血液成分を提供する方法及び装置
方法は、試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するために提案される。方法は、以下の手順を含む：少なくとも２つの開口部（１１２、１１４）を有する少なくとも１つの計量キャピラリー（１１０）を準備すること；計量キャピラリー（１１０）を試料（１３４）で少なくとも部分的に満たすこと；計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分（１５０、１５４）の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なうこと；及び、計量キャピラリー（１１０）を少なくとも２つの部分片（１６０、１６２）に分割し、ここで、部分片の少なくとも１つ（１６０）は、規定容積の標的成分（１６４）を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中、特に血液試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための方法に関する。本発明は、さらに、試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための計量キャピラリー及び装置に関する。かかる方法、計量キャピラリー、及び装置は、特に、毛細管血から規定量の血漿を得るために使用され得る。
【背景技術】
【０００２】
体液、例えば血液の検査は、医療診断の重要な要素であることが多い。かかる検査は、病院、及びポイントオブケア部門又はホームモニタリングで行なわれ得る。以下に記載の本発明は、特に血液試料に関するものであるが、他のタイプの試料、特に液体試料、好ましくは体液も同様に検査することができる。他の検査可能な試料に対して制限を加えるものではないが、以下では主に血液試料に関して本発明を説明する。
【０００３】
試料は、通常、少なくとも１つの医療用及び／又は診断用に提供される。診断用では、例えばそれらは少なくとも１つの性質、例えば、物理的に、及び／又は化学的に、又は生化学的に測定することが可能な少なくとも１つのパラメータに関して検査され得る。例えば、試料は、少なくとも１つの検体、特に、少なくとも１つの代謝物の定性的検出及び／又は定量的検出の対象となり得る。そのため、従来から多くの検出方法が知られている。
【０００４】
例えば、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、ヘモグロビン、尿素、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ガンマ−グルタミントランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）若しくは高比重リポタンパクコレステロール（ＨＤＬＣ）、又は上記分析物若しくは他の分析物の組み合わせの検出が可能である。さらに、血液の他の性質、例えば、血球成分の割合（ヘマトクリット値）が測定され得る。
【０００５】
血液試料を検査する上での問題は、例えば、他のタイプの試料でも言えることだが、多くの場合、これらの血液試料を、更なる使用の前に処理しなければならないことである。具体的には、多くの用途で、血液試料を血球成分と血漿とに分離する等、血液試料をそれらの構成成分に分画する必要がある。血液試料をその構成成分にするこの分離は、正確な規定量の試料を用いると同時に、多くの検査が高い純度、すなわち、高い分離度を必要とするので、一般に、非常に慎重に行なわれる必要がある。多くの場合、これらの試料調製の正確さという点での厳しい要件は、未熟練者による分析を困難又は不可能にする。なぜなら、規定の要件を満たす試料調製は、一般に、熟練者によって行なわざるを得ないからである。例えば、現在、パラメータＨＤＬＣ（高比重リポタンパクコレステロール）を測定することが可能な装置は市場にはないか、或いはほんのわずかの装置しか存在しない。その主な理由は、分離の際に凝固が生じるため、このパラメータが、抗凝固剤が添加される血漿で、且つ、正確に規定された試料容積（例えば、３１±１．５μｌ）を用いる場合にのみ、すなわち、非常に慎重な試料調製の後においてのみ、測定され得るからである。
