新規のコレスト−４−エン−３−オンオキシム誘導体、それを含む医薬組成物及び調製方法
本発明は、新規化合物、特に、コレスト−４−エン−３−オンオキシム誘導体、及び、医薬、特に細胞保護薬、特定的には、神経保護薬、心保護薬及び／又は肝保護薬としてのその使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規の化合物、特に、コレスト−４−エン−３−オンオキシム誘導体、その医薬としての使用、特に、細胞保護薬、特に、神経保護薬、心保護薬及び／又は肝保護薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
上記の医薬は細胞変性又は細胞死、特に、運動神経細胞及び／又は心筋細胞及び／又は肝細胞の細胞変性又は細胞死に関連する病態及び外傷に特に適している。
【０００３】
本発明は、上記の化合物を含む医薬組成物及びその調製方法にも関する。
【０００４】
細胞変性プロセスは所望しない細胞活性及び細胞死をしばしばもたらす細胞の機能障害を特徴とする。
【０００５】
細胞はストレスに応答して適用機構を発達し、それにより、その寿命を延ばし、又は、細胞死を遅延させ又は阻害している（細胞保護機構）。
【０００６】
しかしながら、これらの細胞保護機構は時折、不十分であり、不適切であり、又は、有効性を発揮するには遅すぎ、そして細胞は死亡する。それゆえ、細胞保護を促進する新規の細胞保護薬が入手可能になることが有用であることは明らかであろう。
【０００７】
主な細胞死機構のなかで、ネクローシス、アポトーシス及びネクロトーシスの間に本質的な区別がなされる。
【０００８】
ネクローシスはいわゆる「偶発的」細胞死であり、それは細胞損傷の際に起こる。最も影響を受け、細胞ホメオスタシスに変化をもたらすのは細胞の形質膜である。細胞は形質膜の溶解をもたらすところまで水を吸い込むであろう。この細胞溶解は周囲の媒体中に細胞質含分を開放させる。ネクローシスは炎症プロセスの起源となる。
【０００９】
ネクローシスは細胞群又は組織に影響を及ぼしうるが、他の隣接部位は生きたままである。これにより生じるトランスフォーメーションは細胞又は組織の壊死である。
【００１０】
別の言い方をすれば、ネクローシスは、器官内での血液循環の停止もしくは低減、高熱（温度の有意な上昇）、化学品による中毒症、身体的衝撃などの重大な外傷などの事象に次いで、細胞がその生命が終わりとなる際に起こる形態変化と規定される。
【００１１】
最もよく知られているネクローシスの１つは冠状動脈の閉塞（通過障害）による梗塞 （心筋への血液供給の中断）の間の心筋のネクローシスである。
【００１２】
アポトーシスは生命体の通常の生理機能の不可欠な部分を形成する。これは非常に制御された生理学的形態の細胞死であり、そして多細胞生物の生存に必要とされている。アポトーシスは胚形成にとって非常に重要なプロセスである。
【００１３】
アポトーシスを経験する細胞、すなわち、アポトーシス性細胞は他の細胞から分離される。アポトーシスは、通常、組織内の個別の細胞に関わるものであり、炎症を起こさない。アポトーシスの形態学的観点からの特徴の１つは核と細胞質の両方の有意な凝結であり、それにより、細胞体積の有意な減少がもたらされる。その後、核は断片化され、各フラグメントはダブルエンベロープにより包囲される。アポトーシス性ボディ（細胞質要素及び核要素）はその後、開放され、そして貪食により隣接細胞により吸収されるであろう。
【００１４】
アポトーシスは種々の様式で誘導されうる。たとえば、放射線、化学物質又はホルモンの存在は細胞内でのアポトーシス性事象のカスケードを誘発することができる刺激である。不完全な有糸分裂又はＤＮＡへの損傷などの細胞内シグナルもアポトーシスを誘発することがある。
【００１５】
アポトーシスは遺伝毒性物質の作用の後又は病気の際にも起こる。特定の病態は特定の細胞集団の損失をもたらす異常アポトーシスを特徴とし、肝毒性、網膜症、心毒性などである。
【００１６】
それゆえ、生理学的アポトーシスと病理学的アポトーシスとは区別される。本発明は本質的に病理学的アポトーシスに関わる。
【００１７】
ネクロトーシスなどの他の細胞死機構が存在し、それはネクローシスとアポトーシスの特徴を示す。ネクロトーシスにより死んでいく細胞はネクローシスによる細胞死の場合と同様の特徴を示すが、この機構の生化学工程はアポトーシスの場合とのほうが似通っている。この細胞死機構は、たとえば、虚血で起こる。
【００１８】
それゆえ、本発明の１つの目的は、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスを阻止し及び／又は処置することができる新規の医薬（抗ネクローシス及び／又は抗アポトーシス及び／又は抗ネクロトーシス薬）を入手可能にすることである。
【００１９】
細胞変性プロセスは、とりわけ、まとめて変性疾患又は変性状態と呼ばれる病理学的状況により生じ、外傷により生じ、又は、様々な要因への暴露により生じることができる。
【００２０】
これらの外傷及び要因としては、たとえば、放射線（ＵＶ、ガンマ）への暴露、低酸素又は酸素欠乏、栄養素欠乏、成長因子欠乏、毒、細胞毒、廃棄物、環境毒、フリーラジカル、反応性酸素種を挙げることができる。医療処置の状況で治療剤として使用される化学もしくは生物学的物質、たとえば、細胞分裂阻害剤又は抗炎症剤も言及されうる。
【００２１】
変性プロセスを特徴とする最も有意な病理学的状況としては、
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬剤により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）、
が挙げられる。
【００２２】
さらに、神経変性プロセスは神経細胞の機能不全及び死を特徴とし、それは脳（中枢神経系、ＣＮＳ）、脊髄及び末梢神経系（ＰＮＳ）により媒介される神経学的機能の損失をもたらす。それは、とりわけ、神経変性疾患もしくは症状と総称される病理状態から、外傷から、又は、毒への暴露から生じることがある。
【００２３】
神経変性プロセスを特徴とする最も有意な病態は下記のとおりである。
慢性神経変性疾患、特に、慢性脱髄性疾患、遺伝性もしくは孤発性の、有利にはアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、特に、小児クロイツフェルト−ヤコブ病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アドレノロイコジストロフィーを含むロイコジストロフィー、てんかん、認知症、統合失調症、及び、ＡＩＤＳに関連する神経症候群；
老化に関連する神経細胞障害；
遺伝的であるか又は病変により生じる末梢神経障害、たとえば、ファブリ病、シャルコー・マリー・トゥース病、クラッベ病、ロイコジストロフィー、糖尿病性神経障害及び抗癌剤処置により生じる障害など；
脳、末梢神経又は脊髄の外傷；
脳血管障害に続く又は血液灌流の欠如により生じる、脳又は脊髄の虚血；
視覚神経細胞の遺伝的であるか、傷害により生じるか又は老化に関連している変性、たとえば、黄斑変性症、色素性網膜炎、又は、緑内障により誘発される視神経の変性；
聴覚神経細胞の遺伝的であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性で、聴力の低下又は損失をもたらす変性。
【００２４】
これらの病態において影響を受ける幾つかの信号経路は多くの神経変性疾患に一般的である。アルツハイマー病は最も頻繁にある認知症である。アルツハイマー病は脳の萎縮の発現をもたらし、海馬における支配的な神経細胞損失をもたらし、そしてコリン作動神経にも影響を及ぼす。葉性萎縮（ピック病、クロイツフェルト−ヤコブ病）、レビー小体型認知症、血管性認知症、パーキンソン病などの他の病態はこれらの認知症の兆候の起源における有意な神経細胞死と関係がある。
【００２５】
神経細胞が死ぬことから保護するための治療アプローチは神経栄養タンパク質の供給である。
【００２６】
これらのタンパク質、たとえば、ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）、ＣＮＴＦ（毛様体神経栄養因子）、ＮＧＦ（神経成長因子）、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）は胎生期発達の間に又はおとなの病変後に合成される。これらの成長因子は神経細胞の生存、成熟及び分化を促進する。さらに、アポトーシス機構を阻害し、複数の生存経路を活性化し、そして多数の神経細胞群を保護する。その使用は多くの細胞変性において提案されている。
【００２７】
神経栄養因子の発現を活性化し又はこれらの因子の作用を模倣する化合物は神経変性症候群の処置のための治療可能性を有する。
【００２８】
特に、神経変性の処置のための神経栄養素分子の供給には３つの目的がある。
神経細胞の末梢もしくは中枢標的による供給不全及び／又は神経栄養因子の逆行輸送の問題に関連する神経栄養因子の潜在的欠乏を補うこと、
変性カスケードに関与する生化学経路に非特異的に介入すること、
神経末端の樹状成長及び分枝の自然補償現象を促進すること。
【００２９】
これらの化合物は、それゆえ、多くの病態、特に、末梢及び中枢神経系に影響を及ぼす病態において有利な効果を有するであろう。
【００３０】
さらに、上記の文脈で、運動神経細胞は脊髄及び脳幹に特に存在する神経細胞である。その変性又は死は四肢の筋肉の進行性衰弱をもたらす可能性があり、その後、筋肉の萎縮及び可能性としては痙攣（すなわち、永久収縮）をもたらすことがある。
【００３１】
脊髄及び／又は延髄運動神経細胞の変性及び死により生じる最も重要な病態はシャルコー病、又は、ルー・ゲーリック病の名称でも知られている筋萎縮性側索硬化症、及び、ウェルドニッヒ・ホフマン病又はクーゲルベルク・ヴェランダー病の名称でも知られている脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症である。
【００３２】
さらに、運動神経細胞の変性は脊髄又は末梢運動神経の圧潰及び／又は切開による外傷の場合に観察される。
【００３３】
より一般に、脊髄性筋萎縮症は脊髄の運動神経細胞の変性又は死が関与する病気として参照される。
【００３４】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）はルイスボディなどの異なるタイプの封入に関連しそして脊髄及び皮質運動神経細胞の変性を特徴とする神経変性疾患であり、その致死性転帰は時折、前頭葉認知症に関連している。ＡＬＳの進展の間に、神経支配の欠如により、変性現象は脳内だけでなく、脊髄でも起こり、結果的に、筋肉でも起こる。
【００３５】
化学構造に関しては、文献は３−オキシイミノ−コレスト−４−エン誘導体の幾つかの例を提供している。このことはＷＯ２００４／０８２５８１及びＷＯ２００７／１１８９６７の特許明細書に特に当てはまり、それらはそれぞれ、３−オキシイミノ−コレスト−４−エン及びその誘導体の神経保護及び細胞保護特性について記載している。
【００３６】
文献Lieblg's Annalen der Chemic [(1991), (1), p 89-91]は化合物３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン及び３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エンならびにそのキラル分子特性を記載している。この文献はこれらの２つの化合物についての細胞保護、神経保護及び／又は心保護活性は記載していない。
【００３７】
文献Chemical & Pharmaceutical Bulletin [(1972), 20(7), p 1567-9]は３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンのアンチ異性体を記載しているが、この化合物の細胞保護、神経保護及び／又は心保護活性について記載も言及もない。
【００３８】
現在知られている処置法に対して否定的な意見を述べるわけではないが、現在まで、細胞変性、特に神経細胞変性を止めるための有効な処置法は存在しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３９】
このため、細胞を変性現象から有効に保護することができる新規の製品がなおも現実に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
本発明の化合物は、それが新規であるという事実を除いても、非常に有用な薬理学的特性を示す。
【００４１】
それらの化合物は細胞保護、特に、神経保護及び／又は心保護及び／又は肝保護に有利であることを証明する。
【００４２】
生物学的活性に加えて、特定の新規の化合物は薬理学的活性、たとえば、薬物動態、生物学的利用能、溶解度、安定性、毒性、吸収性及び／又は代謝に関する有利な特性をも示すことができる。このことにより、医薬、特に細胞保護薬、非常に特定的には、神経保護薬及び／又は心保護薬及び／又は肝保護薬を調製するのに非常に有用となる。
【００４３】
より詳細には、本発明の主題は式（Ｉ）
【化１】
【００４４】
（上式中、Ｒ１は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、ヘテロサイクル、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、ここで、
(i)Ｒａ及びＲｂは同時に又は互いに独立に、水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基から選ばれることができ、又は、
(ii) Ｒａ及びＲｂは一緒になって２〜６個の炭素原子を有する直鎖又は枝分かれ鎖炭化水素鎖を形成することができ、それは、任意に、１個又は複数の二重結合を含んでよく及び／又は任意に、１個又は複数の酸素、硫黄又は窒素原子が介在してよく、
Ｒ２は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、
Ｒ３は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｉｓ、−ＣＯＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、又は、
Ｒ３及びＲ２はそれらが結合した炭素と一緒になって（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ４は水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、又は、
Ｒ４及びＲ２はＲ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなる炭素−炭素結合（Ｃ−Ｃ結合）を形成することができ、又は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ５は水素原子又は−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＣＮ、−ＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、
Ｒ６は水素原子、又は、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＮ、−ＣＨ２−ＳＲａ、−ＣＨ２−ＳｅＲａ基、又は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）：
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）又は−Ｃ（Ｏ）−Ｑ−Ｒｃ（Ｂ）
に対応する基であることができ、ここで、
＋Ｑは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、ここでＲａは上記に規定されるとおりであり、又は、任意に置換されていてよい直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素鎖により構成されるスペーサーアームであることができ、それは２〜２０個の炭素原子を含みまた少なくとも１個のヘテロ原子を含み、
＋Ｒｃは水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロサイクルＣ（Ｏ）−であることができ、特に式（Ｃ）又は（Ｄ）
【００４５】
【化２】
【００４６】
のいずれかにより表される基であることができ、
Ｒ７は水素原子、又は、ハロゲン原子、又は、ヒドロキシ基であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ８は水素原子又は−ＯＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定のとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ９は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基であることができ、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０はＲ９と一緒になって、オキソ、＝ＣＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、＝ＣＨ−アリール、＝ＣＨ−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基であることができ、
Ｒ１１は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はアリール基であることができ、好ましくは水素原子であり、又は、
Ｒ１１及びＲ９は一緒になってそれらが結合した炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成することができ、又は、一緒になってＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１２は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル基、又は、−ＯＲａ、−ＳＲａ基であることができ、−Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１３は
(i)Ｃ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基、特に、
【００４７】
【化３】
【００４８】
から選ばれる基であることができ、又は、
(ii)下記式Ｅ
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）に対応する基であることができ、
Ｒ１４はＣ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基であり、特に、アルキル基であり、好ましくは下記Ｇ７基
【００４９】
【化４】
【００５０】
であり、
Ｘは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、− Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクルであることができ、特に、上記の式（Ｃ）又は（Ｄ）により表される基である）に対応する新規の化合物、ならびに、存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、医薬的に許容される酸又は塩基とのその付加塩、その水和物及びその溶媒和物、そのプロドラッグであるが、ただし、以下の化合物を除く。
【００５１】
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−７，７−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−（３−オキシイミノ−ブチル）−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン−６−オン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４、６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４，６−トリエン。
【００５２】
本明細書によれば以下のことが理解される。
用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素基を指し、たとえば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルである。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は好ましい。アルキル基は任意に下記のとおりのアリール基により置換されていてよく、この場合には、アリールアルキル基という用語を用いる。アリールアルキル基の例は、特に、ベンジル及びフェネチルである。任意に、アルキル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−Ｏ−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲｂ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂ基は上記に規定されるとおりである。特に指示がないかぎり、炭化水素基は４〜１２個の炭素原子を含むことができる。用語「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」は２〜６個の炭素原子を有する１個又は複数の二重結合を含む、直鎖もしくは枝分かれ鎖又は環式炭化水素基を指す。たとえば、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−３−ブテニル、１−ヘキセニル基を挙げることができる。任意に、アルケニル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲｂ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂ基は上記に規定されるとおりである。
【００５３】
用語「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」は３〜６個の炭素原子を有する飽和もしくは部分的に不飽和の環式炭化水素基を指す。シクロアルキル基としては、特に、置換基シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニルが挙げられる。任意に、シクロアルキル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５４】
用語「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」は２〜６個の炭素原子を有する少なくとも１個の三重結合を含む直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素基を指す。アルキニル基は、特に、置換基エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル又は２−ペンチニルが挙げられる。任意に、アルキニル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５５】
用語「Ｃ６〜Ｃ１０アリール」は６〜１０個の炭素原子を有し、さらに好ましくは６個の炭素原子を有する芳香族炭化水素基を指す。アリール基としては、特に、フェニル、ナフチル及びビフェニル基が挙げられる。任意に、アリール基は、ハロゲン原子又はアルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ３、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５６】
用語「Ｃ３〜Ｃ９ヘテロサイクル」は３〜９個の炭素原子及び１個又は複数のヘテロ原子を含む、任意に置換されていてよい飽和、不飽和又は芳香族単環もしくは多環基を指す。好ましくはヘテロ原子は酸素、硫黄及び窒素から選ばれる。ヘテロサイクルの例はフリル、チエニル、ピロール、イミダゾール、イソチアゾール、チアゾール、イソオキサゾール、オキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドール、イソインドール、インダゾール、キノリン、イソキノリン、フタラジン、キナゾリン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チアゾリジン又はフタルイミド、ベンズイミダゾール基である。任意に、ヘテロサイクル基は、ハロゲン原子又はアルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ３、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５７】
用語「ハロゲン」は、塩素、臭素、フッ素及びヨウ素原子を指し、好ましくはフッ素原子である。
【００５８】
表現「スペーサーアーム」は飽和であるか飽和でない、任意に置換されそして少なくとも１個のヘテロ原子を含み、２〜２０個の炭素原子を含む炭化水素鎖を指す。特に、上記のスペーサーアームは下記のＫ１、Ｋ２、Ｋ３又はＫ４基から選ばれ、ここでＲａは上記に規定されるとおりである。
【００５９】
【化５】
【００６０】
用語「処置」は阻止、治癒又は緩和的処置ならびに患者の管理（苦痛を緩和し、余命を延ばし、病気の進行を遅延させる）などを含む。処置は、また、他の要素又は処置、たとえば、本明細書中に特定される病態又は外傷を処置するための他の活性成分と組み合わせて行われてよい。
【００６１】
用語「細胞保護」は、細胞機能の損失又は細胞死を伴うもしくは伴わない所望されない細胞活性をもたらす細胞変性現象から細胞を保護し、及び／又は、細胞死をもたらす又はもたらさない細胞機能不全から細胞を保護し、及び／又は、これらの細胞死をもたらす又はもたらさない細胞機能不全を引き起こす細胞変性疾患又は障害から細胞を保護するために、細胞どうしの相互作用又は細胞と他の組織との相互作用を維持するための薬剤、たとえば、天然もしくは非天然の化合物の能力を意味する。
【００６２】
用語「神経保護」又は「心保護」又は「肝保護」は上記薬剤の同一の特性を指すが、神経系の細胞に特に関し（神経保護）、心臓系の細胞に特に関し（心保護）、又は、肝臓系の細胞に関する（肝保護）。それゆえ、細胞保護又は神経保護又は心保護化合物は上記の特性を有する化合物であると理解される。
【００６３】
式（Ｉ）の特に好ましい化合物は下記のものである。
置換基Ｒ１は水素原子、フッ素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、任意にＣ１〜Ｃ４アルキル基及びフェニル基で、任意に置換されていてよいものから選ばれることができる。
置換基Ｒ６は−ＣＨ３基及び−ＣＨ２−ＯＨ基から選ばれることができ、さらにより好ましくは、置換基Ｒ６は−ＣＨ３基であることができる。
【００６４】
本発明の別の態様によると、好ましい置換基Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）
に対応する基であることができる。上式中、Ｑは酸素原子であり、Ｒｃは下記式（Ｃ）に対応する基であることができる。
【００６５】
【化６】
【００６６】
本発明による他の好ましい化合物は置換基Ｒ６が下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）
に対応する基であることができる。上式中、ＱはＮＲａであることができ、Ｒａは上記のとおりであり、Ｒｃはアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクルから選ばれる基であることができ、特に下記式（Ｄ）に対応する基であることができる。
【００６７】
【化７】
【００６８】
