【課題】治療，診断，標的評価およびゲノム発見用途における使用において遺伝子発現を調節するのに有用な方法および試薬を提供する。
【解決手段】標的核酸配列に対するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介しうる小核酸分子，例えば，短干渉核酸（ｓｉＮＡ），短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ），二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ），マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ），および短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）分子。小核酸分子は細胞，組織または生物における遺伝子発現の調節に応答する任意の疾病または状態の治療において有用である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される化学的に合成された二本鎖核酸分子であって，
（ａ） 前記二本鎖核酸分子の各鎖は１９−２３ヌクレオチドの長さであり；
（ｂ） センス鎖の少なくとも１９ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり；
（ｃ） 前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖は，１９−２３ヌクレオチドの配列ホモロジーを共有する１またはそれ以上のＲＮＡ転写産物の間の配列ホモロジーの領域に相補的な少なくとも１９ヌクレオチドを有し；および
（ｄ） 前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は前記ＲＮＡ転写産物と相同な配列を含む，
ことを特徴とする二本鎖核酸分子。
【請求項２】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項３】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項４】
２つの鎖がリンカー分子を介して連結している，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項５】
前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである，請求項４記載の二本鎖核酸分子。
【請求項６】
前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである，請求項４記載の二本鎖核酸分子。
【請求項７】
センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項８】
センス鎖中のプリンヌクレオチドが２’−デオキシプリンヌクレオチドである，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項９】
センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１０】
センス鎖が，５’末端，３’末端，または５’末端および３’末端の両方に末端キャップ成分を有する，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１１】
前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である，請求項１０記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１２】
前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１３】
前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１４】
前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１５】
前記ＲＮＡ転写産物が外因性遺伝子によりコードされる，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１６】
前記外因性遺伝子がレセプターをコードする，請求項１５記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１７】
前記レセプターがＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２である，請求項１６記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１８】
前記レセプターが上皮成長因子レセプターである，請求項１６記載の二本鎖核酸分子。
【請求項１９】
前記ＲＮＡ転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２０】
前記ウイルス遺伝子が複数の株のウイルスに由来する，請求項１９記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２１】
前記ウイルスがＨＩＶである，請求項１９記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２２】
前記ウイルスが，ＨＣＶ，ＨＢＶ，ＲＳＶ，およびインフルエンザからなる群より選択される，請求項１９記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２３】
二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の３’末端が１またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む，請求項１記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２４】
前記オーバーハングが１−４ヌクレオチドである，請求項２３記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２５】
前記オーバーハングが２ヌクレオチドである，請求項２３記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２６】
前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドを含む，請求項２３記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２７】
前記修飾ヌクレオチドが，２’−デオキシ，２’−デオキシ−２’−フルオロ，２’−Ｏ−メチル，およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される，請求項２６記載の二本鎖核酸分子。
【請求項２８】
請求項１記載の二本鎖核酸分子を薬学的に許容しうる担体または希釈剤中に含む組成物。
【請求項２９】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）により配列ホモロジーを共有する２以上のＲＮＡ転写産物の切断を指示する方法であって，前記ＲＮＡ転写産物を，前記切断に適した条件下で請求項１−２７のいずれかに記載の二本鎖核酸分子と接触させることを含む方法。
【請求項３０】
二本鎖核酸分子を製造する方法であって，
（ａ）約１９−２３ヌクレオチドの配列ホモロジーを有する１またはそれ以上の領域を有する２またはそれ以上のＲＮＡ転写産物を同定し；
（ｂ）センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を合成し，ここで，前記二本鎖核酸分子の各鎖は１９−２３ヌクレオチドの長さであり；センス鎖の少なくとも１９ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり；前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖の少なくとも１９ヌクレオチドは，前記ＲＮＡ転写産物間の配列ホモロジーの領域に対して相補的なヌクレオチド配列を有し；および前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は前記ＲＮＡ転写産物に相同な配列を含む，
ことを特徴とする方法。
【請求項３１】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない，請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む，請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
２つの鎖がリンカー分子を介して連結している，請求項３０記載の方法。
【請求項３４】
前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである，請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである，請求項３３記載の方法。
【請求項３６】
センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである，請求項３０記載の方法。
