慢性閉塞性肺疾患改善剤
【課題】 ＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする安全で、効果的なＣＯＰＤ改善剤を提供することを課題とする。
【解決手段】 下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤であり、静脈投与或いは吸入投与されるＣＯＰＤ改善剤である。
【解決手段】 下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤であり、静脈投与或いは吸入投与されるＣＯＰＤ改善剤である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は慢性閉塞性肺疾患改善剤に係わり、詳細には、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＰＣ−ＳＯＤと記載する場合もある）を有効成分として含有する慢性閉塞性肺疾患改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＳＯＤと記載する場合もある）は、１９６５年Huberらによって牛の血液から抗炎症蛋白質として抽出され、活性酸素の一つであるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）を特異的に消去することが明らかにされた生理活性蛋白質である。生体内においては、活性酸素は主に好中球、マクロファージ等の食細胞から殺菌のために放出されるが、通常余剰の活性酸素に対してはＳＯＤをはじめとする種々の抗酸化物質が存在し、活性酸素による正常細胞への傷害を防御している。
【０００３】
しかしながら、ＳＯＤ等の抗酸化物質による抗酸化能力を超えて活性酸素が過剰に存在すると、その近くに存在する物質、特に細胞膜が活性酸素により攻撃され、種々の病態が発現してくる。事実、活性酸素はその強力な組織障害性が証明されて以来、炎症、アレルギー、虚血再灌流による組織障害、抗癌剤による肺線維症など多くの病態の発生・増悪因子になることが明らかにされてきた。
【０００４】
このような状況の中、活性酸素を特異的に消去するＳＯＤが見出され、その臨床的応用の可能性について広く検討されている。本発明者らもＳＯＤの臨床的活用性について鋭意検討してきたなかで、ＳＯＤの臨床的効果を高めるためには、腎臓からの排泄を抑えて血中濃度を維持すること、さらに細胞膜への親和性を高めて細胞膜上に存在する過剰の活性酸素を消去することが重要であると考え、種々の修飾型ＳＯＤを検討し、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を提案してきている（特許文献１、特許文献９）。
【０００５】
このＰＣ−ＳＯＤは、遺伝子組み換え技術によりＣｕ／Ｚｎ−ヒトスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を調製した後、化学的にレシチン誘導体（フォスファチジルコリン誘導体：ＰＣ）をＳＯＤ１分子（２量体）あたり平均４分子結合させたレシチン化ＳＯＤである。ＰＣ−ＳＯＤは、細胞膜に対して高い親和性を有し、病変部位において発症因子である虚血・再灌流障害やアントラサイクリン系抗癌剤誘発心筋症等の活性酸素が関与する疾患に対する高い治療効果が認められており、既にこのＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする急性心不全治療剤（特許文献２）、抗ウイルス剤（特許文献３）、ループス腎炎治療剤（特許文献４）、脳血管障害に伴う機能障害改善剤（特許文献５）、抗線維化剤（特許文献６）あるいは抗アレルギー疾患処置剤（特許文献７）、熱傷治療剤（特許文献８）、間質性肺炎治療剤（特許文献１０）等を種々提案してきている。
【０００６】
ところで、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ：Chronic Obstructive Pulmonary Disease）は、様々な原因、特に喫煙により肺に慢性の炎症が生じ、これにより、肺胞の破壊や気管支粘液線の肥大が起き、その結果息切れを生じたり、咳嗽や喀痰が増加したりする疾患である。以前において、肺気腫（ＰＥ：pulmonary emphysema）と呼ばれていた疾患と慢性気管支炎（ＣＢ：chronic bronchitis）と呼ばれていた疾患は、両者が種々の割合で合併することが多く、この二つによる閉塞性肺疾患を会わせて、慢性閉塞性肺疾患（以下、ＣＯＰＤと記す）と呼ぶようになった。
【０００７】
世界保健機構（ＷＨＯ）の試算では、２００５年に世界中で年間３００万人がＣＯＰＤで命を落とし、死亡原因の第４位を占めているが、今後１０年間でさらに３０％増加すると予測している。日本では、厚生労働省の統計によると、２００５年には日本人の全死亡数の１．３％がＣＯＰＤにより死亡しており、死亡原因の１０位であり、男性に限れば７位を占めている。
【０００８】
ＣＯＰＤの最大の原因は喫煙である。ＣＯＰＤ患者の９０％は喫煙者であり（非特許文献１）、非喫煙者に比べて喫煙者ではＣＯＰＤの発症のリスクは６倍以上となる。喫煙者の約１０〜１５％がＣＯＰＤを発症するが、高齢者に限るとその５０％近くがＣＯＰＤである。その他の原因として、室内空気汚染や、大気汚染、化学物質や粉塵の吸入、遺伝によるもの、小児期の肺炎・気管支炎などが挙げられている。
【０００９】
その病態としては、気流制限、すなわち息が吐きづらいことを特徴とする疾患であるが、病態の本質は、気道の慢性炎症である。喫煙や吸入物質により中枢気道から末梢気管支まで肺のさまざまなレベルで炎症が惹起される。その結果、プロテアーゼ・アンチプロテアーゼの不均等や、オキシダント・アンチオキシダントの不均等などにより、肺胞の破壊や、気管支粘液腺の肥大が起きると考えられている。
【００１０】
このＣＯＰＤは、不可逆的な気道の破壊が生じているために、治癒しない疾患である。禁煙や、気管支拡張剤、去痰剤、鎮咳剤などの投与による薬物療法、酸素療法等により症状緩和を行うにすぎず、極めてやっかいな疾患である。
【００１１】
かかる観点から、これまでに種々のＣＯＰＤ改善剤、或いは改善方法が提案されているが（例えば、特許文献１１、１２）、さらに優れたＣＯＰＤ改善剤の登場が期待されているのが現状である。
【特許文献１】特開平９−１１７２７９号公報
【特許文献２】特開平９−５２８４３号公報
【特許文献３】特開平９−５９１７８号公報
【特許文献４】特開平９−１１０７１７号公報
【特許文献５】特開平１０−３３８６４５号公報
【特許文献６】特開２００１−２５８５号公報
【特許文献７】特開２００１−１５１６９５号公報
【特許文献８】特開２００６−１６９１２８号公報
【特許文献９】特開２００１−６４１９９号公報
【特許文献１０】特願２００７−０９９２０１
【特許文献１１】特開２００６−５６８９０号公報
【特許文献１２】特開２００８−１８９６６７号公報
【非特許文献１】Annual Review of Medicine, 40:1989, pp411-429
【００１２】
ＣＯＰＤの発症に肺組織における炎症が関与しているとすれば、その誘発には、スーパーオキサイドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を抑制させ、結果的にＣＯＰＤ症状の改善を行うことができるものと考えられる。
そこで本発明者は、かかる考え方に立脚して、先に提案している細胞親和性の高いレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）についてＣＯＰＤへの適用を検討した結果、このＰＣ−ＳＯＤがＣＯＰＤの症状改善に極めて効果的であることを確認して、本発明を完成させるに至った。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって本発明は、上記の現状に鑑み、ＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする安全で、効果的なＣＯＰＤ改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的態様として、
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１５】
より好ましくは、本発明で使用する式（Ｉ）で示されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼにおいて、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１６】
さらに本発明は、より具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であり、具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１７】
