細胞含有組成物調製容器、および該細胞含有組成物調製容器を備えた細胞含有組成物製造器具
【課題】本発明は、簡便かつ迅速に細胞含有組成物を無菌的に調製することを可能にする細胞含有組成物の調製容器、および該調製容器を備えた細胞含有組成物の製造器具を提供する。
【解決手段】流入口１５を備えるバッグ１１の内部空間を仕切り１３で区画することにより、区画された複数の空間１０を形成させる。空間１０には、細胞支持体１２を封入する。こうして構成された混合容器１の流入口１５からバッグ１１内に細胞を流入させると、空間１０内で細胞支持体１２と細胞とが混合される。また、仕切り１３を除去することにより、細胞と混合する細胞支持体１２の量や種類を所望に制御することができる。それゆえ、簡便かつ容易に、所望の細胞含有組成物を無菌的に調製することができる。
【解決手段】流入口１５を備えるバッグ１１の内部空間を仕切り１３で区画することにより、区画された複数の空間１０を形成させる。空間１０には、細胞支持体１２を封入する。こうして構成された混合容器１の流入口１５からバッグ１１内に細胞を流入させると、空間１０内で細胞支持体１２と細胞とが混合される。また、仕切り１３を除去することにより、細胞と混合する細胞支持体１２の量や種類を所望に制御することができる。それゆえ、簡便かつ容易に、所望の細胞含有組成物を無菌的に調製することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞含有組成物調製容器、および該細胞含有組成物調製容器を備えた細胞含有組成物製造器具に関するものであって、特に、簡便かつ迅速に細胞含有組成物を無菌的に製造することを可能にする細胞含有組成物調製容器、および該細胞含有組成物調製容器を備えた細胞含有組成物製造器具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞含有組成物は、様々な疾患の治療に用いられている。具体的には、例えば、細胞含有組成物は、骨壊死の治療に用いられている。
【０００３】
骨壊死は、外傷や血管病変あるいは骨細胞への直接の傷害によって、骨細胞、骨基質、骨髄細胞の死滅または破壊が起こった状態である。
【０００４】
骨壊死の治療法としては、例えば、骨に分化する間葉系幹細胞をβ−リン酸三カルシウム等の細胞支持体に付与して、細胞含有組成物を調製した後に、該細胞含有組成物を生体に投与する方法が開発されている。該方法で、骨欠損部の修復速度が高まり、骨壊死を治療することができる。
【０００５】
このような細胞含有組成物としては、具体的には、特許文献１には、体液から所望の不要成分を除去した少なくとも間葉系幹細胞を含む濃縮体をβ−リン酸三カルシウム（以下、「β−ＴＣＰ」ともいう）からなる骨補填材に付与してなる骨補填体が開示されている。
【０００６】
また、特許文献１には、上記骨補填体は、上部開口型の容器に、体液から所望の不要成分を除去した少なくとも間葉系幹細胞を含む濃縮体を入れて、該容器内で、β−ＴＣＰを上記濃縮体に漬けることにより、製造できることが記載されている。
【特許文献１】特開２００３−３２０００９号公報（平成１５（２００３）年１１月１１日公開）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上説したような細胞含有組成物は、生体に投与するため、無菌的に調製する必要がある。そのため、特許文献１のように、上部が開口された容器を用いて、上記細胞含有組成物を調製する場合、無菌的に調製するために、特別な装置が必要となるという問題がある。
【０００８】
また、そのような特別な装置を用いる必要となるため、臨床現場で簡便に調製できないという問題がある。
【０００９】
本発明は、上記問題点に鑑みなされたものであって、その目的は、簡便かつ迅速に細胞含有組成物を無菌的に調製することを可能にする細胞含有組成物の調製容器、および該調製容器を備えた細胞含有組成物の製造器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、細胞支持体が封入された空間と、細胞を含有する試料を流入させるための流入口を有する空間とを備え、かつ、上記２つの空間が容易に連結可能な容器を用いることにより、無菌的に、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を簡便かつ容易に調製できることを独自に見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、以下の産業上有用な以下の発明を包含する。
【００１１】
（１）細胞を流入させるための流入部を有する容器と、該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部と、を備え、上記仕切り部の除去により、上記容器内の区画された空間は連結可能であって、上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられており、上記仕切り部によって区画された空間のうち、少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されていることを特徴とする細胞含有組成物調製容器。
【００１２】
（２）上記容器は、流出部をさらに備え、上記流入部および流出部は、ともに、上記仕切り部によって区画された１つの同一空間に設けられており、該流入部および流出部が設けられた空間には、上記細胞支持体は封入されていないことを特徴とする（１）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１３】
（３）細胞回収部をさらに備え、該細胞回収部は、上記流出部と接続されていることを特徴とする（２）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１４】
（４）上記細胞回収部は、該細胞回収部の内部の空間を少なくとも２つに区画するフィルターを備えていることを特徴とする（３）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１５】
（５）上記容器は、合成樹脂からなることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１６】
（６）上記仕切り部は、上記容器の壁面同士を熱圧着させることにより形成されてなることを特徴とする（５）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１７】
（７）上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記細胞支持体が封入されている空間および上記細胞支持体が封入されている空間とは異なる少なくとも１つの空間に、上記細胞と上記細胞支持体とを混合するための溶液が封入されていることを特徴とする（１）〜（６）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１８】
（８）上記溶液が封入されている空間は、さらに、上記流入部が設けられている空間とは異なることを特徴とする（７）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１９】
（９）上記溶液は、培地、生理食塩液、血漿、および血清からなる群より選択される少なくとも１つの溶液であることを特徴とする（７）または（８）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２０】
（１０）上記細胞支持体は、無機材料、天然高分子材料、合成高分子材料、金属材料、自家骨またはこれらの２種以上を組み合わせた複合材を含むことを特徴とする（１）〜（９）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２１】
（１１）上記細胞は、幹細胞であることを特徴とする（１）〜（１０）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２２】
（１２）（１）〜（１１）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器と、細胞分離部とを備え、該細胞分離部は、上記流入部と接続されていることを特徴とする細胞含有組成物製造器具。
【００２３】
（１３）上記細胞分離部は、細胞を捕捉するための細胞捕捉部と、上記細胞捕捉部に細胞回収液を注入し、該細胞捕捉部に捕捉された上記細胞を該細胞捕捉部から流出させるための細胞回収液注入部とを備え、上記細胞含有組成物調製容器は、上記細胞捕捉部から流出した上記細胞を含む細胞回収液を回収するためのものであることを特徴とする（１２）に記載の細胞含有組成物製造器具。
【００２４】
（１４）上記細胞を含む試料を上記細胞捕捉部に注入するための試料注入部をさらに備え、上記試料注入部は、上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記試料を注入するものであることを特徴とする（１２）または（１３）に記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２５】
（１５）上記試料注入部が上記細胞捕捉部に上記試料を注入したとき、上記試料のうち、上記細胞捕捉部を通過した成分を回収するための廃液回収部をさらに備えることを特徴とする（１４）に記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２６】
（１６）上記細胞捕捉部を洗浄するための洗浄液を上記細胞捕捉部に注入するための洗浄液注入部をさらに備え、上記洗浄液注入部は、上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記洗浄液を注入することを特徴とする（１２）〜（１５）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２７】
（１７）上記細胞捕捉部は、フィルター構造を有する細胞分離材を含むことを特徴とする（１２）〜（１６）のいずれかに記載の細胞含有組成物製造器具。
【発明の効果】
【００２８】
以上のように、本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、細胞を流入させるための流入部を有する容器と、該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部とを備えている。上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられている。また、上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記流入部が設けられた空間とは異なる少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されている。さらに、上記容器内の区画された空間は、上記仕切り部の除去により、連結される。
【００２９】
したがって、上記流入部から細胞を流入させた後、上記仕切り部を除去することにより、上記細胞と細胞支持体とを混合することができる。それゆえ、上記構成によれば、無菌的に、上記細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を簡便かつ容易に調製できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
本発明の一実施形態について図１〜図５に基づき説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３１】
＜Ｉ．細胞含有組成物調製容器＞
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することに適したものである。
【００３２】
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、従来公知の細胞分離装置と接続することにより、無菌的に、上記細胞含有組成物を迅速かつ容易に調製することを可能にする。
【００３３】
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器を用いて調製される細胞含有組成物は、特に限定されるものではない。例えば、特定の細胞と、細胞支持体とを少なくとも含み、あらゆる疾患や疾病の治療用途に利用可能な組成物を好適に調製することができる。上記特定の細胞は特に限定されるものではないが、幹細胞であることが好ましい。幹細胞は、医療上有用な細胞の１つであり、このような細胞を含む細胞含有組成物であれば、医療用途に個的に用いることができる。
【００３４】
上記細胞含有組成物としては、より具体的には、例えば、骨再生関連細胞と、細胞支持体とを少なくとも含む骨再生組成物を挙げることができる。このような骨再生組成物は、疾患の治療において、骨再生させるために用いることができる。また、骨再生以外では、軟骨再生、心筋再生等の目的や、心臓病、神経疾患、筋萎縮性側索硬化症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ガン、多発性硬化症、動脈石灰化、皮膚疾患等の疾患に対して用いることができる。
【００３５】
上記骨再生関連細胞とは、骨再生に関わる細胞であり、具体的には、例えば、間葉系幹細胞を挙げることができる。
【００３６】
間葉系幹細胞は、体液中から分離され、自己増殖を繰り返す能力を有し、下流の細部系譜への分化が可能な細胞である。また、間葉系幹細胞は、その由来系統の細胞だけではなく、別系統の細胞にまで分化することができる。
【００３７】
より詳しく説明すると、間葉系幹細胞は、分化誘導因子により、例えば、軟骨細胞や、血管内皮細胞、心筋細胞、脂肪組織等、または歯周組織の構成細胞であるセメント芽細胞、歯周靱帯繊維芽細胞等の中胚葉系の細胞に分化することができる。
【００３８】
また、間葉系幹細胞は、適切な環境下では骨芽細胞に分化し、骨組織を新生することが知られている。この骨組織の新生では、間葉系幹細胞は、不足した骨新生能力を補填する役割を担っていると考えられている。
【００３９】
間葉系幹細胞としては、具体的には、骨髄由来間葉系幹細胞、脂肪組織由来間葉系幹細胞、羊膜由来間葉系幹細胞、胎盤由来間葉系幹細胞、臍帯由来間葉系幹細胞等を挙げることができる。
【００４０】
本明細書において、「細胞支持体」とは、細胞を支持することが可能な物質が意図される。本発明では、上記細胞支持体は、細胞の増殖および／または分化の足場となるものであることが好ましい。このような細胞支持体は、混合する細胞の種類に応じて、適宜選択すればよい。
【００４１】
上記細胞支持体としては、具体的には、例えば、ハイドロキシアパタイト、β−リン酸三カルシウム、炭酸カルシウムまたはリン酸オクタカルシウム、リン酸カルシウム等の無機材料；コラーゲン、キトサン、またはキチン等の天然高分子材料；ポリリシン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリシアノアクリレート、またはε−カプロラクタン等の合成高分子材料；純チタン、チタン合金、タンタル、またはステンレス鋼等の金属材料などを挙げることができる。
【００４２】
これらは単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせた複合材として用いてもよい。
【００４３】
また、自家骨、自家骨片、自家骨粉、血管柄付き骨片のような組織及び組織片等を細胞支持体とすることもできる。
【００４４】
〔実施の形態１〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器の一実施形態について、図１に基づいて、以下、具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００４５】
本実施形態にかかる混合容器１（細胞含有組成物調製容器）は、図１に示すように、細胞を流入させるための流入口１５（流入部）を有するバッグ１１（容器）と、バッグ１１内の空間を区画している、２つの仕切り１３（仕切り部）とを備えている。
【００４６】
上記構成を備えることにより、バッグ１１内の空間は、２つの仕切り１３によって、３つの空間１０に区画されている。そして、各空間１０には、細胞支持体１２が封入されている。
【００４７】
また、図１において、流入口１５は、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央にある空間１０に設けられている。
【００４８】
上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、まず、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央にある空間１０に収納される。そこで、細胞支持体１２と混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【００４９】
また、上記構成では、隣接する空間１０との間に存在するいずれかの仕切り１３を除去することにより、隣接する空間１０同士を連結することができる。
【００５０】
したがって、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央の空間１０で調製された細胞含有組成物に対して、両横に隣接する空間１０との間の仕切り１３を除去することにより、隣接する空間１０内に封入された細胞支持体１２を、閉鎖的な系でさらに添加して混合することができる。
【００５１】
より詳しく説明すると、例えば、図１において、３つの空間１０にそれぞれ等量の細胞支持体１２を封入しておくと、仕切り１３を１つ開放することにより、細胞に混合する細胞支持体１２の量を２倍に増加させることができる。さらに、仕切り１３を２つとも開放すれば、細胞に混合する細胞支持体１２の量を３倍に増加させることができる。
【００５２】
それゆえ、混合容器１によれば、細胞含有組成物の調製時に、不要なコンタミネーションを防ぐことができる。また、細胞の量に応じて、細胞に添加する細胞支持体１２の量を閉鎖的な系で容易に増加させることができる。つまり、上記構成によれば、細胞と細胞支持体１２とが所望の割合で混合された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００５３】
このように、混合容器１は、２以上に区画された空間１０、２以上に区画された空間１０を隔てる仕切り１３、および流入口１５を有するバッグ１１からなり、２以上に区画された空間１０のうち少なくとも１以上の空間に細胞支持体１２が封入され、２以上に区画された空間１０を隔てる仕切り１３を取り除くことにより容易に空間１０同士がつながる細胞含有組成物調製容器ということもできる。
【００５４】
なお、本実施形態では、混合容器１の使用形態として、流入口１５から細胞を流入させた後、仕切り１３を除去する使用形態について説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、所望のタイミングで除去すればよい。すなわち、仕切り１３は、流入口１５から細胞を流入させる前に除去してもよい。また、複数の仕切り１３を備えている場合、これら全ての仕切り１３は、同時に除去してもよいし、タイミングをずらして除去してもよい。また、除去が必要な仕切り１３のみを除去し、除去が不要な仕切り１３については、使用終了まで除去しなくてもよい。このような仕切り１３の除去タイミング等は、本明細書に鑑みた当業者であれば、容易に理解することができる。
【００５５】
図１において、流入口１５は、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央の空間１０に設けられているが、本発明はこれに限定されず、いずれの空間１０に設けられていてもよい。
【００５６】
また、図１では、混合容器１は、２つの仕切り１３によって、３つの空間１０に区画されているが、仕切り１３および空間１０の数は特に限定されるものではない。具体的には、空間１０が少なくとも２つ以上形成されるように、仕切り１３を設ければよい。
【００５７】
さらに、図１では、３つの空間１０の全てに、同一の細胞支持体１２が等量ずつ封入されているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、３つの空間１０のうち、少なくとも１つの空間１０に細胞支持体１２が封入されていればよい。
【００５８】
また、複数の空間１０に細胞支持体１２が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体は、全て同一であってもよいし、異なるものであってもよい。つまり、混合容器１では、細胞支持体１２が封入されている空間が、仕切り１３によって分離されているため、複数種類の細胞支持体１２を別々に封入することができる。
【００５９】
さらに、複数の空間１０に細胞支持体１２が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体の量についても、特に限定されるものではなく、同量であってもよいし、異なる量であってもよい。
【００６０】
