標的化のためのＥｒｂＢ４細胞外ドメインおよびニューレグリンヘパリン結合ドメインを有するハイブリッドタンパク質
ニューレグリン（ＮＲＧ）ヘパリン結合ドメイン（Ｎ−ＨＢＤ）のポリペプチドおよびそれをコードする核酸が、開示される。特に、融合ポリペプチドが産生され、この融合ポリペプチドは、標的構造として、Ｎ−ＨＢＤのポリペプチド、フラグメント、ホモログ、または機能的誘導体、および標的化されるタンパク質を含む。これは、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが豊富な細胞表面に対して標的化されるポリペプチドまたはペプチド（Ｐｔｒｇ）に融合されて、チロシンキナーゼレセプターにおける相互作用を、活性化または阻害する。好ましい融合ポリペプチドは、Ｎ−ＨＢＤ、スペーサーおよびｅｒｂＢ４（ＮＲＧによってシグナル伝達される数種のレセプターの１つ）の細胞外ドメインを含み、この融合タンパク質は、強力なＮＲＧアンタゴニストである。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−ＨＢＤ融合ポリペプチドをコードするハイブリッド核酸分子であって、該分子は、以下：
（ａ）動物Ｎ−ＨＢＤポリペプチド、または該ポリペプチドのホモログもしくは機能的誘導体をコードする約１００ヌクレオチドより長くない第１の核酸配列であって、該ポリペプチド、該ホモログまたは該機能的誘導体が、以下：
（ｉ）免疫グロブリンスーパーファミリーのＣ２サブファミリーのメンバーであるが、同じ動物種由来の免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖のＣ２ドメインに対して約４０％未満の配列同一性を有し；そして
（ｉｉ）従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンおよびヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する；
ことにおいて特徴付けられる、第１の核酸配列；
（ｂ）必要に応じて、該第１の核酸配列とインフレームで融合される、リンカーペプチドをコードするリンカー核酸配列；および
（ｃ）第２の核酸配列であって、該第２の核酸配列が、（ｉ）該第１の核酸配列または該リンカー核酸配列にインフレームで連結され、そして（ｉｉ）第２のポリペプチドＰｔｒｇをコードし、該第２の核酸配列がｅｒｂＢ４レセプター（Ｂ４）細胞外ドメインをコードする、第２の核酸配列、
を含み、該コードされた融合ポリペプチドは、ニューレグリンアンタゴニストである、ハイブリッド核酸分子。
【請求項２】
前記Ｎ−ＨＢＤポリペプチドが、以下：
【化１】
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）の機能的誘導体またはホモログ、
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下：
【化２】
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項４】
配列番号４のヌクレオチド配列を含む、請求項３に記載の核酸分子。
【請求項５】
発現ベクターであって、以下：
（ａ）プロモーターおよび
（ｂ）必要に応じて、真核生物細胞における該核酸の発現を調節する、さらなる調節配列、
に作動可能に連結される請求項１〜５のいずれかに記載の核酸を含み、該ベクターが、細胞へのインビトロまたはインビボでの送達の後に、該細胞中で発現され得る、発現ベクター。
【請求項６】
プラスミドである、請求項５に記載の発現ベクター。
【請求項７】
ウイルスベクターである、請求項５の発現ベクター。
【請求項８】
ベクター組成物であって、以下：
（ａ）第１の組換え発現ベクターであって、該第１の組換え発現ベクターは、その核酸中に、Ｎ−ＨＢＤポリペプチドまたは該Ｎ−ＨＢＤの生物学的に活性なフラグメント、ホモログ、もしくは他の機能的誘導体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を組み込んでいる、第１の組換え発現ベクター；および
（ｂ）第２の組換え発現ベクターであって、該第２の組換え発現ベクターは、その核酸中に、Ｂ４細胞外ドメインであるポリペプチドＰｔｒｇをコードするヌクレオチド配列を組み込んでいる、第２の組換え発現ベクター、
を含み、該発現ベクターは、宿主細胞を同時感染または同時トランスフェクトして、ＰｔｒｇおよびＮ−ＨＢＤポリペプチド、Ｎ−ＨＢＤフラグメント、Ｎ−ＨＢＤホモログ、またはＮ−ＨＢＤ誘導体の同時発現をもたらし得る、ベクター組成物。
【請求項９】
前記第１のベクターが、配列番号４、配列番号５または配列番号６を含む、請求項８に記載のベクター組成物。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれかの核酸分子によって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１１】
請求項５〜７のいずれかの発現ベクターによって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１２】
請求項８または９の組成物によって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１３】
哺乳動物細胞である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１４】
ヒト細胞である、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
哺乳動物細胞である、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１６】
ヒト細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
融合ポリペプチドであって、以下：
（ａ）第１の標的化ポリペプチドであって、該第１の標的化ポリペプチドは、該融合ポリペプチドが細胞または組織に接触し得る場合に、ヘパラン硫酸に結合し、それによって該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織表面に、該融合ポリペプチドを局在化し；
該融合ポリペプチドは、従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンまたはヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する、
第１の標的化ポリペプチド；ならびに
（ｂ）Ｂ４細胞外ドメインを含み、そして該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織表面に標的化および局在化される、第２の標的化されるポリペプチドＰｔｒｇ；
を含み、ここで、該融合ポリペプチドは、該Ｐｔｒｇの作用を介して、標的レセプターのブロックにおいて、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されないＰｔｒｇと比較して増強された生物学的活性を有する、融合ポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１７に記載の融合ポリペプチドであって、ここで、前記第１の標的化ポリペプチドが、Ｎ−ＨＢＤまたはそのホモログもしくは機能的誘導体の全てまたは一部を含み、該第１の標的化ポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的化されるポリペプチドに直接的に融合されるか、または
（ｉｉ）必要に応じて、該第２の標的化されるポリペプチドに融合されるリンカーまたはスペーサーペプチド配列Ｓに融合される、融合ポリペプチド。
【請求項１９】
前記Ｎ−ＨＢＤと前記Ｂ４細胞外ドメインとの間にリンカーまたはスペーサー配列Ｓを含む、請求項１８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２０】