Ｒ４がＲ２とともに、Ｒ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成する化合物も好ましい。
【００６９】
同様に、Ｒ１１及びＲ９がそれらが結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成する化合物も好ましい化合物である。
【００７０】
本発明によると、特に好ましい置換基Ｒ１３は下記のＧ１及びＧ２基から選ばれる。
【化８】
【００７１】
本発明による他の好ましい化合物はＲ１３が下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基である化合物である。
【００７２】
上式中、Ｒ１４は下記のＧ７基
【化９】
【００７３】
であることができ、Ｘは−ＮＨ又は−ＮＣＨ３であることができ、
(i)Ｒ１５はアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクル基から選ばれる基であることができ、特に、下記式（Ｄ）
【００７４】
【化１０】
【００７５】
に対応する基であることができ、又は、
(ii)Ｒ１５は−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクル基から選ばれる基であることができ、特に下記式（Ｃ）に対応する基であることができる。
【００７６】
【化１１】
【００７７】
特に有利には、本発明による好ましい化合物は、
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンズオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エン、ならびに、
存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、
存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、
医薬上許容される酸又は塩基とのその付加塩、
その水和物又は溶媒和物、
そのプロドラッグである。
【００７８】
医薬上許容される酸との付加塩は、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸又はアルカンスルホン酸、たとえば、メタンもしくはエタンスルホン酸、アリールスルホン酸、たとえば、ベンゼンもしくはパラトルエンスルホン酸、又は、カルボン酸とともに形成される塩であることができる。
【００７９】
本発明の特定の好ましい化合物は１個又は複数のフッ素原子を有する。たとえば、４−位にフッ素原子を有する３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−１）は特に好ましい。
【００８０】
【化１２】
【００８１】
驚くべきことに、この化合物中にこのようなフッ素原子を導入することにより、薬理特性を変性することができた。単一のＡＮＴＩ異性体の形態で得られるこのフッ素化化合物（式Ｉ−１）は経口経路で投与されるときに、改良された暴露を示す。
【００８２】
本発明によると、３−オキシイミノ−６−フルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−２）及び３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−３）は好ましい化合物である。
【００８３】
【化１３】
【００８４】
本明細書中において、一般用語「ハロゲン」により示されることができる原子は天然又は合成の放射性同位体であってもよく、たとえば、フッ素の場合には、フッ素１８（１８Ｆ）であってもよいことに注意すべきである。式（Ｉ）の放射ラベル化化合物、特に、同位体１８Ｆでラベル化された化合物は医療画像形成、特に、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）に非常に有用であり、ＰＥＴは、たとえば、腫瘍学、神経学及び心臓病学の分野における病気の診断のために開発された生体内画像形成技術である。同様に、臭素又はヨウ素の場合には、これらはそれぞれ放射ラベル化同位体である臭素−７５（７５Ｂｒ）及びヨウ素−１２４（１２４Ｉ）により表しうると述べることができる。
【００８５】
一般用語「ハロゲン」は、また、本明細書によると、天然又は合成の非放射活性同位体、たとえば、非放射活性同位体フッ素−１９（１９Ｆ）も網羅することができ、それはバイオメディカル研究及び、特に、認知神経科学において有用であり、また、核磁気共鳴画像形成技術（ＭＲＩ）に特に有用である。
【００８６】
本発明の主題である化合物は非常に有用な薬理学的特性を有する。それらの化合物は顕著な細胞保護特性、特に、神経細胞保護特性、さらに特に、相対運動神経細胞保護特性、及び、心保護及び肝保護特性が与えられている。
【００８７】
これらの特性は実施例の部分で以下に例示される。その特性は上記の化合物ならびにそのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩の細胞保護薬、特に神経細胞保護薬及び／又は心保護薬及び／又は肝保護薬としての使用を正当化する。
【００８８】
非常に特に、本発明による化合物は相対運動神経細胞、中枢神経系、運動神経及び末梢神経の神経細胞に顕著な活性を示す。
【００８９】
このように、本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物、ならびに、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩の医薬としての使用である。
【００９０】
それゆえ、本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物、ならびに、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの細胞保護薬の調製のための使用である。
【００９１】
本発明に係る化合物は、その細胞保護特性のために、ネクローシス、及び／又は、病理学的アポトーシス、及び／又は、ネクロトーシスの処置又は阻止のための医薬（抗ネクローシス薬及び／又は抗アポトーシス薬及び／又は抗ネクロトーシス薬）を調製するために使用でき、又は、下記の状態の処置又は阻止に使用できる。
【００９２】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬物により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）。
【００９３】
非常に特に、本発明に係る医薬はその神経保護特性のために、神経変性状態、たとえば、ハンチントン病、慢性神経変性状態、有利には、慢性脱髄性疾患、遺伝性又は弧発性の老化に関連する神経細胞病変、末梢神経の、遺伝性であるか又は病変により生じる神経障害、糖尿病性であるか又は、癌の処置、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血、てんかんにより生じる神経障害、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか、又は老化に関連している変性、聴覚神経細胞の遺伝性であるか、外傷性であるか、又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、特に、脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷により生じる病態の処置又は阻止において使用される。
【００９４】
それらの化合物はその神経保護特性のために、上記のとおり、相対運動神経細胞、特に、脊髄性筋萎縮症の処置、特に、筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症の処置、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷の処置に使用される。
【００９５】
一般に、化合物の一日の用量は治療効果を得るための最少量である。この用量は上記の異なる因子に依存するであろう。３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む上記の化合物の用量は、一般に、ヒトに対しては、１日あたり、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇで含まれることができる。
【００９６】
必要ならば、１日の用量は１日あたりに２、３、４、５、６回又はそれ以上の投与回数で又は１日の間に適切な間隔の複数副投与によって投与されうる。
【００９７】
選ばれる量は多くの因子、特に、投与経路、投与時間、投与時刻、化合物の排出速度、その化合物と組み合わせて使用される異なる製品、患者の年齢、体重及び身体的状態、ならびに、医療歴及びあらゆる他の既知の医療情報に依存するであろう。
【００９８】
担当医師の処方箋は一般に使用されている量よりも低い用量で開始し、その後、これらの用量を累進的に増加させ、可能な副作用の出現をより良好に制御するであろう。
【００９９】
本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物、又は、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかを活性成分として含む、医薬組成物である。
【０１００】
これらの組成物中で、上記の活性生物は有利には生理学的に有効な用量で存在し、上記の組成物は特に少なくとも１種の上記の成分を有効な神経保護用量で含むことができる。
【０１０１】
医薬として、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）に対応する化合物、ならびに、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩は消化性経路又は非経口経路が意図された医薬組成物中に取り込まれることができる。
【０１０２】
本発明に係る医薬組成物は、また、特に、細胞、特に上記の心臓細胞及び／又は運動神経細胞の変性又は死に関連する病態又は外傷に苦しんでいる患者の処置の際に、少なくとも１種の他の治療活性成分を、同時の使用もしくは別々の使用又は長時間にわたる使用のために含むこともできる。
【０１０３】
本発明に係る医薬組成物又は医薬は有利に１種又は複数の不活性な、すなわち、医薬上不活性かつ無毒の賦形剤又はビヒクルを含む。たとえば、医薬使用に適合しそして当業者に知られている塩類溶液、生理学的溶液、等張液、緩衝溶液などを挙げることができる。組成物は分散剤、可溶化剤、安定剤、防腐剤などから選ばれる１種又は複数の薬剤又はビヒクルを含むことができる。（液体及び／又は注入可能な及び／又は固体）製剤中に使用されうる薬剤又はビヒクルは特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリン、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油及び動物油、アラビアゴムなどである。組成物は注入可能な懸濁液、ゲル、オイル、タブレット、坐薬、粉末、ゼラチンカプセル、カプセルなどの形態に、任意に持続放出性及び／又は徐放性を確保するガレニーク形態又はデバイスを用いて製剤されうる。このタイプの製剤には、セルロース、カーボネート又はデンプンなどの薬剤を有利に使用する。
【０１０４】
投与は当業者により知られるいかなる方法で行ってもよく、好ましくは、経口経路又は注入、通常には、腹腔内、脳内、髄腔内、静脈内、動脈内又は筋肉内の経路で行われることができる。経口経路の投与は好ましい。長期間の処置に関しては、好ましい投与経路は舌下、経口又は経皮経路である。
【０１０５】
注入については、化合物は、一般に液体懸濁液の形態でパッケージされ、それは、たとえば、シリンジ又は点滴により注入されうる。注入される流速及び／又は用量又は投与される用量は、一般に、患者、病態、投与法などによって当業者が調節しうることが理解される。任意に、他の活性成分又は医薬上許容されるビヒクル（緩衝剤、塩類溶液、等張液、安定剤の存在下の溶液）との組み合わせで、繰り返し投与を行ってよいことが理解される。
【０１０６】
本発明は哺乳動物、特に、ヒトに使用できる。
本発明の主題は、また、上記の組成物の調製方法であり、本質的に既知の方法により、活性成分を、許容される、特に医薬上許容される賦形剤と混合することを特徴とする。
本発明の特定の主題は、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、式（Ｉ）の化合物の、細胞、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の自然又は偶発の変性又は死に関連する病態又は外傷の処置又は阻止のための医薬の調製における使用である。
【０１０７】
本発明のより特定の主題は、また、上記の式（Ｉ)の化合物、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンの、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスを処置し又は阻止するための医薬（抗ネクローシス及び／又は抗アポトーシス及び／又は抗ネクロトーシス薬）の調製、又は、下記のような状態を処置し又は阻止するための医薬の調製における使用である。
【０１０８】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬剤により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）、
【０１０９】
神経変性疾患、たとえば、ハンチントン病、慢性神経変性疾患、有利には、慢性脱髄性疾患、遺伝性又は弧発性の、特に、多発性硬化症及びロイコジストロフィー、老化に関連する神経細胞病変、遺伝性であるか又は病変により生じる末梢神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は癌の処置、てんかん、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血により誘導される神経障害、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか又は老化に関連している変性又は視神経の変性、聴覚神経の遺伝性であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、運動神経細胞の変性に関連している疾患及び外傷、より特定的には、脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症及び脊髄又は末梢運動神経の外傷。
【０１１０】
本発明の非常に特定の主題は３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物の脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、及び、筋萎縮性側索硬化症の処置のための医薬の製造における使用である。
【０１１１】
これらの医薬の使用は、通常、細胞、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の生存率を高め又は軸索成長を促進するための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物を、患者、特に、哺乳動物、非常に特定的にはヒトに投与することを含む。
【０１１２】
本発明の主題は、同様に、上記の特に神経変性疾患、特に、神経細胞の変性又は死に関連した病態又は外傷を、このような病態又は外傷に苦しんでいる哺乳動物（一般に、患者）において処置するための方法であり、神経細胞の生存率を高め、又は、軸索成長を促進するための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式Ｉの化合物をこれらの哺乳動物に投与することを含む方法である。
【０１１３】
本発明のさらなる主題は上記の状態の１つ、特に、運動神経細胞の変性又は死に関連した病態又は外傷を、このような病態又は外傷に苦しんでいる哺乳動物（一般に患者）において処置する方法であり、神経細胞の生存率を高めるための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式Ｉの化合物をこれらの哺乳動物に投与することを含む方法である。より特定的には、運動神経細胞の変性又は死に関連している病態は筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症である。別の形態によると、本発明は、また、アビジン（ストレプトアビジン又はニュートラアビジン）のビオチンに対する非常に強い親和性（Ｋａ約１０７Ｍ）を利用した蛍光顕微鏡技術などの当業者に知られた検知及び／又は視覚化技術によって直接的又は間接的に検知し及び／又は視覚化させることができるラベル化基を含む化合物にも関する。
【０１１４】
用語「ラベル化」とは、一般に、放射性同位体又は非同位体など、たとえば、フルオロフォア剤、着色剤、ハプテン、ビオチンを指す。
【０１１５】
用語「フロオロフォア」は、一般に、蛍光性物質の特徴、すなわち、エネルギー源により励起されるときに光エネルギーを吸収し（励起光）、そして蛍光の形態で急速に戻る（発光）という特徴を指す。フルオロフォアのこの特徴により、たとえば、研究する細胞の画像形成を行うための、生物学的系（メンブレン、細胞、神経細胞、ミトコンドリアなど）における蛍光ラベルとしてのこのような物質の使用を考えることができる。
【０１１６】
ビオチンは、植物、細菌及び特定の真菌類により合成される、ビタミンＨとも呼ばれる補酵素である。ビオチンは、ビオチンに対して非常に強い親和性（Ｋａ約１０７Ｍ）を有するアビジン（ストレプトアビジン又はニュートラアビジン）により検知される。ビオチンの構造は下記のとおりである。
【０１１７】
【化１４】
【０１１８】
ビオチンに対するアビジンの非常に強い親和性を利用するアプローチの１つを用い、生物学的活性物質中にビオチン基を導入することにより、上記の活性物質と相互作用することができるタンパク質標的又は他の非タンパク質化合物を分離し及び／又は特定することが可能になることが当該技術分野において知られている。このように分離されたタンパク質標的又は他の非タンパク質化合物は、たとえば、マススペクトルにより特性化される。当業者に知られた使用の中で、以下のものを挙げることができる：ビオチン化化合物を用いた診断試験、ビオチン化抗生物質を用いたＥＬＩＳＡ試験（酵素結合免疫吸着検査法（Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay））、ビオチン化した化合物を装填した固定化アビジンカラムの使用に基づく親和性クロマトグラフィー、プロテオーム解析技術（２Ｄ電子泳動及びマススペクトル）など。
【０１１９】
本発明に係るラベル化基はビオチン又はフルオロフォア基、たとえば、７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾ−ルー４−イル（式Ｄ）、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）フルオロフォア、アントラセン及びフルオレセインから選ばれることができる。好ましくは、本発明に係るラベル化基はビオチン及び７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イルフルフォア基（式Ｄ）から選ばれる。
【０１２０】
【化１５】
【０１２１】
ビオチン又はフルオロフォアによりラベル化された本発明に係る化合物は、
このラベル化された化合物と接触する細胞を視覚化し及び／又は検知する、
生体、ヒト又は動物中でのその分布、及び、細胞部分（膜、細胞、神経細胞、ミトコンドリア、核、小胞体、ゴルジ、リソソーム、エンドソーム及び他の細胞小器官）中でのその位置を研究する、
上記のラベル化された化合物と相互作用することができるタンパク質又は他の非タンパク質化合物の検知方法を実施する、
その分子標的を特定する、
分子の観点での分子−タンパク質相互作用を研究する、
コレスト−４−エン−３−オンオキシム又はその誘導体に特異的なモノクロナール抗体を検知する、
特に対象の標的により親和性が高いリガンドの最適化を可能にする結合試験を開発しそして行う、
アッセイ方法を開発する、
新しいリガンドスクリーニングツールを開発する、
のに非常に有用であるプローブである。
【０１２２】
このようなラベル化基を導入することにより、本発明に係るラベル化化合物の生物学的活性の損失を生じず、そして、プローブとしての、特にトレーサー又はラベル化剤としてのこれらのラベル化化合物の使用が可能になる。
【０１２３】
結果として、本発明の別の目的はＮＢＤ基及びビオチンから選ばれるラベル化基を含む式（Ｉ）の化合物を提供することである。
【０１２４】
本発明のさらなる主題は、式Ｉの化合物のプローブとしての、特にトレーサー又はラベル化剤としての使用であって、ここで、
Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）に対応する基であることができ、
ここで、Ｑは酸素原子又はＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒｃは式（Ｃ）又は（Ｄ）に対応する基であることができ、
【０１２５】
【化１６】
【０１２６】
又は、Ｒ１３は下記式（Ｅ）に対応する基であることができ、
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
Ｒ１４は下記Ｇ７式であることができ、
【０１２７】
【化１７】
【０１２８】
Ｘは酸素原子又はＮＲａであることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、特にＮＨ又はＮＣＨ３であり、そして
Ｒ１５は下記式（Ｃ）又は（Ｄ）に対応する基であることができる。
【０１２９】
【化１８】
【０１３０】
本発明に係るトレーサー又はラベル化剤として特に好ましい化合物は下記式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）
【０１３１】
【化１９】
【０１３２】
により示され、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（Ｖ）において、置換基Ｒ１は上記に規定されるとおりであることができる。好ましくは、置換基Ｒ１は水素原子である。
【０１３３】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物は当業者によく知られている様々な合成方法によって、特にケトンオキシム化反応を用いて得ることができる。下記のダイアグラムは式（Ｉ）の化合物の調製に使用される方法を例示している。
【０１３４】
【化２０】
【０１３５】
例として、式（Ｉ）の化合物を得るための特に適切な方法は(i)Ｒ１〜Ｒ１３基が上記のとおりである式（ＩＩ）の化合物を、(ii)ヒドロキシルアミンヒドロクロリドなどのヒドロキシルアミンハロゲン化物と反応させることからなる。
【０１３６】
この方法はピリジンなどの適切な溶剤中で有利に行うことができる。
式（Ｉ）の化合物は当業者によく知られている様々な方法により反応媒体から分離されうる。場合により、式（Ｉ）の化合物は医薬上許容される塩のいずれかに転化されてもよい。式（Ｉ）の化合物を得るための出発製品として使用される式（ＩＩ）の化合物は市販されているか又は当業者に知られた方法により調製される。
【０１３７】
下記の実施例は本発明を例示するが、それを限定するものでない。実施例及び調製に記載される化合物の構造は通常の技術（核磁気共鳴、質量分析など）により決定した。
【０１３８】
略語
ＰＥ：石油エーテル
ＥＡ：酢酸エチル
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｔ：トリプレット
ｓｅｐｔ：セプタプレット
【実施例】
【０１３９】
例１−式（ＩＩ）の化合物の調製
例１ａ−４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Toyota, A. らChemical & Pharmaceutical Bulletin (1994), 42 (3), 459-61;及びNakanishi, S.ら: Chemistry & Industry (英国、ロンドン) (1960), 1136-7に記載される方法により調製した。
【０１４０】
例１ｂ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Thomas, M. G, らJournal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry (1999), (21), 3191-3198; 20 Poss, A. JらTetrahedron Letters (1995), 36 (27), 4721-4; Edmunds, J.JらJournal of the Chemical Society, Chemical Communications (1989), (13), 881-3;Salmond, W. GらGer. Offen. (1983), DE 3225747; Nakanishi, SらJournal of the American Chemical Society (1959), 81 5259-60に記載される方法のいずれかにより調製した。
【０１４１】
例１ｃ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン及び２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
懸濁液中の１０ｇ（２６ミリモル）のコレスト−４−エン−３−オンをフラスコ中の２６０ｍＬのメタノールに添加し、次いで、アルミナ上５０質量％で１７．４ｇ（２７．２ミリモル）の１−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，４−ジアゾニアビシクロ[２．２．２]オクタンビス（テトラフルオロボレート）を添加する。この媒体を１６時間還流下に攪拌し、そして７．７ｇのフッ素化試薬を添加し、還流下に５時間及び周囲温度で４日間攪拌を続ける。この反応媒体を、その後、真空下に濃縮し、残留物をジクロロメタン中に取り込ませる。ろ過後、得られた溶液を真空下に濃縮し、そして残留物を、アセトニトリル中の１０％塩酸５００ｍＬ中に取り込ませる。この懸濁液を周囲温度で２時間攪拌し、そしてろ過する。沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、ろ液を酢酸エチルで抽出し、そして有機相を真空下に濃縮する。
【０１４２】
シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから８０／２０ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡの勾配）による沈殿物の精製、その後、半分取ＨＰＬＣにより、１７．５ｍｇの２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン及び２３．１ｍｇの２，２−ジフルオロ−４−コレステン−３−オンを分離することができる。
【０１４３】
ろ液から得られた残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから８０／２０ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡ勾配）により精製し、その後、半分取ＨＰＬＣにより、さらに８２ｍｇの２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを分離することができる。
【０１４４】
２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン
1H NMR (CDCl3) ; δ (ppm) 6.11 (d, 1H, 4-CH), 5.21 (dddd, 1H, 2-CH), 4,86 (ddd, 1H, 6-CH), 0.71 (s, 3H, 18-CH3)
LC/UV/MS (254 nm) : TR ＝5.82 min, m/z=421 [M+H]+
２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン
1H NMR (CDCl3): δ(ppm) 6,26 (d, 1H, 4-CH), 0.73 (s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3):δ(ppm, 非検量) -86.33 (ddd, 2-CFa), -101.04 (d, 2-CFb)
LC/UV/MS (254 nm):TR = 6.48 min, m/z= 421 [M+H]+
【０１４５】
例１ｄ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
懸濁液中の５ｇ（１３ミリモル）のコレスト−４−エン−３−オンをフラスコ中の１３０ｍＬのメタノールに添加し、次いで、アルミナ上５０質量％で８．７ｇ（１３．６ミリモル）の１−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，４−ジアゾニアビシクロ[２．２．２]オクタンビス（テトラフルオロボレート）を添加する。この媒体を３時間還流下に攪拌し、そして４．３ｇのフッ素化試薬を添加し、還流下に３時間及び周囲温度で一晩攪拌を続ける。この反応媒体を、その後、真空下に濃縮し、残留物をジクロロメタン中に取り込ませる。ろ過後、得られた溶液を真空下に濃縮し、そして残留物を、アセトニトリル中の１０％塩酸２５０ｍＬ中に取り込ませる。この懸濁液を周囲温度で１時間攪拌し、そしてろ過する。沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、ろ液を酢酸エチルで抽出し、そして有機相を真空下に濃縮する。
【０１４６】
得られた残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから９５／５ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡ勾配）により精製し、その後、半分取ＨＰＬＣにより、３０ｍｇの２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを分離する。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.27 min (syn/anti), m/z = 403 [M+H]+
【０１４７】
例１e−２５−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
１００ｍｇ（２４７ミリモル）の２５−フルオロ−５−コレステン−３β−オール及び１５ｍLのアセトンをフラスコに０℃で導入し、その後、１６０μＬのジョーンズ試薬を添加する。この媒体を０℃で９分間攪拌し、その後、エタノールを添加することで反応を停止する。３０℃未満の温度で真空下に濃縮した後に、残留物を１０ｍＬのエタノール中に取り込み、そして１００μＬの１Ｎ塩酸溶液を添加する。この媒体を５０〜６０℃で１５分間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。得られた残留物を水中に取り込ませ、そして酢酸エチルで抽出し、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル、その後、石油エーテル／酢酸エチル９５／５）による精製の後に、６９ｍｇのエノンを収率６９％で得る。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.41 min, m/z=403 [M+H]+
【０１４８】
例１ｆ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾ−ル−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−５−エン−３−オン及び２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
工程１：tert-ブチルジメチルシリル−２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールの合成
４０ｍＬのメタノール中の２．８３ｇ（５．６５ミリモル）のtert-ブチルジメチルシリル−２５−ケト−２７−ノルコレステロール（１）、３．６２ｇ（５３．６７ミリモル）のＮ−メチルアミンヒドロクロリド及び３５５ｍｇ（５．６５ミリモル）のナトリウムシアノボロヒドリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、媒体を真空下に濃縮する。残留物を２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液中に取り込ませ、そしてジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過しそして真空下に濃縮する。得られた生成物を精製なしにそのまま使用する。
【０１４９】
LC/DEDL/MS: TR = 10.42 min, m/z= 516 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 5.29-5.33 (マルチプレット, 1H, 6-CH), 3.47 (m, 1H, 3-CH), 2.10-2.55 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.67 (s, 3H, 18-CH3), 0.05 (s, 6H, Si (CH3)2)
(1) Ferraboschi, Pら Tetrahednon Asymmetry (1999), 10 (13), 2497-2500;
Ferraboschi, PらTetrahedron: Asymmetry(1998), 9 (13), 2193-2196。Okamoto, Mら日本国特許公開公報(1997), 15 pp, CODEN: JKXXAF JP 09249691 A 19970922; Satsangi, R. K ら Analyst (ケンブリッジ、英国) (1992), 117 (6) 953-7。
【０１５０】
工程２：２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールの合成
１２ｍＬのジクロロメタン中の、工程１で得られた２ｇ（３．８７ミリモル）のtert-ブチルジメチルシリル−２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールをフラスコに導入する。ジオキサン中の４Ｎ塩化水素溶液４ｍＬを滴下して加える。この反応媒体を周囲温度で１時間攪拌し、その後、フリット上でろ過する。ソーダ溶液を添加することによりろ液を塩基化し、ジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、そして真空下に濃縮する。得られた生成物を精製なしにそのまま使用する。
LC/DEDL/MS: TR = 1.85及び2.08 min, m/z = 402 [M+H]+
1H NMR (CDCl3): δ (ppm) 5.29-5.40 (マルチプレット, 1H, 6-CH), 3.50 (m, 1H, 3-CH), 2.10-2.65 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.67 (s, 3H, 18-CH3)
【０１５１】
工程３：２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
工程１で得られた８７０ｍｇ（２．１６ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロール、１５ｍＬのアセトン及び６ｍＬのジクロロメタンをフラスコに０℃で導入し、その後、１．１ｍＬのジョーンズ試薬を添加する。この媒体を０℃で２０分間攪拌し、その後、２ｍＬのエタノールを添加することにより反応を停止する。３０℃未満の温度で真空下での濃縮の後、残留物を１５ｍＬのエタノールに取り込ませ、そして７２５μＬの１Ｎ塩酸溶液を添加する。媒体を５０℃で２０分間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。得られる残留物を水中に吸収させ、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、勾配９５／５から８／２）により精製した後に、１０６ｍｇのエノンを収率１２％で得る。
LC/UVMS (254nm) : TR = 7.35 min, m/z= 400 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 5.72 (s, 1H, 4-CH), 2.86 (m, 1H, 25-CH), 2.10-2.60(マルチプレット, 3H, NCH3), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)。
【０１５２】
工程４：２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−５−エン−３−オンの合成
８ｍＬのジクロロメタン中の、工程３で得られた１０６ｍｇ（０．２６５ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン、５８．３ｍｇ（０．２９２ミリモル）の４−クロロ−７−ニトロベンゾフラザン及び７４μＬのトリエチルアミンをフラスコに導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、光から保護し、その後、反応媒体をジクロロメタン中で希釈する。得られた溶液を１Ｎ塩酸溶液で洗浄し（３回）、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下で濃縮する。得られた残留物を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液ジクロロメタン／酢酸エチル９５／５）により精製し、その後、逆相フラッシュクロマトグラフィー（溶離液アセトニトリル）により精製する。２７ｍｇの期待の生成物を褐色固形分の形態で得る（収率１８％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 4.75 min, m/z= 563 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 8.44 (d, 1H, NBD-CH), 6.16 (d, 1H, NBD-CH), 5.71 (s, 1H, 4-CH), 2.93-3.25 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.66 (d, 3H, 18-CH3)
【０１５３】
工程４’： ２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び１ｍＬのジクロロメタン中の、工程３で得られた８２ｍｇ（０．２０５ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン、４３ｍｇ（０．２２６ミリモル）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボイミド、３３ｍｇ（０．２６７ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン及び５５ｍｇ（０．２２６ミリモル）のＤ（＋）−ビオチンをフラスコに導入する。反応媒体を周囲温度で一晩攪拌し、その後、水中に浸漬し、そしてジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下で濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（勾配１００％ジクロロメタンから９５／５ジクロロメタン／メタノール）で精製した後に、９０ｍｇのアミドを収率７０％で得る。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 9.14 min, m/z= 626 [M+H]+
【０１５４】
例１ｇ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
３．５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び２ｍＬのジクロロメタン中の１１２ｍｇ（０．５８２ミリモル）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、８４ｍｇ（０．６８８ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン及び１４２ｍｇ（０．５８２ミリモル）のＤ（＋）ビオチンをフラスコに導入する。この媒体を周囲温度で４５分間攪拌し、その後、２１２ｍｇ（０．５２９ミリモル）の１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊の２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の溶液を滴下して加える。この媒体を周囲温度で４８時間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。この残留物を水中に取り込ませ、そして酢酸エチルで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（勾配１００％ジクロロメタンから９５／５ジクロロメタン／メタノール）により精製した後に、１８０ｍｇの１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンエステルを収率５４％で得る。
1H NMR (CDCl3):δ (ppm) 5.91 (s, 1H), 4.72 (d, 1H), 4,52 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.13 (m, 1H), 2,93 (dd, 1H), 0,70 (s, 3H)
LC/UV/MS(254 nm) : TR = 4.85 min, m/z= 627 [M+H]+
＊化合物１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オンは市販されている。
【０１５５】
例１ｈ−２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンの合成
２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Julia, S.ら Journal of Chemical Society (1964), ８月, 2633-9に記載される方法により調製した。
【０１５６】
例１ｉ−４−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
４−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Patel, K. M. ら Journal of Organic Chemistry (1975), 40 (10), 1504-5及びEngelfried, 0. らの特許DE 1117112 (1961)に記載される方法により調製した。
【０１５７】
例２−式（Ｉ）の化合物の合成
例２ａ−一般法Ａ
１当量のケトン及び６当量のヒドロキシルアミンヒドロクロリド（ピリジン中（約１０〜２０ｍＬ／ミリモル））をフラスコに導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、反応媒体を真空下に濃縮する。得られた残留物を水中に取り込み、ジクロロメタン又は酢酸エチルで抽出し、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下に濃縮する。必要ならば、生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。
【０１５８】
例２ｂ−３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ａにおいて調製した４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンから方法Ａによって定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 3.02 (dd, 2H, 2-CH2), 2.23 (td, 1H, 6-CHa) 0.69 (3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3): δ (ppm, 非検量) -137.35 (s, 4-CF)
LC/UV/MS (254 nm) ; TR =6.42 min, M/Z= 418 [M+H]+
【０１５９】
例２ｃ−３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｂにおいて調製した６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９３％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.75 (d, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.07 (d, 0.7H, 4-CH [anti]),5.01 (dt, 0.3H, 6-CH [syn]), 4.97 (dt, 0.7H, 6-CH [anti]), 3.07 (d, 0.7H, 2-CHa [anti]), 0.72 (s,3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3); δ (ppm, 非検量) -159.23 (td, 6-CF [anti]), -162.05 (td, 6-CF[syn])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.88及び5.96 min (syn/anti), M/Z = 418 [M+H]+
【０１６０】
例２ｄ−３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エンを例１ｃにおいて調製した２，２−ジフルオロ−４−コレステン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率８９％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 7.18 (d, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.49 (d, 0.7H, 4-CH [anti]), 3.09(ブロードd, 0.7H), 0.71 (s, 3H, 18-CH3)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.06 min, m/z= 436 [M+H]+
【０１６１】
例２ｅ−３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エンを例１ｃにおいて調製した２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９７％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.84 (s, 0.35H, 4-CH [syn]), 6.25 (s, 0.65H, 4-CH [anti]), 5.94 (ブロードd, 1H, 2-CH), 5.13 (ブロードd, 1H, 6-CH), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)
19F NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -171.52 (td, 2-CF [syn]), -180.75 (td, 2-CF [anti]), -183.56 (d, 6-CF [syn]), -184.02 (d, 6-CF [anti])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.68 min, m/z = 436 [M+H]+
【０１６２】
例２ｆ−３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｄにおいて調製した２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９７％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.87 (s, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.21 (s, 0.7H, 4-CH [anti]), 5.08 (ddd, 1H, 2-CH), 3.08 (ブロードd, 0.7H), 0.69(s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -183.12 (ddd, 2-CF [syn]), -183.66 (ddd, 2-CF [anti])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.78及び5.99 min(syn/anti), m/z = 418 [M+H]+
【０１６３】
例２ｇ−３−オキシイミノ−２５−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２５−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｅにおいて調製した２５−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率８３％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.46 (s, 0.4H, 4-CH [syn]), 5.77 (s, 0.6H, 4-CH [anti]), 3.04(d, 0.6H, 2-CHa[anti]), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -137.01 (sept, 25-CF)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 4.44及び4.84 min(syn/anti), m/z = 418 [M+H]+
【０１６４】
例２ｈ−３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールー４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エンの合成
２ｍＬのピリジン中の、例１ｆの工程４において調製した２５ｍｇ（０．０４４ミリモル）の２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン及び２５ｍｇ（０．３６ミリモル）のヒドロキシルアミンヒドロクロリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、反応媒体をジクロロメタンで希釈する。得られた溶液を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下で濃縮する。２６ｍｇの３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エンをこのようにしてオレンジ色の固形分の形で得る（収率８９％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.34, 3.64及び3.95 min, m/z= 578 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 8.45 (d, 1H, NBD-CH), 6.45 (s, 0.34H, 4-CH [syn]), 6.16(d, 1H, NBD-CH), 5.80 (s, 0.66H, 4-CH [anti]), 2.94-3.30 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.64(d, 3H, 18-CH3)
【０１６５】
例２ｉ−３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エンの合成
２ｍＬのピリジン中の、例１ｆの工程４’において調製した６５ｍｇ（０．１０４ミリモル）の２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン及び６５ｍｇ（０．９３５ミリモル）のヒドロキシルアミンヒドロクロリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、ピリジンを真空下に濃縮する。残留物を水中に取り込み、そして酢酸エチルで４回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下で濃縮する。６６ｍｇの３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エンをこのようにしてベージュ色の固形分の形で得る（収率９８％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 8.56及び8.81 min, m/z = 641 [M+H]+
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.46 (s, 0.3H, 4-CH [syn]), 5.77 (s, 0.7H, 4-CH [anti]), 2.68-2.81 (マルチプレット, 4H), 2.85-3.23 (マルチプレット, 3H), 3.82 (m, 0.5H), 4.33 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.73(m, 0.5H), 4.90-5.01 (マルチプレット, 1H), 5.35-5.49 (マルチプレット, 1H), 0.68 (ブロード s, 3H, 18-CH3)
【０１６６】
例２ｊ−３−オキシイミノ−７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エンを７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊からsyn/anti混合物の形態で、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.56 (s, 0.3H), 5.87 (s, 0.7H), 3.85-3.94 (マルチプレット, 1H), 3.92-4.08 (マルチプレット, 1H), 3.05 (dt, 0,7H), 2.56 (ブロード d, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.90 (d, 3H), 0.86(dd, 6H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.19及び3.56 min (syn/anti), m/z= 416 [M+H]+
＊７α−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オンは市販されている。
