組成物および方法、およびそれらに関する使用
本発明はライフサイエンスおよび食品、飼料、または医薬品工業の分野に関する。特に本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。本発明はまた薬剤としての使用のための組成物に関する。さらに本発明は、呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用に関する。またさらに本発明は、成人における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。さらに本発明は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための組成物、および呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。さらに本発明は、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を治療または予防するための方法、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための方法、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための方法、および、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はライフサイエンスおよび食品、飼料、または医薬品工業の分野に関する。特に本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。本発明はまた薬剤としての使用のための組成物に関する。さらに本発明は、呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用に関する。またさらに本発明は、成人における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。さらに本発明は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための組成物、および呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。さらに本発明は、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を治療または予防するための方法、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための方法、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための方法、および、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクスは、動脈性高血圧症、血管性疾患、アレルギー、癌、アトピー性疾患、ウイルス性疾患または感染症、虫歯、ＩＢＳ、ＩＢＤ、粘膜炎、消化管透過性障害、肥満、代謝症候群、酸化ストレスおよび腹痛などの様々な疾患の予防および治療のために使用され続けている。
【０００３】
初期の下痢症研究（ｅａｒｌｙ ｄｉａｒｒｈｅａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ）に基づき、プロバイオティクスは消化管における感染症を軽減することが知られている。現在の科学的データは、病気の予防および治療と同様にウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）におけるプロバイオティクスの効果は、消化管において微生物叢を改変する能力および病原体を退去させる能力に基づく、という仮説を支持している。しかしながら現在、特定のプロバイオティクスがさらに消化管外の感染症も軽減するかもしれないという証拠が増加している。
【０００４】
口腔内および消化管内並びに気道内の粘膜上皮表面は、ウイルスなどの感染因子と絶えず戦っている。これらの表面上の共生微生物叢は、代謝物質および制御物質によって、かつ、粘膜上の栄養素および利用できる接着部位を競合することによって、病原菌から身体を保護する。微生物叢は一生涯の間に発達し変化するが、通常、健常者において様々な細菌種を含む。
【０００５】
上気道および下気道に影響を及ぼす急性呼吸器感染症は、その発生率は全ての年齢層において高いが、子供および高齢者の間で最も一般的な健康問題である。これらの呼吸器感染症は、デイケアセンターや仕事における欠席と同様に、毎年、病院における多数の医療訪問や治療期間を引き起こす。最も激しい場合において、呼吸器感染症は高齢者の早期死亡を引き起こすであろう。しかしながら大多数の呼吸器感染症は、一般的な風邪としても知られる、穏やかな自己限定性のウイルス性上気道感染症である。
【０００６】
基本的に健康な子供あるいは成人において呼吸器感染症におけるプロバイオティクスの効果を試験したいくつかの臨床研究がある。就学児における例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉは下気道感染の発生を減少させ（Ｃｏｂｏ Ｓａｎｚ ＪＭ．ら、２００６、Ｎｕｔｒ Ｈｏｓｐ ２１、５４７−５１）、一方で同じプロバイオティクスは高齢の対象において全ての感染症の継続期間を減少させた（Ｔｕｒｃｈｅｔ Ｐ．ら、２００３、Ｊ Ｎｕｔｒ Ｈｅａｌｔｈ Ａｇｉｎｇ ７、７５−７）。さらにミルクに与えられたラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ＬＧＧ）は、合併症および下気道感染症を伴う呼吸器感染症を患う子供の数において１７％の相対的減少を示した（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００１、ＢＭＪ、３２２、１−５）、しかし、マラソン走者においては、ミルクベースの果汁飲料の形式またはカプセル形式で与えられたＬＧＧは呼吸器感染症に効果を有さなかった（Ｋｅｋｋｏｎｅｎ Ｒ．ら、２００７、Ｉｎｔ Ｊ Ｓｐｏｒｔ Ｎｕｔｒ Ｅｘｅｒｃ Ｍｅｔａｂ １７、３５２−３６３）。また、ＬＧＧ、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５（ＬＣ７０５）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ） Ｂｂ９９およびプロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ・サブスピーシーズ・シェルマニイ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ｓｓｐ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ）の組合せは、子供における呼吸器感染症の減少を示したが（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００７、Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ２６、３１４−３２１；Ｋｕｋｋｏｎｅｎ Ｋ．ら、２００８、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２２、８−１２）、高齢者においてはそうではなかった（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００７、博士論文、ｈｔｔｐ：／／ｕｒｎ．ｆｉ／ＵＲＮ：ＩＳＢＮ：９７８−９５２−１０−３８９７−６）。
【０００７】
成人において、例えば、ビタミンおよびミネラルと共にラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）およびビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）を含む栄養補助食品が、呼吸器感染症の発生率を減少させることを示している（Ｗｉｎｋｌｅｒ Ｐ．ら、２００５、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ４３、３１８−２６；ｄｅ Ｖｒｅｓｅ Ｍ．ら、２００５、Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ２４、４８１−９１）。
【０００８】
非合併性の呼吸器感染症は抗生物質によって広く治療される。しかしながら、抗生物質はウイルス性感染症には効果を有さない。それゆえ、例えば一般的な風邪の治療は、主に症状を緩和する薬剤（ｓｙｍｐｔｏｍ−ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ）および解熱剤（ｆｅｖｅｒ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｄｒｕｇｓ）に基づく。いくつかの抗ウイルス薬がインフルエンザウイルスに対して提供されているが、これまで他の一般的な呼吸器ウイルスに対する効果的な抗ウイルス薬は存在しない。それゆえ、効果的な医薬品および治療は呼吸器感染症の予防および治療のためにまだ認可される。
【０００９】
また様々な先行研究において、呼吸器感染症におけるプロバイオティクスの効果は、年齢層（例えば、幼児、子供、成人、高齢者）の間で異なることが示されている。プロバイオティクス効果を有する１つの菌種は、確定した症状を治療することにおいて利用されるかもしれないが、同属または異なる属のいくつかの株を含有するプロバイオティクスは、例えば相乗効果または相加効果によって、さらなる、あるいは異なる利点を提供するかもしれない。それゆえ、好適な量および消費期間と同様に最適なプロバイオティクスまたはそれらの組合せが呼吸器感染症を患っている異なる年齢層のために認可される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、呼吸器感染症の予防および治療のための新規な製品、方法および使用を提供することである。実際に、本発明はこれらの目的のための最適なプロバイオティクスまたはそれらの組合せを提供する。ＬＣ７０５、またはＬＧＧおよびＬＣ７０５の好ましい効果は、呼吸器感染症においてこれまで一度も検出されておらず、さらにＬＧＧは、成人における呼吸器感染症において効果を有することはこれまで一度も示されていなかった。
【００１１】
本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。
【００１２】
またさらに本発明は、薬剤としての使用のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。
【００１３】
またさらに本発明は、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧと併用しての使用に関する。
【００１４】
さらに本発明は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧと併用しての使用に関する。
【００１５】
また本発明は、成人対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。
【００１６】
本発明はまた、成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。
【００１７】
本発明は、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。
【００１８】
本発明は、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。
【００１９】
さらに本発明は、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せに関する。
【００２０】
本発明は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せに関する。
【００２１】
また本発明は、成人対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを記載する。
【００２２】
本発明はまた、成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを記載する。
【００２３】
本発明は、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）に関する。
【００２４】
本発明は、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）に関する。
【００２５】
また本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せを含む組成物の対象への投与を含む、対象において呼吸器感染症を治療または予防する方法に関する。
【００２６】
本発明はまた、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを含む組成物の対象への投与を含む、成人対象において呼吸器感染症を治療または予防する方法を記載する。
【００２７】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せを含む組成物の対象への投与を含む、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させる方法に関する。
【００２８】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含む組成物の対象への投与を含む、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害する方法に関する。
【００２９】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含む組成物の対象への投与を含む、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させる方法に関する。
【００３０】
本発明は、食品、飼料、または医薬品工業におけるさらなる発展のための手段を提供する。またさらに、本発明によって、より効果的で特異的な治療が、呼吸器感染症を患っている患者、例えば異なる年齢層に利用できるようになる。
【００３１】
ＬＧＧ、ＬＣ７０５、またはそれらの組合せは、そのままで、または例えば医薬品または食品などの別の製品の一部として使用できる。本発明のＬＧＧ、ＬＣ７０５または組合せは、抗ウイルスタンパク質（例えば、ＩＰ−１０およびＩＦＮ−α（図１）、Ｍｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ（図２））の発現を増加すること、および、例えばウイルス構成タンパク質の減少によって確かめられる（例えばＮＰおよびＭ１（図５））インフルエンザウイルスの増殖を阻止することにより、ヒトにおいて有利な抗ウイルス効果を有する。
【００３２】
健康、特に呼吸器感染症に対する明確に実証された効果を有し、そのままで、または例えば医薬品または食品もしくは飼料製品のような別の製品の一部として容易に使用できるような形状で生産された新製品を消費者に提供することが、継続的かつ明白に必要である。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、ＬＣ７０５がヒト単球から得られたマクロファージにおける抗ウイルス性ＩＦＮ−α産生を誘導することを示す。ＬＧＧまたはＬＣ７０５でのマクロファージの６時間刺激および２４時間刺激が図において示される。ＬＧＧまたはＬＣ７０５は抗ウイルス性ＩＰ−１０産生を誘導するが、ＬＣ７０５はＬＧＧより多くＩＰ−１０産生を誘導する。
【００３４】
【図２】図２は、ＬＧＧまたはＬＣ７０５がＭｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ産生を活性化することを示す。しかしながらＬＣ７０５はＬＧＧより多くＩＦＮ−α調節型抗ウイルス性タンパク質（Ｍｘ１、Ｍｘ２、ＲＩＧ−Ｉ）産生を活性化する。
【００３５】
