組換えアルファウイルスベクター
【課題】
精製された組換えウイルスベクター（特にアルファウイルスベクター）を凍結乾燥の形で高温で保存する方法、かつこれが患者への注射に適した形であることを提供すること。
【解決手段】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、誘導性プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターは、細胞内での該プロモーターの誘導の際にアルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、そしてここで、細胞内の誘導の前に、該発現カセットは、該発現カセットを含むＢＨＫ細胞に対して細胞毒性であるのに十分な量の構造タンパク質を発現しない、発現カセット。
精製された組換えウイルスベクター（特にアルファウイルスベクター）を凍結乾燥の形で高温で保存する方法、かつこれが患者への注射に適した形であることを提供すること。
【解決手段】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、誘導性プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターは、細胞内での該プロモーターの誘導の際にアルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、そしてここで、細胞内の誘導の前に、該発現カセットは、該発現カセットを含むＢＨＫ細胞に対して細胞毒性であるのに十分な量の構造タンパク質を発現しない、発現カセット。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、誘導性プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターは、細胞内での該プロモーターの誘導の際にアルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、そしてここで、細胞内の誘導の前に、該発現カセットは、該発現カセットを含むＢＨＫ細胞に対して細胞毒性であるのに十分な量の構造タンパク質を発現しない、発現カセット。
【請求項２】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、細胞内でウイルスｃＤＮＡからＲＮＡの合成を開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、次にウイルスＲＮＡからアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質遺伝子に作動可能に連結されるウイルス接合領域プロモーター、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含み、但し該カセットは、全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項３】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター及びアルファウイルス糖タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターは、アルファウイルスカプシドタンパク質遺伝子の発現を配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項４】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターは、アルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現も全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現も配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項５】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター、アルファウイルス構造タンパク質遺伝子、及び異種リガンド配列を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス構造タンパク質遺伝子及び該異種リガンド配列の発現を配向し、但し該プロモーターは、全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項６】
請求項１に記載の発現カセットであって、但し前記プロモーターが全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット。
【請求項７】
請求項３に記載の発現カセットであって、但し前記プロモーターが全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、ベネズエラウマ脳炎ウイルス由来である、発現カセット。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、ロス・リバーウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、セムリキ森林ウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、シンドビスウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１２】
請求項１、２、４、５又は６のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子が、アルファウイルスカプシドタンパク質をコードする、発現カセット。
【請求項１３】
請求項１、２、３、５、６又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、アルファウイルス構造タンパク質Ｅ３、Ｅ２及びＥ１から成るグループの中から選択されるタンパク質をコードする、発現カセット。
【請求項１４】
請求項３、４、５又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで該カセットが、ＤＮＡカセットである、発現カセット。
【請求項１５】
請求項２、３、４、５、６又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、誘発因子による該プロモーターの誘導の際に細胞内でタンパク質の発現を配向する誘導性プロモーターである、発現カセット。
【請求項１６】
請求項１４に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、メタロチオネイン、熱ショックタンパク質６５、熱ショックタンパク質８５及びＭＭＴＶから成るグループの中から選択される、発現カセット。
【請求項１７】
請求項１４に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａアクチン５Ｃ遠位、ＳＶ４０、Ｐｙ、ＲＳＶ、ＢＫ、ＪＣ、ＭｕＬＶ、ＣＭＶ及びＶＡ１ＲＮＡからなるグループの中から選択される、発現カセット。
【請求項１８】
請求項３又は７に記載の発現カセットであって、ここで該発現カセットが、ＲＮＡ発現カセットである、発現カセット。
【請求項１９】
請求項４又は５に記載の発現カセットであって、ここで該発現カセットが、ＲＮＡ発現カセットである、発現カセット。
【請求項２０】
請求項１８に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、アルファウイルス接合領域である、発現カセット。
【請求項２１】
請求項１９に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、アルファウイルス接合領域である、発現カセット。
【請求項２２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質発現カセットを含む、細胞。
【請求項２３】
請求項２２に記載の細胞であって、ここで該細胞が、パッケージング細胞であり、そしてここで該細胞が、アルファウイルスベクター作成体の導入の際に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、細胞。