最も具体的には、本発明はスーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１８】
さらに本発明は、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼと共にその安定化剤を含有するＣＯＰＤ改善剤であり、安定化剤として糖成分、特にシュークロースを含有させたＣＯＰＤ改善剤である。
【００１９】
より具体的には、本発明は注射剤の形態、或いは吸入剤の形態にあることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、ＣＯＰＤの発症として、中枢気管支から末梢軌道に至る気道に慢性炎症が生じる疾患であり、その誘発には、スーパーオキシドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、ＣＯＰＤの有効な改善治療を行えるものである。
これまで効果的なＣＯＰＤ改善剤が存在しなかった状況下において、特異的なＰＣ−ＳＯＤを投与することにより、その症状の改善を行える点で、その医療上の効果は極めて特異的なものである。
【００２１】
また、本発明に使用するＰＣ−ＳＯＤは、従来のＳＯＤに比較して細胞膜への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上安定化剤として糖成分、特にシュークロースを一緒に含有させることにより、ＰＣ−ＳＯＤ自体の安定性に優れたものとなり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮し、ＣＯＰＤの改善を行い得る点で、特に優れたものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤において使用されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）において、「レシチン」とはフォスファチジルコリンを意味する通常のレシチンをいい、「リゾレシチン」とはレシチンのグリセロールの２位に結合している脂肪酸１分子がとれて、２位の炭素原子に水酸基が結合した化合物をいう。
【００２３】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、通常リゾレシチンの２位の水酸基に化学的架橋剤を結合させたレシチン誘導体を、ＳＯＤに１個以上結合させて得ることができる。このＰＣ−ＳＯＤは、次式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表すことができる。
【００２４】
ここで使用するＳＯＤ’は、生体内の活性酸素（Ｏ２−）の分解というその本来の機能を発揮し得る限りにおいて、その起源は特に限定されるものではなく、各種の動植物または微生物に由来するＳＯＤ残基を広く用いることができる。しかしながら、医薬品としての用途を考慮した場合には生体内での抗原性を可能な限り減らすことが好ましい。したがって、使用するＳＯＤ’としては、本発明のＣＯＰＤ改善剤を投与する対象に応じて適宜適切なＳＯＤ残基を選択することが好ましい。
【００２５】
例えば、現実のＣＯＰＤ患者を対象に投与しようとするものであるから、投与による生体内における抗原性をできるだけ減らすために、ヒト由来のＳＯＤ残基を用いることが好ましい。したがって、本発明のＣＯＰＤ改善剤としては、抗原性を考慮し、ヒト由来のＳＯＤを使用するのがよい。
【００２６】
ヒト由来のＳＯＤとしては、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ（活性中心に銅と亜鉛を含むヒト由来のＳＯＤ；以下、ヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと略記する場合もある）が、細胞内における発現量が多く、また遺伝子工学的手法による生産技術が既に確立しており、大量に調製することが可能であるために、特に好ましく使用される。
【００２７】
このヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤには、ヒト組織または培養細胞から製造される天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；遺伝子工学的手法により製造されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと実質上同一のアミノ酸配列を有する組み換えヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤにおけるアミノ酸配列式中の一部のアミノ酸を欠失、付加、置換、あるいは化学的に修飾若しくは改変したＳＯＤ等があり、いずれのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤであってもよい。
【００２８】
そのなかでも、天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤのアミノ酸配列式における１１１位のアミノ酸（システイン：Ｃｙｓ）がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤが好ましい。かかるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤは、例えば特開平９−１１７２７９号公報にその詳細が記載されており、その方法に従って得ることができる。
したがって、特開平９−１１７２７９号公報に記載されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの調製は、本明細書の一部を構成し、本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤを素材として得ることができる。
【００２９】
本発明で使用する式（Ｉ）で表されるＰＣ−ＳＯＤにおいて、Ｂで示される「グリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基」は、具体的には次式（ＩＩ）：
−Ｏ−ＣＨ(ＣＨ２ＯＲ)[ＣＨ２ＯＰ(Ｏ)(Ｏ−)(ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋(ＣＨ３)３)]
（ＩＩ）
（式中、Ｒは脂肪酸残基（アシル基）である）
で表される。
【００３０】
Ｒで示される脂肪酸残基（アシル基）としては、炭素数１０〜２８の飽和または不飽和脂肪酸残基が好ましく、より好ましくは、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、ドコサノイル基、その他の炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸残基であり、特に好ましくは炭素数１６を有する飽和脂肪酸残基であるパルミトイル基である。
【００３１】
また、一般式（Ｉ）においてＱで示される化学的架橋は、ＳＯＤとレシチンとを架橋して化学的に結合（共有結合）させ得るものであれば特に限定されない。そのような化学的架橋としては、残基：−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）が特に好ましい。この残基は、式：ＨＯ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−ＯＨで表される直鎖状のジカルボン酸、その無水物、エステル、ハロゲン化物等の両端に存在する水酸基（但し、無水物、エステル、ハロゲン化物の場合には、両端に存在する水酸基に該当する部分）を除いた残基である。
【００３２】
一般式（Ｉ）においてＱが上記の直鎖状のジカルボン酸残基である場合には、Ｑはその一端において前記した式（ＩＩ）のリゾレシチン残基の水酸基由来の酸素とエステル結合により結合している。また、エステル結合をしたＱの他端は、ＳＯＤのアミノ基とアミド結合などにより直接結合している。
なお、上記化学的架橋の残基においてｎとしては２以上の整数であり、好ましくは２〜１０の整数である。
【００３３】
また、式（Ｉ）においてｍとしてはＳＯＤ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数を表している。したがって、ｍは１以上の整数であり、１〜１２、特に４であることが好ましい。
【００３４】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤの製造方法、すなわちレシチン誘導体とＳＯＤ、好ましくはヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの結合方法は、例えば、特開平９−１１７２７９号公報に記載の方法により行うことができる。
【００３５】
