抗腫瘍剤としてのビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体およびその製造方法
【課題】
【解決手段】本発明は、ヒト癌細胞株に対する潜在的抗腫瘍剤として有用な、一般式Ｖ
の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体を提供する。本発明はさらに、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体の製造方法を提供する。
式中、ｎ＝３、４または５である。
【解決手段】本発明は、ヒト癌細胞株に対する潜在的抗腫瘍剤として有用な、一般式Ｖ
の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体を提供する。本発明はさらに、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体の製造方法を提供する。
式中、ｎ＝３、４または５である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体およびその調製方法に関するものである。特に、本発明は、潜在的抗腫瘍剤としての新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッドの調製方法に関するものである。
【０００２】
本発明は特に、抗癌剤となる可能性のあるものとして、様々な長さのリンカーによるアルカンジイルジオキシ架橋により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッドの合成に関するものである。新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッド（Ｖａ−ｃ
）の構造式は下記のとおりである。
【０００３】
【化７】
【０００４】
式中、ｎ＝３、４、５である。
【背景技術】
【０００５】
ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属由来の、ＤＮＡと相互作用する抗腫瘍性抗生物質のファミリーである。天然のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類の例として、アントラマイシン、トメイマイシン、シビロマイシン、およびＤＣ−８１が挙げられる。これらの化合物は、そのＮ１０−Ｃ１１イミン／カルビノールアミン部分を介してＤＮＡマイナーグローブ内のグアニン残基のＣ２−アミン位に共有結合することによりその生物活性を示し、Ｐｕ−Ｇ−Ｐｕ配列への選択を生じる。（Kunimoto,S.; Masuda, T.: Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T and Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665.（非特許文献１）; Kohn, K.W. and Speous, C.L. J. Mol. Biol., 1970, 91, 551..（非特許文献２）; Hurley, L.H.; Gairpla, C. and Zmijewski, M. Biochem. Biophys. Acta., 1977, 475, 521..（非特許文献３）; Kaplan, D. J. and Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572..（非特許文献４））これらの分子は、Ｃ環からＡ環の方向を見た場合、右巻のねじれを有する。これによりＰＢＤはＢ型ＤＮＡの曲線を反映し、マイナーグローブの壁および低部と同一らせん（isohelical）接触を維持することが可能となる。
【０００６】
新しいピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドの開発に対する関心がこの数年高まってきている。多くのＰＢＤ抱合体が合成され、抗癌活性に関する検討がなされている（Thurston, D. E., Morris, S. J., Hartley, J. A., Chem. Commun. 1996, 563.（非特許文献５）; Damayanthi, Y., Reddy, B. S. P., Lown, J. W., J. Org. Chem. 1999, 64, 290.（非特許文献６）; Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddy, G. S. K., Ramesh, G., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1933.（非特許文献７）, Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddyインド特許出願公開第２０９／ＤＥＬ／２０００号明細書（特許文献１））。近年、Ｃ２／Ｃ２エキソ不飽和を有するＣ−８結合したＰＢＤ二量体が設計され合成されている（Gregson, S. J., Howard, P.W., Hartley, J. A., Brooks, N. A., Adam, L. J., Jenkins, T. C., Kelland, L. R., Thurston, D. E., J. Med. Chem. 2001, 44, 737.（非特許文献８））。また、顕著なＤＮＡ結合能と強力な抗腫瘍活性を有する非架橋結合の混合イミン−アミドＰＢＤ二量体も合成されている（Kamal, A., Ramesh, G., Laxman, N., Ramulu, P., Srinivas, O., Neelima, K., Kondapi, A. K., Srinu, V.B., Nagarajaram, H. M., J. Med. Chem. 2002, 45, 4679.（非特許文献９））。
【特許文献１】インド特許出願公開第２０９／ＤＥＬ／２０００号明細書
【非特許文献１】Kunimoto,S.; Masuda, T.: Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T and Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665
【非特許文献２】Kohn, K.W. and Speous, C.L. J. Mol. Biol., 1970, 91, 551.
【非特許文献３】Hurley, L.H.; Gairpla, C. and Zmijewski, M. Biochem. Biophys. Acta., 1977, 475, 521.
【非特許文献４】Kaplan, D. J. and Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572.
【非特許文献５】Thurston, D. E., Morris, S. J., Hartley, J. A., Chem. Commun. 1996, 563.
【非特許文献６】Damayanthi, Y., Reddy, B. S. P., Lown, J. W., J. Org. Chem. 1999, 64, 290.
【非特許文献７】Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddy, G. S. K., Ramesh, G., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1933.
【非特許文献８】Gregson, S. J., Howard, P.W., Hartley, J. A., Brooks, N. A., Adam, L. J., Jenkins, T. C., Kelland, L. R., Thurston, D. E., J. Med. Chem. 2001, 44, 737.