【請求項２４】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、請求項１、２、５、６又は７のいずれか１項に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、ならびにアルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン、及び組換えベクター粒子からなるグループの中から選択されるベクターを導入することを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、組換え型アルファウイルス粒子を前記細胞集団から収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項２６】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、（ａ）請求項３又は７に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、（ｂ）アルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン及び組換えベクター粒子から成るグループの中から選択されるベクター、ならびに（ｃ）プロモーター及びアルファウイルスカプシド遺伝子を含む発現カセットであって、ここで該プロモーターが、アルファウイルスカプシド遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターはアルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット、を導入することを含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記細胞集団から組換え型アルファウイルス粒子を収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項２８】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、（ａ）請求項１８に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、（ｂ）アルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン及び組換えベクター粒子から成るグループの中から選択されるベクター、ならびに（ｃ）プロモーター及びアルファウイルスカプシド遺伝子を含む発現カセットであって、ここで該プロモーターが、該アルファウイルスカプシド遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターはアルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット、を導入することを含む、方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、前記細胞集団から組換え型アルファウイルス粒子を収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項３０】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化されたウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３１】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正されたウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３２】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化された第１のウイルス接合領域、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正された第２のウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３３】
アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体であって、ＲＮＡの合成を細胞内でウイルスｃＤＮＡから開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、以下：（ｉ）全ての活性なウイルス接合領域、（ｉｉ）サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正されたウイルス接合領域、及び（ｉｉｉ）サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化されたウイルス接合領域からなるウイルス接合領域、ならびにアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体。
【請求項３４】
アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体であって、ＲＮＡの合成を細胞内でウイルスｃＤＮＡから開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化された第１のウイルス接合領域、続いてサブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正された第２のウイルス接合領域、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体。
【請求項３５】
ポリアデニル化配列をさらに含む、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体。
【請求項３６】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで前記アルファウイルスが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ロス・リバーウイルス及びセムリキ森林ウイルスから成るグループの中から選択される、ベクター作成体。
【請求項３７】
前記アルファウイルスがシンドビスウイルスである、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体。
【請求項３８】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、選択された異種ヌクレオチド配列をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項３９】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで該ベクター作成体が、約１００塩基〜約８ｋｂのサイズの範囲の選択された異種ヌクレオチド配列を含む、ベクター作成体。
【請求項４０】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５及びＧＭ−ＣＳＦから成るグループの中から選択されたタンパク質をコードする配列である、ベクター作成体。
【請求項４１】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、ＩＬ−２である、ベクター作成体。
【請求項４２】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ＨＰＶ，ＨＢＶ，ＨＩＶ，ＨＳＶ，ＦｅＬＶ，ＦＩＶ，ＨＴＬＶ−Ｉ，ＨＴＬＶ−ＩＩ及びＣＭＶから成るグループの中から選択されたウイルスから得られる、ベクター作成体。
【請求項４３】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、Ｃ型肝炎ウイルスから得られる、ベクター作成体。
【請求項４４】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、アンチセンス配列、非コードセンス配列及びリボザイム配列から成るグループの中から選択される、ベクター作成体。
【請求項４５】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで該ベクター作成体が、アルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含まない、ベクター作成体。
【請求項４６】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、前記ウイルス接合領域から下流に位置する、ベクター作成体。
【請求項４７】