【図３】図３は、ＬＧＧ、ＬＣ７０５およびそれらの組合せがＩＬ−１β産生を増加すること（図３Ａ）、ＬＣ７０５がＩＦＮ−αを増加すること（図３Ｂ）、ＬＣ７０５、およびＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せがＴＮＦ−αを増加すること（図３Ｃ）を示す。さらに、図３は、ＬＣ７０５および、ＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せが、インフルエンザＡウイルス（ｉｎｆｌ Ａ）感染の間、ＬＧＧより多く抗ウイルス性炎症活性（ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−α（図３Ａおよび図３Ｃ））を増加することを示す。ＬＣ７０５、およびＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せは、インフルエンザＡウイルス感染の間、ＬＧＧより多くＩＦＮ−α産生を増加する（図３Ｂ）。
【００３６】
【図４】図４は、ＬＧＧ、ＬＣ７０５およびそれらの組合せがインフルエンザＡウイルスのｍＲＮＡ合成を減少させる、すなわち、ウイルスの複製を減少もしくは減速させることを示す。図４Ａは、ＬＣ７０５またはＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せが、ウイルス感染の間、ＮＰ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。図４Ｂは、ＬＧＧ、ＬＣ７０５またはそれらの組合せが、ウイルス感染の間、Ｍ１ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。図４Ｃは、ＬＧＧ、ＬＣ７０５またはそれらの組合せが、ウイルス感染の間、ＮＳ１ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。
【００３７】
【図５】図５は、ＬＧＧまたはＬＣ７０５がインフルエンザＡウイルスの構造タンパク質（ＮＰ、Ｍ１）の産生を減少させることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
発明の詳細な説明
プロバイオティクスは食品工業および飼料工業において長い間利用されているが、未だに、広範囲の症状または病気における、かつ、特定の標的グループに対する、プロバイオティクスの効果を決定する必要がある。本発明はＬＧＧおよびＬＣ７０５が呼吸器感染症におけるプロバイオティクス効果を有するという知見に属する。またＬＣ７０５およびＬＧＧは、抗ウイルス性サイトカインの産生を増大し、かつウイルスの増幅を阻止し、それゆえ呼吸器感染症のリスクを減少するための最適な組合せとして機能する。
【００３９】
プロバイオティクス菌
プロバイオティクスは生きた微生物であり、好ましくはヒトあるいは動物へ適当量を投与した際に宿主のウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）を促進する非病原性の微生物である（Ｆｕｌｌｅｒ Ｒ １９８９、Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ６６、３６５−３７８）。プロバイオティクスは、十分な量を食品または栄養補助食品として消費された場合、宿主へ有益な健康上の利点をもたらす。
【００４０】
ヒトまたは動物におけるプロバイオティクスの栄養機能表示は多くの病気の見込まれる予防および治療を含む。プロバイオティクスの健康促進効果は、例えば腸内細菌叢の平衡化および維持、免疫システムの刺激、および抗発癌活性を含む。
【００４１】
最もよく実証されたプロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧ、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌ． Ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ） ＬＡ１、ラクトバチルス・カゼイ シロタ（Ｌ．ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）およびビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ） Ｂｂ１２を含む。加えて、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５などの多数の他のプロバイオティクスが文献に記載されている。
【００４２】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧ（ＬＧＧ、登録商標ＬＧＧ）株は、もとは米国からの非病原性グラム陽性分離株である（ＵＳ４８３９２８１ Ａ）。ＬＧＧ株は人糞から単離され、ｐＨ３においてよく増殖し、低いｐＨ値でも、また高胆汁酸量でも生存する。この株は、粘膜および上皮細胞の両方へ優れた接着性を示し、かつ消化管でコロニーを形成する。グルコースからの乳酸の収量は良好である：ＭＲＳブロスで生育させた時、この株は１．５−２％の乳酸を産生する。この株はラクトースを発酵せず、それゆえラクトースから乳酸は産生しない。この株は以下の炭水化物：Ｄ−アラビノース、リボース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、サッカロース、トレハロース、メレジトース、ゲンチオビオース、Ｄ−タガトース、Ｌ−フコースおよびグルコン酸塩、を発酵する。この株は１５−４５℃で良好に生育し、最適温度は３０−３７℃である。ＬＧＧは寄託機関Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託番号ＡＴＣＣ ５３１０３で寄託されている。
【００４３】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５（ＬＣ７０５）株もまた、もとはフィンランドからではあるが、非病原性グラム陽性分離株である。ＬＣ７０５はフィンランド特許９２４９８、Ｖａｌｉｏ Ｏｙにおいてより詳細に記載されている。ＬＣ７０５はグラム陽性の鎖状の短桿菌であり；ホモ発酵性であり；弱いタンパク質分解性であり；１５−４５℃でよく成長し；アルギニンからアンモニアを産生せず；カタラーゼ陰性であり；ＭＲＳブロス（ＬＡＢ Ｍ）中で生育する時この株はＬ（＋）立体配置の光学活性を有する１．６％の乳酸を産生し；この株はクエン酸塩を分解して（０．１６９％）ジアセチルおよびアセトインを産生し；この株は少なくとも下記の炭水化物（糖類、糖、糖アルコール）：リボース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、Ｌ−ソルボース、ラムノース、マンニトール、ソルビトール、メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ゲンチオビオース、Ｄ−ツラノースおよびＤ−タガトースを発酵する。ＬＣ７０５は粘膜細胞に弱く接着するが、上皮細胞には中程度に接着する。株の生存性は低ｐＨ値および高胆汁酸量で良好である。株は５％の塩分濃度で良好に、塩分濃度１０％でかなり良好に生存する。ＬＣ７０５は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｕｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭ）に寄託番号ＤＳＭ７０６１で寄託されている。
【００４４】
本発明の１つの実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＧＧである。本発明の別の実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＣ７０５である。本発明の具体的な実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＧＧおよびＬＣ７０５である。
【００４５】
組成物
本発明の組成物はＬＧＧおよびＬＣ７０５プロバイオティクスを含む。プロバイオティクスＬＧＧおよびＬＣ７０５のみが組成物中に含まれる。本発明の組成物は、食品、動物飼料、栄養製品、栄養補助食品、食品原料、健康食品、医薬品および化粧品からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。組成物はまた、例えば毎日の食事もしくは薬剤の都合のよい部分（ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｐａｒｔ）もしくは栄養補助食品として適用できる。本発明の１つの好ましい実施形態において、組成物は医薬品、食品または飼料製品である。本発明の別の実施形態において、組成物は機能性食品、すなわち、何らかの健康促進特性および／または疾患の予防もしくは治療特性を有する食品である。好ましくは、本発明の食品は、乳製品、ベーカリー製品、チョコレートおよび菓子類、砂糖およびガム菓子類、シリアル製品、スナック菓子、ベリーまたは果物ベースの製品、および飲み物／飲料からなる群から選択される。乳製品は、乳、酸乳（ｓｏｕｒ ｍｉｌｋ）、ヨーグルトおよびチーズやスプレッドなどの他の発酵乳製品、粉乳、子供用食品、離乳食、幼児用食品、特殊調製粉乳（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ）、ジュースおよびスープを含むが、これらに限定されるものではない。
【００４６】
本発明の組成物は医薬組成物であってもよく、タブレット（ｔａｂｌｅｔ）、錠剤（ｐｉｌｌ）、丸薬（ｐｅｌｌｅｔ）、カプセル、溶液、乳剤または懸濁剤の形態などの、例えば、固体、半固体、または液体において使用され得る。好ましくは、組成物は経口投与または腸内、吸入もしくは静脈内適用のためのものである。またさらに、対象が呼吸器感染症に感染する前もしくは後に対象へ投与することができる。
【００４７】
プロバイオティクスに加えて、組成物は医薬上または栄養学的に許容され得る、かつ／または技術的に必要とされる担体（例えば、水、グルコースまたはラクトース）、アジュバント、賦形剤、補助賦形剤、防腐剤、安定化剤、増粘剤もしくは着色剤、着香料、結合剤、充填剤、滑沢剤、懸濁化剤、甘味料、香味剤、ゲル化剤、酸化防止剤、保存料、緩衝剤、ｐＨ調整剤、湿潤剤、スターター、または類似の組成物において通常見られる成分を含むことができる。プロバイオティクスではない任意の作用剤も、例えば上述の群から選択することができる。組成物の作用剤、例えば原料または成分は、市販で入手されるか、または技術分野において知られた従来技術のいずれかによって調製される。
【００４８】
本発明の具体的な実施形態において、組成物はＬＧＧおよびＬＣ７０５からなる作用剤および任意にあらゆる非プロバイオティクス性の作用剤を含む。「非プロバイオティクス性の作用剤」とはプロバイオティクスではないあらゆる作用剤を指す。
【００４９】
本発明の組成物は所望の効果を生じるための十分な量においてＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５を含む。本発明の好ましい実施形態において、ＬＧＧおよびＬＣ７０５の割合（細菌数）は同等すなわち１：１である。本発明の別の好ましい実施形態において、ＬＧＧのＬＣ７０５に対する割合（細菌数）は２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または１０：１である。本発明のさらに別の好ましい実施形態において、ＬＣ７０５のＬＧＧに対する割合（細菌数）は２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または１０：１である。
【００５０】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）のプロバイオティクスに加えて、呼吸器感染症の予防および／または治療のために、呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるために、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために、または、抗ウイルス性サイトカインを増加させるために使用される組成物は、他のプロバイオティクスまたは類似の組成物において通常見られる任意の他の作用剤を含んでもよい。
【００５１】
組成物は技術分野において既知の任意の従来法によって製造され得る。ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、例えば、調製と結合して、またはその後、最終生産物の最終加工の間のいずれか一方で、任意の製品に添加または任意の作用剤と混合され得る。
【００５２】
呼吸器感染症および治療
呼吸器感染症は上気道および下気道の両方の感染を含む。上気道感染症は、肺胞を除く鼻から下部呼吸樹への呼吸器粘膜の炎症を含む。それゆえ上気道は、鼻腔（鼻端、洞（ｓｉｎｕｓｅｓ））、咽頭および喉頭を含む。上気道感染症は、一般的な風邪、副鼻腔炎、耳感染症、中耳炎、乳様突起炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭蓋炎、気管炎、喉頭炎および気管支炎からなる群から選択されるが、これらに限定されるものではない。上気道感染症の症状は、鼻閉、咳、鼻炎、鼻詰まり、鼻感冒、咽頭炎、発熱、顔面圧迫感、頭痛、食欲不振および／またはくしゃみを含む。
【００５３】
下気道感染症は、気管、原始気管支および肺を含む。下気道に影響を及ぼす感染症は、肺炎、胸膜炎、気管支炎、細気管支炎および肺気腫からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではなく、症状は、例えば息切れ、衰弱、高熱、咳嗽および／または倦怠感を含む。
【００５４】
多数の細菌種が上気道にコロニーを形成し、一方、下気道には通常、微生物はほとんどないに等しい。上気道感染症または下気道感染症は病原体への暴露および数時間から数日に及ぶ潜伏期間（例えば１−７日間）の後に起こり、かつ、例えば３日間から１０日間あるいはさらに長く（数週間）続く。症状の性質および持続期間は、病原体、病原体の量と同様に対象の年齢および免疫学的状態に依存する。
【００５５】
急性感染症に加え、病原体は慢性感染症もまた引き起こす可能性がある。慢性感染症は通常急性感染症から発展し、数日間から一生涯続く。
【００５６】
ここで使用される「感染症」とは、細胞あるいは組織における病原性微生物の侵入および増殖を指し、すなわち「感染症」は感染された状態に起因する状態もさす。感染症は様々な細胞機構または毒性機構を通して、傷害および疾患の進行を引き起こす可能性がある。しかしながら、全ての感染症が臨床的疾患を導くものではない；症候性疾患は感染者の７５％において発症することが知られる（Ｇｗａｌｔｎｅｙ ＪＭおよびＨａｙｄｅｎ ＦＧ、１９９２、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３２６、６４４−５）。
【００５７】
呼吸器感染症を引き起こす病原体は細菌またはウイルスである可能性がある。場合によっては、感染症はそれら両方の結果である。呼吸器感染症、すなわち上気道および／または下気道感染症を引き起こす細菌またはウイルスは、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、カタラリス菌（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）およびエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）からなる群から選択することができる。また、気道に影響を及ぼす任意の他の細菌あるいはウイルスも上述の群へ含まれ得る。本発明の組成物で予防または治療することができる呼吸器感染症を引き起こすウイルスは、一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）およびエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本発明の１つの実施形態において、呼吸器感染症はインフルエンザウイルス感染症である。本発明の好ましい実施形態において、インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢからなる群から選択される。インフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢは一本鎖ＲＮＡウイルス類およびオルソミクソウイルス科に属する。インフルエンザウイルスＡは鳥類を宿主とし、バードフル（ｂｉｒｄ ｆｌｕ）あるいはエイビアンフル（ａｖｉａｎ ｆｌｕ）としても知られる「鳥インフルエンザ」を引き起こす。ウイルスの全ての既知のサブタイプは鳥類において固有の病気である。しかしながら、インフルエンザウイルスＡは哺乳動物にも感染することができ、少なくとも、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２およびＨ５Ｎ１と名付けられたサブタイプはヒトにおいても検出されている。インフルエンザウイルスＢはヒトおよびあざらし類に感染することだけ知られており、かつ、インフルエンザウイルスＡとは対照的に、インフルエンザウイルスＢはインフルエンザの大流行を引き起こさない。