【０１６７】
例２ｋ−３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エンを１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊からsyn/anti混合物の形態で、方法Ａにより収率９６％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 6.75 (s, 0.25H), 6.07 (s, 0.75H), 3.69-3.81 (マルチプレット, 1H), 3.92-4.08 (マルチプレット, 1H), 2.96 (ブロード d, 1H), 0.68 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.81及び4.27 min (syn/anti), m/z= 416 [M+H]+
＊１９−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オンは市販されている。
【０１６８】
例２ｌ−３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エンを、例１ｇにおいて調製した１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンエステルからsys/anti混合物の形態で、方法Ａにより収率９２％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.76 (s, 0.3H), 6.62 (ブロード s, 1H), 5.93 (s, 0.7H), 4.89(d, 0.7H), 4.73 (d, 0.3H), 4.50 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.03 (d, 0.3H), 3.85 (d, 0.7H), 2.15-3.20(マルチプレット, 8H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR =4.41 及び4.55 min (syn/anti), m/z= 642 [M+H]+
【０１６９】
例２ｍ−３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エンを、例１ｈにおいて調製した２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンから、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.44 (s, 0.7H), 5.78 (s, 0.20H), 0.70 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.42及び6.74 min (syn/anti), m/z= 414 [M+H]+
【０１７０】
例２ｎ−３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンを、例１ｉにおいて調製した４−−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンから、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 3.57 (s, 3H), 3.03 (dd, 2H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.36 min, m/z= 430 [M+H]+
【０１７１】
薬理学的研究
化合物を下記の手順により試験した。
運動神経細胞の生存率に対する式（Ｉ）の化合物の効果
式（Ｉ）の化合物の神経保護作用を示すために、出願人はラットの運動神経細胞の栄養欠乏のインビトロモデルに対するその活性を研究した。脊髄の運動神経細胞の培養について、本願出願人の特許出願ＷＯ０１４２７８４を有用に参照することができる。
【０１７２】
Ｅ１４ラット胎仔の脊髄を解体し、腹側領域をトリプシン処理の後に倍散剤により解離する。
【０１７３】
運動神経細胞を既知の方法により他の脊髄細胞から分離する（Camu ら1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and rat embryos by immunopanning. In “Immunoselection Strategies for Neural cell culture”, Neuroprotocols: A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199; Hendersonら 1993, Neutrophins promote motor neuron survival and are present in embryonic limb bud. Nature 363 (6426) :266-70）
【０１７４】
細胞を密度勾配で遠心分離する。大きい細胞画分（最も密度が低い）は運動神経細胞を多量に含んでいる。この画分の細胞を運動神経細胞上の表面抗原、抗−ｐ７５抗体とともにインキュベートする。
【０１７５】
磁気ビーズに結合した第二の抗体を加え、そして細胞の混合物をマグネット中のカラムに通す（Arce ら 1999 Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique, J, Neurosci Res 55 (1): 119-26）運動神経細胞のみが残る：その純度は約９０％である。
【０１７６】
下記文献により補給された基礎培養基（ＧＩＢＣＯ）中のポリオルニチン−ラミニン基質上に運動神経細胞を低密度で培養ウェル中で播く（Raoulら 1999, Programmed cell death of embryonic motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol .147 (5):1049-62）。
【０１７７】
負の対照（栄養因子を含まない）、及び、正の対照（ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）が１ｎｇ／ｍｌで存在する、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）が１ｎｇ／ｍｌで存在する、及びＣＮＴＦ（繊毛様神経栄養因子）が１０ｎｇ／ｍｌで存在する、米国の会社ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ，Ｉｎｃ．及び会社Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから販売）を各シリーズに含める。
【０１７８】
試験される化合物を播種の６０分後に添加し、そして培養物を５％ＣＯ２で３７℃に３日間維持する。
【０１７９】
運動神経細胞は神経栄養因子の非存在下に死ぬ自発的傾向がある（Pettmann及びHenderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20 (4):633-47）。３日後に、生きている細胞において蛍光性となるカルセインの存在下で細胞をインキュベートした後に、蛍光測定により生存率を評価する。
【０１８０】
３日後、３７℃で、５％ＣＯ２、そして飽和湿分の下で、最初に播いた運動神経の５０％までが神経栄養因子を補給した媒体中で生存するが、運動神経細胞の１５％未満しか神経栄養因子の添加なしの培地において生存しない。
【０１８１】
神経栄養因子を添加した培地内での運動神経細胞の生存率と比較した、神経基礎培地（ＧＩＢＣＯ）に上記化合物を添加したときの運動神経細胞の死を阻止する能力によって試験される化合物の神経保護活性を評価した。
【０１８２】
本発明に係る式Ｉの化合物は神経基礎培地における運動神経細胞のより良好な生存率を可能にすることができる濃度で神経保護活性を示した。
【０１８３】
この生存率は、神経栄養因子により得られる生存と比較した、試験されるべき化合物で処置した後の生存細胞の数により表される。それゆえ、この比は、神経栄養因子により得られる生存と比較した、試験されるべき化合物による生存率を表すことができる。もし、この比が０より大きければ、運動神経細胞の生存に対する化合物の効果は正である。
得られる結果は下記のとおりである。
【０１８４】
【表１】
【０１８５】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物は、それゆえ、医薬として、特に、脊髄運動神経に対するその化合物の栄養効果のために、筋萎縮症の処置、筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症の処置、及び、脊髄の外傷の処置における医薬として潜在的に有用であることを証明している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規の化合物、特に、コレスト−４−エン−３−オンオキシム誘導体、その医薬としての使用、特に、細胞保護薬、特に、神経保護薬、心保護薬及び／又は肝保護薬としての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
上記の医薬は細胞変性又は細胞死、特に、運動神経細胞及び／又は心筋細胞及び／又は肝細胞の細胞変性又は細胞死に関連する病態及び外傷に特に適している。
【０００３】
本発明は、上記の化合物を含む医薬組成物及びその調製方法にも関する。
【０００４】
細胞変性プロセスは所望しない細胞活性及び細胞死をしばしばもたらす細胞の機能障害を特徴とする。
【０００５】
細胞はストレスに応答して適用機構を発達し、それにより、その寿命を延ばし、又は、細胞死を遅延させ又は阻害している（細胞保護機構）。
【０００６】
しかしながら、これらの細胞保護機構は時折、不十分であり、不適切であり、又は、有効性を発揮するには遅すぎ、そして細胞は死亡する。それゆえ、細胞保護を促進する新規の細胞保護薬が入手可能になることが有用であることは明らかであろう。
【０００７】
主な細胞死機構のなかで、ネクローシス、アポトーシス及びネクロトーシスの間に本質的な区別がなされる。
【０００８】
ネクローシスはいわゆる「偶発的」細胞死であり、それは細胞損傷の際に起こる。最も影響を受け、細胞ホメオスタシスに変化をもたらすのは細胞の形質膜である。細胞は形質膜の溶解をもたらすところまで水を吸い込むであろう。この細胞溶解は周囲の媒体中に細胞質含分を開放させる。ネクローシスは炎症プロセスの起源となる。
【０００９】
ネクローシスは細胞群又は組織に影響を及ぼしうるが、他の隣接部位は生きたままである。これにより生じるトランスフォーメーションは細胞又は組織の壊死である。
【００１０】
別の言い方をすれば、ネクローシスは、器官内での血液循環の停止もしくは低減、高熱（温度の有意な上昇）、化学品による中毒症、身体的衝撃などの重大な外傷などの事象に次いで、細胞がその生命が終わりとなる際に起こる形態変化と規定される。
【００１１】
最もよく知られているネクローシスの１つは冠状動脈の閉塞（通過障害）による梗塞 （心筋への血液供給の中断）の間の心筋のネクローシスである。
【００１２】
アポトーシスは生命体の通常の生理機能の不可欠な部分を形成する。これは非常に制御された生理学的形態の細胞死であり、そして多細胞生物の生存に必要とされている。アポトーシスは胚形成にとって非常に重要なプロセスである。
【００１３】
アポトーシスを経験する細胞、すなわち、アポトーシス性細胞は他の細胞から分離される。アポトーシスは、通常、組織内の個別の細胞に関わるものであり、炎症を起こさない。アポトーシスの形態学的観点からの特徴の１つは核と細胞質の両方の有意な凝結であり、それにより、細胞体積の有意な減少がもたらされる。その後、核は断片化され、各フラグメントはダブルエンベロープにより包囲される。アポトーシス性ボディ（細胞質要素及び核要素）はその後、開放され、そして貪食により隣接細胞により吸収されるであろう。
【００１４】
アポトーシスは種々の様式で誘導されうる。たとえば、放射線、化学物質又はホルモンの存在は細胞内でのアポトーシス性事象のカスケードを誘発することができる刺激である。不完全な有糸分裂又はＤＮＡへの損傷などの細胞内シグナルもアポトーシスを誘発することがある。
【００１５】
アポトーシスは遺伝毒性物質の作用の後又は病気の際にも起こる。特定の病態は特定の細胞集団の損失をもたらす異常アポトーシスを特徴とし、肝毒性、網膜症、心毒性などである。
【００１６】
それゆえ、生理学的アポトーシスと病理学的アポトーシスとは区別される。本発明は本質的に病理学的アポトーシスに関わる。
【００１７】
ネクロトーシスなどの他の細胞死機構が存在し、それはネクローシスとアポトーシスの特徴を示す。ネクロトーシスにより死んでいく細胞はネクローシスによる細胞死の場合と同様の特徴を示すが、この機構の生化学工程はアポトーシスの場合とのほうが似通っている。この細胞死機構は、たとえば、虚血で起こる。
【００１８】
それゆえ、本発明の１つの目的は、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスを阻止し及び／又は処置することができる新規の医薬（抗ネクローシス及び／又は抗アポトーシス及び／又は抗ネクロトーシス薬）を入手可能にすることである。
【００１９】
細胞変性プロセスは、とりわけ、まとめて変性疾患又は変性状態と呼ばれる病理学的状況により生じ、外傷により生じ、又は、様々な要因への暴露により生じることができる。
【００２０】
これらの外傷及び要因としては、たとえば、放射線（ＵＶ、ガンマ）への暴露、低酸素又は酸素欠乏、栄養素欠乏、成長因子欠乏、毒、細胞毒、廃棄物、環境毒、フリーラジカル、反応性酸素種を挙げることができる。医療処置の状況で治療剤として使用される化学もしくは生物学的物質、たとえば、細胞分裂阻害剤又は抗炎症剤も言及されうる。
【００２１】
変性プロセスを特徴とする最も有意な病理学的状況としては、
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬剤により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）、
が挙げられる。
【００２２】
さらに、神経変性プロセスは神経細胞の機能不全及び死を特徴とし、それは脳（中枢神経系、ＣＮＳ）、脊髄及び末梢神経系（ＰＮＳ）により媒介される神経学的機能の損失をもたらす。それは、とりわけ、神経変性疾患もしくは症状と総称される病理状態から、外傷から、又は、毒への暴露から生じることがある。
【００２３】
神経変性プロセスを特徴とする最も有意な病態は下記のとおりである。
慢性神経変性疾患、特に、慢性脱髄性疾患、遺伝性もしくは孤発性の、有利にはアルツハイマー病、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、特に、小児クロイツフェルト−ヤコブ病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、アドレノロイコジストロフィーを含むロイコジストロフィー、てんかん、認知症、統合失調症、及び、ＡＩＤＳに関連する神経症候群；
老化に関連する神経細胞障害；
遺伝的であるか又は病変により生じる末梢神経障害、たとえば、ファブリ病、シャルコー・マリー・トゥース病、クラッベ病、ロイコジストロフィー、糖尿病性神経障害及び抗癌剤処置により生じる障害など；
脳、末梢神経又は脊髄の外傷；
脳血管障害に続く又は血液灌流の欠如により生じる、脳又は脊髄の虚血；
視覚神経細胞の遺伝的であるか、傷害により生じるか又は老化に関連している変性、たとえば、黄斑変性症、色素性網膜炎、又は、緑内障により誘発される視神経の変性；
聴覚神経細胞の遺伝的であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性で、聴力の低下又は損失をもたらす変性。
【００２４】
これらの病態において影響を受ける幾つかの信号経路は多くの神経変性疾患に一般的である。アルツハイマー病は最も頻繁にある認知症である。アルツハイマー病は脳の萎縮の発現をもたらし、海馬における支配的な神経細胞損失をもたらし、そしてコリン作動神経にも影響を及ぼす。葉性萎縮（ピック病、クロイツフェルト−ヤコブ病）、レビー小体型認知症、血管性認知症、パーキンソン病などの他の病態はこれらの認知症の兆候の起源における有意な神経細胞死と関係がある。
【００２５】
神経細胞が死ぬことから保護するための治療アプローチは神経栄養タンパク質の供給である。
【００２６】
これらのタンパク質、たとえば、ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）、ＣＮＴＦ（毛様体神経栄養因子）、ＮＧＦ（神経成長因子）、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）は胎生期発達の間に又はおとなの病変後に合成される。これらの成長因子は神経細胞の生存、成熟及び分化を促進する。さらに、アポトーシス機構を阻害し、複数の生存経路を活性化し、そして多数の神経細胞群を保護する。その使用は多くの細胞変性において提案されている。
【００２７】
神経栄養因子の発現を活性化し又はこれらの因子の作用を模倣する化合物は神経変性症候群の処置のための治療可能性を有する。
【００２８】
特に、神経変性の処置のための神経栄養素分子の供給には３つの目的がある。
神経細胞の末梢もしくは中枢標的による供給不全及び／又は神経栄養因子の逆行輸送の問題に関連する神経栄養因子の潜在的欠乏を補うこと、
変性カスケードに関与する生化学経路に非特異的に介入すること、
神経末端の樹状成長及び分枝の自然補償現象を促進すること。
【００２９】
これらの化合物は、それゆえ、多くの病態、特に、末梢及び中枢神経系に影響を及ぼす病態において有利な効果を有するであろう。
【００３０】
さらに、上記の文脈で、運動神経細胞は脊髄及び脳幹に特に存在する神経細胞である。その変性又は死は四肢の筋肉の進行性衰弱をもたらす可能性があり、その後、筋肉の萎縮及び可能性としては痙攣（すなわち、永久収縮）をもたらすことがある。
【００３１】
脊髄及び／又は延髄運動神経細胞の変性及び死により生じる最も重要な病態はシャルコー病、又は、ルー・ゲーリック病の名称でも知られている筋萎縮性側索硬化症、及び、ウェルドニッヒ・ホフマン病又はクーゲルベルク・ヴェランダー病の名称でも知られている脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症である。
【００３２】
さらに、運動神経細胞の変性は脊髄又は末梢運動神経の圧潰及び／又は切開による外傷の場合に観察される。
【００３３】
より一般に、脊髄性筋萎縮症は脊髄の運動神経細胞の変性又は死が関与する病気として参照される。
【００３４】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）はルイスボディなどの異なるタイプの封入に関連しそして脊髄及び皮質運動神経細胞の変性を特徴とする神経変性疾患であり、その致死性転帰は時折、前頭葉認知症に関連している。ＡＬＳの進展の間に、神経支配の欠如により、変性現象は脳内だけでなく、脊髄でも起こり、結果的に、筋肉でも起こる。
【００３５】
化学構造に関しては、文献は３−オキシイミノ−コレスト−４−エン誘導体の幾つかの例を提供している。このことはＷＯ２００４／０８２５８１及びＷＯ２００７／１１８９６７の特許明細書に特に当てはまり、それらはそれぞれ、３−オキシイミノ−コレスト−４−エン及びその誘導体の神経保護及び細胞保護特性について記載している。
【００３６】
文献Lieblg's Annalen der Chemic [(1991), (1), p 89-91]は化合物３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン及び３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エンならびにそのキラル分子特性を記載している。この文献はこれらの２つの化合物についての細胞保護、神経保護及び／又は心保護活性は記載していない。
【００３７】
文献Chemical & Pharmaceutical Bulletin [(1972), 20(7), p 1567-9]は３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンのアンチ異性体を記載しているが、この化合物の細胞保護、神経保護及び／又は心保護活性について記載も言及もない。
【００３８】
現在知られている処置法に対して否定的な意見を述べるわけではないが、現在まで、細胞変性、特に神経細胞変性を止めるための有効な処置法は存在しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３９】
このため、細胞を変性現象から有効に保護することができる新規の製品がなおも現実に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００４０】
本発明の化合物は、それが新規であるという事実を除いても、非常に有用な薬理学的特性を示す。
【００４１】
それらの化合物は細胞保護、特に、神経保護及び／又は心保護及び／又は肝保護に有利であることを証明する。
【００４２】
生物学的活性に加えて、特定の新規の化合物は薬理学的活性、たとえば、薬物動態、生物学的利用能、溶解度、安定性、毒性、吸収性及び／又は代謝に関する有利な特性をも示すことができる。このことにより、医薬、特に細胞保護薬、非常に特定的には、神経保護薬及び／又は心保護薬及び／又は肝保護薬を調製するのに非常に有用となる。
【００４３】
より詳細には、本発明の主題は式（Ｉ）
【化１】
【００４４】
（上式中、Ｒ１は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、ヘテロサイクル、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、ここで、
(i)Ｒａ及びＲｂは同時に又は互いに独立に、水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基から選ばれることができ、又は、
(ii) Ｒａ及びＲｂは一緒になって２〜６個の炭素原子を有する直鎖又は枝分かれ鎖炭化水素鎖を形成することができ、それは、任意に、１個又は複数の二重結合を含んでよく及び／又は任意に、１個又は複数の酸素、硫黄又は窒素原子が介在してよく、
Ｒ２は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、
Ｒ３は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−Ｉｓ、−ＣＯＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、又は、
Ｒ３及びＲ２はそれらが結合した炭素と一緒になって（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ４は水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、又は、
Ｒ４及びＲ２はＲ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなる炭素−炭素結合（Ｃ−Ｃ結合）を形成することができ、又は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ５は水素原子又は−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＣＮ、−ＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、
Ｒ６は水素原子、又は、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＮ、−ＣＨ２−ＳＲａ、−ＣＨ２−ＳｅＲａ基、又は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）：
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）又は−Ｃ（Ｏ）−Ｑ−Ｒｃ（Ｂ）
に対応する基であることができ、ここで、
＋Ｑは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、ここでＲａは上記に規定されるとおりであり、又は、任意に置換されていてよい直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素鎖により構成されるスペーサーアームであることができ、それは２〜２０個の炭素原子を含みまた少なくとも１個のヘテロ原子を含み、
＋Ｒｃは水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロサイクルＣ（Ｏ）−であることができ、特に式（Ｃ）又は（Ｄ）
【００４５】
【化２】
【００４６】
のいずれかにより表される基であることができ、
Ｒ７は水素原子、又は、ハロゲン原子、又は、ヒドロキシ基であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ８は水素原子又は−ＯＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定のとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ９は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基であることができ、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０はＲ９と一緒になって、オキソ、＝ＣＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、＝ＣＨ−アリール、＝ＣＨ−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基であることができ、
Ｒ１１は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はアリール基であることができ、好ましくは水素原子であり、又は、
Ｒ１１及びＲ９は一緒になってそれらが結合した炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成することができ、又は、一緒になってＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１２は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル基、又は、−ＯＲａ、−ＳＲａ基であることができ、−Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１３は
(i)Ｃ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基、特に、
【００４７】
【化３】
【００４８】
から選ばれる基であることができ、又は、
(ii)下記式Ｅ
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）に対応する基であることができ、
Ｒ１４はＣ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基であり、特に、アルキル基であり、好ましくは下記Ｇ７基
【００４９】
【化４】
【００５０】
であり、
Ｘは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、− Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクルであることができ、特に、上記の式（Ｃ）又は（Ｄ）により表される基である）に対応する新規の化合物、ならびに、存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、医薬的に許容される酸又は塩基とのその付加塩、その水和物及びその溶媒和物、そのプロドラッグであるが、ただし、以下の化合物を除く。