請求項３１〜３４に記載のベクター作成体であって、ここで選択された異種ヌクレオチド配列が、前記第２のウイルス接合領域から下流に位置する、ベクター作成体。
【請求項４８】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで選択された異種ヌクレオチド配列が、アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列内に位置する、ベクター作成体。
【請求項４９】
請求項３０、３２、３３又は３４に記載のベクター作成体であって、ここで前記不活性化されたウイルス接合領域が、ヌクレオチド番号７５７９〜ヌクレオチド７５９７までの以下に示されているようなヌクレオチド配列から成る、ベクター作成体。
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【表１−４】
【表１−５】
【表１−６】
【表１−７】
【請求項５０】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、アデノウイルスＬ３遺伝子又はＣＭＶ Ｈ３０１遺伝子をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５１】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、非アルファウイルスパッケージング配列をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５２】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、３’転写終了部位をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５３】
請求項５２に記載のベクター作成体であって、ここで前記転写終了部位が、終了／ポリアデニル化配列である、ベクター作成体。
【請求項５４】
組換え型アルファウイルス粒子であって、ＢＨＫ細胞内への導入の時点で、感染後少なくとも７２時間生存可能な感染細胞を産生する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５５】
組換え型アルファウイルス粒子であって、ＢＨＫ細胞内への導入の時点で、感染後少なくとも７２時間生存可能である感染細胞を産生し、該粒子はまた、アルファウイルス粒子での感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導くベクター作成体をも保有しており、ここで該抗原又はその修飾された形態が動物内で免疫応答を刺激する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで該発現された抗原が、細胞媒介型免疫応答、ＨＬＡクラスＩ−制限免疫応答、及びＨＬＡクラスＩＩ−制限免疫応答からなるグループの中から選択される免疫応答を惹起する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５７】
請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の組換え型アルファウイルス粒子を用いて、感染された細胞。
【請求項５８】
請求項５６に記載の細胞であって、ここで該細胞が、哺乳動物細胞である、細胞。
【請求項５９】
アルファウイルス構造タンパク質を誘導性に発現するパッケージング細胞系統であって、そしてアルファウイルスベクター作成体の導入の際に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞系統。
【請求項６０】
哺乳動物細胞から誘導される、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６１】
哺乳動物でない細胞から誘導される、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６２】
昆虫細胞から誘導される、請求項６１に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６３】
前記昆虫細胞が蚊細胞である、請求項６１に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６４】
請求項５９に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで該パッケージング細胞系統が、ベクター作成体の導入の時点で、ヒト細胞を感染するアルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞系統。
【請求項６５】
請求項５９に記載のパッケージング細胞系統であって、ここでアルファウイルス阻害タンパク質が、産生されない、パッケージング細胞系統。
【請求項６６】
アルファウイルスベクターのパッケージング及び産生に適したパッケージング細胞系統であって、ここで該パッケージング細胞系統が、ＶＳＶ−Ｇの発現を配向する発現カセットを含む、パッケージング細胞系統。
【請求項６７】
請求項６６に記載のパッケージング細胞系統であって、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する発現カセットをさらに含む、パッケージング細胞系統。
【請求項６８】
請求項５９〜６６に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで該細胞系統が、アポトーシスを抑制する遺伝子産物を発現する、パッケージング細胞系統。
【請求項６９】
請求項６８に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで前記遺伝子産物が、ｂｃｌ−２オンコ遺伝子、１９−ｋＤタンパク質をコードするアデノウイルスＥＩＢ遺伝子、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、ガンマ３４．５遺伝子、及びＡｃＭＮＰＶバキュロウイルスｐ３５遺伝子からなるグループの中から選択される遺伝子によってコードされる、パッケージング細胞系統。
【請求項７０】
アルファウイルス生産者細胞系統であって、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統、及びアルファウイルスウイルスベクター作成体又はアルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体を含み、ここで該生産者細胞系統が、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７１】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで前記組換え型アルファウイルス粒子が、ヒト細胞を感染する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７２】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、組換え型アルファウイルス粒子を誘導性に産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７３】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、該生産者細胞系統の分化状態に応答して組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７４】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適した生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、ｇａｇ／ｐｏｌの発現を配向する発現カセット、ｅｎｖの発現を配向する発現カセット、及びレトロウイルスパッケージング配列を含むアルファウイルスベクター作成体を含む、生産者細胞系統。
【請求項７５】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適した生産者細胞系統であって、ここで該細胞系統が、非アルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する１つ以上の発現カセット、及び非アルファウイルス構造タンパク質が誘導されるウイルスに対応するパッケージング配列を含むアルファウイルスベクター作成体を含む、生産者細胞系統。