その好ましいＰＣ−ＳＯＤの化学構造を模式的に示すと、以下のＰＣ−ＳＯＤが特に好ましい。
【００３６】
【化１】
（ｍは、結合したレシチン誘導体数）
【００３７】
すなわち、E. coliを宿主として遺伝子組み換えにより製造したヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの遊離アミノ基に、レシチン誘導体を平均４分子共有結合させたものである。
【００３８】
本発明のＣＯＰＤ改善剤において用いるＰＣ−ＳＯＤは、医薬として使用できる程度に精製され、かつ、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものであることが好ましい。例えば、ＰＣ−ＳＯＤは、２，５００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものを用いるのが好ましく、３，０００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものがより好ましい。
なお、本発明において１Ｕ（ユニット）とは、ｐＨ７．８／３０℃の条件下でＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）を用いてJ. Biol. Chem., vol.244, No.22 6049-6055 (1969) に記載の方法に準じて測定し、ＮＢＴの還元速度を５０％阻害するＰＣ−ＳＯＤの酵素量を表す。
【００３９】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、かくして調製されたＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするＣＯＰＤ改善剤であるが、好ましくはＰＣ−ＳＯＤと共に安定化剤を含有するものがよい。そのような安定化剤としては、例えば糖成分をあげることができる。糖成分としては医薬的に使用される糖成分であれば特に限定されないが、なかでもシュークロースが好ましい。したがって、本発明が提供する最も好ましいＣＯＰＤ改善剤は、ＰＣ−ＳＯＤと共にシュークロースを含有する組成物である。シュークロースとしては医薬品として使用できる程度に精製されたものが好ましく、特に活性炭で処理されたシュークロースを用いるのがよい。かかるシュークロースをＰＣ−ＳＯＤと共に使用することにより、長期間保存によるＰＣ−ＳＯＤの活性低下を防ぐことができ、安定性が高く、凍結乾燥した場合であっても、その性状が特に良好な組成物として調製することができる。
【００４０】
本発明のＣＯＰＤ改善剤におけるＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの配合比率は、投与量、製剤の形態等に応じて適宜決定することができ、特に限定されるものでない。しかしながら、ＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの重量比として、０．１／１００〜８０／１００程度の範囲内にあることが好ましく、０．４／１００〜６０／１００程度がより好ましい。
【００４１】
本発明のＣＯＰＤ改善剤には、ＰＣ−ＳＯＤの活性に影響を与えず、且つ製剤の効果に影響を与えない限り、他の医薬活性成分や、慣用されている製剤成分、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、崩壊剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤等を添加することができる。
【００４２】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤の調製は、ＰＣ−ＳＯＤおよびシュークロースを用いて、製剤学的に公知であり、慣用されている方法により行うことができる。なお、本発明の製剤組成物に使用するＰＣ−ＳＯＤは、溶液状、凍結状、または凍結乾燥状の形態が好ましい。
【００４３】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、その一つの態様として、好ましくは注射剤の形態で投与することができる。注射剤としては、溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解型固形製剤等の形態であることが好ましく、これらの製剤は、日本薬局方の製剤総則に記載の方法に準じ調製することができる。
【００４４】
また、本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、また別の態様として、好ましくは吸入剤の形態で投与することができる。
かかる吸入剤とは、気管、気管支、肺等へ到達させるための医薬組成物を意味し、好適には、点鼻剤又は経鼻若しくは経肺投与に適した組成物であり、特に経肺投与に適した組成物である。
【００４５】
吸入剤としては、上記したＰＣ−ＳＯＤを有効成分として用いて、粉末、溶液又は懸濁液の形態として製造することができる。
【００４６】
吸入剤を粉末として製造する場合には、有効成分である上記したＰＣ−ＳＯＤをそのまま、若しくは賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加えて微細化することにより製造することができる。
【００４７】
また、吸入剤を溶液または懸濁剤として製造する場合には、例えば、ＰＣ−ＳＯＤを水または水と補助溶媒、例えば、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのようなアルコール系の補助溶媒の混合物に溶解又は懸濁させることにより製造することができる。そのような溶液又は懸濁液は、さらに防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、等張化剤、吸収促進剤、増粘剤等を含有することができる。
【００４８】
上記のようにして製造した吸入剤は、吸入剤の分野での一般的な手段、例えば、スポイト、ピペット、カニューレ又はアトマイザーやネブライザーなどの噴霧器を用いて霧状をして鼻腔内又は口腔内に、或いは気管、気管支、肺等へ直接投与される。噴霧器を用いる場合には、適当な噴射剤（例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタンのようなクロロフルオロカーボン、または二酸化炭素等のガス等）と共に加圧バッグの形にされたエアゾールとして噴霧するか、ネブライザーを用いて投与することができる。
【００４９】
本発明のＣＯＰＤ改善剤における有効成分であるＰＣ−ＳＯＤの量および製剤の投与量は、製剤調製の方法、剤形、対象疾患の程度、患者の年齢、体重によって異なり、一概に限定できないが、例えば臨床量として成人１人１日当たり０．５〜１００ｍｇ（１５００〜３０万Ｕ）を例示することができる。また投与回数についても一概に限定できないが、１日１回ないし１日数回の投与を行うことも可能である。
【実施例】
【００５０】
以下に本発明を、具体的試験例、実施例を説明することにより、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらの記載に限定されるものではない。
【００５１】
試験例１：ブタ膵臓エラスターゼ誘発ＣＯＰＤモデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの効果（静脈内投与）
［方法］
６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ブタ脾臓エステラーゼを、マウス１匹あたり５０μｇ経気道投与し、肺傷害を作成させた。
各濃度（１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ）のＰＣ−ＳＯＤを一日一回静脈内投与し、３日後に肺胞洗浄液を回収し、全細胞数をカウントした。
また、細胞をディフクイック法により染色し、各炎症性細胞数をカウントした。
更に、マウスを安楽死させ、肺組織の切片を作成し、Ｈ＆Ｅ染色を行い、電子顕微鏡撮影により染色像（×４０）を得た。
そのＨ＆Ｅ染色像より、平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）を測定した。
【００５２】
［結果］
１．肺胞洗浄液中の全細胞数を図１に示した。
図中の結果から判明するように、ブタ脾臓エステラーゼ投与により、全細胞数は上昇し、炎症性細胞の増加が予測された。また、この上昇はＰＣ−ＳＯＤにより減弱したことから、ＰＣ−ＳＯＤが抗炎症作用を発揮することが予測された。
２．各炎症性細胞数を図２〜図４に示した。
図２は肺胞マクロファージの結果を、図３は好中球の結果を、図４はリンパ球の結果を示した。
図中の結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ静脈投与で、炎症性細胞の減少が見られ、有意に抗炎症作用を示していることが判明する。