また、一部の空間１０にのみ細胞支持体１２が封入されている場合、流入口１５が設けられた空間１０には、細胞支持体１２が封入されていないことが好ましい。このような構成であれば、細胞支持体１２が封入された空間１０における細胞支持体の種類や量を変更しておけば、流入口１５が設けられた空間１０に流入した細胞の種類や状態等に応じて、混合する細胞支持体の種類または量を所望に変更することができる。
【００６１】
また、一部の空間１０にのみ細胞支持体１２が封入されている場合、細胞支持体１２が封入されていない空間１０には、細胞と細胞支持体１２と混合するための溶液が封入されていることが好ましい。つまり、図２に示す混合容器２のように、細胞支持体１２が封入された空間１０とは別の空間１０に、溶液２８が封入されていることが好ましい。
【００６２】
このような構成によれば、外部から細胞と細胞支持体１２とを混合するための溶液を流入させなくとも、混合容器１内に細胞を流入させた後、仕切り１３を除去することにより、該細胞と、細胞支持体１２および溶液２８とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。
【００６３】
空間１０に溶液２８が封入されている場合、溶液２８は、流入口１５が設けられた空間１０とは異なる空間１０に封入されていることが好ましい。このような構成によれば、溶液２８は、細胞と細胞支持体１２との混合用途のみならず、流入口１５が設けられた空間１０内で調製された細胞含有組成物の細胞濃度や粘度等の物性調製用途にも用いることができる。
【００６４】
より詳しく説明すると、仕切り１３を除去することにより、溶液２８は、隣接する空間１０内に存在する細胞および細胞支持体１２と混合することができる。これにより、液量や細胞濃度、粘性等が所望に調製された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００６５】
溶液２８は、特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、培地、生理食塩液、血漿、および血清等を挙げることができる。このような溶液は、生理的イオン強度を有する。それゆえ、細胞に悪影響を与えることが少ないため、細胞含有組成物に含有させる溶液として好適に用いることができる。
【００６６】
空間１０には、細胞支持体１２以外の物質が、細胞支持体１２とともに、封入されていてもよい。細胞支持体１２以外の物質は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、乾燥剤や、細胞支持体の保存剤等を挙げることができる。
【００６７】
空間１０に乾燥剤や細胞支持体の保存剤を、細胞支持体１２とともに封入することにより、細胞支持体１２を安定して保存することができる。
【００６８】
混合容器１において、バッグ１１の材質、形状等は特に限定されるものではないが、プラスチック等の合成樹脂からなることが好ましい。合成樹脂の材質としては、ガス滅菌できるためガス透過性を有するものがよい。例えばポリオレフィン製が好ましい。また、このような構成であれば、例えば、バッグ１１の壁面同士を熱圧着させることにより、仕切り１３を容易に形成させることができる。また、このようにして形成された仕切り１３は、例えば、バッグ１１を手で圧迫する等によって仕切り１３を容易に除去（開放）することができる。つまり、仕切り１３で区画された空間１０同士を容易に連結することができる。
【００６９】
なお、上記のように、仕切り１３を熱圧着により形成する場合、熱圧着条件は、特に限定されるものではなく、バッグ１１の材質に応じて適宜、適切な条件を設定すればよい。バッグ１１の材質として、プラスチック等の一般的な合成樹脂を用いる場合、上記熱圧着の温度は、例えば、１２０℃〜１４０℃とすることが好ましい。
【００７０】
本実施形態では、図１に示すように、混合容器１の流入口１５には、キャップ１７が取り付けられている。これにより、混合容器１の使用前に、流入口１５を介して、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。
【００７１】
キャップ１７は、特に限定されるものではないが、ゴム等からなることが好ましい。このような構成によれば、例えば、細胞を含有する試料を入れた容器に取り付けられた針等をキャップ１７に貫通させることにより、上記細胞をバッグ１１内に容易に流入させることができる。
【００７２】
また、混合容器１において、流入口１５とキャップ１７とは、一体的に形成されていてもよい。つまり、流入口１５とキャップ１７とは、分離できない構成であってもよい。このような構成であっても、例えば、細胞を含有する試料を入れた容器に取り付けられた針等をキャップ１７に貫通させることにより、上記細胞をバッグ１１内に流入させることができる。
【００７３】
また、混合容器１は、キャップ１７を備えない構成としてもよい。このような構成であっても、例えば、混合容器１を密閉容器（もしくは密封容器や、気密容器）内で保管しておくことにより、混合容器１の使用前に、流入口１５を介して、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。
【００７４】
細胞支持体１２は、特に限定されるものではなく、例えば、上説したような細胞支持体を用いればよい。また、その形状についても特に限定されず、細胞を保持し得るものであればよい。具体的には、例えば、顆粒状、膜状、チューブ状、平板状、ロール状等の形状を挙げることができる。
【００７５】
混合容器１に流入させる細胞は、特に限定されるものではないが、疾患や疾病の治療用途に用いることが可能な、特定の細胞であることが好ましい。具体的には、例えば、間葉系幹細胞のような幹細胞を挙げることができる。このような細胞は、細胞支持体１２と混合し、細胞含有組成物とすることにより、医療上の有用な組成物とすることができる。
【００７６】
また、混合容器１において、バッグ１１に細胞を流入させる方法は、特に限定されるものではないが、例えば、シリンジ等を用いて、上記細胞を含有する細胞懸濁液を流入口１５から注入することにより、バッグ１１内に細胞を流入させることができる。
【００７７】
細胞を細胞懸濁液として流入させる場合、該細胞懸濁液における細胞濃度は、得られる細胞含有組成物の種類や用途に応じて、所望に調製しておくことが好ましい。
【００７８】
また、上記細胞を含有する試料から、特定の細胞を分離したのち、該特定の細胞を混合容器１に流入させる場合、該特定の細胞を分離する細胞分離器具とバッグ１１の流入口１５とを直接、もしくは、チューブ等を介して接続して、該細胞分離器具から直接、バッグ１１に細胞を流入させてもよい。
【００７９】
混合容器１内で、細胞と細胞支持体１２とを混合させる方法は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、（１）加圧や引圧を与えることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（２）液を加えて、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（３）細胞と細胞支持体１２とのチャージを利用して電気的に細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（４）振動を与えることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（５）回転させることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法等が挙げることができる。
【００８０】
より具体的に説明すると、上記（１）の方法において加圧する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、シリンジにより空気を介して押圧したり、混合容器１自体を手で押圧したりすることにより、加圧することができる。また、引圧する方法についても特に限定されるものではないが、例えば、シリンジやポンプを用いて引圧することができる。
【００８１】
また、上記（２）の方法では、例えば、顆粒状の細胞支持体１２が入った混合容器１に、細胞を含有する細胞懸濁液を、混合容器１の上部から滴下することによって、該細胞懸濁溶液中で細胞支持体１２と細胞とを混合させることができる。
【００８２】
上記（３）の方法では、例えば、細胞支持体１２を正に帯電させることにより、細胞は負に帯電しているため、互いに静電的に引き付けあって、細胞支持体１２と細胞とを混合することができる。
【００８３】
上記（４）の方法では、例えば、手動で、または機械的に容器に振動を与えることによって、細胞支持体１２と細胞とを混合することができる。
【００８４】
混合容器１内で調製された細胞含有組成物を混合容器１外に取り出す方法は特に限定されるものではない。例えば、流入口１５から取り出してもよいし、バッグ１１の一部を切断して取り出してもよい。また、ゴム栓等の流入口１５の材質等によっては、流入口１５に突きさした注射針を通して、シリンジ内に、細胞含有組成物を回収してもよい。
【００８５】
〔実施の形態２〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器の別の実施形態について、図２に基づいて説明する。なお、説明の便宜上、実施の形態１で用いた部材と同一の機能を有する部材には、同一の部材番号を付記し、その説明を省略する。
【００８６】
本実施形態にかかる混合容器２は、図２に示すように、流入口１５を有するバッグ１１（容器）と、バッグ１１内の空間を区画している、１０個の仕切り１３と、流出口１６とを備えている。
【００８７】
混合容器２では、１０個の仕切り１３により、バッグ１１内の空間は、６つの空間１０と、１つの空間１４との合計７つの空間に区画されている。そして、６つの空間１０のうち、２つの空間１０には、細胞支持体１２が封入されている。また、残り４つの空間１０のうち、２つの空間１０には、溶液２８が封入されており、残りの２つの空間１０には何も封入されていない。
【００８８】
また、図２において、流入口１５および流出口１６は、ともに、縦一列に並んだ３つの空間１０の列と列との間に位置する空間１４に設けられている。
【００８９】
上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、まず、空間１４に収納される。そこで、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とが連結される。それゆえ、細胞と細胞支持体１２とが混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【００９０】
さらに、必要に応じて、溶液２８が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞含有組成物に対して、溶液２８を閉鎖系で、簡便かつ容易に添加することができる。
【００９１】
それゆえ、液量や細胞濃度、粘性等が所望に調製された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００９２】
混合容器２では、こうして調製された細胞含有組成物は、流出口１６を通して、バッグ１１から容易に取り出すことができる。なお、混合容器２から細胞含有組成物を取り出す方法は、これに限定されず、実施の形態１で説明した混合容器１から細胞含有組成物を取り出す方法と同様の方法を用いて、混合容器２から細胞含有組成物を取り出してもよい。
【００９３】
なお、本実施形態では、混合容器２の使用形態として、流入口１５から細胞を流入させた後、仕切り１３を除去する使用形態について説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、実施の形態１出説明したように、所望のタイミングで除去すればよい。
【００９４】
また、本実施形態においても、仕切り１３および空間１０の数は特に限定されるものではない。細胞支持体１２および溶液２８が封入された空間１０の数についても特に限定されない。さらに、複数の空間１０に細胞支持体１２または溶液２８が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体１２もしくは溶液２８の種類および量は、同一であっても、異なってもよい。
【００９５】
さらに、空間１０には、実施の形態１と同様に、細胞支持体以外の物質が、細胞支持体１２とともに、封入されていてもよい。細胞細胞支持体以外の物質としては、実施の形態１に記載したものを同様に例示することができる。
【００９６】
これら空間１０の構成については、実施の形態１で説明したとおりである。
【００９７】
また、流入口１５および流出口１６には、それぞれ、キャップ１７およびキャップ２９が取り付けられている。これにより、混合容器２の使用前に、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。なお、本発明はこれに限定されず、キャップ１７およびキャップ２９を備えない構成とすることができる。
【００９８】
ここで、混合容器２の製造方法について、説明するが、本発明はこれに限定されない。すなわち、混合容器２の形状や、空間１０の数、仕切り１３の数等に応じて、適宜、適切な方法を選択して製造すればよい。そのような製造方法は、本明細書に鑑みた当業者であれば、容易に理解できる。
【００９９】
図２に示す混合容器２の製造においては、まず、プラスチック製のバッグ１１の４辺のうち、流入口１５が形成された１辺、および流出口１６が形成された１辺を熱圧着する。
【０１００】
次に、６つの空間１０、および１つの空間１４が形成されるように、バッグ１１の壁面同士を熱圧着する。なお、このときの熱圧着の温度は、バッグ１１の４辺を熱圧着する時の温度よりも低くすることが好ましい。
【０１０１】
仕切り１３を形成させた後、バッグ１１の４辺のうち、熱圧着されていない２辺から、細胞支持体１２または溶液２８を空間１０内に配置する。そして、バッグ１１の４辺のうち、熱圧着されていない２辺を、熱圧着することにより、細胞支持体１２を６つの空間１０内に封入することができる。
【０１０２】
なお、このときの熱圧着温度は、流入口１５が形成された１辺、および流出口１６が形成された１辺を熱圧着する時と同様に、仕切り１３形成時の熱圧着温度よりも高くすることが好ましい。
【０１０３】
このように、バッグ１１の４辺の熱圧着温度よりも、仕切り１３の熱圧着温度を低くすることにより、手等でバッグ１１を圧迫したとき、バッグ１１の４辺は開放されず、仕切り１３のみを容易に開放することができる。
【０１０４】
〔実施の形態３〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器のさらに別の実施形態について、図３に基づいて説明する。なお、説明の便宜上、実施の形態１および実施の形態２で用いた部材と同一の機能を有する部材には、同一の部材番号を付記し、その説明を省略する。
【０１０５】
本実施形態にかかる混合容器３は、図３に示すように、混合容器２の流出口１６に、細胞回収容器１８が接続された構成を有する。
【０１０６】
なお、混合容器３では、図３に示すように、全ての空間１０に細胞支持体１２が封入されているが、本発明はこれに限定されない。つまり、実施の形態２で説明したような構成としてもよい。
【０１０７】
細胞回収容器１８は、上部に流出口１６と接続するための開口部と、底部には、細胞回収容器１８内の溶液を排出可能な排出口とを備えている。また、細胞回収容器１８内の空間は、フィルター１９によって区画されている。つまり、細胞回収容器１８は、フィルター１９を隔てて、上記開口部が設けられた空間と、上記排出口が設けられた空間とを有している。
【０１０８】
したがって、上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、空間１４を通過し、細胞回収容器１８に流入する。そして、該細胞は、フィルター１９上に捕捉される。このとき、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞以外の成分でフィルター１９を通過できるものは、フィルター１９を通過して上記排出口から排出される。
【０１０９】
それゆえ、例えば、流入口１５から細胞を細胞懸濁液の状態でバッグ１１に流入させる場合、該細胞懸濁液に含まれる必要な細胞と、不要な成分（不要な細胞を含む）とを分離することができる。
【０１１０】
つまり、上記構成によれば、バッグ１１に流入させる細胞を含む試料が、必要な細胞以外の不純物を含む場合であっても、流出口１６を通じて該試料を細胞回収容器１８に流入させると、フィルター１９によって必要な細胞のみを捕捉し、必要な細胞以外の不要成分（不要な細胞を含む）はフィルター１９を通過させ、廃棄することができる。
【０１１１】
フィルター１９上に細胞を捕捉した後、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とが連結される。これにより、細胞支持体１２が細胞回収容器１８に投入される。
【０１１２】
そして、細胞回収容器１８内で、細胞と細胞支持体１２とが混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【０１１３】
さらに、必要に応じて、溶液２８が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞回収容器１８に溶液２８を閉鎖系内で、簡便かつ容易に添加することができる。これにより、閉鎖系内で、簡便かつ容易に、得られる細胞含有組成物の液量や粘性、細胞濃度等を所望に制御することができる。
【０１１４】
こうして調製された細胞含有組成物は、細胞回収容器１８の開口部または排出口から、取り出すことができる。混合容器３から、細胞含有組成物を取り出す方法は、これに限定されるものではない。
【０１１５】
例えば、細胞含有組成物を細胞回収容器１８内に細胞含有組成物を回収し、バッグ１１と細胞回収容器１８とを分離し、細胞回収容器１８の流出口１６との接続口から該細胞含有組成物を取り出してもよい。
【０１１６】
また、細胞含有組成物を調製後、該細胞含有組成物をバッグ１１に回収し、続いて、バッグ１１と細胞回収容器１８とを分離し、流出口１６から細胞含有組成物を取り出してもよい。
【０１１７】
さらに、実施の形態１で説明した混合容器１から細胞含有組成物を取り出す方法と同様の方法によっても、混合容器３から細胞含有組成物を取り出すことができる。
【０１１８】
本実施形態では、図３に示すように、流入口１５および流出口１６が設けられた空間１４には、細胞支持体１２は封入されていない。
【０１１９】
そのため、流入口１５を通ってバッグ１１内の空間１４に流入した細胞は、直ちに細胞支持体１２と接触することはない。つまり、バッグ１１に流入させる細胞を含む試料が必要な細胞以外の不要成分を含む場合であっても、そのような不要成分が細胞支持体１２と接触することを防止することができる。
【０１２０】
それゆえ、混合容器３から回収した細胞含有組成物を、生体に投与する場合であっても、生体内に不要成分を投与することを防止することができる。
【０１２１】
細胞回収容器１８の内部に備えられるフィルター１９は、特に限定されるものでなく、細胞を含有する試料に含まれる必要な細胞と、その他の不要成分（不要な細胞を含む）とを分離できるものであればよい。より詳しくは、必要な細胞を捕捉することが可能で、かつ、必要な細胞以外の成分を通過させることが可能なものであればよい。
【０１２２】
つまり、細胞含有組成物に含有させる細胞の大きさにより、適切な孔径のフィルターを用いればよい。例えば、幹細胞を含有する細胞含有組成物を調製する場合、フィルター１９として、孔径が１μｍ〜８μｍであるフィルターを用いることが好ましい。このような孔径のフィルターであれば、流入口１５から流入させる試料に、幹細胞以外の不要な細胞が混入していたとしても、幹細胞と該不要な細胞とを分離することができる。
【０１２３】
また、フィルター１９の材質についても特に限定されないが、具体的には、例えば、濾紙、不織布、ガラスフィルター等を好適に用いることができる。
【０１２４】
フィルター１９について、より具体的な例を挙げると、例えば、孔径が２．２μｍのガラスフィルターを複数重ねたものを用いることができる。
【０１２５】
本実施形態では、バッグ１１と細胞回収容器１８とが接続されているが、本発明はこれに限定されない。例えば、混合容器３は、バッグ１１と細胞回収容器１８とが分離可能な構成としてもよい。
【０１２６】
このような構成によれば、必要に応じて、細胞回収容器１８を流出口１６から脱着することができる。また、様々なフィルター１９を備える細胞回収容器１８との取替えが容易となり、混合容器３を用いて調製する細胞含有組成物の選択域を広げることができる。
【０１２７】
また、本実施形態では、図３に示すように、流入口１５および細胞回収容器１８の排出口には、それぞれ、キャップ１７およびキャップ２０が取り付けられている。これにより、混合容器３の使用前に、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。なお、本発明はこれに限定されず、キャップ１７およびキャップ２０を備えない構成とすることができる。
【０１２８】
ここで、混合容器３の使用形態について、具体的に説明するが、本発明はこれに限定されない。まず、流入口１５から細胞を含む溶液（例えば、細胞懸濁液）を流入させる。そして、フィルター１９で必要な細胞を捕捉し、その他の不要成分（不要な細胞を含む）は、フィルター１９を通過させ、廃棄する。その後、流入口１５から、フィルター１９に捕捉された細胞を洗浄するための洗浄液を流入させ、細胞を洗浄する。なお、細胞を洗浄した後の洗浄液は、フィルター１９を通過させて廃棄する。