【００５９】
ウイルス粒子はそれ自身によっては生育および増幅せず、それらはまた、タンパク質合成およびエネルギー生産のための遺伝的情報が欠如している。そのためウイルスは宿主細胞に依存する。様々な呼吸器系ウイルスの発症機序はウイルス間で異なる。病原性事象の理解は主にライノウイルス感染症に由来する。ライノウイルスは主に、小さいエアロゾル粒子によって、かつ、感染性分泌物での直接的または間接的な接触を通して伝染される。感染の初期において、ライノウイルスは主に鼻咽頭に位置するＩＣＡＭ−１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ １）受容体に結合することにより宿主へと侵入する。細胞内への侵入および複製の後、ウイルスは咽頭へ向かって鼻腔内に広がる。複製は、炎症性メディエーターを介して血管拡張、増大した血管透過性および細胞浸潤を引き起こす、宿主における炎症および免疫応答を惹起する。上昇した炎症誘発性のサイトカインの濃度は、ウイルスを根絶または中和するために必要な炎症性反応のカスケードをもたらす（ｖａｎ Ｋｅｍｐｅｎ Ｍ．ら １９９９、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ ３７、９７−１０３）。
【００６０】
インフルエンザウイルスは、主要なウイルス表面糖タンパク質の一つであるヘマグルチニン（ＨＡ）により細胞表面上の受容体に結合することによって、宿主上皮細胞に感染する。宿主気道はインフルエンザウイルスのための感染部位だけでなく、ウイルス感染に対する防御部位でもある。インフルエンザウイルス感染に対する防御機構はいくつかのエフェクター細胞およびエフェクター分子を含む。ウイルスは最初、抗原特異的ではなく長時間の誘導を要しない自然免疫システムによって非特異的に検出され、破壊される。粘膜、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣｓ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、インターフェロン（ＩＦＮ）α、βおよび他のサイトカインおよび補体成分などのいくつかの構成要素が自然免疫系に含まれる。上皮細胞におけるウイルスの存在は、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの産生を誘導する。さらに、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２などのサイトカインがマクロファージ活性化ＮＫ細胞によって分泌される。ＮＫ細胞は感染した細胞の溶解に特に影響を与えるＩＦＮ−γを放出する。細胞表面受容体へのインターフェロンの結合は、例えば、サイトカインの産生をさらに加速させる多くの遺伝子の転写を増加する。インターフェロンはまたウイルスＲＮＡを分解するリボヌクレアーゼ酵素を活性化し得、またさらにインターフェロンはウイルス複製を阻止するために間接的にタンパク質合成を妨げ得る（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．およびＫｕｒａｔａ Ｔ．、２００４、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ５７：２３６−２４７；Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら、２００５、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ、５８：１９５−２０７）。
【００６１】
しかしながら、ウイルスが早期生体防御機構を回避する場合には、それらは気道におけるマクロファージおよびＤＣｓ上のトール様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＴＬＲｓ）を通って、インフルエンザウイルス成分によって増大され得る適応免疫機構によって検出され、特異的に除去される。ウイルスを認識したマクロファージおよびＤＣｓは、ＭＨＣ−１（ヒトにおいてはＨＬＡ−ＩおよびＨＬＡ−ＩＩ）およびＭＨＣ−２タンパク質を用いてウイルス性抗原をＴ−リンパ球およびＢ−リンパ球へ提示する。この一連の事象は適応免疫応答を開始する。抗体産生はウイルスを中和するために活性化される（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．およびＫｕｒａｔａ Ｔ．、２００４、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ５７：２３６−２４７；Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら、２００５、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ、５８：１９５−２０７）。
【００６２】
免疫応答の変化は、生体サンプルまたは対象から、任意の適した医学的、生理学的または生物学的試験、例えばインビトロ、エクスビボまたはインビボ試験によって観察できる。プロバイオティクス株の性質は、例えば末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ヒト単球、マクロファージおよび樹状細胞を利用して、例えば細胞培養（インビトロ）において調査することができる。エクスビボ実験の例は、好中球および単球の貪食、酸化バーストすなわち好中球および単球の過酸化水素発生、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性、リンパ球増殖、ならびにＰＢＭＣ、組織マクロファージ、単球もしくはリンパ球によるサイトカインの産生、の定量を含む。インビボ実験は、ワクチン（例えばワクチン特異的抗体またはワクチン特異的抗体産生細胞）への応答、遅延型過敏症および弱毒化病原体への応答の定量を含むが、これらに限定されるものではない。
【００６３】
病原体の侵入に対して宿主を保護する主要な細胞は、病原体を食べる、すなわち貪食する、またはサイトカインを産生するマクロファージである。サイトカインは他の免疫細胞を動員（ｒｅｃｒｕｉｔ）し、炎症を仲介（ｍｅｄｉａｔｅ）する。マクロファージは組織内の白血球であり、単球の分化によってインビトロで培養できる。本発明において、健常成人由来のマクロファージが、ヒト対象におけるプロバイオティクスの効果を調査するためにインビトロモデルにおいて使用された。マクロファージはＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５で刺激され、インフルエンザウイルスに感染した。
【００６４】
免疫応答を活性化するために、マクロファージはサイトカイン、ケモカインおよび抗菌性物質を産生する。サイトカインは細胞間情報伝達において使用されるシグナル分子（すなわち、タンパク質、ペプチドまたは糖タンパク質）である。これらはしばしば、病原体に遭遇し、それによって病原体への全身応答（ｓｙｓｔｅｍ’ｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を増加するためにさらなる免疫細胞を活性化して動員する免疫細胞によって分泌される。
【００６５】
各サイトカインは適合する細胞表面受容体を有しており、それゆえ、続いて起こる細胞内シグナル伝達のカスケードが細胞機能を変化させる。細胞内シグナル伝達は、他のサイトカインの産生、他の分子に対する表面受容体の数の増加またはフィードバック阻害によるそれ自身の効果の抑制をもたらす、例えばいくつかの遺伝子およびそれらの転写因子の発現上昇および／または発現低下を招き得る。
【００６６】
サイトカインは２つの群に分類することができる：１型、サイトカイン応答を増強するもの（例えば、ＩＦＮ−γ、ＴＧＦ−β）および２型、抗体応答を助けるもの（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３）。炎症誘発性のサイトカインである腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）もインターフェロン（ＩＦＮｓ）と同様に、細菌性感染への応答において、最初のサイトカインの中で特に産生される。後に産生されるサイトカインは、細菌感染の間、応答を細胞性Ｔヘルパータイプ１（Ｔｈ１）または液性Ｔｈ２タイプ免疫のいずれかに向ける。
【００６７】
ケモカインは、近隣の応答細胞の有向走化性（ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ）を誘導する、小サイトカイン（約８−１０キロダルトンの大きさで、保存領域に４つのシステイン残基がある）のファミリーである。ＩＰ−１０などのいくつかのケモカインは炎症性であると考えられている。これらのタンパク質はＧタンパク質結合型膜貫通受容体との相互作用によって生物学的効果を発揮する。
【００６８】
免疫応答の変化を検出するための試験は、シグナル経路の活性化を検出すること、およびマーカー遺伝子の転写レベルもしくは翻訳レベルまたはタンパク質（例えば抗体または受容体）の量を検出することに基づく試験を含むが、これらに限定されるものではない。細胞または生命体における免疫応答を検出するための単一のマーカーは現在入手不可能である。しかしながら、好ましいマーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＴＧＦ−βおよびＩＰ−１０からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
プロバイオティクス刺激は、マクロファージにおけるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生を誘導することが知られている（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ． ８４：１０９２−１１００）が、ＬＧＧまたはＬＣ７０５に誘導されるインフルエンザウイルスへの効果は、マクロファージにおいてこれまで示されたことはない。
【００７０】
本発明において、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、抗ウイルス性タンパク質（ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β（図１および３））およびＩＦＮ−α誘導性サイトカインもしくはタンパク質（Ｍｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ（図２））を増加し、それゆえウイルスの機能を鈍化させた。ウイルスの鈍化した機能もまた、減少したウイルス構造タンパク質の量によって検出された（図４および５）。
【００７１】
本発明において、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、抗ウイルス性サイトカイン産生を増加し、それゆえウイルスの不活化に関与する。この現象は「ウイルスに対する抵抗力の増大」ともいう。「抗ウイルス性サイトカイン」とは、ウイルスの破壊または中和を助けるサイトカインをいう。本発明の好ましい実施形態において、抗ウイルス性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αおよびＩＰ−１０からなる群から選択される。１型インターフェロン（ＩＦＮ−α／β）は、例えばインフルエンザウイルス感染に対する議論（ｄｅｂａｔｉｎｇ）において必要不可欠なものである。ＩＦＮ−α誘導性サイトカインもしくはタンパク質はＭｘ１、Ｍｘ２、ＲＩＧ−１およびＩＰ−１０を含むが、これらに限定されるものではない。
【００７２】
Ｍｘ１タンパク質は、ヒトにおいてＭｘＡとして知られる、ミクソウイルス（インフルエンザウイルス）抵抗性１タンパク質（インターフェロン誘導性タンパク質ｐ７８（マウス））である。細胞質タンパク質Ｍｘ１は、ダイナミンファミリーおよびラージＧＴＰアーゼ（ｌａｒｇｅ ＧＴＰａｓｅ）ファミリーの両方のメンバーである。インターフェロン誘導性Ｍｘ１タンパク質はウイルス複製におけるヌクレオカプシド（ＮＰ）の役割を妨げることにより、インフルエンザウイルスに対する活性を示す。
【００７３】
Ｍｘ遺伝子の発現は、主にＩ型ＩＦＮｓによって調節される。ＩＦＮｓからのシグナル経路は、Ｍｘ遺伝子の上流でインターフェロン刺激応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を誘導する（Ｈｕｇ Ｈ．ら、１９８８、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８、３０６５−３０７９）。また、ウイルス感染または二重らせんＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）自体の投与は、迅速で効率的なＭｘ遺伝子の活性化を生じることができる（Ｈｕｇ Ｈ．ら、１９８８、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８、３０６５−３０７９；Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４)。全ての場合において、Ｍｘ誘導はウイルス誘導性ＩＦＮへの二次応答よりも、ウイルスに対する真の一時応答である。細胞は、細胞内に残る予定のＭｘタンパク質と細胞環境中へ放出される予定のＩＦＮｓを同時に合成することにより、感染に迅速に応答する能力を有する。このインターフェロンは、最初に感染した細胞がウイルス保護された細胞のバリアによってすぐに区別されるように、近隣の非感染細胞におけるＭｘタンパク質の発現を誘導する。結果として、ウイルスは効率的に広がることができず、自身の防衛線を開始してウイルスを除去するために十分な時間を免疫システムに与える。
【００７４】
ヒトにおいてＭｘＢとして知られる細胞質タンパク質Ｍｘ２（ミクソウイルス（インフルエンザウイルス）抵抗性２）はダイナミンファミリーおよびラージＧＴＰアーゼ（ｌａｒｇｅ ＧＴＰａｓｅ）ファミリーの両方のメンバーである。タンパク質はまた核膜の直下にあるヘテロクロマチン領域の顆粒状部に局在する核型（ｎｕｃｌｅａｒ ｆｏｒｍ）を有する。局在化シグナル（ＮＬＳ）は核型のアミノ末端に存在する。このタンパク質はＩＦＮ−αによって発現上昇される。
【００７５】
ＲＩＧ−１（ＤＤＸ５８、レチノイン酸誘導性遺伝子１タンパク質、ＤＥＡＤ−ボックスタンパク質５８）はＩＦＮ−α誘導性ＲＮＡヘリカーゼである。ＲＩＧ−１は２つのＣＡＲＤドメイン、ヘリカーゼＡＴＰ結合ドメインおよびヘリカーゼＣ末端ドメインを含む。ＲＩＧ−１はウイルス複製の阻止における、二重らせんＲＮＡ誘導性の先天性の抗ウイルス応答において必要不可欠な機能を有する。ＲＩＧ−１はまた、インフルエンザＡウイルス感染の場合において一本鎖ＲＮＡによって活性化されることが知られている。インフルエンザＡウイルスＮＳ１タンパク質は、ＲＩＧ−Ｉに結合し、ＲＩＧ−Ｉの抗ウイルス作用を阻害する（Ｐｉｃｈｌｍａｉｒ Ａ．ら、２００６、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３１４ （５８０１）：９９７−１００１）。
【００７６】
インターフェロン（ＩＦＮ）−誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）はサイトカインのケモカインファミリーのメンバーであり、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−αおよびリポ多糖類への応答における様々な細胞において誘導される。ＩＰ−１０結合部位は、内皮細胞、上皮細胞および造血細胞を含む様々な細胞上で検出されている。ＩＰ−１０遺伝子発現はインフルエンザＡウイルスによって上昇することが示されている。
【００７７】