【００５３】
３．図５にＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真の結果を示し、図６に平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した。
各図中に示した結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ静脈投与は、エラスターゼ依存の平均肺胞径の延長を抑制し、肺傷害を抑制していることが判明する。
【００５４】
試験例２：ブタ膵臓エラスターゼ誘発ＣＯＰＤモデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの効果（吸入投与）
［方法］
６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ブタ脾臓エステラーゼを、マウスあたり５０μｇ経気道投与し、肺傷害を作成させた。
各濃度（３０及び６０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤を一日一回吸入投与し、３日後に肺胞洗浄液を回収し、全細胞数をカウントした。
また、細胞をディフクイック法により染色し、各炎症性細胞数をカウントした。
更に、マウスを安楽死させ、肺組織の切片を作成し、Ｈ＆Ｅ染色を行い、電子顕微鏡撮影により染色像（×４０）を得た。
そのＨ＆Ｅ染色像より、平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）を測定した。
【００５５】
［結果］
１．肺胞洗浄液中の全細胞数を図７に示した。
図中の結果から判明するように、ブタ脾臓エステラーゼ投与依存によって上昇した全細胞数はＰＣ−ＳＯＤにより減弱したことから、ＰＣ−ＳＯＤが抗炎症作用を発揮したことが予測された。
２．各炎症性細胞数を図８〜図１０に示した。
図８は肺胞マクロファージの結果を、図９は好中球の結果を、図１０はリンパ球の結果を示した。
図中の結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの３０及び５０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤の吸入投与（経肺投与）は、有意に抗炎症作用を示していることが判明する。
【００５６】
３．図１１にＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真の結果を示し、図１２に平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した。
各図中に示した結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの３０及び５０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤の吸入（経肺）投与は、エラスターゼ依存の平均肺胞径の延長を抑制し、肺傷害を抑制していることが判明する。
【００５７】
製剤例１：静脈注射剤
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）を５％キシリトール水溶液に溶解した後、凍結乾燥した。得られた凍結乾燥剤に、別にバイアル充填した０．５％カルメロースあるいは注射用水を加えることにより静脈注射用剤を得た。
【００５８】
実施例２：吸入剤
吸入用液剤（１）
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）を５％キシリトール水溶液に溶解し、吸入用液剤を調製する。
【００５９】
吸入用液剤（２）
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）、ポリエチレングリコール１０％（ｗ／ｗ）、プロピレングリコール２０％（ｗ／ｗ）、残部精製水で吸入用液剤を調製する。
【００６０】
吸入用散剤
ＰＣ−ＳＯＤが５％（ｗ／ｗ）、残部シュークロース（微細粉末状）で吸入用散剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
以上記載したように、本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、特異的なＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするものであり、従来のＳＯＤに比較して細胞膜等への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上シュークロースと共に含有させることによりその安定性に優れたものであり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮する。このＳＯＤの効果により、細胞障害を誘導するスーパーオキシドアニオンなどの活性酸素を消去することにより、これらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、ＣＯＰＤの有効な改善を行えるものであり、医療上の価値は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】試験例１における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図２】試験例１における炎症性細胞数として、肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図３】試験例１における炎症性細胞数として、好中球の結果を示した図である。
【図４】試験例１における炎症性細胞数として、リンパ球の結果を示した図である。
【図５】試験例１におけるＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真である。
【図６】試験例１における平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した図である。
【００６３】
【図７】試験例２における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図８】試験例２における炎症性細胞数として、肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図９】試験例２における炎症性細胞数として、好中球の結果を示した図である。
【図１０】試験例２における炎症性細胞数として、リンパ球の結果を示した図である。
【図１１】試験例２におけるＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真である。
【図１２】試験例２における平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は慢性閉塞性肺疾患改善剤に係わり、詳細には、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＰＣ−ＳＯＤと記載する場合もある）を有効成分として含有する慢性閉塞性肺疾患改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＳＯＤと記載する場合もある）は、１９６５年Huberらによって牛の血液から抗炎症蛋白質として抽出され、活性酸素の一つであるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）を特異的に消去することが明らかにされた生理活性蛋白質である。生体内においては、活性酸素は主に好中球、マクロファージ等の食細胞から殺菌のために放出されるが、通常余剰の活性酸素に対してはＳＯＤをはじめとする種々の抗酸化物質が存在し、活性酸素による正常細胞への傷害を防御している。
【０００３】
しかしながら、ＳＯＤ等の抗酸化物質による抗酸化能力を超えて活性酸素が過剰に存在すると、その近くに存在する物質、特に細胞膜が活性酸素により攻撃され、種々の病態が発現してくる。事実、活性酸素はその強力な組織障害性が証明されて以来、炎症、アレルギー、虚血再灌流による組織障害、抗癌剤による肺線維症など多くの病態の発生・増悪因子になることが明らかにされてきた。
【０００４】
このような状況の中、活性酸素を特異的に消去するＳＯＤが見出され、その臨床的応用の可能性について広く検討されている。本発明者らもＳＯＤの臨床的活用性について鋭意検討してきたなかで、ＳＯＤの臨床的効果を高めるためには、腎臓からの排泄を抑えて血中濃度を維持すること、さらに細胞膜への親和性を高めて細胞膜上に存在する過剰の活性酸素を消去することが重要であると考え、種々の修飾型ＳＯＤを検討し、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を提案してきている（特許文献１、特許文献９）。