前記スペーサーが、配列番号１４の残基１３１〜１９５のアミノ酸配列、またはそれと相同な配列を有するニューレグリンの天然のアミノ酸スペーサーである、請求項１９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２１】
タグ配列をさらに含む、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項２２】
前記タグ配列が、前記融合ポリペプチドのＣ末端にある、請求項２１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２３】
前記タグ配列が、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）配列である、請求項２１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２４】
前記ヘパラン硫酸結合領域、またはＮ−ＨＢＤの全てもしくは一部、またはホモログもしくは機能的誘導体は、前記Ｂ４ドメインに対するＮ−末端である、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項２５】
ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４−ＨＡのＮ−末端からＣ−末端までの模式的な構造を有する、請求項２４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２６】
前記ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４領域が、配列番号１３の配列を有する核酸分子によってコードされる、請求項２５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２７】
前記ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４領域が、配列番号１４の配列を有する、請求項２５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２８】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するため、および該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２４に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３０】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２５に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３１】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２６に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３２】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２７に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３３】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、該細胞において発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する融合ポリペプチドまたはそのホモログもしくは機能的誘導体を産生する、請求項１〜４のいずれかに記載の核酸の有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、該細胞において発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する融合ポリペプチドまたはそのホモログもしくは機能的誘導体を産生する、請求項５〜７のいずれかに記載の発現ベクターの有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、請求項８または９のいずれかに記載のベクターが該細胞において同時発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する前記Ｐｔｒｇおよび前記Ｎ−ＨＢＤポリペプチド、Ｎ−ＨＢＤフラグメント、Ｎ−ＨＢＤホモログまたはＮ−ＨＢＤ誘導体を産生するように、請求項８または９のいずれかに記載のベクター組成物の有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２１に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３８】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２４に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３９】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２５に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４０】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２６に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２７に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４２】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項２８に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、ここで、前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４３】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍または前記癌の細胞表面における前記ヘパラン硫酸が、Ｎ−硫酸化、２−Ｏ−硫酸化および６−Ｏ硫酸化を含むパターンで硫酸化される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍または前記癌が、乳房もしくは卵巣の腫瘍または癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項２９に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４７】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３０に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４９】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３１に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項５１】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３２に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項５３】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項５２に記載の方法。
【請求項１】
Ｎ−ＨＢＤ融合ポリペプチドをコードするハイブリッド核酸分子であって、該分子は、以下：
（ａ）動物Ｎ−ＨＢＤポリペプチド、または該ポリペプチドのホモログもしくは機能的誘導体をコードする約１００ヌクレオチドより長くない第１の核酸配列であって、該ポリペプチド、該ホモログまたは該機能的誘導体が、以下：
（ｉ）免疫グロブリンスーパーファミリーのＣ２サブファミリーのメンバーであるが、同じ動物種由来の免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖のＣ２ドメインに対して約４０％未満の配列同一性を有し；そして