【請求項７６】
パッケージング細胞系統から組換え型アルファウイルス粒子を産生するための方法であって、該方法は、アルファウイルスベクター作成体を請求項５９〜７０のいずれか１項に従うパッケージング細胞系統に、以下（ｉ）真核細胞重層ベクターイニシエーション系を用いたパッケージング細胞系統のトランスフェクション、（ｉｉ）インビトロでアルファウイルスベクター作成体から転写されるＲＮＡを用いたパッケージング細胞系統のトランスフェクション、及び（ｉｉｉ）組換えアルファウイルス粒子を用いたパッケージング細胞系統の感染からなるグループの中から選択されるプロセスによって導入することを含む、方法。
【請求項７７】
動物における抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって、アルファウイルスでの感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導くベクターを含む組換え型アルファウイルス粒子で、感受性のある動物標的細胞を感染させることを含み、ここで該抗原又はその修正された形態が動物内での免疫応答を刺激し、そしてここで該組換え型アルファウイルス粒子は、アルファウイルス構造タンパク質を発現する安定に形質転換された発現カセットを含むアルファウイルスパッケージング細胞から得られ、アルファウイルスベクター作成体の導入後に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、方法。
【請求項７８】
前記抗原がウイルス抗原である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
請求項７８に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ＨＰＶ，ＨＢＶ，ＨＩＶ，ＨＳＶ，ＦｅＬＶ，ＦＩＶ，ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−２及びＣＭＶからなるグループの中から選択されるウイルスから得られる、方法。
【請求項８０】
請求項７８に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、Ｃ型肝炎ウイルスから得られる、方法。
【請求項８１】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記抗原が、腫瘍抗原である、方法。
【請求項８２】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記抗原が、細菌、寄生虫又は真菌から得られる、方法。
【請求項８３】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクター作成体が、真核細胞重層ベクターイニシエーション系又はアルファウイルスベクター作成体ＲＮＡの前記パッケージング細胞へのトランスフェクトによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。
【請求項８４】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクター作成体が、組換え型アルファウイルス粒子を有する前記パッケージング細胞を感染することによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。
【請求項８５】
動物において抗原への免疫応答を刺激する方法であって、アルファウイルスでの感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導く組換え型アルファウイルス粒子で、感受性のある動物標的細胞を感染させることを含み、ここで該抗原又はその修正された形態は動物内での免疫応答を刺激し、そしてここで該組換え型アルファウイルス粒子は、感染性アルファウイルス粒子を産生する生産的感染を開始し得る組換えアルファウイルス粒子を含まない、方法。
【請求項８６】
請求項７７〜８５のいずれか１項に記載の方法であって、ここで前記標的細胞は、前記動物内で感染を受ける、方法。
【請求項８７】
請求項７７〜８５のいずれか１に記載の方法であって、ここで前記発現された抗原が、細胞媒介免疫応答、ＨＬＡクラス−Ｉ制限免疫応答及びＨＬＡクラスＩＩ−制限免疫応答からなるグループの中から選択される免疫応答を惹起する、方法。
【請求項８８】
組換え型アルファウイルス粒子であって、以下：
（ａ）異種核酸分子の発現を配向するアルファウイルスベクター作成体であって、ここで該アルファウイルスベクター作成体が、以下（ｉ）アルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、（ｉｉ）アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、（ｉｉｉ）異種核酸配列の発現を配向するウイルス接合領域プロモーター、及び（ｉｖ）ＲＮＡポリメラーゼ認識配列、を含むアルファウイルスベクター作成体であって、ここで該異種核酸配列がアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を置換し；
（ｂ）カプシドタンパク質；ならびに
（ｃ）該アルファウイルスベクター作成体のアルファウイルスとは異なる第２のウイルス由来のエンベロープ糖タンパク質
を含む、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項８９】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記カプシドが、アルファウイルスカプシドである、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９０】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記アルファウイルスベクターが、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、及びロス・リバーウイルスからなるグループの中から選択されるアルファウイルスから産生される、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９１】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記アルファウイルスベクターが、シンドビスウイルスから産生される、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９２】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記ベクター作成体が、前記第２のウイルス由来のＲＮＡパッケージングシグナルをさらに含む、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９３】
請求項９２に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記ＲＮＡパッケージングシグナルが、コロナウイルス、レトロウイルス又はＢ型肝炎ウイルス由来である、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９４】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記第２のウイルスが、前記アルファウイルスベクター作成体とは異なるアルファウイルスである、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９５】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記エンベロープ糖タンパク質が、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス及びロス・リバーウイルスからなるグループの中から選択されるアルファウイルスから得られる、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９６】
前記エンベロープ糖タンパク質が、センドビスウイルスから得られる、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９７】
前記第２のウイルスが、水疱性口内炎ウイルスである、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９８】