【０１２９】
次に、キャップ２０を取り付け、細胞含有組成物に含有させる溶液を所望量だけ流入口１５から流入させる。そして、所望の数の仕切り１３を除去（開放）し、所望の数の空間１０と、空間１４と、細胞回収容器１８内の空間とを連結させる。
【０１３０】
これにより、これら連結された空間内で、細胞と細胞支持体１２とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。なお、細胞と細胞支持体１２との混合は、上記連結された空間内で行えばよい。すなわち、バッグ１１内で行ってもよいし、細胞回収容器１８内で行ってもよい。
【０１３１】
本実施形態において、上記洗浄液や、細胞含有組成物に含有させる溶液は、流入口１５から流入させる以外にも、例えば、いずれかの空間１０に封入しておき、仕切り１３を除去することにより、空間１４内に流入させることができる。
【０１３２】
こうして調製された細胞含有組成物は、上説した方法により、混合容器３から取り出すことができる。
【０１３３】
＜ＩＩ．細胞含有組成物製造器具＞
本発明にかかる細胞含有組成物製造器具は、上説した本発明にかかる細胞含有組成物調製容器と、細胞分離器とが接続されたものである。
【０１３４】
このような細胞含有組成物製造器具によれば、（１）細胞を含む試料溶液（以下、「細胞含有試料」）から特定の細胞を分離し、（２）分離された特定の細胞と細胞支持体との混合を、閉鎖系内で、一連の操作として行うことができる。
【０１３５】
したがって、本発明にかかる細胞含有組成物製造器具によれば、無菌的に、細胞含有組成物を、簡便かつ容易に製造することができる。
【０１３６】
なお、上記細胞含有試料は、特に限定されるものではなく、具体的には、例えば、体液、および生体組織の処理液等を挙げることができる。
【０１３７】
また、上記細胞含有試料は、細胞培養液であってもよい。すなわち、体液、および生体組織の処理液等から分離した細胞を増幅して得られた細胞含有試料であってもよい。
【０１３８】
このような細胞含有試料としては、具体的には、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ ＭＥＭ培地（日水）、α−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）、ＭＥＭ培地（日水）、ＩＭＥＭ培地（日水）、ＲＰＭＩ−１６４０培地（日水）等の培養培地中で、体液、および生体組織の処理液等から分離した細胞を接着または増殖させた細胞培養液を挙げることができる。
【０１３９】
上記培養培地には、必要に応じて血清を５％〜２０％の濃度で添加してもよい。また、培養条件は、特に限定されるものではなく、細胞の種類に応じて適宜設定すればよい。例えば、温度３７℃、ＣＯ２ガス５％の雰囲気下で培養すればよい。
【０１４０】
本明細書において、「体液」とは、細胞を含む、血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血、脂肪細胞含有体液等が意図される。また、体液には、血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血等の希釈物；血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血、脂肪細胞含有体液等を、フィコール、パーコール、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、バクティナーチューブ、リンフォプレップ等を用いた比重密度遠心分離法により前処理して調製された細胞懸濁液等も含まれる。
【０１４１】
また、「生体組織の処理液」とは、生体組織を酵素により分解させた処理液（酵素分解処理液）、生体組織を破砕により分解させた処理液（破砕処理液）、生体組織を擦過により分解させた処理液（擦過処理液）、生体組織を浸透抽出により分解させた処理液（浸透抽出処理液）、生体組織を美容整形等で行われる脂肪吸引法により分解させた処理液（脂肪吸引処理液）等が意図される。なお、これら生体組織の処理液については、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１４２】
また、「生体組織」とは、細胞を含む体液以外の生体組織が意図される。
【０１４３】
ここで、本発明にかかる細胞含有組成物製造器具の一実施形態について、図４を参照しながら、以下、詳細に説明するが本発明はこれに限定されるものではない。
【０１４４】
本実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具５は、図４に示すように、バッグ１１と細胞回収容器１８とが接続された混合容器３と、細胞分離フィルター３３（細胞分離器、細胞捕捉部）と、試料注入用シリンジ３１（細胞分離器、試料注入部）と、廃液バッグ３５（細胞分離器、廃液回収部）と、洗浄用シリンジ３２（細胞分離器、洗浄液注入部）と、回収用シリンジ３４（細胞分離器、細胞回収液注入部）とを備えている。
【０１４５】
さらに、細胞回収容器１８の下流には、細胞回収容器１８から排出された廃液を回収するための廃液バッグ３８を備えている。ただし、廃液バッグ３８を設けない構成としてもよい。
【０１４６】
図４に示すように、細胞分離フィルター３３、廃液バッグ３５および回収用シリンジ３４は、三方活栓４２を介して互いに接続されている。
【０１４７】
より詳しくは、図４に示すように、細胞分離フィルター３３と三方活栓４２とは、配管回路４６によって接続されている。廃液バッグ３５と三方活栓４２とは、配管回路４７によって接続されている。
【０１４８】
さらに、回収用シリンジ３４と三方活栓４２とは、配管回路４９によって接続されている。これにより、結果として、細胞分離フィルター３３、廃液バッグ３５および回収用シリンジ３４は、互いに接続されている。
【０１４９】
また、細胞分離フィルター３３、試料注入用シリンジ３１、洗浄用シリンジ３２、およびバッグ１１（換言すれば、混合容器３）は、三方活栓４０および三方活栓４１を介して互いに接続されている。
【０１５０】
より詳しくは、図４に示すように、細胞分離フィルター３３と三方活栓４１とは、配管回路４５によって接続されている。バッグ１１と三方活栓４１とは、配管回路４８によって接続されている。三方活栓４１と三方活栓４０とは、配管回路４４によって接続されている。
【０１５１】
また、洗浄用シリンジ３２と三方活栓４０とは、配管回路４３によって接続されている。さらに、試料注入用シリンジ３１と三方活栓４０とは、配管回路４３によって接続されている。
【０１５２】
これにより、結果として、細胞分離フィルター３３、試料注入用シリンジ３１、洗浄用シリンジ３２、およびバッグ１１は、互いに接続されている。
【０１５３】
上記構成によれば、試料注入用シリンジ３１から、細胞含有試料を注入すると、三方活栓４０および三方活栓４１を経由して、細胞分離フィルター３３に該試料溶液を流入させることができる。
【０１５４】
そして、細胞分離フィルター３３では、上記細胞含有試料に含有される特定の細胞は捕捉され、上記細胞含有試料に含有される夾雑物は、三方活栓４２を経由して、廃液バッグ３５に流入（排出）させることができる。
【０１５５】
また、上記構成によれば、細胞分離フィルター３３に特定の細胞が捕捉された状態で、洗浄用シリンジ３２から、洗浄液を注入すると、三方活栓４０および三方活栓４１を経由して、細胞分離フィルター３３に該洗浄液を流入させることができる。
【０１５６】
これにより、細胞分離フィルター３３には、上記細胞含有試料を流入させたときと同じ向きに、上記洗浄液が流入することになる。そのため、細胞分離フィルター３３内の夾雑物を洗い流し、上記洗浄液は、三方活栓４２を経由して、廃液バッグ３５に流入（排出）させることができる。
【０１５７】
さらに、上記構成によれば、細胞分離フィルター３３に特定の細胞が捕捉され、細胞分離フィルター３３内の夾雑物が洗い流された状態で、回収用シリンジ３４から細胞回収液を注入すると、三方活栓４２を経由して、細胞分離フィルター３３に該細胞回収液を流入させることができる。
【０１５８】
その結果、細胞分離フィルター３３には、上記細胞含有試料を流入させたときとは逆向きに、上記細胞回収液が流入することになる。そのため、細胞分離フィルター３３に捕捉された特定の細胞を細胞分離フィルター３３から流出させ、三方活栓４１を経由して、バッグ１１に、該特定の細胞を流入させることができる。
【０１５９】
細胞含有組成物製造器具５のバッグ１１には、細胞分離フィルター３３から流出した細胞が流入する。混合容器３（より具体的には、バッグ１１）内に流入した細胞は、上説したように、細胞支持体と混合され、細胞含有組成物を調製することができる。
【０１６０】
混合容器３については、上説したので、ここでは、その詳細な説明は省略する。また、本実施形態では、細胞含有組成物製造器具５は、混合容器３を備えているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、上説した本発明にかかる細胞含有組成物調製容器であれば、いかなる形態のもの（例えば、混合容器２）を備えていてもよい。
【０１６１】
また、本実施形態では、図４に示すように、細胞回収容器１８から排出された廃液を回収するための廃液バッグ３８を設けているが、廃液バッグ３８を設けない構成としてもよい。
【０１６２】
このように、細胞含有組成物製造器具５によれば、細胞含有試料から、特定の細胞を分離し、さらに、分離した特定の細胞と細胞支持体１２と混合することを、閉鎖系内で、一連の操作として行うことができる。
【０１６３】
換言すれば、回収用シリンジ３４から細胞回収液を注入することによって、細胞分離フィルター３３に捕捉した特定の細胞を混合容器３に回収し、特定の細胞以外の不要成分（不要な細胞を含む）を廃液バッグ３８に廃棄するという一連の細胞回収過程と、回収した細胞と細胞支持体１２との混合を閉鎖的な系で行うことができる。
【０１６４】
したがって、無菌性を保ったまま、すなわち、外部からのコンタミネーションを防止しながら、細胞含有組成物を簡便かつ容易に製造することができる。
【０１６５】
また、上記構成によれば、遠心分離機等の大型機器を用いることなく、特定の細胞を混合容器３内に回収し、混合容器３内で、細胞含有組成物を調製することができる。
【０１６６】
さらに、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を多量の細胞回収液を用いて流出させたとしても、不要な（過剰な）細胞回収液を廃液バッグ３８に回収することができる。それゆえ、多量の細胞回収液が混合容器３内に回収され、得られる細胞含有組成物の液量が増加することを防止することができる。
【０１６７】
細胞含有組成物製造器具５において、細胞分離フィルター３３は、特定の細胞を捕捉し、不必要な夾雑物を通過させることが可能なものである。ここでいう「夾雑物」とは、目的細胞以外の細胞、例えば、赤血球、血小板、リンパ球等が意図される。
【０１６８】
細胞分離フィルター３３の形態は特に限定されるものではなく、任意の大きさ、形状の細胞分離材を、少なくとも２つの口をもつ容器に充填したものであってもよいし、容器等に充填していない細胞分離材そのものであってもよい。
【０１６９】
本実施形態では、細胞分離フィルター３３は、フィルター構造を有する細胞分離材を容器内に充填したものであることが好ましい。この場合、細胞分離材は、上記容器に圧縮して充填されていてもよいし、圧縮せずに充填されていてもよい。
【０１７０】
より具体的には、例えば、不織布状の細胞分離材を、充填した状態で厚みが０．１ｃｍ〜５ｃｍ、好ましくは、０．１５ｃｍ〜４ｃｍ、より好ましくは０．２ｃｍ〜３ｃｍとなるように、上記容器に充填したものを細胞分離フィルター３３として好適に用いることができる。
【０１７１】
このような構成の細胞分離フィルター３３によれば、赤血球、白血球、血小板等を効率よく除去した上で、細胞を高い回収率で回収することができる。
【０１７２】
また、上記細胞分離材として、ロール状の細胞分離材を用いる場合、上記容器に該ロール状の細胞分離材を充填し、ロールの内側から外側に向けて体液を流して、細胞を捕捉する形態としてもよいし、ロールの外側から内側に向けて体液を流して、細胞を捕捉する形態としてもよい。
【０１７３】
細胞分離材を充填する容器は、特に限定されるものではなく、球、コンテナ、カセット、バッグ、チューブ、カラム等、任意の形態をとりうる。好ましい具体例としては、例えば、容量約０．１ｍｌ〜１０００ｍｌ程度、直径約０．１ｃｍ〜１５ｃｍ程度の透明または半透明の円柱状容器、あるいは一片の長さ０．１ｃｍ〜２０ｃｍ程度の正方形あるいは長方形で、厚みが０．１ｃｍ〜５ｃｍ程度の四角柱状の容器等を挙げることができる。
【０１７４】
上記細胞分離材は、細胞支持体や特定の細胞は通過せず、液体成分を通過させる濾過材であればよい。具体的には、白血球および赤血球を含む試料を通液したとき、白血球の６０％〜９０％を通過させ、かつ、赤血球の９０％以上を通過させることが好ましい。
【０１７５】
上記細胞分離材の材質としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン等のポリオレフィン、ポリエステル、塩化ビニル、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリスチレン、アクリル（ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクロニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート等）、ナイロン、ポリウレタン、ポリイミド、アラミド、ポリアミド、キュプラ、ケブラー、カーボン、フェノール、テトロン、パルプ、麻、セルロース、ケナフ、キチン、キトサン、ガラス、綿等を挙げることができる。
【０１７６】
中でも、ポリエステル、ポリスチレン、アクリル、レーヨン、ポリオレフィン、ビニロン、ナイロン、およびポリウレタン等の合成高分子を好適に用いることができる。
【０１７７】
上記細胞分離材は、これらの材質のうち、単一の材質からなってもよいし、複数の材質を組み合わせた複合材からなってもよい。
【０１７８】
２種以上の合成高分子を組み合わせて用いる場合、その組み合わせは特に限定されるものではないが、ポリエステルとポリプロピレンとの組み合わせ、レーヨンとポリオレフィンとの組み合わせ、または、ポリエステルとレーヨンとビニロンとの組み合わせを好適に用いることができる。
【０１７９】
２種以上の合成高分子を組み合わせて繊維とする場合、具体的には、例えば、１本の繊維が異成分同士の合成高分子よりなる繊維、あるいは異成分同士が剥離分割した分割繊維でもよい。また、成分の異なる合成高分子単独よりなる繊維をそれぞれ複合化した繊維であってもよい。ここでいう「複合化した繊維」とは、２種以上の繊維を混在させることにより構成した繊維、または、合成高分子単独よりなる繊維をそれぞれ張り合わせた繊維等が意図される。
【０１８０】
上記細胞分離材の形態は特に限定されるものではないが、本発明では、フィルター構造を有する細胞分離材を容器内に充填したものを細胞分離フィルター３３として用いることが好ましいことから、上記細胞分離材の形態は、上記容器に収納できるものであることが好ましい。
【０１８１】
具体的には、例えば、連通孔構造の多孔質体、繊維の集合体、織物等を挙げることができる。中でも、繊維で構成されることが好ましく、不織布であることがより好ましい。
【０１８２】
また、上記細胞分離材は、上記例示した材質に対して、細胞分離材としての性能を向上させるための処理が施されたものであってもよい。
【０１８３】
このような処理としては、具体的には、例えば、（１）親水化処理、（２）細胞付着性タンパク質や、細胞上に特異的に発現している特異的抗原に対する抗体の固定化処理を挙げることができる。
【０１８４】
上記親水化処理により、細胞以外の細胞の非特異的な捕捉を抑制することができる。また、体液が細胞分離フィルター３３内を通過する際、特定の領域の細胞分離材に偏って通過して、細胞の回収率が低下することを防止することができる。
【０１８５】
また、上記特定のタンパク質の固定化処理によれば、細胞の細胞分離材への付着性をより向上させることができる。
【０１８６】
なお、上記親水化処理や、特定のタンパク質の固定化処理の具体的な方法については特に限定されるものではなく、従来公知の方法を用いればよい。また、細胞分離材を性能を向上させる処理については、例えば、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１８７】
細胞分離フィルター３３は細胞の分離に用いられるため、上記細胞分離材は、孔が通液方向と平行に連通している形態とすることが好ましい。
【０１８８】
また、細胞分離材が繊維である場合、その繊維径が３μｍより小さいと、細胞分離材と白血球との相互作用が高まり、夾雑物（換言すれば、不要細胞）の除去効率が低くなる傾向がある。一方、繊維径が４０μｍより大きいと、有効接触面積の低下やショートパスが起こりやすくなり、細胞の回収率が低下する傾向がある。
【０１８９】
したがって、細胞分離材が繊維である場合の繊維径は、３μｍ〜４０μｍであることが好ましく、５μｍ〜３５μｍであることがより好ましく、５μｍ〜３０μｍであることがさらに好ましい。このような繊維径とすれば、細胞と細胞分離材との相互作用を上げ、細胞の収率を向上させることができる。
【０１９０】
さらに、細胞分離材が繊維である場合、目開きが３μｍより小さいと、夾雑物の除去効率が低下する傾向がある。一方、上記目開きが１２０μｍより大きいと、細胞の捕捉が困難となる傾向がある。
【０１９１】
したがって、上記目開きは、短径が３μｍ以上で、長径が１２０μｍ以下であることが好ましく、短径が５μｍ以上で、長径が８０μｍ以下であることがより好ましく、短径が５μｍ以上で、長径が５０μｍ以下であることがさらに好ましい。このような目開きとすれば、赤血球等の比較的大きな夾雑物を高い除去効率で除去するとともに、高い回収率で細胞を捕捉することができる。
【０１９２】
なお、ここでいう「細胞分離材が繊維である場合の繊維の目開き」は、下記の方法により求めることができる。まず、細胞分離材が繊維である場合の繊維を走査型電子顕微鏡（以下、「ＳＥＭ」ともいう）にて写真撮影する。次に、そのＳＥＭ画像を用いて、異なる２本以上の繊維が交差することにより形成される実質的な孔の長径、および短径を画像解析装置にて５０ポイント以上測定し、それぞれの平均値を求める。これにより、上記目開きの短径および長径をそれぞれ測定することができる。
【０１９３】
なお、長径は実質的な孔の２点間の最長の距離を、短径は長径を求めた際の２点間の距離の中央値を通り、実質的に孔に接する最短の距離をいう。
【０１９４】
細胞分離フィルター３３において、細胞分離材の密度Ｋ（つまり、目付（ｇ／ｍ２）／厚み（ｍ））は、１．０×１０４≦Ｋ≦１．０×１０６であることが好ましく、２．５×１０４≦Ｋ≦７．５×１０５であることがより好ましく、５．０×１０４≦Ｋ≦５．０×１０５であることがさらに好ましく、５．０×１０４≦Ｋ≦２．０×１０５であることが特に好ましい。このような密度であれば、赤血球、白血球、血小板等を高い除去効率で除去できるうえ、細胞を高い回収率で回収することができる。
【０１９５】
なお、密度Ｋは、つまり、目付（ｇ／ｍ２）／厚み（ｍ）を示すが、換言すれば、重量（ｇ）／単位体積（ｍ３）と表すこともできる。したがって、密度Ｋは、細胞分離材の単位体積（ｍ３）当りの重量（ｇ）を測定することにより求めることができる。
【０１９６】
なお、細胞分離フィルター３３は、上記容器を含まず、細胞分離材のみからなる構成とすることもできる。その場合、具体的には、上記細胞分離材を成型したフィルター、多孔質体、中空糸、メッシュ等を挙げることができる。
【０１９７】
細胞分離フィルター３３は、以上説示した通りであるが、細胞分離フィルター３３の構成については、例えば、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１９８】
細胞含有組成物製造器具５において、細胞分離フィルター３３には、細胞含有試料を注入する。より具体的には、細胞含有試料を入れた試料注入用シリンジ３１のプランジャーを、手や機械を用いて押して、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する。
【０１９９】
この際、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する注入速度（換言すれば、通液速度）は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよい。
【０２００】
具体的には、例えば、細胞分離フィルター３３として、フィルター構造を有する細胞分離材が充填された細胞分離器を用いる場合、細胞分離材の厚さに対する細胞含有試料の通過速度（線速）として、０．１ｍｍ／ｍｉｎ〜１０００ｍｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、０．５ｍｍ／ｍｉｎ〜５００ｍｍ／ｍｉｎとすることがより好ましく、１ｍｍ／ｍｉｎ〜２５０ｍｍ／ｍｉｎとすることがさらに好ましい。