本発明の方法もしくは使用において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために対象に投与される。ウイルスの複製効率は、ウイルスのｍＲＮＡまたは構造タンパク質の量を決定することによって調査され得る。ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害し、またそれゆえ感染によって一般的に引き起こされる症状を軽減または予防する。ウイルスの複製効率を決定するための適したインフルエンザウイルスタンパク質は、例えば、ＮＰ（核タンパク質）、ＮＳ１（非構造性タンパク質１）、ポリメラーゼタンパク質ＰＢ１、ＰＢ２もしくはＰＡ、外部糖タンパク質ＨＡ（ヘマグルチニン）もしくはＮＡ（ノイラミニダーゼ）、Ｍ１（膜タンパク質）、Ｍ２もしくはＮＳ２を含み得るが、これらに限定されるものではない。本発明において、ＮＰ、ＮＳ１およびＭ１のｍＲＮＡもしくはタンパク質におけるＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５の効果は調査され、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５はそれらの全ての産生を減少し減速させた。
【００７８】
ＮＳ１は、核からの宿主ｍＲＮＡの輸送を妨げ、ＲＩＧ−Ｉを介するＩＦＮ−応答を妨げ、かつ抗ウイルス状態を阻害する非構造性タンパク質１である。ＮＰは、一つには、あらゆる遺伝子フラグメントに結合し、核への輸送を調節する核タンパク質である。Ｍ１は、ウイルス性脂質エンベロープの内側基質（ｉｎｎｅｒ ｍａｔｒｉｘ）に位置する基質（ｍａｔｒｉｘ）タンパク質である。Ｍ１の蓄積はウイルス出芽に必要である。
【化１】
【００７９】
本発明において、治療または予防のための対象は任意の真核生物であり、好ましくはヒトである。本発明の好ましい実施形態においては、対象は幼児、子供または成人である。「幼児」は０ヶ月から５ヶ月までの年齢である人間をいい、「子供」は６ヶ月から１７歳までの年齢である人間をいい、「成人」は１８歳以上の年齢である人間をいう。対象は、動物であってもよく、特にペットまたは生産動物である。動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、家禽、イヌ、ネコ、ウサギ、爬虫類およびヘビなどの、生産動物およびペットからなる群から選択することができる。
【００８０】
本発明において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（例えば、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５）を含む組成物は、対象が呼吸器感染症に感染する前もしくは後のいずれか一方で、対象に投与することができる。
【００８１】
本発明の具体的な実施形態において、ＬＧＧおよびＬＣ７０５は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるために、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために、および、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるために、対象における呼吸器感染症の治療および予防のため使用される。
【００８２】
本発明は、以下の実施例によって説明されるが、何らかの方法で制限することを意図するものではない。
【実施例】
【００８３】
実施例１：マクロファージおよびプロバイオティクス菌
マクロファージ
健康な献血者から新鮮に回収された白血球豊富な軟膜は、フィンランド赤十字輸血サービス（Ｆｉｎｎｉｓｈ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ）によって供給された。ＰＢＭＣは密度勾配遠心分離によって単離された。前述の通り、単球は６穴プラスチックプレート（Ｆａｌｃｏｎ）への接着によってＰＢＭＣから精製され、組換えヒト（ｒｈ）ＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｃｏｍａｘ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）の存在下、マクロファージ無血清培地（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において７日間培養され、マクロファージを獲得した（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら ２０００、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４、３７３３−３７４０）。
【００８４】
菌
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５は、刺激実験におけるそれらの使用の前に、−７０℃でスキムミルク中に保存され、前述の通り３回継代された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら １９９６、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６４：５４０３）。ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）中で生育させた。刺激実験のために、菌は対数増殖期まで生育させられ、菌細胞の数はペトロフハウザー血球計算盤における計数によって決定された。
【００８５】
実施例２：マクロファージ刺激実験
刺激実験はＲＰＭＩ１６４０培地（シグマ）において行われた。実施例１のマクロファージは、実施例１の生菌を用いて、すなわち１：１の割合（細胞数による）でのＬＧＧまたはＬＣ７０５単独で、または、マクロファージ細胞に対する菌の割合は１：１のままで、同数の菌細胞数でのＬＧＧおよびＬＣ７０５を共に用いて、２４時間刺激された。マクロファージはそれから、１００％の感染をもたらす感染の多重度（ＭＯＩ）５のインフルエンザウイルスＡ／北京／３５３／８９ウイルス（０．１２８ ＨＡＵ／ｍｌ）（健康福祉研究所（ＴＨＬ））を用いて１時間感染させられ、その後、感染細胞はＰＢＳで洗浄され、細胞培養培地は交換され、感染は前述のように総合して９時間または２４時間の間続いた（Ｐｉｒｈｏｎｅｎ Ｊ．ら、１９９９、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６２、７３２２−７３２９）。細胞および細胞培養上清は刺激の後に回収された。回収サンプルから総ＲＮＡまたはタンパク質が単離された。ウイルス性ｍＲＮＡの量は定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって決定され、かつウイルスまたは宿主タンパク質はウェスタンブロットによって検出された。分泌されたサイトカインはＥＬＩＳＡ法によって測定された。
【００８６】
ＭｘＡ、ＭｘＢ、ＲＩＧ−Ｉ、ＮＰおよびＭ１タンパク質発現は、以下の抗体：抗ＭｘＡ抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９３、Ｊ ｉｍｍｕｎｏｌ １５０、１７１５−１７２６；抗ＭｘＢ抗体（Ｍｅｌｅｎ Ｋ．ら、１９９６、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１、２３４７８−２３４８６）；抗ＲＩＧ−Ｉ抗体（Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ Ｓ．ら、２００６、Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０、３５１５−３５２２）；インフルエンザＡ特異的抗ＮＰ抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４）；および、抗ＮＰ抗体の獲得のためと同様にウサギを免疫することによって獲得されたインフルエンザＡ特異的抗Ｍ１抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４）：を用いて、前述の通りウェスタンブロット法によって解析された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８４、１０９２−１１００）（図２および５参照）。
【００８７】
ｑＲＴ−ＰＣＲによるウイルスｍＲＮＡの定量は、アプライドバイオシステムズの試薬および手順により、インフルエンザＡ Ｍ１のためのプライマー−プローブペア（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ ｐａｉｒ）を用いて、前述の通り実行された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８４：１０９２−１１００）。ＮＰプライマー−プローブ（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ）は以下のとおり：フォワードプライマー５’−ｃｃａｔａａｇｇａｃｃａｇｇａｇｔｇｇａ−３’、リバースプライマー５’−ｃｃｃｔｃｃｇｔａｔｔｔｃｃａｇｔｇａａ−３’、プローブ５’−ｃａｇｇｃｃａａａｔｃａｇｔｇｔｇｃａａｃｃｔａｃ−３’であり、ＮＳ１プライマー−プローブ（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ）は：フォワードプライマー５’−ｔｇａａａｇｃｇａａｔｔｔｃａｇｔｇｔｇａｔ−３’、リバースプライマー５’−ｃｔｇｇａａａａｇａａｇｇｃａａｔｇｇｔ−３’、プローブ５’−ｃｔａａｇｇｇｃｔｔｔｃａｃｃｇａａｇａｇｇｇ−３’であった。
【００８８】
細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α）およびケモカインレベル（ＩＰ−１０）は、前述の通りＥＬＩＳＡ法によって検出された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、１９９８、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６６、６０５８−６０６２；Ｖｅｃｋｍａｎ Ｖ．ら、２００３、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ７４、３９５−４０２）（図１および３−４参照）。
【技術分野】
【０００１】
本発明はライフサイエンスおよび食品、飼料、または医薬品工業の分野に関する。特に本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。本発明はまた薬剤としての使用のための組成物に関する。さらに本発明は、呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用に関する。またさらに本発明は、成人における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物、および成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。さらに本発明は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための組成物、および呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。さらに本発明は、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を治療または予防するための方法、対象において、または成人対象において、呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための方法、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための方法、および、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロバイオティクスは、動脈性高血圧症、血管性疾患、アレルギー、癌、アトピー性疾患、ウイルス性疾患または感染症、虫歯、ＩＢＳ、ＩＢＤ、粘膜炎、消化管透過性障害、肥満、代謝症候群、酸化ストレスおよび腹痛などの様々な疾患の予防および治療のために使用され続けている。
【０００３】
初期の下痢症研究（ｅａｒｌｙ ｄｉａｒｒｈｅａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ）に基づき、プロバイオティクスは消化管における感染症を軽減することが知られている。現在の科学的データは、病気の予防および治療と同様にウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）におけるプロバイオティクスの効果は、消化管において微生物叢を改変する能力および病原体を退去させる能力に基づく、という仮説を支持している。しかしながら現在、特定のプロバイオティクスがさらに消化管外の感染症も軽減するかもしれないという証拠が増加している。
【０００４】
口腔内および消化管内並びに気道内の粘膜上皮表面は、ウイルスなどの感染因子と絶えず戦っている。これらの表面上の共生微生物叢は、代謝物質および制御物質によって、かつ、粘膜上の栄養素および利用できる接着部位を競合することによって、病原菌から身体を保護する。微生物叢は一生涯の間に発達し変化するが、通常、健常者において様々な細菌種を含む。
【０００５】
上気道および下気道に影響を及ぼす急性呼吸器感染症は、その発生率は全ての年齢層において高いが、子供および高齢者の間で最も一般的な健康問題である。これらの呼吸器感染症は、デイケアセンターや仕事における欠席と同様に、毎年、病院における多数の医療訪問や治療期間を引き起こす。最も激しい場合において、呼吸器感染症は高齢者の早期死亡を引き起こすであろう。しかしながら大多数の呼吸器感染症は、一般的な風邪としても知られる、穏やかな自己限定性のウイルス性上気道感染症である。
【０００６】
基本的に健康な子供あるいは成人において呼吸器感染症におけるプロバイオティクスの効果を試験したいくつかの臨床研究がある。就学児における例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉは下気道感染の発生を減少させ（Ｃｏｂｏ Ｓａｎｚ ＪＭ．ら、２００６、Ｎｕｔｒ Ｈｏｓｐ ２１、５４７−５１）、一方で同じプロバイオティクスは高齢の対象において全ての感染症の継続期間を減少させた（Ｔｕｒｃｈｅｔ Ｐ．ら、２００３、Ｊ Ｎｕｔｒ Ｈｅａｌｔｈ Ａｇｉｎｇ ７、７５−７）。さらにミルクに与えられたラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（ＬＧＧ）は、合併症および下気道感染症を伴う呼吸器感染症を患う子供の数において１７％の相対的減少を示した（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００１、ＢＭＪ、３２２、１−５）、しかし、マラソン走者においては、ミルクベースの果汁飲料の形式またはカプセル形式で与えられたＬＧＧは呼吸器感染症に効果を有さなかった（Ｋｅｋｋｏｎｅｎ Ｒ．ら、２００７、Ｉｎｔ Ｊ Ｓｐｏｒｔ Ｎｕｔｒ Ｅｘｅｒｃ Ｍｅｔａｂ １７、３５２−３６３）。また、ＬＧＧ、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５（ＬＣ７０５）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ） Ｂｂ９９およびプロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ・サブスピーシーズ・シェルマニイ（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ｓｓｐ ｓｈｅｒｍａｎｉｉ）の組合せは、子供における呼吸器感染症の減少を示したが（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００７、Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ２６、３１４−３２１；Ｋｕｋｋｏｎｅｎ Ｋ．ら、２００８、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２２、８−１２）、高齢者においてはそうではなかった（Ｈａｔａｋｋａ Ｋ．ら、２００７、博士論文、ｈｔｔｐ：／／ｕｒｎ．ｆｉ／ＵＲＮ：ＩＳＢＮ：９７８−９５２−１０−３８９７−６）。