【請求項３７】
センス鎖中のプリンヌクレオチドが２’−デオキシプリンヌクレオチドである，請求項３０記載の方法。
【請求項３８】
センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項３０記載の方法。
【請求項３９】
センス鎖が，５’末端，３’末端，または５’末端および３’末端の両方に末端キャップ成分を有する，請求項３０記載の方法。
【請求項４０】
前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である，請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項３０記載の方法。
【請求項４２】
前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである，請求項３０記載の方法。
【請求項４３】
前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む，請求項３０記載の方法。
【請求項４４】
前記ＲＮＡ転写産物が外因性遺伝子によりコードされる，請求項３０記載の方法。
【請求項４５】
前記外因性遺伝子がレセプターをコードする，請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記レセプターがＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２である，請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
前記レセプターが上皮成長因子レセプターである，請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
前記ＲＮＡ転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる，請求項３０記載の方法。
【請求項４９】
前記ウイルス遺伝子が複数の株のウイルスに由来する，請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記ウイルスがＨＩＶである，請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記ウイルスが，ＨＣＶ，ＨＢＶ，ＲＳＶ，およびインフルエンザからなる群より選択される，請求項４９記載の方法。
【請求項５２】
二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の３’末端が１またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む，請求項３０記載の方法。
【請求項５３】
前記オーバーハングが１−４ヌクレオチドである，請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
前記オーバーハングが２ヌクレオチドである，請求項５２記載の方法。
【請求項５５】
前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドである，請求項５２記載の方法。
【請求項５６】
前記修飾ヌクレオチドが，２’−デオキシ，２’−デオキシ−２’−フルオロ，２’−Ｏ−メチル，およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される，請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を製造する方法であって，ここで，アンチセンス鎖は，２以上の標的ＲＮＡ転写産物に相補的であり，該方法は，
（ａ）配列ホモロジーを有する１またはそれ以上の領域を有する２またはそれ以上のＲＮＡ転写産物を同定し；
（ｂ）センス鎖およびアンチセンス鎖から構成される二本鎖核酸分子を合成し，ここで，前記二本鎖核酸分子の各鎖は１９−２３ヌクレオチドの長さであり；センス鎖の少なくとも１９ヌクレオチドはアンチセンス鎖に相補的であり；前記二本鎖核酸分子のアンチセンス鎖中の少なくとも１９ヌクレオチドは，前記ＲＮＡ転写産物の間で配列ホモロジーを有する領域に相補的なヌクレオチド配列を有し；および前記二本鎖核酸分子のセンス鎖は，前記ＲＮＡ転写産物に相同な配列を含む，
の各工程を含むことを特徴とする方法。
【請求項５８】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含まない，請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
前記二本鎖核酸分子がリボヌクレオチドを含む，請求項５７記載の方法。
【請求項６０】
２つの鎖がリンカー分子を介して連結している，請求項５７記載の方法。
【請求項６１】
前記リンカー分子がポリヌクレオチドリンカーである，請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
前記リンカー分子が非ヌクレオチドリンカーである，請求項６０記載の方法。
【請求項６３】
センス鎖中のピリミジンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドである，請求項５７記載の方法。
【請求項６４】
センス鎖中のプリンヌクレオチドが２’−デオキシプリンヌクレオチドである，請求項５７記載の方法。
【請求項６５】
センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項５７記載の方法。
【請求項６６】
センス鎖が５’末端，３’末端，または５’末端および３’末端の両方に末端キャップ成分を有する，請求項５７記載の方法。
【請求項６７】
前記末端キャップ成分が反転デオキシ無塩基成分である，請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
前記アンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである，請求項５７記載の方法。
【請求項６９】
前記アンチセンス鎖のプリンヌクレオチドが２’−Ｏ−メチルプリンヌクレオチドである
，請求項５７記載の方法。
【請求項７０】
前記アンチセンス鎖中に存在するプリンヌクレオチドが２’−デオキシ−プリンヌクレオチドを含む，請求項５７記載の方法。
【請求項７１】
前記ＲＮＡ転写産物が外因性遺伝子によりコードされる，請求項５７記載の方法。
【請求項７２】
前記外因性遺伝子がレセプターをコードする，請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
前記レセプターがＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２である，請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
前記レセプターが上皮成長因子レセプターである，請求項７２記載の方法。
【請求項７５】
前記ＲＮＡ転写産物がウイルス遺伝子によりコードされる，請求項５７記載の方法。
【請求項７６】
前記ウイルス遺伝子が，複数の株のウイルスに由来する，請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
前記ウイルスがＨＩＶである，請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
前記ウイルスが，ＨＣＶ，ＨＢＶ，ＲＳＶ，およびインフルエンザからなる群より選択される，請求項７６記載の方法。
【請求項７９】
二本鎖核酸分子の一方または両方の鎖の３’末端が１またはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む，請求項５７記載の方法。
【請求項８０】
前記オーバーハングが１−４ヌクレオチドである，請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
前記オーバーハングが２ヌクレオチドである，請求項７９記載の方法。
【請求項８２】
前記オーバーハングが修飾ヌクレオチドを含む，請求項７９記載の方法。
【請求項８３】
前記修飾ヌクレオチドが，２’−デオキシ，２’−デオキシ−２’−フルオロ，２’−Ｏ−メチル，およびホスホロチオエート修飾ヌクレオチドからなる群より選択される，請求項８２記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【公開番号】特開２００９−６０８９３（Ｐ２００９−６０８９３Ａ）
【公開日】平成２１年３月２６日（２００９．３．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２０１５９３（Ｐ２００８−２０１５９３）
【出願日】平成２０年８月５日（２００８．８．５）
【分割の表示】特願２００６−１１７１９９（Ｐ２００６−１１７１９９）の分割
【原出願日】平成１５年２月２０日（２００３．２．２０）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５００２０３６８４）サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド (28)
【氏名又は名称原語表記】Ｓｉｒｎａ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】