【非特許文献９】Kamal, A., Ramesh, G., Laxman, N., Ramulu, P., Srinivas, O., Neelima, K., Kondapi, A. K., Srinu, V.B., Nagarajaram, H. M., J. Med. Chem. 2002, 45, 4679.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
当研究室における初期の研究中、アントラキノンをそのアミノ官能基を介して有望な抗癌活性を示すＰＢＤ類のＡ環のＣ８位に結合させている（Kamal, A., Ramu, R., Khanna, G. B. R., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 4907, Kamal, A., Ramu, R., Khanna, G. B. R., ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＩＮ０４／００２１２、 米国特許出願公開第１１／０２４，２４０号明細書）。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
しかし、本発明においては、二つのｐｂｄ単位を、様々な長さのリンカーを用いて、アルカンジイルジオキシ架橋によりアントラキノンの１，４−位にそのａ−ｃ８位を介し結合させた。本発明は、抗癌剤として有用な新規のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類を提供する。本発明はまた、抗腫瘍剤として有用な新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類の調製方法も提供する。
【０００９】
【化８】
【００１０】
本発明の主要な目的は、新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体を提供することである。
【００１１】
さらに別の目的は、ヒト癌細胞株に対する抗腫瘍剤として有用な新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体を提供することである。
【００１２】
本発明のさらに別の目的は、新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体の調製方法を提供することである。
【００１３】
したがって、本発明は、一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベン
ゾジアゼピン−アントラキノン抱合体を提供する。
【００１４】
【化９】
【００１５】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の一実施形態において、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は、下記の化合物群によって代表される：１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）；１，４−ビス−｛４−［７
−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オ
キシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【００１７】
さらに別の実施形態においては、代表的な化合物の構造式は下記のとおりである。
【００１８】
【化１０】
【００１９】
さらに別の実施形態において、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンは、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す。
【００２０】
さらに別の実施形態において、ＨｏＰ６２に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、０．
１〜１．４μＭの範囲内である。
【００２１】
さらに別の実施形態において、ＳｉＨａに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、
０．８〜９．０μＭの範囲内である。
【００２２】
さらに別の実施形態において、ＭＣＦ７に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、
０．６〜９．０μＭの範囲内である。
【００２３】
さらに別の実施形態において、Ｃｏｌｏ２０５に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露
期間、１．０〜１０．０μＭの範囲内である。
【００２４】
さらに別の実施形態において、ＰＣ３に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、１
．０〜１．４μＭの範囲内である。
【００２５】
さらに別の実施形態において、ＺＲ−７５−１に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露
期間、０．５〜１．５μＭの範囲内である。
【００２６】
さらに別の実施形態において、Ａ２７８０に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性に使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜１０．０μＭの範
囲内である。
【００２７】
本発明はさらに、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン、抱合体、その誘導体、類似塩類またはそれらの混合物を、任意に薬学的に許容できる担体、補助剤および添加剤とともに含む医薬組成物を提供する。
【００２８】
さらに別の実施形態において、医薬組成物に使用される新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は一般式Ｖを有する。
【００２９】
【化１１】
【００３０】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【００３１】
さらに別の実施態様において、医薬組成物は、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す。
【００３２】
本発明はさらに、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピ
ン−アントラキノン抱合体の製造方法を提供するものであって、前記方法は次の工程を含む。
ａ．式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンを、ジブロモアルカン類と、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３３】
【化１２】
【００３４】
式中、ｎ＝３；（ＩＩａ）または４；（ＩＩｂ）、または５；（ＩＩｃ）である。
ｂ．式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）アントラセン−９，１０−ジオンを、（２Ｓ）−ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと、乾燥有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、所望の生成物である式ＩＩＩａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３５】
【化１３】
【００３６】
式中、ｎ＝３；（ＩＩＩａ）または４；（ＩＩＩｂ）、または５；（ＩＩＩｃ）である。
ｃ．式ＩＩＩの化合物１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化スズで、アルコール溶媒中、還流させながら約４時間還元し、得られた反応混合物を温度２０〜２５℃まで冷却し、過剰アルコールを蒸発により除去し、残渣を無機塩基でｐＨ約８に調整した後、酢酸エチルにより抽出し、一つにまとめた有機相をブライン溶液で洗浄し、溶媒を蒸発させ、所望の化合物である式ＩＶａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３７】
【化１４】
【００３８】
式中、ｎ＝３；（ＩＶａ）または４；（ＩＶｂ）、または５；（ＩＶｃ）である。
ｄ．式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化水銀と、水およびアセトニトリルの混合物中、炭酸カルシウムの存在下、撹拌しながら、約８〜１０時間、２５〜３０℃の範囲の温度で反応させ、それを酢酸エチルで希釈した後、ろ過し、有機性の上清を酢酸エチルで抽出し、得られた有機相を重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、有機層を蒸発させた後、公知の方法で精製し、式Ｖａ−ｃの所望の生成物を得る。
【００３９】
本発明の一実施形態において、工程（ａ）および（ｂ）で使用される弱無機塩基は重炭酸カリウムである。
【００４０】
さらに別の実施形態において、得られた式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１
，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンは、下記の化合物群によって代表される：
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）、１，４−ビス−｛４
−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−
８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【００４１】
さらに別の実施形態において、工程（ａ）で使用されるブロモアルカンは、１，３ジブロモプロパン、１，３ジブロモブタンおよび１，３ジブロモペンタンからなる群から選択される。
【００４２】
さらに別の実施形態において、工程（ａ）で使用される有機溶媒は、アセトンおよびアセトニトリルから選択される。
【００４３】
さらに別の実施形態において、工程（ｂ）で使用される式ＩＩａ−ｃの化合物は、１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン、１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンおよび１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンからなる群から選択される。
【００４４】
さらに別の実施形態において、工程（ｂ）で使用される有機溶媒は、アセトニトリル、アセトンおよびＤＭＦから選択される。
【００４５】
さらに別の実施形態において、工程（ｃ）で使用される式ＩＩＩａ−ｃの化合物は、１，４−ビス−｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩａ）、１，４−ビス−｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｂ）および１，４−ビス−｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｃ）からなる群から選択される。
【００４６】
さらに別の実施形態において、工程（ｃ）で使用されるアルコールは、メタノールおよびエタノールから選択される。
【００４７】
さらに別の実施形態において、工程（ｄ）で使用される式ＩＶａ−ｃの化合物は、１，４−ビス-｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶａ）、１，４−ビス-｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｂ）および１，４−ビス-｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｃ）から選択される。
【００４８】
さらに別の実施形態において、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株からなる群から選択されるヒト癌株に対して抗腫瘍活性を示す。
【００４９】
［発明の詳細な記述］
本発明は、当明細書に付随する図の式Ｖのピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジア
ゼピン類アントラキノン−アントラキノンの調製方法を提供する。
【００５０】
【化１５】
【００５１】
式中、ｎ＝３、４または５である。
【００５２】
