新規な抗癌性化合物
本発明は、新規な抗癌性化合物、特に中性子捕捉治療等の核種活性化治療に用いられる新規な化合物に関する。特に、本発明は、一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされる共役体を与える。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗癌性化合物、特に中性子捕捉治療等の核種活性化治療に用いられる新規な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
核種活性化治療においては、核種が活性化され、核開裂を起し、生体細胞を破壊可能な高イオン化放射線を放出する。その方法は、核種が中性子により活性化されるときには、中性子捕捉治療と呼ばれる。癌の治療のための中性子捕捉治療（ＮＣＴ）の原理は、米国の科学者ロッカー（Locker）により１９３６年にはじめて記述された。本質において、ＮＣＴ元素（例えば安定核種ホウ素−１０）を非イオン化性の遅い中性子で照射すると、開裂反応が起り７〜９μｍの範囲の高イオン化放射線を放出する。１９５１年に最初の患者が治療され、それ以来、その原理は臨床において成功裡に証明されてきたが、これまで効果的なＮＣＴ薬剤については解明困難であった。
【０００３】
ホウ素中性子捕捉治療は、中性子と薬剤の空間的および時間的重複を必要とする二モード治療である。生物学的効果を達成するためには、遅い中性子とホウ素担持剤の相互作用が必要である。１０Ｂと中性子とのＢＮＣＴ反応は次式で要約される。
【０００４】
１０Ｂ＋１ｎｔｈ → ７Ｌｉ＋α粒子（４Ｈｅ）＋２．４ＭｅＶ
その２．４ＭｅＶのエネルギーは、Ｌｉ＋およびＨｅ２＋イオンに取り上げられる。この二つの粒子は充分に活性化され、最大で９μｍの射程の強いイオン化軌跡を生ずる。したがって損傷は腫瘍細胞径、すなわち１０μｍに限定される。従って１０Ｂを含む細胞のみが損傷を受け、１０Ｂを含まない（健康な）細胞は損なわれずに残される。１０Ｂ核種は安定かつ非放射性であり、その核は、遅い中性子に対し、水素の２７００倍という非常に大きな中性子吸収断面積を有する。これは、生体組織を構成する水素、酸素および炭素等の元素よりも数千倍も良好な中性子吸収能を有することを意味する。
【０００５】
ＢＮＣＴは、通常放射線治療により処置されるリンパ腫および皮ふ癌の治療、ならびに脳、胸、肺、頭および首、骨、前立腺、すい臓および頚部の癌の治療に用いられる。加えて、腫瘍の外科的除去が計画される際には、ＢＮＣＴは腫瘍寸法の減小および関連正常組織の損失の低減を助けるためにも用いられる。ＢＮＣＴは選択的な「局部（in situ）」での放射線治療の利益の可能性ならびに従来のＸ線照射療法に代替する可能性により促進されている。世界的には５００人を超える患者が、脳および皮ふ腫瘍の実験的ＮＣＴ治療を受けている。多くは、二つの実験化合物、すなわち４−ジヒドロキシボリルフェニルアラニン（ＢＰＡ）およびナトリウム・メルカプトウンデカハイドロドデカデカーボネート（ＢＳＨ）、が臨床試験に用いられている。
【０００６】
従来の放射線治療においては、生物学的効果は、被照射領域の全域に拡がるのに対して、ＢＮＣＴでは、１０Ｂ担持分子を含む細胞に特定される。放射線治療において、生物学的効果のための破壊的イオン化軌跡を発生させるためには、比較的高い放射線量が必要である。これは、この治療法の有効性を制約する要因となる。放射線治療は、電子（β−粒子）あるいは光子（Ｘ−線およびγ−線）からなる低いＬＥＴ（直線エネルギー転移性）を有する放射線束の使用という本来の特性により制約される。ＢＮＣＴによれば、短い射程で高いエネルギーのαおよび７Ｌｉ粒子が生成される。これら粒子は高ＬＥＴ粒子であり、強いイオン化性およびはるかに大きな能力の破壊特性を示す。従って、放射線治療の場合に比べて、同等な照射治療生物学的効果を発揮するのに要求されるＢＮＣＴ線量ははるかに小さい。
【０００７】
放射線治療と対称的に、ＢＮＣＴは、薬剤の特性により目標組織を与える。致死線量は、１０Ｂが局在化する所、すなわち腫瘍組織内、にのみ発生される。一連の治療は、２〜４日内に完了する。遅い中性子は非イオン化性である。ＢＮＣＴは、また通常明瞭な境界を持たない拡散性腫瘍を破壊することもできる。
【０００８】
ＢＮＣＴは、多くが低酸素状態を示し、癌治療が解剖学と妥協されることのある腫瘍中の酸素濃度に依存しない。４〜８ｃｍ程度あるいはそれを超える深部腫瘍の治療も可能である。
【０００９】
ＢＮＣＴは、従来の放射線治療が６週間にわたって３０回も処置される必要があるのに対して、２〜４日間にわたって数回の処置を行えるので、従来の放射線治療に比べて、患者を傷つけることが少ない。
【００１０】
二次系であるので、各要素は他とは独立して操作可能である。１０Ｂ剤の投与と中性子照射の間隔は、正常組織と腫瘍組織との間に最高の１０Ｂ濃度差を与えるように時間最適化される。同様に、中性子束を収束して、照射領域を腫瘍部位に限定して、ある程度残留１０Ｂ濃度を有する正常組織を治療容積部から除くことも行われる。
【００１１】
しかしながら、ＮＣＴの「局部」細胞放射線治療という利点を可能とするためには、いくつかの前提要件がある。中性子は、ＮＣＴ核種、例えば１０Ｂ原子のみが開裂反応を起す範囲のエネルギーを有さなければならない。ＮＣＴ剤は、目標組織に選択的に局在化されねばならない。例えば、１０９／秒／ｃｍ２の中性子流出量を与える核反応炉からの中性子束を用いてＢＮＣＴを効果的に行うために必要な１０Ｂ量として、腫瘍組織１ｇ当り、１５〜３５μｇ（ホウ素原子１０９個と等しい）が広く引用されている。
【００１２】
しかしながら、腫瘍組織当り１０９個のホウ素原子を実現するためには、高濃度のホウ素含有薬剤を投与する必要がある。この点を説明するために、下記表１に多くの前臨床および臨床研究の主題とされた三つのＢＮＣＴ化合物を要約する。ＢＰＡおよびＢＳＨは臨床利用されており、第３の化合物は、前臨床開発において実験的に使用されている化合物である。
【表１】
【００１３】
しかしながら上記の化合物は、例えばＢＰＡの場合、１２００／ｋｇ（３０ｍｇ／ｍｌ−静脈液）にも達する非常に高濃度で投与する必要がある。これは、病気の患者にとっては大きな懸念および不利である。何故なら、やせた腫瘍（meager tumour）／血液比として３：１を達成するためには、数時間に数リットルの薬剤を投与する必要があるからである。その結果、患者は心臓血管ショックにさらされる。この腫瘍／血液比を達成するためには、１、２、４、６および８時間の輸液プロトコルが必要である。ＢＰＡおよびＢＳＨはまた腫瘍に対する選択性がない。ＣｕＴＣＰＨは、より高い腫瘍／血液比を有するが、２００ｍｇ／ｋｇを投与する悩みがあり、これはやはり非常に多く且つ１０〜１０００ｍｌの液中に約１５ｇの化合物を必要とすることになろう。これらの不利を克服するために、明らかに新しい化合物が要求されている。しかしながら、５０年を超える研究・開発の後にも、わずかに理想的ではないが二つの化合物（ＢＰＡおよびＢＳＨ）が臨床試験に入っているに過ぎない。
【００１４】
〔発明の開示〕
従って、本発明は、一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされる共役体を提供するものである。
【００１５】
本発明はかくして、従来利用可能な化合物よりも改良された腫瘍指向性を有する共役体を提供する。
【００１６】
本発明は、また上記共役体を含む薬剤組成物を提供するものである。
【００１７】
本発明は、更に上記共役体の癌治療用薬剤の調製のための使用、および上記共役体の癌治療への使用を提供するものである。本発明は、好ましくは、固体腫瘍、例えば脳、胸、頭、および首、前立腺、肺、骨、すい臓および肝臓、ならびに結腸癌、の治療に関する。加えて、本発明は、上記共役体の患者への投与に続いて、腫瘍部位におけるＮＡＴ剤を活性化することを特徴とする癌の治療方法を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の化合物は、非経口投与に適した水性媒体に溶解する大分子である。該ポリマー−ＮＡＴ共役体は、従来の薬剤が２００〜５００Ｄａであるのに対し、５ｋＤａを超える分子量を有する。化合物は、それ自体では抗−腫瘍活性を有さないが、活性化源、例えば中性子、の存在により、ＮＴＡ反応を起し毒性のある高ＬＥＴ粒子（α粒子およびＬｉイオン）を生成する。
【００１９】
該ポリマー−ＮＡＴ共役体は、三成分、すなわち、ポリマー、ＮＡＴ剤およびリンカーを含む。該ポリマーは、生物適合性（例えば、非免疫〔抗〕原性および非血栓性、すなわち血小板および凝固因子と干渉しない）であり、典型的には水溶性の天然あるいは合成ポリマーである。共役体は、０．１ｍｇ／ｍｌを超える水溶性を有し、より好ましくは１〜１００ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｍｌの水溶性を有する。ポリマーは、薬学的には不活性である。
【００２０】
ポリマーは、血液−プラズマ半減期が０．１〜２４時間、好ましくは０．２〜１２時間、特に好ましくは１〜６時間である。飲細胞運動（pynocytosis）により分子が細胞中に侵入するために、充分な半減期が必要である。飲細胞運動は遅い過程であり、これにより細胞外液体（薬剤分子を含む）が細胞質中に取り込まれる。
【００２１】
分子の分子量および形状（例えばひも状あるいは球状）が胃からの透過速度を決定する。ポリマーの分子量は、５〜６０００ｋＤａであり、好ましくは５〜１００、より好ましくは１０〜７０、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａである。
【００２２】
ポリマーは水溶性であり、好ましくは水溶性が０．１ｍｇ／ｍｌより大、より好ましくは５０ｍｇ／ｍｌより大、最も好ましくは１００ｍｇ／ｍｌより大である。このような溶解性は、ＮＡＴ活性剤（通常は貧水溶性である）が共役するときに必要であり、これにより通常該化合物の溶解性に対する影響が全体として無視できるようになる。水溶性であることにより、また、患者に投与されることが必要な薬剤溶液容積が有意に減少可能となる。また、これにより、薬剤調製において潜在的に毒性な共溶媒が不要となる。
【００２３】
しかしながら、低水溶性ポリマー（溶解度が０．１ｍｇ／ｍｌより低い）も有用ではある。しかし、この場合は、油、表面活性剤および／または乳化剤等の薬学的希釈成分を用いて、充分に濃縮された注入可能な液体系を生成する必要がある。
【００２４】
ポリマーは、酸素的劣化を起さないようなアミノ酸あるいは人造糖分を導入して変性することにより、ポリマーの安定性および半減期を増大することがある。
【００２５】
コポリマーを形成する二つのモノマーの量は可変である。ヒドロキシプロピルメタクリルアミド／メタクリレートの比は、好ましくは１００：１〜１：１、最も好ましくは２０：１〜１：１である。
【００２６】
ＮＡＴ活性核種は、核開裂を起して、腫瘍細胞を破壊するに充分なエネルギーを有し、しかし、細胞損傷を腫瘍の半径、すなわち１０μｍ、に限定することのできる粒子を生成可能なものでなければならない。このような核種は当業界に公知であり、例えば、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕが挙げられる。より好ましい核種は、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，または１８４Ｏｓである。典型的には、特定の元素について、ＮＡＴ活性核種が富化される。ＮＡＴ活性核種は、これを担持する化合物を介してポリマーに付着される。そのような化合物は当業界に公知であり、以下に例示する。
【００２７】
ホウ素化アミノ酸およびペプチド、例えばボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ）。参照：Soloway Chem. Rev. (1998) Vol 98, No.4, 1531-1534頁；およびSnyder, H R et al, J. Am. Chem. Soc. (1958) 80,835；
変性カルボランケージ化合物、例えば［Ｂ１０Ｈ１０］２−（デカヒドロデカボレート）および［Ｂ１２Ｈ１２］２−（ドデカヒドロドデカボレート）、例えばＣ２Ｂ１２Ｈ１２；参照：Hawthorn, M F et al, J. Am. Chem. Soc. (1959) 81, 5519およびGrimes, R. N. in“Carboranes”Academic Press NY(1970)；
メルカプトホウ酸塩、例えばメルカプトウンデカヒドロドデカボレート（Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ２−）（ＢＳＨ）。そのジナトリウム塩の構造を以下に示すが、これは二量体（ＢＳＳＢ）の形態も採る。参照：Soloway, A. H. et al J. Med. Chem. (1967) 10,714；
【化１】
【００２８】
ポリフィリンおよびフタロシアニン、例えばＢＯＰＰおよびＬＴＣＰ類（ＮｉＴＣＰ、ＣｕＴＣＰ、ＮｉＴＣＰＨおよびＣｕＴＣＰＨ）。このうちポルフィリンは、カルボランケージを４個有する。参照：Ozawa, T., Pro. Am. Ass. For Cancer, March 1998, 39, 586頁およびMiura, M., Radiation Research (2001) 155, 603-610（下記構造参照）、
