本発明は、２つの型のポリペプチド二量体を含む混合物から、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介しては結合されない二量体から、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合される二量体を、分離または優先的に合成する方法を記載する。これらの型は、疎水性相互作用クロマトグラフィーを使用して互いに分離され得る。さらに、本発明は、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合される二量体または少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介しては結合されない二量体の優先的な整合性を生じる連結ペプチドに関する。本発明はまた、組成物に関し、その中において、多数の二量体が少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されるか、または多数の二量体が少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介しては結合されない。本発明はなおさらに、新規の結合分子（例えば、本発明の連結ペプチドを含む）に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を有するポリペプチド二量体を含む組成物であって、該少なくとも２本のポリペプチド鎖が、少なくとも１つの重鎖部分および合成連結ペプチドを含み、５０％を超える該ポリペプチド二量体が、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含む、組成物。
【請求項２】
９０％を超える前記ポリペプチド二量体が、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ポリペプチド鎖が、前記連結ペプチドを介してＶＬ、ＶＨまたはＣＨ１に遺伝的に融合されたＣＨ３ドメインを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリペプチド鎖が、ＣＨ２ドメインの全てまたは部分を欠損している、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ポリペプチド二量体が、２つ以上の鎖間ジスルフィド結合を介して結合されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記重鎖部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群より選択されるアイソタイプの抗体に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記重鎖部分が、γ１ヒンジ、γ２ヒンジ、γ３ヒンジおよびγ４ヒンジからなる群より選択されるヒンジ領域に由来するアミノ酸配列を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記重鎖部分が、キメラヒンジを含む、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記合成連結ペプチドが、ＩｇＧ１ヒンジドメインの少なくとも一部分、ＩｇＧ３ヒンジドメインの少なくとも一部分を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記結合部位が、個々に、抗原結合部位、レセプターのリガンド結合部分、およびリガンドのレセプター結合部分、からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ポリペプチド二量体が、４本のポリペプチド鎖を含み、そして該ポリペプチド鎖のうち２本が、少なくとも１つの重鎖部分および合成連結ペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも２つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を有するポリペプチド二量体を含む組成物であって、該少なくとも２本のポリペプチド鎖が、少なくとも１つの重鎖部分および合成連結ペプチドを含み、５０％を超える該ポリペプチド二量体が、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含み、そして該連結ペプチドが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムの２４３位にプロリン残基を含む、組成物。
【請求項１３】
９０％を超える前記ポリペプチド二量体が、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されている、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記合成連結ペプチドが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムの２３９位または２４２位にシステイン残基をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
少なくとも１本の前記ポリペプチド鎖が、前記連結ペプチドを介してＶＬ、ＶＨまたはＣＨ１に結合されているＣＨ３ドメインを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１６】
前記合成連結ペプチドが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムの２４４位にアラニン残基を、そして２４５位にプロリン残基をさらに含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１７】
結合分子での処置から恩恵を受ける被験体を処置する方法であって、該方法は、請求項１または請求項１１のいずれか１項に記載の組成物を被験体に投与して、その結果、処置が生じる工程を包含する、方法。
【請求項１８】