【０００５】
このＰＣ−ＳＯＤは、遺伝子組み換え技術によりＣｕ／Ｚｎ−ヒトスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を調製した後、化学的にレシチン誘導体（フォスファチジルコリン誘導体：ＰＣ）をＳＯＤ１分子（２量体）あたり平均４分子結合させたレシチン化ＳＯＤである。ＰＣ−ＳＯＤは、細胞膜に対して高い親和性を有し、病変部位において発症因子である虚血・再灌流障害やアントラサイクリン系抗癌剤誘発心筋症等の活性酸素が関与する疾患に対する高い治療効果が認められており、既にこのＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする急性心不全治療剤（特許文献２）、抗ウイルス剤（特許文献３）、ループス腎炎治療剤（特許文献４）、脳血管障害に伴う機能障害改善剤（特許文献５）、抗線維化剤（特許文献６）あるいは抗アレルギー疾患処置剤（特許文献７）、熱傷治療剤（特許文献８）、間質性肺炎治療剤（特許文献１０）等を種々提案してきている。
【０００６】
ところで、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ：Chronic Obstructive Pulmonary Disease）は、様々な原因、特に喫煙により肺に慢性の炎症が生じ、これにより、肺胞の破壊や気管支粘液線の肥大が起き、その結果息切れを生じたり、咳嗽や喀痰が増加したりする疾患である。以前において、肺気腫（ＰＥ：pulmonary emphysema）と呼ばれていた疾患と慢性気管支炎（ＣＢ：chronic bronchitis）と呼ばれていた疾患は、両者が種々の割合で合併することが多く、この二つによる閉塞性肺疾患を会わせて、慢性閉塞性肺疾患（以下、ＣＯＰＤと記す）と呼ぶようになった。
【０００７】
世界保健機構（ＷＨＯ）の試算では、２００５年に世界中で年間３００万人がＣＯＰＤで命を落とし、死亡原因の第４位を占めているが、今後１０年間でさらに３０％増加すると予測している。日本では、厚生労働省の統計によると、２００５年には日本人の全死亡数の１．３％がＣＯＰＤにより死亡しており、死亡原因の１０位であり、男性に限れば７位を占めている。
【０００８】
ＣＯＰＤの最大の原因は喫煙である。ＣＯＰＤ患者の９０％は喫煙者であり（非特許文献１）、非喫煙者に比べて喫煙者ではＣＯＰＤの発症のリスクは６倍以上となる。喫煙者の約１０〜１５％がＣＯＰＤを発症するが、高齢者に限るとその５０％近くがＣＯＰＤである。その他の原因として、室内空気汚染や、大気汚染、化学物質や粉塵の吸入、遺伝によるもの、小児期の肺炎・気管支炎などが挙げられている。
【０００９】
その病態としては、気流制限、すなわち息が吐きづらいことを特徴とする疾患であるが、病態の本質は、気道の慢性炎症である。喫煙や吸入物質により中枢気道から末梢気管支まで肺のさまざまなレベルで炎症が惹起される。その結果、プロテアーゼ・アンチプロテアーゼの不均等や、オキシダント・アンチオキシダントの不均等などにより、肺胞の破壊や、気管支粘液腺の肥大が起きると考えられている。
【００１０】
このＣＯＰＤは、不可逆的な気道の破壊が生じているために、治癒しない疾患である。禁煙や、気管支拡張剤、去痰剤、鎮咳剤などの投与による薬物療法、酸素療法等により症状緩和を行うにすぎず、極めてやっかいな疾患である。
【００１１】
かかる観点から、これまでに種々のＣＯＰＤ改善剤、或いは改善方法が提案されているが（例えば、特許文献１１、１２）、さらに優れたＣＯＰＤ改善剤の登場が期待されているのが現状である。
【特許文献１】特開平９−１１７２７９号公報
【特許文献２】特開平９−５２８４３号公報
【特許文献３】特開平９−５９１７８号公報
【特許文献４】特開平９−１１０７１７号公報
【特許文献５】特開平１０−３３８６４５号公報
【特許文献６】特開２００１−２５８５号公報
【特許文献７】特開２００１−１５１６９５号公報
【特許文献８】特開２００６−１６９１２８号公報
【特許文献９】特開２００１−６４１９９号公報
【特許文献１０】特願２００７−０９９２０１
【特許文献１１】特開２００６−５６８９０号公報
【特許文献１２】特開２００８−１８９６６７号公報
【非特許文献１】Annual Review of Medicine, 40:1989, pp411-429
【００１２】
ＣＯＰＤの発症に肺組織における炎症が関与しているとすれば、その誘発には、スーパーオキサイドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を抑制させ、結果的にＣＯＰＤ症状の改善を行うことができるものと考えられる。
そこで本発明者は、かかる考え方に立脚して、先に提案している細胞親和性の高いレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）についてＣＯＰＤへの適用を検討した結果、このＰＣ−ＳＯＤがＣＯＰＤの症状改善に極めて効果的であることを確認して、本発明を完成させるに至った。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって本発明は、上記の現状に鑑み、ＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする安全で、効果的なＣＯＰＤ改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的態様として、
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１５】
より好ましくは、本発明で使用する式（Ｉ）で示されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼにおいて、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１６】
さらに本発明は、より具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であり、具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１７】
最も具体的には、本発明はスーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【００１８】
さらに本発明は、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼと共にその安定化剤を含有するＣＯＰＤ改善剤であり、安定化剤として糖成分、特にシュークロースを含有させたＣＯＰＤ改善剤である。
【００１９】
より具体的には、本発明は注射剤の形態、或いは吸入剤の形態にあることを特徴とするＣＯＰＤ改善剤である。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、ＣＯＰＤの発症として、中枢気管支から末梢軌道に至る気道に慢性炎症が生じる疾患であり、その誘発には、スーパーオキシドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることでこれらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、ＣＯＰＤの有効な改善治療を行えるものである。
これまで効果的なＣＯＰＤ改善剤が存在しなかった状況下において、特異的なＰＣ−ＳＯＤを投与することにより、その症状の改善を行える点で、その医療上の効果は極めて特異的なものである。
【００２１】
また、本発明に使用するＰＣ−ＳＯＤは、従来のＳＯＤに比較して細胞膜への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上安定化剤として糖成分、特にシュークロースを一緒に含有させることにより、ＰＣ−ＳＯＤ自体の安定性に優れたものとなり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮し、ＣＯＰＤの改善を行い得る点で、特に優れたものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤において使用されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）において、「レシチン」とはフォスファチジルコリンを意味する通常のレシチンをいい、「リゾレシチン」とはレシチンのグリセロールの２位に結合している脂肪酸１分子がとれて、２位の炭素原子に水酸基が結合した化合物をいう。
【００２３】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、通常リゾレシチンの２位の水酸基に化学的架橋剤を結合させたレシチン誘導体を、ＳＯＤに１個以上結合させて得ることができる。このＰＣ−ＳＯＤは、次式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表すことができる。