（ｉｉ）従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンおよびヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する；
ことにおいて特徴付けられる、第１の核酸配列；
（ｂ）必要に応じて、該第１の核酸配列とインフレームで融合される、リンカーペプチドをコードするリンカー核酸配列；および
（ｃ）第２の核酸配列であって、該第２の核酸配列が、（ｉ）該第１の核酸配列または該リンカー核酸配列にインフレームで連結され、そして（ｉｉ）第２のポリペプチドＰｔｒｇをコードし、該第２の核酸配列がｅｒｂＢ４レセプター（Ｂ４）細胞外ドメインをコードする、第２の核酸配列、
を含み、該コードされた融合ポリペプチドは、ニューレグリンアンタゴニストである、ハイブリッド核酸分子。
【請求項２】
前記Ｎ−ＨＢＤポリペプチドが、以下：
【化１】
（ｄ）（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）の機能的誘導体またはホモログ、
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。
【請求項３】
請求項１に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下：
【化２】
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項４】
配列番号４のヌクレオチド配列を含む、請求項３に記載の核酸分子。
【請求項５】
発現ベクターであって、以下：
（ａ）プロモーターおよび
（ｂ）必要に応じて、真核生物細胞における該核酸の発現を調節する、さらなる調節配列、
に作動可能に連結される請求項１〜５のいずれかに記載の核酸を含み、該ベクターが、細胞へのインビトロまたはインビボでの送達の後に、該細胞中で発現され得る、発現ベクター。
【請求項６】
プラスミドである、請求項５に記載の発現ベクター。
【請求項７】
ウイルスベクターである、請求項５の発現ベクター。
【請求項８】
ベクター組成物であって、以下：
（ａ）第１の組換え発現ベクターであって、該第１の組換え発現ベクターは、その核酸中に、Ｎ−ＨＢＤポリペプチドまたは該Ｎ−ＨＢＤの生物学的に活性なフラグメント、ホモログ、もしくは他の機能的誘導体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を組み込んでいる、第１の組換え発現ベクター；および
（ｂ）第２の組換え発現ベクターであって、該第２の組換え発現ベクターは、その核酸中に、Ｂ４細胞外ドメインであるポリペプチドＰｔｒｇをコードするヌクレオチド配列を組み込んでいる、第２の組換え発現ベクター、
を含み、該発現ベクターは、宿主細胞を同時感染または同時トランスフェクトして、ＰｔｒｇおよびＮ−ＨＢＤポリペプチド、Ｎ−ＨＢＤフラグメント、Ｎ−ＨＢＤホモログ、またはＮ−ＨＢＤ誘導体の同時発現をもたらし得る、ベクター組成物。
【請求項９】
前記第１のベクターが、配列番号４、配列番号５または配列番号６を含む、請求項８に記載のベクター組成物。
【請求項１０】
請求項１〜４のいずれかの核酸分子によって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１１】
請求項５〜７のいずれかの発現ベクターによって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１２】
請求項８または９の組成物によって、形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１３】
哺乳動物細胞である、請求項１０に記載の細胞。
【請求項１４】
ヒト細胞である、請求項１３に記載の細胞。
【請求項１５】
哺乳動物細胞である、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１６】
ヒト細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
融合ポリペプチドであって、以下：
（ａ）第１の標的化ポリペプチドであって、該第１の標的化ポリペプチドは、該融合ポリペプチドが細胞または組織に接触し得る場合に、ヘパラン硫酸に結合し、それによって該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織表面に、該融合ポリペプチドを局在化し；
該融合ポリペプチドは、従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンまたはヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する、
第１の標的化ポリペプチド；ならびに
（ｂ）Ｂ４細胞外ドメインを含み、そして該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織表面に標的化および局在化される、第２の標的化されるポリペプチドＰｔｒｇ；
を含み、ここで、該融合ポリペプチドは、該Ｐｔｒｇの作用を介して、標的レセプターのブロックにおいて、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されないＰｔｒｇと比較して増強された生物学的活性を有する、融合ポリペプチド。
【請求項１８】
請求項１７に記載の融合ポリペプチドであって、ここで、前記第１の標的化ポリペプチドが、Ｎ−ＨＢＤまたはそのホモログもしくは機能的誘導体の全てまたは一部を含み、該第１の標的化ポリペプチドは、
（ｉ）前記第２の標的化されるポリペプチドに直接的に融合されるか、または
（ｉｉ）必要に応じて、該第２の標的化されるポリペプチドに融合されるリンカーまたはスペーサーペプチド配列Ｓに融合される、融合ポリペプチド。
【請求項１９】
前記Ｎ−ＨＢＤと前記Ｂ４細胞外ドメインとの間にリンカーまたはスペーサー配列Ｓを含む、請求項１８に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２０】
前記スペーサーが、配列番号１４の残基１３１〜１９５のアミノ酸配列、またはそれと相同な配列を有するニューレグリンの天然のアミノ酸スペーサーである、請求項１９に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２１】
タグ配列をさらに含む、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項２２】
前記タグ配列が、前記融合ポリペプチドのＣ末端にある、請求項２１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２３】
前記タグ配列が、インフルエンザ赤血球凝集素（ＨＡ）配列である、請求項２１に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２４】
前記ヘパラン硫酸結合領域、またはＮ−ＨＢＤの全てもしくは一部、またはホモログもしくは機能的誘導体は、前記Ｂ４ドメインに対するＮ−末端である、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド。
【請求項２５】
ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４−ＨＡのＮ−末端からＣ−末端までの模式的な構造を有する、請求項２４に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２６】
前記ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４領域が、配列番号１３の配列を有する核酸分子によってコードされる、請求項２５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２７】
前記ＨＢＤ−Ｓ−Ｂ４領域が、配列番号１４の配列を有する、請求項２５に記載の融合ポリペプチド。
