洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物
【課題】洗浄性を向上させる洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物を提供する。
【解決手段】特定のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤。この洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物。好ましくはさらにプロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有する洗剤組成物。
【解決手段】特定のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤。この洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物。好ましくはさらにプロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有する洗剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
衣料用洗剤において、洗浄性を向上させるための研究開発が行われており、例えば、界面活性剤にプロテアーゼ等の酵素を併用することで洗浄性が向上すること（特許文献１）は知られている。しかし、洗浄性の向上が十分ではない。
【０００３】
ところで、近年塩基配列決定技術の進展に伴って多種多様な生物のゲノムＤＮＡの塩基配列が決定され、生物情報科学的な観点から遺伝子の配列や機能も予測されている。しかし、その遺伝子がコードするタンパク質の機能が実際に予測に一致しない例が多い。そのため、実際に生化学的解析をしなければ正確な機能が特定できないのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平０６−０７３３９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の解決しようとする課題は、洗浄性を向上させる洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、洗浄性を向上させる成分を得るべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。すなわち、本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤である。
また、本発明の洗剤組成物は、洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の洗浄性向上剤は、洗剤の洗浄性を向上させることができる。また、本発明の洗剤組成物は、洗浄性が優れている。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなるものである。
【０００９】
本発明においてセルラーゼ（Ａ）は、β−１，４−グルカンのグリコシド結合を加水分解するというエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する酵素である。
【００１０】
本発明において、配列番号１のアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼとは、変質後も依然としてエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を保持するアミノ酸配列を有するセルラーゼであり、配列番号１のアミノ酸配列と等価であるアミノ酸配列を有するセルラーゼを意味する。
上記アミノ酸の付加とは、配列番号１のアミノ酸配列中のアミノ酸とアミノ酸との間に、１若しくは数個のアミノ酸が付加することを意味し、アミノ酸配列のＮ及び／又はＣ末端へのアミノ酸の付加は含まない。
上記１若しくは数個は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する観点から、１〜１０個が好ましく、さらに好ましくは１〜５個である。
【００１１】
セルラーゼ（Ａ）は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有するものであれば、配列番号１又はこのアミノ酸配列と等価であるアミノ酸配列のＮ及び／又はＣ末端に、ペプチド配列（Ｎ）を有していてもいい。（Ｎ）は、アミノ酸１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。（Ｎ）として、具体的には、ＭＤ配列、ＭＫＹＬＬＰＴＡＡＡＧＬＬＬＬＡＡＱＰＡＭＡＭＤ配列（配列番号（２））及びＳＤＰＮＳＳＳＶＤＫＬＡＡＡＬＥ配列（配列番号（１２））等が挙げられる。
（Ｎ）を構成するアミノ酸の数は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜２０個、特に好ましくは１〜１０個である。
【００１２】
また、セルラーゼ（Ａ）は、上記（Ｎ）以外に、セルラーゼ（Ａ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等が挙げられる。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるセルラーゼ（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００１３】
本発明において、セルラーゼ（Ａ）の活性は、一般的なエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性測定法によって測定できる。エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性測定法として、具体的には、粘度測定法が挙げられる。
【００１４】
粘度測定法は、ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）を基質として用いて反応させた後、溶液の粘度を測定してエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を検出する方法である。具体的には、下記の粘度測定法により測定される。
＜粘度測定法＞
ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、１７．５ｇ／ＬになるようにＣＭＣ（製品名：カルボキシメチルセルロースナトリウム０３９−０１３３５、和光純薬社製）を溶解し、基質溶液を調整する。ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、一定量のセルラーゼ（Ａ）を溶解したセルラーゼ（Ａ）溶液を調整する。基質溶液３ｍＬとセルラーゼ（Ａ）溶液５μＬを混合し、４０℃に温度を調節した粘度計（例えば、ＴＶＥ−２２Ｌ粘度計、２ｒｐｍ）に移す。混合直後に粘度を読み取り、１、２、３、４、５及び６分後に粘度を読み取る。セルラーゼ（Ａ）の濃度が異なるセルラーゼ（Ａ）溶液を用いて同様に測定する。セルラーゼ（Ａ）溶液及び基質溶液を混合直後の粘度と、５分後の粘度とを比較して、５分後の粘度が１／２となるセルラーゼ（Ａ）の量（ｍｇ）を、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性１単位と定義する。１単位となるセルラーゼ量（単位：ｍｇ）から、セルラーゼ１ｍｇ当たりのエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性単位を算出する。
【００１５】
セルラーゼ（Ａ）の粘度測定法によるエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性は、洗浄性を向上させる観点から、１〜１００００単位／ｍｇが好ましく、さらに好ましくは２０〜２０００単位／ｍｇである。
【００１６】
上記セルラーゼ（Ａ）は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有するセルラーゼ又はこのアミノ酸配列と等価のアミノ酸配列を有するセルラーゼをコードする遺伝子を微生物等の宿主に導入し、宿主を培養液中で培養し、培養液中からセルラーゼを採取及び精製することによって生産することができる。
【００１７】
なお、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子は、自然界等から得ることも可能ではあるが、更に部位特異的突然変異誘発法等の公知の手法を利用して調製することもできる。
【００１８】
セルラーゼ（Ａ）は、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を、例えばバチラス属に属する微生物、例えばＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ等から、ショットガン法、ＰＣＲ法を用いてクローニングし、適当なベクターと宿主菌を用いて大量に生産することができる。
【００１９】
セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を用いてセルラーゼ（Ａ）を生産する方法は、目的とする宿主内で遺伝子を発現するのに適した任意のベクターに、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を組込み、この組換えベクターを用いて宿主を形質転換し、組み換えベクターを含む形質転換体を得る。得られた形質転換体を培養し、この培養液からセルラーゼを採取すればよい。
【００２０】
組換えベクターは、適当なベクターにセルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を挿入することによって得ることができる。
ベクターは種々のものが公知であり、市販品も多く存在する。当業者であれば、宿主の種類に応じて適切なベクターを容易に選択することができる。ベクターの具体例としては、ｐＥＴシリーズ及びｐＵＣシリーズ等が挙げられる。
組換えベクターの調製方法自体は周知の常法である。適当なベクターにセルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を挿入し、宿主を形質転換する具体的な方法としては、エレクトロポレーション法及びカルシウム法等が挙げられる。
【００２１】
本発明において、宿主としては、動物細胞、微生物、植物細胞などが挙げられる。
動物細胞としては、特に限定されないが、昆虫細胞、サル細胞ＣＯＳ−７、Ｖｅｒｏ、マウスＬ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細胞及びＣＨＯ細胞等が挙げられる。
昆虫細胞としては、特に限定されないが、Ｓｆ９細胞及びＳｆ２１細胞等が挙げられる。
微生物としては、特に限定されないが、細菌及び酵母等が挙げられる。
細菌としては、真正細菌及び古細菌が含まれる。
真正細菌には、グラム陰性菌及びグラム陽性菌が含まれる。グラム陰性細菌としては、エシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、サーマス属菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、リゾビウム属菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、シュードモナス属菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、ビブリオ属菌（Ｖｉｂｒｉｏ）、サルモネラ属菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属）、シネコシスティス属（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ属）等が挙げられる。グラム陽性菌としては、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ属）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）、ブレビバチルス属（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ビフィドバクテリウム属 (Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属)、ラクトコッカス属 (Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属)、エンテロコッカス属 (Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属)、ペディオコッカス属(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属)、リューコノストック属 (Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属)、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属）等が挙げられる。
植物細胞としては、特に限定されないが、ＢＹ−２細胞等が挙げられる。
【００２２】