【０００７】
成人において、例えば、ビタミンおよびミネラルと共にラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）およびビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｉｆｉｄｕｍ）を含む栄養補助食品が、呼吸器感染症の発生率を減少させることを示している（Ｗｉｎｋｌｅｒ Ｐ．ら、２００５、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ４３、３１８−２６；ｄｅ Ｖｒｅｓｅ Ｍ．ら、２００５、Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ ２４、４８１−９１）。
【０００８】
非合併性の呼吸器感染症は抗生物質によって広く治療される。しかしながら、抗生物質はウイルス性感染症には効果を有さない。それゆえ、例えば一般的な風邪の治療は、主に症状を緩和する薬剤（ｓｙｍｐｔｏｍ−ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ）および解熱剤（ｆｅｖｅｒ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｄｒｕｇｓ）に基づく。いくつかの抗ウイルス薬がインフルエンザウイルスに対して提供されているが、これまで他の一般的な呼吸器ウイルスに対する効果的な抗ウイルス薬は存在しない。それゆえ、効果的な医薬品および治療は呼吸器感染症の予防および治療のためにまだ認可される。
【０００９】
また様々な先行研究において、呼吸器感染症におけるプロバイオティクスの効果は、年齢層（例えば、幼児、子供、成人、高齢者）の間で異なることが示されている。プロバイオティクス効果を有する１つの菌種は、確定した症状を治療することにおいて利用されるかもしれないが、同属または異なる属のいくつかの株を含有するプロバイオティクスは、例えば相乗効果または相加効果によって、さらなる、あるいは異なる利点を提供するかもしれない。それゆえ、好適な量および消費期間と同様に最適なプロバイオティクスまたはそれらの組合せが呼吸器感染症を患っている異なる年齢層のために認可される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、呼吸器感染症の予防および治療のための新規な製品、方法および使用を提供することである。実際に、本発明はこれらの目的のための最適なプロバイオティクスまたはそれらの組合せを提供する。ＬＣ７０５、またはＬＧＧおよびＬＣ７０５の好ましい効果は、呼吸器感染症においてこれまで一度も検出されておらず、さらにＬＧＧは、成人における呼吸器感染症において効果を有することはこれまで一度も示されていなかった。
【００１１】
本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。
【００１２】
またさらに本発明は、薬剤としての使用のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５からなるプロバイオティクスを含む組成物に関する。
【００１３】
またさらに本発明は、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧと併用しての使用に関する。
【００１４】
さらに本発明は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独での使用またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧと併用しての使用に関する。
【００１５】
また本発明は、成人対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。
【００１６】
本発明はまた、成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧの使用を記載する。
【００１７】
本発明は、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。
【００１８】
本発明は、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための組成物の製造のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）の使用に関する。
【００１９】
さらに本発明は、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せに関する。
【００２０】
本発明は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せに関する。
【００２１】
また本発明は、成人対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを記載する。
【００２２】
本発明はまた、成人対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを記載する。
【００２３】
本発明は、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）に関する。
【００２４】
本発明は、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるための、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）に関する。
【００２５】
また本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せを含む組成物の対象への投与を含む、対象において呼吸器感染症を治療または予防する方法に関する。
【００２６】
本発明はまた、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧを含む組成物の対象への投与を含む、成人対象において呼吸器感染症を治療または予防する方法を記載する。
【００２７】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せを含む組成物の対象への投与を含む、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させる方法に関する。
【００２８】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含む組成物の対象への投与を含む、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害する方法に関する。
【００２９】
さらに本発明は、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）を含む組成物の対象への投与を含む、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させる方法に関する。
【００３０】
本発明は、食品、飼料、または医薬品工業におけるさらなる発展のための手段を提供する。またさらに、本発明によって、より効果的で特異的な治療が、呼吸器感染症を患っている患者、例えば異なる年齢層に利用できるようになる。
【００３１】
ＬＧＧ、ＬＣ７０５、またはそれらの組合せは、そのままで、または例えば医薬品または食品などの別の製品の一部として使用できる。本発明のＬＧＧ、ＬＣ７０５または組合せは、抗ウイルスタンパク質（例えば、ＩＰ−１０およびＩＦＮ−α（図１）、Ｍｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ（図２））の発現を増加すること、および、例えばウイルス構成タンパク質の減少によって確かめられる（例えばＮＰおよびＭ１（図５））インフルエンザウイルスの増殖を阻止することにより、ヒトにおいて有利な抗ウイルス効果を有する。
【００３２】
健康、特に呼吸器感染症に対する明確に実証された効果を有し、そのままで、または例えば医薬品または食品もしくは飼料製品のような別の製品の一部として容易に使用できるような形状で生産された新製品を消費者に提供することが、継続的かつ明白に必要である。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、ＬＣ７０５がヒト単球から得られたマクロファージにおける抗ウイルス性ＩＦＮ−α産生を誘導することを示す。ＬＧＧまたはＬＣ７０５でのマクロファージの６時間刺激および２４時間刺激が図において示される。ＬＧＧまたはＬＣ７０５は抗ウイルス性ＩＰ−１０産生を誘導するが、ＬＣ７０５はＬＧＧより多くＩＰ−１０産生を誘導する。
【００３４】
【図２】図２は、ＬＧＧまたはＬＣ７０５がＭｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ産生を活性化することを示す。しかしながらＬＣ７０５はＬＧＧより多くＩＦＮ−α調節型抗ウイルス性タンパク質（Ｍｘ１、Ｍｘ２、ＲＩＧ−Ｉ）産生を活性化する。
【００３５】
【図３】図３は、ＬＧＧ、ＬＣ７０５およびそれらの組合せがＩＬ−１β産生を増加すること（図３Ａ）、ＬＣ７０５がＩＦＮ−αを増加すること（図３Ｂ）、ＬＣ７０５、およびＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せがＴＮＦ−αを増加すること（図３Ｃ）を示す。さらに、図３は、ＬＣ７０５および、ＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せが、インフルエンザＡウイルス（ｉｎｆｌ Ａ）感染の間、ＬＧＧより多く抗ウイルス性炎症活性（ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−α（図３Ａおよび図３Ｃ））を増加することを示す。ＬＣ７０５、およびＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せは、インフルエンザＡウイルス感染の間、ＬＧＧより多くＩＦＮ−α産生を増加する（図３Ｂ）。
【００３６】
【図４】図４は、ＬＧＧ、ＬＣ７０５およびそれらの組合せがインフルエンザＡウイルスのｍＲＮＡ合成を減少させる、すなわち、ウイルスの複製を減少もしくは減速させることを示す。図４Ａは、ＬＣ７０５またはＬＧＧおよびＬＣ７０５の組合せが、ウイルス感染の間、ＮＰ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。図４Ｂは、ＬＧＧ、ＬＣ７０５またはそれらの組合せが、ウイルス感染の間、Ｍ１ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。図４Ｃは、ＬＧＧ、ＬＣ７０５またはそれらの組合せが、ウイルス感染の間、ＮＳ１ ｍＲＮＡの産生を減少もしくは減速させることを示す。
【００３７】
【図５】図５は、ＬＧＧまたはＬＣ７０５がインフルエンザＡウイルスの構造タンパク質（ＮＰ、Ｍ１）の産生を減少させることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
発明の詳細な説明
プロバイオティクスは食品工業および飼料工業において長い間利用されているが、未だに、広範囲の症状または病気における、かつ、特定の標的グループに対する、プロバイオティクスの効果を決定する必要がある。本発明はＬＧＧおよびＬＣ７０５が呼吸器感染症におけるプロバイオティクス効果を有するという知見に属する。またＬＣ７０５およびＬＧＧは、抗ウイルス性サイトカインの産生を増大し、かつウイルスの増幅を阻止し、それゆえ呼吸器感染症のリスクを減少するための最適な組合せとして機能する。
【００３９】
プロバイオティクス菌
プロバイオティクスは生きた微生物であり、好ましくはヒトあるいは動物へ適当量を投与した際に宿主のウェルビーイング（ｗｅｌｌ−ｂｅｉｎｇ）を促進する非病原性の微生物である（Ｆｕｌｌｅｒ Ｒ １９８９、Ｊ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ６６、３６５−３７８）。プロバイオティクスは、十分な量を食品または栄養補助食品として消費された場合、宿主へ有益な健康上の利点をもたらす。
【００４０】
ヒトまたは動物におけるプロバイオティクスの栄養機能表示は多くの病気の見込まれる予防および治療を含む。プロバイオティクスの健康促進効果は、例えば腸内細菌叢の平衡化および維持、免疫システムの刺激、および抗発癌活性を含む。
【００４１】
最もよく実証されたプロバイオティクスは、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧ、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌ． Ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ） ＬＡ１、ラクトバチルス・カゼイ シロタ（Ｌ．ｃａｓｅｉ Ｓｈｉｒｏｔａ）およびビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ） Ｂｂ１２を含む。加えて、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５などの多数の他のプロバイオティクスが文献に記載されている。
【００４２】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧ（ＬＧＧ、登録商標ＬＧＧ）株は、もとは米国からの非病原性グラム陽性分離株である（ＵＳ４８３９２８１ Ａ）。ＬＧＧ株は人糞から単離され、ｐＨ３においてよく増殖し、低いｐＨ値でも、また高胆汁酸量でも生存する。この株は、粘膜および上皮細胞の両方へ優れた接着性を示し、かつ消化管でコロニーを形成する。グルコースからの乳酸の収量は良好である：ＭＲＳブロスで生育させた時、この株は１．５−２％の乳酸を産生する。この株はラクトースを発酵せず、それゆえラクトースから乳酸は産生しない。この株は以下の炭水化物：Ｄ−アラビノース、リボース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、ラムノース、ズルシトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、サッカロース、トレハロース、メレジトース、ゲンチオビオース、Ｄ−タガトース、Ｌ−フコースおよびグルコン酸塩、を発酵する。この株は１５−４５℃で良好に生育し、最適温度は３０−３７℃である。ＬＧＧは寄託機関Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託番号ＡＴＣＣ ５３１０３で寄託されている。
【００４３】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５（ＬＣ７０５）株もまた、もとはフィンランドからではあるが、非病原性グラム陽性分離株である。ＬＣ７０５はフィンランド特許９２４９８、Ｖａｌｉｏ Ｏｙにおいてより詳細に記載されている。ＬＣ７０５はグラム陽性の鎖状の短桿菌であり；ホモ発酵性であり；弱いタンパク質分解性であり；１５−４５℃でよく成長し；アルギニンからアンモニアを産生せず；カタラーゼ陰性であり；ＭＲＳブロス（ＬＡＢ Ｍ）中で生育する時この株はＬ（＋）立体配置の光学活性を有する１．６％の乳酸を産生し；この株はクエン酸塩を分解して（０．１６９％）ジアセチルおよびアセトインを産生し；この株は少なくとも下記の炭水化物（糖類、糖、糖アルコール）：リボース、ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、Ｄ−マンノース、Ｌ−ソルボース、ラムノース、マンニトール、ソルビトール、メチル−Ｄ−グルコシド、Ｎ−アセチルグルコサミン、アミグダリン、アルブチン、エスクリン、サリシン、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、メレジトース、ゲンチオビオース、Ｄ−ツラノースおよびＤ−タガトースを発酵する。ＬＣ７０５は粘膜細胞に弱く接着するが、上皮細胞には中程度に接着する。株の生存性は低ｐＨ値および高胆汁酸量で良好である。株は５％の塩分濃度で良好に、塩分濃度１０％でかなり良好に生存する。ＬＣ７０５は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｕｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ（ＤＳＭ）に寄託番号ＤＳＭ７０６１で寄託されている。