【請求項２８】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するため、および該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項２９】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２４に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３０】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２５に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３１】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２６に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３２】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、以下：
（ａ）請求項２７に記載の融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項３３】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、該細胞において発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する融合ポリペプチドまたはそのホモログもしくは機能的誘導体を産生する、請求項１〜４のいずれかに記載の核酸の有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、該細胞において発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する融合ポリペプチドまたはそのホモログもしくは機能的誘導体を産生する、請求項５〜７のいずれかに記載の発現ベクターの有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、請求項８または９のいずれかに記載のベクターが該細胞において同時発現され、そしてニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する前記Ｐｔｒｇおよび前記Ｎ−ＨＢＤポリペプチド、Ｎ−ＨＢＤフラグメント、Ｎ−ＨＢＤホモログまたはＮ−ＨＢＤ誘導体を産生するように、請求項８または９のいずれかに記載のベクター組成物の有効量を該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項１７〜２０のいずれかに記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２１に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３８】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２４に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項３９】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２５に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４０】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２６に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
ＥＧＦ−レセプターのニューレグリンによる活性化および／またはニューレグリンによるこのようなレセプターを有する細胞の増殖の刺激を阻害する方法であって、該方法は、ニューレグリンの結合および該レセプターの活性化を阻害する、請求項２７に記載の融合ポリペプチドの有効量を、該レセプターまたは該細胞に提供する工程を包含する、方法。
【請求項４２】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項２８に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、ここで、前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４３】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記腫瘍または前記癌の細胞表面における前記ヘパラン硫酸が、Ｎ−硫酸化、２−Ｏ−硫酸化および６−Ｏ硫酸化を含むパターンで硫酸化される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記腫瘍または前記癌が、乳房もしくは卵巣の腫瘍または癌である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項２９に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４７】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３０に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項４９】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３１に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項５１】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ニューレグリンシグナル伝達の阻害によって処置可能な被験体における疾患または状態を処置するための方法であって、該方法は、請求項３２に記載の薬学的組成物の有効量を該被験体に投与する工程を包含し、それによって前記融合ポリペプチドのＢ４の生物学的活性は、ネイティブのＢ４または標的化ポリペプチドに融合されないＢ４の活性と比較して増加され、それによって該疾患または該状態を処置する、方法。
【請求項５３】
前記疾患または前記状態は、腫瘍の増殖および／もしくは転移がＮＲＧによるオートクライン刺激に依存する腫瘍、または癌である、請求項５２に記載の方法。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公表番号】特表２００８−５２０１８４（Ｐ２００８−５２０１８４Ａ）
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２０５３９（Ｐ２００７−５２０５３９）
【出願日】平成１７年７月８日（２００５．７．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２４２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１７１８４
【国際公開日】平成１８年２月１６日（２００６．２．１６）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＰＯＬＡＲＯＩＤ
【出願人】（３９９０２９７２１）ウェイン・ステイト・ユニバーシティ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月８日（２００５．７．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２４２７９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１７１８４
【国際公開日】平成１８年２月１６日（２００６．２．１６）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＰＯＬＡＲＯＩＤ
【出願人】（３９９０２９７２１）ウェイン・ステイト・ユニバーシティ (2)
【Ｆターム（参考）】
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