本発明は、式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンとジブロモアルカン類との、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度における２４時間の反応と、式ＩＩの１，４−ビス-（ｎ−ブロモアルキルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンの単離と、式ＩＩａ−ｃの化合物と（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールとの、弱無機塩基の存在下の反応による式ＩＩＩの化合物の単離と、有機溶媒の存在下、還流温度での前記化合物のＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏによる還元と、式ＩＶの上記アミノ化合物と公知の脱保護剤とを従来法で反応させ、式Ｖ（式中、「ｎ」
は上記のとおり）の新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得ることとを含む。
【００５３】
前駆体（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールは文献中の方法（Thurston, D. E., Murthy, V. S., Langley, D. R., Jones, G. B., Synthesis, 1990, 81）によって調製した。
【００５４】
本発明の式Ｖの代表的化合物を以下に挙げる。
【００５５】
１］ １，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）
２］ １，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）
３］ １，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）
ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドのこれらの新規同族体は、特定のヒト癌細胞株において有望な抗癌活性を示した。合成されたこれらの分子は、潜在的な配列選択的ＤＮＡ結合性を有し、多大な生物学的意義を有する。これにより、スキームに示す新規同類物の設計および合成に至った。スキームは、下記を含む。
１．ＤＣ−８１中間体のＣ−８位におけるアントラキノン部分とのエーテル結合
２．この反応混合物の２４〜４８時間の還流
３．Ｃ−８結合したＰＢＤハイブリッドの合成
４．酢酸エチル、へキサン、ジクロロメタンおよびメタノールなどの様々な溶媒を用いたカラムクロマトグラフィによる精製。
【００５６】
以下の実施例は、説明を目的として提示するものであり、したがって本発明の範囲を限定するものと解釈してはならない。
【実施例１】
【００５７】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモプロパン（１．２１ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩａを黄色固体として得た（７９１ｍｇ、８２％）。
【００５８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２．４０−２．５２（ｍ、４Ｈ）、３．８５−３．９１（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．５１Ｈｚ）、４．２２−４．２８（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝５．５３Ｈｚ）、７．３４（ｓ、２Ｈ）、７．７１−７．７７（ｍ、２Ｈ）、８．１５−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：４８２（Ｍ+）。
【００５９】
１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩａ）（４８２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８０１ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩａを得た（８０７ｍｇ、７２％）。
【００６０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２４−１．４０（ｍ、１２Ｈ）、１．９２−２．１５（ｍ、８Ｈ）、２．６２−２．８２（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２５（ｍ、４Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０５−４．３２（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７２（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６６Ｈｚ）、６．７５（ｓ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、２Ｈ）、７．６１−７．７４（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１２１（Ｍ+）。
【００６１】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩａ（１．１２１ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶａを黄色油として得（８９５ｍｇ、８２％）、次の工程に直接使用した。
【００６２】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタール３３ａ（１．１９ｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖａを黄色固体として得た（４９３ｍｇ、５１％）。
【００６３】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９６−２．０５（ｍ、４Ｈ）、２．２０−２．５０（ｍ、８Ｈ）、３．５５−３．８５（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．２０−４．３２（ｍ、４Ｈ）、４．４２−４．５２（ｍ、４Ｈ）、６．８５（ｓ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、２Ｈ）、７．４０（ｓ、２Ｈ）、７．５２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．３９Ｈｚ）、７．６５−７．７１（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１５（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：９６８（Ｍ+＋１）
【実施例２】
【００６４】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモブタン（１．２９ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩｂを黄色固体として得た（８２６ｍｇ、８１％）。
【００６５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）１．２５−１．４０（ｍ、６Ｈ）、１．７２−２．４２（ｍ、６Ｈ）、２．７０−２．８（ｍ、４Ｈ）、３．１５−３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．６０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．２０Ｈｚ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝４．９６Ｈｚ）、４．６０−４．７５（ｍ、１Ｈ）、４．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．３３Ｈｚ）、６．７８（ｓ、１Ｈ）、７．６８（ｓ、１Ｈ）。
【００６６】
１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩｂ）（５１０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８１０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩｂを得た（８０５ｍｇ、７０％）。
【００６７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２５−１．４０（ｍ、１２Ｈ）、２．０−２．３２（ｍ、１６Ｈ）、２．６２−２．８０（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２５（ｍ、４Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０８−４．４０（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６２Ｈｚ）、６．７７（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．６２−７．７８（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１５０［Ｍ+＋１］+。
【００６８】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩｂ（１．１５ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶｂを黄色油として得（８９５ｍｇ、８０％）、次の工程に直接使用した。
【００６９】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタールＩＶｂ（１．１２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖｂを黄色固体として得た（５１７ｍｇ、５２％）。
【００７０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９６−２．３５（ｍ、１６Ｈ）、３．５０−３．８４（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．１２−４．３８（ｍ、８Ｈ）、６．８２（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．４２（ｓ、２Ｈ）、７．５６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．３９Ｈｚ）、７．６２−７．７２（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：９９６［Ｍ+＋１］+
【実施例３】
【００７１】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモペンタン（１．３８ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩｃを黄色固体として得た（９０４ｍｇ、８４％）。
【００７２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．７５−２．０７（ｍ、１２Ｈ）、３．４９（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．５９Ｈｚ）、４．０８（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．１３Ｈｚ）、７．２５（ｓ、２Ｈ）、７．６９−７．７５（ｍ、２Ｈ）、８．１３−８．２０（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：５３８［Ｍ］+。
【００７３】
１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩｃ）（５３８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８０１ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩｃを得た（８２４ｍｇ、７０％）。
【００７４】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２３−１．４２（ｍ、１２Ｈ）、１．８３−２．１８（ｍ、２０Ｈ）、２．６５−２．８５（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２８（ｍ、４Ｈ）、３．９３（ｓ、６Ｈ）、４．０５−４．２０（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．８３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６６Ｈｚ）、６．７７（ｓ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、２Ｈ）、７．６０−７．７３（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１７８［Ｍ＋１］+。
