本発明は、生物活性ＲＮＡ分子の細胞への送達のための新規な化合物、組成物及び方法を提供する。具体的には、本発明は、生物活性ＲＮＡの細胞への送達に有用な新規な核酸分子、ポリペプチド及びＲＮＡ−タンパク質複合体、並びにそれらをコードするポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、そのポリヌクレオチドを発現するためのベクターをも提供する。更に、本発明は、トランスフェクション試薬として使用され得る新規な化合物及びベクターを含む細胞及び組成物を提供する。本発明は、それらの化合物、ベクター、細胞及び組成物の作製方法を更に提供する。更に、生物活性ＲＮＡ分子を細胞及び／又は組織に送達するためのベクター及び方法が提供される。新規な化合物、ベクター、細胞及び組成物は、例えば、対象又は生物における疾患、障害又は状態の診断、予防、寛解及び／又は治療における標的遺伝子発現を調節するために生物活性ＲＮＡ分子を細胞に送達する場合に有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１ポリヌクレオチドが、標的遺伝子転写物に向けられた第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合によって末端ミニヘリックス配列を含む核酸をコードし、
第２ポリヌクレオチドが、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び細胞貫通ペプチド配列を含むポリペプチドをコードする、
第１ポリヌクレオチド及び第２ポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項２】
第１ポリヌクレオチドが、標的遺伝子転写物に向けられた生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合によって末端ミニヘリックス配列を含む核酸をコードし、
第２ポリヌクレオチドが、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び非古典的分泌ドメイン配列を含むポリペプチドをコードする、
第１ポリヌクレオチド及び第２ポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項３】
第２ポリヌクレオチドが、非古典的分泌ドメイン配列を更に含むポリペプチドをコードする、請求項１に記載の発現ベクター。
【請求項４】
前記ベクターが、第１プロモーター配列及び終止配列、並びに第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列を更に含み、第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合による末端ミニヘリックス配列をコードするポリヌクレオチドが、第１プロモーター配列及び終止配列に作動可能に連結し、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び細胞貫通ペプチド配列をコードするポリヌクレオチドが、第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項１に記載の発現ベクター。
【請求項５】
前記ベクターが、第１プロモーター配列及び終止配列、並びに第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列を更に含み、第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合による末端ミニヘリックス配列をコードするポリヌクレオチドが、第１プロモーター配列及び終止配列に作動可能に連結し、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び非古典的分泌ドメイン配列をコードするポリヌクレオチドが、第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項６】
前記ベクターが、第１プロモーター配列及び終止配列、並びに第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列を更に含み、第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合による末端ミニヘリックス配列をコードするポリヌクレオチドが、第１プロモーター配列及び終止配列に作動可能に連結し、ＲＮＡ結合ドメイン配列、細胞貫通ペプチド及び非古典的分泌ドメイン配列をコードするポリヌクレオチドが、第２プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項３に記載の発現ベクター。
【請求項７】
第１発現カセットが、プロモーター配列、標的遺伝子に向けられた第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列、場合によって末端ミニヘリックス配列及び終止配列を含み、第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合による末端ミニヘリックス配列が、プロモーター配列及び終止配列に作動可能に連結し、
第２発現カセットが、プロモーター配列、ＲＮＡ結合ドメイン配列、細胞貫通ペプチド配列及びポリＡ付加配列を含み、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び細胞貫通ペプチド配列が、プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する
第１発現カセット及び第２発現カセットを含む発現ベクター。
【請求項８】
第１発現カセットが、プロモーター配列、標的遺伝子に向けられた第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列、場合によって末端ミニヘリックス配列及び終止配列を含み、第１生物活性ＲＮＡ配列、認識ＲＮＡ配列及び場合による末端ミニヘリックス配列が、プロモーター配列及び終止配列に作動可能に連結し、
第２発現カセットが、プロモーター配列、ＲＮＡ結合ドメイン配列、非古典的分泌ドメイン配列及びポリＡ付加配列を含み、ＲＮＡ結合ドメイン配列及び非古典的分泌ドメイン配列が、プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する
第１発現カセット及び第２発現カセットを含む発現ベクター。
【請求項９】
第２発現カセットが、非古典的分泌ドメイン配列を更に含み、ＲＮＡ結合ドメイン配列、細胞貫通ペプチド配列及び非古典的分泌ドメイン配列が、プロモーター配列及びポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項７に記載の発現ベクター。
【請求項１０】
発現ベクターが、ウイルス複製のために必要な１つ又は複数のウイルスポリメラーゼ及び１つ又は複数のウイルスアクセサリータンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列を更に含む、請求項１に記載の発現ベクター。
【請求項１１】
前記ベクターが、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列を更に含み、ウイルスポリメラーゼ（単数又は複数）及びウイルスアクセサリータンパク質（単数又は複数）をコードするポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項１０に記載の発現ベクター。