【０２０１】
線速が０．１ｍｍ／ｍｉｎより低いと処理時間が長期化する傾向がある。一方、１０００ｍｍ／ｍｉｎより高いと、細胞含有試料の流水圧により、コロニー形成が可能な細胞が細胞分離フィルター３３に捕捉されにくくなる傾向がある。
【０２０２】
しかし、上記線速範囲であれば、処理時間が長期化することなく、また、効率よく細胞を捕捉することができる。
【０２０３】
試料注入用シリンジ３１の材質や形状は、特に限定されるものではなく、従来公知のあらゆるシリンジ、好ましくは医療用シリンジを用いることができる。
【０２０４】
本実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具５では、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入するために、試料注入用シリンジ３１を備えているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、試料注入用シリンジ３１に代えて、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する方法に応じて、あらゆる試料注入用具を用いることができる。
【０２０５】
具体的には、例えば、試料注入用シリンジ３１に代えて、任意の容器（例えば、バッグ）を用い、細胞含有試料を該任意の容器にプールして、自然落下により、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入することができる。また、細胞含有試料を入れた任意の容器から、ポンプ等を用いて、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入してもよい。
【０２０６】
洗浄用シリンジ３２は、細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入するためのものである。洗浄用シリンジ３２によれば、細胞含有試料を流した方向と同方向から、細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入することができる。それゆえ、細胞分離フィルター３３中に溜まっている夾雑物を、細胞分離フィルター３３から洗い流すことができる。
【０２０７】
洗浄用シリンジ３２の材質や形状は、特に限定されるものではなく、従来公知のあらゆるシリンジ、好ましくは医療用シリンジを用いることができる。
【０２０８】
細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入（換言すれば、通液）する注入速度は、特に限定されなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよい。
【０２０９】
具体的には、例えば、細胞分離フィルター３３として、フィルター構造を有する細胞分離材が充填された細胞分離器を用いる場合、細胞分離材の厚さに対する洗浄液の通過速度（線速）として、０．１ｍｍ／ｍｉｎ〜１０００ｍｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、０．５ｍｍ／ｍｉｎ〜５００ｍｍ／ｍｉｎとすることがより好ましく、１ｍｍ／ｍｉｎ〜２５０ｍｍ／ｍｉｎとすることがさらに好ましい。
【０２１０】
線速が０．１ｍｍ／ｍｉｎより低いと処理時間が長期化する傾向がある。一方、１０００ｍｍ／ｍｉｎより高いと、洗浄液の流水圧により、必要な有用な細胞が細胞分離フィルター３３から流出する可能性がある。
【０２１１】
しかし、上記線速範囲であれば、処理時間が長期化することなく、また、必要な有用な細胞を細胞分離フィルター３３から流出させることなく、細胞分離フィルター３３中に溜まっている夾雑物を、細胞分離フィルター３３から流出させることができる。
【０２１２】
また、細胞分離フィルター３３に注入する洗浄液の量は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の容積に応じて適宜変更すればよい。具体的には、細胞分離フィルター３３の容積の１倍量〜１００倍量の洗浄液を注入することが好ましく、１０倍量〜１００倍量の洗浄液を注入することがより好ましい。
【０２１３】
上記の量の洗浄液を注入すれば、最終的に得られる細胞含有組成物を治療用として人体に投与する場合であっても、人体に悪影響を与えない程度にまで、夾雑物を除去することができる。
【０２１４】
なお、上記洗浄液は、特に限定されるものではなく、細胞に対して負の影響を与えない溶液であればよい。具体的に、例えば、生理的食塩液やリンゲル液など注射用剤として一般的に用いられる溶液、リン酸緩衝液等の緩衝液、αＭＥＭ培地やＤＭＥＭ培地等の細胞培養用の培地等を挙げることができる。
【０２１５】
これら例示した溶液の中でも、細胞への負の影響が小さいことから、細胞培養用培地や生理食塩水を好ましく用いることができる。
【０２１６】
回収用シリンジ３４は、細胞回収液を細胞分離フィルター３３に注入するためのものである。回収用シリンジ３４によれば、細胞含有試料を注入した方向とは逆方向から、細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入することができる。それゆえ、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を、細胞分離フィルター３３から流出させることができる。
【０２１７】
細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入（換言すれば、通液）する注入速度は、特に限定されなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよいが、可能な範囲で、高速で注入することが好ましい。
【０２１８】
具体的には、例えば、細胞分離材の厚さに対する細胞回収液の通過速度（線速）として、５０ｃｍ／ｍｉｎ〜５００ｃｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、１００ｃｍ／ｍｉｎ〜５００ｃｍ／ｍｉｎとすることがより好ましい。上記流速範囲によれば、細胞の回収率を向上させることができる。
【０２１９】
このような線速範囲で、細胞分離フィルター３３に対して細胞回収液を注入する場合、例えば、細胞回収液入れた回収用シリンジ３４のプランジャーを、手や機械を用いて勢いよく押すことにより上記線速を実現することができる。
【０２２０】
細胞分離フィルター３３に注入する細胞回収液の量は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の容積に応じて適宜変更すればよい。具体的には、細胞分離フィルター３３の容積の１倍量〜１００倍量の細胞回収液を注入することが好ましく、１０倍量〜１００倍量の細胞回収液を注入することがより好ましい。
【０２２１】
上記の量の細胞回収液を注入すれば、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を確実に、回収することができる。
【０２２２】
こうして細胞分離フィルター３３から流出した細胞を含む細胞回収液は、混合容器３に回収される。
【０２２３】
なお、上記細胞回収液は、特に限定されるものではなく、細胞に対して負の影響を与えない溶液であればよい。具体的に、例えば、生理的食塩液やリンゲル液など注射用剤として一般的に用いられる溶液、リン酸緩衝液等の緩衝液、αＭＥＭ培地やＤＭＥＭ培地等の細胞培養用の培地等を挙げることができる。
【０２２４】
これら例示した溶液の中でも、細胞への負の影響が小さいことから、細胞培養用培地や生理食塩水を好ましく用いることができる。
【０２２５】
また、上記細胞回収液には、細胞保護の観点から、タンパクを添加してもよい。上記物質は特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、血漿、血清、アルブミン等を挙げることができる。
【０２２６】
さらに、上記細胞回収液には、粘張度を上げるための物質を添加してもよい。上記物質は特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、アルブミン、フィブリノーゲン、グロブリン、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、ヒドロキシエチルセルロース等を挙げることができる。
【０２２７】
このような物質を添加することにより、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞の回収率を向上させることができる。
【０２２８】
洗浄用シリンジ３２、および回収用シリンジ３４の材質並びに形状は特に限定されるものでないが、試料注入用シリンジ３１と同様のものを用いることができる。また、試料注入用シリンジ３１と同様に、細胞分離フィルター３３に洗浄液または細胞回収液を注入する方法に応じて、シリンジ以外のものを代用することができる。
【０２２９】
廃液バッグ３５は、試料注入用シリンジ３１および洗浄用シリンジ３２から注入された細胞含有試料および洗浄液のうち、細胞分離フィルター３３を通過した成分を回収するものである。廃液バッグ３５の材質および形状は特に限定されるものではなく、医療用途に一般的に用いられる廃液バッグを好適に用いることができる。
【０２３０】
また、本実施形態では、廃液バッグ３５を備えているが本発明はこれに限定されない。すなわち、試料注入用シリンジ３１および洗浄用シリンジ３２から注入された細胞含有試料および洗浄液のうち、細胞分離フィルター３３を通過した成分を回収することができるものであれば、バッグに限らず、あらゆる容器を代用することができる。
【０２３１】
三方活栓４０〜４２は、それぞれ、３つの口をもち、これら３つの口の任意の２つの口を連通させることが可能なものであればよく、その材質等は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、医療用途で用いられるあらゆる三方活栓を用いることができる。
【０２３２】
さらに、配管回路４３〜４９もまた、特に限定されるものではなく、各部材間を、溶液が漏れないように接続できるものであればよい。その材質や形状についても特に限定されるものではない。具体的には、例えば、医療用途で用いられるあらゆるチューブ類を好適に用いることができる。
【０２３３】
廃液バッグ３８は、細胞回収容器１８のフィルター１９を通過した成分を回収するものである。廃液バッグ３８としては、具体的には、廃液バッグ３５と同様のものを用いればよい。
【０２３４】
本発明にかかる細胞含有組成物製造器具は、上記構成を備えているため、特定の細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を、無菌的に、簡便かつ容易に製造することができる。
【０２３５】
本発明には、このような本発明にかかる細胞含有組成物製造器具を用いて、細胞含有組成物を製造する方法、および該方法により製造された細胞含有組成物も含まれる。
【０２３６】
本発明にかかる細胞含有組成物の製造方法としては、具体的には、（１）細胞を細胞分離フィルター３３で捕捉する工程と、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を、細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入することによって、細胞分離フィルター３３から流出させ、細胞分離フィルター３３から流出した細胞を含む細胞回収液を混合容器１に回収する工程と、混合容器１において、細胞を濃縮した後、細胞と細胞支持体１２とを混合する工程とを含む構成、（２）上記細胞捕捉工程と、細胞回収工程との間に、細胞分離フィルター３３に対して洗浄液を注入し、細胞分離フィルター３３を洗浄する工程をさらに含む構成等を挙げることができる。
【０２３７】
ここで、図５を参照しながら、細胞含有組成物製造器具５を用いて、細胞含有組成物を製造する方法について、より具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本明細書に鑑みた当業者であれば、本発明にかかる細胞含有組成物の製造方法の他の構成を容易に理解することができる。
【０２３８】
細胞含有組成物製造器具５を用いて、細胞含有組成物を製造する場合、具体的には、例えば、図５に示すように、まず、体液等の細胞含有試料を含む試料注入用シリンジ３１を、細胞含有組成物製造器具５にセットする。
【０２３９】
次に、試料注入用シリンジ３１から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４０】
そして、試料注入用シリンジ３１から細胞含有試料（例えば、体液）を細胞分離フィルター３３に注入する。このとき、細胞分離フィルター３３を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３５に排出される。
【０２４１】
次に、洗浄用シリンジ３２から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４２】
そして、洗浄用シリンジ３２から洗浄液を細胞分離フィルター３３に注入する。このとき、細胞分離フィルター３３を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３５に排出される。
【０２４３】
次に、回収用シリンジ３４から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４４】
そして、回収用シリンジ３４から細胞回収液を細胞分離フィルター３３に注入する。これにより、細胞分離フィルター３３に捕捉されていた細胞は、細胞回収液と共に、混合容器３に流入する。このとき、細胞回収容器１８内のフィルター１９を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３８に排出され、必要な細胞は、フィルター１９に捕捉され、結果として細胞回収容器１８に回収される。
【０２４５】
次に、バッグ１１内の全て、もしくは一部の仕切り１３を除去（開放）し、細胞支持体１２を細胞回収容器１８内に添加する。そして、細胞回収容器１８内で、細胞と細胞支持体１２とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。
【０２４６】
こうして調製された細胞含有組成物は、細胞回収容器１８を細胞含有組成物製造器具５から取り外すことにより、細胞回収容器１８から細胞含有組成物を取り出すことができる。
【０２４７】
なお本発明は、以上説示した各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【産業上の利用可能性】
【０２４８】
以上のように、本発明では、骨再生に関わる細胞を含む試料からの細胞の分離し、該細胞を培養することなく、そのまま、閉鎖系内で、細胞支持体と混合する。そのため、骨再生治療に利用可能な細胞含有組成物を簡便かつ迅速に製造することができる。したがって、本発明は、骨再生に関わる医療用途および医薬品用途に広く用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【０２４９】
【図１】図１は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図２】図２は、本発明の別の実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図３】図３は、本発明のさらに別の実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図４】図４は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具の外観を示す側面図である。
【図５】図５は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具を用いた細胞含有組成物の製造工程を示す図である。
【符号の説明】
【０２５０】
１ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
２ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
３ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
５ 細胞含有組成物製造器具
１０ 空間
１１ バッグ（容器）
１２ 細胞支持体
１３ 仕切り（仕切り部）
１４ 空間
１５ 流入口（流入部）
１６ 流出口（流出部）
１８ 細胞回収容器（細胞回収部）
１９ フィルター
２８ 溶液（細胞と細胞支持体とを混合するための溶液）
３１ 試料注入用シリンジ（細胞分離部、試料注入部）
３２ 洗浄用シリンジ（細胞分離部、洗浄液注入部）
３３ 細胞分離フィルター（細胞分離部、細胞捕捉部）
３４ 回収用シリンジ（細胞分離部、細胞回収液注入部）
３５ 廃液バッグ（細胞分離部、廃液回収部）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞含有組成物調製容器、および該細胞含有組成物調製容器を備えた細胞含有組成物製造器具に関するものであって、特に、簡便かつ迅速に細胞含有組成物を無菌的に製造することを可能にする細胞含有組成物調製容器、および該細胞含有組成物調製容器を備えた細胞含有組成物製造器具に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、細胞含有組成物は、様々な疾患の治療に用いられている。具体的には、例えば、細胞含有組成物は、骨壊死の治療に用いられている。
【０００３】
骨壊死は、外傷や血管病変あるいは骨細胞への直接の傷害によって、骨細胞、骨基質、骨髄細胞の死滅または破壊が起こった状態である。
【０００４】
骨壊死の治療法としては、例えば、骨に分化する間葉系幹細胞をβ−リン酸三カルシウム等の細胞支持体に付与して、細胞含有組成物を調製した後に、該細胞含有組成物を生体に投与する方法が開発されている。該方法で、骨欠損部の修復速度が高まり、骨壊死を治療することができる。
【０００５】
このような細胞含有組成物としては、具体的には、特許文献１には、体液から所望の不要成分を除去した少なくとも間葉系幹細胞を含む濃縮体をβ−リン酸三カルシウム（以下、「β−ＴＣＰ」ともいう）からなる骨補填材に付与してなる骨補填体が開示されている。
【０００６】
また、特許文献１には、上記骨補填体は、上部開口型の容器に、体液から所望の不要成分を除去した少なくとも間葉系幹細胞を含む濃縮体を入れて、該容器内で、β−ＴＣＰを上記濃縮体に漬けることにより、製造できることが記載されている。
【特許文献１】特開２００３−３２０００９号公報（平成１５（２００３）年１１月１１日公開）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上説したような細胞含有組成物は、生体に投与するため、無菌的に調製する必要がある。そのため、特許文献１のように、上部が開口された容器を用いて、上記細胞含有組成物を調製する場合、無菌的に調製するために、特別な装置が必要となるという問題がある。
【０００８】
また、そのような特別な装置を用いる必要となるため、臨床現場で簡便に調製できないという問題がある。
【０００９】
本発明は、上記問題点に鑑みなされたものであって、その目的は、簡便かつ迅速に細胞含有組成物を無菌的に調製することを可能にする細胞含有組成物の調製容器、および該調製容器を備えた細胞含有組成物の製造器具を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題に鑑み鋭意検討した結果、細胞支持体が封入された空間と、細胞を含有する試料を流入させるための流入口を有する空間とを備え、かつ、上記２つの空間が容易に連結可能な容器を用いることにより、無菌的に、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を簡便かつ容易に調製できることを独自に見出し、本発明を完成させるに至った。すなわち、本発明は、以下の産業上有用な以下の発明を包含する。
【００１１】
（１）細胞を流入させるための流入部を有する容器と、該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部と、を備え、上記仕切り部の除去により、上記容器内の区画された空間は連結可能であって、上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられており、上記仕切り部によって区画された空間のうち、少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されていることを特徴とする細胞含有組成物調製容器。
【００１２】
（２）上記容器は、流出部をさらに備え、上記流入部および流出部は、ともに、上記仕切り部によって区画された１つの同一空間に設けられており、該流入部および流出部が設けられた空間には、上記細胞支持体は封入されていないことを特徴とする（１）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１３】