前記第２のウイルスが、コロナウイルス、レトロウイルス又はＢ型肝炎ウイルスである、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項１】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、誘導性プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターは、細胞内での該プロモーターの誘導の際にアルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、そしてここで、細胞内の誘導の前に、該発現カセットは、該発現カセットを含むＢＨＫ細胞に対して細胞毒性であるのに十分な量の構造タンパク質を発現しない、発現カセット。
【請求項２】
ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、細胞内でウイルスｃＤＮＡからＲＮＡの合成を開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、次にウイルスＲＮＡからアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質遺伝子に作動可能に連結されるウイルス接合領域プロモーター、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含み、但し該カセットは、全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、ＤＮＡアルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項３】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター及びアルファウイルス糖タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターは、アルファウイルスカプシドタンパク質遺伝子の発現を配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項４】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター及びアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス構造タンパク質遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターは、アルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現も全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現も配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項５】
アルファウイルス構造タンパク質発現カセットであって、プロモーター、アルファウイルス構造タンパク質遺伝子、及び異種リガンド配列を含み、ここで該プロモーターが、該アルファウイルス構造タンパク質遺伝子及び該異種リガンド配列の発現を配向し、但し該プロモーターは、全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、アルファウイルス構造タンパク質発現カセット。
【請求項６】
請求項１に記載の発現カセットであって、但し前記プロモーターが全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット。
【請求項７】
請求項３に記載の発現カセットであって、但し前記プロモーターが全てのアルファウイルス非構造タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、ベネズエラウマ脳炎ウイルス由来である、発現カセット。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、ロス・リバーウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、セムリキ森林ウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、シンドビスウイルス由来である、発現カセット。
【請求項１２】
請求項１、２、４、５又は６のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子が、アルファウイルスカプシドタンパク質をコードする、発現カセット。
【請求項１３】
請求項１、２、３、５、６又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記アルファウイルス構造タンパク質遺伝子又は糖タンパク質遺伝子が、アルファウイルス構造タンパク質Ｅ３、Ｅ２及びＥ１から成るグループの中から選択されるタンパク質をコードする、発現カセット。
【請求項１４】
請求項３、４、５又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで該カセットが、ＤＮＡカセットである、発現カセット。
【請求項１５】
請求項２、３、４、５、６又は７のいずれか１項に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、誘発因子による該プロモーターの誘導の際に細胞内でタンパク質の発現を配向する誘導性プロモーターである、発現カセット。
【請求項１６】
請求項１４に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、メタロチオネイン、熱ショックタンパク質６５、熱ショックタンパク質８５及びＭＭＴＶから成るグループの中から選択される、発現カセット。
【請求項１７】
請求項１４に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａアクチン５Ｃ遠位、ＳＶ４０、Ｐｙ、ＲＳＶ、ＢＫ、ＪＣ、ＭｕＬＶ、ＣＭＶ及びＶＡ１ＲＮＡからなるグループの中から選択される、発現カセット。
【請求項１８】
請求項３又は７に記載の発現カセットであって、ここで該発現カセットが、ＲＮＡ発現カセットである、発現カセット。
【請求項１９】
請求項４又は５に記載の発現カセットであって、ここで該発現カセットが、ＲＮＡ発現カセットである、発現カセット。
【請求項２０】
請求項１８に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、アルファウイルス接合領域である、発現カセット。
【請求項２１】
請求項１９に記載の発現カセットであって、ここで前記プロモーターが、アルファウイルス接合領域である、発現カセット。
【請求項２２】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質発現カセットを含む、細胞。
【請求項２３】
請求項２２に記載の細胞であって、ここで該細胞が、パッケージング細胞であり、そしてここで該細胞が、アルファウイルスベクター作成体の導入の際に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、細胞。
【請求項２４】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、請求項１、２、５、６又は７のいずれか１項に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、ならびにアルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン、及び組換えベクター粒子からなるグループの中から選択されるベクターを導入することを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、組換え型アルファウイルス粒子を前記細胞集団から収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項２６】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、（ａ）請求項３又は７に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、（ｂ）アルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン及び組換えベクター粒子から成るグループの中から選択されるベクター、ならびに（ｃ）プロモーター及びアルファウイルスカプシド遺伝子を含む発現カセットであって、ここで該プロモーターが、アルファウイルスカプシド遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターはアルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット、を導入することを含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記細胞集団から組換え型アルファウイルス粒子を収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項２８】