前記被験体が、癌を罹患している、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記被験体が、リンパ腫を罹患している、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記被験体が、自己免疫疾患または自己免疫障害を罹患している、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体が、炎症性疾患または炎症性障害を罹患している、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記結合部位が、個々に、抗原結合部位、レセプターのリガンド結合部位、およびリガンドのレセプター結合部位からなる群より選択される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１または請求項１２のいずれか１項に記載のポリペプチド鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２４】
請求項２３に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
【請求項２５】
前記ポリペプチド二量体が、４本のポリペプチド鎖を含み、そして該ポリペプチド鎖のうち２本が、少なくとも１つの重鎖部分および合成連結ペプチドを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２６】
配列番号８〜配列番号１５、および配列番号５３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、連結ペプチド。
【請求項２７】
配列番号８〜配列番号１５、および配列番号５３からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、連結ペプチド。
【請求項２８】
ポリペプチド鎖をコードする核酸分子であって、該核酸分子が、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３８、配列番号４２、配列番号４６および配列番号４７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項２９】
ポリペプチド鎖をコードする核酸分子であって、該核酸分子が、配列番号２４および配列番号２５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項３０】
配列番号１８、配列番号２２、配列番号２３、配列番号４０、および配列番号４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、ドメイン欠失抗体分子。
【請求項３１】
配列番号２６および配列番号２７からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、ドメイン欠失抗体分子。
【請求項３２】
配列番号３１に示されるアミノ酸配列を含む、抗体分子。
【請求項３３】
配列番号３５に示されるアミノ酸配列を含む、抗体分子。
【請求項３４】
第一のポリペプチド二量体と第二のポリペプチド二量体とを分離する方法であって、該第一のポリペプチド二量体は、少なくとも２つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を含み、該少なくとも２本のポリペプチド鎖は、重鎖部分を含み、そして該第一のポリペプチド二量体は、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含み、かつ該第二のポリペプチド二量体は、少なくとも２つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を含み、該少なくとも２本のポリペプチド鎖は、重鎖部分を含み、そして該第二のポリペプチド二量体は、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合していないポリペプチド鎖を含み、以下：
ｉ）該第一のポリペプチド二量体および該第二のポリペプチド二量体を含む混合物を、媒体に接触させ、該媒体は、該ポリペプチド二量体を該媒体に結合させる条件下での疎水性相互作用に基づいて該ポリペプチド鎖を分離する媒体である、工程；ならびに
ｉｉ）該第一のポリペプチド二量体を収集し、それにより該第一のポリペプチド二量体および該第二のポリペプチド二量体を分離する工程、
の工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記収集する工程が、ほぼ中性のｐＨで約１２０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有する溶液と接触させる工程を包含する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記伝導率が、約１１６ｍＳ／ｃｍである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
該第一のポリペプチド二量体および第二のポリペプチド鎖のいずれもが該媒体に結合するように、前記媒体を、工程ｉｉ）の前に、ほぼ中性のｐＨで約１４０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有する溶液と接触させる工程をさらに包含する、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記ポリペプチド鎖が、合成連結ペプチドを介してＶＬ、ＶＨまたはＣＨ１ドメインに結合されているＣＨ３ドメインを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
前記第一のポリペプチド二量体および第二のポリペプチド二量体の重鎖部分が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４からなる群より選択されるアイソタイプの抗体に由来する、請求項３４に記載の方法。
【請求項４０】
前記重鎖部分が、γ１ヒンジ、γ２ヒンジ、γ３ヒンジ、およびγ４ヒンジからなる群より選択されるヒンジ領域に由来するアミノ酸配列を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記結合部位が、抗原結合部位、レセプターのリガンド結合部位、およびリガンドのレセプター結合部位からなる群より、個々に選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項４２】