（３）細胞回収部をさらに備え、該細胞回収部は、上記流出部と接続されていることを特徴とする（２）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１４】
（４）上記細胞回収部は、該細胞回収部の内部の空間を少なくとも２つに区画するフィルターを備えていることを特徴とする（３）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１５】
（５）上記容器は、合成樹脂からなることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１６】
（６）上記仕切り部は、上記容器の壁面同士を熱圧着させることにより形成されてなることを特徴とする（５）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１７】
（７）上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記細胞支持体が封入されている空間および上記細胞支持体が封入されている空間とは異なる少なくとも１つの空間に、上記細胞と上記細胞支持体とを混合するための溶液が封入されていることを特徴とする（１）〜（６）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１８】
（８）上記溶液が封入されている空間は、さらに、上記流入部が設けられている空間とは異なることを特徴とする（７）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００１９】
（９）上記溶液は、培地、生理食塩液、血漿、および血清からなる群より選択される少なくとも１つの溶液であることを特徴とする（７）または（８）に記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２０】
（１０）上記細胞支持体は、無機材料、天然高分子材料、合成高分子材料、金属材料、自家骨またはこれらの２種以上を組み合わせた複合材を含むことを特徴とする（１）〜（９）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２１】
（１１）上記細胞は、幹細胞であることを特徴とする（１）〜（１０）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器。
【００２２】
（１２）（１）〜（１１）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製容器と、細胞分離部とを備え、該細胞分離部は、上記流入部と接続されていることを特徴とする細胞含有組成物製造器具。
【００２３】
（１３）上記細胞分離部は、細胞を捕捉するための細胞捕捉部と、上記細胞捕捉部に細胞回収液を注入し、該細胞捕捉部に捕捉された上記細胞を該細胞捕捉部から流出させるための細胞回収液注入部とを備え、上記細胞含有組成物調製容器は、上記細胞捕捉部から流出した上記細胞を含む細胞回収液を回収するためのものであることを特徴とする（１２）に記載の細胞含有組成物製造器具。
【００２４】
（１４）上記細胞を含む試料を上記細胞捕捉部に注入するための試料注入部をさらに備え、上記試料注入部は、上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記試料を注入するものであることを特徴とする（１２）または（１３）に記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２５】
（１５）上記試料注入部が上記細胞捕捉部に上記試料を注入したとき、上記試料のうち、上記細胞捕捉部を通過した成分を回収するための廃液回収部をさらに備えることを特徴とする（１４）に記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２６】
（１６）上記細胞捕捉部を洗浄するための洗浄液を上記細胞捕捉部に注入するための洗浄液注入部をさらに備え、上記洗浄液注入部は、上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記洗浄液を注入することを特徴とする（１２）〜（１５）のいずれかに記載の細胞含有組成物調製器具。
【００２７】
（１７）上記細胞捕捉部は、フィルター構造を有する細胞分離材を含むことを特徴とする（１２）〜（１６）のいずれかに記載の細胞含有組成物製造器具。
【発明の効果】
【００２８】
以上のように、本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、細胞を流入させるための流入部を有する容器と、該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部とを備えている。上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられている。また、上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記流入部が設けられた空間とは異なる少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されている。さらに、上記容器内の区画された空間は、上記仕切り部の除去により、連結される。
【００２９】
したがって、上記流入部から細胞を流入させた後、上記仕切り部を除去することにより、上記細胞と細胞支持体とを混合することができる。それゆえ、上記構成によれば、無菌的に、上記細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を簡便かつ容易に調製できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
本発明の一実施形態について図１〜図５に基づき説明すると以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３１】
＜Ｉ．細胞含有組成物調製容器＞
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することに適したものである。
【００３２】
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器は、従来公知の細胞分離装置と接続することにより、無菌的に、上記細胞含有組成物を迅速かつ容易に調製することを可能にする。
【００３３】
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器を用いて調製される細胞含有組成物は、特に限定されるものではない。例えば、特定の細胞と、細胞支持体とを少なくとも含み、あらゆる疾患や疾病の治療用途に利用可能な組成物を好適に調製することができる。上記特定の細胞は特に限定されるものではないが、幹細胞であることが好ましい。幹細胞は、医療上有用な細胞の１つであり、このような細胞を含む細胞含有組成物であれば、医療用途に個的に用いることができる。
【００３４】
上記細胞含有組成物としては、より具体的には、例えば、骨再生関連細胞と、細胞支持体とを少なくとも含む骨再生組成物を挙げることができる。このような骨再生組成物は、疾患の治療において、骨再生させるために用いることができる。また、骨再生以外では、軟骨再生、心筋再生等の目的や、心臓病、神経疾患、筋萎縮性側索硬化症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、ガン、多発性硬化症、動脈石灰化、皮膚疾患等の疾患に対して用いることができる。
【００３５】
上記骨再生関連細胞とは、骨再生に関わる細胞であり、具体的には、例えば、間葉系幹細胞を挙げることができる。
【００３６】
間葉系幹細胞は、体液中から分離され、自己増殖を繰り返す能力を有し、下流の細部系譜への分化が可能な細胞である。また、間葉系幹細胞は、その由来系統の細胞だけではなく、別系統の細胞にまで分化することができる。
【００３７】
より詳しく説明すると、間葉系幹細胞は、分化誘導因子により、例えば、軟骨細胞や、血管内皮細胞、心筋細胞、脂肪組織等、または歯周組織の構成細胞であるセメント芽細胞、歯周靱帯繊維芽細胞等の中胚葉系の細胞に分化することができる。
【００３８】
また、間葉系幹細胞は、適切な環境下では骨芽細胞に分化し、骨組織を新生することが知られている。この骨組織の新生では、間葉系幹細胞は、不足した骨新生能力を補填する役割を担っていると考えられている。
【００３９】
間葉系幹細胞としては、具体的には、骨髄由来間葉系幹細胞、脂肪組織由来間葉系幹細胞、羊膜由来間葉系幹細胞、胎盤由来間葉系幹細胞、臍帯由来間葉系幹細胞等を挙げることができる。
【００４０】
本明細書において、「細胞支持体」とは、細胞を支持することが可能な物質が意図される。本発明では、上記細胞支持体は、細胞の増殖および／または分化の足場となるものであることが好ましい。このような細胞支持体は、混合する細胞の種類に応じて、適宜選択すればよい。
【００４１】
上記細胞支持体としては、具体的には、例えば、ハイドロキシアパタイト、β−リン酸三カルシウム、炭酸カルシウムまたはリン酸オクタカルシウム、リン酸カルシウム等の無機材料；コラーゲン、キトサン、またはキチン等の天然高分子材料；ポリリシン、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリシアノアクリレート、またはε−カプロラクタン等の合成高分子材料；純チタン、チタン合金、タンタル、またはステンレス鋼等の金属材料などを挙げることができる。
【００４２】
これらは単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせた複合材として用いてもよい。
【００４３】
また、自家骨、自家骨片、自家骨粉、血管柄付き骨片のような組織及び組織片等を細胞支持体とすることもできる。
【００４４】
〔実施の形態１〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器の一実施形態について、図１に基づいて、以下、具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００４５】
本実施形態にかかる混合容器１（細胞含有組成物調製容器）は、図１に示すように、細胞を流入させるための流入口１５（流入部）を有するバッグ１１（容器）と、バッグ１１内の空間を区画している、２つの仕切り１３（仕切り部）とを備えている。
【００４６】
上記構成を備えることにより、バッグ１１内の空間は、２つの仕切り１３によって、３つの空間１０に区画されている。そして、各空間１０には、細胞支持体１２が封入されている。
【００４７】
また、図１において、流入口１５は、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央にある空間１０に設けられている。
【００４８】
上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、まず、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央にある空間１０に収納される。そこで、細胞支持体１２と混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【００４９】
また、上記構成では、隣接する空間１０との間に存在するいずれかの仕切り１３を除去することにより、隣接する空間１０同士を連結することができる。
【００５０】
したがって、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央の空間１０で調製された細胞含有組成物に対して、両横に隣接する空間１０との間の仕切り１３を除去することにより、隣接する空間１０内に封入された細胞支持体１２を、閉鎖的な系でさらに添加して混合することができる。
【００５１】
より詳しく説明すると、例えば、図１において、３つの空間１０にそれぞれ等量の細胞支持体１２を封入しておくと、仕切り１３を１つ開放することにより、細胞に混合する細胞支持体１２の量を２倍に増加させることができる。さらに、仕切り１３を２つとも開放すれば、細胞に混合する細胞支持体１２の量を３倍に増加させることができる。
【００５２】
それゆえ、混合容器１によれば、細胞含有組成物の調製時に、不要なコンタミネーションを防ぐことができる。また、細胞の量に応じて、細胞に添加する細胞支持体１２の量を閉鎖的な系で容易に増加させることができる。つまり、上記構成によれば、細胞と細胞支持体１２とが所望の割合で混合された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００５３】
このように、混合容器１は、２以上に区画された空間１０、２以上に区画された空間１０を隔てる仕切り１３、および流入口１５を有するバッグ１１からなり、２以上に区画された空間１０のうち少なくとも１以上の空間に細胞支持体１２が封入され、２以上に区画された空間１０を隔てる仕切り１３を取り除くことにより容易に空間１０同士がつながる細胞含有組成物調製容器ということもできる。
【００５４】
なお、本実施形態では、混合容器１の使用形態として、流入口１５から細胞を流入させた後、仕切り１３を除去する使用形態について説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、所望のタイミングで除去すればよい。すなわち、仕切り１３は、流入口１５から細胞を流入させる前に除去してもよい。また、複数の仕切り１３を備えている場合、これら全ての仕切り１３は、同時に除去してもよいし、タイミングをずらして除去してもよい。また、除去が必要な仕切り１３のみを除去し、除去が不要な仕切り１３については、使用終了まで除去しなくてもよい。このような仕切り１３の除去タイミング等は、本明細書に鑑みた当業者であれば、容易に理解することができる。
【００５５】
図１において、流入口１５は、横一列に並んだ３つの空間１０のうち、中央の空間１０に設けられているが、本発明はこれに限定されず、いずれの空間１０に設けられていてもよい。
【００５６】
また、図１では、混合容器１は、２つの仕切り１３によって、３つの空間１０に区画されているが、仕切り１３および空間１０の数は特に限定されるものではない。具体的には、空間１０が少なくとも２つ以上形成されるように、仕切り１３を設ければよい。
【００５７】
さらに、図１では、３つの空間１０の全てに、同一の細胞支持体１２が等量ずつ封入されているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、３つの空間１０のうち、少なくとも１つの空間１０に細胞支持体１２が封入されていればよい。
【００５８】
また、複数の空間１０に細胞支持体１２が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体は、全て同一であってもよいし、異なるものであってもよい。つまり、混合容器１では、細胞支持体１２が封入されている空間が、仕切り１３によって分離されているため、複数種類の細胞支持体１２を別々に封入することができる。
【００５９】
さらに、複数の空間１０に細胞支持体１２が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体の量についても、特に限定されるものではなく、同量であってもよいし、異なる量であってもよい。
【００６０】
また、一部の空間１０にのみ細胞支持体１２が封入されている場合、流入口１５が設けられた空間１０には、細胞支持体１２が封入されていないことが好ましい。このような構成であれば、細胞支持体１２が封入された空間１０における細胞支持体の種類や量を変更しておけば、流入口１５が設けられた空間１０に流入した細胞の種類や状態等に応じて、混合する細胞支持体の種類または量を所望に変更することができる。
【００６１】
また、一部の空間１０にのみ細胞支持体１２が封入されている場合、細胞支持体１２が封入されていない空間１０には、細胞と細胞支持体１２と混合するための溶液が封入されていることが好ましい。つまり、図２に示す混合容器２のように、細胞支持体１２が封入された空間１０とは別の空間１０に、溶液２８が封入されていることが好ましい。
【００６２】
このような構成によれば、外部から細胞と細胞支持体１２とを混合するための溶液を流入させなくとも、混合容器１内に細胞を流入させた後、仕切り１３を除去することにより、該細胞と、細胞支持体１２および溶液２８とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。
【００６３】
空間１０に溶液２８が封入されている場合、溶液２８は、流入口１５が設けられた空間１０とは異なる空間１０に封入されていることが好ましい。このような構成によれば、溶液２８は、細胞と細胞支持体１２との混合用途のみならず、流入口１５が設けられた空間１０内で調製された細胞含有組成物の細胞濃度や粘度等の物性調製用途にも用いることができる。
【００６４】
より詳しく説明すると、仕切り１３を除去することにより、溶液２８は、隣接する空間１０内に存在する細胞および細胞支持体１２と混合することができる。これにより、液量や細胞濃度、粘性等が所望に調製された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００６５】
溶液２８は、特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、培地、生理食塩液、血漿、および血清等を挙げることができる。このような溶液は、生理的イオン強度を有する。それゆえ、細胞に悪影響を与えることが少ないため、細胞含有組成物に含有させる溶液として好適に用いることができる。
【００６６】
空間１０には、細胞支持体１２以外の物質が、細胞支持体１２とともに、封入されていてもよい。細胞支持体１２以外の物質は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、乾燥剤や、細胞支持体の保存剤等を挙げることができる。
【００６７】
空間１０に乾燥剤や細胞支持体の保存剤を、細胞支持体１２とともに封入することにより、細胞支持体１２を安定して保存することができる。
【００６８】
混合容器１において、バッグ１１の材質、形状等は特に限定されるものではないが、プラスチック等の合成樹脂からなることが好ましい。合成樹脂の材質としては、ガス滅菌できるためガス透過性を有するものがよい。例えばポリオレフィン製が好ましい。また、このような構成であれば、例えば、バッグ１１の壁面同士を熱圧着させることにより、仕切り１３を容易に形成させることができる。また、このようにして形成された仕切り１３は、例えば、バッグ１１を手で圧迫する等によって仕切り１３を容易に除去（開放）することができる。つまり、仕切り１３で区画された空間１０同士を容易に連結することができる。
【００６９】
なお、上記のように、仕切り１３を熱圧着により形成する場合、熱圧着条件は、特に限定されるものではなく、バッグ１１の材質に応じて適宜、適切な条件を設定すればよい。バッグ１１の材質として、プラスチック等の一般的な合成樹脂を用いる場合、上記熱圧着の温度は、例えば、１２０℃〜１４０℃とすることが好ましい。
【００７０】
本実施形態では、図１に示すように、混合容器１の流入口１５には、キャップ１７が取り付けられている。これにより、混合容器１の使用前に、流入口１５を介して、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。
【００７１】
キャップ１７は、特に限定されるものではないが、ゴム等からなることが好ましい。このような構成によれば、例えば、細胞を含有する試料を入れた容器に取り付けられた針等をキャップ１７に貫通させることにより、上記細胞をバッグ１１内に容易に流入させることができる。
【００７２】
また、混合容器１において、流入口１５とキャップ１７とは、一体的に形成されていてもよい。つまり、流入口１５とキャップ１７とは、分離できない構成であってもよい。このような構成であっても、例えば、細胞を含有する試料を入れた容器に取り付けられた針等をキャップ１７に貫通させることにより、上記細胞をバッグ１１内に流入させることができる。
【００７３】
また、混合容器１は、キャップ１７を備えない構成としてもよい。このような構成であっても、例えば、混合容器１を密閉容器（もしくは密封容器や、気密容器）内で保管しておくことにより、混合容器１の使用前に、流入口１５を介して、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。
【００７４】
細胞支持体１２は、特に限定されるものではなく、例えば、上説したような細胞支持体を用いればよい。また、その形状についても特に限定されず、細胞を保持し得るものであればよい。具体的には、例えば、顆粒状、膜状、チューブ状、平板状、ロール状等の形状を挙げることができる。
【００７５】
混合容器１に流入させる細胞は、特に限定されるものではないが、疾患や疾病の治療用途に用いることが可能な、特定の細胞であることが好ましい。具体的には、例えば、間葉系幹細胞のような幹細胞を挙げることができる。このような細胞は、細胞支持体１２と混合し、細胞含有組成物とすることにより、医療上の有用な組成物とすることができる。