ホウ素含有核酸前駆体、例えばホウ素化およびカルボラン含有ピリミジンおよびプリン、例えば５−（ジヒドロキシボリル）ウラシル、５−カルボラニルウラシル。参照：Liao, T.K J. Am. Chem Soc. (1964)86, 1869, Schinazi, R. F. J. Org. Chem. Soc. (1985) 50, 841, およびNemoto, H. J. Chem. Soc. Chem. Commun. (1994) 577；ならびに葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオウレア誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントイン、バルビツル酸塩。参照：Soloway Chem. Rev. (1998) Vol 98, No.4, 1545-1550頁。
【００２９】
【化２】
【００３０】
Ｒは、更にハロゲン（好ましくは、ＢｒまたはＣｌ）、またはニトロ基（ＮＯ）であってもよい。
【００３１】
他の核種も同様にして含まれる。例えばＢＮＣＴおよびＧｄＮＣＴの結合化合物で、Ｇｄ核種とカルボランケージが同一分子上にあるものが知られている。参照：Soloway (1998), Chem. Rev. Vol 98, No.4, 1519頁。
【００３２】
ＮＡＴ剤は、好ましくは、ポリマー−ＮＡＴ共役体の全質量の１〜３０％、より好ましくは５〜１０％を占める。
【００３３】
ＮＡＴ剤は、公知の技法、例えば電磁放射線（例えばＸ線、光、マイクロ波、ガンマ線）または中性子、または超音波、プロトン、カーボイオンの照射、π中間子治療法、電子線治療法、反陽子治療法、光子治療法、光力学治療法等、により活性化される。中性子の場合には、この技法を中性子捕捉治療と呼び、薬剤は中性子捕捉治療（ＮＣＴ）剤と呼ぶ。
【００３４】
リンカーは、ポリマーとＮＣＴ剤を結合し、ポリマー−ＮＡＴ共役体の生体内（in vivo）溶解性および毒性に影響しない任意の基であり得る。該リンカーには、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルブチルおよびメチルフェニル；およびアミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド、が含まれる。
【００３５】
好ましいペプチドは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ，Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＰｈｅおよびＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅである。特に好ましいペプチドは、Ｇｌｙ−ＧｌｙおよびＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙである。
【００３６】
ペプチド・リンカーのいくつかは、リソソマル（lisosomal）酵素により劣化されて、ＮＡＴ化合物が腫瘍細胞中に放出される。
【００３７】
リンカーは、当業者には周知の慣用合成法により、ポリマーおよびＮＡＴ剤に結合される。下記の結合によりＮＡＴ剤はポリマーに結合される、すなわちアミノ結合、エステル結合、ヒドラジド結合、ウレタン（カーバメート）結合、イミン（シッフ塩基）結合、チオエーテル結合、アゾ結合あるいは炭素−炭素結合である。代りに、ＮＡＴ剤は、ポリマー自体に結合され得る、すなわちこの場合のリンカーは共役結合である。
【００３８】
アミド結合は、アミノ基（−ＮＨ２）およびカルボン酸基（ＣＯＯＨ）により形成される。後者は、酸塩化物（ＣＯＣｌ）等のより反応性の中間体に変換される、あるいはカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）もしくはジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて、より反応性の中間体に変換される。アミノ基の他の基剤には、酸無水物およびエステルがある。エステル結合はヒドロキシル基（ＯＨ）と、上記した活性化カルボン酸および酸無水物とから形成される。ヒドラジド結合は、ハロゲン化アシル（例えば上記酸塩化物）とヒドラジン（ＮＨ２ＮＨＲ）とから形成される。カーバメート結合は、ホスゲン（ＣｌＣＯＣｌ）または、より好ましくはトリクロロメチルクロロホーメート（ＣＣｌ３ＯＣＯＣｌ）から、アルコールおよびアミンと反応させることにより形成される。カーボネート結合も、ホスゲンまたはトリクロロメチルクロロホーナートから、二つのアルコール基と反応させることにより形成される。イミン（またはシッフ塩基）は、アルデヒド（ＲＣＨＯ）もしくは、ケトン（ＲＣＯＲ）とアミンとの間での縮合により形成される。アルデヒドは、一級アルコールの酸化により容易に形成され、ケトンは二級アルコールの酸化により形成される。チオエーテルは、まずアルコール等の基を、例えばトシレート、メシレート、トリフレートあるいはハロゲン化物等の離脱性の良い基に変換し、それをメルカプチド（ＲＳ−）と反応させ、上記離脱性基をＲＳに変換することにより形成される。参照：例えばSchacht E (1987): Illum L, Davis SS (eds) “Polymers in drug delivery”, Wright, Bristol, 131頁。
【００３９】
典型的には、リンカーは、好ましくはアミド結合を介して、ポリマーのメタクリレート・モノマーの位置に結合される。ぶら下がっているＮＡＴ剤（あるいは他の薬学的活性剤）を有さないメタクリレート・モノマーは、なおリンカーを有することができ、このリンカーは、例えば２−アミノ−１−プロパノールなどのキャッピング剤でキャッピングされていてもよい。
【００４０】
効果的な治療計画およびＢＮＣＴ投与量計算のためには、腫瘍中の薬剤の位置および濃度を知ることが重要である。従って、治療計画の一部としての臨床の設定においては、臨床中性子投与量を計算するために、腫瘍部中のＮＡＴ剤の部位および量を知ることが重要である。例えば、巨大分子には、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、ＭＲＩ等の診断技法により像化可能な金属を担持させることができる。例えば親油性カルボラニルテトラフェニルポルフィン（ＬＴＣＰ）はメタルイオンを担持可能である。このような金属は、バナジウム（Ｖ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ルテニウム（Ｒｕ）、テクネチウム（Ｔｃ）、クロム（Ｃｒ）、白金（Ｐｔ）、コバルト（Ｃｏ）、ニッケル（Ｎｉ）、銅（Ｃｕ）、亜鉛（Ｚｎ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、インジウム（Ｉｎ）、スズ（Ｓｎ）、イットリウム（Ｙ）、金（Ａｕ）、バリウム（Ｂａ）、タングステン（Ｗ）、ガドリニウム（Ｇｄ）およびガリウム（Ｇａ）から選ばれる。最も好ましい金属は、ＣｕとＮｉである。
【００４１】
陽電子放出トモグラフィー（ＰＥＴ）もまた、腫瘍中のポリマー−ＮＡＴ共役体の位置および濃度の表示を得るために用いることができる。ＰＥＴにおいては、１８Ｆ（半減期：約２時間）または１１Ｃ（半減期：２０分）等の放射性核種が好ましく用いられる。１つのフッ素原子を、ポリマー主鎖または理想的にはリンカー鎖中のアミノ酸、好ましくはＰｈｅに含ませる。これにより、診断および治療計画のために強力な手段が与えられ、個人に対し適合されたポリマー−ＮＡＴ共役体薬剤投与が可能になる。フッ素原子が存在することにより、周知のＰＥＴ像化化学を用いて診断する際に、放射性核種１８Ｆを該Ｆ原子で置きかえる手段が与えられる。
【００４２】
次に、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体の好ましい例のいくつかについて述べる。
【００４３】
好ましくは、ポリマーはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）とメタクリル酸とのコポリマーであり；リンカーは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ等のペプチドであり；ＮＡＴ剤は、Ｏ−カルボラニルアラニンＢ１０Ｃ２Ｈ２−ＣＨ２ＣＨＣＯ２ＮＨ２、カルボラン・ブタミンＢ１０Ｃ２Ｈ２−（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２、ＢＰＡ（ｐ−ボロノフェニルアラニン）、Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ（ＢＳＨ）（メルカプトウンデカヒドロドデカカーボレート）、ホウ素化ポリフィリン、ＢＳＨ−グルタチオン・ジスルフィド、および水溶性テトラカルボニルフェニルポルフィリン（例えばＮｉＴＣＰ）から選ばれる。
【００４４】
特に好ましい共役体は以下の通りである。
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−カルボラン・ブタミン（Ｂ１０Ｃ２Ｈ１１（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２）
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−カルボラン・ブタミン（Ｂ１０Ｃ２Ｈ１１−（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２）
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＣｕＴＣＰＨ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＣｕＴＣＰＨＢｒ。
【００４５】
本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体は、腫瘍を選択的に目標付けられ、腫瘍特性のいくつかを利用する。例えば、腫瘍は、リンパ排液がないので負の浸透圧を有し、その結果ポリマー−ＮＡＴ共役体を捕捉する（いわゆる、強化された透過保持（ＥＰＲ）効果）。かくして、小化合物の大多数は拡散により腫瘍に入り、腫瘍床内に止まり、ギャップ接合部を通って細胞間を移動する。化合物は、通常細胞質へのエンドーサイトーシス（endocytosis）により細胞に入り、リソソーム区画に止まる。ポリマー−ＮＡＴ共役体は、細胞膜、細胞質小器官（例えばミトコンドリア、内皮小網あるいはゴルジ装置）、および／または核に目標付けられる。核または細胞質小器官により近いポリマー−ＮＡＴ共役体は、ＮＡＴ剤の開裂により生ずるイオン化性粒子（例えばαおよびＬｉイオン）による不可逆なＤＮＡないし細胞損傷の確率を増する。
【００４６】
ポリマー−ＮＡＴ共役体のポリマー成分も、体の特定領域に目標付けられるように変性することができる。例えば、肝細胞のアシアロ糖蛋白受容体は、ガラクトースおよびＮ−アセチルガラクトサミンを認識可能である。従って、これらの化合物をポリマー中に導入することにより本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体を肝臓に指向させることができる。
【００４７】
保護ヒドロキシル基を有するＨＰＭＡモノマーにガラクトースを導入することができる。例えば、１，２，３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−６−Ｏ−メタクリロイル−α−Ｄ−ガラクトピラノースを合成して、ＨＰＭＡと共重合し、その後、保護基イソプロピリデンをギ酸により除く。参照：Chytry, V. et al New Polymer Material (1987)1,21.Ｎ−アシル化ガラクトサミンを、ｐ−ニトロピリジン末端側鎖を有する反応性ＨＰＭＡコポリマー前駆体を用いて結合する。これらを、室温および圧力下、ＤＭＳＯ中でガラクトサミンとのアミノリシスに付す。
【００４８】
更に、ポリマー−ＮＡＴ共役体の非選択的取り込みを、正電荷（例えばメタクリロキシルエチルトリメチルアンモニウム・クロライドを用いて）あるいは疎水性コモノマー（例えばＮ−［２−（４−ヒドロキシフェニルエチル）］アクリルアミドまたはＮ−メタクリロイルチロシナミドを用いて）をポリマー中に導入することにより、促進することができる。
【００４９】
ＮＡＴの必要性からは、ポリマー−ＮＡＴ共役体を体重１ｋｇ当り、０．１〜１００ｍｇ、好ましくは０．１〜５０ｍｇ、特に好ましくは１〜３０ｍｇ投与する。投与により、湿潤腫瘍組織１ｇ当り、活性核種（例えば１０Ｂ原子）の１０μｇ以上、好ましくは２５μｇ以上、より好ましくは、８０μｇ以上、更に好ましくは１６０μｇ以上、最も好ましくは２００μｇより大なる量で、与えるべきである。
【００５０】
なお、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体は、公知のＮＡＴ剤に比べて全身毒性が有意に減少しており、従って、より大なる腫瘍細胞中ＮＡＴ剤濃度をもたらすように投与量を増加することができる。毒性が減少しているのは、ポリマー−ＮＡＴ共役体中のＮＡＴ剤が生物学的環境と相互作用しないからである。更に、ポリマー−ＮＡＴ共役体は、長時間、すなわち数時間ないし数日にわたって、腫瘍に保持されるので、くり返して投与して臨床治療窓を拡げる必要がない。
