本明細書では、酵母細胞壁粒子を使用して物質（例えば、遺伝子サイレンシング物質）および分子を細胞に送達するための方法および組成物が提示される。本発明の態様は、核酸（例えば、siRNA）を細胞に送達するために特に有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母細胞壁粒子（YCWP）外部および多層状ナノ粒子内部を含むsiRNA送達系であって、前記多層状ナノ粒子内部がコア、少なくとも1つのペイロード層、および少なくとも1つの捕捉層を含み、前記ペイロード層はsiRNAを含む、siRNA送達系。
【請求項２】
捕捉層がコアおよびペイロード層の間にある、請求項1記載のsiRNA送達系。
【請求項３】
捕捉層がペイロード層の外側にある、請求項1記載のsiRNA送達系。
【請求項４】
少なくとも第2捕捉層を含む、請求項1記載のsiRNA送達系。
【請求項５】
第2捕捉層がペイロード層およびYCWP外部の間である、請求項4記載のsiRNA送達系。
【請求項６】
前記ペイロード層および捕捉層が静電相互作用によって結び付いている、請求項1〜5のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項７】
コアおよび捕捉層が静電相互作用によって結び付いている、請求項1〜6のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項８】
コアがカチオン性界面活性剤を含む、請求項1〜7のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項９】
捕捉層がカチオン性である、請求項1〜8のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１０】
コアが表面上でカチオン性である、請求項8記載のsiRNA送達系。
【請求項１１】
コアがカチオン性界面活性剤を含む、請求項8記載のsiRNA送達系。
【請求項１２】
siRNAがMap4k4 siRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１３】
siRNAが炎症性サイトカインsiRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１４】
siRNAがTNF-αsiRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１５】
siRNAがRIP140 siRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１６】
siRNAがTLR4シグナリングsiRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１７】
siRNAがaP2 siRNAである、請求項1〜11のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１８】
コアがペイロードをさらに含むペイロードコアである、請求項1〜17のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項１９】
ペイロードがsiRNAである、請求項18記載のsiRNA送達系。
【請求項２０】
ペイロードコアおよびペイロード層が同一siRNAを含む、請求項18または19記載のsiRNA送達系。
【請求項２１】
ペイロードコアおよびペイロード層が別個のsiRNAを含む、請求項18または19記載のsiRNA送達系。
【請求項２２】
siRNAがYCWPに付き約0.1×10^-7〜100×10^-7pmolのsiRNAの比率で存在している、請求項1〜20のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項２３】
ペイロードが非siRNAペイロードである、請求項18記載のsiRNA送達系。
【請求項２４】
非siRNAペイロードがDNA、タンパク質、非siRNA RNA、アンチセンスDNA、および低分子からなる群より選択される、請求項23記載のsiRNA送達系。
【請求項２５】
DNAが発現ベクターである、請求項24記載のsiRNA送達系。
【請求項２６】
捕捉層が荷電ポリマー、荷電界面活性剤またはそれらの混合物を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項２７】
捕捉層がカチオン性ポリマー、カチオン性界面活性剤またはそれらの混合物を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項２８】
コアがカチオン性ポリマー、カチオン性界面活性剤またはそれらの混合物を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項２９】
カチオン性ポリマーがキトサン、ポリ-L-リシンおよびポリエチレンイミン（PEI）からなる群より選択される、請求項27または28記載のsiRNA送達系。
【請求項３０】
カチオン性ポリマーがタンパク質、ポリペプチド、短鎖合成ペプチド、ヘリカル両親媒性ペプチド、カチオン性デンドリマー類、グルカラミド（glucaramide）ポリマー、N置換グリシンオリゴマー、ポリ（2-メチル-アクリル酸2-［（2-ジメチルアミノ）-エチル）-メチル-アミノ］-エチルエステル）（poly(2-methyl-acrylic acid 2-[(2- dimethylamino)-ethyl)-methyl-amino]-ethy- 1 ester)）、ポリ（2-ジメチルアミノエチル）-メタクリレートおよびそれらの混合物からなる群より選択される、請求項27または28記載のsiRNA送達系。
【請求項３１】
カチオン性ポリマーがポリエチレンイミン（PEI）である、請求項29記載のsiRNA送達系。
【請求項３２】
非siRNAペイロードをさらに含む、請求項1〜24のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項３３】
コアがアニオン性ポリマー、アニオン性界面活性剤またはそれらの混合物を含む、請求項1〜24のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項３４】
アニオン性ポリマーがアルギネートまたはキサンタンである、請求項32または33記載のsiRNA送達系。
【請求項３５】
コアが核酸、タンパク質、生体ポリマー、無機塩、およびそれらの混合物からなる群より選択される生体適合性物質をさらに含む、請求項1〜34のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項３６】
生体適合性物質が核酸である、請求項35記載のsiRNA送達系。
【請求項３７】
生体適合性物質がトランスファーRNA（tRNA）である、請求項36記載のsiRNA送達系。