【００７６】
また、混合容器１において、バッグ１１に細胞を流入させる方法は、特に限定されるものではないが、例えば、シリンジ等を用いて、上記細胞を含有する細胞懸濁液を流入口１５から注入することにより、バッグ１１内に細胞を流入させることができる。
【００７７】
細胞を細胞懸濁液として流入させる場合、該細胞懸濁液における細胞濃度は、得られる細胞含有組成物の種類や用途に応じて、所望に調製しておくことが好ましい。
【００７８】
また、上記細胞を含有する試料から、特定の細胞を分離したのち、該特定の細胞を混合容器１に流入させる場合、該特定の細胞を分離する細胞分離器具とバッグ１１の流入口１５とを直接、もしくは、チューブ等を介して接続して、該細胞分離器具から直接、バッグ１１に細胞を流入させてもよい。
【００７９】
混合容器１内で、細胞と細胞支持体１２とを混合させる方法は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、（１）加圧や引圧を与えることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（２）液を加えて、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（３）細胞と細胞支持体１２とのチャージを利用して電気的に細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（４）振動を与えることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法、（５）回転させることにより、細胞と細胞支持体１２とを混合する方法等が挙げることができる。
【００８０】
より具体的に説明すると、上記（１）の方法において加圧する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、シリンジにより空気を介して押圧したり、混合容器１自体を手で押圧したりすることにより、加圧することができる。また、引圧する方法についても特に限定されるものではないが、例えば、シリンジやポンプを用いて引圧することができる。
【００８１】
また、上記（２）の方法では、例えば、顆粒状の細胞支持体１２が入った混合容器１に、細胞を含有する細胞懸濁液を、混合容器１の上部から滴下することによって、該細胞懸濁溶液中で細胞支持体１２と細胞とを混合させることができる。
【００８２】
上記（３）の方法では、例えば、細胞支持体１２を正に帯電させることにより、細胞は負に帯電しているため、互いに静電的に引き付けあって、細胞支持体１２と細胞とを混合することができる。
【００８３】
上記（４）の方法では、例えば、手動で、または機械的に容器に振動を与えることによって、細胞支持体１２と細胞とを混合することができる。
【００８４】
混合容器１内で調製された細胞含有組成物を混合容器１外に取り出す方法は特に限定されるものではない。例えば、流入口１５から取り出してもよいし、バッグ１１の一部を切断して取り出してもよい。また、ゴム栓等の流入口１５の材質等によっては、流入口１５に突きさした注射針を通して、シリンジ内に、細胞含有組成物を回収してもよい。
【００８５】
〔実施の形態２〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器の別の実施形態について、図２に基づいて説明する。なお、説明の便宜上、実施の形態１で用いた部材と同一の機能を有する部材には、同一の部材番号を付記し、その説明を省略する。
【００８６】
本実施形態にかかる混合容器２は、図２に示すように、流入口１５を有するバッグ１１（容器）と、バッグ１１内の空間を区画している、１０個の仕切り１３と、流出口１６とを備えている。
【００８７】
混合容器２では、１０個の仕切り１３により、バッグ１１内の空間は、６つの空間１０と、１つの空間１４との合計７つの空間に区画されている。そして、６つの空間１０のうち、２つの空間１０には、細胞支持体１２が封入されている。また、残り４つの空間１０のうち、２つの空間１０には、溶液２８が封入されており、残りの２つの空間１０には何も封入されていない。
【００８８】
また、図２において、流入口１５および流出口１６は、ともに、縦一列に並んだ３つの空間１０の列と列との間に位置する空間１４に設けられている。
【００８９】
上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、まず、空間１４に収納される。そこで、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とが連結される。それゆえ、細胞と細胞支持体１２とが混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【００９０】
さらに、必要に応じて、溶液２８が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞含有組成物に対して、溶液２８を閉鎖系で、簡便かつ容易に添加することができる。
【００９１】
それゆえ、液量や細胞濃度、粘性等が所望に調製された細胞含有組成物を、閉鎖系内で、簡便かつ容易に調製することができる。
【００９２】
混合容器２では、こうして調製された細胞含有組成物は、流出口１６を通して、バッグ１１から容易に取り出すことができる。なお、混合容器２から細胞含有組成物を取り出す方法は、これに限定されず、実施の形態１で説明した混合容器１から細胞含有組成物を取り出す方法と同様の方法を用いて、混合容器２から細胞含有組成物を取り出してもよい。
【００９３】
なお、本実施形態では、混合容器２の使用形態として、流入口１５から細胞を流入させた後、仕切り１３を除去する使用形態について説明するが、本発明はこれに限定されるものではなく、実施の形態１出説明したように、所望のタイミングで除去すればよい。
【００９４】
また、本実施形態においても、仕切り１３および空間１０の数は特に限定されるものではない。細胞支持体１２および溶液２８が封入された空間１０の数についても特に限定されない。さらに、複数の空間１０に細胞支持体１２または溶液２８が封入されている場合、各空間１０に封入されている細胞支持体１２もしくは溶液２８の種類および量は、同一であっても、異なってもよい。
【００９５】
さらに、空間１０には、実施の形態１と同様に、細胞支持体以外の物質が、細胞支持体１２とともに、封入されていてもよい。細胞細胞支持体以外の物質としては、実施の形態１に記載したものを同様に例示することができる。
【００９６】
これら空間１０の構成については、実施の形態１で説明したとおりである。
【００９７】
また、流入口１５および流出口１６には、それぞれ、キャップ１７およびキャップ２９が取り付けられている。これにより、混合容器２の使用前に、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。なお、本発明はこれに限定されず、キャップ１７およびキャップ２９を備えない構成とすることができる。
【００９８】
ここで、混合容器２の製造方法について、説明するが、本発明はこれに限定されない。すなわち、混合容器２の形状や、空間１０の数、仕切り１３の数等に応じて、適宜、適切な方法を選択して製造すればよい。そのような製造方法は、本明細書に鑑みた当業者であれば、容易に理解できる。
【００９９】
図２に示す混合容器２の製造においては、まず、プラスチック製のバッグ１１の４辺のうち、流入口１５が形成された１辺、および流出口１６が形成された１辺を熱圧着する。
【０１００】
次に、６つの空間１０、および１つの空間１４が形成されるように、バッグ１１の壁面同士を熱圧着する。なお、このときの熱圧着の温度は、バッグ１１の４辺を熱圧着する時の温度よりも低くすることが好ましい。
【０１０１】
仕切り１３を形成させた後、バッグ１１の４辺のうち、熱圧着されていない２辺から、細胞支持体１２または溶液２８を空間１０内に配置する。そして、バッグ１１の４辺のうち、熱圧着されていない２辺を、熱圧着することにより、細胞支持体１２を６つの空間１０内に封入することができる。
【０１０２】
なお、このときの熱圧着温度は、流入口１５が形成された１辺、および流出口１６が形成された１辺を熱圧着する時と同様に、仕切り１３形成時の熱圧着温度よりも高くすることが好ましい。
【０１０３】
このように、バッグ１１の４辺の熱圧着温度よりも、仕切り１３の熱圧着温度を低くすることにより、手等でバッグ１１を圧迫したとき、バッグ１１の４辺は開放されず、仕切り１３のみを容易に開放することができる。
【０１０４】
〔実施の形態３〕
本発明にかかる細胞含有組成物調製容器のさらに別の実施形態について、図３に基づいて説明する。なお、説明の便宜上、実施の形態１および実施の形態２で用いた部材と同一の機能を有する部材には、同一の部材番号を付記し、その説明を省略する。
【０１０５】
本実施形態にかかる混合容器３は、図３に示すように、混合容器２の流出口１６に、細胞回収容器１８が接続された構成を有する。
【０１０６】
なお、混合容器３では、図３に示すように、全ての空間１０に細胞支持体１２が封入されているが、本発明はこれに限定されない。つまり、実施の形態２で説明したような構成としてもよい。
【０１０７】
細胞回収容器１８は、上部に流出口１６と接続するための開口部と、底部には、細胞回収容器１８内の溶液を排出可能な排出口とを備えている。また、細胞回収容器１８内の空間は、フィルター１９によって区画されている。つまり、細胞回収容器１８は、フィルター１９を隔てて、上記開口部が設けられた空間と、上記排出口が設けられた空間とを有している。
【０１０８】
したがって、上記構成によれば、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞は、空間１４を通過し、細胞回収容器１８に流入する。そして、該細胞は、フィルター１９上に捕捉される。このとき、流入口１５からバッグ１１内に流入した細胞以外の成分でフィルター１９を通過できるものは、フィルター１９を通過して上記排出口から排出される。
【０１０９】
それゆえ、例えば、流入口１５から細胞を細胞懸濁液の状態でバッグ１１に流入させる場合、該細胞懸濁液に含まれる必要な細胞と、不要な成分（不要な細胞を含む）とを分離することができる。
【０１１０】
つまり、上記構成によれば、バッグ１１に流入させる細胞を含む試料が、必要な細胞以外の不純物を含む場合であっても、流出口１６を通じて該試料を細胞回収容器１８に流入させると、フィルター１９によって必要な細胞のみを捕捉し、必要な細胞以外の不要成分（不要な細胞を含む）はフィルター１９を通過させ、廃棄することができる。
【０１１１】
フィルター１９上に細胞を捕捉した後、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞支持体１２が封入されている空間１０と空間１４とが連結される。これにより、細胞支持体１２が細胞回収容器１８に投入される。
【０１１２】
そして、細胞回収容器１８内で、細胞と細胞支持体１２とが混合され、細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を調製することができる。
【０１１３】
さらに、必要に応じて、溶液２８が封入されている空間１０と空間１４とを区画している仕切り１３を除去することにより、細胞回収容器１８に溶液２８を閉鎖系内で、簡便かつ容易に添加することができる。これにより、閉鎖系内で、簡便かつ容易に、得られる細胞含有組成物の液量や粘性、細胞濃度等を所望に制御することができる。
【０１１４】
こうして調製された細胞含有組成物は、細胞回収容器１８の開口部または排出口から、取り出すことができる。混合容器３から、細胞含有組成物を取り出す方法は、これに限定されるものではない。
【０１１５】
例えば、細胞含有組成物を細胞回収容器１８内に細胞含有組成物を回収し、バッグ１１と細胞回収容器１８とを分離し、細胞回収容器１８の流出口１６との接続口から該細胞含有組成物を取り出してもよい。
【０１１６】
また、細胞含有組成物を調製後、該細胞含有組成物をバッグ１１に回収し、続いて、バッグ１１と細胞回収容器１８とを分離し、流出口１６から細胞含有組成物を取り出してもよい。
【０１１７】
さらに、実施の形態１で説明した混合容器１から細胞含有組成物を取り出す方法と同様の方法によっても、混合容器３から細胞含有組成物を取り出すことができる。
【０１１８】
本実施形態では、図３に示すように、流入口１５および流出口１６が設けられた空間１４には、細胞支持体１２は封入されていない。
【０１１９】
そのため、流入口１５を通ってバッグ１１内の空間１４に流入した細胞は、直ちに細胞支持体１２と接触することはない。つまり、バッグ１１に流入させる細胞を含む試料が必要な細胞以外の不要成分を含む場合であっても、そのような不要成分が細胞支持体１２と接触することを防止することができる。
【０１２０】
それゆえ、混合容器３から回収した細胞含有組成物を、生体に投与する場合であっても、生体内に不要成分を投与することを防止することができる。
【０１２１】
細胞回収容器１８の内部に備えられるフィルター１９は、特に限定されるものでなく、細胞を含有する試料に含まれる必要な細胞と、その他の不要成分（不要な細胞を含む）とを分離できるものであればよい。より詳しくは、必要な細胞を捕捉することが可能で、かつ、必要な細胞以外の成分を通過させることが可能なものであればよい。
【０１２２】
つまり、細胞含有組成物に含有させる細胞の大きさにより、適切な孔径のフィルターを用いればよい。例えば、幹細胞を含有する細胞含有組成物を調製する場合、フィルター１９として、孔径が１μｍ〜８μｍであるフィルターを用いることが好ましい。このような孔径のフィルターであれば、流入口１５から流入させる試料に、幹細胞以外の不要な細胞が混入していたとしても、幹細胞と該不要な細胞とを分離することができる。
【０１２３】
また、フィルター１９の材質についても特に限定されないが、具体的には、例えば、濾紙、不織布、ガラスフィルター等を好適に用いることができる。
【０１２４】
フィルター１９について、より具体的な例を挙げると、例えば、孔径が２．２μｍのガラスフィルターを複数重ねたものを用いることができる。
【０１２５】
本実施形態では、バッグ１１と細胞回収容器１８とが接続されているが、本発明はこれに限定されない。例えば、混合容器３は、バッグ１１と細胞回収容器１８とが分離可能な構成としてもよい。
【０１２６】
このような構成によれば、必要に応じて、細胞回収容器１８を流出口１６から脱着することができる。また、様々なフィルター１９を備える細胞回収容器１８との取替えが容易となり、混合容器３を用いて調製する細胞含有組成物の選択域を広げることができる。
【０１２７】
また、本実施形態では、図３に示すように、流入口１５および細胞回収容器１８の排出口には、それぞれ、キャップ１７およびキャップ２０が取り付けられている。これにより、混合容器３の使用前に、バッグ１１内の空間が汚染されることを防止することができる。なお、本発明はこれに限定されず、キャップ１７およびキャップ２０を備えない構成とすることができる。
【０１２８】
ここで、混合容器３の使用形態について、具体的に説明するが、本発明はこれに限定されない。まず、流入口１５から細胞を含む溶液（例えば、細胞懸濁液）を流入させる。そして、フィルター１９で必要な細胞を捕捉し、その他の不要成分（不要な細胞を含む）は、フィルター１９を通過させ、廃棄する。その後、流入口１５から、フィルター１９に捕捉された細胞を洗浄するための洗浄液を流入させ、細胞を洗浄する。なお、細胞を洗浄した後の洗浄液は、フィルター１９を通過させて廃棄する。
【０１２９】
次に、キャップ２０を取り付け、細胞含有組成物に含有させる溶液を所望量だけ流入口１５から流入させる。そして、所望の数の仕切り１３を除去（開放）し、所望の数の空間１０と、空間１４と、細胞回収容器１８内の空間とを連結させる。
【０１３０】
これにより、これら連結された空間内で、細胞と細胞支持体１２とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。なお、細胞と細胞支持体１２との混合は、上記連結された空間内で行えばよい。すなわち、バッグ１１内で行ってもよいし、細胞回収容器１８内で行ってもよい。
【０１３１】
本実施形態において、上記洗浄液や、細胞含有組成物に含有させる溶液は、流入口１５から流入させる以外にも、例えば、いずれかの空間１０に封入しておき、仕切り１３を除去することにより、空間１４内に流入させることができる。
【０１３２】
こうして調製された細胞含有組成物は、上説した方法により、混合容器３から取り出すことができる。
【０１３３】
＜ＩＩ．細胞含有組成物製造器具＞
本発明にかかる細胞含有組成物製造器具は、上説した本発明にかかる細胞含有組成物調製容器と、細胞分離器とが接続されたものである。
【０１３４】
このような細胞含有組成物製造器具によれば、（１）細胞を含む試料溶液（以下、「細胞含有試料」）から特定の細胞を分離し、（２）分離された特定の細胞と細胞支持体との混合を、閉鎖系内で、一連の操作として行うことができる。
【０１３５】
したがって、本発明にかかる細胞含有組成物製造器具によれば、無菌的に、細胞含有組成物を、簡便かつ容易に製造することができる。
【０１３６】
なお、上記細胞含有試料は、特に限定されるものではなく、具体的には、例えば、体液、および生体組織の処理液等を挙げることができる。
【０１３７】
また、上記細胞含有試料は、細胞培養液であってもよい。すなわち、体液、および生体組織の処理液等から分離した細胞を増幅して得られた細胞含有試料であってもよい。
【０１３８】
このような細胞含有試料としては、具体的には、例えば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ ＭＥＭ培地（日水）、α−ＭＥＭ培地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）、ＭＥＭ培地（日水）、ＩＭＥＭ培地（日水）、ＲＰＭＩ−１６４０培地（日水）等の培養培地中で、体液、および生体組織の処理液等から分離した細胞を接着または増殖させた細胞培養液を挙げることができる。
【０１３９】
上記培養培地には、必要に応じて血清を５％〜２０％の濃度で添加してもよい。また、培養条件は、特に限定されるものではなく、細胞の種類に応じて適宜設定すればよい。例えば、温度３７℃、ＣＯ２ガス５％の雰囲気下で培養すればよい。
【０１４０】
本明細書において、「体液」とは、細胞を含む、血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血、脂肪細胞含有体液等が意図される。また、体液には、血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血等の希釈物；血液（末梢血、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血を含む）、骨髄液、臍帯血、脂肪細胞含有体液等を、フィコール、パーコール、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ）、バクティナーチューブ、リンフォプレップ等を用いた比重密度遠心分離法により前処理して調製された細胞懸濁液等も含まれる。
【０１４１】
また、「生体組織の処理液」とは、生体組織を酵素により分解させた処理液（酵素分解処理液）、生体組織を破砕により分解させた処理液（破砕処理液）、生体組織を擦過により分解させた処理液（擦過処理液）、生体組織を浸透抽出により分解させた処理液（浸透抽出処理液）、生体組織を美容整形等で行われる脂肪吸引法により分解させた処理液（脂肪吸引処理液）等が意図される。なお、これら生体組織の処理液については、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１４２】
また、「生体組織」とは、細胞を含む体液以外の生体組織が意図される。
【０１４３】
ここで、本発明にかかる細胞含有組成物製造器具の一実施形態について、図４を参照しながら、以下、詳細に説明するが本発明はこれに限定されるものではない。
【０１４４】
本実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具５は、図４に示すように、バッグ１１と細胞回収容器１８とが接続された混合容器３と、細胞分離フィルター３３（細胞分離器、細胞捕捉部）と、試料注入用シリンジ３１（細胞分離器、試料注入部）と、廃液バッグ３５（細胞分離器、廃液回収部）と、洗浄用シリンジ３２（細胞分離器、洗浄液注入部）と、回収用シリンジ３４（細胞分離器、細胞回収液注入部）とを備えている。
【０１４５】
さらに、細胞回収容器１８の下流には、細胞回収容器１８から排出された廃液を回収するための廃液バッグ３８を備えている。ただし、廃液バッグ３８を設けない構成としてもよい。
【０１４６】
図４に示すように、細胞分離フィルター３３、廃液バッグ３５および回収用シリンジ３４は、三方活栓４２を介して互いに接続されている。
【０１４７】
より詳しくは、図４に示すように、細胞分離フィルター３３と三方活栓４２とは、配管回路４６によって接続されている。廃液バッグ３５と三方活栓４２とは、配管回路４７によって接続されている。
【０１４８】