本発明において、宿主としては、クローニングの容易さの観点から、微生物が好ましく、さらに好ましくはエシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、サーマス属菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、リゾビウム属菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、シュードモナス属菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、ビブリオ属菌（Ｖｉｂｒｉｏ）、サルモネラ属菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属）、シネコシスティス属（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ属）であり、特に好ましくはエシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ブレビバチルス属（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ属）である。
【００２３】
培養は微生物の資化可能な炭素源、窒素源その他の必須栄養素を含む培地に接種し、常法に従って行えばよい。
【００２４】
本発明において、培養液からセルラーゼ（Ａ）を採取及び精製する方法としては、常法に準じて行うことができる。例えば、培養物から遠心分離又は濾過することで菌体を除き、得られた培養上清液から常法手段により目的酵素を濃縮することができる。このようにして得られた酵素液又は乾燥粉末はそのまま用いることもできるが更に公知の方法により結晶化や造粒化することができる。
【００２５】
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、上記セルラーゼ（Ａ）からなるものである。
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）を洗浄剤に添加することにより、洗浄剤の洗浄性を向上させることができる。さらに、洗浄性向上剤（Ｂ）により向上した洗浄性は、長期間保管後も低下しない。
【００２６】
また、本発明の洗剤組成物は、上記洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物である。
【００２７】
洗剤組成物中に含む洗浄性向上剤（Ｂ）として、好ましいものは、上記と同様である。
【００２８】
界面活性剤（Ｃ）には、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）、アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）、カチオン性界面活性剤（Ｃ−３）、両性界面活性剤（Ｃ−４）及びバイオサーファクタント（Ｃ−５）が含まれる。
【００２９】
非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）としては、アルキレンオキサイド付加型非イオン性界面活性剤（Ｃ−１−１）及び多価アルコール型非イオン性界面活性剤（Ｃ−１−２）等が挙げられる。
【００３０】
（Ｃ−１−１）としては、高級アルコール（炭素数８〜１８）アルキレン（炭素数２〜４、好ましいのは２）オキサイド付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜３０）、アルキル（炭素数１〜１２）フェノールエチレンオキサイド（以下、エチレンオキサイドをＥＯと記載することがある）付加物（付加モル数１〜３０）、高級アミン（炭素数８〜２２）アルキレン（炭素数２〜４、好ましいのは２）オキサイド付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜４０）、脂肪酸（炭素数８〜１８）ＥＯ付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜６０）、ポリプロピレングリコール（分子量２００〜４０００）ＥＯ付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜５０）、ポリオキシエチレン（繰り返し単位数３〜３０）アルキル（炭素数６〜２０）アリルエーテル並びにソルビタンモノラウレートＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）及びソルビタンモノオレートＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）等の多価（２〜８価又はそれ以上）アルコール（炭素数２〜３０）の脂肪酸（炭素数８〜２４）エステルＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）等が挙げられる。
【００３１】
（Ｃ−１−２）としては、グリセリンモノステアレート、グリセリンモノオレート、ソルビタンモノラウレート及びソルビタンモノオレート等の多価（２〜８価又はそれ以上）アルコール（炭素数２〜３０）の脂肪酸（炭素数８〜２４）エステル並びにラウリン酸モノエタノールアミド及びラウリン酸ジエタノールアミド等の脂肪酸アルカノールアミド等が挙げられる。
【００３２】
アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）としては、炭素数８〜２４のアルキルエーテルカルボン酸又はその塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレンエーテルカルボン酸又はその塩［（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルエーテル酢酸ナトリウム及び（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルスルホコハク酸２ナトリウム等］、炭素数８〜２４のアルキル硫酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレン硫酸エステル塩［ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）硫酸ナトリウム及びラウリル（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）硫酸−トリエタノールアミン塩等］、ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド硫酸スルホン酸ナトリウム、炭素数８〜２４のアルキルフェニルスルホン酸塩［ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等］、炭素数８〜２４のアルキルリン酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレンリン酸エステル塩［ラウリルリン酸ナトリウム及び（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルエーテルリン酸ナトリウム等］、脂肪酸塩［ラウリン酸ナトリウム及びラウリン酸トリエタノールアミン等］、アシル化アミノ酸塩［ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム、ヤシ油脂肪酸ザルコシンナトリウム、ヤシ油脂肪酸ザルコシントリエタノールアミン、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−グルタミン酸トリエタノールアミン、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム及びラウロイルメチル−β−アラニンナトリウム等］が挙げられる。
【００３３】
カチオン性界面活性剤（Ｃ−３）としては、第４級アンモニウム塩型［塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム及びエチル硫酸ラノリン脂肪酸アミノプロピルエチルジメチルアンモニウム等］及びアミン塩型［ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド乳酸塩、ジラウリルアミン塩酸塩及びオレイルアミン乳酸塩等］等が挙げられる。
【００３４】
両性界面活性剤（Ｃ−４）としては、ベタイン型両性界面活性剤［ヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ラウリルヒドロキシスルホベタイン及びラウロイルアミドエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルベタインヒドロキシプロピルリン酸ナトリウム等］、アミノ酸型両性界面活性剤［β−ラウリルアミノプロピオン酸ナトリウム等］が挙げられる。
【００３５】
バイオサーファクタント（Ｃ−５）としては、サーファクチン、ラムノリピッド及びこれらの塩等が挙げられる。塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩及びオニウム塩等が挙げられる。
【００３６】
（Ｃ）としては、１種又は２種以上が使用出来る。２種以上を使用する場合、その組み合わせとしては、例えば非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とアニオン性界面活性剤（Ｃ−２）、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とカチオン性界面活性剤（Ｃ−３）及び非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）と両性界面活性剤（Ｃ−４）の組み合わせ等が挙げられる。
【００３７】
（Ｃ）として、洗浄性の観点から、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）単独での使用、及び非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とアニオン性界面活性剤（Ｃ−２）との組み合わせでの使用が好ましい。
非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）としては、洗浄性の観点から、脂肪族アルコール（炭素数８〜２４）エチレンオキサイド付加物（重合度＝１〜１００）が好ましく、さらに好ましくは脂肪族アルコール（炭素数１２〜１８）エチレンオキサイド付加物（重合度４〜２０）、次にさらに好ましくは脂肪族アルコール（炭素数１２〜１５）エチレンオキサイド付加物（重合度＝８〜１２）、特に好ましくはラウリルアルコールエチレンオキサイド１１モル付加物である。
アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）としては、洗浄性の観点から、炭素数８〜２４のアルキルフェニルスルホン酸塩、脂肪酸塩、炭素数８〜２４のアルキル硫酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレン硫酸エステル塩が好ましく、さらに好ましくは、炭素数１２〜１６のアルキルフェニルスルホン酸塩及び炭素数８〜１６の脂肪酸塩、次にさらに好ましくは、ドデシルベンゼンスルホン酸モノエタノールアミン塩及びラウリン酸ナトリウムである。
【００３８】
本発明の洗剤組成物中に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、０．０００１〜６０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。
【００３９】
本発明の洗剤組成物に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜０．５重量％である。
【００４０】
本発明の洗剤組成物中に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、４０〜９９．９９９９重量％が好ましく、さらに好ましくは９５〜９９．９９重量％である。
【００４１】
本発明の洗剤組成物に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、１〜９０重量％が好ましく、さらに好ましくは５〜８０重量％である。
【００４２】
本発明における洗剤組成物には、上記の洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）以外に、プロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有することができる。洗浄性の観点から、（Ｄ）及び（Ｅ）を含有することが好ましい。
【００４３】
本発明においてプロテアーゼ（Ｄ）とは、ペプチド又はタンパク質を基質として加水分解を触媒する酵素である。（Ｄ）としては、セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）、アスパラギン酸プロテアーゼ（Ｄ−２）、システインプロテアーゼ（Ｄ−３）及び金属プロテアーゼ（Ｄ−４）が含まれる。
【００４４】
セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）は、触媒残基としてセリン残基をもつプロテアーゼであり、キモトリプシン、トリプシン、トロンビン、プラスミン、エラスターゼ、スブチリシン及びケキシン等が含まれる。具体的には、ブタすい臓由来トリプシン、バシラス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のサブチリシン Ｎｏｖｏ、サブチリシン Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン ３０９、サブチリシン １４７及びサブチリシン １６８が挙げられる。
市販のセリンプロテアーゼ（Ｄ−１）としては、ノボザイムス社製のアルカラーゼ、サビナーゼ、エバラーゼ、ＰＴＮ及びジェネンコア社のピュラフェクト、ピュラフェクト ＯＸＰ等が挙げられる。