【００７５】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩｃ（１．１８ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶｃを黄色油として得（９６３ｍｇ、８４％）、次の工程に直接使用した。
【００７６】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタールＩＶｃ（１．１５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖｃを黄色固体として得た（５２２ｍｇ、５１％）。
【００７７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９５−２．３２（ｍ、２０Ｈ）、３．５３−３．８２（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０７−４．１３（ｍ、８Ｈ）、６．７６（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．４４（ｓ、２Ｈ）、７．５８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．４０Ｈｚ）、７．６５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１６（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１０２４［Ｍ+＋１］+。
【００７８】
生物活性
ヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性
細胞毒性：特定のヒト癌細胞株における一次抗癌活性について化合物Ｖａ−ｃを評価し
た。いくつかの代表的化合物の細胞毒性データを表１に示す。各化合物について、各細胞株に対する用量反応曲線を、１０倍希釈列の少なくとも５種類の濃度で求めた。薬物に対して４８時間連続暴露する方式を用い、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）タンパク質分析法を用いて細胞生存率または増殖能を推定した。対照と比較して５０％細胞増殖阻害をもたらす濃度を計算した。
【００７９】
【表１】
【００８０】
表１のデータの比較により、アルカンスペーサーの重要性がわかる。化合物Ｖａの３
炭素スペーサーは、二重らせんＤＮＡマイナーグローブへの適度な適合を可能にし、この一連の化合物の中ではやや高い活性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】図１は、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドのこれらの新規同族体の設計および合成を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体およびその調製方法に関するものである。特に、本発明は、潜在的抗腫瘍剤としての新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッドの調製方法に関するものである。
【０００２】
本発明は特に、抗癌剤となる可能性のあるものとして、様々な長さのリンカーによるアルカンジイルジオキシ架橋により結合したピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッドの合成に関するものである。新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンハイブリッド（Ｖａ−ｃ
）の構造式は下記のとおりである。
【０００３】
【化７】
【０００４】
式中、ｎ＝３、４、５である。
【背景技術】
【０００５】
ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属由来の、ＤＮＡと相互作用する抗腫瘍性抗生物質のファミリーである。天然のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類の例として、アントラマイシン、トメイマイシン、シビロマイシン、およびＤＣ−８１が挙げられる。これらの化合物は、そのＮ１０−Ｃ１１イミン／カルビノールアミン部分を介してＤＮＡマイナーグローブ内のグアニン残基のＣ２−アミン位に共有結合することによりその生物活性を示し、Ｐｕ−Ｇ−Ｐｕ配列への選択を生じる。（Kunimoto,S.; Masuda, T.: Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T and Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665.（非特許文献１）; Kohn, K.W. and Speous, C.L. J. Mol. Biol., 1970, 91, 551..（非特許文献２）; Hurley, L.H.; Gairpla, C. and Zmijewski, M. Biochem. Biophys. Acta., 1977, 475, 521..（非特許文献３）; Kaplan, D. J. and Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572..（非特許文献４））これらの分子は、Ｃ環からＡ環の方向を見た場合、右巻のねじれを有する。これによりＰＢＤはＢ型ＤＮＡの曲線を反映し、マイナーグローブの壁および低部と同一らせん（isohelical）接触を維持することが可能となる。
【０００６】
新しいピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドの開発に対する関心がこの数年高まってきている。多くのＰＢＤ抱合体が合成され、抗癌活性に関する検討がなされている（Thurston, D. E., Morris, S. J., Hartley, J. A., Chem. Commun. 1996, 563.（非特許文献５）; Damayanthi, Y., Reddy, B. S. P., Lown, J. W., J. Org. Chem. 1999, 64, 290.（非特許文献６）; Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddy, G. S. K., Ramesh, G., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1933.（非特許文献７）, Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddyインド特許出願公開第２０９／ＤＥＬ／２０００号明細書（特許文献１））。近年、Ｃ２／Ｃ２エキソ不飽和を有するＣ−８結合したＰＢＤ二量体が設計され合成されている（Gregson, S. J., Howard, P.W., Hartley, J. A., Brooks, N. A., Adam, L. J., Jenkins, T. C., Kelland, L. R., Thurston, D. E., J. Med. Chem. 2001, 44, 737.（非特許文献８））。また、顕著なＤＮＡ結合能と強力な抗腫瘍活性を有する非架橋結合の混合イミン−アミドＰＢＤ二量体も合成されている（Kamal, A., Ramesh, G., Laxman, N., Ramulu, P., Srinivas, O., Neelima, K., Kondapi, A. K., Srinu, V.B., Nagarajaram, H. M., J. Med. Chem. 2002, 45, 4679.（非特許文献９））。
【特許文献１】インド特許出願公開第２０９／ＤＥＬ／２０００号明細書
【非特許文献１】Kunimoto,S.; Masuda, T.: Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T and Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665
【非特許文献２】Kohn, K.W. and Speous, C.L. J. Mol. Biol., 1970, 91, 551.
【非特許文献３】Hurley, L.H.; Gairpla, C. and Zmijewski, M. Biochem. Biophys. Acta., 1977, 475, 521.
【非特許文献４】Kaplan, D. J. and Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572.
【非特許文献５】Thurston, D. E., Morris, S. J., Hartley, J. A., Chem. Commun. 1996, 563.
【非特許文献６】Damayanthi, Y., Reddy, B. S. P., Lown, J. W., J. Org. Chem. 1999, 64, 290.
【非特許文献７】Kamal, A., Reddy, B. S. N., Reddy, G. S. K., Ramesh, G., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002, 12, 1933.
【非特許文献８】Gregson, S. J., Howard, P.W., Hartley, J. A., Brooks, N. A., Adam, L. J., Jenkins, T. C., Kelland, L. R., Thurston, D. E., J. Med. Chem. 2001, 44, 737.
【非特許文献９】Kamal, A., Ramesh, G., Laxman, N., Ramulu, P., Srinivas, O., Neelima, K., Kondapi, A. K., Srinu, V.B., Nagarajaram, H. M., J. Med. Chem. 2002, 45, 4679.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
当研究室における初期の研究中、アントラキノンをそのアミノ官能基を介して有望な抗癌活性を示すＰＢＤ類のＡ環のＣ８位に結合させている（Kamal, A., Ramu, R., Khanna, G. B. R., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 4907, Kamal, A., Ramu, R., Khanna, G. B. R., ＰＣＴ特許出願ＰＣＴ／ＩＮ０４／００２１２、 米国特許出願公開第１１／０２４，２４０号明細書）。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
しかし、本発明においては、二つのｐｂｄ単位を、様々な長さのリンカーを用いて、アルカンジイルジオキシ架橋によりアントラキノンの１，４−位にそのａ−ｃ８位を介し結合させた。本発明は、抗癌剤として有用な新規のピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類を提供する。本発明はまた、抗腫瘍剤として有用な新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類の調製方法も提供する。
【０００９】
【化８】
【００１０】
本発明の主要な目的は、新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体を提供することである。
【００１１】
さらに別の目的は、ヒト癌細胞株に対する抗腫瘍剤として有用な新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体を提供することである。
【００１２】
本発明のさらに別の目的は、新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン類アントラキノン抱合体の調製方法を提供することである。
【００１３】
したがって、本発明は、一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベン
ゾジアゼピン−アントラキノン抱合体を提供する。
【００１４】
【化９】
【００１５】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の一実施形態において、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は、下記の化合物群によって代表される：１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）；１，４−ビス−｛４−［７
−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オ
キシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【００１７】
さらに別の実施形態においては、代表的な化合物の構造式は下記のとおりである。
【００１８】
【化１０】
【００１９】
さらに別の実施形態において、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンは、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す。