さらに、回収用シリンジ３４と三方活栓４２とは、配管回路４９によって接続されている。これにより、結果として、細胞分離フィルター３３、廃液バッグ３５および回収用シリンジ３４は、互いに接続されている。
【０１４９】
また、細胞分離フィルター３３、試料注入用シリンジ３１、洗浄用シリンジ３２、およびバッグ１１（換言すれば、混合容器３）は、三方活栓４０および三方活栓４１を介して互いに接続されている。
【０１５０】
より詳しくは、図４に示すように、細胞分離フィルター３３と三方活栓４１とは、配管回路４５によって接続されている。バッグ１１と三方活栓４１とは、配管回路４８によって接続されている。三方活栓４１と三方活栓４０とは、配管回路４４によって接続されている。
【０１５１】
また、洗浄用シリンジ３２と三方活栓４０とは、配管回路４３によって接続されている。さらに、試料注入用シリンジ３１と三方活栓４０とは、配管回路４３によって接続されている。
【０１５２】
これにより、結果として、細胞分離フィルター３３、試料注入用シリンジ３１、洗浄用シリンジ３２、およびバッグ１１は、互いに接続されている。
【０１５３】
上記構成によれば、試料注入用シリンジ３１から、細胞含有試料を注入すると、三方活栓４０および三方活栓４１を経由して、細胞分離フィルター３３に該試料溶液を流入させることができる。
【０１５４】
そして、細胞分離フィルター３３では、上記細胞含有試料に含有される特定の細胞は捕捉され、上記細胞含有試料に含有される夾雑物は、三方活栓４２を経由して、廃液バッグ３５に流入（排出）させることができる。
【０１５５】
また、上記構成によれば、細胞分離フィルター３３に特定の細胞が捕捉された状態で、洗浄用シリンジ３２から、洗浄液を注入すると、三方活栓４０および三方活栓４１を経由して、細胞分離フィルター３３に該洗浄液を流入させることができる。
【０１５６】
これにより、細胞分離フィルター３３には、上記細胞含有試料を流入させたときと同じ向きに、上記洗浄液が流入することになる。そのため、細胞分離フィルター３３内の夾雑物を洗い流し、上記洗浄液は、三方活栓４２を経由して、廃液バッグ３５に流入（排出）させることができる。
【０１５７】
さらに、上記構成によれば、細胞分離フィルター３３に特定の細胞が捕捉され、細胞分離フィルター３３内の夾雑物が洗い流された状態で、回収用シリンジ３４から細胞回収液を注入すると、三方活栓４２を経由して、細胞分離フィルター３３に該細胞回収液を流入させることができる。
【０１５８】
その結果、細胞分離フィルター３３には、上記細胞含有試料を流入させたときとは逆向きに、上記細胞回収液が流入することになる。そのため、細胞分離フィルター３３に捕捉された特定の細胞を細胞分離フィルター３３から流出させ、三方活栓４１を経由して、バッグ１１に、該特定の細胞を流入させることができる。
【０１５９】
細胞含有組成物製造器具５のバッグ１１には、細胞分離フィルター３３から流出した細胞が流入する。混合容器３（より具体的には、バッグ１１）内に流入した細胞は、上説したように、細胞支持体と混合され、細胞含有組成物を調製することができる。
【０１６０】
混合容器３については、上説したので、ここでは、その詳細な説明は省略する。また、本実施形態では、細胞含有組成物製造器具５は、混合容器３を備えているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、上説した本発明にかかる細胞含有組成物調製容器であれば、いかなる形態のもの（例えば、混合容器２）を備えていてもよい。
【０１６１】
また、本実施形態では、図４に示すように、細胞回収容器１８から排出された廃液を回収するための廃液バッグ３８を設けているが、廃液バッグ３８を設けない構成としてもよい。
【０１６２】
このように、細胞含有組成物製造器具５によれば、細胞含有試料から、特定の細胞を分離し、さらに、分離した特定の細胞と細胞支持体１２と混合することを、閉鎖系内で、一連の操作として行うことができる。
【０１６３】
換言すれば、回収用シリンジ３４から細胞回収液を注入することによって、細胞分離フィルター３３に捕捉した特定の細胞を混合容器３に回収し、特定の細胞以外の不要成分（不要な細胞を含む）を廃液バッグ３８に廃棄するという一連の細胞回収過程と、回収した細胞と細胞支持体１２との混合を閉鎖的な系で行うことができる。
【０１６４】
したがって、無菌性を保ったまま、すなわち、外部からのコンタミネーションを防止しながら、細胞含有組成物を簡便かつ容易に製造することができる。
【０１６５】
また、上記構成によれば、遠心分離機等の大型機器を用いることなく、特定の細胞を混合容器３内に回収し、混合容器３内で、細胞含有組成物を調製することができる。
【０１６６】
さらに、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を多量の細胞回収液を用いて流出させたとしても、不要な（過剰な）細胞回収液を廃液バッグ３８に回収することができる。それゆえ、多量の細胞回収液が混合容器３内に回収され、得られる細胞含有組成物の液量が増加することを防止することができる。
【０１６７】
細胞含有組成物製造器具５において、細胞分離フィルター３３は、特定の細胞を捕捉し、不必要な夾雑物を通過させることが可能なものである。ここでいう「夾雑物」とは、目的細胞以外の細胞、例えば、赤血球、血小板、リンパ球等が意図される。
【０１６８】
細胞分離フィルター３３の形態は特に限定されるものではなく、任意の大きさ、形状の細胞分離材を、少なくとも２つの口をもつ容器に充填したものであってもよいし、容器等に充填していない細胞分離材そのものであってもよい。
【０１６９】
本実施形態では、細胞分離フィルター３３は、フィルター構造を有する細胞分離材を容器内に充填したものであることが好ましい。この場合、細胞分離材は、上記容器に圧縮して充填されていてもよいし、圧縮せずに充填されていてもよい。
【０１７０】
より具体的には、例えば、不織布状の細胞分離材を、充填した状態で厚みが０．１ｃｍ〜５ｃｍ、好ましくは、０．１５ｃｍ〜４ｃｍ、より好ましくは０．２ｃｍ〜３ｃｍとなるように、上記容器に充填したものを細胞分離フィルター３３として好適に用いることができる。
【０１７１】
このような構成の細胞分離フィルター３３によれば、赤血球、白血球、血小板等を効率よく除去した上で、細胞を高い回収率で回収することができる。
【０１７２】
また、上記細胞分離材として、ロール状の細胞分離材を用いる場合、上記容器に該ロール状の細胞分離材を充填し、ロールの内側から外側に向けて体液を流して、細胞を捕捉する形態としてもよいし、ロールの外側から内側に向けて体液を流して、細胞を捕捉する形態としてもよい。
【０１７３】
細胞分離材を充填する容器は、特に限定されるものではなく、球、コンテナ、カセット、バッグ、チューブ、カラム等、任意の形態をとりうる。好ましい具体例としては、例えば、容量約０．１ｍｌ〜１０００ｍｌ程度、直径約０．１ｃｍ〜１５ｃｍ程度の透明または半透明の円柱状容器、あるいは一片の長さ０．１ｃｍ〜２０ｃｍ程度の正方形あるいは長方形で、厚みが０．１ｃｍ〜５ｃｍ程度の四角柱状の容器等を挙げることができる。
【０１７４】
上記細胞分離材は、細胞支持体や特定の細胞は通過せず、液体成分を通過させる濾過材であればよい。具体的には、白血球および赤血球を含む試料を通液したとき、白血球の６０％〜９０％を通過させ、かつ、赤血球の９０％以上を通過させることが好ましい。
【０１７５】
上記細胞分離材の材質としては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、高密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン等のポリオレフィン、ポリエステル、塩化ビニル、ポリビニルアルコール、塩化ビニリデン、レーヨン、ビニロン、ポリスチレン、アクリル（ポリメチルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリアクロニトリル、ポリアクリル酸、ポリアクリレート等）、ナイロン、ポリウレタン、ポリイミド、アラミド、ポリアミド、キュプラ、ケブラー、カーボン、フェノール、テトロン、パルプ、麻、セルロース、ケナフ、キチン、キトサン、ガラス、綿等を挙げることができる。
【０１７６】
中でも、ポリエステル、ポリスチレン、アクリル、レーヨン、ポリオレフィン、ビニロン、ナイロン、およびポリウレタン等の合成高分子を好適に用いることができる。
【０１７７】
上記細胞分離材は、これらの材質のうち、単一の材質からなってもよいし、複数の材質を組み合わせた複合材からなってもよい。
【０１７８】
２種以上の合成高分子を組み合わせて用いる場合、その組み合わせは特に限定されるものではないが、ポリエステルとポリプロピレンとの組み合わせ、レーヨンとポリオレフィンとの組み合わせ、または、ポリエステルとレーヨンとビニロンとの組み合わせを好適に用いることができる。
【０１７９】
２種以上の合成高分子を組み合わせて繊維とする場合、具体的には、例えば、１本の繊維が異成分同士の合成高分子よりなる繊維、あるいは異成分同士が剥離分割した分割繊維でもよい。また、成分の異なる合成高分子単独よりなる繊維をそれぞれ複合化した繊維であってもよい。ここでいう「複合化した繊維」とは、２種以上の繊維を混在させることにより構成した繊維、または、合成高分子単独よりなる繊維をそれぞれ張り合わせた繊維等が意図される。
【０１８０】
上記細胞分離材の形態は特に限定されるものではないが、本発明では、フィルター構造を有する細胞分離材を容器内に充填したものを細胞分離フィルター３３として用いることが好ましいことから、上記細胞分離材の形態は、上記容器に収納できるものであることが好ましい。
【０１８１】
具体的には、例えば、連通孔構造の多孔質体、繊維の集合体、織物等を挙げることができる。中でも、繊維で構成されることが好ましく、不織布であることがより好ましい。
【０１８２】
また、上記細胞分離材は、上記例示した材質に対して、細胞分離材としての性能を向上させるための処理が施されたものであってもよい。
【０１８３】
このような処理としては、具体的には、例えば、（１）親水化処理、（２）細胞付着性タンパク質や、細胞上に特異的に発現している特異的抗原に対する抗体の固定化処理を挙げることができる。
【０１８４】
上記親水化処理により、細胞以外の細胞の非特異的な捕捉を抑制することができる。また、体液が細胞分離フィルター３３内を通過する際、特定の領域の細胞分離材に偏って通過して、細胞の回収率が低下することを防止することができる。
【０１８５】
また、上記特定のタンパク質の固定化処理によれば、細胞の細胞分離材への付着性をより向上させることができる。
【０１８６】
なお、上記親水化処理や、特定のタンパク質の固定化処理の具体的な方法については特に限定されるものではなく、従来公知の方法を用いればよい。また、細胞分離材を性能を向上させる処理については、例えば、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１８７】
細胞分離フィルター３３は細胞の分離に用いられるため、上記細胞分離材は、孔が通液方向と平行に連通している形態とすることが好ましい。
【０１８８】
また、細胞分離材が繊維である場合、その繊維径が３μｍより小さいと、細胞分離材と白血球との相互作用が高まり、夾雑物（換言すれば、不要細胞）の除去効率が低くなる傾向がある。一方、繊維径が４０μｍより大きいと、有効接触面積の低下やショートパスが起こりやすくなり、細胞の回収率が低下する傾向がある。
【０１８９】
したがって、細胞分離材が繊維である場合の繊維径は、３μｍ〜４０μｍであることが好ましく、５μｍ〜３５μｍであることがより好ましく、５μｍ〜３０μｍであることがさらに好ましい。このような繊維径とすれば、細胞と細胞分離材との相互作用を上げ、細胞の収率を向上させることができる。
【０１９０】
さらに、細胞分離材が繊維である場合、目開きが３μｍより小さいと、夾雑物の除去効率が低下する傾向がある。一方、上記目開きが１２０μｍより大きいと、細胞の捕捉が困難となる傾向がある。
【０１９１】
したがって、上記目開きは、短径が３μｍ以上で、長径が１２０μｍ以下であることが好ましく、短径が５μｍ以上で、長径が８０μｍ以下であることがより好ましく、短径が５μｍ以上で、長径が５０μｍ以下であることがさらに好ましい。このような目開きとすれば、赤血球等の比較的大きな夾雑物を高い除去効率で除去するとともに、高い回収率で細胞を捕捉することができる。
【０１９２】
なお、ここでいう「細胞分離材が繊維である場合の繊維の目開き」は、下記の方法により求めることができる。まず、細胞分離材が繊維である場合の繊維を走査型電子顕微鏡（以下、「ＳＥＭ」ともいう）にて写真撮影する。次に、そのＳＥＭ画像を用いて、異なる２本以上の繊維が交差することにより形成される実質的な孔の長径、および短径を画像解析装置にて５０ポイント以上測定し、それぞれの平均値を求める。これにより、上記目開きの短径および長径をそれぞれ測定することができる。
【０１９３】
なお、長径は実質的な孔の２点間の最長の距離を、短径は長径を求めた際の２点間の距離の中央値を通り、実質的に孔に接する最短の距離をいう。
【０１９４】
細胞分離フィルター３３において、細胞分離材の密度Ｋ（つまり、目付（ｇ／ｍ２）／厚み（ｍ））は、１．０×１０４≦Ｋ≦１．０×１０６であることが好ましく、２．５×１０４≦Ｋ≦７．５×１０５であることがより好ましく、５．０×１０４≦Ｋ≦５．０×１０５であることがさらに好ましく、５．０×１０４≦Ｋ≦２．０×１０５であることが特に好ましい。このような密度であれば、赤血球、白血球、血小板等を高い除去効率で除去できるうえ、細胞を高い回収率で回収することができる。
【０１９５】
なお、密度Ｋは、つまり、目付（ｇ／ｍ２）／厚み（ｍ）を示すが、換言すれば、重量（ｇ）／単位体積（ｍ３）と表すこともできる。したがって、密度Ｋは、細胞分離材の単位体積（ｍ３）当りの重量（ｇ）を測定することにより求めることができる。
【０１９６】
なお、細胞分離フィルター３３は、上記容器を含まず、細胞分離材のみからなる構成とすることもできる。その場合、具体的には、上記細胞分離材を成型したフィルター、多孔質体、中空糸、メッシュ等を挙げることができる。
【０１９７】
細胞分離フィルター３３は、以上説示した通りであるが、細胞分離フィルター３３の構成については、例えば、国際公開公報ＷＯ２００７／０４６５０１（２００７年４月２６日公開）の内容も本明細書に参考として援用される。
【０１９８】
細胞含有組成物製造器具５において、細胞分離フィルター３３には、細胞含有試料を注入する。より具体的には、細胞含有試料を入れた試料注入用シリンジ３１のプランジャーを、手や機械を用いて押して、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する。
【０１９９】
この際、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する注入速度（換言すれば、通液速度）は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよい。
【０２００】
具体的には、例えば、細胞分離フィルター３３として、フィルター構造を有する細胞分離材が充填された細胞分離器を用いる場合、細胞分離材の厚さに対する細胞含有試料の通過速度（線速）として、０．１ｍｍ／ｍｉｎ〜１０００ｍｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、０．５ｍｍ／ｍｉｎ〜５００ｍｍ／ｍｉｎとすることがより好ましく、１ｍｍ／ｍｉｎ〜２５０ｍｍ／ｍｉｎとすることがさらに好ましい。
【０２０１】
線速が０．１ｍｍ／ｍｉｎより低いと処理時間が長期化する傾向がある。一方、１０００ｍｍ／ｍｉｎより高いと、細胞含有試料の流水圧により、コロニー形成が可能な細胞が細胞分離フィルター３３に捕捉されにくくなる傾向がある。
【０２０２】
しかし、上記線速範囲であれば、処理時間が長期化することなく、また、効率よく細胞を捕捉することができる。
【０２０３】
試料注入用シリンジ３１の材質や形状は、特に限定されるものではなく、従来公知のあらゆるシリンジ、好ましくは医療用シリンジを用いることができる。
【０２０４】
本実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具５では、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入するために、試料注入用シリンジ３１を備えているが、本発明はこれに限定されない。すなわち、試料注入用シリンジ３１に代えて、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入する方法に応じて、あらゆる試料注入用具を用いることができる。
【０２０５】
具体的には、例えば、試料注入用シリンジ３１に代えて、任意の容器（例えば、バッグ）を用い、細胞含有試料を該任意の容器にプールして、自然落下により、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入することができる。また、細胞含有試料を入れた任意の容器から、ポンプ等を用いて、細胞分離フィルター３３に細胞含有試料を注入してもよい。
【０２０６】
洗浄用シリンジ３２は、細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入するためのものである。洗浄用シリンジ３２によれば、細胞含有試料を流した方向と同方向から、細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入することができる。それゆえ、細胞分離フィルター３３中に溜まっている夾雑物を、細胞分離フィルター３３から洗い流すことができる。
【０２０７】
洗浄用シリンジ３２の材質や形状は、特に限定されるものではなく、従来公知のあらゆるシリンジ、好ましくは医療用シリンジを用いることができる。
【０２０８】
細胞分離フィルター３３に洗浄液を注入（換言すれば、通液）する注入速度は、特に限定されなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよい。
【０２０９】
具体的には、例えば、細胞分離フィルター３３として、フィルター構造を有する細胞分離材が充填された細胞分離器を用いる場合、細胞分離材の厚さに対する洗浄液の通過速度（線速）として、０．１ｍｍ／ｍｉｎ〜１０００ｍｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、０．５ｍｍ／ｍｉｎ〜５００ｍｍ／ｍｉｎとすることがより好ましく、１ｍｍ／ｍｉｎ〜２５０ｍｍ／ｍｉｎとすることがさらに好ましい。
【０２１０】
線速が０．１ｍｍ／ｍｉｎより低いと処理時間が長期化する傾向がある。一方、１０００ｍｍ／ｍｉｎより高いと、洗浄液の流水圧により、必要な有用な細胞が細胞分離フィルター３３から流出する可能性がある。
【０２１１】
しかし、上記線速範囲であれば、処理時間が長期化することなく、また、必要な有用な細胞を細胞分離フィルター３３から流出させることなく、細胞分離フィルター３３中に溜まっている夾雑物を、細胞分離フィルター３３から流出させることができる。
【０２１２】
また、細胞分離フィルター３３に注入する洗浄液の量は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の容積に応じて適宜変更すればよい。具体的には、細胞分離フィルター３３の容積の１倍量〜１００倍量の洗浄液を注入することが好ましく、１０倍量〜１００倍量の洗浄液を注入することがより好ましい。
【０２１３】
上記の量の洗浄液を注入すれば、最終的に得られる細胞含有組成物を治療用として人体に投与する場合であっても、人体に悪影響を与えない程度にまで、夾雑物を除去することができる。
【０２１４】
なお、上記洗浄液は、特に限定されるものではなく、細胞に対して負の影響を与えない溶液であればよい。具体的に、例えば、生理的食塩液やリンゲル液など注射用剤として一般的に用いられる溶液、リン酸緩衝液等の緩衝液、αＭＥＭ培地やＤＭＥＭ培地等の細胞培養用の培地等を挙げることができる。
【０２１５】
これら例示した溶液の中でも、細胞への負の影響が小さいことから、細胞培養用培地や生理食塩水を好ましく用いることができる。
【０２１６】
回収用シリンジ３４は、細胞回収液を細胞分離フィルター３３に注入するためのものである。回収用シリンジ３４によれば、細胞含有試料を注入した方向とは逆方向から、細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入することができる。それゆえ、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を、細胞分離フィルター３３から流出させることができる。
【０２１７】
細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入（換言すれば、通液）する注入速度は、特に限定されなく、細胞分離フィルター３３の形態に応じて適した注入速度とすればよいが、可能な範囲で、高速で注入することが好ましい。
【０２１８】
具体的には、例えば、細胞分離材の厚さに対する細胞回収液の通過速度（線速）として、５０ｃｍ／ｍｉｎ〜５００ｃｍ／ｍｉｎとすることが好ましく、１００ｃｍ／ｍｉｎ〜５００ｃｍ／ｍｉｎとすることがより好ましい。上記流速範囲によれば、細胞の回収率を向上させることができる。
【０２１９】