【００５１】
ＮＡＴ剤に加えて、他の薬剤あるいは予見プロドラッグを、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体に導入することにより、抗癌作用を増大することもできる。すなわち一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（Ｌ−化学療法剤）ｍ（ここでＰ，Ｌ，ＮＡＴおよびｎは前記定義した意味を有する）を有するポリマー−ＮＡＴ共役体を用いることができる。ここでＬは同じでも異なってもよく；ｍは１〜１０００、好ましくは１〜５００、より好ましくは１〜１００、最も好ましくは１〜２０、の整数である。そのような化学療法剤には、例えば下記の任意のものが含まれる：すなわち、５−（アズルダブ−１−イル）−４−ジヒドロキシルアミノ−２−ニトロベンズアミド、フェニルジアミン・マスタード、安息香酸マスタード、ガンシクロビル・トリホスフェート、アデニン・アラビノヌクレオチド・トリホスフェート（ａｒａＴＡＰ）、過酸化水素、シアン化物、超酸化物、メトトレキサート、マイトマイシン・アルコール、エトポシド、パリトキシオン、メルファラン、５−（アジリジン−１−イル）−４−ヒドロキシルアミノ−２−ニトロベンズアミド、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、タキサン類（例えばタキソールおよびタキソテーレ）、トポイソメラーゼ抑制因子（例えばカンプトテシンおよびトポテカンシクロホスファミド）、カルムスチン、５−フルオロウラシル、シトラビン、メルカプトプリン、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ビンカ・アルカロイド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ダクチノマイシン、マイトマイシンＣ、ラスパラジナーゼ、Ｇ−ＣＳＦ、シスプラチンおよびカルボプラチン、である。
【００５２】
この型の好ましい共役体には、式：ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｙ）］（ここでＹは抗癌剤を示す）で表わされるものがあり、例えば以下の通りである：
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙドキソルビシン）］
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙエリプチシン）］
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙシスプラチン）］
【００５３】
本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体の一つの特徴は、ポリマーに結合した目標化分子部を必要とすることなく、腫瘍中に蓄積することである。しかしながら、ポリマーには、抗癌化学療法剤を伴うか否かに拘わらず、該ポリマーに結合した目標化分子部を含むことができる。このような目標化分子部により、選択性を持たせて、共役体の生体内分布を有意に変化させることができる。このような目標化分子部には、（Ｎ−アシル化）ガラクトサミン、（６−Ｏ−結合）ガラクトース、（Ｎ−アシル化）フコーシルアミン、メラニン細胞刺激ホルモンおよびセクレチン、が含まれる。
【００５４】
以下、本発明を、現行のＢＮＣＴ剤の不都合を克服する新規なポリマー−ＮＡＴ共役体のいくつかの例により説明する。
【実施例】
【００５５】
ポリマーは、ポリマー・ラボラトリース・リミテッド（Polymer Laboratories Ltd.）より入手した。分析証明はバターヮース（Butterworth）より得た。
【００５６】
以下の実施例１および２では、４−ボロノフェニルアミン（ＢＰＡ）とポリマーのｐ−ニトロフェニルエステル基と反応させることにより、以下の反応式に示すように、ｐ−ニトロフェノールを排除することにより、ホウ素含有ポリマーを形成する。
【化３】
【００５７】
ポリマー・ラボラトリース・リミテッドより市販されるポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＯＮｐ）は、平均分子量が２８，１００であり、重量平均分子量／数平均分子量比Ｍｗ／Ｍｎ＝１．３１の広い分子量分布を示し、平均値としてｘ＝１５３、ｙ＝１７（ＭＷ＝２７，６２４）となる。ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）は、平均分子量が４７，２００（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．５３）であり、平均分子量から、ｘおよびｙの平均値はｘ＝２２５、ｙ＝２５（ＭＷ＝４７，１３１）と計算される。これらの値を、ホウ素置換フェニルアラニンの添加量を計算するのに用いている。
【００５８】
（実施例１）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）のｇ量レベルでの調製
粉末ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＯＮｐ）（１．１ｇ、４０．０μｍｏｌ）および（１０Ｂ−富化）４−ボロノフェニルアラニン（０．１５ｇ、７４０μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、混合物を攪拌して全物質を溶解して濁った溶液を得た。トリエチルアミン（４滴）を触媒として加えることにより、溶液を黄色化させた。溶液をアルゴン下２０〜２２℃（油浴温度）で一夜攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な固体沈殿を残した。この粘稠な固体沈殿を、追加のジエチルエーテルで、粘稠性でなくなるまで洗浄した。残留溶媒は、減圧（約０．４ｍｍＨｇ）、３６℃で３時間かけて留去した。生成物ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）がベージュないし黄味がかった固体として得られた（１．２０ｇ、１０４％）。１Ｈ−ＮＭＲ分析により、残留ジエチルエーテルおよびＤＭＳＯの若干量が見出された。
【００５９】
バターワース（Butterworth Laboratories Ltd.）によりホウ素分析を行った。ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）中のホウ素含量は０．４７％（予期値は０．５９％）であった。低い値は、ポリマーと４−ボロノフェニルアラニンとの反応の不完全性および残留溶媒の存在によるものと解される。
【００６０】
（実施例２）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）のｇ量レベルでの調製
粉末ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（１．１ｇ、２３．３μｍｏｌ）および（１０Ｂ−富化）４−ボロノフェニルアラニン（０．１３ｇ、６２５μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、混合物を攪拌して全物質を溶解して濁った溶液を得た。トリエチルアミン（４滴）を触媒として加えることにより、溶液を黄色化させた。溶液をアルゴン下２０〜２２℃（油浴温度）で一夜攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な固体沈殿を残した。この粘稠な固体沈殿を、追加のジエチルエーテルで、粘稠性でなくなるまで洗浄した。残留溶媒は、減圧（約０．４ｍｍＨｇ）、３６℃で３時間かけて留去した。生成物ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）がベージュないし黄味がかった固体として得られた（１．２３ｇ、１０２％）。１Ｈ−ＮＭＲ分析により、残留ジエチルエーテルおよびＤＭＳＯの若干量が見出された。
【００６１】
バターワース（Butterworth Laboratories Ltd.）によりホウ素分析を行った。ポリマー中のホウ素含量は０．４０％（予期値は０．４８％）であった。わずかに低い値は、ポリマーと４−ボロノフェニルアラニンとの反応の不完全性および残留溶媒の存在によるものと解される。
【００６２】
実施例１および２で得たポリマー−ＮＡＴ共役体の化学構造は、以下の通りである：
【化４】
【００６３】
実施例１と２のポリマー−ＮＡＴ共役体は、それらのペプチド・リンカーにおいてのみ相違する。実施例１のポリマー−ＮＡＴ共役体は、ペプチド・リンカーＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを有し、これは細胞のリソソマル区画において酵素的に劣化ないし分解されてＢＰＡを放出する。これに対し、実施例２のポリマー−ＮＡＴ共役体はペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙを有し、これは分解せずに全体分子をそのまま残す。生分解性ポリマーは、ホウ素含有分子を細胞質中に放出することができ、細胞小器官および最も重要には核に拡散する機会を有する。ＢＮＡＴにおいては、ホウ素担持分子がＤＮＡに近ければ近いほど、細胞が死ぬ。しかしながら、非劣化性のポリマー−ＮＡＴ共役体では、分子は無傷で残り、一旦内在化されると細胞を離れない。これにより、くり返し投与によりホウソ化ポリマーの非常に高濃度での細胞中蓄積が起こり得る。もし、そうでない場合には、くり返し投与はホウソ化ポリマーの全身毒性のために不可能となり得る。
【００６４】
（実施例３）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）（出願人コード：ＰＰ４０３）の調製
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）を、市販のナトリウム・ボロカプテートを用いて合成した。ＵＳ６，０１７，９０２号公報に記載の方法により、ナトリウム・ボロカプテートを、まず「ステップ１」で、フェニルアラニン誘導体、ナトリウム・ボロノカプテート・メルファラン（ＢＳＭｅｌ）に転換した。次いで、「ステップ２」でＢＳＭｅｌをポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ−ＯＮｐ）と反応させて、ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）を生成する。
【００６５】
【化５】
【００６６】
ナトリウム・ボロカプテート（０．９５ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）を５％炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｍｌ）中に溶解した。黄色味がかった固体のメルファラン（０．２２ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加し、懸濁液を室温で４８時間攪拌した。黄色調の固体メルファランは完全に溶解し、微細な白色沈殿物が生成した。生成固体を加熱（浴温約１００℃）して、水（３０ｍｌ）に溶解した。生成した溶液を室温まで冷却し、ろ過した。濃塩酸を注意深く滴下して、溶液のｐＨを２．７に調整することにより、微細固体を沈殿させた。一夜冷却（約４℃）した後、生成物をろ過により回収し、冷水で洗浄した。残留溶媒を真空（約０．４ｍｍＨｇ）下、３０℃で５時間蒸発させた。生成物は、薄い黄褐色の固体（０．１９ｇ、６５％）として得られた。
【００６７】
＜ステップ２：ＢＳＭｅｌポリマーの調製＞
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｏ−Ｎｐ）（１．１ｇ、４０．０μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。上記ステップ１からのＢＳＭｅｌ（０．０６９ｇ、１６９μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（２滴）を滴下して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン２０〜２２℃（油浴温）で一夜攪拌した。３−アミノ−１−プロパノール（４１μｌ、５３６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に３時間攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な沈殿物を得た。この黄色調固体を、粘稠でなくなるまで、更に追加のジエチルエーテルにより洗浄した。残留溶媒を真空蒸発した。収量：１．１０ｇ。
【化６】
【００６８】
この非生分解性のホウ素含有ポリマーは、ホウ素担体当り、１２のホウ素原子を供給可能であり、ポリマー分子当り３〜４個のＢＳＭｅｌ分子が存在する。従って、ＢＳＭｅｌポリマーは、実施例１および２と比べて、ポリマー分子当り３０〜４０倍多くのホウ素を供給できる。これは、比較的低濃度のポリマーで高濃度のホウ素を供給する強力な方法を与えるものである。