組換え型アルファウイルス粒子を作製する方法であって、組換え型アルファウイルス粒子が産生されるように、細胞集団の中へ、（ａ）請求項１８に記載のアルファウイルス構造タンパク質発現カセット、（ｂ）アルファウイルスベクター作成体、真核細胞重層ベクターイニシエーション系、ＲＮＡベクターレプリコン及び組換えベクター粒子から成るグループの中から選択されるベクター、ならびに（ｃ）プロモーター及びアルファウイルスカプシド遺伝子を含む発現カセットであって、ここで該プロモーターが、該アルファウイルスカプシド遺伝子の発現を配向し、但し該プロモーターはアルファウイルス糖タンパク質遺伝子の発現を配向しない、発現カセット、を導入することを含む、方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法であって、前記細胞集団から組換え型アルファウイルス粒子を収集する工程をさらに含む、方法。
【請求項３０】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化されたウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３１】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正されたウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３２】
アルファウイルスベクター作成体であって、ＲＮＡの合成をウイルスｃＤＮＡからインビトロ転写のプロセスによって開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化された第１のウイルス接合領域、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正された第２のウイルス接合領域、隣接するリーディングフレームの間のリボゾーム読み通しを促進する内部リボゾーム侵入部位又は配列、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスベクター作成体。
【請求項３３】
アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体であって、ＲＮＡの合成を細胞内でウイルスｃＤＮＡから開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、続いてアルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、以下：（ｉ）全ての活性なウイルス接合領域、（ｉｉ）サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正されたウイルス接合領域、及び（ｉｉｉ）サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化されたウイルス接合領域からなるウイルス接合領域、ならびにアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体。
【請求項３４】
アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体であって、ＲＮＡの合成を細胞内でウイルスｃＤＮＡから開始するウイルスｃＤＮＡのプロモーター５’、続いてアルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、サブゲノミックフラグメントのウイルス転写が妨げられるように不活性化された第１のウイルス接合領域、続いてサブゲノミックフラグメントのウイルス転写が減少されるように修正された第２のウイルス接合領域、及びアルファウイルスＲＮＡポリメラーゼ認識配列を含む、アルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体。
【請求項３５】
ポリアデニル化配列をさらに含む、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体。
【請求項３６】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで前記アルファウイルスが、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、ロス・リバーウイルス及びセムリキ森林ウイルスから成るグループの中から選択される、ベクター作成体。
【請求項３７】
前記アルファウイルスがシンドビスウイルスである、請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体。
【請求項３８】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、選択された異種ヌクレオチド配列をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項３９】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで該ベクター作成体が、約１００塩基〜約８ｋｂのサイズの範囲の選択された異種ヌクレオチド配列を含む、ベクター作成体。
【請求項４０】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５及びＧＭ−ＣＳＦから成るグループの中から選択されたタンパク質をコードする配列である、ベクター作成体。
【請求項４１】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、ＩＬ−２である、ベクター作成体。
【請求項４２】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ＨＰＶ，ＨＢＶ，ＨＩＶ，ＨＳＶ，ＦｅＬＶ，ＦＩＶ，ＨＴＬＶ−Ｉ，ＨＴＬＶ−ＩＩ及びＣＭＶから成るグループの中から選択されたウイルスから得られる、ベクター作成体。
【請求項４３】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、Ｃ型肝炎ウイルスから得られる、ベクター作成体。
【請求項４４】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、アンチセンス配列、非コードセンス配列及びリボザイム配列から成るグループの中から選択される、ベクター作成体。
【請求項４５】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで該ベクター作成体が、アルファウイルス構造タンパク質遺伝子を含まない、ベクター作成体。
【請求項４６】
請求項３０〜３４のいずれか１項に記載のベクター作成体であって、ここで前記選択された異種ヌクレオチド配列が、前記ウイルス接合領域から下流に位置する、ベクター作成体。
【請求項４７】
請求項３１〜３４に記載のベクター作成体であって、ここで選択された異種ヌクレオチド配列が、前記第２のウイルス接合領域から下流に位置する、ベクター作成体。
【請求項４８】
請求項３８に記載のベクター作成体であって、ここで選択された異種ヌクレオチド配列が、アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列内に位置する、ベクター作成体。
【請求項４９】
請求項３０、３２、３３又は３４に記載のベクター作成体であって、ここで前記不活性化されたウイルス接合領域が、ヌクレオチド番号７５７９〜ヌクレオチド７５９７までの以下に示されているようなヌクレオチド配列から成る、ベクター作成体。
【表１−１】
【表１−２】
【表１−３】
【表１−４】
【表１−５】
【表１−６】
【表１−７】