【００５１】
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−７，７−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−（３−オキシイミノ−ブチル）−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン−６−オン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４、６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４，６−トリエン。
【００５２】
本明細書によれば以下のことが理解される。
用語「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は１〜６個の炭素原子を含む直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素基を指し、たとえば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert-ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシルである。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基は好ましい。アルキル基は任意に下記のとおりのアリール基により置換されていてよく、この場合には、アリールアルキル基という用語を用いる。アリールアルキル基の例は、特に、ベンジル及びフェネチルである。任意に、アルキル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−Ｏ−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲｂ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂ基は上記に規定されるとおりである。特に指示がないかぎり、炭化水素基は４〜１２個の炭素原子を含むことができる。用語「Ｃ２〜Ｃ６アルケニル」は２〜６個の炭素原子を有する１個又は複数の二重結合を含む、直鎖もしくは枝分かれ鎖又は環式炭化水素基を指す。たとえば、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−３−ブテニル、１−ヘキセニル基を挙げることができる。任意に、アルケニル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲｂ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂ基は上記に規定されるとおりである。
【００５３】
用語「Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル」は３〜６個の炭素原子を有する飽和もしくは部分的に不飽和の環式炭化水素基を指す。シクロアルキル基としては、特に、置換基シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘキセニルが挙げられる。任意に、シクロアルキル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５４】
用語「Ｃ２〜Ｃ６アルキニル」は２〜６個の炭素原子を有する少なくとも１個の三重結合を含む直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素基を指す。アルキニル基は、特に、置換基エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル又は２−ペンチニルが挙げられる。任意に、アルキニル基は、ハロゲン原子又は−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５５】
用語「Ｃ６〜Ｃ１０アリール」は６〜１０個の炭素原子を有し、さらに好ましくは６個の炭素原子を有する芳香族炭化水素基を指す。アリール基としては、特に、フェニル、ナフチル及びビフェニル基が挙げられる。任意に、アリール基は、ハロゲン原子又はアルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ３、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５６】
用語「Ｃ３〜Ｃ９ヘテロサイクル」は３〜９個の炭素原子及び１個又は複数のヘテロ原子を含む、任意に置換されていてよい飽和、不飽和又は芳香族単環もしくは多環基を指す。好ましくはヘテロ原子は酸素、硫黄及び窒素から選ばれる。ヘテロサイクルの例はフリル、チエニル、ピロール、イミダゾール、イソチアゾール、チアゾール、イソオキサゾール、オキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドール、イソインドール、インダゾール、キノリン、イソキノリン、フタラジン、キナゾリン、ピロリジン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、チアゾリジン又はフタルイミド、ベンズイミダゾール基である。任意に、ヘテロサイクル基は、ハロゲン原子又はアルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ３、−ＮＯ２、−ＣＯＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＳＲａ基から独立に選ばれる置換基のいずれかによって１回又は数回置換されてよく、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりである。
【００５７】
用語「ハロゲン」は、塩素、臭素、フッ素及びヨウ素原子を指し、好ましくはフッ素原子である。
【００５８】
表現「スペーサーアーム」は飽和であるか飽和でない、任意に置換されそして少なくとも１個のヘテロ原子を含み、２〜２０個の炭素原子を含む炭化水素鎖を指す。特に、上記のスペーサーアームは下記のＫ１、Ｋ２、Ｋ３又はＫ４基から選ばれ、ここでＲａは上記に規定されるとおりである。
【００５９】
【化５】
【００６０】
用語「処置」は阻止、治癒又は緩和的処置ならびに患者の管理（苦痛を緩和し、余命を延ばし、病気の進行を遅延させる）などを含む。処置は、また、他の要素又は処置、たとえば、本明細書中に特定される病態又は外傷を処置するための他の活性成分と組み合わせて行われてよい。
【００６１】
用語「細胞保護」は、細胞機能の損失又は細胞死を伴うもしくは伴わない所望されない細胞活性をもたらす細胞変性現象から細胞を保護し、及び／又は、細胞死をもたらす又はもたらさない細胞機能不全から細胞を保護し、及び／又は、これらの細胞死をもたらす又はもたらさない細胞機能不全を引き起こす細胞変性疾患又は障害から細胞を保護するために、細胞どうしの相互作用又は細胞と他の組織との相互作用を維持するための薬剤、たとえば、天然もしくは非天然の化合物の能力を意味する。
【００６２】
用語「神経保護」又は「心保護」又は「肝保護」は上記薬剤の同一の特性を指すが、神経系の細胞に特に関し（神経保護）、心臓系の細胞に特に関し（心保護）、又は、肝臓系の細胞に関する（肝保護）。それゆえ、細胞保護又は神経保護又は心保護化合物は上記の特性を有する化合物であると理解される。
【００６３】
式（Ｉ）の特に好ましい化合物は下記のものである。
置換基Ｒ１は水素原子、フッ素原子、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、任意にＣ１〜Ｃ４アルキル基及びフェニル基で、任意に置換されていてよいものから選ばれることができる。
置換基Ｒ６は−ＣＨ３基及び−ＣＨ２−ＯＨ基から選ばれることができ、さらにより好ましくは、置換基Ｒ６は−ＣＨ３基であることができる。
【００６４】
本発明の別の態様によると、好ましい置換基Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）
に対応する基であることができる。上式中、Ｑは酸素原子であり、Ｒｃは下記式（Ｃ）に対応する基であることができる。
【００６５】
【化６】
【００６６】
本発明による他の好ましい化合物は置換基Ｒ６が下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）
に対応する基であることができる。上式中、ＱはＮＲａであることができ、Ｒａは上記のとおりであり、Ｒｃはアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクルから選ばれる基であることができ、特に下記式（Ｄ）に対応する基であることができる。
【００６７】
【化７】
【００６８】
Ｒ４がＲ２とともに、Ｒ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成する化合物も好ましい。
【００６９】
同様に、Ｒ１１及びＲ９がそれらが結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成する化合物も好ましい化合物である。
【００７０】
本発明によると、特に好ましい置換基Ｒ１３は下記のＧ１及びＧ２基から選ばれる。
【化８】
【００７１】
本発明による他の好ましい化合物はＲ１３が下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基である化合物である。
【００７２】
上式中、Ｒ１４は下記のＧ７基
【化９】
【００７３】
であることができ、Ｘは−ＮＨ又は−ＮＣＨ３であることができ、
(i)Ｒ１５はアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクル基から選ばれる基であることができ、特に、下記式（Ｄ）
【００７４】
【化１０】
【００７５】
に対応する基であることができ、又は、
(ii)Ｒ１５は−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクル基から選ばれる基であることができ、特に下記式（Ｃ）に対応する基であることができる。
【００７６】
【化１１】
【００７７】
特に有利には、本発明による好ましい化合物は、
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンズオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エン、ならびに、
存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、
存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、
医薬上許容される酸又は塩基とのその付加塩、
その水和物又は溶媒和物、
そのプロドラッグである。
【００７８】
医薬上許容される酸との付加塩は、たとえば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、シュウ酸、グリオキシル酸、アスパラギン酸又はアルカンスルホン酸、たとえば、メタンもしくはエタンスルホン酸、アリールスルホン酸、たとえば、ベンゼンもしくはパラトルエンスルホン酸、又は、カルボン酸とともに形成される塩であることができる。
【００７９】
本発明の特定の好ましい化合物は１個又は複数のフッ素原子を有する。たとえば、４−位にフッ素原子を有する３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−１）は特に好ましい。
【００８０】
【化１２】
【００８１】
驚くべきことに、この化合物中にこのようなフッ素原子を導入することにより、薬理特性を変性することができた。単一のＡＮＴＩ異性体の形態で得られるこのフッ素化化合物（式Ｉ−１）は経口経路で投与されるときに、改良された暴露を示す。
【００８２】
本発明によると、３−オキシイミノ−６−フルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−２）及び３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン（式Ｉ−３）は好ましい化合物である。
【００８３】
【化１３】
【００８４】
本明細書中において、一般用語「ハロゲン」により示されることができる原子は天然又は合成の放射性同位体であってもよく、たとえば、フッ素の場合には、フッ素１８（１８Ｆ）であってもよいことに注意すべきである。式（Ｉ）の放射ラベル化化合物、特に、同位体１８Ｆでラベル化された化合物は医療画像形成、特に、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）に非常に有用であり、ＰＥＴは、たとえば、腫瘍学、神経学及び心臓病学の分野における病気の診断のために開発された生体内画像形成技術である。同様に、臭素又はヨウ素の場合には、これらはそれぞれ放射ラベル化同位体である臭素−７５（７５Ｂｒ）及びヨウ素−１２４（１２４Ｉ）により表しうると述べることができる。
【００８５】
一般用語「ハロゲン」は、また、本明細書によると、天然又は合成の非放射活性同位体、たとえば、非放射活性同位体フッ素−１９（１９Ｆ）も網羅することができ、それはバイオメディカル研究及び、特に、認知神経科学において有用であり、また、核磁気共鳴画像形成技術（ＭＲＩ）に特に有用である。
【００８６】
本発明の主題である化合物は非常に有用な薬理学的特性を有する。それらの化合物は顕著な細胞保護特性、特に、神経細胞保護特性、さらに特に、相対運動神経細胞保護特性、及び、心保護及び肝保護特性が与えられている。
【００８７】
これらの特性は実施例の部分で以下に例示される。その特性は上記の化合物ならびにそのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩の細胞保護薬、特に神経細胞保護薬及び／又は心保護薬及び／又は肝保護薬としての使用を正当化する。
【００８８】
非常に特に、本発明による化合物は相対運動神経細胞、中枢神経系、運動神経及び末梢神経の神経細胞に顕著な活性を示す。
【００８９】
このように、本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物、ならびに、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩の医薬としての使用である。
【００９０】
それゆえ、本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物、ならびに、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの細胞保護薬の調製のための使用である。
【００９１】
本発明に係る化合物は、その細胞保護特性のために、ネクローシス、及び／又は、病理学的アポトーシス、及び／又は、ネクロトーシスの処置又は阻止のための医薬（抗ネクローシス薬及び／又は抗アポトーシス薬及び／又は抗ネクロトーシス薬）を調製するために使用でき、又は、下記の状態の処置又は阻止に使用できる。
【００９２】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬物により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）。
【００９３】
非常に特に、本発明に係る医薬はその神経保護特性のために、神経変性状態、たとえば、ハンチントン病、慢性神経変性状態、有利には、慢性脱髄性疾患、遺伝性又は弧発性の老化に関連する神経細胞病変、末梢神経の、遺伝性であるか又は病変により生じる神経障害、糖尿病性であるか又は、癌の処置、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血、てんかんにより生じる神経障害、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか、又は老化に関連している変性、聴覚神経細胞の遺伝性であるか、外傷性であるか、又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、特に、脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷により生じる病態の処置又は阻止において使用される。
【００９４】
それらの化合物はその神経保護特性のために、上記のとおり、相対運動神経細胞、特に、脊髄性筋萎縮症の処置、特に、筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症の処置、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷の処置に使用される。
【００９５】
一般に、化合物の一日の用量は治療効果を得るための最少量である。この用量は上記の異なる因子に依存するであろう。３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む上記の化合物の用量は、一般に、ヒトに対しては、１日あたり、０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇで含まれることができる。
【００９６】
必要ならば、１日の用量は１日あたりに２、３、４、５、６回又はそれ以上の投与回数で又は１日の間に適切な間隔の複数副投与によって投与されうる。
【００９７】
選ばれる量は多くの因子、特に、投与経路、投与時間、投与時刻、化合物の排出速度、その化合物と組み合わせて使用される異なる製品、患者の年齢、体重及び身体的状態、ならびに、医療歴及びあらゆる他の既知の医療情報に依存するであろう。
【００９８】
担当医師の処方箋は一般に使用されている量よりも低い用量で開始し、その後、これらの用量を累進的に増加させ、可能な副作用の出現をより良好に制御するであろう。
【００９９】
本発明の主題は、また、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物、又は、そのエステル、及び／又は、医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかを活性成分として含む、医薬組成物である。
【０１００】
これらの組成物中で、上記の活性生物は有利には生理学的に有効な用量で存在し、上記の組成物は特に少なくとも１種の上記の成分を有効な神経保護用量で含むことができる。
【０１０１】
医薬として、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）に対応する化合物、ならびに、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩は消化性経路又は非経口経路が意図された医薬組成物中に取り込まれることができる。
【０１０２】
本発明に係る医薬組成物は、また、特に、細胞、特に上記の心臓細胞及び／又は運動神経細胞の変性又は死に関連する病態又は外傷に苦しんでいる患者の処置の際に、少なくとも１種の他の治療活性成分を、同時の使用もしくは別々の使用又は長時間にわたる使用のために含むこともできる。
【０１０３】
本発明に係る医薬組成物又は医薬は有利に１種又は複数の不活性な、すなわち、医薬上不活性かつ無毒の賦形剤又はビヒクルを含む。たとえば、医薬使用に適合しそして当業者に知られている塩類溶液、生理学的溶液、等張液、緩衝溶液などを挙げることができる。組成物は分散剤、可溶化剤、安定剤、防腐剤などから選ばれる１種又は複数の薬剤又はビヒクルを含むことができる。（液体及び／又は注入可能な及び／又は固体）製剤中に使用されうる薬剤又はビヒクルは特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、シクロデキストリン、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、ラクトース、植物油及び動物油、アラビアゴムなどである。組成物は注入可能な懸濁液、ゲル、オイル、タブレット、坐薬、粉末、ゼラチンカプセル、カプセルなどの形態に、任意に持続放出性及び／又は徐放性を確保するガレニーク形態又はデバイスを用いて製剤されうる。このタイプの製剤には、セルロース、カーボネート又はデンプンなどの薬剤を有利に使用する。
【０１０４】
投与は当業者により知られるいかなる方法で行ってもよく、好ましくは、経口経路又は注入、通常には、腹腔内、脳内、髄腔内、静脈内、動脈内又は筋肉内の経路で行われることができる。経口経路の投与は好ましい。長期間の処置に関しては、好ましい投与経路は舌下、経口又は経皮経路である。
【０１０５】
注入については、化合物は、一般に液体懸濁液の形態でパッケージされ、それは、たとえば、シリンジ又は点滴により注入されうる。注入される流速及び／又は用量又は投与される用量は、一般に、患者、病態、投与法などによって当業者が調節しうることが理解される。任意に、他の活性成分又は医薬上許容されるビヒクル（緩衝剤、塩類溶液、等張液、安定剤の存在下の溶液）との組み合わせで、繰り返し投与を行ってよいことが理解される。
【０１０６】
本発明は哺乳動物、特に、ヒトに使用できる。
本発明の主題は、また、上記の組成物の調製方法であり、本質的に既知の方法により、活性成分を、許容される、特に医薬上許容される賦形剤と混合することを特徴とする。
本発明の特定の主題は、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、式（Ｉ）の化合物の、細胞、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の自然又は偶発の変性又は死に関連する病態又は外傷の処置又は阻止のための医薬の調製における使用である。
【０１０７】
本発明のより特定の主題は、また、上記の式（Ｉ)の化合物、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンの、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスを処置し又は阻止するための医薬（抗ネクローシス及び／又は抗アポトーシス及び／又は抗ネクロトーシス薬）の調製、又は、下記のような状態を処置し又は阻止するための医薬の調製における使用である。
【０１０８】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気、たとえば、骨粗しょう症、骨髄炎、関節炎（変形性関節症、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む）、無腐性壊死、進行性骨化線維増殖症、くる病、クッシング症候群;
デュシェンヌ型筋ジストロフィー、筋強直性ジストロフィー、ミオパシー及び筋無力症などの筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚炎、湿疹、乾癬、老化、あるいは、また、瘢痕変化などの皮膚疾患；
心虚血及び／又は血管虚血、心筋梗塞、虚血性心疾患、慢性又は急性心不全、不整脈、心房細動、心室細動、発作性頻脈、心不全、無酸素、低酸素症、抗がん剤を用いた治療法の副作用などの心血管疾患;
アテローム性動脈硬化症、動脈硬化、末梢血管疾患、大脳血管障害、動脈瘤などの循環器系疾患;
貧血、血管アミロイド症、出血、鎌状赤血球貧血、赤血球断片化症候群、好中球減少症、白血球減少症、髄質形成不全、汎血球減少症、血小板減少症、血友病などの血液及び血管疾患;
肺炎、喘息、慢性閉塞性肺疾患、たとえば、慢性気管支炎、肺気腫を含む肺疾患;
潰瘍などの消化管疾患；
ウイルス性肝炎及び肝硬変、毒素又は薬剤により引き起こされる肝疾患、肝硬変を引き起こしうる状態、たとえば、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）、ウィルソン病、原始性硬化性胆管炎又は原始性胆汁性肝硬変などを含む、肝疾患；
急性又は慢性膵炎などの膵臓疾患;
真性糖尿病及び尿崩症、甲状腺炎などの代謝性疾患;
急性腎疾患又は糸球体腎炎などの腎臓疾患;
敗血症などのウイルス及び細菌感染症;
化学薬品、毒素又は薬物による重篤な中毒；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
早老症などの老化に関連する障害；
クローン病、関節リュウマチなどの炎症性疾患；
エリテマトーデスなどの自己免疫疾患；
歯周病などの組織の崩壊を引き起こすような歯科障害；
糖尿病性網膜症、緑内障、黄斑変性症、網膜変性症、網膜色素変性症、網膜円孔又は網膜裂孔、網膜剥離、網膜虚血、外傷に関連する急性網膜症、炎症性変性症、術後合併症、薬剤誘発性網膜症、白内障などの眼科疾患又は障害；
耳硬化症及び抗生剤誘発性難聴などの聴覚伝導路の疾患；
フリードリヒ失調症、構造的ミトコンドリア異常による先天性筋ジストロフィー、特定のミオパシー（ＭＥＬＡＳ症候群、ＭＥＲＦＦ症候群、ピアソン症候群）、ＭＩＤＤ症候群（母性遺伝糖尿病及び難聴）、ウルフラム症候群、ジストニアなどのミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）、
【０１０９】
神経変性疾患、たとえば、ハンチントン病、慢性神経変性疾患、有利には、慢性脱髄性疾患、遺伝性又は弧発性の、特に、多発性硬化症及びロイコジストロフィー、老化に関連する神経細胞病変、遺伝性であるか又は病変により生じる末梢神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は癌の処置、てんかん、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血により誘導される神経障害、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか又は老化に関連している変性又は視神経の変性、聴覚神経の遺伝性であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、運動神経細胞の変性に関連している疾患及び外傷、より特定的には、脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症及び脊髄又は末梢運動神経の外傷。
【０１１０】
本発明の非常に特定の主題は３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物の脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、及び、筋萎縮性側索硬化症の処置のための医薬の製造における使用である。
【０１１１】
これらの医薬の使用は、通常、細胞、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の生存率を高め又は軸索成長を促進するための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式（Ｉ）の化合物を、患者、特に、哺乳動物、非常に特定的にはヒトに投与することを含む。
【０１１２】
本発明の主題は、同様に、上記の特に神経変性疾患、特に、神経細胞の変性又は死に関連した病態又は外傷を、このような病態又は外傷に苦しんでいる哺乳動物（一般に、患者）において処置するための方法であり、神経細胞の生存率を高め、又は、軸索成長を促進するための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式Ｉの化合物をこれらの哺乳動物に投与することを含む方法である。
【０１１３】