【００２４】
ここで使用するＳＯＤ’は、生体内の活性酸素（Ｏ２−）の分解というその本来の機能を発揮し得る限りにおいて、その起源は特に限定されるものではなく、各種の動植物または微生物に由来するＳＯＤ残基を広く用いることができる。しかしながら、医薬品としての用途を考慮した場合には生体内での抗原性を可能な限り減らすことが好ましい。したがって、使用するＳＯＤ’としては、本発明のＣＯＰＤ改善剤を投与する対象に応じて適宜適切なＳＯＤ残基を選択することが好ましい。
【００２５】
例えば、現実のＣＯＰＤ患者を対象に投与しようとするものであるから、投与による生体内における抗原性をできるだけ減らすために、ヒト由来のＳＯＤ残基を用いることが好ましい。したがって、本発明のＣＯＰＤ改善剤としては、抗原性を考慮し、ヒト由来のＳＯＤを使用するのがよい。
【００２６】
ヒト由来のＳＯＤとしては、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ（活性中心に銅と亜鉛を含むヒト由来のＳＯＤ；以下、ヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと略記する場合もある）が、細胞内における発現量が多く、また遺伝子工学的手法による生産技術が既に確立しており、大量に調製することが可能であるために、特に好ましく使用される。
【００２７】
このヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤには、ヒト組織または培養細胞から製造される天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；遺伝子工学的手法により製造されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと実質上同一のアミノ酸配列を有する組み換えヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤにおけるアミノ酸配列式中の一部のアミノ酸を欠失、付加、置換、あるいは化学的に修飾若しくは改変したＳＯＤ等があり、いずれのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤであってもよい。
【００２８】
そのなかでも、天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤのアミノ酸配列式における１１１位のアミノ酸（システイン：Ｃｙｓ）がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤが好ましい。かかるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤは、例えば特開平９−１１７２７９号公報にその詳細が記載されており、その方法に従って得ることができる。
したがって、特開平９−１１７２７９号公報に記載されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの調製は、本明細書の一部を構成し、本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤを素材として得ることができる。
【００２９】
本発明で使用する式（Ｉ）で表されるＰＣ−ＳＯＤにおいて、Ｂで示される「グリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基」は、具体的には次式（ＩＩ）：
−Ｏ−ＣＨ(ＣＨ２ＯＲ)[ＣＨ２ＯＰ(Ｏ)(Ｏ−)(ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋(ＣＨ３)３)]
（ＩＩ）
（式中、Ｒは脂肪酸残基（アシル基）である）
で表される。
【００３０】
Ｒで示される脂肪酸残基（アシル基）としては、炭素数１０〜２８の飽和または不飽和脂肪酸残基が好ましく、より好ましくは、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、ドコサノイル基、その他の炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸残基であり、特に好ましくは炭素数１６を有する飽和脂肪酸残基であるパルミトイル基である。
【００３１】
また、一般式（Ｉ）においてＱで示される化学的架橋は、ＳＯＤとレシチンとを架橋して化学的に結合（共有結合）させ得るものであれば特に限定されない。そのような化学的架橋としては、残基：−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）が特に好ましい。この残基は、式：ＨＯ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−ＯＨで表される直鎖状のジカルボン酸、その無水物、エステル、ハロゲン化物等の両端に存在する水酸基（但し、無水物、エステル、ハロゲン化物の場合には、両端に存在する水酸基に該当する部分）を除いた残基である。
【００３２】
一般式（Ｉ）においてＱが上記の直鎖状のジカルボン酸残基である場合には、Ｑはその一端において前記した式（ＩＩ）のリゾレシチン残基の水酸基由来の酸素とエステル結合により結合している。また、エステル結合をしたＱの他端は、ＳＯＤのアミノ基とアミド結合などにより直接結合している。
なお、上記化学的架橋の残基においてｎとしては２以上の整数であり、好ましくは２〜１０の整数である。
【００３３】
また、式（Ｉ）においてｍとしてはＳＯＤ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数を表している。したがって、ｍは１以上の整数であり、１〜１２、特に４であることが好ましい。
【００３４】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤの製造方法、すなわちレシチン誘導体とＳＯＤ、好ましくはヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの結合方法は、例えば、特開平９−１１７２７９号公報に記載の方法により行うことができる。
【００３５】
その好ましいＰＣ−ＳＯＤの化学構造を模式的に示すと、以下のＰＣ−ＳＯＤが特に好ましい。
【００３６】
【化１】
（ｍは、結合したレシチン誘導体数）
【００３７】
すなわち、E. coliを宿主として遺伝子組み換えにより製造したヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの遊離アミノ基に、レシチン誘導体を平均４分子共有結合させたものである。
【００３８】
本発明のＣＯＰＤ改善剤において用いるＰＣ−ＳＯＤは、医薬として使用できる程度に精製され、かつ、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものであることが好ましい。例えば、ＰＣ−ＳＯＤは、２，５００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものを用いるのが好ましく、３，０００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものがより好ましい。
なお、本発明において１Ｕ（ユニット）とは、ｐＨ７．８／３０℃の条件下でＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）を用いてJ. Biol. Chem., vol.244, No.22 6049-6055 (1969) に記載の方法に準じて測定し、ＮＢＴの還元速度を５０％阻害するＰＣ−ＳＯＤの酵素量を表す。
【００３９】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、かくして調製されたＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするＣＯＰＤ改善剤であるが、好ましくはＰＣ−ＳＯＤと共に安定化剤を含有するものがよい。そのような安定化剤としては、例えば糖成分をあげることができる。糖成分としては医薬的に使用される糖成分であれば特に限定されないが、なかでもシュークロースが好ましい。したがって、本発明が提供する最も好ましいＣＯＰＤ改善剤は、ＰＣ−ＳＯＤと共にシュークロースを含有する組成物である。シュークロースとしては医薬品として使用できる程度に精製されたものが好ましく、特に活性炭で処理されたシュークロースを用いるのがよい。かかるシュークロースをＰＣ−ＳＯＤと共に使用することにより、長期間保存によるＰＣ−ＳＯＤの活性低下を防ぐことができ、安定性が高く、凍結乾燥した場合であっても、その性状が特に良好な組成物として調製することができる。