【００２０】
さらに別の実施形態において、ＨｏＰ６２に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、０．
１〜１．４μＭの範囲内である。
【００２１】
さらに別の実施形態において、ＳｉＨａに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、
０．８〜９．０μＭの範囲内である。
【００２２】
さらに別の実施形態において、ＭＣＦ７に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、
０．６〜９．０μＭの範囲内である。
【００２３】
さらに別の実施形態において、Ｃｏｌｏ２０５に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露
期間、１．０〜１０．０μＭの範囲内である。
【００２４】
さらに別の実施形態において、ＰＣ３に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、１
．０〜１．４μＭの範囲内である。
【００２５】
さらに別の実施形態において、ＺＲ−７５−１に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露
期間、０．５〜１．５μＭの範囲内である。
【００２６】
さらに別の実施形態において、Ａ２７８０に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性に使用する化合物ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン（Ｖａ−ｃ）の濃度は、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜１０．０μＭの範
囲内である。
【００２７】
本発明はさらに、新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン、抱合体、その誘導体、類似塩類またはそれらの混合物を、任意に薬学的に許容できる担体、補助剤および添加剤とともに含む医薬組成物を提供する。
【００２８】
さらに別の実施形態において、医薬組成物に使用される新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は一般式Ｖを有する。
【００２９】
【化１１】
【００３０】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【００３１】
さらに別の実施態様において、医薬組成物は、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す。
【００３２】
本発明はさらに、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピ
ン−アントラキノン抱合体の製造方法を提供するものであって、前記方法は次の工程を含む。
ａ．式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンを、ジブロモアルカン類と、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３３】
【化１２】
【００３４】
式中、ｎ＝３；（ＩＩａ）または４；（ＩＩｂ）、または５；（ＩＩｃ）である。
ｂ．式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）アントラセン−９，１０−ジオンを、（２Ｓ）−ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと、乾燥有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、所望の生成物である式ＩＩＩａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３５】
【化１３】
【００３６】
式中、ｎ＝３；（ＩＩＩａ）または４；（ＩＩＩｂ）、または５；（ＩＩＩｃ）である。
ｃ．式ＩＩＩの化合物１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化スズで、アルコール溶媒中、還流させながら約４時間還元し、得られた反応混合物を温度２０〜２５℃まで冷却し、過剰アルコールを蒸発により除去し、残渣を無機塩基でｐＨ約８に調整した後、酢酸エチルにより抽出し、一つにまとめた有機相をブライン溶液で洗浄し、溶媒を蒸発させ、所望の化合物である式ＩＶａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【００３７】
【化１４】
【００３８】
式中、ｎ＝３；（ＩＶａ）または４；（ＩＶｂ）、または５；（ＩＶｃ）である。
ｄ．式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化水銀と、水およびアセトニトリルの混合物中、炭酸カルシウムの存在下、撹拌しながら、約８〜１０時間、２５〜３０℃の範囲の温度で反応させ、それを酢酸エチルで希釈した後、ろ過し、有機性の上清を酢酸エチルで抽出し、得られた有機相を重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、有機層を蒸発させた後、公知の方法で精製し、式Ｖａ−ｃの所望の生成物を得る。
【００３９】
本発明の一実施形態において、工程（ａ）および（ｂ）で使用される弱無機塩基は重炭酸カリウムである。
【００４０】
さらに別の実施形態において、得られた式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１
，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノンは、下記の化合物群によって代表される：
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）、１，４−ビス−｛４
−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−
８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【００４１】
さらに別の実施形態において、工程（ａ）で使用されるブロモアルカンは、１，３ジブロモプロパン、１，３ジブロモブタンおよび１，３ジブロモペンタンからなる群から選択される。
【００４２】
さらに別の実施形態において、工程（ａ）で使用される有機溶媒は、アセトンおよびアセトニトリルから選択される。
【００４３】
さらに別の実施形態において、工程（ｂ）で使用される式ＩＩａ−ｃの化合物は、１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン、１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンおよび１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンからなる群から選択される。
【００４４】
さらに別の実施形態において、工程（ｂ）で使用される有機溶媒は、アセトニトリル、アセトンおよびＤＭＦから選択される。
【００４５】
さらに別の実施形態において、工程（ｃ）で使用される式ＩＩＩａ−ｃの化合物は、１，４−ビス−｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩａ）、１，４−ビス−｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｂ）および１，４−ビス−｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｃ）からなる群から選択される。
【００４６】
さらに別の実施形態において、工程（ｃ）で使用されるアルコールは、メタノールおよびエタノールから選択される。
【００４７】
さらに別の実施形態において、工程（ｄ）で使用される式ＩＶａ−ｃの化合物は、１，４−ビス-｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶａ）、１，４−ビス-｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｂ）および１，４−ビス-｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｃ）から選択される。
【００４８】
さらに別の実施形態において、式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベ
ンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体は、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株からなる群から選択されるヒト癌株に対して抗腫瘍活性を示す。
【００４９】
［発明の詳細な記述］
本発明は、当明細書に付随する図の式Ｖのピロロ［２，１ｃ］［１，４］ベンゾジア
ゼピン類アントラキノン−アントラキノンの調製方法を提供する。
【００５０】
【化１５】
【００５１】
式中、ｎ＝３、４または５である。
【００５２】
本発明は、式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンとジブロモアルカン類との、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度における２４時間の反応と、式ＩＩの１，４−ビス-（ｎ−ブロモアルキルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンの単離と、式ＩＩａ−ｃの化合物と（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールとの、弱無機塩基の存在下の反応による式ＩＩＩの化合物の単離と、有機溶媒の存在下、還流温度での前記化合物のＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏによる還元と、式ＩＶの上記アミノ化合物と公知の脱保護剤とを従来法で反応させ、式Ｖ（式中、「ｎ」
は上記のとおり）の新規ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを得ることとを含む。
【００５３】
前駆体（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールは文献中の方法（Thurston, D. E., Murthy, V. S., Langley, D. R., Jones, G. B., Synthesis, 1990, 81）によって調製した。
【００５４】
本発明の式Ｖの代表的化合物を以下に挙げる。
【００５５】
１］ １，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）
２］ １，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）
３］ １，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａＳ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）
ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドのこれらの新規同族体は、特定のヒト癌細胞株において有望な抗癌活性を示した。合成されたこれらの分子は、潜在的な配列選択的ＤＮＡ結合性を有し、多大な生物学的意義を有する。これにより、スキームに示す新規同類物の設計および合成に至った。スキームは、下記を含む。
１．ＤＣ−８１中間体のＣ−８位におけるアントラキノン部分とのエーテル結合
２．この反応混合物の２４〜４８時間の還流
３．Ｃ−８結合したＰＢＤハイブリッドの合成
４．酢酸エチル、へキサン、ジクロロメタンおよびメタノールなどの様々な溶媒を用いたカラムクロマトグラフィによる精製。
【００５６】
以下の実施例は、説明を目的として提示するものであり、したがって本発明の範囲を限定するものと解釈してはならない。
【実施例１】
【００５７】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモプロパン（１．２１ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩａを黄色固体として得た（７９１ｍｇ、８２％）。
【００５８】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２．４０−２．５２（ｍ、４Ｈ）、３．８５−３．９１（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．５１Ｈｚ）、４．２２−４．２８（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝５．５３Ｈｚ）、７．３４（ｓ、２Ｈ）、７．７１−７．７７（ｍ、２Ｈ）、８．１５−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：４８２（Ｍ+）。