本発明のさらなる主題は上記の状態の１つ、特に、運動神経細胞の変性又は死に関連した病態又は外傷を、このような病態又は外傷に苦しんでいる哺乳動物（一般に患者）において処置する方法であり、神経細胞の生存率を高めるための治療有効量の、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む式Ｉの化合物をこれらの哺乳動物に投与することを含む方法である。より特定的には、運動神経細胞の変性又は死に関連している病態は筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症である。別の形態によると、本発明は、また、アビジン（ストレプトアビジン又はニュートラアビジン）のビオチンに対する非常に強い親和性（Ｋａ約１０７Ｍ）を利用した蛍光顕微鏡技術などの当業者に知られた検知及び／又は視覚化技術によって直接的又は間接的に検知し及び／又は視覚化させることができるラベル化基を含む化合物にも関する。
【０１１４】
用語「ラベル化」とは、一般に、放射性同位体又は非同位体など、たとえば、フルオロフォア剤、着色剤、ハプテン、ビオチンを指す。
【０１１５】
用語「フロオロフォア」は、一般に、蛍光性物質の特徴、すなわち、エネルギー源により励起されるときに光エネルギーを吸収し（励起光）、そして蛍光の形態で急速に戻る（発光）という特徴を指す。フルオロフォアのこの特徴により、たとえば、研究する細胞の画像形成を行うための、生物学的系（メンブレン、細胞、神経細胞、ミトコンドリアなど）における蛍光ラベルとしてのこのような物質の使用を考えることができる。
【０１１６】
ビオチンは、植物、細菌及び特定の真菌類により合成される、ビタミンＨとも呼ばれる補酵素である。ビオチンは、ビオチンに対して非常に強い親和性（Ｋａ約１０７Ｍ）を有するアビジン（ストレプトアビジン又はニュートラアビジン）により検知される。ビオチンの構造は下記のとおりである。
【０１１７】
【化１４】
【０１１８】
ビオチンに対するアビジンの非常に強い親和性を利用するアプローチの１つを用い、生物学的活性物質中にビオチン基を導入することにより、上記の活性物質と相互作用することができるタンパク質標的又は他の非タンパク質化合物を分離し及び／又は特定することが可能になることが当該技術分野において知られている。このように分離されたタンパク質標的又は他の非タンパク質化合物は、たとえば、マススペクトルにより特性化される。当業者に知られた使用の中で、以下のものを挙げることができる：ビオチン化化合物を用いた診断試験、ビオチン化抗生物質を用いたＥＬＩＳＡ試験（酵素結合免疫吸着検査法（Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay））、ビオチン化した化合物を装填した固定化アビジンカラムの使用に基づく親和性クロマトグラフィー、プロテオーム解析技術（２Ｄ電子泳動及びマススペクトル）など。
【０１１９】
本発明に係るラベル化基はビオチン又はフルオロフォア基、たとえば、７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾ−ルー４−イル（式Ｄ）、ＢＯＤＩＰＹ（登録商標）フルオロフォア、アントラセン及びフルオレセインから選ばれることができる。好ましくは、本発明に係るラベル化基はビオチン及び７−ニトロベンズ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イルフルフォア基（式Ｄ）から選ばれる。
【０１２０】
【化１５】
【０１２１】
ビオチン又はフルオロフォアによりラベル化された本発明に係る化合物は、
このラベル化された化合物と接触する細胞を視覚化し及び／又は検知する、
生体、ヒト又は動物中でのその分布、及び、細胞部分（膜、細胞、神経細胞、ミトコンドリア、核、小胞体、ゴルジ、リソソーム、エンドソーム及び他の細胞小器官）中でのその位置を研究する、
上記のラベル化された化合物と相互作用することができるタンパク質又は他の非タンパク質化合物の検知方法を実施する、
その分子標的を特定する、
分子の観点での分子−タンパク質相互作用を研究する、
コレスト−４−エン−３−オンオキシム又はその誘導体に特異的なモノクロナール抗体を検知する、
特に対象の標的により親和性が高いリガンドの最適化を可能にする結合試験を開発しそして行う、
アッセイ方法を開発する、
新しいリガンドスクリーニングツールを開発する、
のに非常に有用であるプローブである。
【０１２２】
このようなラベル化基を導入することにより、本発明に係るラベル化化合物の生物学的活性の損失を生じず、そして、プローブとしての、特にトレーサー又はラベル化剤としてのこれらのラベル化化合物の使用が可能になる。
【０１２３】
結果として、本発明の別の目的はＮＢＤ基及びビオチンから選ばれるラベル化基を含む式（Ｉ）の化合物を提供することである。
【０１２４】
本発明のさらなる主題は、式Ｉの化合物のプローブとしての、特にトレーサー又はラベル化剤としての使用であって、ここで、
Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）に対応する基であることができ、
ここで、Ｑは酸素原子又はＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒｃは式（Ｃ）又は（Ｄ）に対応する基であることができ、
【０１２５】
【化１６】
【０１２６】
又は、Ｒ１３は下記式（Ｅ）に対応する基であることができ、
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
Ｒ１４は下記Ｇ７式であることができ、
【０１２７】
【化１７】
【０１２８】
Ｘは酸素原子又はＮＲａであることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、特にＮＨ又はＮＣＨ３であり、そして
Ｒ１５は下記式（Ｃ）又は（Ｄ）に対応する基であることができる。
【０１２９】
【化１８】
【０１３０】
本発明に係るトレーサー又はラベル化剤として特に好ましい化合物は下記式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）
【０１３１】
【化１９】
【０１３２】
により示され、式（ＩＩＩ）、（ＩＶ）又は（Ｖ）において、置換基Ｒ１は上記に規定されるとおりであることができる。好ましくは、置換基Ｒ１は水素原子である。
【０１３３】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物は当業者によく知られている様々な合成方法によって、特にケトンオキシム化反応を用いて得ることができる。下記のダイアグラムは式（Ｉ）の化合物の調製に使用される方法を例示している。
【０１３４】
【化２０】
【０１３５】
例として、式（Ｉ）の化合物を得るための特に適切な方法は(i)Ｒ１〜Ｒ１３基が上記のとおりである式（ＩＩ）の化合物を、(ii)ヒドロキシルアミンヒドロクロリドなどのヒドロキシルアミンハロゲン化物と反応させることからなる。
【０１３６】
この方法はピリジンなどの適切な溶剤中で有利に行うことができる。
式（Ｉ）の化合物は当業者によく知られている様々な方法により反応媒体から分離されうる。場合により、式（Ｉ）の化合物は医薬上許容される塩のいずれかに転化されてもよい。式（Ｉ）の化合物を得るための出発製品として使用される式（ＩＩ）の化合物は市販されているか又は当業者に知られた方法により調製される。
【０１３７】
下記の実施例は本発明を例示するが、それを限定するものでない。実施例及び調製に記載される化合物の構造は通常の技術（核磁気共鳴、質量分析など）により決定した。
【０１３８】
略語
ＰＥ：石油エーテル
ＥＡ：酢酸エチル
ｓ：シングレット
ｄ：ダブレット
ｔ：トリプレット
ｓｅｐｔ：セプタプレット
【実施例】
【０１３９】
例１−式（ＩＩ）の化合物の調製
例１ａ−４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Toyota, A. らChemical & Pharmaceutical Bulletin (1994), 42 (3), 459-61;及びNakanishi, S.ら: Chemistry & Industry (英国、ロンドン) (1960), 1136-7に記載される方法により調製した。
【０１４０】
例１ｂ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Thomas, M. G, らJournal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and Bio-Organic Chemistry (1999), (21), 3191-3198; 20 Poss, A. JらTetrahedron Letters (1995), 36 (27), 4721-4; Edmunds, J.JらJournal of the Chemical Society, Chemical Communications (1989), (13), 881-3;Salmond, W. GらGer. Offen. (1983), DE 3225747; Nakanishi, SらJournal of the American Chemical Society (1959), 81 5259-60に記載される方法のいずれかにより調製した。
【０１４１】
例１ｃ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン及び２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
懸濁液中の１０ｇ（２６ミリモル）のコレスト−４−エン−３−オンをフラスコ中の２６０ｍＬのメタノールに添加し、次いで、アルミナ上５０質量％で１７．４ｇ（２７．２ミリモル）の１−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，４−ジアゾニアビシクロ[２．２．２]オクタンビス（テトラフルオロボレート）を添加する。この媒体を１６時間還流下に攪拌し、そして７．７ｇのフッ素化試薬を添加し、還流下に５時間及び周囲温度で４日間攪拌を続ける。この反応媒体を、その後、真空下に濃縮し、残留物をジクロロメタン中に取り込ませる。ろ過後、得られた溶液を真空下に濃縮し、そして残留物を、アセトニトリル中の１０％塩酸５００ｍＬ中に取り込ませる。この懸濁液を周囲温度で２時間攪拌し、そしてろ過する。沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、ろ液を酢酸エチルで抽出し、そして有機相を真空下に濃縮する。
【０１４２】
シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから８０／２０ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡの勾配）による沈殿物の精製、その後、半分取ＨＰＬＣにより、１７．５ｍｇの２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン及び２３．１ｍｇの２，２−ジフルオロ−４−コレステン−３−オンを分離することができる。
【０１４３】
ろ液から得られた残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから８０／２０ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡ勾配）により精製し、その後、半分取ＨＰＬＣにより、さらに８２ｍｇの２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを分離することができる。
【０１４４】
２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン
1H NMR (CDCl3) ; δ (ppm) 6.11 (d, 1H, 4-CH), 5.21 (dddd, 1H, 2-CH), 4,86 (ddd, 1H, 6-CH), 0.71 (s, 3H, 18-CH3)
LC/UV/MS (254 nm) : TR ＝5.82 min, m/z=421 [M+H]+
２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オン
1H NMR (CDCl3): δ(ppm) 6,26 (d, 1H, 4-CH), 0.73 (s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3):δ(ppm, 非検量) -86.33 (ddd, 2-CFa), -101.04 (d, 2-CFb)
LC/UV/MS (254 nm):TR = 6.48 min, m/z= 421 [M+H]+
【０１４５】
例１ｄ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
懸濁液中の５ｇ（１３ミリモル）のコレスト−４−エン−３−オンをフラスコ中の１３０ｍＬのメタノールに添加し、次いで、アルミナ上５０質量％で８．７ｇ（１３．６ミリモル）の１−フルオロ−４−ヒドロキシ−１，４−ジアゾニアビシクロ[２．２．２]オクタンビス（テトラフルオロボレート）を添加する。この媒体を３時間還流下に攪拌し、そして４．３ｇのフッ素化試薬を添加し、還流下に３時間及び周囲温度で一晩攪拌を続ける。この反応媒体を、その後、真空下に濃縮し、残留物をジクロロメタン中に取り込ませる。ろ過後、得られた溶液を真空下に濃縮し、そして残留物を、アセトニトリル中の１０％塩酸２５０ｍＬ中に取り込ませる。この懸濁液を周囲温度で１時間攪拌し、そしてろ過する。沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、ろ液を酢酸エチルで抽出し、そして有機相を真空下に濃縮する。
【０１４６】
得られた残留物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液１００％ＰＥから９５／５ＰＥ／ＥＡのＰＥ／ＥＡ勾配）により精製し、その後、半分取ＨＰＬＣにより、３０ｍｇの２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンを分離する。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.27 min (syn/anti), m/z = 403 [M+H]+
【０１４７】
例１e−２５−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
１００ｍｇ（２４７ミリモル）の２５−フルオロ−５−コレステン−３β−オール及び１５ｍLのアセトンをフラスコに０℃で導入し、その後、１６０μＬのジョーンズ試薬を添加する。この媒体を０℃で９分間攪拌し、その後、エタノールを添加することで反応を停止する。３０℃未満の温度で真空下に濃縮した後に、残留物を１０ｍＬのエタノール中に取り込み、そして１００μＬの１Ｎ塩酸溶液を添加する。この媒体を５０〜６０℃で１５分間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。得られた残留物を水中に取り込ませ、そして酢酸エチルで抽出し、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル、その後、石油エーテル／酢酸エチル９５／５）による精製の後に、６９ｍｇのエノンを収率６９％で得る。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.41 min, m/z=403 [M+H]+
【０１４８】
例１ｆ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾ−ル−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−５−エン−３−オン及び２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
工程１：tert-ブチルジメチルシリル−２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールの合成
４０ｍＬのメタノール中の２．８３ｇ（５．６５ミリモル）のtert-ブチルジメチルシリル−２５−ケト−２７−ノルコレステロール（１）、３．６２ｇ（５３．６７ミリモル）のＮ−メチルアミンヒドロクロリド及び３５５ｍｇ（５．６５ミリモル）のナトリウムシアノボロヒドリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、媒体を真空下に濃縮する。残留物を２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液中に取り込ませ、そしてジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過しそして真空下に濃縮する。得られた生成物を精製なしにそのまま使用する。
【０１４９】
LC/DEDL/MS: TR = 10.42 min, m/z= 516 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 5.29-5.33 (マルチプレット, 1H, 6-CH), 3.47 (m, 1H, 3-CH), 2.10-2.55 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.67 (s, 3H, 18-CH3), 0.05 (s, 6H, Si (CH3)2)
(1) Ferraboschi, Pら Tetrahednon Asymmetry (1999), 10 (13), 2497-2500;
Ferraboschi, PらTetrahedron: Asymmetry(1998), 9 (13), 2193-2196。Okamoto, Mら日本国特許公開公報(1997), 15 pp, CODEN: JKXXAF JP 09249691 A 19970922; Satsangi, R. K ら Analyst (ケンブリッジ、英国) (1992), 117 (6) 953-7。
【０１５０】
工程２：２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールの合成
１２ｍＬのジクロロメタン中の、工程１で得られた２ｇ（３．８７ミリモル）のtert-ブチルジメチルシリル−２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロールをフラスコに導入する。ジオキサン中の４Ｎ塩化水素溶液４ｍＬを滴下して加える。この反応媒体を周囲温度で１時間攪拌し、その後、フリット上でろ過する。ソーダ溶液を添加することによりろ液を塩基化し、ジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、そして真空下に濃縮する。得られた生成物を精製なしにそのまま使用する。
LC/DEDL/MS: TR = 1.85及び2.08 min, m/z = 402 [M+H]+
1H NMR (CDCl3): δ (ppm) 5.29-5.40 (マルチプレット, 1H, 6-CH), 3.50 (m, 1H, 3-CH), 2.10-2.65 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.67 (s, 3H, 18-CH3)
【０１５１】
工程３：２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
工程１で得られた８７０ｍｇ（２．１６ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレステロール、１５ｍＬのアセトン及び６ｍＬのジクロロメタンをフラスコに０℃で導入し、その後、１．１ｍＬのジョーンズ試薬を添加する。この媒体を０℃で２０分間攪拌し、その後、２ｍＬのエタノールを添加することにより反応を停止する。３０℃未満の温度で真空下での濃縮の後、残留物を１５ｍＬのエタノールに取り込ませ、そして７２５μＬの１Ｎ塩酸溶液を添加する。媒体を５０℃で２０分間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。得られる残留物を水中に吸収させ、ジクロロメタンで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、勾配９５／５から８／２）により精製した後に、１０６ｍｇのエノンを収率１２％で得る。
LC/UVMS (254nm) : TR = 7.35 min, m/z= 400 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 5.72 (s, 1H, 4-CH), 2.86 (m, 1H, 25-CH), 2.10-2.60(マルチプレット, 3H, NCH3), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)。
【０１５２】
工程４：２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−５−エン−３−オンの合成
８ｍＬのジクロロメタン中の、工程３で得られた１０６ｍｇ（０．２６５ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン、５８．３ｍｇ（０．２９２ミリモル）の４−クロロ−７−ニトロベンゾフラザン及び７４μＬのトリエチルアミンをフラスコに導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、光から保護し、その後、反応媒体をジクロロメタン中で希釈する。得られた溶液を１Ｎ塩酸溶液で洗浄し（３回）、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下で濃縮する。得られた残留物を、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（溶離液ジクロロメタン／酢酸エチル９５／５）により精製し、その後、逆相フラッシュクロマトグラフィー（溶離液アセトニトリル）により精製する。２７ｍｇの期待の生成物を褐色固形分の形態で得る（収率１８％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 4.75 min, m/z= 563 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 8.44 (d, 1H, NBD-CH), 6.16 (d, 1H, NBD-CH), 5.71 (s, 1H, 4-CH), 2.93-3.25 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.66 (d, 3H, 18-CH3)
【０１５３】
工程４’： ２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オンの合成
２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び１ｍＬのジクロロメタン中の、工程３で得られた８２ｍｇ（０．２０５ミリモル）の２５−（Ｎ−メチルアミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン、４３ｍｇ（０．２２６ミリモル）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボイミド、３３ｍｇ（０．２６７ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン及び５５ｍｇ（０．２２６ミリモル）のＤ（＋）−ビオチンをフラスコに導入する。反応媒体を周囲温度で一晩攪拌し、その後、水中に浸漬し、そしてジクロロメタンで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下で濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（勾配１００％ジクロロメタンから９５／５ジクロロメタン／メタノール）で精製した後に、９０ｍｇのアミドを収率７０％で得る。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 9.14 min, m/z= 626 [M+H]+
【０１５４】
例１ｇ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
３．５ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及び２ｍＬのジクロロメタン中の１１２ｍｇ（０．５８２ミリモル）の１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、８４ｍｇ（０．６８８ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン及び１４２ｍｇ（０．５８２ミリモル）のＤ（＋）ビオチンをフラスコに導入する。この媒体を周囲温度で４５分間攪拌し、その後、２１２ｍｇ（０．５２９ミリモル）の１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊の２ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の溶液を滴下して加える。この媒体を周囲温度で４８時間攪拌し、その後、真空下に濃縮する。この残留物を水中に取り込ませ、そして酢酸エチルで３回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして真空下に濃縮する。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（勾配１００％ジクロロメタンから９５／５ジクロロメタン／メタノール）により精製した後に、１８０ｍｇの１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンエステルを収率５４％で得る。
1H NMR (CDCl3):δ (ppm) 5.91 (s, 1H), 4.72 (d, 1H), 4,52 (m, 1H), 4.32 (m, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.13 (m, 1H), 2,93 (dd, 1H), 0,70 (s, 3H)
LC/UV/MS(254 nm) : TR = 4.85 min, m/z= 627 [M+H]+
＊化合物１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オンは市販されている。
【０１５５】
例１ｈ−２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンの合成
２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Julia, S.ら Journal of Chemical Society (1964), ８月, 2633-9に記載される方法により調製した。
【０１５６】
例１ｉ−４−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンの合成
４−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンを下記の文献：Patel, K. M. ら Journal of Organic Chemistry (1975), 40 (10), 1504-5及びEngelfried, 0. らの特許DE 1117112 (1961)に記載される方法により調製した。
【０１５７】
例２−式（Ｉ）の化合物の合成
例２ａ−一般法Ａ
１当量のケトン及び６当量のヒドロキシルアミンヒドロクロリド（ピリジン中（約１０〜２０ｍＬ／ミリモル））をフラスコに導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、反応媒体を真空下に濃縮する。得られた残留物を水中に取り込み、ジクロロメタン又は酢酸エチルで抽出し、有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下に濃縮する。必要ならば、生成物をシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。