【００４４】
本発明の１つの実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＧＧである。本発明の別の実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＣ７０５である。本発明の具体的な実施形態において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）はＬＧＧおよびＬＣ７０５である。
【００４５】
組成物
本発明の組成物はＬＧＧおよびＬＣ７０５プロバイオティクスを含む。プロバイオティクスＬＧＧおよびＬＣ７０５のみが組成物中に含まれる。本発明の組成物は、食品、動物飼料、栄養製品、栄養補助食品、食品原料、健康食品、医薬品および化粧品からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。組成物はまた、例えば毎日の食事もしくは薬剤の都合のよい部分（ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｐａｒｔ）もしくは栄養補助食品として適用できる。本発明の１つの好ましい実施形態において、組成物は医薬品、食品または飼料製品である。本発明の別の実施形態において、組成物は機能性食品、すなわち、何らかの健康促進特性および／または疾患の予防もしくは治療特性を有する食品である。好ましくは、本発明の食品は、乳製品、ベーカリー製品、チョコレートおよび菓子類、砂糖およびガム菓子類、シリアル製品、スナック菓子、ベリーまたは果物ベースの製品、および飲み物／飲料からなる群から選択される。乳製品は、乳、酸乳（ｓｏｕｒ ｍｉｌｋ）、ヨーグルトおよびチーズやスプレッドなどの他の発酵乳製品、粉乳、子供用食品、離乳食、幼児用食品、特殊調製粉乳（ｉｎｆａｎｔ ｆｏｒｍｕｌａ）、ジュースおよびスープを含むが、これらに限定されるものではない。
【００４６】
本発明の組成物は医薬組成物であってもよく、タブレット（ｔａｂｌｅｔ）、錠剤（ｐｉｌｌ）、丸薬（ｐｅｌｌｅｔ）、カプセル、溶液、乳剤または懸濁剤の形態などの、例えば、固体、半固体、または液体において使用され得る。好ましくは、組成物は経口投与または腸内、吸入もしくは静脈内適用のためのものである。またさらに、対象が呼吸器感染症に感染する前もしくは後に対象へ投与することができる。
【００４７】
プロバイオティクスに加えて、組成物は医薬上または栄養学的に許容され得る、かつ／または技術的に必要とされる担体（例えば、水、グルコースまたはラクトース）、アジュバント、賦形剤、補助賦形剤、防腐剤、安定化剤、増粘剤もしくは着色剤、着香料、結合剤、充填剤、滑沢剤、懸濁化剤、甘味料、香味剤、ゲル化剤、酸化防止剤、保存料、緩衝剤、ｐＨ調整剤、湿潤剤、スターター、または類似の組成物において通常見られる成分を含むことができる。プロバイオティクスではない任意の作用剤も、例えば上述の群から選択することができる。組成物の作用剤、例えば原料または成分は、市販で入手されるか、または技術分野において知られた従来技術のいずれかによって調製される。
【００４８】
本発明の具体的な実施形態において、組成物はＬＧＧおよびＬＣ７０５からなる作用剤および任意にあらゆる非プロバイオティクス性の作用剤を含む。「非プロバイオティクス性の作用剤」とはプロバイオティクスではないあらゆる作用剤を指す。
【００４９】
本発明の組成物は所望の効果を生じるための十分な量においてＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５を含む。本発明の好ましい実施形態において、ＬＧＧおよびＬＣ７０５の割合（細菌数）は同等すなわち１：１である。本発明の別の好ましい実施形態において、ＬＧＧのＬＣ７０５に対する割合（細菌数）は２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または１０：１である。本発明のさらに別の好ましい実施形態において、ＬＣ７０５のＬＧＧに対する割合（細菌数）は２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または１０：１である。
【００５０】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）のプロバイオティクスに加えて、呼吸器感染症の予防および／または治療のために、呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるために、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために、または、抗ウイルス性サイトカインを増加させるために使用される組成物は、他のプロバイオティクスまたは類似の組成物において通常見られる任意の他の作用剤を含んでもよい。
【００５１】
組成物は技術分野において既知の任意の従来法によって製造され得る。ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、例えば、調製と結合して、またはその後、最終生産物の最終加工の間のいずれか一方で、任意の製品に添加または任意の作用剤と混合され得る。
【００５２】
呼吸器感染症および治療
呼吸器感染症は上気道および下気道の両方の感染を含む。上気道感染症は、肺胞を除く鼻から下部呼吸樹への呼吸器粘膜の炎症を含む。それゆえ上気道は、鼻腔（鼻端、洞（ｓｉｎｕｓｅｓ））、咽頭および喉頭を含む。上気道感染症は、一般的な風邪、副鼻腔炎、耳感染症、中耳炎、乳様突起炎、咽頭炎、扁桃炎、喉頭蓋炎、気管炎、喉頭炎および気管支炎からなる群から選択されるが、これらに限定されるものではない。上気道感染症の症状は、鼻閉、咳、鼻炎、鼻詰まり、鼻感冒、咽頭炎、発熱、顔面圧迫感、頭痛、食欲不振および／またはくしゃみを含む。
【００５３】
下気道感染症は、気管、原始気管支および肺を含む。下気道に影響を及ぼす感染症は、肺炎、胸膜炎、気管支炎、細気管支炎および肺気腫からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではなく、症状は、例えば息切れ、衰弱、高熱、咳嗽および／または倦怠感を含む。
【００５４】
多数の細菌種が上気道にコロニーを形成し、一方、下気道には通常、微生物はほとんどないに等しい。上気道感染症または下気道感染症は病原体への暴露および数時間から数日に及ぶ潜伏期間（例えば１−７日間）の後に起こり、かつ、例えば３日間から１０日間あるいはさらに長く（数週間）続く。症状の性質および持続期間は、病原体、病原体の量と同様に対象の年齢および免疫学的状態に依存する。
【００５５】
急性感染症に加え、病原体は慢性感染症もまた引き起こす可能性がある。慢性感染症は通常急性感染症から発展し、数日間から一生涯続く。
【００５６】
ここで使用される「感染症」とは、細胞あるいは組織における病原性微生物の侵入および増殖を指し、すなわち「感染症」は感染された状態に起因する状態もさす。感染症は様々な細胞機構または毒性機構を通して、傷害および疾患の進行を引き起こす可能性がある。しかしながら、全ての感染症が臨床的疾患を導くものではない；症候性疾患は感染者の７５％において発症することが知られる（Ｇｗａｌｔｎｅｙ ＪＭおよびＨａｙｄｅｎ ＦＧ、１９９２、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３２６、６４４−５）。
【００５７】
呼吸器感染症を引き起こす病原体は細菌またはウイルスである可能性がある。場合によっては、感染症はそれら両方の結果である。呼吸器感染症、すなわち上気道および／または下気道感染症を引き起こす細菌またはウイルスは、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、カタラリス菌（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、肺炎クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）およびエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）からなる群から選択することができる。また、気道に影響を及ぼす任意の他の細菌あるいはウイルスも上述の群へ含まれ得る。本発明の組成物で予防または治療することができる呼吸器感染症を引き起こすウイルスは、一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）、エンテロウイルス（ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、コロナウイルス（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ）およびエプスタイン・バール・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ）からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本発明の１つの実施形態において、呼吸器感染症はインフルエンザウイルス感染症である。本発明の好ましい実施形態において、インフルエンザウイルスはインフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢからなる群から選択される。インフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢは一本鎖ＲＮＡウイルス類およびオルソミクソウイルス科に属する。インフルエンザウイルスＡは鳥類を宿主とし、バードフル（ｂｉｒｄ ｆｌｕ）あるいはエイビアンフル（ａｖｉａｎ ｆｌｕ）としても知られる「鳥インフルエンザ」を引き起こす。ウイルスの全ての既知のサブタイプは鳥類において固有の病気である。しかしながら、インフルエンザウイルスＡは哺乳動物にも感染することができ、少なくとも、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２およびＨ５Ｎ１と名付けられたサブタイプはヒトにおいても検出されている。インフルエンザウイルスＢはヒトおよびあざらし類に感染することだけ知られており、かつ、インフルエンザウイルスＡとは対照的に、インフルエンザウイルスＢはインフルエンザの大流行を引き起こさない。
【００５９】
ウイルス粒子はそれ自身によっては生育および増幅せず、それらはまた、タンパク質合成およびエネルギー生産のための遺伝的情報が欠如している。そのためウイルスは宿主細胞に依存する。様々な呼吸器系ウイルスの発症機序はウイルス間で異なる。病原性事象の理解は主にライノウイルス感染症に由来する。ライノウイルスは主に、小さいエアロゾル粒子によって、かつ、感染性分泌物での直接的または間接的な接触を通して伝染される。感染の初期において、ライノウイルスは主に鼻咽頭に位置するＩＣＡＭ−１（ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌｅ １）受容体に結合することにより宿主へと侵入する。細胞内への侵入および複製の後、ウイルスは咽頭へ向かって鼻腔内に広がる。複製は、炎症性メディエーターを介して血管拡張、増大した血管透過性および細胞浸潤を引き起こす、宿主における炎症および免疫応答を惹起する。上昇した炎症誘発性のサイトカインの濃度は、ウイルスを根絶または中和するために必要な炎症性反応のカスケードをもたらす（ｖａｎ Ｋｅｍｐｅｎ Ｍ．ら １９９９、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ ３７、９７−１０３）。
【００６０】
インフルエンザウイルスは、主要なウイルス表面糖タンパク質の一つであるヘマグルチニン（ＨＡ）により細胞表面上の受容体に結合することによって、宿主上皮細胞に感染する。宿主気道はインフルエンザウイルスのための感染部位だけでなく、ウイルス感染に対する防御部位でもある。インフルエンザウイルス感染に対する防御機構はいくつかのエフェクター細胞およびエフェクター分子を含む。ウイルスは最初、抗原特異的ではなく長時間の誘導を要しない自然免疫システムによって非特異的に検出され、破壊される。粘膜、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣｓ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、インターフェロン（ＩＦＮ）α、βおよび他のサイトカインおよび補体成分などのいくつかの構成要素が自然免疫系に含まれる。上皮細胞におけるウイルスの存在は、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βの産生を誘導する。さらに、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２などのサイトカインがマクロファージ活性化ＮＫ細胞によって分泌される。ＮＫ細胞は感染した細胞の溶解に特に影響を与えるＩＦＮ−γを放出する。細胞表面受容体へのインターフェロンの結合は、例えば、サイトカインの産生をさらに加速させる多くの遺伝子の転写を増加する。インターフェロンはまたウイルスＲＮＡを分解するリボヌクレアーゼ酵素を活性化し得、またさらにインターフェロンはウイルス複製を阻止するために間接的にタンパク質合成を妨げ得る（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．およびＫｕｒａｔａ Ｔ．、２００４、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ５７：２３６−２４７；Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら、２００５、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ、５８：１９５−２０７）。
【００６１】
しかしながら、ウイルスが早期生体防御機構を回避する場合には、それらは気道におけるマクロファージおよびＤＣｓ上のトール様受容体（Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＴＬＲｓ）を通って、インフルエンザウイルス成分によって増大され得る適応免疫機構によって検出され、特異的に除去される。ウイルスを認識したマクロファージおよびＤＣｓは、ＭＨＣ−１（ヒトにおいてはＨＬＡ−ＩおよびＨＬＡ−ＩＩ）およびＭＨＣ−２タンパク質を用いてウイルス性抗原をＴ−リンパ球およびＢ−リンパ球へ提示する。この一連の事象は適応免疫応答を開始する。抗体産生はウイルスを中和するために活性化される（Ｔａｍｕｒａ Ｓ．およびＫｕｒａｔａ Ｔ．、２００４、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ５７：２３６−２４７；Ｔａｍｕｒａ Ｓ．ら、２００５、Ｊｐｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ、５８：１９５−２０７）。
【００６２】
免疫応答の変化は、生体サンプルまたは対象から、任意の適した医学的、生理学的または生物学的試験、例えばインビトロ、エクスビボまたはインビボ試験によって観察できる。プロバイオティクス株の性質は、例えば末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、ヒト単球、マクロファージおよび樹状細胞を利用して、例えば細胞培養（インビトロ）において調査することができる。エクスビボ実験の例は、好中球および単球の貪食、酸化バーストすなわち好中球および単球の過酸化水素発生、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性、リンパ球増殖、ならびにＰＢＭＣ、組織マクロファージ、単球もしくはリンパ球によるサイトカインの産生、の定量を含む。インビボ実験は、ワクチン（例えばワクチン特異的抗体またはワクチン特異的抗体産生細胞）への応答、遅延型過敏症および弱毒化病原体への応答の定量を含むが、これらに限定されるものではない。
【００６３】