【００６９】
（実施例４）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＢＳＭｅｌ）（ＰＰ４０４）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｏ−Ｎｐ）（１．１ｇ、２３．３μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．０６２ｇ、１５２μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（２滴）を滴下して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン２０〜２２℃（油浴温）で一夜攪拌した。３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に３時間攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２２０ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な沈殿物を得た。この非白色固体を、粘稠でなくなるまで、更に追加のジエチルエーテルにより洗浄した。残留溶媒を真空蒸発した。収量：０．９５ｇ。
【００７０】
【化７】
【００７１】
（実施例５）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙパクリタキセル（ＰＰ４０５）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（２．１５ｇ、４５．６μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（２２ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．１４６ｇ、３６６μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（５２μｌ、３６６μｍｏｌ）を添加して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン下、２０〜２２℃（油浴温度）で５時間攪拌した。パクリタキセル（０．３１３ｇ、３６６μｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン触媒（０．０１５ｇ、１２３μｍｏｌ）を添加した。２０〜２２℃で一夜攪拌後、３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に４時間攪拌した。溶液を、ゆっくり攪拌されているジエチルエーテル（５００ｍｌ）中に注ぎ、次いで溶媒を傾斜除去して、粘稠な沈殿物を残した。黄色調の固体を、粘稠でなくなるまで追加のジエチルエーテルで洗浄し、残留溶媒を真空蒸発した。収量：２．４４ｇ（９８％）。
【００７２】
【化８】
【００７３】
（実施例６）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙドキソルビシン（ＰＰ４０６）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（２．１５ｇ、４５．６μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（２２ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．１４６ｇ、３６６μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（５２μｌ、３６６μｍｏｌ）を添加して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン下、２０〜２２℃（油浴温度）で５時間攪拌した。塩酸ドキソルビシン（０．２１２ｇ、３６６μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５２μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加した。２０〜２２℃で一夜攪拌後、３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に４時間攪拌した。溶液を、ゆっくり攪拌されているジエチルエーテル（５００ｍｌ）中に注ぎ、次いで溶媒を傾斜除去して、粘稠な沈殿物を残した。赤色の固体を、粘稠でなくなるまで追加のジエチルエーテルで洗浄し、残留溶媒を真空蒸発した。収量：２．５５ｇ（１０５％）。
【００７４】
【化９】
【００７５】
（生体内分布の検討）
ＥＭＴ−６癌腫を有する雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（２０〜２５ｇ）を用いた。１ケージ当り４匹のマウスを温度制御室内に収容し、自由に食物および水が取れるようにした。マウスを、制御した明／暗サイクルに維持し、７００〜１９００時間点灯した。全ての検討実験において、ケタミン（１２０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）により感覚麻痺状態を維持した。マウスは、一般健康状態について毎日モニターした。マウスは、必要な場合、感覚麻痺状態で安楽死させた。
【００７６】
上記実施例３および４で合成した二つのホウ素化ポリマー、すなわち、ＰＰ４０３およびＰＰ４０４を、ＥＭＴ−６腫瘍を有するマウスの尾の静脈から注入した。化合物は、５０ｍｇ／ｍｌ（０．５ｍｇホウ素／ｍｌ）濃度で塩水溶液として注入した。投与容積は、一度投与（a single bolus injection）で、０．０１ｍｌ／ｇｂｗとし、約５ｍｇホウ素／ｋｇの投与量を供給した。
【００７７】
組織試料内のホウ素濃度は、直流プラズマ原子発光分析法（ＤＣＰ−ＡＥＳ）により決定した。参照：Coderre, J.A., Button, T.M., Micca, P.L. Fisher, C., Nawrocky, M.M., およびLiu, H.B., Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. (1994)30, 643-652.
【００７８】
マウスの外見、行動レベルおよび一般的挙動の目視観察からは、毒性の徴候は見られなかった（参照：Miura, M., Micca, P.L., Fisher, C.D., Gordon, C.R., Heinrichs, J.C. et al. Brit. J. Radiol. (1998) 847, 773-781）。ホウ素分析のための注入後、６、２４、４８および７２時間において、腫瘍、血液、脳および肝臓試料を採取した。試料採取の１時点あたり４匹のマウス（合計１６匹）を使用した。ホウ素の生体分布データの詳細を下表２に示す。
【００７９】
ＰＰ４０３からの腫瘍ホウ素濃度は、ＰＰ４０４からのそれに比べて約３倍の大きさを示す。これはＰＰ４０３中の非分解性リンカーによるものと解される。肝臓：腫瘍ホウ素比は、ＰＰ４０３の全点において２：１〜３：１の範囲であり、ＰＰ４０４について４．５：１〜６：１であった。腫瘍：血液ホウ素比は、ＰＰ４０３の場合７２時間の時点になるまでは１：１未満であり、ＰＰ４０４の場合４８時間の時点になるまでは１：１未満であった。腫瘍ホウ素濃度の絶対値は低いが、供給ホウ素投与量も低かった。ＣＲＭにおけるＣｕＴＣＰＨを用いる同様のホウ素投与による生体分布データに比べて、腫瘍取り込み量は２．３倍低いが肝臓取り込み量は５倍低い。
【００８０】
【表２】
【００８１】
表２は、共役体が腫瘍に目標付けられ、生分解性リンカーのある場所でＮＡＴ剤を放出可能であることを示すものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な抗癌性化合物、特に中性子捕捉治療等の核種活性化治療に用いられる新規な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
核種活性化治療においては、核種が活性化され、核開裂を起し、生体細胞を破壊可能な高イオン化放射線を放出する。その方法は、核種が中性子により活性化されるときには、中性子捕捉治療と呼ばれる。癌の治療のための中性子捕捉治療（ＮＣＴ）の原理は、米国の科学者ロッカー（Locker）により１９３６年にはじめて記述された。本質において、ＮＣＴ元素（例えば安定核種ホウ素−１０）を非イオン化性の遅い中性子で照射すると、開裂反応が起り７〜９μｍの範囲の高イオン化放射線を放出する。１９５１年に最初の患者が治療され、それ以来、その原理は臨床において成功裡に証明されてきたが、これまで効果的なＮＣＴ薬剤については解明困難であった。
【０００３】
ホウ素中性子捕捉治療は、中性子と薬剤の空間的および時間的重複を必要とする二モード治療である。生物学的効果を達成するためには、遅い中性子とホウ素担持剤の相互作用が必要である。１０Ｂと中性子とのＢＮＣＴ反応は次式で要約される。
【０００４】
１０Ｂ＋１ｎｔｈ → ７Ｌｉ＋α粒子（４Ｈｅ）＋２．４ＭｅＶ
その２．４ＭｅＶのエネルギーは、Ｌｉ＋およびＨｅ２＋イオンに取り上げられる。この二つの粒子は充分に活性化され、最大で９μｍの射程の強いイオン化軌跡を生ずる。したがって損傷は腫瘍細胞径、すなわち１０μｍに限定される。従って１０Ｂを含む細胞のみが損傷を受け、１０Ｂを含まない（健康な）細胞は損なわれずに残される。１０Ｂ核種は安定かつ非放射性であり、その核は、遅い中性子に対し、水素の２７００倍という非常に大きな中性子吸収断面積を有する。これは、生体組織を構成する水素、酸素および炭素等の元素よりも数千倍も良好な中性子吸収能を有することを意味する。
【０００５】
ＢＮＣＴは、通常放射線治療により処置されるリンパ腫および皮ふ癌の治療、ならびに脳、胸、肺、頭および首、骨、前立腺、すい臓および頚部の癌の治療に用いられる。加えて、腫瘍の外科的除去が計画される際には、ＢＮＣＴは腫瘍寸法の減小および関連正常組織の損失の低減を助けるためにも用いられる。ＢＮＣＴは選択的な「局部（in situ）」での放射線治療の利益の可能性ならびに従来のＸ線照射療法に代替する可能性により促進されている。世界的には５００人を超える患者が、脳および皮ふ腫瘍の実験的ＮＣＴ治療を受けている。多くは、二つの実験化合物、すなわち４−ジヒドロキシボリルフェニルアラニン（ＢＰＡ）およびナトリウム・メルカプトウンデカハイドロドデカデカーボネート（ＢＳＨ）、が臨床試験に用いられている。
【０００６】
従来の放射線治療においては、生物学的効果は、被照射領域の全域に拡がるのに対して、ＢＮＣＴでは、１０Ｂ担持分子を含む細胞に特定される。放射線治療において、生物学的効果のための破壊的イオン化軌跡を発生させるためには、比較的高い放射線量が必要である。これは、この治療法の有効性を制約する要因となる。放射線治療は、電子（β−粒子）あるいは光子（Ｘ−線およびγ−線）からなる低いＬＥＴ（直線エネルギー転移性）を有する放射線束の使用という本来の特性により制約される。ＢＮＣＴによれば、短い射程で高いエネルギーのαおよび７Ｌｉ粒子が生成される。これら粒子は高ＬＥＴ粒子であり、強いイオン化性およびはるかに大きな能力の破壊特性を示す。従って、放射線治療の場合に比べて、同等な照射治療生物学的効果を発揮するのに要求されるＢＮＣＴ線量ははるかに小さい。
【０００７】
放射線治療と対称的に、ＢＮＣＴは、薬剤の特性により目標組織を与える。致死線量は、１０Ｂが局在化する所、すなわち腫瘍組織内、にのみ発生される。一連の治療は、２〜４日内に完了する。遅い中性子は非イオン化性である。ＢＮＣＴは、また通常明瞭な境界を持たない拡散性腫瘍を破壊することもできる。
【０００８】
ＢＮＣＴは、多くが低酸素状態を示し、癌治療が解剖学と妥協されることのある腫瘍中の酸素濃度に依存しない。４〜８ｃｍ程度あるいはそれを超える深部腫瘍の治療も可能である。
【０００９】
ＢＮＣＴは、従来の放射線治療が６週間にわたって３０回も処置される必要があるのに対して、２〜４日間にわたって数回の処置を行えるので、従来の放射線治療に比べて、患者を傷つけることが少ない。
【００１０】
二次系であるので、各要素は他とは独立して操作可能である。１０Ｂ剤の投与と中性子照射の間隔は、正常組織と腫瘍組織との間に最高の１０Ｂ濃度差を与えるように時間最適化される。同様に、中性子束を収束して、照射領域を腫瘍部位に限定して、ある程度残留１０Ｂ濃度を有する正常組織を治療容積部から除くことも行われる。
【００１１】
しかしながら、ＮＣＴの「局部」細胞放射線治療という利点を可能とするためには、いくつかの前提要件がある。中性子は、ＮＣＴ核種、例えば１０Ｂ原子のみが開裂反応を起す範囲のエネルギーを有さなければならない。ＮＣＴ剤は、目標組織に選択的に局在化されねばならない。例えば、１０９／秒／ｃｍ２の中性子流出量を与える核反応炉からの中性子束を用いてＢＮＣＴを効果的に行うために必要な１０Ｂ量として、腫瘍組織１ｇ当り、１５〜３５μｇ（ホウ素原子１０９個と等しい）が広く引用されている。
【００１２】
しかしながら、腫瘍組織当り１０９個のホウ素原子を実現するためには、高濃度のホウ素含有薬剤を投与する必要がある。この点を説明するために、下記表１に多くの前臨床および臨床研究の主題とされた三つのＢＮＣＴ化合物を要約する。ＢＰＡおよびＢＳＨは臨床利用されており、第３の化合物は、前臨床開発において実験的に使用されている化合物である。