【００４５】
アスパラギン酸プロテアーゼ（Ｄ−２）は、活性中心にアスパラギン酸の存在するプロテアーゼであり、ペプシン、カテプシンＤ、レニン及びキモシン等が含まれる。具体的には、ヒト胃由来のペプシン等が挙げられる。
【００４６】
システインプロテアーゼ（Ｄ−３）は、チオール基が活性中心に存在するプロテアーゼであり、パパイン、ブロメライン、フィシン、アクチニジン、カテプシンＢ、カテプシンＨ、カテプシンＬ及びショウガプロテアーゼ等が含まれる。
【００４７】
金属プロテアーゼ（Ｄ−４）は、活性中心に金属イオンを含むプロテアーゼであり、例えば、サーモライシン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ及びコラゲナーゼ等が挙げられる。
【００４８】
上記プロテアーゼ（Ｄ）のうち、洗浄性の観点から、セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）が好ましく、さらに好ましくはスブチリシンである。
【００４９】
本発明の洗剤組成物が（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）を含む場合、洗剤組成物に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．００１〜６０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。
本発明の洗剤組成物に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、１０〜９９．９９８９９８重量％が好ましく、さらに好ましくは８５〜９９．９８８９重量％、特に好ましくは８９〜９９．９８６９であり、最も好ましくは９３〜９９．９８６７である。
本発明において、洗剤組成物中のプロテアーゼ（Ｄ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．０００００１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜５重量％、特に好ましくは０．００３〜１重量％である。
（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準としたプロテアーゼ（Ｄ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、洗剤組成物の洗浄性が良好となる。また、３０重量％以下であることで、添加量に見合った洗浄性を得られる。
【００５０】
また、洗剤組成物中のプロテアーゼ（Ｄ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００００１〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜０．０５重量％である。
洗剤組成物の重量を基準としたプロテアーゼ（Ｄ）の含有量が０．００００１重量％以上であることで、洗剤組成物の洗浄性が良好となる。また、０．０５重量％以下であることで、添加量に見合った洗浄性を得られる。
【００５１】
本発明において、プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）としては、プロテアーゼ阻害剤の機能を持つ公知のものが使用でき、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｏｕｓ由来Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＳＳＩ）に代表されるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属由来のスブチリシン阻害剤、大豆由来トリプシン阻害剤、コムギ由来スブチリシン・キモトリプシン阻害剤（ＷＳＣＩ）、ヒト由来シスタチンＢ、回虫由来ペプシン阻害剤及びジャガイモ由来カテプシンＤ阻害剤等もしくはその改変体等が挙げられる。
プロテアーゼ活性阻害剤（Ｅ）の機能とは、プロテアーゼ（Ｄ）と一定のモル比で可逆的に結合し、プロテアーゼ（Ｄ）の活性を阻害することである。
【００５２】
本発明において、洗剤組成物中のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量は、洗浄性及び洗剤組成物の保存安定性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．０００００１〜８９．９９８９９重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜５重量％、特に好ましくは０．０００３〜１重量％である。
（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準としたプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、８９．９９８９重量％以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
【００５３】
また、洗剤組成物中のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量は、洗浄性及び洗剤組成物の保存安定性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００００１〜１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００００１〜０．５重量％である。
洗剤組成物の重量を基準としたプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、１重量％以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）とのモル比｛（Ｅ）のモル数／（Ｄ）のモル数｝が０．５〜１００が好ましく、さらに好ましくは１〜８０、特に好ましくは１〜５０である。
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）との比が０．５以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、１００以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
【００５４】
洗剤組成物には、必要により、水又は公知のその他の成分、例えば特開２００４−２７１８１号公報に記載のビルダー、キレート剤、親水性溶媒、消泡剤、蛍光増白剤、漂白剤、柔軟剤、除菌剤、香料、着色剤、ｐＨ緩衝剤、アミラーゼ及びリパーゼ等を含有してもよい。
【００５５】
ビルダーとしては、ポリカルボン酸塩（アクリル酸塩ホモポリマー及びマレイン酸塩ホモポリマー等）、多価カルボン酸塩（クエン酸及びリンゴ酸等）、及びアルカリビルダー（苛性ソーダ、ソーダ灰、アンモニア、トリエタノールアミン、トリポリリン酸ソーダ及びケイ酸ソーダ等）等が挙げられる。
キレート剤としては、ＥＤＴＡ及びＮＴＡ等が挙げられる。親水性溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール及びプロピレングリコール等が挙げられる。
消泡剤としては、シリコーン系消泡剤、ポリオキシアルキレン系消泡剤及び鉱物油系消泡剤等が挙げられる。
ｐＨ緩衝剤としては、ホウ酸バッファー、リン酸バッファー、酢酸バッファー、Ｔｒｉｓバッファー、ＨＥＰＥＳバッファー、硫酸、塩酸、クエン酸、乳酸、ピルビン酸、蟻酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、モノエタノールアミン及びジエタノールアミン等が挙げられる。
アミラーゼとしては、公知のアミラーゼが使用でき、具体的には、ノボザイムス社製、商品名「ターマミル」中に含まれるアミラーゼ等が挙げられる。
リパーゼとしては、公知のリパーゼが使用でき、具体的には、ノボザイムス社製、商品名「リポラーゼ」中に含まれるリパーゼ等が挙げられる。
酵素安定化剤としては、公知の酵素安定化剤が使用でき、具体的には、糖等が挙げられる。
【００５６】
洗剤組成物中の水の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜９８.９重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜９３．９９５重量％であり、次にさらに好ましくは１０〜７９.９重量％、特に好ましくは２０〜６７．９重量％である。
その他の成分のうち、洗剤組成物中のビルダー及びキレート剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
洗剤組成物中の蛍光増白剤、漂白剤、柔軟剤、酵素、除菌剤、香料、着色剤及び消泡剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜５重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜２重量％である。
洗剤組成物中の親水性溶媒の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
洗剤組成物中のｐＨ緩衝剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０〜２５重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１５重量％、特に好ましくは０〜１０重量％である。
洗剤組成物中のアミラーゼの含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜０．０５重量％、特に好ましくは０〜０．０１重量％である。
洗剤組成物中のリパーゼの含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜０．０５重量％、特に好ましくは０〜０．０１重量％である。
洗剤組成物中の酵素安定化剤の含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜２０重量％、特に好ましくは０〜１０重量％である。
【００５７】
本発明の洗剤組成物の性状は特に限定されないが、液体状、ペースト状、粉末状、フレーク状及びブロック状等が挙げられる。これらのうち、取り扱い易さの観点から好ましいのは粉末状及び液体状である。
【００５８】
本発明の洗剤組成物は、性状の違いにより、以下の方法を選択して製造することができる。
（１）洗剤組成物の性状が液体状又はペースト状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要により水及びその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌して製造する方法。
（２）洗剤組成物の性状が粉末状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要により水及びその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌した後、噴霧乾燥器（例えば圧力噴霧ノズル型噴霧乾燥機、２流体噴霧ノズル型噴霧乾燥機及び回転円盤式噴霧乾燥機等）で噴霧乾燥する方法。
（３）洗剤組成物の性状が粉末状、フレーク状及びブロック状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要によりその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌した後、離型紙上に溶融物を取り出して室温まで冷却し、得られた固化物を粉砕機（例えばミルミキサー、ボールミル、ジェット粉砕機、コロイドミル及びホモジナイザー等）で適度な大きさ（粉状、フレーク状又はブロック状）に粉砕する方法。
【００５９】
上記洗剤組成物は、衣料用洗剤、自動食器洗浄機用洗剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤等に使用できる。
【００６０】
洗剤組成物の使用方法は、従来の洗剤組成物の使用方法と同じでよく、特に限定されるものではない。衣料用洗剤としての使用方法の１例を下記に示す。
（１）洗濯物が入った洗濯機に水道水を張り、洗剤組成物を２５℃で添加し、軽く撹拌して溶解させる。
（２）洗濯機で洗濯物を洗浄する。
（３）洗濯機から液を抜き、水道水で１〜２回すすぐ。
（４）適宜脱水をかける。
【実施例】
【００６１】
以下の実施例、比較例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００６２】
＜製造例１＞
プライマー１（配列番号５）と２（配列番号６）を用いてＰＣＲ法によりＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓのｂｇｌＣ遺伝子を増幅した。ＰＣＲ増幅断片を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで処理後、ｐＥＴ−２２ｂプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ社）のＮｃｏＩ制限酵素サイトとＢａｍＨＩ制限酵素サイトに結合した。その後、ＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌株（Ｎｏｖａｇｅｎ社）へ形質転換を行い、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列からなる配列番号３のセルラーゼ（Ａ−１）を発現する大腸菌（α）を作成した。