病原体の侵入に対して宿主を保護する主要な細胞は、病原体を食べる、すなわち貪食する、またはサイトカインを産生するマクロファージである。サイトカインは他の免疫細胞を動員（ｒｅｃｒｕｉｔ）し、炎症を仲介（ｍｅｄｉａｔｅ）する。マクロファージは組織内の白血球であり、単球の分化によってインビトロで培養できる。本発明において、健常成人由来のマクロファージが、ヒト対象におけるプロバイオティクスの効果を調査するためにインビトロモデルにおいて使用された。マクロファージはＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５で刺激され、インフルエンザウイルスに感染した。
【００６４】
免疫応答を活性化するために、マクロファージはサイトカイン、ケモカインおよび抗菌性物質を産生する。サイトカインは細胞間情報伝達において使用されるシグナル分子（すなわち、タンパク質、ペプチドまたは糖タンパク質）である。これらはしばしば、病原体に遭遇し、それによって病原体への全身応答（ｓｙｓｔｅｍ’ｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を増加するためにさらなる免疫細胞を活性化して動員する免疫細胞によって分泌される。
【００６５】
各サイトカインは適合する細胞表面受容体を有しており、それゆえ、続いて起こる細胞内シグナル伝達のカスケードが細胞機能を変化させる。細胞内シグナル伝達は、他のサイトカインの産生、他の分子に対する表面受容体の数の増加またはフィードバック阻害によるそれ自身の効果の抑制をもたらす、例えばいくつかの遺伝子およびそれらの転写因子の発現上昇および／または発現低下を招き得る。
【００６６】
サイトカインは２つの群に分類することができる：１型、サイトカイン応答を増強するもの（例えば、ＩＦＮ−γ、ＴＧＦ−β）および２型、抗体応答を助けるもの（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３）。炎症誘発性のサイトカインである腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）もインターフェロン（ＩＦＮｓ）と同様に、細菌性感染への応答において、最初のサイトカインの中で特に産生される。後に産生されるサイトカインは、細菌感染の間、応答を細胞性Ｔヘルパータイプ１（Ｔｈ１）または液性Ｔｈ２タイプ免疫のいずれかに向ける。
【００６７】
ケモカインは、近隣の応答細胞の有向走化性（ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ）を誘導する、小サイトカイン（約８−１０キロダルトンの大きさで、保存領域に４つのシステイン残基がある）のファミリーである。ＩＰ−１０などのいくつかのケモカインは炎症性であると考えられている。これらのタンパク質はＧタンパク質結合型膜貫通受容体との相互作用によって生物学的効果を発揮する。
【００６８】
免疫応答の変化を検出するための試験は、シグナル経路の活性化を検出すること、およびマーカー遺伝子の転写レベルもしくは翻訳レベルまたはタンパク質（例えば抗体または受容体）の量を検出することに基づく試験を含むが、これらに限定されるものではない。細胞または生命体における免疫応答を検出するための単一のマーカーは現在入手不可能である。しかしながら、好ましいマーカーは、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＩＬ−１α、ＩＬ−６、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＴＧＦ−βおよびＩＰ−１０からなる群から選択することができるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
プロバイオティクス刺激は、マクロファージにおけるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生を誘導することが知られている（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ． ８４：１０９２−１１００）が、ＬＧＧまたはＬＣ７０５に誘導されるインフルエンザウイルスへの効果は、マクロファージにおいてこれまで示されたことはない。
【００７０】
本発明において、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、抗ウイルス性タンパク質（ＩＰ−１０、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β（図１および３））およびＩＦＮ−α誘導性サイトカインもしくはタンパク質（Ｍｘ１、Ｍｘ２およびＲＩＧ−Ｉ（図２））を増加し、それゆえウイルスの機能を鈍化させた。ウイルスの鈍化した機能もまた、減少したウイルス構造タンパク質の量によって検出された（図４および５）。
【００７１】
本発明において、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、抗ウイルス性サイトカイン産生を増加し、それゆえウイルスの不活化に関与する。この現象は「ウイルスに対する抵抗力の増大」ともいう。「抗ウイルス性サイトカイン」とは、ウイルスの破壊または中和を助けるサイトカインをいう。本発明の好ましい実施形態において、抗ウイルス性サイトカインは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αおよびＩＰ−１０からなる群から選択される。１型インターフェロン（ＩＦＮ−α／β）は、例えばインフルエンザウイルス感染に対する議論（ｄｅｂａｔｉｎｇ）において必要不可欠なものである。ＩＦＮ−α誘導性サイトカインもしくはタンパク質はＭｘ１、Ｍｘ２、ＲＩＧ−１およびＩＰ−１０を含むが、これらに限定されるものではない。
【００７２】
Ｍｘ１タンパク質は、ヒトにおいてＭｘＡとして知られる、ミクソウイルス（インフルエンザウイルス）抵抗性１タンパク質（インターフェロン誘導性タンパク質ｐ７８（マウス））である。細胞質タンパク質Ｍｘ１は、ダイナミンファミリーおよびラージＧＴＰアーゼ（ｌａｒｇｅ ＧＴＰａｓｅ）ファミリーの両方のメンバーである。インターフェロン誘導性Ｍｘ１タンパク質はウイルス複製におけるヌクレオカプシド（ＮＰ）の役割を妨げることにより、インフルエンザウイルスに対する活性を示す。
【００７３】
Ｍｘ遺伝子の発現は、主にＩ型ＩＦＮｓによって調節される。ＩＦＮｓからのシグナル経路は、Ｍｘ遺伝子の上流でインターフェロン刺激応答配列（ＩＳＲＥ）の活性化を誘導する（Ｈｕｇ Ｈ．ら、１９８８、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８、３０６５−３０７９）。また、ウイルス感染または二重らせんＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）自体の投与は、迅速で効率的なＭｘ遺伝子の活性化を生じることができる（Ｈｕｇ Ｈ．ら、１９８８、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８、３０６５−３０７９；Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４)。全ての場合において、Ｍｘ誘導はウイルス誘導性ＩＦＮへの二次応答よりも、ウイルスに対する真の一時応答である。細胞は、細胞内に残る予定のＭｘタンパク質と細胞環境中へ放出される予定のＩＦＮｓを同時に合成することにより、感染に迅速に応答する能力を有する。このインターフェロンは、最初に感染した細胞がウイルス保護された細胞のバリアによってすぐに区別されるように、近隣の非感染細胞におけるＭｘタンパク質の発現を誘導する。結果として、ウイルスは効率的に広がることができず、自身の防衛線を開始してウイルスを除去するために十分な時間を免疫システムに与える。
【００７４】
ヒトにおいてＭｘＢとして知られる細胞質タンパク質Ｍｘ２（ミクソウイルス（インフルエンザウイルス）抵抗性２）はダイナミンファミリーおよびラージＧＴＰアーゼ（ｌａｒｇｅ ＧＴＰａｓｅ）ファミリーの両方のメンバーである。タンパク質はまた核膜の直下にあるヘテロクロマチン領域の顆粒状部に局在する核型（ｎｕｃｌｅａｒ ｆｏｒｍ）を有する。局在化シグナル（ＮＬＳ）は核型のアミノ末端に存在する。このタンパク質はＩＦＮ−αによって発現上昇される。
【００７５】
ＲＩＧ−１（ＤＤＸ５８、レチノイン酸誘導性遺伝子１タンパク質、ＤＥＡＤ−ボックスタンパク質５８）はＩＦＮ−α誘導性ＲＮＡヘリカーゼである。ＲＩＧ−１は２つのＣＡＲＤドメイン、ヘリカーゼＡＴＰ結合ドメインおよびヘリカーゼＣ末端ドメインを含む。ＲＩＧ−１はウイルス複製の阻止における、二重らせんＲＮＡ誘導性の先天性の抗ウイルス応答において必要不可欠な機能を有する。ＲＩＧ−１はまた、インフルエンザＡウイルス感染の場合において一本鎖ＲＮＡによって活性化されることが知られている。インフルエンザＡウイルスＮＳ１タンパク質は、ＲＩＧ−Ｉに結合し、ＲＩＧ−Ｉの抗ウイルス作用を阻害する（Ｐｉｃｈｌｍａｉｒ Ａ．ら、２００６、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３１４ （５８０１）：９９７−１００１）。
【００７６】
インターフェロン（ＩＦＮ）−誘導性タンパク質１０（ＩＰ−１０）はサイトカインのケモカインファミリーのメンバーであり、ＩＦＮ−γ、ＩＦＮ−αおよびリポ多糖類への応答における様々な細胞において誘導される。ＩＰ−１０結合部位は、内皮細胞、上皮細胞および造血細胞を含む様々な細胞上で検出されている。ＩＰ−１０遺伝子発現はインフルエンザＡウイルスによって上昇することが示されている。
【００７７】
本発明の方法もしくは使用において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために対象に投与される。ウイルスの複製効率は、ウイルスのｍＲＮＡまたは構造タンパク質の量を決定することによって調査され得る。ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５は、インフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害し、またそれゆえ感染によって一般的に引き起こされる症状を軽減または予防する。ウイルスの複製効率を決定するための適したインフルエンザウイルスタンパク質は、例えば、ＮＰ（核タンパク質）、ＮＳ１（非構造性タンパク質１）、ポリメラーゼタンパク質ＰＢ１、ＰＢ２もしくはＰＡ、外部糖タンパク質ＨＡ（ヘマグルチニン）もしくはＮＡ（ノイラミニダーゼ）、Ｍ１（膜タンパク質）、Ｍ２もしくはＮＳ２を含み得るが、これらに限定されるものではない。本発明において、ＮＰ、ＮＳ１およびＭ１のｍＲＮＡもしくはタンパク質におけるＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５の効果は調査され、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５はそれらの全ての産生を減少し減速させた。
【００７８】
ＮＳ１は、核からの宿主ｍＲＮＡの輸送を妨げ、ＲＩＧ−Ｉを介するＩＦＮ−応答を妨げ、かつ抗ウイルス状態を阻害する非構造性タンパク質１である。ＮＰは、一つには、あらゆる遺伝子フラグメントに結合し、核への輸送を調節する核タンパク質である。Ｍ１は、ウイルス性脂質エンベロープの内側基質（ｉｎｎｅｒ ｍａｔｒｉｘ）に位置する基質（ｍａｔｒｉｘ）タンパク質である。Ｍ１の蓄積はウイルス出芽に必要である。
【化１】
【００７９】
本発明において、治療または予防のための対象は任意の真核生物であり、好ましくはヒトである。本発明の好ましい実施形態においては、対象は幼児、子供または成人である。「幼児」は０ヶ月から５ヶ月までの年齢である人間をいい、「子供」は６ヶ月から１７歳までの年齢である人間をいい、「成人」は１８歳以上の年齢である人間をいう。対象は、動物であってもよく、特にペットまたは生産動物である。動物は、ウシ、ウマ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、家禽、イヌ、ネコ、ウサギ、爬虫類およびヘビなどの、生産動物およびペットからなる群から選択することができる。
【００８０】
本発明において、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）（例えば、ＬＧＧおよび／またはＬＣ７０５）を含む組成物は、対象が呼吸器感染症に感染する前もしくは後のいずれか一方で、対象に投与することができる。
【００８１】
本発明の具体的な実施形態において、ＬＧＧおよびＬＣ７０５は、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるために、対象においてインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するために、および、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるために、対象における呼吸器感染症の治療および予防のため使用される。
【００８２】
本発明は、以下の実施例によって説明されるが、何らかの方法で制限することを意図するものではない。
【実施例】
【００８３】
実施例１：マクロファージおよびプロバイオティクス菌
マクロファージ
健康な献血者から新鮮に回収された白血球豊富な軟膜は、フィンランド赤十字輸血サービス（Ｆｉｎｎｉｓｈ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ）によって供給された。ＰＢＭＣは密度勾配遠心分離によって単離された。前述の通り、単球は６穴プラスチックプレート（Ｆａｌｃｏｎ）への接着によってＰＢＭＣから精製され、組換えヒト（ｒｈ）ＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｃｏｍａｘ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）の存在下、マクロファージ無血清培地（Ｇｉｂｃｏ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において７日間培養され、マクロファージを獲得した（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら ２０００、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４、３７３３−３７４０）。
【００８４】
菌
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧおよびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５は、刺激実験におけるそれらの使用の前に、−７０℃でスキムミルク中に保存され、前述の通り３回継代された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら １９９６、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６４：５４０３）。ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）中で生育させた。刺激実験のために、菌は対数増殖期まで生育させられ、菌細胞の数はペトロフハウザー血球計算盤における計数によって決定された。
【００８５】
実施例２：マクロファージ刺激実験
刺激実験はＲＰＭＩ１６４０培地（シグマ）において行われた。実施例１のマクロファージは、実施例１の生菌を用いて、すなわち１：１の割合（細胞数による）でのＬＧＧまたはＬＣ７０５単独で、または、マクロファージ細胞に対する菌の割合は１：１のままで、同数の菌細胞数でのＬＧＧおよびＬＣ７０５を共に用いて、２４時間刺激された。マクロファージはそれから、１００％の感染をもたらす感染の多重度（ＭＯＩ）５のインフルエンザウイルスＡ／北京／３５３／８９ウイルス（０．１２８ ＨＡＵ／ｍｌ）（健康福祉研究所（ＴＨＬ））を用いて１時間感染させられ、その後、感染細胞はＰＢＳで洗浄され、細胞培養培地は交換され、感染は前述のように総合して９時間または２４時間の間続いた（Ｐｉｒｈｏｎｅｎ Ｊ．ら、１９９９、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６２、７３２２−７３２９）。細胞および細胞培養上清は刺激の後に回収された。回収サンプルから総ＲＮＡまたはタンパク質が単離された。ウイルス性ｍＲＮＡの量は定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）によって決定され、かつウイルスまたは宿主タンパク質はウェスタンブロットによって検出された。分泌されたサイトカインはＥＬＩＳＡ法によって測定された。