【００４０】
本発明のＣＯＰＤ改善剤におけるＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの配合比率は、投与量、製剤の形態等に応じて適宜決定することができ、特に限定されるものでない。しかしながら、ＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの重量比として、０．１／１００〜８０／１００程度の範囲内にあることが好ましく、０．４／１００〜６０／１００程度がより好ましい。
【００４１】
本発明のＣＯＰＤ改善剤には、ＰＣ−ＳＯＤの活性に影響を与えず、且つ製剤の効果に影響を与えない限り、他の医薬活性成分や、慣用されている製剤成分、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、崩壊剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤等を添加することができる。
【００４２】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤の調製は、ＰＣ−ＳＯＤおよびシュークロースを用いて、製剤学的に公知であり、慣用されている方法により行うことができる。なお、本発明の製剤組成物に使用するＰＣ−ＳＯＤは、溶液状、凍結状、または凍結乾燥状の形態が好ましい。
【００４３】
本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、その一つの態様として、好ましくは注射剤の形態で投与することができる。注射剤としては、溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解型固形製剤等の形態であることが好ましく、これらの製剤は、日本薬局方の製剤総則に記載の方法に準じ調製することができる。
【００４４】
また、本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、また別の態様として、好ましくは吸入剤の形態で投与することができる。
かかる吸入剤とは、気管、気管支、肺等へ到達させるための医薬組成物を意味し、好適には、点鼻剤又は経鼻若しくは経肺投与に適した組成物であり、特に経肺投与に適した組成物である。
【００４５】
吸入剤としては、上記したＰＣ−ＳＯＤを有効成分として用いて、粉末、溶液又は懸濁液の形態として製造することができる。
【００４６】
吸入剤を粉末として製造する場合には、有効成分である上記したＰＣ−ＳＯＤをそのまま、若しくは賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、矯味・矯臭剤などの添加剤を加えて微細化することにより製造することができる。
【００４７】
また、吸入剤を溶液または懸濁剤として製造する場合には、例えば、ＰＣ−ＳＯＤを水または水と補助溶媒、例えば、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールのようなアルコール系の補助溶媒の混合物に溶解又は懸濁させることにより製造することができる。そのような溶液又は懸濁液は、さらに防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、等張化剤、吸収促進剤、増粘剤等を含有することができる。
【００４８】
上記のようにして製造した吸入剤は、吸入剤の分野での一般的な手段、例えば、スポイト、ピペット、カニューレ又はアトマイザーやネブライザーなどの噴霧器を用いて霧状をして鼻腔内又は口腔内に、或いは気管、気管支、肺等へ直接投与される。噴霧器を用いる場合には、適当な噴射剤（例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン若しくはジクロロテトラフルオロエタンのようなクロロフルオロカーボン、または二酸化炭素等のガス等）と共に加圧バッグの形にされたエアゾールとして噴霧するか、ネブライザーを用いて投与することができる。
【００４９】
本発明のＣＯＰＤ改善剤における有効成分であるＰＣ−ＳＯＤの量および製剤の投与量は、製剤調製の方法、剤形、対象疾患の程度、患者の年齢、体重によって異なり、一概に限定できないが、例えば臨床量として成人１人１日当たり０．５〜１００ｍｇ（１５００〜３０万Ｕ）を例示することができる。また投与回数についても一概に限定できないが、１日１回ないし１日数回の投与を行うことも可能である。
【実施例】
【００５０】
以下に本発明を、具体的試験例、実施例を説明することにより、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらの記載に限定されるものではない。
【００５１】
試験例１：ブタ膵臓エラスターゼ誘発ＣＯＰＤモデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの効果（静脈内投与）
［方法］
６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ブタ脾臓エステラーゼを、マウス１匹あたり５０μｇ経気道投与し、肺傷害を作成させた。
各濃度（１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ）のＰＣ−ＳＯＤを一日一回静脈内投与し、３日後に肺胞洗浄液を回収し、全細胞数をカウントした。
また、細胞をディフクイック法により染色し、各炎症性細胞数をカウントした。
更に、マウスを安楽死させ、肺組織の切片を作成し、Ｈ＆Ｅ染色を行い、電子顕微鏡撮影により染色像（×４０）を得た。
そのＨ＆Ｅ染色像より、平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）を測定した。
【００５２】
［結果］
１．肺胞洗浄液中の全細胞数を図１に示した。
図中の結果から判明するように、ブタ脾臓エステラーゼ投与により、全細胞数は上昇し、炎症性細胞の増加が予測された。また、この上昇はＰＣ−ＳＯＤにより減弱したことから、ＰＣ−ＳＯＤが抗炎症作用を発揮することが予測された。
２．各炎症性細胞数を図２〜図４に示した。
図２は肺胞マクロファージの結果を、図３は好中球の結果を、図４はリンパ球の結果を示した。
図中の結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ静脈投与で、炎症性細胞の減少が見られ、有意に抗炎症作用を示していることが判明する。
【００５３】
３．図５にＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真の結果を示し、図６に平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した。
各図中に示した結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの１．５及び３．０ｋＵ／ｋｇ静脈投与は、エラスターゼ依存の平均肺胞径の延長を抑制し、肺傷害を抑制していることが判明する。
【００５４】
試験例２：ブタ膵臓エラスターゼ誘発ＣＯＰＤモデルマウスに対するＰＣ−ＳＯＤの効果（吸入投与）
［方法］
６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ブタ脾臓エステラーゼを、マウスあたり５０μｇ経気道投与し、肺傷害を作成させた。
各濃度（３０及び６０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤を一日一回吸入投与し、３日後に肺胞洗浄液を回収し、全細胞数をカウントした。
また、細胞をディフクイック法により染色し、各炎症性細胞数をカウントした。
更に、マウスを安楽死させ、肺組織の切片を作成し、Ｈ＆Ｅ染色を行い、電子顕微鏡撮影により染色像（×４０）を得た。
そのＨ＆Ｅ染色像より、平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）を測定した。
【００５５】
［結果］
１．肺胞洗浄液中の全細胞数を図７に示した。
図中の結果から判明するように、ブタ脾臓エステラーゼ投与依存によって上昇した全細胞数はＰＣ−ＳＯＤにより減弱したことから、ＰＣ−ＳＯＤが抗炎症作用を発揮したことが予測された。
２．各炎症性細胞数を図８〜図１０に示した。
図８は肺胞マクロファージの結果を、図９は好中球の結果を、図１０はリンパ球の結果を示した。
図中の結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの３０及び５０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤の吸入投与（経肺投与）は、有意に抗炎症作用を示していることが判明する。
【００５６】