【００６３】
＜製造例２＞
プライマー２の代わりにプライマー３（配列番号８）を用いること以外は製造例１と同様にして、配列番号９のセルラーゼ（Ａ−３）を発現する大腸菌（β）を作成した。
【００６４】
＜実施例１＞
○洗浄性向上剤（Ｂ−１）の製造
大腸菌（α）の終夜培養液１０ｍｌを作製し、２５０ｍＬ培養液（ＴＢ培養液（Ｄｉｆｃｏ社）、０．７重量％硫酸アンモニウム、０．０５重量％クエン酸２アンモニウム、１ｍＭ硫酸マグネシウム）に植菌し、１Ｌ微生物培養装置（エイブル社）を用いてｐＨ７．０、３７℃で維持したまま培養を行った。培養開始３時間後に、１Ｍ ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−チオガラクトピラノシド）を０．７５ｍＬ加え、さらに、培養液中の濃度が１．０重量％になるようにヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン（三洋化成工業（株）製、商品名「レボン２０００」）を加えた。培養を４８時間行った後、培養液１５ｍＬから遠心分離機（ＫＵＢＯＴＡ社製「５９２２」、４℃、６０００×ｇ、１０分）を用いて菌体を分離し、上清のみを回収した。得られた上清を、遠心分離機（ＫＵＢＯＴＡ社製「５９２２」、４℃、６０００×ｇ、１０分）を用いて沈殿除去を行った後、限外ろ過膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製「アミコンウルトラ−１５」分画分子量１００００）を用いて、５ｍＬ程度になるまで上清の濃縮を行い、リン酸緩衝液１０ｍＬ加えて再び５ｍＬ程度になるまで濃縮を行い、再度リン酸緩衝液を加え５ｍＬ程度になるまで濃縮を行い、配列番号４のセルラーゼ（Ａ−２）を含む水溶液（すなわち、洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液）を得た（大腸菌（α）において発現誘導を行い細胞外に分泌される際に、分泌シグナル部位が切断され、配列番号４のアミノ酸配列となった）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、水溶液中のセルラーゼ（Ａ−２）の濃度は１５ｇ／Ｌであった。
得られた洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液を用いて、表１の割合で２５℃で配合した溶液を用いて、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６５】
＜実施例２＞
○洗浄性向上剤（Ｂ−２）の製造
実施例１において、「大腸菌（α）」に変えて「大腸菌（β）」を用いること以外は同様に行って、配列番号１０のセルラーゼ（Ａ−４）を含む水溶液（すなわち、洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液）を得た（大腸菌（β）において発現誘導を行い細胞外に分泌される際に、分泌シグナル部位が切断され、配列番号１０のアミノ酸配列となった）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、水溶液中のセルラーゼ（Ａ−４）の濃度は１５ｇ／Ｌであった。
得られた洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液を用いて、表１の割合で２５℃で配合した溶液を用いて、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６６】
＜セルラーゼ（Ａ−２）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定＞
ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、１７．５ｇ／ＬになるようにＣＭＣ（製品名：カルボキシメチルセルロースナトリウム０３９−０１３３５、和光純薬社製）を溶解し、基質溶液を調整した。ｐＨ７．５のリン酸緩衝液３ｍＬに、実施例１で得たセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液を加え、リン酸緩衝液で１００倍希釈して、セルラーゼ（Ａ−２）溶液を調整した。基質溶液３ｍＬとセルラーゼ（Ａ−２）溶液５μＬを混合し、４０℃に温度を調節した粘度計（ＴＶＥ−２２Ｌ粘度計、２ｒｐｍ）に移した。混合直後に粘度を読み取り、その後、１、２、３、４、５及び６分後に粘度を読み取った。セルラーゼ（Ａ−２）の濃度が異なるセルラーゼ（Ａ−２）溶液を作成して同様に測定し、混合直後の粘度と５分後の粘度を比較した。５分後の粘度が１／２となるセルラーゼ（Ａ−２）の量（エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性１単位）は０．０５ｍｇであった。したがって、セルラーゼ（Ａ−２）の粘度測定法によるエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性は２０単位／ｍｇであった。
【００６７】
＜セルラーゼ（Ａ−４）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定＞
「セルラーゼ（Ａ−２）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定」において、「実施例１で得たセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液」に変えて「実施例２で得たセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液」を用いること以外は同様に行った。活性は２０単位／ｍｇであった。
【００６８】
＜比較例１＞
実施例１において、洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液に変えて水を用いる以外は同様にして、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
表１中の各成分は、下記のものを使用した。
洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液：実施例１で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液
洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液：実施例２で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液
【００７０】
表１の洗浄率の結果から、比較例１の水のみで洗浄した場合と比較して、実施例１及び２で得られた洗浄性向上剤を用いることで、洗浄率が高くなった。したがって、本発明の洗浄性向上剤は、洗浄性向上剤のみでも、洗浄性を向上させることができることがわかる。
【００７１】
＜製造例３＞
配列番号７の遺伝子を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで処理後、ｐＥＴ−２２ｂプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ社）のＮｃｏＩ制限酵素サイトとＢａｍＨＩ制限酵素サイトに結合した。そのＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌株にこのプラスミドを形質転換してプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）を発現する大腸菌（γ）を作成した。
【００７２】
＜製造例４＞
○プロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）の製造
実施例１の、「洗浄性向上剤（Ｂ−１）の製造」において、「大腸菌（α）」に変えて「大腸菌（γ）」を用いる以外は同様にして、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｕｓ由来の配列番号１１のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液を得た。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、プロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液中のプロテアーゼ阻害剤の濃度は２．２ｇ／Ｌであった。
【００７３】
＜実施例３〜２３＞
表２の割合で２５℃で配合し、本発明の洗剤組成物を作製した。
【００７４】
＜比較例２〜９＞
表３の割合で２５℃で配合し、比較の洗剤組成物を作製した。
【００７５】
【表２】
【００７６】
【表３】
【００７７】
表２及び３中の各成分は、下記のものを使用した。
洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液：実施例１で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液
洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液：実施例２で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液
プロテアーゼ阻害剤含有溶液：製造例４で得た２.２ｇ／Ｌプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液、１５１μＭ
界面活性剤：ラウリルアルコールエチレンオキサイド１１モル付加物、三洋化成工業（株）製
プロテアーゼ溶液：ノボザイムス社製、商品名「アルカラーゼ２．５Ｌ」、ＳＤＳ−ＰＡＧＥよりアルカラーゼ含量は１ｇ／Ｌと推定、３７μＭ
【００７８】
＜洗浄性試験＞
＜配合直後の洗浄率＞
実施例１〜２３及び比較例１〜９で作製した溶液及び洗剤組成物０．６ｇを、水９９９．４ｇに溶解し溶液を得た。この溶液に、湿式人工汚染布（４ｃｍ×４ｃｍ）５枚を投入し、ターゴトメーター（大栄化学製）を用いて以下の条件にて洗浄及びすすぎをした後、布を取り出し、ギヤーオーブン（ＴＡＢＡＩ製、ＧＰＳ−２２２）を用いて７０℃で６０分間乾燥し、試験布を得た。ついで、多光源分光測色計（スガ試験機製）を使用して、この試験布の５４０ｎｍの反射率を、試験布１枚ごとに表裏２個所ずつ計４個所（試験布５枚で合計２０個所）測定し、この平均値を求め、以下の式にて洗浄率（％）を算出した。結果を表１〜３に示す。
（洗浄条件）
時間：１０分、温度：２５℃、回転速度：１２０ｒｐｍ
（すすぎ条件）
時間：１分、温度：２５℃、回転速度：１２０ｒｐｍ
（洗浄率）
洗浄率（％）＝｛（ＲW−ＲS）／（ＲI−ＲS）｝×１００
なお、ＲIは清浄布の反射率、ＲWは洗浄布の反射率、ＲSは汚染布の反射率を示す。
また、使用した湿式人工汚染布は、表２の汚垢組成を有する財団法人洗濯科学協会製の湿式人工汚染布（５４０ｎｍにおける反射率が４０±５％）である。
【００７９】
【表４】
【００８０】
＜２５℃３ヶ月保管後の洗浄率＞
実施例３〜２３及び比較例２〜９で得た洗剤組成物について、上記＜配合直後の洗浄率＞において、作成直後の洗剤組成物の代わりに、洗剤組成物の作成後２５℃で３ヶ月保管した後の洗剤組成物を用いる以外は同様に洗浄性試験をおこない、洗浄率を算出した。結果を表２及び３に示す。
【００８１】
表２及び表３の配合直後の洗浄率の評価結果から、表２の実施例３〜２３の本発明の洗浄性向上剤を含む洗剤組成物は、表３のそれぞれ界面活性剤濃度が同じ比較例２〜９と比較して、洗浄率が高いことがわかる。したがって、本願発明の洗浄性向上剤は、洗剤の洗浄性を向上させることができることが分かる。
特に、プロテアーゼを含む実施例の洗剤組成物は、さらに洗浄率が高いことがわかる。
また、２５℃３ヶ月保管後の洗浄率の評価結果から、本発明の実施例において、プロテアーゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含む洗剤組成物は、高い洗浄性を長期的に保つことができることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の洗浄性向上剤は、衣料用洗浄剤、自動食器洗浄機用洗浄剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤等の洗浄剤の洗浄性を向上させる洗浄性向上剤として使用できる。また、本発明の洗剤組成物は、衣料用洗浄剤、自動食器洗浄機用洗浄剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤として使用でき、特に衣料用液体洗剤に使用できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
衣料用洗剤において、洗浄性を向上させるための研究開発が行われており、例えば、界面活性剤にプロテアーゼ等の酵素を併用することで洗浄性が向上すること（特許文献１）は知られている。しかし、洗浄性の向上が十分ではない。
【０００３】
ところで、近年塩基配列決定技術の進展に伴って多種多様な生物のゲノムＤＮＡの塩基配列が決定され、生物情報科学的な観点から遺伝子の配列や機能も予測されている。しかし、その遺伝子がコードするタンパク質の機能が実際に予測に一致しない例が多い。そのため、実際に生化学的解析をしなければ正確な機能が特定できないのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平０６−０７３３９６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の解決しようとする課題は、洗浄性を向上させる洗浄性向上剤及びこの洗浄性向上剤を含有する洗剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、洗浄性を向上させる成分を得るべく鋭意検討した結果、本発明に到達した。すなわち、本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤である。