【００８６】
ＭｘＡ、ＭｘＢ、ＲＩＧ−Ｉ、ＮＰおよびＭ１タンパク質発現は、以下の抗体：抗ＭｘＡ抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９３、Ｊ ｉｍｍｕｎｏｌ １５０、１７１５−１７２６；抗ＭｘＢ抗体（Ｍｅｌｅｎ Ｋ．ら、１９９６、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１、２３４７８−２３４８６）；抗ＲＩＧ−Ｉ抗体（Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ Ｓ．ら、２００６、Ｊ Ｖｉｒｏｌ ８０、３５１５−３５２２）；インフルエンザＡ特異的抗ＮＰ抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４）；および、抗ＮＰ抗体の獲得のためと同様にウサギを免疫することによって獲得されたインフルエンザＡ特異的抗Ｍ１抗体（Ｒｏｎｎｉ Ｔ．ら、１９９５、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５４、２７６４−２７７４）：を用いて、前述の通りウェスタンブロット法によって解析された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８４、１０９２−１１００）（図２および５参照）。
【００８７】
ｑＲＴ−ＰＣＲによるウイルスｍＲＮＡの定量は、アプライドバイオシステムズの試薬および手順により、インフルエンザＡ Ｍ１のためのプライマー−プローブペア（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ ｐａｉｒ）を用いて、前述の通り実行された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、２００８、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ８４：１０９２−１１００）。ＮＰプライマー−プローブ（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ）は以下のとおり：フォワードプライマー５’−ｃｃａｔａａｇｇａｃｃａｇｇａｇｔｇｇａ−３’、リバースプライマー５’−ｃｃｃｔｃｃｇｔａｔｔｔｃｃａｇｔｇａａ−３’、プローブ５’−ｃａｇｇｃｃａａａｔｃａｇｔｇｔｇｃａａｃｃｔａｃ−３’であり、ＮＳ１プライマー−プローブ（ｐｒｉｍｅｒ−ｐｒｏｂｅ）は：フォワードプライマー５’−ｔｇａａａｇｃｇａａｔｔｔｃａｇｔｇｔｇａｔ−３’、リバースプライマー５’−ｃｔｇｇａａａａｇａａｇｇｃａａｔｇｇｔ−３’、プローブ５’−ｃｔａａｇｇｇｃｔｔｔｃａｃｃｇａａｇａｇｇｇ−３’であった。
【００８８】
細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＬ−１β、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α）およびケモカインレベル（ＩＰ−１０）は、前述の通りＥＬＩＳＡ法によって検出された（Ｍｉｅｔｔｉｎｅｎ Ｍ．ら、１９９８、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ ６６、６０５８−６０６２；Ｖｅｃｋｍａｎ Ｖ．ら、２００３、Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ ７４、３９５−４０２）（図１および３−４参照）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象において抗ウイルス効果を有する組成物の調製のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５の単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用での使用。
【請求項２】
組成物が医薬品、食品または飼料製品である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
組成物が医薬組成物である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
組成物が、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のためにある、請求項１−３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
対象において抗ウイルス効果を有する組成物であるラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５を単独でまたはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用で含む組成物の対象への投与を含む方法であって、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための方法。
【請求項６】
組成物が、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるためにある、請求項１−５のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項７】
組成物が、抗ウイルス性タンパク質の発現を増加する、請求項１−６のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項８】
組成物が、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるためにある、請求項１−６のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項９】
抗ウイルス性サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、およびＩＰ−１０からなる群から選択される、請求項８に記載の使用または方法。
【請求項１０】
呼吸器感染症が一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルスおよびエプスタイン・バール・ウイルスからなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、請求項４−９のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項１１】
呼吸器感染症がインフルエンザウイルス感染症である、請求項１０に記載の使用または方法。
【請求項１２】
インフルエンザウイルスがインフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢからなる群から選択される、請求項１１に記載の使用または方法。
【請求項１３】
組成物がインフルエンザウイルスの増殖を防ぐため、かつ／または、対象におけるインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するためにある、請求項１０−１２のいずれか１つに記載の使用または方法。
【請求項１４】
対象が幼児、子供または成人である、請求項１−１３のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項１５】
プロバイオティクスとしてラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５を含む抗ウイルス性組成物。
【請求項１６】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５およびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧからなるプロバイオティクスを含む抗ウイルス性組成物。
【請求項１７】
対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項１８】
対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項１９】
抗ウイルス性タンパク質の発現を増加させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項２０】
呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項２１】
インフルエンザウイルスの増殖を防ぐため、かつ／または、対象におけるインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項１】
対象において抗ウイルス効果を有する組成物の調製のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５の単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用での使用。
【請求項２】
組成物が医薬品、食品または飼料製品である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
組成物が医薬組成物である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
組成物が、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のためにある、請求項１−３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
対象において抗ウイルス効果を有する組成物であるラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５を単独でまたはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの併用で含む組成物の対象への投与を含む方法であって、対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のための方法。
【請求項６】
組成物が、対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるためにある、請求項１−５のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項７】
組成物が、抗ウイルス性タンパク質の発現を増加する、請求項１−６のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項８】
組成物が、呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるためにある、請求項１−６のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項９】
抗ウイルス性サイトカインが、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、およびＩＰ−１０からなる群から選択される、請求項８に記載の使用または方法。
【請求項１０】
呼吸器感染症が一般的な風邪（インフルエンザ）ウイルス、ライノウイルス、アデノウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、エンテロウイルス、コロナウイルスおよびエプスタイン・バール・ウイルスからなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、請求項４−９のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項１１】
呼吸器感染症がインフルエンザウイルス感染症である、請求項１０に記載の使用または方法。
【請求項１２】
インフルエンザウイルスがインフルエンザウイルスＡおよびインフルエンザウイルスＢからなる群から選択される、請求項１１に記載の使用または方法。
【請求項１３】
組成物がインフルエンザウイルスの増殖を防ぐため、かつ／または、対象におけるインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するためにある、請求項１０−１２のいずれか１つに記載の使用または方法。
【請求項１４】
対象が幼児、子供または成人である、請求項１−１３のいずれか１項に記載の使用または方法。
【請求項１５】
プロバイオティクスとしてラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５を含む抗ウイルス性組成物。
【請求項１６】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５およびラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧからなるプロバイオティクスを含む抗ウイルス性組成物。
【請求項１７】
対象における呼吸器感染症の治療および／または予防のためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項１８】
対象において呼吸器感染症を引き起こすウイルスに対する抵抗力を増大させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項１９】
抗ウイルス性タンパク質の発現を増加させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項２０】
呼吸器感染症に感染する、または、感染している対象において、抗ウイルス性サイトカインを増加させるためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【請求項２１】
インフルエンザウイルスの増殖を防ぐため、かつ／または、対象におけるインフルエンザウイルスの複製を減少させ、遅延させ、または阻害するためのラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＬＣ７０５単独またはラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ） ＧＧとの組合せ。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図５】
【公表番号】特表２０１３−５０７４３１（Ｐ２０１３−５０７４３１Ａ）
【公表日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３３６６３（Ｐ２０１２−５３３６６３）
【出願日】平成２２年１０月１３日（２０１０．１０．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＩ２０１０／０５０７９２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４５４７１
【国際公開日】平成２３年４月２１日（２０１１．４．２１）
【出願人】（５００１８５４１６）ヴァリオ・リミテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】Ｖａｌｉｏ Ｌｔｄ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月４日（２０１３．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月１３日（２０１０．１０．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＩ２０１０／０５０７９２
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４５４７１
【国際公開日】平成２３年４月２１日（２０１１．４．２１）
【出願人】（５００１８５４１６）ヴァリオ・リミテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】Ｖａｌｉｏ Ｌｔｄ．
【Ｆターム（参考）】
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