【０００６】
血液試料から血漿、例えば、毛細管血漿を得る既知の方法は、毛細管血を得た後、遠心分離を行なう方法である。例えば、体表面の切開により出てくる血液は、キャピラリーを用いて採集され、次いで、遠心分離され得る。
【０００７】
毛細管血を採集して遠心分離する装置は、原則的には、従来から知られている。例えば、採集し、分離し、そして二相の液体に分配する管が、米国特許第５，４５６，８８５号明細書に開示されている。他方で、充填された後、正確な検体容積を得るために、所定の区切り点で切断されるキャピラリーも市販されている。かかるキャピラリーは、例えばＤｒ． Ｍｕｌｌｅｒ Ｇｅｒａｔｅｂａｕ ＧｍｂＨ， Ｄ−０１７０５ Ｆｒｅｉｔａｌ， Ｇｅｒｍａｎｙから市販されているか、或いは、例えば、ドイツ実用新案第２９５２０９１８号に開示されている。切断されたキャピラリー部分は、その中にある血液とともに、次いで、試料管、例えばカップに入れられる。かかる試料管は、次いで、遠心分離機にかけられ、遠心分離される。また別の方法として、毛細管血漿の試料はまた、毛細管血を試料管に直接、採集することによって、毛細管血から得ることができる。血液試料中の血球部分が血漿と分離する遠心分離の後、余剰の血漿から、所望量の過剰な血漿がピペットで取り除かれる。
【０００８】
しかしながら、このピペット操作では、一般に、ピペット操作中に試料管の底部の凝血塊に触れ、その結果、非血漿成分もピペットで取るという危険があるので、この操作は非常に慎重に行なわれなければならないという課題がある。血漿画分がこのように汚染され得るので、その結果として、測定値が大きな影響を受け得る。
【０００９】
この血漿画分の汚染の危険性は、不必要に多量の血液又は血漿を採集することによってのみ、低減され得る。例えば、汚染の危険性のない必要量の血漿を得るためには、必要な血漿の約５〜７倍の量が毛細管血として採集されなければならない。
【００１０】
しかしながら、非常に多量の血液を抜くことは、それ自体、非常に困難である。例えば、一般に、約３１±１．５μｌの純粋な血漿が、通常の検査、例えば、１つ以上の上記検体の定量的検出に必要とされる。上記の方法では、毛細管血が多量に入手できることを前提とするが、これは必ずしも可能とは限らない。例えば、上記によれば、約１５０〜２００μｌの毛細管血がこのために必要とされるが、多くの場合、現実には入手することだけでも難しい。
【００１１】
所定の区切り点を備えるキャピラリーもまた、他の先行技術文献で知られている。例えば、血液又は他の液体を検査する混合装置が米国特許第４，０６６，４０７号明細書に開示されている。とりわけ、ピペットが切り込みによってあらかじめ分離されることが記載されている。遠心分離後、ピペットは切り込みに沿って分割される。
【００１２】
キャピラリー管内の正確な試料量を測定する方法及び装置がドイツ特許第１５９８５０１号に開示されている。とりわけ、上記文献には、試料で満たされたキャピラリー管がどのようにキャップで閉じられて、遠心分離されるかが記載されている。ヘマトクリット値は、次いで、測定され得る。キャピラリー管はまた、正確な規定容積の血漿量を検査するためにキャピラリー管を切断させる刻み目を有する。
【００１３】
正確な量の液体試料を分離するための使い捨て器具もまた、ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号に開示されている。所定の区切り点を有する精密測定用のキャピラリー管が用いられる。
【００１４】
同様に、液体の容量測定を行なうピペット操作のための、特に、毛細管血を採集するための使い捨てマイクロピペットがドイツ特許出願公開第２７２４４６５号に開示されている。例えば、それを正確なマイクロ単位の量の血漿を得るために用いることができる。そのマイクロピペットは所定の区切り点を多数有している。これら所定の区切り点は、マイクロピペットの外側の表面に配置されている。
【００１５】