また、本発明の洗剤組成物は、洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明の洗浄性向上剤は、洗剤の洗浄性を向上させることができる。また、本発明の洗剤組成物は、洗浄性が優れている。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなるものである。
【０００９】
本発明においてセルラーゼ（Ａ）は、β−１，４−グルカンのグリコシド結合を加水分解するというエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する酵素である。
【００１０】
本発明において、配列番号１のアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼとは、変質後も依然としてエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を保持するアミノ酸配列を有するセルラーゼであり、配列番号１のアミノ酸配列と等価であるアミノ酸配列を有するセルラーゼを意味する。
上記アミノ酸の付加とは、配列番号１のアミノ酸配列中のアミノ酸とアミノ酸との間に、１若しくは数個のアミノ酸が付加することを意味し、アミノ酸配列のＮ及び／又はＣ末端へのアミノ酸の付加は含まない。
上記１若しくは数個は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する観点から、１〜１０個が好ましく、さらに好ましくは１〜５個である。
【００１１】
セルラーゼ（Ａ）は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有するものであれば、配列番号１又はこのアミノ酸配列と等価であるアミノ酸配列のＮ及び／又はＣ末端に、ペプチド配列（Ｎ）を有していてもいい。（Ｎ）は、アミノ酸１個又はアミノ酸が２個以上結合したペプチド配列である。（Ｎ）として、具体的には、ＭＤ配列、ＭＫＹＬＬＰＴＡＡＡＧＬＬＬＬＡＡＱＰＡＭＡＭＤ配列（配列番号（２））及びＳＤＰＮＳＳＳＶＤＫＬＡＡＡＬＥ配列（配列番号（１２））等が挙げられる。
（Ｎ）を構成するアミノ酸の数は、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を有する観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜２０個、特に好ましくは１〜１０個である。
【００１２】
また、セルラーゼ（Ａ）は、上記（Ｎ）以外に、セルラーゼ（Ａ）のＮ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９TM、ＣｒｕｚＴａｇ２２TM、ＣｒｕｚＴａｇ４１TM、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等が挙げられる。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるセルラーゼ（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。
【００１３】
本発明において、セルラーゼ（Ａ）の活性は、一般的なエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性測定法によって測定できる。エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性測定法として、具体的には、粘度測定法が挙げられる。
【００１４】
粘度測定法は、ＣＭＣ（カルボキシメチルセルロース）を基質として用いて反応させた後、溶液の粘度を測定してエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性を検出する方法である。具体的には、下記の粘度測定法により測定される。
＜粘度測定法＞
ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、１７．５ｇ／ＬになるようにＣＭＣ（製品名：カルボキシメチルセルロースナトリウム０３９−０１３３５、和光純薬社製）を溶解し、基質溶液を調整する。ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、一定量のセルラーゼ（Ａ）を溶解したセルラーゼ（Ａ）溶液を調整する。基質溶液３ｍＬとセルラーゼ（Ａ）溶液５μＬを混合し、４０℃に温度を調節した粘度計（例えば、ＴＶＥ−２２Ｌ粘度計、２ｒｐｍ）に移す。混合直後に粘度を読み取り、１、２、３、４、５及び６分後に粘度を読み取る。セルラーゼ（Ａ）の濃度が異なるセルラーゼ（Ａ）溶液を用いて同様に測定する。セルラーゼ（Ａ）溶液及び基質溶液を混合直後の粘度と、５分後の粘度とを比較して、５分後の粘度が１／２となるセルラーゼ（Ａ）の量（ｍｇ）を、エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性１単位と定義する。１単位となるセルラーゼ量（単位：ｍｇ）から、セルラーゼ１ｍｇ当たりのエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性単位を算出する。
【００１５】
セルラーゼ（Ａ）の粘度測定法によるエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性は、洗浄性を向上させる観点から、１〜１００００単位／ｍｇが好ましく、さらに好ましくは２０〜２０００単位／ｍｇである。
【００１６】
上記セルラーゼ（Ａ）は、配列番号１に示すアミノ酸配列を有するセルラーゼ又はこのアミノ酸配列と等価のアミノ酸配列を有するセルラーゼをコードする遺伝子を微生物等の宿主に導入し、宿主を培養液中で培養し、培養液中からセルラーゼを採取及び精製することによって生産することができる。
【００１７】
なお、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子は、自然界等から得ることも可能ではあるが、更に部位特異的突然変異誘発法等の公知の手法を利用して調製することもできる。
【００１８】
セルラーゼ（Ａ）は、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を、例えばバチラス属に属する微生物、例えばＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ等から、ショットガン法、ＰＣＲ法を用いてクローニングし、適当なベクターと宿主菌を用いて大量に生産することができる。
【００１９】
セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を用いてセルラーゼ（Ａ）を生産する方法は、目的とする宿主内で遺伝子を発現するのに適した任意のベクターに、セルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を組込み、この組換えベクターを用いて宿主を形質転換し、組み換えベクターを含む形質転換体を得る。得られた形質転換体を培養し、この培養液からセルラーゼを採取すればよい。
【００２０】
組換えベクターは、適当なベクターにセルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を挿入することによって得ることができる。
ベクターは種々のものが公知であり、市販品も多く存在する。当業者であれば、宿主の種類に応じて適切なベクターを容易に選択することができる。ベクターの具体例としては、ｐＥＴシリーズ及びｐＵＣシリーズ等が挙げられる。
組換えベクターの調製方法自体は周知の常法である。適当なベクターにセルラーゼ（Ａ）をコードする遺伝子を挿入し、宿主を形質転換する具体的な方法としては、エレクトロポレーション法及びカルシウム法等が挙げられる。
【００２１】
本発明において、宿主としては、動物細胞、微生物、植物細胞などが挙げられる。
動物細胞としては、特に限定されないが、昆虫細胞、サル細胞ＣＯＳ−７、Ｖｅｒｏ、マウスＬ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細胞及びＣＨＯ細胞等が挙げられる。
昆虫細胞としては、特に限定されないが、Ｓｆ９細胞及びＳｆ２１細胞等が挙げられる。
微生物としては、特に限定されないが、細菌及び酵母等が挙げられる。
細菌としては、真正細菌及び古細菌が含まれる。
真正細菌には、グラム陰性菌及びグラム陽性菌が含まれる。グラム陰性細菌としては、エシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、サーマス属菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、リゾビウム属菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、シュードモナス属菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、ビブリオ属菌（Ｖｉｂｒｉｏ）、サルモネラ属菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属）、シネコシスティス属（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ属）等が挙げられる。グラム陽性菌としては、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ属）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属）、ブレビバチルス属（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ビフィドバクテリウム属 (Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属)、ラクトコッカス属 (Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属)、エンテロコッカス属 (Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ属)、ペディオコッカス属(Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属)、リューコノストック属 (Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属)、ストレプトマイセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属）等が挙げられる。
植物細胞としては、特に限定されないが、ＢＹ−２細胞等が挙げられる。
【００２２】
本発明において、宿主としては、クローニングの容易さの観点から、微生物が好ましく、さらに好ましくはエシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、サーマス属菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、リゾビウム属菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）、シュードモナス属菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、ビブリオ属菌（Ｖｉｂｒｉｏ）、サルモネラ属菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属）、シネコシスティス属（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ属）であり、特に好ましくはエシェリチア属菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、シュワネラ属菌（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ属）、ブレビバチルス属（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ属）である。
【００２３】
培養は微生物の資化可能な炭素源、窒素源その他の必須栄養素を含む培地に接種し、常法に従って行えばよい。
【００２４】
本発明において、培養液からセルラーゼ（Ａ）を採取及び精製する方法としては、常法に準じて行うことができる。例えば、培養物から遠心分離又は濾過することで菌体を除き、得られた培養上清液から常法手段により目的酵素を濃縮することができる。このようにして得られた酵素液又は乾燥粉末はそのまま用いることもできるが更に公知の方法により結晶化や造粒化することができる。
【００２５】
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）は、上記セルラーゼ（Ａ）からなるものである。
本発明の洗浄性向上剤（Ｂ）を洗浄剤に添加することにより、洗浄剤の洗浄性を向上させることができる。さらに、洗浄性向上剤（Ｂ）により向上した洗浄性は、長期間保管後も低下しない。
【００２６】