【００５９】
１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩａ）（４８２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８０１ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩａを得た（８０７ｍｇ、７２％）。
【００６０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２４−１．４０（ｍ、１２Ｈ）、１．９２−２．１５（ｍ、８Ｈ）、２．６２−２．８２（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２５（ｍ、４Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０５−４．３２（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７２（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６６Ｈｚ）、６．７５（ｓ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、２Ｈ）、７．６１−７．７４（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１２１（Ｍ+）。
【００６１】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩａ（１．１２１ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶａを黄色油として得（８９５ｍｇ、８２％）、次の工程に直接使用した。
【００６２】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタール３３ａ（１．１９ｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖａを黄色固体として得た（４９３ｍｇ、５１％）。
【００６３】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９６−２．０５（ｍ、４Ｈ）、２．２０−２．５０（ｍ、８Ｈ）、３．５５−３．８５（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．２０−４．３２（ｍ、４Ｈ）、４．４２−４．５２（ｍ、４Ｈ）、６．８５（ｓ、２Ｈ）、７．２２（ｓ、２Ｈ）、７．４０（ｓ、２Ｈ）、７．５２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．３９Ｈｚ）、７．６５−７．７１（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１５（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：９６８（Ｍ+＋１）
【実施例２】
【００６４】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモブタン（１．２９ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩｂを黄色固体として得た（８２６ｍｇ、８１％）。
【００６５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3、２００ＭＨｚ）１．２５−１．４０（ｍ、６Ｈ）、１．７２−２．４２（ｍ、６Ｈ）、２．７０−２．８（ｍ、４Ｈ）、３．１５−３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．６０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．２０Ｈｚ）、３．９５（ｓ、３Ｈ）、４．２０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝４．９６Ｈｚ）、４．６０−４．７５（ｍ、１Ｈ）、４．８２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝４．３３Ｈｚ）、６．７８（ｓ、１Ｈ）、７．６８（ｓ、１Ｈ）。
【００６６】
１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩｂ）（５１０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８１０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩｂを得た（８０５ｍｇ、７０％）。
【００６７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２５−１．４０（ｍ、１２Ｈ）、２．０−２．３２（ｍ、１６Ｈ）、２．６２−２．８０（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２５（ｍ、４Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０８−４．４０（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６２Ｈｚ）、６．７７（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．６２−７．７８（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１５０［Ｍ+＋１］+。
【００６８】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩｂ（１．１５ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶｂを黄色油として得（８９５ｍｇ、８０％）、次の工程に直接使用した。
【００６９】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタールＩＶｂ（１．１２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖｂを黄色固体として得た（５１７ｍｇ、５２％）。
【００７０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９６−２．３５（ｍ、１６Ｈ）、３．５０−３．８４（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．１２−４．３８（ｍ、８Ｈ）、６．８２（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．４２（ｓ、２Ｈ）、７．５６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．３９Ｈｚ）、７．６２−７．７２（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：９９６［Ｍ+＋１］+
【実施例３】
【００７１】
１，４−ジヒドロキシアントラキノン（４８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（３０ｍＬ）に、無水炭酸カリウム（１．１ｇ、８ｍｍｏｌ）および１，３ジブロモペンタン（１．３８ｇ、６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を２４時間還流した。反応の進行はＴＬＣによりモニターした。反応終了後、炭酸カリウムをろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物を得た。これをさらにカラムクロマトグラフィ（３０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩｃを黄色固体として得た（９０４ｍｇ、８４％）。
【００７２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．７５−２．０７（ｍ、１２Ｈ）、３．４９（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．５９Ｈｚ）、４．０８（ｔ、４Ｈ、Ｊ＝６．１３Ｈｚ）、７．２５（ｓ、２Ｈ）、７．６９−７．７５（ｍ、２Ｈ）、８．１３−８．２０（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：５３８［Ｍ］+。
【００７３】
１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩｃ）（５３８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の乾燥アセトニトリル溶液（３０ｍＬ）に、無水Ｋ2ＣＯ3（８２９ｍｇ、６ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール（８０１ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２４時間還流した。反応終了後、Ｋ2ＣＯ3をろ過によって除去し、溶媒を減圧下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（８０％ＥｔＯＡｃ−へキサン）で精製し、化合物ＩＩＩｃを得た（８２４ｍｇ、７０％）。
【００７４】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２３−１．４２（ｍ、１２Ｈ）、１．８３−２．１８（ｍ、２０Ｈ）、２．６５−２．８５（ｍ、８Ｈ）、３．１２−３．２８（ｍ、４Ｈ）、３．９３（ｓ、６Ｈ）、４．０５−４．２０（ｍ、８Ｈ）、４．６０−４．７１（ｍ、２Ｈ）、４．８３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝３．６６Ｈｚ）、６．７７（ｓ、２Ｈ）、７．２４（ｓ、２Ｈ）、７．６０−７．７３（ｍ、４Ｈ）、８．０２−８．１８（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１１７８［Ｍ＋１］+。
【００７５】
メタノール（４０ｍＬ）に溶解した化合物ＩＩＩｃ（１．１８ｇ、１ｍｍｏｌ）にＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（２．２５６ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、４時間還流した。反応混合物を冷却し、メタノールを真空下蒸発させた。残渣を飽和ＮａＨＣＯ3溶液で慎重にｐＨ８に調整した後、酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。一つにまとめた有機相をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、真空下蒸発させて、アミノジエチルチオアセタールＩＶｃを黄色油として得（９６３ｍｇ、８４％）、次の工程に直接使用した。
【００７６】
アセトニトリル−水（４：１）中アミノチオアセタールＩＶｃ（１．１５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、ＨｇＣｌ2（１．１９ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）およびＣａＣＯ3（４８０ｍｇ、４．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＬＣが出発材料の完全な消失を示すまで、室温で一晩ゆっくりと撹拌した。その反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈し、セライトを通してろ過した。透明な黄色有機性上清を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ3（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、一つにまとめた有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させた。有機層を真空下蒸発させ、粗生成物をカラムクロマトグラフィ（１５％ＭｅＯＨ−ＥｔＯＡｃ）によって精製し、化合物Ｖｃを黄色固体として得た（５２２ｍｇ、５１％）。
【００７７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．９５−２．３２（ｍ、２０Ｈ）、３．５３−３．８２（ｍ、６Ｈ）、３．９２（ｓ、６Ｈ）、４．０７−４．１３（ｍ、８Ｈ）、６．７６（ｓ、２Ｈ）、７．２３（ｓ、２Ｈ）、７．４４（ｓ、２Ｈ）、７．５８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝４．４０Ｈｚ）、７．６５−７．６９（ｍ、２Ｈ）、８．０２−８．１６（ｍ、２Ｈ）
ＦＡＢＭＳ：１０２４［Ｍ+＋１］+。
