し、そして室温でさえも高い安定性を発揮する。
【００８１】
実施例５
固定化ハロペルオキシダーゼを利用する悪臭生成の阻害
ウレアーゼを失活させ、それ故悪臭生成を阻害する固定化ハロペルオキシダーゼの能力を、１００mg超吸収材をそのまま又は固定化ペルオキシダーゼ（実施例４の通りに調製）と共に用いることにより追跡した。
【００８２】
サンプルは、５mgの過硼酸三水和物（Merck, Art. １．０６５６０）と強く混合し、次いで１００μｌの人工尿Ｃに加えるか、又はサンプルに１２５μｌの０．３％の過酸化水素の混合された１０００μｌの人工尿Ｃを加えた。
【００８３】
Ｗｈｉｒｌミキサーで強く混合後、５００μｌのウレアーゼ溶液（１０Ｕ／ml）を直ちに加え、次いで再び混合した。
【００８４】
サンプルを振盪湯浴上で２５℃で密閉槽の中でインキュベーションし、そしてウレアーゼ活性を、所定の時間間隔においてサンプル中のpHを、そのサンプルの一部をpH指示紙（Merck Neutralit pH５〜１０；Art.１−０９５３３）に接触させることにより追跡することを介して、及び特徴的な悪臭を追跡することによりアンモニアの生成を評価することを介して、追跡した。
【００８５】
【表２】
【００８６】
本例は超吸収性ポリマー上に固定されたハロペルオキシダーゼが過酸化水素との組合せにおいて、通常尿に対するウレアーゼ作用の結果物である悪臭の生成を完全に防ぐことができることを明確に示す。
【００８７】
本例は更に、過酸化水素が固定過硼酸塩の生成においてこの系に好適に添加できることも示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
衛生製品の悪臭を抑制させるためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用。
【請求項２】
前記ハロペルオキシダーゼが菌類、細菌又は藻類から得られたものである、請求項１記載の利用。
【請求項３】
前記ハロペルオキシダーゼがカルダリオマイセス（Caldariomyces ）、アルテルナリア（Alternalia）、カーブラリア（Curvularia）、ドレヒスレラ（Drechslera）、ウロクラジウム（Ulocladium）及びボツリチス（Botrytis）から成る群から選ばれる菌類から得られたものである、請求項２記載の利用。
【請求項４】
前記ハロペルオキシダーゼがカーブラリア・ベルクロサ（C. verruculosa）、例えばカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３から得られたものであるか、又は前記ハロペルオキシダーゼがカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３から得られるハロペルオキシダーゼと免疫学的に交差反応性である、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記ハロペルオキシダーゼがシュードモナス（Pseudomonas ）及びストレプトマイセス（Streptomyces）から成る群から選ばれる細菌から得られたものである、請求項２記載の利用。
【請求項６】
前記過酸化水素起源が過酸化水素又は過酸化水素前駆体である、請求項１〜５のいずれか１項記載の利用。
【請求項７】
前記衛生製品がおむつ、又は成人失禁用製品、又は一組のトレーニングパンツ、又は婦人用ナプキンもしくはタンポンである、請求項１〜６のいずれか１項記載の利用。
【請求項８】
ハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源とが組込まれている、衛生製品。
【請求項９】
前記ハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源が吸収材料の中に組込まれている、請求項８記載の製品。
【請求項１０】
おむつ、又は成人失禁用製品、又は一組のトレーニングパンツ、又は婦人用ナプキンもしくはタンポンである、請求項８又は９記載の製品。
【請求項１】
衛生製品の悪臭を抑制させるためのハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源との組合せの利用。
【請求項２】
前記ハロペルオキシダーゼが菌類、細菌又は藻類から得られたものである、請求項１記載の利用。
【請求項３】
前記ハロペルオキシダーゼがカルダリオマイセス（Caldariomyces ）、アルテルナリア（Alternalia）、カーブラリア（Curvularia）、ドレヒスレラ（Drechslera）、ウロクラジウム（Ulocladium）及びボツリチス（Botrytis）から成る群から選ばれる菌類から得られたものである、請求項２記載の利用。
【請求項４】
前記ハロペルオキシダーゼがカーブラリア・ベルクロサ（C. verruculosa）、例えばカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３から得られたものであるか、又は前記ハロペルオキシダーゼがカーブラリア・ベルクロサＣＢＳ１４７．６３から得られるハロペルオキシダーゼと免疫学的に交差反応性である、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記ハロペルオキシダーゼがシュードモナス（Pseudomonas ）及びストレプトマイセス（Streptomyces）から成る群から選ばれる細菌から得られたものである、請求項２記載の利用。
【請求項６】
前記過酸化水素起源が過酸化水素又は過酸化水素前駆体である、請求項１〜５のいずれか１項記載の利用。
【請求項７】
前記衛生製品がおむつ、又は成人失禁用製品、又は一組のトレーニングパンツ、又は婦人用ナプキンもしくはタンポンである、請求項１〜６のいずれか１項記載の利用。
【請求項８】
ハロペルオキシダーゼと過酸化水素起源とが組込まれている、衛生製品。
【請求項９】
前記ハロペルオキシダーゼ及び過酸化水素起源が吸収材料の中に組込まれている、請求項８記載の製品。
【請求項１０】
おむつ、又は成人失禁用製品、又は一組のトレーニングパンツ、又は婦人用ナプキンもしくはタンポンである、請求項８又は９記載の製品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１１−４４９（Ｐ２０１１−４４９Ａ）
【公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１７５７４１（Ｐ２０１０−１７５７４１）
【出願日】平成２２年８月４日（２０１０．８．４）
【分割の表示】特願２０００−５０９４６２（Ｐ２０００−５０９４６２）の分割
【原出願日】平成１０年８月１４日（１９９８．８．１４）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年８月４日（２０１０．８．４）
【分割の表示】特願２０００−５０９４６２（Ｐ２０００−５０９４６２）の分割
【原出願日】平成１０年８月１４日（１９９８．８．１４）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
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