【表１】
【００１３】
しかしながら上記の化合物は、例えばＢＰＡの場合、１２００／ｋｇ（３０ｍｇ／ｍｌ−静脈液）にも達する非常に高濃度で投与する必要がある。これは、病気の患者にとっては大きな懸念および不利である。何故なら、やせた腫瘍（meager tumour）／血液比として３：１を達成するためには、数時間に数リットルの薬剤を投与する必要があるからである。その結果、患者は心臓血管ショックにさらされる。この腫瘍／血液比を達成するためには、１、２、４、６および８時間の輸液プロトコルが必要である。ＢＰＡおよびＢＳＨはまた腫瘍に対する選択性がない。ＣｕＴＣＰＨは、より高い腫瘍／血液比を有するが、２００ｍｇ／ｋｇを投与する悩みがあり、これはやはり非常に多く且つ１０〜１０００ｍｌの液中に約１５ｇの化合物を必要とすることになろう。これらの不利を克服するために、明らかに新しい化合物が要求されている。しかしながら、５０年を超える研究・開発の後にも、わずかに理想的ではないが二つの化合物（ＢＰＡおよびＢＳＨ）が臨床試験に入っているに過ぎない。
【００１４】
〔発明の開示〕
従って、本発明は、一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされる共役体を提供するものである。
【００１５】
本発明はかくして、従来利用可能な化合物よりも改良された腫瘍指向性を有する共役体を提供する。
【００１６】
本発明は、また上記共役体を含む薬剤組成物を提供するものである。
【００１７】
本発明は、更に上記共役体の癌治療用薬剤の調製のための使用、および上記共役体の癌治療への使用を提供するものである。本発明は、好ましくは、固体腫瘍、例えば脳、胸、頭、および首、前立腺、肺、骨、すい臓および肝臓、ならびに結腸癌、の治療に関する。加えて、本発明は、上記共役体の患者への投与に続いて、腫瘍部位におけるＮＡＴ剤を活性化することを特徴とする癌の治療方法を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の化合物は、非経口投与に適した水性媒体に溶解する大分子である。該ポリマー−ＮＡＴ共役体は、従来の薬剤が２００〜５００Ｄａであるのに対し、５ｋＤａを超える分子量を有する。化合物は、それ自体では抗−腫瘍活性を有さないが、活性化源、例えば中性子、の存在により、ＮＴＡ反応を起し毒性のある高ＬＥＴ粒子（α粒子およびＬｉイオン）を生成する。
【００１９】
該ポリマー−ＮＡＴ共役体は、三成分、すなわち、ポリマー、ＮＡＴ剤およびリンカーを含む。該ポリマーは、生物適合性（例えば、非免疫〔抗〕原性および非血栓性、すなわち血小板および凝固因子と干渉しない）であり、典型的には水溶性の天然あるいは合成ポリマーである。共役体は、０．１ｍｇ／ｍｌを超える水溶性を有し、より好ましくは１〜１００ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｍｌの水溶性を有する。ポリマーは、薬学的には不活性である。
【００２０】
ポリマーは、血液−プラズマ半減期が０．１〜２４時間、好ましくは０．２〜１２時間、特に好ましくは１〜６時間である。飲細胞運動（pynocytosis）により分子が細胞中に侵入するために、充分な半減期が必要である。飲細胞運動は遅い過程であり、これにより細胞外液体（薬剤分子を含む）が細胞質中に取り込まれる。
【００２１】
分子の分子量および形状（例えばひも状あるいは球状）が胃からの透過速度を決定する。ポリマーの分子量は、５〜６０００ｋＤａであり、好ましくは５〜１００、より好ましくは１０〜７０、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａである。
【００２２】
ポリマーは水溶性であり、好ましくは水溶性が０．１ｍｇ／ｍｌより大、より好ましくは５０ｍｇ／ｍｌより大、最も好ましくは１００ｍｇ／ｍｌより大である。このような溶解性は、ＮＡＴ活性剤（通常は貧水溶性である）が共役するときに必要であり、これにより通常該化合物の溶解性に対する影響が全体として無視できるようになる。水溶性であることにより、また、患者に投与されることが必要な薬剤溶液容積が有意に減少可能となる。また、これにより、薬剤調製において潜在的に毒性な共溶媒が不要となる。
【００２３】
しかしながら、低水溶性ポリマー（溶解度が０．１ｍｇ／ｍｌより低い）も有用ではある。しかし、この場合は、油、表面活性剤および／または乳化剤等の薬学的希釈成分を用いて、充分に濃縮された注入可能な液体系を生成する必要がある。
【００２４】
ポリマーは、酸素的劣化を起さないようなアミノ酸あるいは人造糖分を導入して変性することにより、ポリマーの安定性および半減期を増大することがある。
【００２５】
コポリマーを形成する二つのモノマーの量は可変である。ヒドロキシプロピルメタクリルアミド／メタクリレートの比は、好ましくは１００：１〜１：１、最も好ましくは２０：１〜１：１である。
【００２６】
ＮＡＴ活性核種は、核開裂を起して、腫瘍細胞を破壊するに充分なエネルギーを有し、しかし、細胞損傷を腫瘍の半径、すなわち１０μｍ、に限定することのできる粒子を生成可能なものでなければならない。このような核種は当業界に公知であり、例えば、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕが挙げられる。より好ましい核種は、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，または１８４Ｏｓである。典型的には、特定の元素について、ＮＡＴ活性核種が富化される。ＮＡＴ活性核種は、これを担持する化合物を介してポリマーに付着される。そのような化合物は当業界に公知であり、以下に例示する。
【００２７】
ホウ素化アミノ酸およびペプチド、例えばボロノフェニルアラニン（ＢＰＡ）。参照：Soloway Chem. Rev. (1998) Vol 98, No.4, 1531-1534頁；およびSnyder, H R et al, J. Am. Chem. Soc. (1958) 80,835；
変性カルボランケージ化合物、例えば［Ｂ１０Ｈ１０］２−（デカヒドロデカボレート）および［Ｂ１２Ｈ１２］２−（ドデカヒドロドデカボレート）、例えばＣ２Ｂ１２Ｈ１２；参照：Hawthorn, M F et al, J. Am. Chem. Soc. (1959) 81, 5519およびGrimes, R. N. in“Carboranes”Academic Press NY(1970)；
メルカプトホウ酸塩、例えばメルカプトウンデカヒドロドデカボレート（Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ２−）（ＢＳＨ）。そのジナトリウム塩の構造を以下に示すが、これは二量体（ＢＳＳＢ）の形態も採る。参照：Soloway, A. H. et al J. Med. Chem. (1967) 10,714；
【化１】
【００２８】
ポリフィリンおよびフタロシアニン、例えばＢＯＰＰおよびＬＴＣＰ類（ＮｉＴＣＰ、ＣｕＴＣＰ、ＮｉＴＣＰＨおよびＣｕＴＣＰＨ）。このうちポルフィリンは、カルボランケージを４個有する。参照：Ozawa, T., Pro. Am. Ass. For Cancer, March 1998, 39, 586頁およびMiura, M., Radiation Research (2001) 155, 603-610（下記構造参照）、
ホウ素含有核酸前駆体、例えばホウ素化およびカルボラン含有ピリミジンおよびプリン、例えば５−（ジヒドロキシボリル）ウラシル、５−カルボラニルウラシル。参照：Liao, T.K J. Am. Chem Soc. (1964)86, 1869, Schinazi, R. F. J. Org. Chem. Soc. (1985) 50, 841, およびNemoto, H. J. Chem. Soc. Chem. Commun. (1994) 577；ならびに葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオウレア誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントイン、バルビツル酸塩。参照：Soloway Chem. Rev. (1998) Vol 98, No.4, 1545-1550頁。
【００２９】
【化２】
【００３０】
Ｒは、更にハロゲン（好ましくは、ＢｒまたはＣｌ）、またはニトロ基（ＮＯ）であってもよい。
【００３１】
他の核種も同様にして含まれる。例えばＢＮＣＴおよびＧｄＮＣＴの結合化合物で、Ｇｄ核種とカルボランケージが同一分子上にあるものが知られている。参照：Soloway (1998), Chem. Rev. Vol 98, No.4, 1519頁。
【００３２】
ＮＡＴ剤は、好ましくは、ポリマー−ＮＡＴ共役体の全質量の１〜３０％、より好ましくは５〜１０％を占める。
【００３３】
ＮＡＴ剤は、公知の技法、例えば電磁放射線（例えばＸ線、光、マイクロ波、ガンマ線）または中性子、または超音波、プロトン、カーボイオンの照射、π中間子治療法、電子線治療法、反陽子治療法、光子治療法、光力学治療法等、により活性化される。中性子の場合には、この技法を中性子捕捉治療と呼び、薬剤は中性子捕捉治療（ＮＣＴ）剤と呼ぶ。
【００３４】
リンカーは、ポリマーとＮＣＴ剤を結合し、ポリマー−ＮＡＴ共役体の生体内（in vivo）溶解性および毒性に影響しない任意の基であり得る。該リンカーには、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル、１−メチルブチルおよびメチルフェニル；およびアミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド、が含まれる。
【００３５】
好ましいペプチドは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｌａ，Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＰｈｅおよびＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅである。特に好ましいペプチドは、Ｇｌｙ−ＧｌｙおよびＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙである。
【００３６】
ペプチド・リンカーのいくつかは、リソソマル（lisosomal）酵素により劣化されて、ＮＡＴ化合物が腫瘍細胞中に放出される。
【００３７】
リンカーは、当業者には周知の慣用合成法により、ポリマーおよびＮＡＴ剤に結合される。下記の結合によりＮＡＴ剤はポリマーに結合される、すなわちアミノ結合、エステル結合、ヒドラジド結合、ウレタン（カーバメート）結合、イミン（シッフ塩基）結合、チオエーテル結合、アゾ結合あるいは炭素−炭素結合である。代りに、ＮＡＴ剤は、ポリマー自体に結合され得る、すなわちこの場合のリンカーは共役結合である。
【００３８】
アミド結合は、アミノ基（−ＮＨ２）およびカルボン酸基（ＣＯＯＨ）により形成される。後者は、酸塩化物（ＣＯＣｌ）等のより反応性の中間体に変換される、あるいはカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）もしくはジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を用いて、より反応性の中間体に変換される。アミノ基の他の基剤には、酸無水物およびエステルがある。エステル結合はヒドロキシル基（ＯＨ）と、上記した活性化カルボン酸および酸無水物とから形成される。ヒドラジド結合は、ハロゲン化アシル（例えば上記酸塩化物）とヒドラジン（ＮＨ２ＮＨＲ）とから形成される。カーバメート結合は、ホスゲン（ＣｌＣＯＣｌ）または、より好ましくはトリクロロメチルクロロホーメート（ＣＣｌ３ＯＣＯＣｌ）から、アルコールおよびアミンと反応させることにより形成される。カーボネート結合も、ホスゲンまたはトリクロロメチルクロロホーナートから、二つのアルコール基と反応させることにより形成される。イミン（またはシッフ塩基）は、アルデヒド（ＲＣＨＯ）もしくは、ケトン（ＲＣＯＲ）とアミンとの間での縮合により形成される。アルデヒドは、一級アルコールの酸化により容易に形成され、ケトンは二級アルコールの酸化により形成される。チオエーテルは、まずアルコール等の基を、例えばトシレート、メシレート、トリフレートあるいはハロゲン化物等の離脱性の良い基に変換し、それをメルカプチド（ＲＳ−）と反応させ、上記離脱性基をＲＳに変換することにより形成される。参照：例えばSchacht E (1987): Illum L, Davis SS (eds) “Polymers in drug delivery”, Wright, Bristol, 131頁。
【００３９】
典型的には、リンカーは、好ましくはアミド結合を介して、ポリマーのメタクリレート・モノマーの位置に結合される。ぶら下がっているＮＡＴ剤（あるいは他の薬学的活性剤）を有さないメタクリレート・モノマーは、なおリンカーを有することができ、このリンカーは、例えば２−アミノ−１−プロパノールなどのキャッピング剤でキャッピングされていてもよい。
【００４０】