このような線速範囲で、細胞分離フィルター３３に対して細胞回収液を注入する場合、例えば、細胞回収液入れた回収用シリンジ３４のプランジャーを、手や機械を用いて勢いよく押すことにより上記線速を実現することができる。
【０２２０】
細胞分離フィルター３３に注入する細胞回収液の量は、特に限定されるものではなく、細胞分離フィルター３３の容積に応じて適宜変更すればよい。具体的には、細胞分離フィルター３３の容積の１倍量〜１００倍量の細胞回収液を注入することが好ましく、１０倍量〜１００倍量の細胞回収液を注入することがより好ましい。
【０２２１】
上記の量の細胞回収液を注入すれば、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を確実に、回収することができる。
【０２２２】
こうして細胞分離フィルター３３から流出した細胞を含む細胞回収液は、混合容器３に回収される。
【０２２３】
なお、上記細胞回収液は、特に限定されるものではなく、細胞に対して負の影響を与えない溶液であればよい。具体的に、例えば、生理的食塩液やリンゲル液など注射用剤として一般的に用いられる溶液、リン酸緩衝液等の緩衝液、αＭＥＭ培地やＤＭＥＭ培地等の細胞培養用の培地等を挙げることができる。
【０２２４】
これら例示した溶液の中でも、細胞への負の影響が小さいことから、細胞培養用培地や生理食塩水を好ましく用いることができる。
【０２２５】
また、上記細胞回収液には、細胞保護の観点から、タンパクを添加してもよい。上記物質は特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、血漿、血清、アルブミン等を挙げることができる。
【０２２６】
さらに、上記細胞回収液には、粘張度を上げるための物質を添加してもよい。上記物質は特に限定されるものではないが、具体的には、例えば、アルブミン、フィブリノーゲン、グロブリン、デキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、ヒドロキシエチルセルロース等を挙げることができる。
【０２２７】
このような物質を添加することにより、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞の回収率を向上させることができる。
【０２２８】
洗浄用シリンジ３２、および回収用シリンジ３４の材質並びに形状は特に限定されるものでないが、試料注入用シリンジ３１と同様のものを用いることができる。また、試料注入用シリンジ３１と同様に、細胞分離フィルター３３に洗浄液または細胞回収液を注入する方法に応じて、シリンジ以外のものを代用することができる。
【０２２９】
廃液バッグ３５は、試料注入用シリンジ３１および洗浄用シリンジ３２から注入された細胞含有試料および洗浄液のうち、細胞分離フィルター３３を通過した成分を回収するものである。廃液バッグ３５の材質および形状は特に限定されるものではなく、医療用途に一般的に用いられる廃液バッグを好適に用いることができる。
【０２３０】
また、本実施形態では、廃液バッグ３５を備えているが本発明はこれに限定されない。すなわち、試料注入用シリンジ３１および洗浄用シリンジ３２から注入された細胞含有試料および洗浄液のうち、細胞分離フィルター３３を通過した成分を回収することができるものであれば、バッグに限らず、あらゆる容器を代用することができる。
【０２３１】
三方活栓４０〜４２は、それぞれ、３つの口をもち、これら３つの口の任意の２つの口を連通させることが可能なものであればよく、その材質等は特に限定されるものではない。具体的には、例えば、医療用途で用いられるあらゆる三方活栓を用いることができる。
【０２３２】
さらに、配管回路４３〜４９もまた、特に限定されるものではなく、各部材間を、溶液が漏れないように接続できるものであればよい。その材質や形状についても特に限定されるものではない。具体的には、例えば、医療用途で用いられるあらゆるチューブ類を好適に用いることができる。
【０２３３】
廃液バッグ３８は、細胞回収容器１８のフィルター１９を通過した成分を回収するものである。廃液バッグ３８としては、具体的には、廃液バッグ３５と同様のものを用いればよい。
【０２３４】
本発明にかかる細胞含有組成物製造器具は、上記構成を備えているため、特定の細胞と細胞支持体とを含む細胞含有組成物を、無菌的に、簡便かつ容易に製造することができる。
【０２３５】
本発明には、このような本発明にかかる細胞含有組成物製造器具を用いて、細胞含有組成物を製造する方法、および該方法により製造された細胞含有組成物も含まれる。
【０２３６】
本発明にかかる細胞含有組成物の製造方法としては、具体的には、（１）細胞を細胞分離フィルター３３で捕捉する工程と、細胞分離フィルター３３に捕捉された細胞を、細胞分離フィルター３３に細胞回収液を注入することによって、細胞分離フィルター３３から流出させ、細胞分離フィルター３３から流出した細胞を含む細胞回収液を混合容器１に回収する工程と、混合容器１において、細胞を濃縮した後、細胞と細胞支持体１２とを混合する工程とを含む構成、（２）上記細胞捕捉工程と、細胞回収工程との間に、細胞分離フィルター３３に対して洗浄液を注入し、細胞分離フィルター３３を洗浄する工程をさらに含む構成等を挙げることができる。
【０２３７】
ここで、図５を参照しながら、細胞含有組成物製造器具５を用いて、細胞含有組成物を製造する方法について、より具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。本明細書に鑑みた当業者であれば、本発明にかかる細胞含有組成物の製造方法の他の構成を容易に理解することができる。
【０２３８】
細胞含有組成物製造器具５を用いて、細胞含有組成物を製造する場合、具体的には、例えば、図５に示すように、まず、体液等の細胞含有試料を含む試料注入用シリンジ３１を、細胞含有組成物製造器具５にセットする。
【０２３９】
次に、試料注入用シリンジ３１から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４０】
そして、試料注入用シリンジ３１から細胞含有試料（例えば、体液）を細胞分離フィルター３３に注入する。このとき、細胞分離フィルター３３を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３５に排出される。
【０２４１】
次に、洗浄用シリンジ３２から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４２】
そして、洗浄用シリンジ３２から洗浄液を細胞分離フィルター３３に注入する。このとき、細胞分離フィルター３３を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３５に排出される。
【０２４３】
次に、回収用シリンジ３４から注入された溶液が廃液バッグ３５に排出されるように、三方活栓４０〜４２を調整する。
【０２４４】
そして、回収用シリンジ３４から細胞回収液を細胞分離フィルター３３に注入する。これにより、細胞分離フィルター３３に捕捉されていた細胞は、細胞回収液と共に、混合容器３に流入する。このとき、細胞回収容器１８内のフィルター１９を通過した液（通過液）は、廃液バッグ３８に排出され、必要な細胞は、フィルター１９に捕捉され、結果として細胞回収容器１８に回収される。
【０２４５】
次に、バッグ１１内の全て、もしくは一部の仕切り１３を除去（開放）し、細胞支持体１２を細胞回収容器１８内に添加する。そして、細胞回収容器１８内で、細胞と細胞支持体１２とを混合し、細胞含有組成物を調製することができる。
【０２４６】
こうして調製された細胞含有組成物は、細胞回収容器１８を細胞含有組成物製造器具５から取り外すことにより、細胞回収容器１８から細胞含有組成物を取り出すことができる。
【０２４７】
なお本発明は、以上説示した各構成に限定されるものではなく、特許請求の範囲に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【産業上の利用可能性】
【０２４８】
以上のように、本発明では、骨再生に関わる細胞を含む試料からの細胞の分離し、該細胞を培養することなく、そのまま、閉鎖系内で、細胞支持体と混合する。そのため、骨再生治療に利用可能な細胞含有組成物を簡便かつ迅速に製造することができる。したがって、本発明は、骨再生に関わる医療用途および医薬品用途に広く用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【０２４９】
【図１】図１は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図２】図２は、本発明の別の実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図３】図３は、本発明のさらに別の実施形態にかかる細胞含有組成物調製容器を示す断面図である。
【図４】図４は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具の外観を示す側面図である。
【図５】図５は、本発明の一実施形態にかかる細胞含有組成物製造器具を用いた細胞含有組成物の製造工程を示す図である。
【符号の説明】
【０２５０】
１ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
２ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
３ 混合容器（細胞含有組成物調製容器）
５ 細胞含有組成物製造器具
１０ 空間
１１ バッグ（容器）
１２ 細胞支持体
１３ 仕切り（仕切り部）
１４ 空間
１５ 流入口（流入部）
１６ 流出口（流出部）
１８ 細胞回収容器（細胞回収部）
１９ フィルター
２８ 溶液（細胞と細胞支持体とを混合するための溶液）
３１ 試料注入用シリンジ（細胞分離部、試料注入部）
３２ 洗浄用シリンジ（細胞分離部、洗浄液注入部）
３３ 細胞分離フィルター（細胞分離部、細胞捕捉部）
３４ 回収用シリンジ（細胞分離部、細胞回収液注入部）
３５ 廃液バッグ（細胞分離部、廃液回収部）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞を流入させるための流入部を有する容器と、
該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部と、を備え、
上記仕切り部の除去により、上記容器内の区画された空間は連結可能であって、
上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられており、
上記仕切り部によって区画された空間のうち、少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されていることを特徴とする細胞含有組成物調製容器。
【請求項２】
上記容器は、流出部をさらに備え、
上記流入部および流出部は、ともに、上記仕切り部によって区画された１つの同一空間に設けられており、
該流入部および流出部が設けられた空間には、上記細胞支持体は封入されていないことを特徴とする請求項１に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項３】
細胞回収部をさらに備え、
該細胞回収部は、上記流出部と接続されていることを特徴とする請求項２に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項４】
上記細胞回収部は、該細胞回収部の内部の空間を少なくとも２つに区画するフィルターを備えていることを特徴とする請求項３に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項５】
上記容器は、合成樹脂からなることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項６】
上記仕切り部は、上記容器の壁面同士を熱圧着させることにより形成されてなることを特徴とする請求項５に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項７】
上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記細胞支持体が封入されている空間とは異なる少なくとも１つの空間に、上記細胞と上記細胞支持体とを混合するための溶液が封入されていることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項８】
上記溶液が封入されている空間は、さらに、上記流入部が設けられている空間と
は異なることを特徴とする請求項７に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項９】
上記溶液は、培地、生理食塩液、血漿、および血清からなる群より選択される少なくとも１つの溶液であることを特徴とする請求項７または８に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１０】
上記細胞支持体は、無機材料、天然高分子材料、合成高分子材料、金属材料、自家骨またはこれらの２種以上を組み合わせた複合材を含むことを特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１１】
上記細胞は、幹細胞であることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器と、
細胞分離部とを備え、
該細胞分離部は、上記流入部と接続されていることを特徴とする細胞含有組成物製造器具。
【請求項１３】
上記細胞分離部は、細胞を捕捉するための細胞捕捉部と、
上記細胞捕捉部に細胞回収液を注入し、該細胞捕捉部に捕捉された上記細胞を該細胞捕捉部から流出させるための細胞回収液注入部とを備え、
上記細胞含有組成物調製容器は、上記細胞捕捉部から流出した上記細胞を含む細胞回収液を回収するためのものであることを特徴とする請求項１２に記載の細胞含有組成物製造器具。
【請求項１４】
上記細胞を含む試料を上記細胞捕捉部に注入するための試料注入部をさらに備え、
上記試料注入部は、
上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記試料を注入するものであることを特徴とする請求項１２または１３に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１５】
上記試料注入部が上記細胞捕捉部に上記試料を注入したとき、上記試料のうち、上記細胞捕捉部を通過した成分を回収するための廃液回収部をさらに備えることを特徴とする請求項１４に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１６】
上記細胞捕捉部を洗浄するための洗浄液を上記細胞捕捉部に注入するための洗浄液注入部をさらに備え、
上記洗浄液注入部は、
上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記洗浄液を注入することを特徴とする請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１７】
上記細胞捕捉部は、フィルター構造を有する細胞分離材を含むことを特徴とする請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の細胞含有組成物製造器具。
【請求項１】
細胞を流入させるための流入部を有する容器と、
該容器内の空間を区画している少なくとも１つの仕切り部と、を備え、
上記仕切り部の除去により、上記容器内の区画された空間は連結可能であって、
上記流入部は、上記仕切り部によって区画された空間のうちの１つの空間に設けられており、
上記仕切り部によって区画された空間のうち、少なくとも１つの空間に、細胞支持体が封入されていることを特徴とする細胞含有組成物調製容器。
【請求項２】
上記容器は、流出部をさらに備え、
上記流入部および流出部は、ともに、上記仕切り部によって区画された１つの同一空間に設けられており、
該流入部および流出部が設けられた空間には、上記細胞支持体は封入されていないことを特徴とする請求項１に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項３】
細胞回収部をさらに備え、
該細胞回収部は、上記流出部と接続されていることを特徴とする請求項２に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項４】
上記細胞回収部は、該細胞回収部の内部の空間を少なくとも２つに区画するフィルターを備えていることを特徴とする請求項３に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項５】
上記容器は、合成樹脂からなることを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項６】
上記仕切り部は、上記容器の壁面同士を熱圧着させることにより形成されてなることを特徴とする請求項５に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項７】
上記仕切り部によって区画された空間のうち、上記細胞支持体が封入されている空間とは異なる少なくとも１つの空間に、上記細胞と上記細胞支持体とを混合するための溶液が封入されていることを特徴とする請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項８】
上記溶液が封入されている空間は、さらに、上記流入部が設けられている空間と
は異なることを特徴とする請求項７に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項９】
上記溶液は、培地、生理食塩液、血漿、および血清からなる群より選択される少なくとも１つの溶液であることを特徴とする請求項７または８に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１０】
上記細胞支持体は、無機材料、天然高分子材料、合成高分子材料、金属材料、自家骨またはこれらの２種以上を組み合わせた複合材を含むことを特徴とする請求項１〜９のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１１】
上記細胞は、幹細胞であることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製容器と、
細胞分離部とを備え、
該細胞分離部は、上記流入部と接続されていることを特徴とする細胞含有組成物製造器具。
【請求項１３】
上記細胞分離部は、細胞を捕捉するための細胞捕捉部と、
上記細胞捕捉部に細胞回収液を注入し、該細胞捕捉部に捕捉された上記細胞を該細胞捕捉部から流出させるための細胞回収液注入部とを備え、
上記細胞含有組成物調製容器は、上記細胞捕捉部から流出した上記細胞を含む細胞回収液を回収するためのものであることを特徴とする請求項１２に記載の細胞含有組成物製造器具。
【請求項１４】
上記細胞を含む試料を上記細胞捕捉部に注入するための試料注入部をさらに備え、
上記試料注入部は、
上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記試料を注入するものであることを特徴とする請求項１２または１３に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１５】
上記試料注入部が上記細胞捕捉部に上記試料を注入したとき、上記試料のうち、上記細胞捕捉部を通過した成分を回収するための廃液回収部をさらに備えることを特徴とする請求項１４に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１６】
上記細胞捕捉部を洗浄するための洗浄液を上記細胞捕捉部に注入するための洗浄液注入部をさらに備え、
上記洗浄液注入部は、
上記細胞回収液注入部が上記細胞捕捉部に対して上記細胞回収液を注入する方向とは逆方向に、上記細胞捕捉部に対して上記洗浄液を注入することを特徴とする請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の細胞含有組成物調製器具。
【請求項１７】
上記細胞捕捉部は、フィルター構造を有する細胞分離材を含むことを特徴とする請求項１２〜１６のいずれか１項に記載の細胞含有組成物製造器具。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００９−１０２０４９（Ｐ２００９−１０２０４９Ａ）
【公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２７６８７９（Ｐ２００７−２７６８７９）
【出願日】平成１９年１０月２４日（２００７．１０．２４）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月２４日（２００７．１０．２４）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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