【請求項１２】
第３発現カセットが、１つ又は複数のプロモーター配列、ウイルス複製のために必要な１つ又は複数のウイルスポリメラーゼ及び１つ又は複数のウイルスアクセサリータンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列、並びに１つ又はポリＡ付加配列を含み、ウイルスポリメラーゼ（単数又は複数）及びウイルスアクセサリータンパク質（単数又は複数）をコードするポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、第３発現カセットを更に含む、請求項７に記載の発現ベクター。
【請求項１３】
発現ベクターが、ウイルス複製のために必要な１つ又は複数のウイルスポリメラーゼ及び１つ又は複数のウイルスアクセサリータンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列を更に含む、請求項２に記載の発現ベクター。
【請求項１４】
前記ベクターが、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列を更に含み、ウイルスポリメラーゼ（単数又は複数）及びウイルスアクセサリータンパク質（単数又は複数）をコードするポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、請求項１３に記載の発現ベクター。
【請求項１５】
第３発現カセットが、１つ又は複数のプロモーター配列、ウイルス複製のために必要な１つ又は複数のウイルスポリメラーゼ及び１つ又は複数のウイルスアクセサリータンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列、並びに１つ又はポリＡ付加配列を含み、ウイルスポリメラーゼ（単数又は複数）及びウイルスアクセサリータンパク質（単数又は複数）をコードするポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、第３発現カセットを更に含む、請求項８に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
請求項４に記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１７】
請求項５に記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１８】
請求項６に記載の発現ベクターを含む細胞。
【請求項１９】
請求項１１に記載の発現ベクターと、１つ又は複数のウイルスコートタンパク質及び１つ又は複数のウイルス融合タンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列を含む発現ベクターと、医薬的に許容し得る担体とを含む組成物であって、該ウイルスコートタンパク質（単数又は複数）及び該ウイルス融合タンパク質（単数又は複数）をコードする該ポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、上記組成物。
【請求項２０】
請求項１４に記載の発現ベクターと、１つ又は複数のウイルスコートタンパク質及び１つ又は複数のウイルス融合タンパク質をコードする１つ又は複数のポリヌクレオチド配列、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列を含む発現ベクターと、医薬的に許容し得る担体とを含む組成物であって、該ウイルスコートタンパク質（単数又は複数）及び該ウイルス融合タンパク質（単数又は複数）をコードする該ポリヌクレオチド配列（単数又は複数）が、１つ又は複数のプロモーター配列及び１つ又は複数のポリＡ付加配列に作動可能に連結する、上記組成物。
【請求項２１】
請求項１９に記載の組成物を含む細胞。
【請求項２２】
請求項２０に記載の組成物を含む細胞。
【請求項２３】
請求項４に記載の発現ベクターを細胞に投与して、バイオリアクター細胞を作製することを含む、標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法であって、バイオリアクター細胞が、標的細胞への送達のための生物活性ＲＮＡを産生し、分泌する、上記方法。
【請求項２４】
請求項１６に記載の細胞を対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項２５】
請求項２１に記載の細胞を対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項２６】
請求項４に記載の発現ベクターを対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項２７】
請求項１９に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項２８】
請求項２１に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項２９】
請求項２２に記載の組成物を対象に投与することを含む、対象における標的細胞中における１つ又は複数の標的遺伝子の発現を調節するための方法。
【請求項３０】
請求項４に記載の発現ベクターを細胞に投与することを含む、細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３１】
請求項５に記載の発現ベクターを細胞に投与することを含む、細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３２】
請求項６に記載の発現ベクターを細胞に投与することを含む、細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３３】
請求項１９に記載の組成物を細胞に投与することを含む、細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３４】
請求項２０に記載の組成物を細胞に投与することを含む、細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３５】
請求項２１に記載の細胞を第２細胞に投与することを含む、第２細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。
【請求項３６】
請求項２２に記載の細胞を第２細胞に投与することを含む、第２細胞から生物活性ＲＮＡ分子を分泌するための方法。

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【公表番号】特表２０１２−５２００８５（Ｐ２０１２−５２００８５Ａ）
【公表日】平成２４年９月６日（２０１２．９．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５５４２７５（Ｐ２０１１−５５４２７５）
【出願日】平成２２年３月１５日（２０１０．３．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２７３６５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１０５２７７
【国際公開日】平成２２年９月１６日（２０１０．９．１６）
【出願人】（５１００３３５８３）エーゲン、インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】