効果的な治療計画およびＢＮＣＴ投与量計算のためには、腫瘍中の薬剤の位置および濃度を知ることが重要である。従って、治療計画の一部としての臨床の設定においては、臨床中性子投与量を計算するために、腫瘍部中のＮＡＴ剤の部位および量を知ることが重要である。例えば、巨大分子には、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、ＭＲＩ等の診断技法により像化可能な金属を担持させることができる。例えば親油性カルボラニルテトラフェニルポルフィン（ＬＴＣＰ）はメタルイオンを担持可能である。このような金属は、バナジウム（Ｖ）、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、ルテニウム（Ｒｕ）、テクネチウム（Ｔｃ）、クロム（Ｃｒ）、白金（Ｐｔ）、コバルト（Ｃｏ）、ニッケル（Ｎｉ）、銅（Ｃｕ）、亜鉛（Ｚｎ）、ゲルマニウム（Ｇｅ）、インジウム（Ｉｎ）、スズ（Ｓｎ）、イットリウム（Ｙ）、金（Ａｕ）、バリウム（Ｂａ）、タングステン（Ｗ）、ガドリニウム（Ｇｄ）およびガリウム（Ｇａ）から選ばれる。最も好ましい金属は、ＣｕとＮｉである。
【００４１】
陽電子放出トモグラフィー（ＰＥＴ）もまた、腫瘍中のポリマー−ＮＡＴ共役体の位置および濃度の表示を得るために用いることができる。ＰＥＴにおいては、１８Ｆ（半減期：約２時間）または１１Ｃ（半減期：２０分）等の放射性核種が好ましく用いられる。１つのフッ素原子を、ポリマー主鎖または理想的にはリンカー鎖中のアミノ酸、好ましくはＰｈｅに含ませる。これにより、診断および治療計画のために強力な手段が与えられ、個人に対し適合されたポリマー−ＮＡＴ共役体薬剤投与が可能になる。フッ素原子が存在することにより、周知のＰＥＴ像化化学を用いて診断する際に、放射性核種１８Ｆを該Ｆ原子で置きかえる手段が与えられる。
【００４２】
次に、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体の好ましい例のいくつかについて述べる。
【００４３】
好ましくは、ポリマーはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）とメタクリル酸とのコポリマーであり；リンカーは、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ等のペプチドであり；ＮＡＴ剤は、Ｏ−カルボラニルアラニンＢ１０Ｃ２Ｈ２−ＣＨ２ＣＨＣＯ２ＮＨ２、カルボラン・ブタミンＢ１０Ｃ２Ｈ２−（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２、ＢＰＡ（ｐ−ボロノフェニルアラニン）、Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ（ＢＳＨ）（メルカプトウンデカヒドロドデカカーボレート）、ホウ素化ポリフィリン、ＢＳＨ−グルタチオン・ジスルフィド、および水溶性テトラカルボニルフェニルポルフィリン（例えばＮｉＴＣＰ）から選ばれる。
【００４４】
特に好ましい共役体は以下の通りである。
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−カルボラン・ブタミン（Ｂ１０Ｃ２Ｈ１１（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２）
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−ＢＰＡ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−カルボラン・ブタミン（Ｂ１０Ｃ２Ｈ１１−（ＣＨ２）３ＣＨＣＯ２ＮＨ２）
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＣｕＴＣＰＨ
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＣｕＴＣＰＨＢｒ。
【００４５】
本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体は、腫瘍を選択的に目標付けられ、腫瘍特性のいくつかを利用する。例えば、腫瘍は、リンパ排液がないので負の浸透圧を有し、その結果ポリマー−ＮＡＴ共役体を捕捉する（いわゆる、強化された透過保持（ＥＰＲ）効果）。かくして、小化合物の大多数は拡散により腫瘍に入り、腫瘍床内に止まり、ギャップ接合部を通って細胞間を移動する。化合物は、通常細胞質へのエンドーサイトーシス（endocytosis）により細胞に入り、リソソーム区画に止まる。ポリマー−ＮＡＴ共役体は、細胞膜、細胞質小器官（例えばミトコンドリア、内皮小網あるいはゴルジ装置）、および／または核に目標付けられる。核または細胞質小器官により近いポリマー−ＮＡＴ共役体は、ＮＡＴ剤の開裂により生ずるイオン化性粒子（例えばαおよびＬｉイオン）による不可逆なＤＮＡないし細胞損傷の確率を増する。
【００４６】
ポリマー−ＮＡＴ共役体のポリマー成分も、体の特定領域に目標付けられるように変性することができる。例えば、肝細胞のアシアロ糖蛋白受容体は、ガラクトースおよびＮ−アセチルガラクトサミンを認識可能である。従って、これらの化合物をポリマー中に導入することにより本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体を肝臓に指向させることができる。
【００４７】
保護ヒドロキシル基を有するＨＰＭＡモノマーにガラクトースを導入することができる。例えば、１，２，３，４−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−６−Ｏ−メタクリロイル−α−Ｄ−ガラクトピラノースを合成して、ＨＰＭＡと共重合し、その後、保護基イソプロピリデンをギ酸により除く。参照：Chytry, V. et al New Polymer Material (1987)1,21.Ｎ−アシル化ガラクトサミンを、ｐ−ニトロピリジン末端側鎖を有する反応性ＨＰＭＡコポリマー前駆体を用いて結合する。これらを、室温および圧力下、ＤＭＳＯ中でガラクトサミンとのアミノリシスに付す。
【００４８】
更に、ポリマー−ＮＡＴ共役体の非選択的取り込みを、正電荷（例えばメタクリロキシルエチルトリメチルアンモニウム・クロライドを用いて）あるいは疎水性コモノマー（例えばＮ−［２−（４−ヒドロキシフェニルエチル）］アクリルアミドまたはＮ−メタクリロイルチロシナミドを用いて）をポリマー中に導入することにより、促進することができる。
【００４９】
ＮＡＴの必要性からは、ポリマー−ＮＡＴ共役体を体重１ｋｇ当り、０．１〜１００ｍｇ、好ましくは０．１〜５０ｍｇ、特に好ましくは１〜３０ｍｇ投与する。投与により、湿潤腫瘍組織１ｇ当り、活性核種（例えば１０Ｂ原子）の１０μｇ以上、好ましくは２５μｇ以上、より好ましくは、８０μｇ以上、更に好ましくは１６０μｇ以上、最も好ましくは２００μｇより大なる量で、与えるべきである。
【００５０】
なお、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体は、公知のＮＡＴ剤に比べて全身毒性が有意に減少しており、従って、より大なる腫瘍細胞中ＮＡＴ剤濃度をもたらすように投与量を増加することができる。毒性が減少しているのは、ポリマー−ＮＡＴ共役体中のＮＡＴ剤が生物学的環境と相互作用しないからである。更に、ポリマー−ＮＡＴ共役体は、長時間、すなわち数時間ないし数日にわたって、腫瘍に保持されるので、くり返して投与して臨床治療窓を拡げる必要がない。
【００５１】
ＮＡＴ剤に加えて、他の薬剤あるいは予見プロドラッグを、本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体に導入することにより、抗癌作用を増大することもできる。すなわち一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（Ｌ−化学療法剤）ｍ（ここでＰ，Ｌ，ＮＡＴおよびｎは前記定義した意味を有する）を有するポリマー−ＮＡＴ共役体を用いることができる。ここでＬは同じでも異なってもよく；ｍは１〜１０００、好ましくは１〜５００、より好ましくは１〜１００、最も好ましくは１〜２０、の整数である。そのような化学療法剤には、例えば下記の任意のものが含まれる：すなわち、５−（アズルダブ−１−イル）−４−ジヒドロキシルアミノ−２−ニトロベンズアミド、フェニルジアミン・マスタード、安息香酸マスタード、ガンシクロビル・トリホスフェート、アデニン・アラビノヌクレオチド・トリホスフェート（ａｒａＴＡＰ）、過酸化水素、シアン化物、超酸化物、メトトレキサート、マイトマイシン・アルコール、エトポシド、パリトキシオン、メルファラン、５−（アジリジン−１−イル）−４−ヒドロキシルアミノ−２−ニトロベンズアミド、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、タキサン類（例えばタキソールおよびタキソテーレ）、トポイソメラーゼ抑制因子（例えばカンプトテシンおよびトポテカンシクロホスファミド）、カルムスチン、５−フルオロウラシル、シトラビン、メルカプトプリン、アントラサイクリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ビンカ・アルカロイド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ダクチノマイシン、マイトマイシンＣ、ラスパラジナーゼ、Ｇ−ＣＳＦ、シスプラチンおよびカルボプラチン、である。
【００５２】
この型の好ましい共役体には、式：ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｙ）］（ここでＹは抗癌剤を示す）で表わされるものがあり、例えば以下の通りである：
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙドキソルビシン）］
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙエリプチシン）］
ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ［（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＨ）（Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙシスプラチン）］
【００５３】
本発明のポリマー−ＮＡＴ共役体の一つの特徴は、ポリマーに結合した目標化分子部を必要とすることなく、腫瘍中に蓄積することである。しかしながら、ポリマーには、抗癌化学療法剤を伴うか否かに拘わらず、該ポリマーに結合した目標化分子部を含むことができる。このような目標化分子部により、選択性を持たせて、共役体の生体内分布を有意に変化させることができる。このような目標化分子部には、（Ｎ−アシル化）ガラクトサミン、（６−Ｏ−結合）ガラクトース、（Ｎ−アシル化）フコーシルアミン、メラニン細胞刺激ホルモンおよびセクレチン、が含まれる。
【００５４】
以下、本発明を、現行のＢＮＣＴ剤の不都合を克服する新規なポリマー−ＮＡＴ共役体のいくつかの例により説明する。
【実施例】
【００５５】
ポリマーは、ポリマー・ラボラトリース・リミテッド（Polymer Laboratories Ltd.）より入手した。分析証明はバターヮース（Butterworth）より得た。
【００５６】
以下の実施例１および２では、４−ボロノフェニルアミン（ＢＰＡ）とポリマーのｐ−ニトロフェニルエステル基と反応させることにより、以下の反応式に示すように、ｐ−ニトロフェノールを排除することにより、ホウ素含有ポリマーを形成する。
【化３】
【００５７】
ポリマー・ラボラトリース・リミテッドより市販されるポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＯＮｐ）は、平均分子量が２８，１００であり、重量平均分子量／数平均分子量比Ｍｗ／Ｍｎ＝１．３１の広い分子量分布を示し、平均値としてｘ＝１５３、ｙ＝１７（ＭＷ＝２７，６２４）となる。ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）は、平均分子量が４７，２００（Ｍｗ／Ｍｎ＝１．５３）であり、平均分子量から、ｘおよびｙの平均値はｘ＝２２５、ｙ＝２５（ＭＷ＝４７，１３１）と計算される。これらの値を、ホウ素置換フェニルアラニンの添加量を計算するのに用いている。
【００５８】
（実施例１）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）のｇ量レベルでの調製
粉末ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＯＮｐ）（１．１ｇ、４０．０μｍｏｌ）および（１０Ｂ−富化）４−ボロノフェニルアラニン（０．１５ｇ、７４０μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、混合物を攪拌して全物質を溶解して濁った溶液を得た。トリエチルアミン（４滴）を触媒として加えることにより、溶液を黄色化させた。溶液をアルゴン下２０〜２２℃（油浴温度）で一夜攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な固体沈殿を残した。この粘稠な固体沈殿を、追加のジエチルエーテルで、粘稠性でなくなるまで洗浄した。残留溶媒は、減圧（約０．４ｍｍＨｇ）、３６℃で３時間かけて留去した。生成物ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）がベージュないし黄味がかった固体として得られた（１．２０ｇ、１０４％）。１Ｈ−ＮＭＲ分析により、残留ジエチルエーテルおよびＤＭＳＯの若干量が見出された。