【請求項３８】
YCWPが細胞または組織特異的ターゲティング物質を含むように化学修飾されている、請求項1〜37のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項３９】
ペイロード核酸が10⁹粒子のYCWPに付き約1μg〜約2,000μgの核酸の比率で存在している、前記請求項のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項４０】
ペイロード核酸が10⁹粒子のYCWPに付き約1μg〜約12μgの核酸の比率で存在している、前記請求項のいずれか一項記載のsiRNA送達系。
【請求項４１】
ペイロード核酸が1mgのYCWPに付き4μgの比率で存在している、請求項39のsiRNA送達系。
【請求項４２】
siRNAを食細胞へ送達する方法であって、siRNAの送達が発生するように、前記細胞を、siRNA送達系の食作用を促進する条件下で前記請求項のいずれか一項記載の前記siRNA送達系と接触させる工程を含む、方法。
【請求項４３】
食細胞が単球、好中球および樹状細胞からなる群より選択される、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
食細胞がマクロファージである、請求項42記載の方法。
【請求項４５】
siRNA送達系を作製する方法であって、前記siRNA送達系が形成されるような条件下で、YCWPを
（a）少なくとも1つのコア成分;
（b）少なくとも1つのペイロード層の形成を促進する条件下で、ペイロード成分;および
（c）少なくとも1つの捕捉層の形成を促進する条件下で、捕捉成分と接触させる工程を含む、方法。
【請求項４６】
疾患または障害を治療する方法であって、それを必要とする被験者に、前記疾患または障害が治療されるように、ペイロードの送達を促進する条件下で、前記請求項のいずれか一項記載のsiRNA送達系を投与する工程を含む、方法。
【請求項４７】
TLR4-媒介性疾患または障害を治療する方法であって、それを必要とする被験者に、請求項1〜36のいずれか一項記載のsiRNA送達系を投与する工程を含み、siRNAが、前記疾患または障害が治療されるように、前記siRNAの送達およびTLR4シグナリングの変調を促進する条件下でTLR4シグナリング成分を標的とする、方法。
【請求項４８】
siRNA送達系が経口投与される、請求項46または47記載の方法。
【請求項４９】
siRNA送達系が全身性投与される、請求項46または47記載の方法。
【請求項５０】
疾患または障害が炎症性疾患または障害である、請求項46〜49のいずれか一項記載の方法。
【請求項５１】
疾患または障害が自己免疫障害、敗血症、腸の障害、感染性疾患、悪性腫瘍、肺障害、心障害、および神経障害からなる群より選択される、請求項46〜49のいずれか一項記載の方法。
【請求項５２】
疾患または障害がクローン（Crohn）病、HIV、関節炎、心血管疾患および癌からなる群より選択される、請求項51に記載の方法。
【請求項５３】
疾患が代謝性疾患または障害である、請求項46〜49のいずれか一項記載の方法。
【請求項５４】
疾患または障害が耐糖能、インスリン感受性、糖尿病および肥満症からなる群より選択される、請求項53に記載の方法。
【請求項５５】
インスリン感受性を増強する方法であって、それを必要とする被験者に、請求項1〜11および請求項17〜36のいずれか一項記載のsiRNA送達系を投与する工程を含み、siRNAがsiRNAのマクロファージへの送達を促進する条件下でaP2を標的とし、aP2のサイレンシングは結果として前記被験者における増強されたインスリン感受性を生じさせる、方法。
【請求項５６】
インスリン感受性を増強する方法であって、それを必要とする被験者に、請求項1〜12および請求項17〜36のいずれか一項記載のsiRNA送達系を投与する工程を含み、siRNAがsiRNAのマクロファージへの送達を促進する条件下でMap4K4を標的とし、Map4K4のサイレンシングは結果として前記被験者における増強されたインスリン感受性を生じさせる、方法。
【請求項５７】
siRNA送達系が経口投与される、請求項55または56記載の方法。
【請求項５８】
siRNA送達系が全身性投与される、請求項55または56記載の方法。
【請求項５９】
被験者が2型糖尿病を有する、請求項55〜58のいずれか一項記載の方法。
【請求項６０】
経口薬物送達の方法であって、被験者に前記請求項のいずれか一項記載のsiRNA送達系を、siRNAがマクロファージへ送達されるように、siRNA薬物送達系と前記被験者内のマクロファージとの接触を促進する条件下で投与する工程を含む、方法。
【請求項６１】
マクロファージ媒介性siRNA送達法であって、siRNAの送達が発生するように、マクロファージを、siRNA送達系の食作用を促進する条件下で前記請求項のいずれか一項記載の前記siRNA送達系と接触させる工程を含む、方法。
【請求項６２】
マクロファージがインビトロで接触させられる、請求項61記載の方法。
【請求項６３】
マクロファージがインビボで接触させられる、請求項61記載の方法。

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０ａ】

【図２０ｂ】

【図２０ｃ】

【図２０ｄ】

【図２０ｅ】

【図２０ｆ】

【図２０ｇ】

【図２０ｈ】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４ａ】

【図２４ｂ】

【図２４ｃ】

【図２４ｄ】

【図２４ｅ】

【図２５】

【図２６】

【図２７ａ】

【図２７ｂ】

【図２７ｃ】

【図２７ｄ】

【図２７ｅ】

【図２７ｆ】

【図２７ｇ】

【図２８ａ】

【図２８ｂ】

【図２８ｃ】

【図２８ｄ】

【図２８ｅ】

【図２８ｆ】

【図２８ｇ】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６ａ】

【図３６ｂ】

【図３６ｃ】

【図３６ｄ】

【図３７】

【公表番号】特表２０１１−５１７２７９（Ｐ２０１１−５１７２７９Ａ）
【公表日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３２２２２（Ｐ２０１０−５３２２２２）
【出願日】平成２０年１０月２９日（２００８．１０．２９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８１６５３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５８９１３
【国際公開日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【出願人】（５０５２３１６５９）ユニバーシティ　オブ　マサチューセッツ (23)
【Ｆターム（参考）】