水性液体試料を採集する器具及び方法がドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号に開示されている。キャピラリーと閉鎖エレメントが用いられ、その周囲にキャピラリー部分を含む閉鎖エレメントは、所定の区切り点によって切断され得るか、又は破壊開放され得る。さらに、キャピラリーはその内部に、強磁性物質でできた混合エレメント及び混合エレメントを保持する役割を有する保持エレメントを有する。しかしながら、強磁性の混合エレメントとこれらの保持エレメントは、高速でキャピラリーを遠心分離する際に、該キャピラリーチャンネルに損傷をもたらし得る。キャピラリー端部のひとつの可能な構造として、特にルアーコーン、すなわち、キャピラリー端部の周辺において外径が縮小された円錐形が開示されている。
【００１６】
しかしながら、実際のところ、従来技術により既知の装置及び方法には、多くの技術的課題及び技術的欠点がある。特に、重要な欠点は、既知の装置の取り扱いの安全性にある。このように、所定の区切り点を有するキャピラリーは、特に、試料中の所望の標的成分を提供することができるまでに、手動で又は自動で、数回操作される必要がある。この操作は、その性質上、測定結果のずれを引き起こし得る、多くの振盪動作と、多種多様の位置及び方向へのキャピラリーの反復位置決めとを含んでいる。これが、試料の漏れ、試料成分の望ましくない混合、或いは計量の人為的な影響につながり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第５，４５６，８８５号
【特許文献２】ドイツ実用新案第２９５２０９１８号
【特許文献３】米国特許第４，０６６，４０７号
【特許文献４】ドイツ特許第１５９８５０１号
【特許文献５】ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号
【特許文献６】ドイツ特許出願公開第２７２４４６５号
【特許文献７】ドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
したがって、本発明の目的は、試料中の正確な容積の標的成分を提供するための既知の方法及び装置の欠点を少なくとも実質的に回避する方法及び装置を利用可能にすることである。詳細には、提案の方法及び装置は、試料中の他の成分による標的成分の汚染の危険を伴うことなく、同時に高純度を確保する一方で、試料中の標的成分、特に、血液試料中の血漿成分の容積を、安全に、一定に、かつ正確に提供することを可能とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
この目的は、独立項に規定の特徴を有する方法及び装置によって達成される。個々に、又は、一緒に実現され得る本発明の有利な成果は、従属項に規定されている。以下に記載の方法は、特に、記載されている装置の１つ以上を用いることによって実施され得る。そして、該装置は、記載されている変形例の１つ以上で本発明に係る方法を実施するように設計され得る。したがって、本方法の可能な実施態様に関して、装置の説明を参照することができ、その逆もまた同様である。
【００２０】
本発明は、まずキャピラリーによって毛細管血を採集した後、規定容積の血液を得るためにキャピラリーを切断し、次いで、得られた血液（適当な場合には任意の追加処理後）を遠心分離するという従来から知られている方法が、血液を遠心分離前にキャピラリーから取り除かない場合には、非常に簡略化、且つ、改良され得るとの認識に基づく。したがって、本発明は、特に、正確に規定された容積の血漿の採集及び利用に用い得る方法及び装置に関する。少なくともその開口部の１つに狭窄部を有する、特別に改造された計量キャピラリーが用いられる。したがって、本発明は、特別なキャピラリー内に血液を採集すること、このキャピラリー内の血液を遠心分離して血漿を採集すること、そして最後に、正確に規定された内部容積を有するこのキャピラリーの一端を折り取り、その後の試験のためにこの規定容積の血漿を空にすることによって、一定容積の血漿採取・適用(volume-dosed plasma application)を実施する、例えばテストストリップにそれを塗布することの組み合わせを含み得る。本発明は、血液の必要量を大幅に抑え、かつ、手作業の分離やピペット操作を不要にする。同時に、得られる血漿の量は容積が一定で正確である。