【００５９】
バターワース（Butterworth Laboratories Ltd.）によりホウ素分析を行った。ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）中のホウ素含量は０．４７％（予期値は０．５９％）であった。低い値は、ポリマーと４−ボロノフェニルアラニンとの反応の不完全性および残留溶媒の存在によるものと解される。
【００６０】
（実施例２）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）のｇ量レベルでの調製
粉末ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（１．１ｇ、２３．３μｍｏｌ）および（１０Ｂ−富化）４−ボロノフェニルアラニン（０．１３ｇ、６２５μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、混合物を攪拌して全物質を溶解して濁った溶液を得た。トリエチルアミン（４滴）を触媒として加えることにより、溶液を黄色化させた。溶液をアルゴン下２０〜２２℃（油浴温度）で一夜攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な固体沈殿を残した。この粘稠な固体沈殿を、追加のジエチルエーテルで、粘稠性でなくなるまで洗浄した。残留溶媒は、減圧（約０．４ｍｍＨｇ）、３６℃で３時間かけて留去した。生成物ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｆ［４−Ｂ（ＯＨ）２］）がベージュないし黄味がかった固体として得られた（１．２３ｇ、１０２％）。１Ｈ−ＮＭＲ分析により、残留ジエチルエーテルおよびＤＭＳＯの若干量が見出された。
【００６１】
バターワース（Butterworth Laboratories Ltd.）によりホウ素分析を行った。ポリマー中のホウ素含量は０．４０％（予期値は０．４８％）であった。わずかに低い値は、ポリマーと４−ボロノフェニルアラニンとの反応の不完全性および残留溶媒の存在によるものと解される。
【００６２】
実施例１および２で得たポリマー−ＮＡＴ共役体の化学構造は、以下の通りである：
【化４】
【００６３】
実施例１と２のポリマー−ＮＡＴ共役体は、それらのペプチド・リンカーにおいてのみ相違する。実施例１のポリマー−ＮＡＴ共役体は、ペプチド・リンカーＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを有し、これは細胞のリソソマル区画において酵素的に劣化ないし分解されてＢＰＡを放出する。これに対し、実施例２のポリマー−ＮＡＴ共役体はペプチドＧｌｙ−Ｇｌｙを有し、これは分解せずに全体分子をそのまま残す。生分解性ポリマーは、ホウ素含有分子を細胞質中に放出することができ、細胞小器官および最も重要には核に拡散する機会を有する。ＢＮＡＴにおいては、ホウ素担持分子がＤＮＡに近ければ近いほど、細胞が死ぬ。しかしながら、非劣化性のポリマー−ＮＡＴ共役体では、分子は無傷で残り、一旦内在化されると細胞を離れない。これにより、くり返し投与によりホウソ化ポリマーの非常に高濃度での細胞中蓄積が起こり得る。もし、そうでない場合には、くり返し投与はホウソ化ポリマーの全身毒性のために不可能となり得る。
【００６４】
（実施例３）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）（出願人コード：ＰＰ４０３）の調製
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）を、市販のナトリウム・ボロカプテートを用いて合成した。ＵＳ６，０１７，９０２号公報に記載の方法により、ナトリウム・ボロカプテートを、まず「ステップ１」で、フェニルアラニン誘導体、ナトリウム・ボロノカプテート・メルファラン（ＢＳＭｅｌ）に転換した。次いで、「ステップ２」でＢＳＭｅｌをポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ−ＯＮｐ）と反応させて、ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｆ ＢＳＭｅｌ）を生成する。
【００６５】
【化５】
【００６６】
ナトリウム・ボロカプテート（０．９５ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）を５％炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｍｌ）中に溶解した。黄色味がかった固体のメルファラン（０．２２ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を添加し、懸濁液を室温で４８時間攪拌した。黄色調の固体メルファランは完全に溶解し、微細な白色沈殿物が生成した。生成固体を加熱（浴温約１００℃）して、水（３０ｍｌ）に溶解した。生成した溶液を室温まで冷却し、ろ過した。濃塩酸を注意深く滴下して、溶液のｐＨを２．７に調整することにより、微細固体を沈殿させた。一夜冷却（約４℃）した後、生成物をろ過により回収し、冷水で洗浄した。残留溶媒を真空（約０．４ｍｍＨｇ）下、３０℃で５時間蒸発させた。生成物は、薄い黄褐色の固体（０．１９ｇ、６５％）として得られた。
【００６７】
＜ステップ２：ＢＳＭｅｌポリマーの調製＞
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−Ｏ−Ｎｐ）（１．１ｇ、４０．０μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。上記ステップ１からのＢＳＭｅｌ（０．０６９ｇ、１６９μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（２滴）を滴下して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン２０〜２２℃（油浴温）で一夜攪拌した。３−アミノ−１−プロパノール（４１μｌ、５３６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に３時間攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な沈殿物を得た。この黄色調固体を、粘稠でなくなるまで、更に追加のジエチルエーテルにより洗浄した。残留溶媒を真空蒸発した。収量：１．１０ｇ。
【化６】
【００６８】
この非生分解性のホウ素含有ポリマーは、ホウ素担体当り、１２のホウ素原子を供給可能であり、ポリマー分子当り３〜４個のＢＳＭｅｌ分子が存在する。従って、ＢＳＭｅｌポリマーは、実施例１および２と比べて、ポリマー分子当り３０〜４０倍多くのホウ素を供給できる。これは、比較的低濃度のポリマーで高濃度のホウ素を供給する強力な方法を与えるものである。
【００６９】
（実施例４）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＢＳＭｅｌ）（ＰＰ４０４）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−Ｏ−Ｎｐ）（１．１ｇ、２３．３μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（１１ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．０６２ｇ、１５２μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（２滴）を滴下して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン２０〜２２℃（油浴温）で一夜攪拌した。３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に３時間攪拌した。溶液をジエチルエーテル（２２０ｍｌ）で希釈し、溶媒を傾斜により除いて、粘稠な沈殿物を得た。この非白色固体を、粘稠でなくなるまで、更に追加のジエチルエーテルにより洗浄した。残留溶媒を真空蒸発した。収量：０．９５ｇ。
【００７０】
【化７】
【００７１】
（実施例５）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙパクリタキセル（ＰＰ４０５）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（２．１５ｇ、４５．６μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（２２ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．１４６ｇ、３６６μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（５２μｌ、３６６μｍｏｌ）を添加して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン下、２０〜２２℃（油浴温度）で５時間攪拌した。パクリタキセル（０．３１３ｇ、３６６μｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン触媒（０．０１５ｇ、１２３μｍｏｌ）を添加した。２０〜２２℃で一夜攪拌後、３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に４時間攪拌した。溶液を、ゆっくり攪拌されているジエチルエーテル（５００ｍｌ）中に注ぎ、次いで溶媒を傾斜除去して、粘稠な沈殿物を残した。黄色調の固体を、粘稠でなくなるまで追加のジエチルエーテルで洗浄し、残留溶媒を真空蒸発した。収量：２．４４ｇ（９８％）。
【００７２】
【化８】
【００７３】
（実施例６）
・ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙドキソルビシン（ＰＰ４０６）の調製
粉末状ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＯＮｐ）（２．１５ｇ、４５．６μｍｏｌ）を乾燥フラスコ中に入れ、隔膜でシールし、アルゴンで置換した。無水ＤＭＳＯ（２２ｍｌ）を加え、全量が溶解するまで混合物を攪拌した。ＢＳＭｅｌ（０．１４６ｇ、３６６μｍｏｌ）を添加した。全固体を溶解後、トリエチルアミン（５２μｌ、３６６μｍｏｌ）を添加して、溶液を黄色化した。溶液を、アルゴン下、２０〜２２℃（油浴温度）で５時間攪拌した。塩酸ドキソルビシン（０．２１２ｇ、３６６μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５２μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加した。２０〜２２℃で一夜攪拌後、３−アミノ−１−プロパノール（３５μｌ、４５６μｍｏｌ）を添加し、溶液を更に４時間攪拌した。溶液を、ゆっくり攪拌されているジエチルエーテル（５００ｍｌ）中に注ぎ、次いで溶媒を傾斜除去して、粘稠な沈殿物を残した。赤色の固体を、粘稠でなくなるまで追加のジエチルエーテルで洗浄し、残留溶媒を真空蒸発した。収量：２．５５ｇ（１０５％）。
【００７４】
【化９】
【００７５】
（生体内分布の検討）
ＥＭＴ−６癌腫を有する雌のＢＡＬＢ／ｃマウス（２０〜２５ｇ）を用いた。１ケージ当り４匹のマウスを温度制御室内に収容し、自由に食物および水が取れるようにした。マウスを、制御した明／暗サイクルに維持し、７００〜１９００時間点灯した。全ての検討実験において、ケタミン（１２０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（２０ｍｇ／ｋｇ）により感覚麻痺状態を維持した。マウスは、一般健康状態について毎日モニターした。マウスは、必要な場合、感覚麻痺状態で安楽死させた。
【００７６】
上記実施例３および４で合成した二つのホウ素化ポリマー、すなわち、ＰＰ４０３およびＰＰ４０４を、ＥＭＴ−６腫瘍を有するマウスの尾の静脈から注入した。化合物は、５０ｍｇ／ｍｌ（０．５ｍｇホウ素／ｍｌ）濃度で塩水溶液として注入した。投与容積は、一度投与（a single bolus injection）で、０．０１ｍｌ／ｇｂｗとし、約５ｍｇホウ素／ｋｇの投与量を供給した。
【００７７】
組織試料内のホウ素濃度は、直流プラズマ原子発光分析法（ＤＣＰ−ＡＥＳ）により決定した。参照：Coderre, J.A., Button, T.M., Micca, P.L. Fisher, C., Nawrocky, M.M., およびLiu, H.B., Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. (1994)30, 643-652.