また、本発明の洗剤組成物は、上記洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物である。
【００２７】
洗剤組成物中に含む洗浄性向上剤（Ｂ）として、好ましいものは、上記と同様である。
【００２８】
界面活性剤（Ｃ）には、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）、アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）、カチオン性界面活性剤（Ｃ−３）、両性界面活性剤（Ｃ−４）及びバイオサーファクタント（Ｃ−５）が含まれる。
【００２９】
非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）としては、アルキレンオキサイド付加型非イオン性界面活性剤（Ｃ−１−１）及び多価アルコール型非イオン性界面活性剤（Ｃ−１−２）等が挙げられる。
【００３０】
（Ｃ−１−１）としては、高級アルコール（炭素数８〜１８）アルキレン（炭素数２〜４、好ましいのは２）オキサイド付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜３０）、アルキル（炭素数１〜１２）フェノールエチレンオキサイド（以下、エチレンオキサイドをＥＯと記載することがある）付加物（付加モル数１〜３０）、高級アミン（炭素数８〜２２）アルキレン（炭素数２〜４、好ましいのは２）オキサイド付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜４０）、脂肪酸（炭素数８〜１８）ＥＯ付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜６０）、ポリプロピレングリコール（分子量２００〜４０００）ＥＯ付加物（活性水素１個当たりの付加モル数１〜５０）、ポリオキシエチレン（繰り返し単位数３〜３０）アルキル（炭素数６〜２０）アリルエーテル並びにソルビタンモノラウレートＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）及びソルビタンモノオレートＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）等の多価（２〜８価又はそれ以上）アルコール（炭素数２〜３０）の脂肪酸（炭素数８〜２４）エステルＥＯ付加物（活性水素１個あたりの付加モル数１〜３０）等が挙げられる。
【００３１】
（Ｃ−１−２）としては、グリセリンモノステアレート、グリセリンモノオレート、ソルビタンモノラウレート及びソルビタンモノオレート等の多価（２〜８価又はそれ以上）アルコール（炭素数２〜３０）の脂肪酸（炭素数８〜２４）エステル並びにラウリン酸モノエタノールアミド及びラウリン酸ジエタノールアミド等の脂肪酸アルカノールアミド等が挙げられる。
【００３２】
アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）としては、炭素数８〜２４のアルキルエーテルカルボン酸又はその塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレンエーテルカルボン酸又はその塩［（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルエーテル酢酸ナトリウム及び（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルスルホコハク酸２ナトリウム等］、炭素数８〜２４のアルキル硫酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレン硫酸エステル塩［ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）硫酸ナトリウム及びラウリル（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）硫酸−トリエタノールアミン塩等］、ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド硫酸スルホン酸ナトリウム、炭素数８〜２４のアルキルフェニルスルホン酸塩［ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等］、炭素数８〜２４のアルキルリン酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレンリン酸エステル塩［ラウリルリン酸ナトリウム及び（ポリ）オキシエチレン（重合度＝１〜１００）ラウリルエーテルリン酸ナトリウム等］、脂肪酸塩［ラウリン酸ナトリウム及びラウリン酸トリエタノールアミン等］、アシル化アミノ酸塩［ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム、ヤシ油脂肪酸ザルコシンナトリウム、ヤシ油脂肪酸ザルコシントリエタノールアミン、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−グルタミン酸トリエタノールアミン、Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−グルタミン酸ナトリウム及びラウロイルメチル−β−アラニンナトリウム等］が挙げられる。
【００３３】
カチオン性界面活性剤（Ｃ−３）としては、第４級アンモニウム塩型［塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベヘニルトリメチルアンモニウム、塩化ジステアリルジメチルアンモニウム及びエチル硫酸ラノリン脂肪酸アミノプロピルエチルジメチルアンモニウム等］及びアミン塩型［ステアリン酸ジエチルアミノエチルアミド乳酸塩、ジラウリルアミン塩酸塩及びオレイルアミン乳酸塩等］等が挙げられる。
【００３４】
両性界面活性剤（Ｃ−４）としては、ベタイン型両性界面活性剤［ヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、ラウリルヒドロキシスルホベタイン及びラウロイルアミドエチルヒドロキシエチルカルボキシメチルベタインヒドロキシプロピルリン酸ナトリウム等］、アミノ酸型両性界面活性剤［β−ラウリルアミノプロピオン酸ナトリウム等］が挙げられる。
【００３５】
バイオサーファクタント（Ｃ−５）としては、サーファクチン、ラムノリピッド及びこれらの塩等が挙げられる。塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩及びオニウム塩等が挙げられる。
【００３６】
（Ｃ）としては、１種又は２種以上が使用出来る。２種以上を使用する場合、その組み合わせとしては、例えば非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とアニオン性界面活性剤（Ｃ−２）、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とカチオン性界面活性剤（Ｃ−３）及び非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）と両性界面活性剤（Ｃ−４）の組み合わせ等が挙げられる。
【００３７】
（Ｃ）として、洗浄性の観点から、非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）単独での使用、及び非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）とアニオン性界面活性剤（Ｃ−２）との組み合わせでの使用が好ましい。
非イオン性界面活性剤（Ｃ−１）としては、洗浄性の観点から、脂肪族アルコール（炭素数８〜２４）エチレンオキサイド付加物（重合度＝１〜１００）が好ましく、さらに好ましくは脂肪族アルコール（炭素数１２〜１８）エチレンオキサイド付加物（重合度４〜２０）、次にさらに好ましくは脂肪族アルコール（炭素数１２〜１５）エチレンオキサイド付加物（重合度＝８〜１２）、特に好ましくはラウリルアルコールエチレンオキサイド１１モル付加物である。
アニオン性界面活性剤（Ｃ−２）としては、洗浄性の観点から、炭素数８〜２４のアルキルフェニルスルホン酸塩、脂肪酸塩、炭素数８〜２４のアルキル硫酸エステル塩及び炭素数８〜２４のアルキル（ポリ）オキシエチレン硫酸エステル塩が好ましく、さらに好ましくは、炭素数１２〜１６のアルキルフェニルスルホン酸塩及び炭素数８〜１６の脂肪酸塩、次にさらに好ましくは、ドデシルベンゼンスルホン酸モノエタノールアミン塩及びラウリン酸ナトリウムである。
【００３８】
本発明の洗剤組成物中に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、０．０００１〜６０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。
【００３９】
本発明の洗剤組成物に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜０．５重量％である。
【００４０】
本発明の洗剤組成物中に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、４０〜９９．９９９９重量％が好ましく、さらに好ましくは９５〜９９．９９重量％である。
【００４１】
本発明の洗剤組成物に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、１〜９０重量％が好ましく、さらに好ましくは５〜８０重量％である。
【００４２】
本発明における洗剤組成物には、上記の洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）以外に、プロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有することができる。洗浄性の観点から、（Ｄ）及び（Ｅ）を含有することが好ましい。
【００４３】
本発明においてプロテアーゼ（Ｄ）とは、ペプチド又はタンパク質を基質として加水分解を触媒する酵素である。（Ｄ）としては、セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）、アスパラギン酸プロテアーゼ（Ｄ−２）、システインプロテアーゼ（Ｄ−３）及び金属プロテアーゼ（Ｄ−４）が含まれる。
【００４４】
セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）は、触媒残基としてセリン残基をもつプロテアーゼであり、キモトリプシン、トリプシン、トロンビン、プラスミン、エラスターゼ、スブチリシン及びケキシン等が含まれる。具体的には、ブタすい臓由来トリプシン、バシラス菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）由来のサブチリシン Ｎｏｖｏ、サブチリシン Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ、サブチリシン ３０９、サブチリシン １４７及びサブチリシン １６８が挙げられる。
市販のセリンプロテアーゼ（Ｄ−１）としては、ノボザイムス社製のアルカラーゼ、サビナーゼ、エバラーゼ、ＰＴＮ及びジェネンコア社のピュラフェクト、ピュラフェクト ＯＸＰ等が挙げられる。
【００４５】
アスパラギン酸プロテアーゼ（Ｄ−２）は、活性中心にアスパラギン酸の存在するプロテアーゼであり、ペプシン、カテプシンＤ、レニン及びキモシン等が含まれる。具体的には、ヒト胃由来のペプシン等が挙げられる。
【００４６】
システインプロテアーゼ（Ｄ−３）は、チオール基が活性中心に存在するプロテアーゼであり、パパイン、ブロメライン、フィシン、アクチニジン、カテプシンＢ、カテプシンＨ、カテプシンＬ及びショウガプロテアーゼ等が含まれる。
【００４７】
金属プロテアーゼ（Ｄ−４）は、活性中心に金属イオンを含むプロテアーゼであり、例えば、サーモライシン、マトリックスメタロプロテイナーゼ、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ及びコラゲナーゼ等が挙げられる。
【００４８】
上記プロテアーゼ（Ｄ）のうち、洗浄性の観点から、セリンプロテアーゼ（Ｄ−１）が好ましく、さらに好ましくはスブチリシンである。
【００４９】
本発明の洗剤組成物が（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）を含む場合、洗剤組成物に含まれる洗浄性向上剤（Ｂ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．００１〜６０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。
本発明の洗剤組成物に含まれる界面活性剤（Ｃ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、１０〜９９．９９８９９８重量％が好ましく、さらに好ましくは８５〜９９．９８８９重量％、特に好ましくは８９〜９９．９８６９であり、最も好ましくは９３〜９９．９８６７である。
本発明において、洗剤組成物中のプロテアーゼ（Ｄ）の含有量は、洗浄性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．０００００１〜３０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜５重量％、特に好ましくは０．００３〜１重量％である。