３．図１１にＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真の結果を示し、図１２に平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した。
各図中に示した結果からも判明するように、ＰＣ−ＳＯＤの３０及び５０ｋＵ／Chamber）のＰＣ−ＳＯＤを含有する吸入剤の吸入（経肺）投与は、エラスターゼ依存の平均肺胞径の延長を抑制し、肺傷害を抑制していることが判明する。
【００５７】
製剤例１：静脈注射剤
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）を５％キシリトール水溶液に溶解した後、凍結乾燥した。得られた凍結乾燥剤に、別にバイアル充填した０．５％カルメロースあるいは注射用水を加えることにより静脈注射用剤を得た。
【００５８】
実施例２：吸入剤
吸入用液剤（１）
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）を５％キシリトール水溶液に溶解し、吸入用液剤を調製する。
【００５９】
吸入用液剤（２）
ＰＣ−ＳＯＤ１％（ｗ／ｗ）、シュークロース１０％（ｗ／ｗ）、塩化ベンザルコニウム０．０５％（ｗ／ｗ）、ポリエチレングリコール１０％（ｗ／ｗ）、プロピレングリコール２０％（ｗ／ｗ）、残部精製水で吸入用液剤を調製する。
【００６０】
吸入用散剤
ＰＣ−ＳＯＤが５％（ｗ／ｗ）、残部シュークロース（微細粉末状）で吸入用散剤を調製する。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
以上記載したように、本発明が提供するＣＯＰＤ改善剤は、特異的なＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするものであり、従来のＳＯＤに比較して細胞膜等への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上シュークロースと共に含有させることによりその安定性に優れたものであり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮する。このＳＯＤの効果により、細胞障害を誘導するスーパーオキシドアニオンなどの活性酸素を消去することにより、これらの誘導を効果的に抑制させ、その結果、ＣＯＰＤの有効な改善を行えるものであり、医療上の価値は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】試験例１における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図２】試験例１における炎症性細胞数として、肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図３】試験例１における炎症性細胞数として、好中球の結果を示した図である。
【図４】試験例１における炎症性細胞数として、リンパ球の結果を示した図である。
【図５】試験例１におけるＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真である。
【図６】試験例１における平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した図である。
【００６３】
【図７】試験例２における肺胞洗浄液中の全細胞数を示した図である。
【図８】試験例２における炎症性細胞数として、肺胞マクロファージの結果を示した図である。
【図９】試験例２における炎症性細胞数として、好中球の結果を示した図である。
【図１０】試験例２における炎症性細胞数として、リンパ球の結果を示した図である。
【図１１】試験例２におけるＨ＆Ｅ染色した肺組織の電子顕微鏡写真である。
【図１２】試験例２における平均肺胞径（Mean Linear Intercept：μｍ）の結果を示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項３】
ＳＯＤ’が、ヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項４】
ＳＯＤ’が、ヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項５】
スーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする請求項３または４に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項６】
ｎが２〜１０の整数である請求項２ないし５のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項７】
ｍが１〜１２の整数である請求項１ないし６のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項８】
さらに安定化剤を含有することを特徴とする請求項１ないし７のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項９】
安定化剤が、糖であることを特徴とする請求項８に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１０】
糖が、シュークロースであることを特徴とする請求項９に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１１】
シュークロースが、活性炭処理されたシュークロースであることを特徴とする請求項１０に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１２】
注射剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１３】
吸入剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’(Ｑ−Ｂ)ｍ （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項３】
ＳＯＤ’が、ヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項４】
ＳＯＤ’が、ヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項５】
スーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする請求項３または４に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項６】
ｎが２〜１０の整数である請求項２ないし５のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項７】
ｍが１〜１２の整数である請求項１ないし６のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項８】
さらに安定化剤を含有することを特徴とする請求項１ないし７のいずれか１項に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項９】
安定化剤が、糖であることを特徴とする請求項８に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１０】
糖が、シュークロースであることを特徴とする請求項９に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１１】
シュークロースが、活性炭処理されたシュークロースであることを特徴とする請求項１０に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１２】
注射剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【請求項１３】
吸入剤の形態にあることを特徴とする請求項１に記載の慢性閉塞性肺疾患改善剤。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公開番号】特開２０１０−２１５５２７（Ｐ２０１０−２１５５２７Ａ）
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−６１０７５（Ｐ２００９−６１０７５）
【出願日】平成２１年３月１３日（２００９．３．１３）
【出願人】（３０３０１０４５２）株式会社ＬＴＴバイオファーマ (27)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１３日（２００９．３．１３）
【出願人】（３０３０１０４５２）株式会社ＬＴＴバイオファーマ (27)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]