ポリペプチド二量体の少なくとも１つの結合部位が、２Ｂ８、Ｌｙｍ １、Ｌｙｍ ２、ＬＬ２、Ｈｅｒ２、Ｂ１、ＭＢ１、ＢＨ３、Ｂ４、Ｂ７２．３、ＣＣ４９、および５Ｅ１０からなる群より選択される抗体由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
ポリペプチド二量体の少なくとも１つの結合部位が、リガンドの前記レセプター結合部分を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
ポリペプチド二量体の少なくとも１つの結合部位が、レセプターの前記リガンド結合部分を含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
請求項３４に記載の方法により調製される第一のポリペプチド二量体を含む、組成物。
【請求項４６】
結合分子での処置から恩恵を受ける被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に、請求項４５の組成物を投与して、その結果、処置が生じる工程を包含する、方法。
【請求項４７】
前記ポリペプチド二量体が、４本のポリペプチド鎖を含み、そして該ポリペプチド鎖のうち２本が、少なくとも１つの重鎖部分を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項４８】
第一の適切に折りたたまれた抗体分子を第二の不適切に折りたたまれた抗体分子から分離するための方法であって、該第一の抗体分子および第二の抗体分子の各々が、４本のポリペプチド鎖を含み、該鎖のうち少なくとも２本が、少なくとも１つの重鎖部分を含み、かつ該鎖のうち少なくとも２本が、少なくとも１つの軽鎖部分を含み、該方法は、以下
ｉ）該第一の抗体分子および第二の抗体分子を含む混合物を、抗体分子を疎水性相互作用に基づいて分離する媒体と接触させる工程、
ｉｉ）該媒体を、ほぼ中性のｐＨで約１２０ｍＳ／ｃｍの伝導率を有する溶液と接触させ、その結果、該第一の抗体分子は該媒体に結合されず、かつ該第二の抗体分子は該媒体に結合され、それにより該第一の抗体分子と該第二の抗体分子とを分離する工程、
を包含する、方法。
【請求項４９】
請求項４８に記載の方法により調製される第一のポリペプチドを含む、組成物。
【請求項５０】
細胞により産生される第一のポリペプチド二量体の量を第二のポリペプチド二量体に比べて増加させるための方法であって、該第一のポリペプチド二量体および第二のポリペプチド二量体は、少なくとも二つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を含み、該少なくとも２本のポリペプチド鎖は、重鎖部分を含み、該第一の二量体は、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含み、かつ該第二の二量体は、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合されていないポリペプチド鎖を含み、該方法は、該細胞により産生される該第一のポリペプチド二量体の量が、該第二のポリペプチド二量体の量に比べて増加されるように、該ポリペプチド鎖を、合成連結ペプチドを含むように操作する工程を包含する、方法。
【請求項５１】
請求項５０に記載の方法により作製される、組成物。
【請求項５２】
前記ポリペプチド二量体が、４本のポリペプチド鎖を含み、そして該ポリペプチド鎖のうちの２本が、少なくとも１つの重鎖部分および合成連結ペプチドを含む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５３】
配列番号３７のアミノ酸配列を含む合成連結ペプチドを含むポリペプチドであって、該ポリペプチドは、天然に生じるＩｇＧ３分子ではない、ポリペプチド。
【請求項５４】
前記ポリペプチドが、ＩｇＧ４分子である、請求項５３に記載のポリペプチド。
【請求項５５】
前記ポリペプチドが、ＶＬＡ−４に結合する、請求項５４に記載のポリペプチド。
【請求項５６】
細胞により産生されるＩｇＧ４分子の集団において、少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含む二量体の量を増加させるための方法であって、該方法は、ＩｇＧ４分子の集団において少なくとも１つのジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチドを含む二量体の量が増加されるように、該細胞に合成連結ペプチドを含むＩｇＧ４分子を発現させる工程を包含する、方法。
【請求項５７】
少なくとも２つの結合部位および少なくとも２本のポリペプチド鎖を有するポリペプチド二量体を含む組成物であって、該少なくとも２本のポリペプチド鎖は、少なくとも１つの重鎖部分を含み、かつＣＨ２ドメインの全てまたは一部分を欠損し、５０％を超える該ポリペプチド二量体が、少なくとも１つの鎖間ジスルフィド結合を介して結合されているポリペプチド鎖を含む、組成物。
【請求項５８】
前記ポリペプチド二量体が、４本のポリペプチド鎖を含み、そして該ポリペプチド鎖のうち２本が、少なくとも１つの重鎖部分を含む、請求項５７に記載の組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【公表番号】特表２００７−５３５２９６（Ｐ２００７−５３５２９６Ａ）
【公表日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１７７８４（Ｐ２００６−５１７７８４）
【出願日】平成１６年６月２８日（２００４．６．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２０９４４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０００８９８
【国際公開日】平成１７年１月６日（２００５．１．６）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】