【００２１】
概して、試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための方法が提案される。上述したように、この試料は、特に、毛細管血等の血液試料、及び／又は、他の体液試料であり得る。しかし、原則として、他の試料も用いることができる。
【００２２】
標的成分とは、一般に、更なる使用に利用できるようにするため等、提供に関心が持たれている試料成分であると理解され得る。上述したように、標的成分は、特に、血漿であり得る。提供とは、この標的成分の採集、及び／又は、この標的成分の利用、詳細にはそれを少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に利用することであると理解される。「規定」容積とは、所定の誤差限界の範囲内、例えば、±５％以下、好ましくは±１％以下の誤差限界の範囲内で再現可能な方法で提供され得る容積であると理解される。
【００２３】
提案している方法は、以下の方法手順を含み、記載された順序で実施することが好ましいが、必ずしもそうする必要はない。また、記載されていない追加の方法手順を実施してもよい。さらに、個々の方法手順又は追加の方法手順を繰り返したり、同時に又は時間をずらして実施したりしてもよい。
【００２４】
最初の方法手順では、少なくとも２つの開口部を有する少なくとも１つの計量キャピラリーを準備する。計量キャピラリーとは、広く知られている寸法のキャピラリーチャンネルを有するキャピラリーであると理解される。寸法は、少なくとも既知であるか、或いは上記の許容誤差が満たされ得る程度に再現性があるものでなければならない。計量キャピラリー及び計量チャンネルは、好ましくは実質的に真っ直ぐな形状であり得る。しかし、他の形状もまた、原則として、可能であり、例えば、Ｕ字形に曲がった計量キャピラリー等、湾曲した計量キャピラリーも可能である。
【００２５】
計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部を有する。例えば、開口部は、計量キャピラリーの両端、又は、計量キャピラリーの両端近傍、例えば、その両端から計量キャピラリーの外径の最大２０倍離れたところに配置され得る。代わりに、或いは、追加で、開口部の少なくとも１つはまた、計量キャピラリーの他の位置に配置されてもよい。例えば、計量キャピラリーは、計量キャピラリーの少なくとも１つのキャピラリーチャンネルの両末端等、互いに向き合う２つの開口部を有してもよい。計量キャピラリーは、それゆえに、好ましくは両端が開口する線形の計量キャピラリーとして設計される。より詳しく以下に説明するように、これらの少なくとも２つの開口部は、少なくとも１つの遠位開口部及び少なくとも１つの近位開口部から構成され得る。近位開口部とは、充填が行なわれる開口部であると理解されるのに対して、遠位開口部とは、充填が行なわれない別の開口部であると理解される。
【００２６】
本発明によれば、計量キャピラリーの開口部の少なくとも１つは、狭窄部を有する。本発明との関連において、狭窄部とは、概して、計量キャピラリーの内径が、計量キャピラリーの長手方向で見て、狭窄部の上流及び／又は下流等狭窄部周辺領域の計量キャピラリーの内径に比べて狭くなっていることであると理解される。例えば、狭窄部の外側で、キャピラリーチャンネルは、実質的に一定の内径を有していてもよい。しかし、他の形状もまた、原則として可能であり、例えば、円錐形のキャピラリーチャンネルも可能である。特に、狭窄部は、計量キャピラリーの内径を半分以下、より特定的には４分の１以下に狭くすることができる。
【００２７】
狭窄部は、キャピラリーチャンネルの長手方向の広がりに沿って、好ましくは狭窄部の外側でキャピラリーチャンネルの平均内径の２０倍以下、特に好ましくは１０倍以下、又は５倍以下又は２倍以下の長さを有する。したがって、狭窄部は、キャピラリーチャンネルの内径の局部的な狭窄として形成され得る。しかし、他の形状も可能である。