【請求項５０】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、アデノウイルスＬ３遺伝子又はＣＭＶ Ｈ３０１遺伝子をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５１】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、非アルファウイルスパッケージング配列をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５２】
請求項３２又は３４に記載のベクター作成体であって、３’転写終了部位をさらに含む、ベクター作成体。
【請求項５３】
請求項５２に記載のベクター作成体であって、ここで前記転写終了部位が、終了／ポリアデニル化配列である、ベクター作成体。
【請求項５４】
組換え型アルファウイルス粒子であって、ＢＨＫ細胞内への導入の時点で、感染後少なくとも７２時間生存可能な感染細胞を産生する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５５】
組換え型アルファウイルス粒子であって、ＢＨＫ細胞内への導入の時点で、感染後少なくとも７２時間生存可能である感染細胞を産生し、該粒子はまた、アルファウイルス粒子での感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導くベクター作成体をも保有しており、ここで該抗原又はその修飾された形態が動物内で免疫応答を刺激する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５６】
請求項５５に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで該発現された抗原が、細胞媒介型免疫応答、ＨＬＡクラスＩ−制限免疫応答、及びＨＬＡクラスＩＩ−制限免疫応答からなるグループの中から選択される免疫応答を惹起する、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項５７】
請求項５４〜５６のいずれか１項に記載の組換え型アルファウイルス粒子を用いて、感染された細胞。
【請求項５８】
請求項５６に記載の細胞であって、ここで該細胞が、哺乳動物細胞である、細胞。
【請求項５９】
アルファウイルス構造タンパク質を誘導性に発現するパッケージング細胞系統であって、そしてアルファウイルスベクター作成体の導入の際に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞系統。
【請求項６０】
哺乳動物細胞から誘導される、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６１】
哺乳動物でない細胞から誘導される、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６２】
昆虫細胞から誘導される、請求項６１に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６３】
前記昆虫細胞が蚊細胞である、請求項６１に記載のパッケージング細胞系統。
【請求項６４】
請求項５９に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで該パッケージング細胞系統が、ベクター作成体の導入の時点で、ヒト細胞を感染するアルファウイルス粒子を産生する、パッケージング細胞系統。
【請求項６５】
請求項５９に記載のパッケージング細胞系統であって、ここでアルファウイルス阻害タンパク質が、産生されない、パッケージング細胞系統。
【請求項６６】
アルファウイルスベクターのパッケージング及び産生に適したパッケージング細胞系統であって、ここで該パッケージング細胞系統が、ＶＳＶ−Ｇの発現を配向する発現カセットを含む、パッケージング細胞系統。
【請求項６７】
請求項６６に記載のパッケージング細胞系統であって、１つ以上のアルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する発現カセットをさらに含む、パッケージング細胞系統。
【請求項６８】
請求項５９〜６６に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで該細胞系統が、アポトーシスを抑制する遺伝子産物を発現する、パッケージング細胞系統。
【請求項６９】
請求項６８に記載のパッケージング細胞系統であって、ここで前記遺伝子産物が、ｂｃｌ−２オンコ遺伝子、１９−ｋＤタンパク質をコードするアデノウイルスＥＩＢ遺伝子、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、ガンマ３４．５遺伝子、及びＡｃＭＮＰＶバキュロウイルスｐ３５遺伝子からなるグループの中から選択される遺伝子によってコードされる、パッケージング細胞系統。
【請求項７０】
アルファウイルス生産者細胞系統であって、請求項５９に記載のパッケージング細胞系統、及びアルファウイルスウイルスベクター作成体又はアルファウイルスｃＤＮＡベクター作成体を含み、ここで該生産者細胞系統が、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７１】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで前記組換え型アルファウイルス粒子が、ヒト細胞を感染する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７２】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、組換え型アルファウイルス粒子を誘導性に産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７３】
請求項７０に記載のアルファウイルス生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、該生産者細胞系統の分化状態に応答して組換え型アルファウイルス粒子を産生する、アルファウイルス生産者細胞系統。
【請求項７４】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適した生産者細胞系統であって、ここで該生産者細胞系統が、ｇａｇ／ｐｏｌの発現を配向する発現カセット、ｅｎｖの発現を配向する発現カセット、及びレトロウイルスパッケージング配列を含むアルファウイルスベクター作成体を含む、生産者細胞系統。
【請求項７５】
組換え型アルファウイルス粒子のパッケージング及び産生に適した生産者細胞系統であって、ここで該細胞系統が、非アルファウイルス構造タンパク質の発現を配向する１つ以上の発現カセット、及び非アルファウイルス構造タンパク質が誘導されるウイルスに対応するパッケージング配列を含むアルファウイルスベクター作成体を含む、生産者細胞系統。
【請求項７６】
パッケージング細胞系統から組換え型アルファウイルス粒子を産生するための方法であって、該方法は、アルファウイルスベクター作成体を請求項５９〜７０のいずれか１項に従うパッケージング細胞系統に、以下（ｉ）真核細胞重層ベクターイニシエーション系を用いたパッケージング細胞系統のトランスフェクション、（ｉｉ）インビトロでアルファウイルスベクター作成体から転写されるＲＮＡを用いたパッケージング細胞系統のトランスフェクション、及び（ｉｉｉ）組換えアルファウイルス粒子を用いたパッケージング細胞系統の感染からなるグループの中から選択されるプロセスによって導入することを含む、方法。
【請求項７７】
動物における抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって、アルファウイルスでの感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導くベクターを含む組換え型アルファウイルス粒子で、感受性のある動物標的細胞を感染させることを含み、ここで該抗原又はその修正された形態が動物内での免疫応答を刺激し、そしてここで該組換え型アルファウイルス粒子は、アルファウイルス構造タンパク質を発現する安定に形質転換された発現カセットを含むアルファウイルスパッケージング細胞から得られ、アルファウイルスベクター作成体の導入後に、組換え型アルファウイルス粒子を産生する、方法。
【請求項７８】
前記抗原がウイルス抗原である、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