【００７８】
マウスの外見、行動レベルおよび一般的挙動の目視観察からは、毒性の徴候は見られなかった（参照：Miura, M., Micca, P.L., Fisher, C.D., Gordon, C.R., Heinrichs, J.C. et al. Brit. J. Radiol. (1998) 847, 773-781）。ホウ素分析のための注入後、６、２４、４８および７２時間において、腫瘍、血液、脳および肝臓試料を採取した。試料採取の１時点あたり４匹のマウス（合計１６匹）を使用した。ホウ素の生体分布データの詳細を下表２に示す。
【００７９】
ＰＰ４０３からの腫瘍ホウ素濃度は、ＰＰ４０４からのそれに比べて約３倍の大きさを示す。これはＰＰ４０３中の非分解性リンカーによるものと解される。肝臓：腫瘍ホウ素比は、ＰＰ４０３の全点において２：１〜３：１の範囲であり、ＰＰ４０４について４．５：１〜６：１であった。腫瘍：血液ホウ素比は、ＰＰ４０３の場合７２時間の時点になるまでは１：１未満であり、ＰＰ４０４の場合４８時間の時点になるまでは１：１未満であった。腫瘍ホウ素濃度の絶対値は低いが、供給ホウ素投与量も低かった。ＣＲＭにおけるＣｕＴＣＰＨを用いる同様のホウ素投与による生体分布データに比べて、腫瘍取り込み量は２．３倍低いが肝臓取り込み量は５倍低い。
【００８０】
【表２】
【００８１】
表２は、共役体が腫瘍に目標付けられ、生分解性リンカーのある場所でＮＡＴ剤を放出可能であることを示すものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされる共役体。
【請求項２】
該ポリマーが２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーである請求項１に記載の共役体。
【請求項３】
該ポリマーが、５〜１００、好ましくは１０〜７０、より好ましくは１５〜４５、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａの分子量を有する請求項１または２に記載の共役体。
【請求項４】
ヒドロキシプロピルメタクリルアミドとメタクリレートとの比が２０：１〜１：１である請求項１〜３のいずれかに記載の共役体。
【請求項５】
核種活性化治療剤が中性子捕捉治療剤である請求項１〜４のいずれかに記載の共役体。
【請求項６】
中性子捕捉治療剤が、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕから選ばれた少なくとも１の核種を中性子捕捉反応を起すに充分な量で含む請求項５に記載の共役体。
【請求項７】
核種が１０Ｂである請求項６に記載の共役体。
【請求項８】
ＮＡＴが、ホウ素化アミノ酸もしくはペプチド、変性カルボランケージ化合物、メルカプトホウ酸塩、ホウ素含有ポルフィリンもしくはフタロシアニン、ホウ素含有核酸前駆体、ホウ素含有葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオ尿素誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントインまたはバルビツル酸塩である請求項５〜７のいずれかに記載の共役体。
【請求項９】
ＮＡＴが、共役体の全質量の１〜３０％、好ましくは５〜１０％を占める請求項１〜８のいずれかに記載の共役体。
【請求項１０】
該リンカーが、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル；アミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド；または共有結合である請求項１〜９のいずれかに記載の共役体。
【請求項１１】
ｎが、１〜５００、好ましくは１〜１００、特に好ましくは１〜２０の整数である請求項１〜１０のいずれかに記載の共役体。
【請求項１２】
該リンカー分子部を介して該ポリマーと結合される化学療法剤を更に含む請求項１〜１１のいずれかに記載の共役体。
【請求項１３】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＢＳＭｅｌ）。
【請求項１４】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＢＳＭｅｌ）。
【請求項１５】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−パクリタキセル。
【請求項１６】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ドキソルビシン。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の共役体を含む薬剤組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれかに記載の共役体の癌治療用薬剤の調製への使用。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされ、且つ更に該結合分子部Ｌを介して該ポリマーに結合した化学療法剤を含む共役体。
【請求項２】
該ポリマーが２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーである請求項１に記載の共役体。
【請求項３】
該ポリマーが、５〜１００、好ましくは１０〜７０、より好ましくは１５〜４５、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａの分子量を有する請求項１または２に記載の共役体。
【請求項４】
ヒドロキシプロピルメタクリルアミドとメタクリレートとの比が２０：１〜１：１である請求項１〜３のいずれかに記載の共役体。
【請求項５】
核種活性化治療剤が中性子捕捉治療剤である請求項１〜４のいずれかに記載の共役体。
【請求項６】
中性子捕捉治療剤が、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕから選ばれた少なくとも１の核種を中性子捕捉反応を起すに充分な量で含む請求項５に記載の共役体。
【請求項７】
核種が１０Ｂである請求項６に記載の共役体。
【請求項８】
ＮＡＴが、ホウ素化アミノ酸もしくはペプチド、変性カルボランケージ化合物、メルカプトホウ酸塩、ホウ素含有ポルフィリンもしくはフタロシアニン、ホウ素含有核酸前駆体、ホウ素含有葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオ尿素誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントインまたはバルビツル酸塩である請求項５〜７のいずれかに記載の共役体。
【請求項９】
ＮＡＴが、共役体の全質量の１〜３０％、好ましくは５〜１０％を占める請求項１〜８のいずれかに記載の共役体。
【請求項１０】
該リンカーが、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル；アミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド；または共有結合である請求項１〜９のいずれかに記載の共役体。
【請求項１１】
ｎが、１〜５００、好ましくは１〜１００、特に好ましくは１〜２０の整数である請求項１〜１０のいずれかに記載の共役体。
【請求項１２】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ドキソルビシン。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の共役体を含む薬剤組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれかに記載の共役体の癌治療用薬剤の調製への使用。
【請求項１】
一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされる共役体。
【請求項２】
該ポリマーが２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーである請求項１に記載の共役体。
【請求項３】
該ポリマーが、５〜１００、好ましくは１０〜７０、より好ましくは１５〜４５、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａの分子量を有する請求項１または２に記載の共役体。
【請求項４】
ヒドロキシプロピルメタクリルアミドとメタクリレートとの比が２０：１〜１：１である請求項１〜３のいずれかに記載の共役体。
【請求項５】
核種活性化治療剤が中性子捕捉治療剤である請求項１〜４のいずれかに記載の共役体。
【請求項６】
中性子捕捉治療剤が、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕから選ばれた少なくとも１の核種を中性子捕捉反応を起すに充分な量で含む請求項５に記載の共役体。
【請求項７】
核種が１０Ｂである請求項６に記載の共役体。
【請求項８】
ＮＡＴが、ホウ素化アミノ酸もしくはペプチド、変性カルボランケージ化合物、メルカプトホウ酸塩、ホウ素含有ポルフィリンもしくはフタロシアニン、ホウ素含有核酸前駆体、ホウ素含有葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオ尿素誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントインまたはバルビツル酸塩である請求項５〜７のいずれかに記載の共役体。
【請求項９】
ＮＡＴが、共役体の全質量の１〜３０％、好ましくは５〜１０％を占める請求項１〜８のいずれかに記載の共役体。
【請求項１０】
該リンカーが、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル；アミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド；または共有結合である請求項１〜９のいずれかに記載の共役体。
【請求項１１】
ｎが、１〜５００、好ましくは１〜１００、特に好ましくは１〜２０の整数である請求項１〜１０のいずれかに記載の共役体。
【請求項１２】
該リンカー分子部を介して該ポリマーと結合される化学療法剤を更に含む請求項１〜１１のいずれかに記載の共役体。
【請求項１３】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＧ−ＢＳＭｅｌ）。
【請求項１４】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−ＧＦＬＧ−ＢＳＭｅｌ）。
【請求項１５】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−パクリタキセル。
【請求項１６】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ドキソルビシン。
【請求項１７】
請求項１〜１６のいずれかに記載の共役体を含む薬剤組成物。
【請求項１８】
請求項１〜１６のいずれかに記載の共役体の癌治療用薬剤の調製への使用。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：Ｐ−（Ｌ−ＮＡＴ）ｎ（ここで、Ｐは分子量５〜６０００ｋＤａを有するＮ−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーを示し、ＮＡＴは核種活性化治療剤を示し、Ｌは該ポリマーを該中性子捕捉治療剤と結合可能な結合分子部を示し、ｎは１〜１０００の整数を示す）で表わされ、且つ更に該結合分子部Ｌを介して該ポリマーに結合した化学療法剤を含む共役体。
【請求項２】
該ポリマーが２−ヒドロキシプロピルメタクリルアミド−メタクリレートコポリマーである請求項１に記載の共役体。
【請求項３】
該ポリマーが、５〜１００、好ましくは１０〜７０、より好ましくは１５〜４５、最も好ましくは２０〜４０ｋＤａの分子量を有する請求項１または２に記載の共役体。
【請求項４】
ヒドロキシプロピルメタクリルアミドとメタクリレートとの比が２０：１〜１：１である請求項１〜３のいずれかに記載の共役体。
【請求項５】
核種活性化治療剤が中性子捕捉治療剤である請求項１〜４のいずれかに記載の共役体。
【請求項６】
中性子捕捉治療剤が、６Ｌｉ，１０Ｂ，２２Ｎａ，５８Ｃｏ，１１３Ｃｄ，１２６Ｉ，１３５Ｘｅ，１４８ｍＰｍ，１４９Ｓｍ，１５１Ｅｕ，１５５Ｇｄ，１５７Ｇｄ，１６４Ｄｙ，１８４Ｏｓ，１９９Ｈｇ，２３０Ｐａ，２３５Ｕおよび２４１Ｐｕから選ばれた少なくとも１の核種を中性子捕捉反応を起すに充分な量で含む請求項５に記載の共役体。
【請求項７】
核種が１０Ｂである請求項６に記載の共役体。
【請求項８】
ＮＡＴが、ホウ素化アミノ酸もしくはペプチド、変性カルボランケージ化合物、メルカプトホウ酸塩、ホウ素含有ポルフィリンもしくはフタロシアニン、ホウ素含有核酸前駆体、ホウ素含有葉状成長因子、ホルモン、放射線増感剤、ホスフェート、ホスホネート、アミド燐酸塩、環状チオ尿素誘導体、アミン、プロマジン、ヒダントインまたはバルビツル酸塩である請求項５〜７のいずれかに記載の共役体。
【請求項９】
ＮＡＴが、共役体の全質量の１〜３０％、好ましくは５〜１０％を占める請求項１〜８のいずれかに記載の共役体。
【請求項１０】
該リンカーが、カルボニル、アミド、ヒドロキシルもしくはハロゲンで置換されてもよい飽和または不飽和の直鎖または分岐Ｃ１−１５アルキル；アミノ、チオ、カルボキシル、カルボキシアミドもしくはイミダゾール基で置換されてもよい、好ましくは１〜１０のアミノ酸長さを有するペプチド；または共有結合である請求項１〜９のいずれかに記載の共役体。
【請求項１１】
ｎが、１〜５００、好ましくは１〜１００、特に好ましくは１〜２０の整数である請求項１〜１０のいずれかに記載の共役体。
【請求項１２】
ポリ（ＨＰＭＡ−ｃｏ−ＭＡ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＢＳＭｅｌ）Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ドキソルビシン。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれかに記載の共役体を含む薬剤組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれかに記載の共役体の癌治療用薬剤の調製への使用。
【公表番号】特表２００６−５０２９９３（Ｐ２００６−５０２９９３Ａ）
【公表日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５２２２８８（Ｐ２００４−５２２２８８）
【出願日】平成１５年７月４日（２００３．７．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００２９１９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／００９１３６
【国際公開日】平成１６年１月２９日（２００４．１．２９）
【出願人】（５０５０２８１３０）シメイ ファーマスーティカルズ ピーエルシー (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年７月４日（２００３．７．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００３／００２９１９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／００９１３６
【国際公開日】平成１６年１月２９日（２００４．１．２９）
【出願人】（５０５０２８１３０）シメイ ファーマスーティカルズ ピーエルシー (1)
【Ｆターム（参考）】
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