【００２８】
１つの開口部がかかる狭窄部を有する場合、これは、本発明では、狭窄部が開口部に直接、又は、開口部のすぐ近くに、配置されていることを意味し得る。すぐ近くとは、例えば、開口部から、開口部の直径の２０倍以下、好ましくは１０倍以下、特に好ましくは５倍以下、もしくは２倍以下の距離離れて配置されていることであると理解される。上述したように、開口部は、特に計量キャピラリーの一端又は一端の近傍に配置され得るので、狭窄部も同様に、特に一端又は一端の近傍に配置され得ることになる。したがって、狭窄部は、特に、端部に位置している狭窄部として形成され得る。
【００２９】
例えば、狭窄部は、キャピラリーの少なくとも１つの内側に突出した周縁エッジを含み得る。しかし、キャピラリーの他のタイプの狭窄形状の他の狭窄部も可能である。一般に、狭窄部は、キャピラリーに適した押出成形法等により、技術的に簡単に作られる。
【００３０】
狭窄部は、特に計量キャピラリーの一端に配置され得、その末端は以下で狭窄部末端とも称される。例えば、狭窄部は、狭窄によって、計量キャピラリーの内径が、この狭窄部外側領域における内径の１０〜８０％の値に、特に２０〜６０％の値に、特に好ましくはおよそ４０％の値に、例えば４２％に縮小されるように設計され得る。狭窄部領域、すなわち、狭窄部末端等の狭窄によって最も狭くなった計量キャピラリーの位置では、計量キャピラリーの内径は、好ましくは１．０ｍｍ以下、特に好ましくは０．８ｍｍ以下、特に０．６ｍｍ以下で、例えば０．５±０．２ｍｍである。例えば、狭窄部領域における計量キャピラリーの内径は、０．２ｍｍから０．８ｍｍの間、好ましくは０．３ｍｍから０．７ｍｍの間、そして、特に好ましくは０．５±０．２ｍｍであり得る。狭窄部外側領域では、計量キャピラリーは、例えば、０．５ｍｍ〜２．０ｍｍ、特に０．８ｍｍ〜１．６ｍｍ、好ましくは１．０ｍｍ〜１．４ｍｍ、そして、特に好ましくは１．２ｍｍで、例えば１．２０±０．０２ｍｍの内径を有し得る。計量キャピラリーは、例えば、０．０５ｍｍ〜３．０ｍｍ、好ましくは０．０７ｍｍ〜０．５ｍｍ、そして、特に好ましくは０．１ｍｍ〜０．２ｍｍ、例えば０．１７５ｍｍ±０．０２ｍｍの壁厚を有し得る。分割されていない状態では、計量キャピラリーは、例えば、２０ｍｍ〜２００ｍｍ、好ましくは３０ｍｍ〜１２０ｍｍ、そして、特に好ましくは７０ｍｍ〜８０ｍｍで、例えば７５．０ｍｍ±０．５ｍｍの長さを有し得る。分割操作によって、計量キャピラリーは、例えば２分割され得る。ここで、望ましくは狭窄部末端に面する第１の部分片は、例えば５ｍｍから６０ｍｍの間、特に２０ｍｍから４０ｍｍの間、そして、特に好ましくは２５ｍｍから３０ｍｍの間で、例えば２８．０±０．９ｍｍの長さを有する。計量キャピラリーの全容積に対する第１の部分片の容積の割合は、例えば、１０％〜７０％、好ましくは２０％〜６０％、そして、特に好ましくは３０％〜４０％で、例えば３７％±２％であり得る。
【００３１】
この少なくとも１つの狭窄部が、従来から知られている装置を上回る、本発明にかかる計量キャピラリーの顕著に有利な効果を示す。例えば、前述したドイツ特許出願公開第２２１７２３０号には、提案されている装置の取り扱い中、血液の漏出を防ぐために特別なおさえが必要とされる旨が開示されている。さらに、ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号によれば、提案されている装置は、非常に慎重に操作される必要があり、また、キャピラリー管を水平な位置で保持する必要がある。
【００３２】