【０１５８】
例２ｂ−３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ａにおいて調製した４−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンから方法Ａによって定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 3.02 (dd, 2H, 2-CH2), 2.23 (td, 1H, 6-CHa) 0.69 (3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3): δ (ppm, 非検量) -137.35 (s, 4-CF)
LC/UV/MS (254 nm) ; TR =6.42 min, M/Z= 418 [M+H]+
【０１５９】
例２ｃ−３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｂにおいて調製した６β−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９３％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.75 (d, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.07 (d, 0.7H, 4-CH [anti]),5.01 (dt, 0.3H, 6-CH [syn]), 4.97 (dt, 0.7H, 6-CH [anti]), 3.07 (d, 0.7H, 2-CHa [anti]), 0.72 (s,3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3); δ (ppm, 非検量) -159.23 (td, 6-CF [anti]), -162.05 (td, 6-CF[syn])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.88及び5.96 min (syn/anti), M/Z = 418 [M+H]+
【０１６０】
例２ｄ−３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エンを例１ｃにおいて調製した２，２−ジフルオロ−４−コレステン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率８９％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 7.18 (d, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.49 (d, 0.7H, 4-CH [anti]), 3.09(ブロードd, 0.7H), 0.71 (s, 3H, 18-CH3)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.06 min, m/z= 436 [M+H]+
【０１６１】
例２ｅ−３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エンを例１ｃにおいて調製した２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９７％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.84 (s, 0.35H, 4-CH [syn]), 6.25 (s, 0.65H, 4-CH [anti]), 5.94 (ブロードd, 1H, 2-CH), 5.13 (ブロードd, 1H, 6-CH), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)
19F NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -171.52 (td, 2-CF [syn]), -180.75 (td, 2-CF [anti]), -183.56 (d, 6-CF [syn]), -184.02 (d, 6-CF [anti])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.68 min, m/z = 436 [M+H]+
【０１６２】
例２ｆ−３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｄにおいて調製した２α−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率９７％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.87 (s, 0.3H, 4-CH [syn]), 6.21 (s, 0.7H, 4-CH [anti]), 5.08 (ddd, 1H, 2-CH), 3.08 (ブロードd, 0.7H), 0.69(s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -183.12 (ddd, 2-CF [syn]), -183.66 (ddd, 2-CF [anti])
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 5.78及び5.99 min(syn/anti), m/z = 418 [M+H]+
【０１６３】
例２ｇ−３−オキシイミノ−２５−フルオロ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２５−フルオロ−コレスト−４−エンを例１ｅにおいて調製した２５−フルオロ−コレスト−４−エン−３−オンからsyn/anti混合物の形態で、方法Ａによって収率８３％で得る。
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.46 (s, 0.4H, 4-CH [syn]), 5.77 (s, 0.6H, 4-CH [anti]), 3.04(d, 0.6H, 2-CHa[anti]), 0.70 (s, 3H, 18-CH3)
NMR (CDCl3) : δ(ppm, 非検量) -137.01 (sept, 25-CF)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 4.44及び4.84 min(syn/anti), m/z = 418 [M+H]+
【０１６４】
例２ｈ−３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾールー４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エンの合成
２ｍＬのピリジン中の、例１ｆの工程４において調製した２５ｍｇ（０．０４４ミリモル）の２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン及び２５ｍｇ（０．３６ミリモル）のヒドロキシルアミンヒドロクロリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、反応媒体をジクロロメタンで希釈する。得られた溶液を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下で濃縮する。２６ｍｇの３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エンをこのようにしてオレンジ色の固形分の形で得る（収率８９％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.34, 3.64及び3.95 min, m/z= 578 [M+H]+
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 8.45 (d, 1H, NBD-CH), 6.45 (s, 0.34H, 4-CH [syn]), 6.16(d, 1H, NBD-CH), 5.80 (s, 0.66H, 4-CH [anti]), 2.94-3.30 (マルチプレット, 4H, 25-CH及びNCH3), 0.64(d, 3H, 18-CH3)
【０１６５】
例２ｉ−３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エンの合成
２ｍＬのピリジン中の、例１ｆの工程４’において調製した６５ｍｇ（０．１０４ミリモル）の２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン−３−オン及び６５ｍｇ（０．９３５ミリモル）のヒドロキシルアミンヒドロクロリドをフラスコ中に導入する。この溶液を周囲温度で一晩攪拌し、その後、ピリジンを真空下に濃縮する。残留物を水中に取り込み、そして酢酸エチルで４回抽出する。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥しそして真空下で濃縮する。６６ｍｇの３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エンをこのようにしてベージュ色の固形分の形で得る（収率９８％）。
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 8.56及び8.81 min, m/z = 641 [M+H]+
1H NMR (CDC13) : δ (ppm) 6.46 (s, 0.3H, 4-CH [syn]), 5.77 (s, 0.7H, 4-CH [anti]), 2.68-2.81 (マルチプレット, 4H), 2.85-3.23 (マルチプレット, 3H), 3.82 (m, 0.5H), 4.33 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.73(m, 0.5H), 4.90-5.01 (マルチプレット, 1H), 5.35-5.49 (マルチプレット, 1H), 0.68 (ブロード s, 3H, 18-CH3)
【０１６６】
例２ｊ−３−オキシイミノ−７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エンを７α−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊からsyn/anti混合物の形態で、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.56 (s, 0.3H), 5.87 (s, 0.7H), 3.85-3.94 (マルチプレット, 1H), 3.92-4.08 (マルチプレット, 1H), 3.05 (dt, 0,7H), 2.56 (ブロード d, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.90 (d, 3H), 0.86(dd, 6H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.19及び3.56 min (syn/anti), m/z= 416 [M+H]+
＊７α−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オンは市販されている。
【０１６７】
例２ｋ−３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エンを１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン−３−オン＊からsyn/anti混合物の形態で、方法Ａにより収率９６％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ(ppm) 6.75 (s, 0.25H), 6.07 (s, 0.75H), 3.69-3.81 (マルチプレット, 1H), 3.92-4.08 (マルチプレット, 1H), 2.96 (ブロード d, 1H), 0.68 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 3.81及び4.27 min (syn/anti), m/z= 416 [M+H]+
＊１９−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オンは市販されている。
【０１６８】
例２ｌ−３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エンを、例１ｇにおいて調製した１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン−３−オンエステルからsys/anti混合物の形態で、方法Ａにより収率９２％で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.76 (s, 0.3H), 6.62 (ブロード s, 1H), 5.93 (s, 0.7H), 4.89(d, 0.7H), 4.73 (d, 0.3H), 4.50 (m, 1H), 4.34 (m, 1H), 4.03 (d, 0.3H), 3.85 (d, 0.7H), 2.15-3.20(マルチプレット, 8H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR =4.41 及び4.55 min (syn/anti), m/z= 642 [M+H]+
【０１６９】
例２ｍ−３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エンを、例１ｈにおいて調製した２−メチル−コレスト−４−エン−３−オンから、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 6.44 (s, 0.7H), 5.78 (s, 0.20H), 0.70 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.42及び6.74 min (syn/anti), m/z= 414 [M+H]+
【０１７０】
例２ｎ−３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンの合成
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンを、例１ｉにおいて調製した４−−メトキシ−コレスト−４−エン−３−オンから、方法Ａにより定量的収率で得る。
1H NMR (CDCl3) : δ (ppm) 3.57 (s, 3H), 3.03 (dd, 2H), 0.69 (s, 3H)
LC/UV/MS (254 nm) : TR = 6.36 min, m/z= 430 [M+H]+
【０１７１】
薬理学的研究
化合物を下記の手順により試験した。
運動神経細胞の生存率に対する式（Ｉ）の化合物の効果
式（Ｉ）の化合物の神経保護作用を示すために、出願人はラットの運動神経細胞の栄養欠乏のインビトロモデルに対するその活性を研究した。脊髄の運動神経細胞の培養について、本願出願人の特許出願ＷＯ０１４２７８４を有用に参照することができる。
【０１７２】
Ｅ１４ラット胎仔の脊髄を解体し、腹側領域をトリプシン処理の後に倍散剤により解離する。
【０１７３】
運動神経細胞を既知の方法により他の脊髄細胞から分離する（Camu ら1993, Purification of spinal motoneurons from chicken and rat embryos by immunopanning. In “Immunoselection Strategies for Neural cell culture”, Neuroprotocols: A companion to Methods in Neurosciences 2, 191-199; Hendersonら 1993, Neutrophins promote motor neuron survival and are present in embryonic limb bud. Nature 363 (6426) :266-70）
【０１７４】
細胞を密度勾配で遠心分離する。大きい細胞画分（最も密度が低い）は運動神経細胞を多量に含んでいる。この画分の細胞を運動神経細胞上の表面抗原、抗−ｐ７５抗体とともにインキュベートする。
【０１７５】
磁気ビーズに結合した第二の抗体を加え、そして細胞の混合物をマグネット中のカラムに通す（Arce ら 1999 Cardiotrophin-1 requires LIFRbeta to promote survival of mouse motoneurons purified by a novel technique, J, Neurosci Res 55 (1): 119-26）運動神経細胞のみが残る：その純度は約９０％である。
【０１７６】
下記文献により補給された基礎培養基（ＧＩＢＣＯ）中のポリオルニチン−ラミニン基質上に運動神経細胞を低密度で培養ウェル中で播く（Raoulら 1999, Programmed cell death of embryonic motoneurons triggered through the Fas death receptor. J Cell Biol .147 (5):1049-62）。
【０１７７】
負の対照（栄養因子を含まない）、及び、正の対照（ＢＤＮＦ（脳由来神経栄養因子）が１ｎｇ／ｍｌで存在する、ＧＤＮＦ（グリア由来神経栄養因子）が１ｎｇ／ｍｌで存在する、及びＣＮＴＦ（繊毛様神経栄養因子）が１０ｎｇ／ｍｌで存在する、米国の会社ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ，Ｉｎｃ．及び会社Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから販売）を各シリーズに含める。
【０１７８】
試験される化合物を播種の６０分後に添加し、そして培養物を５％ＣＯ２で３７℃に３日間維持する。
【０１７９】
運動神経細胞は神経栄養因子の非存在下に死ぬ自発的傾向がある（Pettmann及びHenderson, 1998, Neuronal cell death. Neuron 20 (4):633-47）。３日後に、生きている細胞において蛍光性となるカルセインの存在下で細胞をインキュベートした後に、蛍光測定により生存率を評価する。
【０１８０】
３日後、３７℃で、５％ＣＯ２、そして飽和湿分の下で、最初に播いた運動神経の５０％までが神経栄養因子を補給した媒体中で生存するが、運動神経細胞の１５％未満しか神経栄養因子の添加なしの培地において生存しない。
【０１８１】
神経栄養因子を添加した培地内での運動神経細胞の生存率と比較した、神経基礎培地（ＧＩＢＣＯ）に上記化合物を添加したときの運動神経細胞の死を阻止する能力によって試験される化合物の神経保護活性を評価した。
【０１８２】
本発明に係る式Ｉの化合物は神経基礎培地における運動神経細胞のより良好な生存率を可能にすることができる濃度で神経保護活性を示した。
【０１８３】
この生存率は、神経栄養因子により得られる生存と比較した、試験されるべき化合物で処置した後の生存細胞の数により表される。それゆえ、この比は、神経栄養因子により得られる生存と比較した、試験されるべき化合物による生存率を表すことができる。もし、この比が０より大きければ、運動神経細胞の生存に対する化合物の効果は正である。
得られる結果は下記のとおりである。
【０１８４】
【表１】
【０１８５】
本発明に係る式（Ｉ）の化合物は、それゆえ、医薬として、特に、脊髄運動神経に対するその化合物の栄養効果のために、筋萎縮症の処置、筋萎縮性側索硬化症又は小児脊髄性筋萎縮症の処置、及び、脊髄の外傷の処置における医薬として潜在的に有用であることを証明している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（上式中、Ｒ１は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、ヘテロサイクル、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、ここで、
(i)Ｒａ及びＲｂは同時に又は互いに独立に、水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基から選ばれることができ、又は、
(ii) Ｒａ及びＲｂは一緒になって２〜６個の炭素原子を有する直鎖又は枝分かれ鎖炭化水素鎖を形成することができ、該炭化水素鎖は、任意に、１個又は複数の二重結合を含んでよく及び／又は任意に、１個又は複数の酸素、硫黄又は窒素原子が介在してよく、
Ｒ２は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、
Ｒ３は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳｅＲａ、−ＣＯＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、又は、
Ｒ３及びＲ２はそれらが結合した炭素と一緒になって（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ４は水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、又は、
Ｒ４及びＲ２はＲ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなる炭素−炭素結合（Ｃ−Ｃ結合）を形成することができ、又は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ５は水素原子又は−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＣＮ、−ＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、
Ｒ６は水素原子、又は、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＮ、−ＣＨ２−ＳＲａ、−ＣＨ２−ＳｅＲａ基、又は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）：
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）又は−Ｃ（Ｏ）−Ｑ−Ｒｃ（Ｂ）
に対応する基であることができ、ここで、
＋Ｑは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、ここでＲａは上記に規定されるとおりであり、又は、任意に置換されていてよい直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素鎖により構成されるスペーサーアームであることができ、該スペーサーアームは２〜２０個の炭素原子を含みかつ少なくとも１個のヘテロ原子を含み、
＋Ｒｃは水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロサイクル−Ｃ（Ｏ）−であることができ、特に式（Ｃ）又は（Ｄ）
【化２】
のいずれかにより表される基であることができ、
Ｒ７は水素原子、又は、ハロゲン原子、又は、ヒドロキシ基であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ８は水素原子又は−ＯＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ９は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基であることができ、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０はＲ９と一緒になって、オキソ、＝ＣＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、＝ＣＨ−アリール、＝ＣＨ−（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基であることができ、
Ｒ１１は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はアリール基であることができ、好ましくは水素原子であり、又は、
Ｒ１１及びＲ９は一緒になってそれらが結合した炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成することができ、又は、一緒になってＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１２は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル基、又は、−ＯＲａ、−ＳＲａ基であることができ、−Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１３は
(i)Ｃ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基、特に、
【化３】
から選ばれる基であることができ、又は、
(ii)下記式Ｅ
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
Ｒ１４はＣ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基であることができ、特に、Ｃ５〜Ｃ１０アルキル基であることができ、好ましくは下記Ｇ７基
【化４】
であり、
Ｘは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、− Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクルであることができ、特に、上記のとおりの式（Ｃ）又は（Ｄ）により表される基であることができる）に対応する新規の化合物、ならびに、
存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、
存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、
医薬的に許容される酸又は塩基とのその付加塩、
その水和物及びその溶媒和物、
そのプロドラッグであるが、
ただし、以下の化合物を除く、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−７，７−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−（３−オキシイミノ−ブチル）−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン−６−オン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４、２２−ジエン、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４，６−トリエン。
【請求項２】
Ｒ１は水素原子であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、任意にＣ１〜Ｃ４アルキルであることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１はフッ素原子であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１は任意に置換されていてよいフェニルであることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ６はＣＨ３基及びＣＨ２−ＯＨ基から選ばれることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）に対応する基であることができ、