（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準としたプロテアーゼ（Ｄ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、洗剤組成物の洗浄性が良好となる。また、３０重量％以下であることで、添加量に見合った洗浄性を得られる。
【００５０】
また、洗剤組成物中のプロテアーゼ（Ｄ）の含有量は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００００１〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜０．０５重量％である。
洗剤組成物の重量を基準としたプロテアーゼ（Ｄ）の含有量が０．００００１重量％以上であることで、洗剤組成物の洗浄性が良好となる。また、０．０５重量％以下であることで、添加量に見合った洗浄性を得られる。
【００５１】
本発明において、プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）としては、プロテアーゼ阻害剤の機能を持つ公知のものが使用でき、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｏｕｓ由来Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＳＳＩ）に代表されるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属由来のスブチリシン阻害剤、大豆由来トリプシン阻害剤、コムギ由来スブチリシン・キモトリプシン阻害剤（ＷＳＣＩ）、ヒト由来シスタチンＢ、回虫由来ペプシン阻害剤及びジャガイモ由来カテプシンＤ阻害剤等もしくはその改変体等が挙げられる。
プロテアーゼ活性阻害剤（Ｅ）の機能とは、プロテアーゼ（Ｄ）と一定のモル比で可逆的に結合し、プロテアーゼ（Ｄ）の活性を阻害することである。
【００５２】
本発明において、洗剤組成物中のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量は、洗浄性及び洗剤組成物の保存安定性の観点から、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、０．０００００１〜８９．９９８９９重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜５重量％、特に好ましくは０．０００３〜１重量％である。
（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準としたプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、８９．９９８９重量％以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
【００５３】
また、洗剤組成物中のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量は、洗浄性及び洗剤組成物の保存安定性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０．０００００１〜１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００００１〜０．５重量％である。
洗剤組成物の重量を基準としたプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が０．０００００１重量％以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、１重量％以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）とのモル比｛（Ｅ）のモル数／（Ｄ）のモル数｝が０．５〜１００が好ましく、さらに好ましくは１〜８０、特に好ましくは１〜５０である。
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）との比が０．５以上であることで、プロテアーゼ（Ｄ）の保存安定性が向上し、洗剤組成物の洗浄性を保つことができる。また、１００以下であることで、添加量に見合った保存安定性を得られる。
【００５４】
洗剤組成物には、必要により、水又は公知のその他の成分、例えば特開２００４−２７１８１号公報に記載のビルダー、キレート剤、親水性溶媒、消泡剤、蛍光増白剤、漂白剤、柔軟剤、除菌剤、香料、着色剤、ｐＨ緩衝剤、アミラーゼ及びリパーゼ等を含有してもよい。
【００５５】
ビルダーとしては、ポリカルボン酸塩（アクリル酸塩ホモポリマー及びマレイン酸塩ホモポリマー等）、多価カルボン酸塩（クエン酸及びリンゴ酸等）、及びアルカリビルダー（苛性ソーダ、ソーダ灰、アンモニア、トリエタノールアミン、トリポリリン酸ソーダ及びケイ酸ソーダ等）等が挙げられる。
キレート剤としては、ＥＤＴＡ及びＮＴＡ等が挙げられる。親水性溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、エチレングリコール、ジエチレングリコール及びプロピレングリコール等が挙げられる。
消泡剤としては、シリコーン系消泡剤、ポリオキシアルキレン系消泡剤及び鉱物油系消泡剤等が挙げられる。
ｐＨ緩衝剤としては、ホウ酸バッファー、リン酸バッファー、酢酸バッファー、Ｔｒｉｓバッファー、ＨＥＰＥＳバッファー、硫酸、塩酸、クエン酸、乳酸、ピルビン酸、蟻酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、モノエタノールアミン及びジエタノールアミン等が挙げられる。
アミラーゼとしては、公知のアミラーゼが使用でき、具体的には、ノボザイムス社製、商品名「ターマミル」中に含まれるアミラーゼ等が挙げられる。
リパーゼとしては、公知のリパーゼが使用でき、具体的には、ノボザイムス社製、商品名「リポラーゼ」中に含まれるリパーゼ等が挙げられる。
酵素安定化剤としては、公知の酵素安定化剤が使用でき、具体的には、糖等が挙げられる。
【００５６】
洗剤組成物中の水の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜９８.９重量％が好ましく、さらに好ましくは１０〜９３．９９５重量％であり、次にさらに好ましくは１０〜７９.９重量％、特に好ましくは２０〜６７．９重量％である。
その他の成分のうち、洗剤組成物中のビルダー及びキレート剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜５重量％である。
洗剤組成物中の蛍光増白剤、漂白剤、柔軟剤、酵素、除菌剤、香料、着色剤及び消泡剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜５重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜２重量％である。
洗剤組成物中の親水性溶媒の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量に基づいて、０〜２０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１０重量％である。
洗剤組成物中のｐＨ緩衝剤の含有量（重量％）は、洗浄性の観点から、洗剤組成物の重量を基準として、０〜２５重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１５重量％、特に好ましくは０〜１０重量％である。
洗剤組成物中のアミラーゼの含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜０．０５重量％、特に好ましくは０〜０．０１重量％である。
洗剤組成物中のリパーゼの含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜０．１重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜０．０５重量％、特に好ましくは０〜０．０１重量％である。
洗剤組成物中の酵素安定化剤の含有量（重量％）は、洗剤組成物の重量を基準として、洗浄性の観点から、０〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜２０重量％、特に好ましくは０〜１０重量％である。
【００５７】
本発明の洗剤組成物の性状は特に限定されないが、液体状、ペースト状、粉末状、フレーク状及びブロック状等が挙げられる。これらのうち、取り扱い易さの観点から好ましいのは粉末状及び液体状である。
【００５８】
本発明の洗剤組成物は、性状の違いにより、以下の方法を選択して製造することができる。
（１）洗剤組成物の性状が液体状又はペースト状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要により水及びその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌して製造する方法。
（２）洗剤組成物の性状が粉末状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要により水及びその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌した後、噴霧乾燥器（例えば圧力噴霧ノズル型噴霧乾燥機、２流体噴霧ノズル型噴霧乾燥機及び回転円盤式噴霧乾燥機等）で噴霧乾燥する方法。
（３）洗剤組成物の性状が粉末状、フレーク状及びブロック状の場合
撹拌機及び加熱冷却装置を備えた混合槽に、界面活性剤（Ｃ）と、必要によりその他の成分を投入順序に特に制限なく投入し、１０〜５０℃で均一になるまで撹拌し、洗浄性向上剤（Ｂ）を加えてさらに１０〜５０℃で均一になるまで攪拌した後、離型紙上に溶融物を取り出して室温まで冷却し、得られた固化物を粉砕機（例えばミルミキサー、ボールミル、ジェット粉砕機、コロイドミル及びホモジナイザー等）で適度な大きさ（粉状、フレーク状又はブロック状）に粉砕する方法。
【００５９】
上記洗剤組成物は、衣料用洗剤、自動食器洗浄機用洗剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤等に使用できる。
【００６０】
洗剤組成物の使用方法は、従来の洗剤組成物の使用方法と同じでよく、特に限定されるものではない。衣料用洗剤としての使用方法の１例を下記に示す。
（１）洗濯物が入った洗濯機に水道水を張り、洗剤組成物を２５℃で添加し、軽く撹拌して溶解させる。
（２）洗濯機で洗濯物を洗浄する。
（３）洗濯機から液を抜き、水道水で１〜２回すすぐ。
（４）適宜脱水をかける。
【実施例】
【００６１】
以下の実施例、比較例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００６２】
＜製造例１＞
プライマー１（配列番号５）と２（配列番号６）を用いてＰＣＲ法によりＢａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓのｂｇｌＣ遺伝子を増幅した。ＰＣＲ増幅断片を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで処理後、ｐＥＴ−２２ｂプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ社）のＮｃｏＩ制限酵素サイトとＢａｍＨＩ制限酵素サイトに結合した。その後、ＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌株（Ｎｏｖａｇｅｎ社）へ形質転換を行い、配列番号１及び配列番号２のアミノ酸配列からなる配列番号３のセルラーゼ（Ａ−１）を発現する大腸菌（α）を作成した。
【００６３】
＜製造例２＞
プライマー２の代わりにプライマー３（配列番号８）を用いること以外は製造例１と同様にして、配列番号９のセルラーゼ（Ａ−３）を発現する大腸菌（β）を作成した。
【００６４】
＜実施例１＞
○洗浄性向上剤（Ｂ−１）の製造
大腸菌（α）の終夜培養液１０ｍｌを作製し、２５０ｍＬ培養液（ＴＢ培養液（Ｄｉｆｃｏ社）、０．７重量％硫酸アンモニウム、０．０５重量％クエン酸２アンモニウム、１ｍＭ硫酸マグネシウム）に植菌し、１Ｌ微生物培養装置（エイブル社）を用いてｐＨ７．０、３７℃で維持したまま培養を行った。培養開始３時間後に、１Ｍ ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−チオガラクトピラノシド）を０．７５ｍＬ加え、さらに、培養液中の濃度が１．０重量％になるようにヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン（三洋化成工業（株）製、商品名「レボン２０００」）を加えた。培養を４８時間行った後、培養液１５ｍＬから遠心分離機（ＫＵＢＯＴＡ社製「５９２２」、４℃、６０００×ｇ、１０分）を用いて菌体を分離し、上清のみを回収した。得られた上清を、遠心分離機（ＫＵＢＯＴＡ社製「５９２２」、４℃、６０００×ｇ、１０分）を用いて沈殿除去を行った後、限外ろ過膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製「アミコンウルトラ−１５」分画分子量１００００）を用いて、５ｍＬ程度になるまで上清の濃縮を行い、リン酸緩衝液１０ｍＬ加えて再び５ｍＬ程度になるまで濃縮を行い、再度リン酸緩衝液を加え５ｍＬ程度になるまで濃縮を行い、配列番号４のセルラーゼ（Ａ−２）を含む水溶液（すなわち、洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液）を得た（大腸菌（α）において発現誘導を行い細胞外に分泌される際に、分泌シグナル部位が切断され、配列番号４のアミノ酸配列となった）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、水溶液中のセルラーゼ（Ａ−２）の濃度は１５ｇ／Ｌであった。