請求項７８に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、インフルエンザウイルス、ＲＳウイルス、ＨＰＶ，ＨＢＶ，ＨＩＶ，ＨＳＶ，ＦｅＬＶ，ＦＩＶ，ＨＴＬＶ−１，ＨＴＬＶ−２及びＣＭＶからなるグループの中から選択されるウイルスから得られる、方法。
【請求項８０】
請求項７８に記載の方法であって、ここで前記ウイルス抗原が、Ｃ型肝炎ウイルスから得られる、方法。
【請求項８１】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記抗原が、腫瘍抗原である、方法。
【請求項８２】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記抗原が、細菌、寄生虫又は真菌から得られる、方法。
【請求項８３】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクター作成体が、真核細胞重層ベクターイニシエーション系又はアルファウイルスベクター作成体ＲＮＡの前記パッケージング細胞へのトランスフェクトによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。
【請求項８４】
請求項７７に記載の方法であって、ここで前記アルファウイルスベクター作成体が、組換え型アルファウイルス粒子を有する前記パッケージング細胞を感染することによって、該パッケージング細胞に導入される、方法。
【請求項８５】
動物において抗原への免疫応答を刺激する方法であって、アルファウイルスでの感染を受けた標的細胞内で少なくとも１つの抗原又はその修正された形態の発現を導く組換え型アルファウイルス粒子で、感受性のある動物標的細胞を感染させることを含み、ここで該抗原又はその修正された形態は動物内での免疫応答を刺激し、そしてここで該組換え型アルファウイルス粒子は、感染性アルファウイルス粒子を産生する生産的感染を開始し得る組換えアルファウイルス粒子を含まない、方法。
【請求項８６】
請求項７７〜８５のいずれか１項に記載の方法であって、ここで前記標的細胞は、前記動物内で感染を受ける、方法。
【請求項８７】
請求項７７〜８５のいずれか１に記載の方法であって、ここで前記発現された抗原が、細胞媒介免疫応答、ＨＬＡクラス−Ｉ制限免疫応答及びＨＬＡクラスＩＩ−制限免疫応答からなるグループの中から選択される免疫応答を惹起する、方法。
【請求項８８】
組換え型アルファウイルス粒子であって、以下：
（ａ）異種核酸分子の発現を配向するアルファウイルスベクター作成体であって、ここで該アルファウイルスベクター作成体が、以下（ｉ）アルファウイルスＲＮＡの転写を開始する５’配列、（ｉｉ）アルファウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列、（ｉｉｉ）異種核酸配列の発現を配向するウイルス接合領域プロモーター、及び（ｉｖ）ＲＮＡポリメラーゼ認識配列、を含むアルファウイルスベクター作成体であって、ここで該異種核酸配列がアルファウイルス構造タンパク質遺伝子を置換し；
（ｂ）カプシドタンパク質；ならびに
（ｃ）該アルファウイルスベクター作成体のアルファウイルスとは異なる第２のウイルス由来のエンベロープ糖タンパク質
を含む、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項８９】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記カプシドが、アルファウイルスカプシドである、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９０】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記アルファウイルスベクターが、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、及びロス・リバーウイルスからなるグループの中から選択されるアルファウイルスから産生される、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９１】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記アルファウイルスベクターが、シンドビスウイルスから産生される、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９２】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記ベクター作成体が、前記第２のウイルス由来のＲＮＡパッケージングシグナルをさらに含む、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９３】
請求項９２に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記ＲＮＡパッケージングシグナルが、コロナウイルス、レトロウイルス又はＢ型肝炎ウイルス由来である、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９４】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記第２のウイルスが、前記アルファウイルスベクター作成体とは異なるアルファウイルスである、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９５】
請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子であって、ここで前記エンベロープ糖タンパク質が、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス及びロス・リバーウイルスからなるグループの中から選択されるアルファウイルスから得られる、組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９６】
前記エンベロープ糖タンパク質が、センドビスウイルスから得られる、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９７】
前記第２のウイルスが、水疱性口内炎ウイルスである、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【請求項９８】
前記第２のウイルスが、コロナウイルス、レトロウイルス又はＢ型肝炎ウイルスである、請求項８８に記載の組換え型アルファウイルス粒子。
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【図３Ｇ】
【図３Ｈ】
【図４】
【図６】
【図８】
【図９】
【図１】
【図２】
【図５】
【図７】
【図１０】
【図１１】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【図３Ｇ】
【図３Ｈ】
【図４】
【図６】
【図８】
【図９】
【図１】
【図２】
【図５】
【図７】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２００６−１１７（Ｐ２００６−１１７Ａ）
【公開日】平成１８年１月５日（２００６．１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１８１３１９（Ｐ２００５−１８１３１９）
【出願日】平成１７年６月２１日（２００５．６．２１）
【分割の表示】特願平７−５０９３７０の分割
【原出願日】平成６年９月１５日（１９９４．９．１５）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＦＬＯＰＰＹ
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１月５日（２００６．１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年６月２１日（２００５．６．２１）
【分割の表示】特願平７−５０９３７０の分割
【原出願日】平成６年９月１５日（１９９４．９．１５）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＦＬＯＰＰＹ
【出願人】（５９１０７６８１１）カイロン コーポレイション (265)
【Ｆターム（参考）】
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