ここで、Ｑは酸素原子であることができ、そして
Ｒｃは式（Ｃ）
【化５】
に対応する基であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
式（Ｉ）に対応しており、Ｒ４はＲ２とともに、Ｒ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成していることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
式（Ｉ）に対応しており、Ｒ１１はＲ９とともに、Ｒ１１及びＲ９が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成していることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ７及びＲ８は水素原子であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６はメチルであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１３は
【化６】
から選ばれる基であることができることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１３はＧ１
【化７】
であることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１３はＧ２
【化８】
であることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１３は下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
ここで、Ｒ１４は下記のＧ７基
【化９】
であることができ、ＸはＮＨ又はＮＣＨ３であることができ、
Ｒ１５はアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクルから選ばれる基であることができる、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１５は下記式（Ｄ）
【化１０】
により表される基であることができることを特徴とする、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１３は下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
Ｒ１４は下記式Ｇ７基であることができ、
【化１１】
ＸはＮＨ又はＮＣＨ３であり、そして
Ｒ１５は下記式（Ｃ）
【化１２】
に対応する基であることができることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンズオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンであることを特徴とする、先行の請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２０】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の式（Ｉ）の化合物の医薬の調製のための使用。
【請求項２１】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、細胞保護用医薬、好ましくは、心保護用医薬及び／又は神経保護用医薬及び／又は肝保護用医薬の調製のための使用。
【請求項２２】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスの処置又は阻止のための医薬（抗ネクローシス薬及び／又は抗アポトーシス薬及び／又は抗ネクロトーシス薬）の調製における使用。
【請求項２３】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、自然又は偶発のいずれかによる、細胞変性又は細胞死、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の細胞変性又は細胞死に関連する病態及び外傷の処置のための医薬の調製のための使用。
【請求項２４】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気；
筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚疾患；
心血管疾患;
循環器系疾患;
血液及び血管疾患;
慢性閉塞性肺疾患を含む肺疾患;
消化管疾患；
肝疾患；
膵臓疾患;
代謝性疾患;
腎臓疾患;
ウイルス及び細菌感染症;
重篤な中毒症；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
老化に関連する障害；
炎症性疾患；
自己免疫疾患；
歯科障害；
眼科疾患又は障害；
聴覚伝導路の障害；
ミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）；
神経学的疾患及び神経変性疾患、
などの状態の処置のための医薬の調製のための、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物、又は、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの使用。
【請求項２５】
神経変性疾患の処置のための医薬を調製するための、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物、又は、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの使用。
【請求項２６】
前記神経保護薬は、ハンチントン病、遺伝性もしくは孤発性の慢性神経変性疾患、老化に関連する神経細胞病変、遺伝性であるか又は病変により生じる末梢神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は抗癌剤処置により生じる神経障害、てんかん、慢性脱髄性疾患及び神経変性疾患、特に、多発性硬化症及びロイコジストロフィー、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか又は老化に関連している変性又は視神経の変性、聴覚神経細胞の遺伝性であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、運動神経細胞の変性に関連している疾患及び外傷、脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷から選ばれる神経変性疾患の処置のためのものであることを特徴とする、請求項２４又は２５記載の使用。
【請求項２７】
前記神経保護薬は脊髄性筋萎縮症の処置、特に、小児脊髄性筋萎縮症の処置、又は、筋萎縮性側索硬化症の処置のためのものであることを特徴とする、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の使用。
【請求項２８】
トレーサー又はラベル化剤としての請求項７、１７又は１８記載の化合物の使用。
【請求項２９】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物を活性成分として含み、また、医薬上許容される賦形剤を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（上式中、Ｒ１は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、ヘテロサイクル、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−ＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、ここで、
(i)Ｒａ及びＲｂは同時に又は互いに独立に、水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基から選ばれることができ、又は、
(ii) Ｒａ及びＲｂは一緒になって２〜６個の炭素原子を有する直鎖又は枝分かれ鎖炭化水素鎖を形成することができ、該炭化水素鎖は、任意に、１個又は複数の二重結合を含んでよく及び／又は任意に、１個又は複数の酸素、硫黄又は窒素原子が介在してよく、
Ｒ２は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、
Ｒ３は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、又は、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳｅＲａ、−ＣＯＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣＯＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、又は、
Ｒ３及びＲ２はそれらが結合した炭素と一緒になって（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ４は水素原子又はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、又は、
Ｒ４及びＲ２はＲ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなる炭素−炭素結合（Ｃ−Ｃ結合）を形成することができ、又は、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ５は水素原子又は−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＣＮ、−ＮＲａＲｂ基であることができ、−Ｒａ及び−Ｒｂは上記に規定されるとおりであり、
Ｒ６は水素原子、又は、−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＮ、−ＣＨ２−ＳＲａ、−ＣＨ２−ＳｅＲａ基、又は、下記式（Ａ）又は（Ｂ）：
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）又は−Ｃ（Ｏ）−Ｑ−Ｒｃ（Ｂ）
に対応する基であることができ、ここで、
＋Ｑは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、ここでＲａは上記に規定されるとおりであり、又は、任意に置換されていてよい直鎖もしくは枝分かれ鎖炭化水素鎖により構成されるスペーサーアームであることができ、該スペーサーアームは２〜２０個の炭素原子を含みかつ少なくとも１個のヘテロ原子を含み、
＋Ｒｃは水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、Ｃ１〜Ｃ６アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロサイクル−Ｃ（Ｏ）−であることができ、特に式（Ｃ）又は（Ｄ）
【化２】
のいずれかにより表される基であることができ、
Ｒ７は水素原子、又は、ハロゲン原子、又は、ヒドロキシ基であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ８は水素原子又は−ＯＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ９は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アリール基、又は、ハロゲン原子であることができ、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０は水素原子、又は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基、ハロゲン原子、又は、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＮＯ２、−ＯＲａ、−ＳＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ基であることができ、Ｒａ及びＲｂは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１０はＲ９と一緒になって、オキソ、＝ＣＨ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、＝ＣＨ−アリール、＝ＣＨ−（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル基であることができ、
Ｒ１１は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル又はアリール基であることができ、好ましくは水素原子であり、又は、
Ｒ１１及びＲ９は一緒になってそれらが結合した炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成することができ、又は、一緒になってＣ３〜Ｃ６シクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１２は水素原子、又は、Ｃ１〜６アルキル基、又は、−ＯＲａ、−ＳＲａ基であることができ、−Ｒａは上記に規定されるとおりであり、好ましくは水素原子であり、
Ｒ１３は
(i)Ｃ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基、特に、
【化３】
から選ばれる基であることができ、又は、
(ii)下記式Ｅ
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
Ｒ１４はＣ４〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２アルケニル基であることができ、特に、Ｃ５〜Ｃ１０アルキル基であることができ、好ましくは下記Ｇ７基
【化４】
であり、
Ｘは酸素原子又は−ＮＲａ基であることができ、Ｒａは上記に規定されるとおりであり、そして
Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール基、ヘテロサイクル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、− Ｃ（Ｏ）−Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−アリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）−ヘテロサイクルであることができ、特に、上記のとおりの式（Ｃ）又は（Ｄ）により表される基であることができる）に対応する新規の化合物、ならびに、
存在する場合にはそのＳＹＮ及びＡＮＴＩ異性体、
存在する場合にはその光学異性体（エナンチオマー、ジアステレオ異性体）、
医薬的に許容される酸又は塩基とのその付加塩、
その水和物及びその溶媒和物、
そのプロドラッグであるが、
ただし、以下の化合物を除く、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−７，７−ジメチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−（３−オキシイミノ−ブチル）−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン−６−オン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３−オキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン−６−オン、
３−オキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン−６−オン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−コレスト−４，２４−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−メチル−コレスト−４，２２−ジエン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４−エン、
３，６−ジオキシイミノ−２４−エチル−コレスト−４、２２−ジエン、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン、
３−オキシイミノ−コレスト−１，４，６−トリエン。
【請求項２】
Ｒ１は水素原子であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることができ、任意にＣ１〜Ｃ４アルキルであることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１はフッ素原子であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１は任意に置換されていてよいフェニルであることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ６はＣＨ３基及びＣＨ２−ＯＨ基から選ばれることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ６は下記式（Ａ）
−ＣＨ２−Ｑ−Ｒｃ（Ａ）に対応する基であることができ、
ここで、Ｑは酸素原子であることができ、そして
Ｒｃは式（Ｃ）
【化５】
に対応する基であることができることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
式（Ｉ）に対応しており、Ｒ４はＲ２とともに、Ｒ２及びＲ４が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成していることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
式（Ｉ）に対応しており、Ｒ１１はＲ９とともに、Ｒ１１及びＲ９が結合している炭素原子の間にさらなるＣ−Ｃ結合を形成していることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ７及びＲ８は水素原子であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１及びＲ１２は水素原子であることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６はメチルであることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１３は
【化６】
から選ばれる基であることができることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１３はＧ１
【化７】
であることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１３はＧ２
【化８】
であることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１３は下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
ここで、Ｒ１４は下記のＧ７基
【化９】
であることができ、ＸはＮＨ又はＮＣＨ３であることができ、
Ｒ１５はアリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクルから選ばれる基であることができる、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１５は下記式（Ｄ）
【化１０】
により表される基であることができることを特徴とする、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１３は下記式（Ｅ）
Ｒ１４−Ｘ−Ｒ１５（Ｅ）
に対応する基であることができ、
Ｒ１４は下記式Ｇ７基であることができ、
【化１１】
ＸはＮＨ又はＮＣＨ３であり、そして
Ｒ１５は下記式（Ｃ）
【化１２】
に対応する基であることができることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
３−オキシイミノ−４−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−６β−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，２−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２，６−ジフルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２α−フルオロ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−[メチル（７−ニトロ−２，１，３−ベンズオキサジアゾール−４−イル）アミノ]−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２５−（（Ｎ−（＋）−ビオチノイル−Ｎ−メチル）アミノ）−２７−ノルコレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ヒドロキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−１９−ビオチニルオキシ−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−２−メチル−コレスト−４−エン、
３−オキシイミノ−４−メトキシ−コレスト−４−エンであることを特徴とする、先行の請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２０】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の式（Ｉ）の化合物の医薬の調製のための使用。
【請求項２１】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、細胞保護用医薬、好ましくは、心保護用医薬及び／又は神経保護用医薬及び／又は肝保護用医薬の調製のための使用。
【請求項２２】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、ネクローシス及び／又は病理学的アポトーシス及び／又はネクロトーシスの処置又は阻止のための医薬（抗ネクローシス薬及び／又は抗アポトーシス薬及び／又は抗ネクロトーシス薬）の調製における使用。
【請求項２３】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物の、自然又は偶発のいずれかによる、細胞変性又は細胞死、特に、心臓細胞及び／又は神経細胞の細胞変性又は細胞死に関連する病態及び外傷の処置のための医薬の調製のための使用。
【請求項２４】
骨、関節、結合組織及び軟骨組織の病気；
筋ジストロフィーなどの筋疾患;
皮膚疾患；
心血管疾患;
循環器系疾患;
血液及び血管疾患;
慢性閉塞性肺疾患を含む肺疾患;
消化管疾患；
肝疾患；
膵臓疾患;
代謝性疾患;
腎臓疾患;
ウイルス及び細菌感染症;
重篤な中毒症；
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に関連する変性状態；
老化に関連する障害；
炎症性疾患；
自己免疫疾患；
歯科障害；
眼科疾患又は障害；
聴覚伝導路の障害；
ミトコンドリアに関連する疾患（ミトコンドリア病）；
神経学的疾患及び神経変性疾患、
などの状態の処置のための医薬の調製のための、
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物、又は、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの使用。
【請求項２５】
神経変性疾患の処置のための医薬を調製するための、３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物、又は、そのエステル及び／又は医薬上許容される酸とのその付加塩のいずれかの使用。
【請求項２６】
前記神経保護薬は、ハンチントン病、遺伝性もしくは孤発性の慢性神経変性疾患、老化に関連する神経細胞病変、遺伝性であるか又は病変により生じる末梢神経障害、シャルコー・マリー・トゥース病、糖尿病性神経障害又は抗癌剤処置により生じる神経障害、てんかん、慢性脱髄性疾患及び神経変性疾患、特に、多発性硬化症及びロイコジストロフィー、脳、末梢神経又は脊髄の外傷、脳又は脊髄の虚血、視覚神経細胞の遺伝性であるか、病変により生じるか又は老化に関連している変性又は視神経の変性、聴覚神経細胞の遺伝性であるか、外傷性であるか又は老化に関連している変性、葉性萎縮及び血管性認知症、運動神経細胞の変性に関連している疾患及び外傷、脊髄性筋萎縮症、特に、小児脊髄性筋萎縮症、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、及び、脊髄又は末梢運動神経の外傷から選ばれる神経変性疾患の処置のためのものであることを特徴とする、請求項２４又は２５記載の使用。
【請求項２７】
前記神経保護薬は脊髄性筋萎縮症の処置、特に、小児脊髄性筋萎縮症の処置、又は、筋萎縮性側索硬化症の処置のためのものであることを特徴とする、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の使用。
【請求項２８】
トレーサー又はラベル化剤としての請求項７、１７又は１８記載の化合物の使用。
【請求項２９】
３−オキシイミノ−４−クロロ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−４−ブロモ−コレスト−４−エン、３−オキシイミノ−６−エトキシ−コレスト−４，６−ジエン及び３−オキシイミノ−４−メチル−コレスト−４−エンを含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の少なくとも１種の化合物を活性成分として含み、また、医薬上許容される賦形剤を含むことを特徴とする、医薬組成物。
【公表番号】特表２０１１−５２９４７８（Ｐ２０１１−５２９４７８Ａ）
【公表日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２０５４９（Ｐ２０１１−５２０５４９）
【出願日】平成２１年７月２９日（２００９．７．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００９／０００９４４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１２９０４
【国際公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【出願人】（５０５３４２０５８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１２月８日（２０１１．１２．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年７月２９日（２００９．７．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００９／０００９４４
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０１２９０４
【国際公開日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【出願人】（５０５３４２０５８）
【Ｆターム（参考）】
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