得られた洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液を用いて、表１の割合で２５℃で配合した溶液を用いて、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６５】
＜実施例２＞
○洗浄性向上剤（Ｂ−２）の製造
実施例１において、「大腸菌（α）」に変えて「大腸菌（β）」を用いること以外は同様に行って、配列番号１０のセルラーゼ（Ａ−４）を含む水溶液（すなわち、洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液）を得た（大腸菌（β）において発現誘導を行い細胞外に分泌される際に、分泌シグナル部位が切断され、配列番号１０のアミノ酸配列となった）。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、水溶液中のセルラーゼ（Ａ−４）の濃度は１５ｇ／Ｌであった。
得られた洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液を用いて、表１の割合で２５℃で配合した溶液を用いて、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６６】
＜セルラーゼ（Ａ−２）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定＞
ｐＨ７．５のリン酸緩衝液に、１７．５ｇ／ＬになるようにＣＭＣ（製品名：カルボキシメチルセルロースナトリウム０３９−０１３３５、和光純薬社製）を溶解し、基質溶液を調整した。ｐＨ７．５のリン酸緩衝液３ｍＬに、実施例１で得たセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液を加え、リン酸緩衝液で１００倍希釈して、セルラーゼ（Ａ−２）溶液を調整した。基質溶液３ｍＬとセルラーゼ（Ａ−２）溶液５μＬを混合し、４０℃に温度を調節した粘度計（ＴＶＥ−２２Ｌ粘度計、２ｒｐｍ）に移した。混合直後に粘度を読み取り、その後、１、２、３、４、５及び６分後に粘度を読み取った。セルラーゼ（Ａ−２）の濃度が異なるセルラーゼ（Ａ−２）溶液を作成して同様に測定し、混合直後の粘度と５分後の粘度を比較した。５分後の粘度が１／２となるセルラーゼ（Ａ−２）の量（エンド−１，４−β−グルカナーゼ活性１単位）は０．０５ｍｇであった。したがって、セルラーゼ（Ａ−２）の粘度測定法によるエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性は２０単位／ｍｇであった。
【００６７】
＜セルラーゼ（Ａ−４）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定＞
「セルラーゼ（Ａ−２）のエンド−１，４−β−グルカナーゼ活性の測定」において、「実施例１で得たセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液」に変えて「実施例２で得たセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液」を用いること以外は同様に行った。活性は２０単位／ｍｇであった。
【００６８】
＜比較例１＞
実施例１において、洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液に変えて水を用いる以外は同様にして、洗浄性試験を行った。結果を表１に示す。
【００６９】
【表１】
表１中の各成分は、下記のものを使用した。
洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液：実施例１で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液
洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液：実施例２で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液
【００７０】
表１の洗浄率の結果から、比較例１の水のみで洗浄した場合と比較して、実施例１及び２で得られた洗浄性向上剤を用いることで、洗浄率が高くなった。したがって、本発明の洗浄性向上剤は、洗浄性向上剤のみでも、洗浄性を向上させることができることがわかる。
【００７１】
＜製造例３＞
配列番号７の遺伝子を制限酵素ＮｃｏＩとＢａｍＨＩで処理後、ｐＥＴ−２２ｂプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ社）のＮｃｏＩ制限酵素サイトとＢａｍＨＩ制限酵素サイトに結合した。そのＢＬ２１（ＤＥ３）大腸菌株にこのプラスミドを形質転換してプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）を発現する大腸菌（γ）を作成した。
【００７２】
＜製造例４＞
○プロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）の製造
実施例１の、「洗浄性向上剤（Ｂ−１）の製造」において、「大腸菌（α）」に変えて「大腸菌（γ）」を用いる以外は同様にして、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｏｇｒｉｓｅｏｌｕｓ由来の配列番号１１のプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液を得た。ＳＤＳ−ＰＡＧＥを測定したところ、プロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液中のプロテアーゼ阻害剤の濃度は２．２ｇ／Ｌであった。
【００７３】
＜実施例３〜２３＞
表２の割合で２５℃で配合し、本発明の洗剤組成物を作製した。
【００７４】
＜比較例２〜９＞
表３の割合で２５℃で配合し、比較の洗剤組成物を作製した。
【００７５】
【表２】
【００７６】
【表３】
【００７７】
表２及び３中の各成分は、下記のものを使用した。
洗浄性向上剤（Ｂ−１）含有溶液：実施例１で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−２）の水溶液
洗浄性向上剤（Ｂ−２）含有溶液：実施例２で得た１５ｇ／Ｌセルラーゼ（Ａ−４）の水溶液
プロテアーゼ阻害剤含有溶液：製造例４で得た２.２ｇ／Ｌプロテアーゼ阻害剤（Ｅ−１）含有溶液、１５１μＭ
界面活性剤：ラウリルアルコールエチレンオキサイド１１モル付加物、三洋化成工業（株）製
プロテアーゼ溶液：ノボザイムス社製、商品名「アルカラーゼ２．５Ｌ」、ＳＤＳ−ＰＡＧＥよりアルカラーゼ含量は１ｇ／Ｌと推定、３７μＭ
【００７８】
＜洗浄性試験＞
＜配合直後の洗浄率＞
実施例１〜２３及び比較例１〜９で作製した溶液及び洗剤組成物０．６ｇを、水９９９．４ｇに溶解し溶液を得た。この溶液に、湿式人工汚染布（４ｃｍ×４ｃｍ）５枚を投入し、ターゴトメーター（大栄化学製）を用いて以下の条件にて洗浄及びすすぎをした後、布を取り出し、ギヤーオーブン（ＴＡＢＡＩ製、ＧＰＳ−２２２）を用いて７０℃で６０分間乾燥し、試験布を得た。ついで、多光源分光測色計（スガ試験機製）を使用して、この試験布の５４０ｎｍの反射率を、試験布１枚ごとに表裏２個所ずつ計４個所（試験布５枚で合計２０個所）測定し、この平均値を求め、以下の式にて洗浄率（％）を算出した。結果を表１〜３に示す。
（洗浄条件）
時間：１０分、温度：２５℃、回転速度：１２０ｒｐｍ
（すすぎ条件）
時間：１分、温度：２５℃、回転速度：１２０ｒｐｍ
（洗浄率）
洗浄率（％）＝｛（ＲW−ＲS）／（ＲI−ＲS）｝×１００
なお、ＲIは清浄布の反射率、ＲWは洗浄布の反射率、ＲSは汚染布の反射率を示す。
また、使用した湿式人工汚染布は、表２の汚垢組成を有する財団法人洗濯科学協会製の湿式人工汚染布（５４０ｎｍにおける反射率が４０±５％）である。
【００７９】
【表４】
【００８０】
＜２５℃３ヶ月保管後の洗浄率＞
実施例３〜２３及び比較例２〜９で得た洗剤組成物について、上記＜配合直後の洗浄率＞において、作成直後の洗剤組成物の代わりに、洗剤組成物の作成後２５℃で３ヶ月保管した後の洗剤組成物を用いる以外は同様に洗浄性試験をおこない、洗浄率を算出した。結果を表２及び３に示す。
【００８１】
表２及び表３の配合直後の洗浄率の評価結果から、表２の実施例３〜２３の本発明の洗浄性向上剤を含む洗剤組成物は、表３のそれぞれ界面活性剤濃度が同じ比較例２〜９と比較して、洗浄率が高いことがわかる。したがって、本願発明の洗浄性向上剤は、洗剤の洗浄性を向上させることができることが分かる。
特に、プロテアーゼを含む実施例の洗剤組成物は、さらに洗浄率が高いことがわかる。
また、２５℃３ヶ月保管後の洗浄率の評価結果から、本発明の実施例において、プロテアーゼ及びプロテアーゼ阻害剤を含む洗剤組成物は、高い洗浄性を長期的に保つことができることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８２】
本発明の洗浄性向上剤は、衣料用洗浄剤、自動食器洗浄機用洗浄剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤等の洗浄剤の洗浄性を向上させる洗浄性向上剤として使用できる。また、本発明の洗剤組成物は、衣料用洗浄剤、自動食器洗浄機用洗浄剤及びコンタクトレンズ用洗浄剤として使用でき、特に衣料用液体洗剤に使用できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤（Ｂ）。
【請求項２】
請求項１に記載の洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物。
【請求項３】
洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）の含有量が、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、（Ｂ）が０．０００１〜６０重量％、（Ｃ）が４０〜９９．９９９９重量％である請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項４】
さらにプロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有する請求項２又は３に記載の洗剤組成物。
【請求項５】
洗浄性向上剤（Ｂ）、界面活性剤（Ｃ）、プロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、（Ｂ）が０．００１〜６０重量％、（Ｃ）が１０〜９９．９９８９９８重量％、（Ｄ）が０．０００００１〜３０重量％、（Ｅ）が０．０００００１〜８９．９９８９９重量％である請求項４に記載の洗剤組成物。
【請求項６】
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）とのモル比｛（Ｅ）のモル数／（Ｄ）のモル数｝が０．５〜１００である請求項４又は５に記載の洗剤組成物。
【請求項１】
配列番号１のアミノ酸配列を有する、又はこのアミノ酸配列の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加からなる群より選ばれる少なくとも１種により変質したアミノ酸配列を有するセルラーゼ（Ａ）からなる洗浄性向上剤（Ｂ）。
【請求項２】
請求項１に記載の洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）を含有する洗剤組成物。
【請求項３】
洗浄性向上剤（Ｂ）及び界面活性剤（Ｃ）の含有量が、（Ｂ）及び（Ｃ）の合計重量を基準として、（Ｂ）が０．０００１〜６０重量％、（Ｃ）が４０〜９９．９９９９重量％である請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項４】
さらにプロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）を含有する請求項２又は３に記載の洗剤組成物。
【請求項５】
洗浄性向上剤（Ｂ）、界面活性剤（Ｃ）、プロテアーゼ（Ｄ）及びプロテアーゼ阻害剤（Ｅ）の含有量が、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）及び（Ｅ）の合計重量を基準として、（Ｂ）が０．００１〜６０重量％、（Ｃ）が１０〜９９．９９８９９８重量％、（Ｄ）が０．０００００１〜３０重量％、（Ｅ）が０．０００００１〜８９．９９８９９重量％である請求項４に記載の洗剤組成物。
【請求項６】
プロテアーゼ阻害剤（Ｅ）とプロテアーゼ（Ｄ）とのモル比｛（Ｅ）のモル数／（Ｄ）のモル数｝が０．５〜１００である請求項４又は５に記載の洗剤組成物。
【公開番号】特開２０１２−１９６２０５（Ｐ２０１２−１９６２０５Ａ）
【公開日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−３８３４８（Ｐ２０１２−３８３４８）
【出願日】平成２４年２月２４日（２０１２．２．２４）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年２月２４日（２０１２．２．２４）
【出願人】（０００００２２８８）三洋化成工業株式会社 (1,719)
【Ｆターム（参考）】
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