【００７８】
生物活性
ヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性
細胞毒性：特定のヒト癌細胞株における一次抗癌活性について化合物Ｖａ−ｃを評価し
た。いくつかの代表的化合物の細胞毒性データを表１に示す。各化合物について、各細胞株に対する用量反応曲線を、１０倍希釈列の少なくとも５種類の濃度で求めた。薬物に対して４８時間連続暴露する方式を用い、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）タンパク質分析法を用いて細胞生存率または増殖能を推定した。対照と比較して５０％細胞増殖阻害をもたらす濃度を計算した。
【００７９】
【表１】
【００８０】
表１のデータの比較により、アルカンスペーサーの重要性がわかる。化合物Ｖａの３
炭素スペーサーは、二重らせんＤＮＡマイナーグローブへの適度な適合を可能にし、この一連の化合物の中ではやや高い活性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】図１は、ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンハイブリッドのこれらの新規同族体の設計および合成を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラ
キノン抱合体。
【化１】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【請求項２】
下記の化合物群によって代表される、請求項１に記載の一般式Ｖの新規ビス−ピロロ
［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体：
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖａ）；
１，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖｂ）および
１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖｃ）。
【請求項３】
前記代表的な化合物の構造式が下記のとおりである、請求項２に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体。
【化２】
【請求項４】
肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す、請求項に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項５】
ＨｏＰ６２に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．１〜１．４μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項６】
ＳｉＨａに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．８〜９．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項７】
ＭＣＦ７に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜９．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項８】
Ｃｏｌｏ２０５に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、１．０〜１０．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項９】
ＰＣ３に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、１．０〜１．４μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１０】
ＺＲ−７５−１に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．５〜１．５μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１１】
Ａ２７８０に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性に使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜１０．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１２】
新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン、抱合体、その誘導体、類似塩類またはそれらの混合物を、任意に薬学的に許容できる担体、補助剤および添加剤とともに含む医薬組成物。
【請求項１３】
使用される前記新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体が、一般式Ｖで表わされる、請求項１２に記載の医薬組成物。
【化３】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【請求項１４】
肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノ
ン抱合体の製造方法であって、下記の工程を含む製造方法。
ａ．式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンを、ジブロモアルカン類と、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化４】
式中、ｎ＝３；（ＩＩａ）または４；（ＩＩｂ）、または５；（ＩＩｃ）である。
ｂ．式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）アントラセン−９，１０−ジオンを、（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと、乾燥有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、所望の生成物である式ＩＩＩａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化５】
式中、ｎ＝３；（ＩＩＩａ）または４；（ＩＩＩｂ）、または５；（ＩＩＩｃ）である。
ｃ．式ＩＩＩの化合物１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化スズを用いて、アルコール溶媒中、還流させながら約４時間還元し、得られた反応混合物を温度２０〜２５℃まで冷却し、過剰アルコールを蒸発により除去し、残渣を無機塩基でｐＨ約８に調整した後、酢酸エチルにより抽出し、一つにまとめた有機相をブライン溶液で洗浄し、溶媒を蒸発させ、所望の化合物である式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化６】
式中、ｎ＝３；（ＩＶａ）または４；（ＩＶｂ）、または５；（ＩＶｃ）である。
ｄ．式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタールアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化水銀と、水およびアセトニトリルの混合物中、炭酸カルシウムの存在下、撹拌しながら、約８〜１０時間、２５〜３０℃の範囲の温度で反応させ、それを酢酸エチルで希釈した後、ろ過し、有機性の上清を酢酸エチルで抽出し、得られた有機相を重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、有機層を蒸発させた後、公知の方法で精製し、式Ｖａ−ｃの所望の生成物を得る。
【請求項１６】
工程（ａ）および（ｂ）で使用される前記弱無機塩基が重炭酸カリウムである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
得られた一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−
アントラキノン抱合体が、下記の化合物群によって代表される、請求項１５に記載の方法。
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）；
１，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および
１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【請求項１８】
工程（ａ）で使用される前記ブロモアルカンが、１，３ジブロモプロパン、１，３ジブロモブタンおよび１，３ジブロモペンタンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ａ）で使用される前記非プロトン有機溶媒が、アセトンおよびアセトニトリルから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
工程（ｂ）で使用される式ＩＩａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン、１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンおよび１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
工程（ｂ）で使用される前記有機溶媒が、アセトニトリル、アセトンおよびＤＭＦから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ｃ）で使用される式ＩＩＩａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス−｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］−プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩａ）、１，４−ビス−｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｂ）および１，４−ビス−｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｃ）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
工程（ｃ）で使用される前記アルコールが、メタノールおよびエタノールから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
工程（ｄ）で使用される式ＩＶａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス-｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶａ）、１，４−ビス-｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｂ）および１，４−ビス-｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）−ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｃ）から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
式Ｖの前記新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラ
キノン抱合体が、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株からなる群から選択されるヒト癌株に対して抗腫瘍活性を示す、請求項１５に記載の方法。
【請求項１】
一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラ
キノン抱合体。
【化１】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【請求項２】
下記の化合物群によって代表される、請求項１に記載の一般式Ｖの新規ビス−ピロロ
［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体：
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖａ）；
１，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖｂ）および
１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ｖｃ）。
【請求項３】
前記代表的な化合物の構造式が下記のとおりである、請求項２に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体。
【化２】
【請求項４】
肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す、請求項に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項５】
ＨｏＰ６２に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．１〜１．４μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項６】
ＳｉＨａに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．８〜９．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項７】
ＭＣＦ７に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜９．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項８】
Ｃｏｌｏ２０５に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、１．０〜１０．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項９】
ＰＣ３に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、１．０〜１．４μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１０】
ＺＲ−７５−１に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性についてＩＣ５０にするために使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．５〜１．５μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１１】
Ａ２７８０に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗腫瘍活性に使用する前記化合物の濃度が、少なくとも４８時間の暴露期間、０．６〜１０．０μＭの範囲内である、請求項４に記載の新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン。
【請求項１２】
新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン、抱合体、その誘導体、類似塩類またはそれらの混合物を、任意に薬学的に許容できる担体、補助剤および添加剤とともに含む医薬組成物。
【請求項１３】
使用される前記新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノン抱合体が、一般式Ｖで表わされる、請求項１２に記載の医薬組成物。
【化３】
式中、ｎ＝３；（ｖａ）または４；（ｖｂ）、または５；（ｖｃ）である。
【請求項１４】
肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株から選択されるヒト癌細胞株に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ抗癌・抗腫瘍活性を示す、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラキノ
ン抱合体の製造方法であって、下記の工程を含む製造方法。
ａ．式Ｉの１，４−ジヒドロキシアントラキノンを、ジブロモアルカン類と、非プロトン水混和性有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化４】
式中、ｎ＝３；（ＩＩａ）または４；（ＩＩｂ）、または５；（ＩＩｃ）である。
ｂ．式ＩＩａ−ｃの１，４−ビス-（３−ブロモアルコキシ）アントラセン−９，１０−ジオンを、（２Ｓ）−Ｎ−［４−ヒドロキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル］ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと、乾燥有機溶媒中、弱無機塩基の存在下、還流温度で約２４時間反応させた後、ろ過により無機塩基を除去し、減圧下蒸発により有機溶媒を除去し、所望の生成物である式ＩＩＩａ−ｃの１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化５】
式中、ｎ＝３；（ＩＩＩａ）または４；（ＩＩＩｂ）、または５；（ＩＩＩｃ）である。
ｃ．式ＩＩＩの化合物１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化スズを用いて、アルコール溶媒中、還流させながら約４時間還元し、得られた反応混合物を温度２０〜２５℃まで冷却し、過剰アルコールを蒸発により除去し、残渣を無機塩基でｐＨ約８に調整した後、酢酸エチルにより抽出し、一つにまとめた有機相をブライン溶液で洗浄し、溶媒を蒸発させ、所望の化合物である式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオンを得る。
【化６】
式中、ｎ＝３；（ＩＶａ）または４；（ＩＶｂ）、または５；（ＩＶｃ）である。
ｄ．式ＩＶａ−ｃのアミノチオアセタールアミノチオアセタール１，４−ビス-｛ｎ−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］アルキルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオンを、塩化水銀と、水およびアセトニトリルの混合物中、炭酸カルシウムの存在下、撹拌しながら、約８〜１０時間、２５〜３０℃の範囲の温度で反応させ、それを酢酸エチルで希釈した後、ろ過し、有機性の上清を酢酸エチルで抽出し、得られた有機相を重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、有機層を蒸発させた後、公知の方法で精製し、式Ｖａ−ｃの所望の生成物を得る。
【請求項１６】
工程（ａ）および（ｂ）で使用される前記弱無機塩基が重炭酸カリウムである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
得られた一般式Ｖの新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−
アントラキノン抱合体が、下記の化合物群によって代表される、請求項１５に記載の方法。
１，４−ビス−｛３−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖａ）；
１，４−ビス−｛４−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−５−オン］ブチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｂ）および
１，４−ビス−｛５−［７−メトキシ−８−オキシ−（１１ａｓ）−１，２，３，１１ａテトラヒドロ−５ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］−ベンゾジアゼピン−５−オン］ペンチルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（Ｖｃ）。
【請求項１８】
工程（ａ）で使用される前記ブロモアルカンが、１，３ジブロモプロパン、１，３ジブロモブタンおよび１，３ジブロモペンタンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
工程（ａ）で使用される前記非プロトン有機溶媒が、アセトンおよびアセトニトリルから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
工程（ｂ）で使用される式ＩＩａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス−（３−ブロモプロピルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオン、１，４−ビス−（３−ブロモブチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンおよび１，４−ビス−（３−ブロモペンチルオキシ）−アントラセン−９，１０−ジオンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
工程（ｂ）で使用される前記有機溶媒が、アセトニトリル、アセトンおよびＤＭＦから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ｃ）で使用される式ＩＩＩａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス−｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］−プロピルオキシ｝アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩａ）、１，４−ビス−｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｂ）および１，４−ビス−｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−ニトロベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＩＩｃ）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
工程（ｃ）で使用される前記アルコールが、メタノールおよびエタノールから選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
工程（ｄ）で使用される式ＩＶａ−ｃの前記化合物が、１，４−ビス-｛３−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］プロピルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶａ）、１，４−ビス-｛４−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ブチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｂ）および１，４−ビス-｛５−［（２Ｓ）−Ｎ−（４−オキシ−５−メトキシ−２−アミノベンゾイル）−ピロリジン−２−カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール］ペンチルオキシ｝−アントラセン−９，１０−ジオン（ＩＶｃ）から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
式Ｖの前記新規ビス−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−アントラ
キノン抱合体が、肺、子宮頚部、乳房、結腸、前立腺および卵巣細胞株からなる群から選択されるヒト癌株に対して抗腫瘍活性を示す、請求項１５に記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２００９−５２６７７８（Ｐ２００９−５２６７７８Ａ）
【公表日】平成２１年７月２３日（２００９．７．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５３８５１（Ｐ２００８−５５３８５１）
【出願日】平成１９年２月１２日（２００７．２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０００３２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９３８７３
【国際公開日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【出願人】（５９５０５９８７２）カウンシル オブ サイエンティフィク アンド インダストリアル リサーチ (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年７月２３日（２００９．７．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年２月１２日（２００７．２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００７／０００３２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９３８７３
【国際公開日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【出願人】（５９５０５９８７２）カウンシル オブ サイエンティフィク アンド インダストリアル リサーチ (81)
【Ｆターム（参考）】
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