本発明にかかる今回提案している計量キャピラリー、および本発明にかかる方法では、取り扱いにおけるこれらの制約をほぼ完全に回避することができる。このように、サンプリング及び相分離の間、計量キャピラリーを水平に保持することは、今ではもはや不可欠ではなく、それどころか狭窄部によれば、試料漏出の危険を冒すことなく、傾斜状態の保管、取扱位置、及び取扱方向を採択することも可能である。ここでいう方向とは、計量キャピラリーの長手方向が水平面に対して０°以外の角度、例えば少なくとも２０°、又は少なくとも５０°、さらにはおよそ垂直方向までの角度であることを想定している。一方では、これがこの方法及びこの計量キャピラリーのユーザーフレンドリーな使い勝手の良い特質を高めている。けれども、他方では、それはまた、特に医療用途の場合に、誤りの可能性を大きく低減させる。その理由は、例えば計量キャピラリーを斜めに保持することによりユーザーによって引き起こされる誤りが、例えば、液体試料の漏れやその結果としての計量キャピラリーの不完全な充填に起因する人為的なサンプリングミス及び／又は人為的な計量ミスを引き起こし、結果的に測定結果を歪めることが今ではもはや必ずしも起こるというわけではないからである。
【００３３】
また一方、それと同時に、提案している計量キャピラリーは、上述のドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号に記載された設計等と比較して、より詳しく以下に記載される方法であって、計量キャピラリー内で成分分離した後、計量キャピラリーを部分片に分割することを含む方法に適している。このように、提案している計量キャピラリーは、特に、混合エレメント及び保持エレメントの影響を受けることなく、また、試料成分の損傷又は混ざり合いの危険を伴うことなく遠心分離することが可能である。切断方法はまた、混合エレメント及び／又は保持エレメントがこの作業に影響を与え得ることなく、構成成分を分離するために、例えば所定の区切り点で行なわれ得る。さらに、これらの方法手順の詳細は、以下でより詳細に説明される。
【００３４】
さらなる方法手順において、計量キャピラリーは、少なくとも一部が試料で満たされる。例えば、充填は、少なくとも２つの開口部の１つ以上、すなわち、近位開口部を介して行なわれる。充填は、好ましくはキャピラリーチャンネルが試料で完全に満たされるように、少なくとも実質的に完全であることが好ましい。このため、少量の試料が充填には用いられない開口部、例えば上述の遠位開口部から出現し得る。遠位開口部から出てくる過剰量は、充填操作の後、例えば単に拭き取られることによって除去することができる。しかし、キャピラリーチャンネルの主要部、即ち後に規定容積を提供する部分が実質的に完全に充填される限りにおいて、計量キャピラリーの不完全な充填もまた原則として起こり得る。
【００３５】
さらに、この方法は、計量キャピラリー内で試料中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離のために行なう成分分離の方法手順を実施することを含む。特に、血液試料の場合、これら少なくとも２つの成分は、血液試料のすでに述べた血漿と血球部分（凝血塊）とを含み得る。しかしながら、一方では、別の種類の分離、例えば、２つ以上の構成成分への分離もまた可能である。従来から知られている方法とは対照的に、この場合の成分分離は、試料を計量キャピラリーから取り除くことなく、キャピラリー自体の中で行なわれる。それゆえ、例えば、この提案している方法は、キャピラリーの内容物を遠心分離容器に入れるために、そしてその後、遠心分離にかけるために、キャピラリーの切断部分を遠心分離容器に入れるという、既知の方法とは異なる。
【００３６】
この成分分離は、特に、計量キャピラリー及び／又は該計量キャピラリーに入っている試料に対する力の作用により行なわれる。具体的には、これらは、重力及び／又は慣性力であり得る。例えば、重力は、成分分離のための静的分離又は沈降という状況において用いられ得る。例えば、慣性力は、例えば遠心分離機、特にヘマトクリット遠心分離機等によって、計量キャピラリー及び／又は計量キャピラリー内の試料に対して加えられる遠心力を含み得る。
【００３７】
さらなる方法手順では、計量キャピラリーは、少なくとも２つの部分片に分割され、部分片の少なくとも１つは、規定容積の標的成分を含む。
【００３８】
この計量キャピラリーの少なくとも２つの部分片への分割は、成分分離に好適な様々な方法で行なわれ得る。例えば、２つの部分片は、例えば、計量キャピラリーが、該計量キャピラリーの両端に各々対応する２つの部分片に正確に分割され得るように、提供され得る。これらの部分片の１つは、次いで、例えば、標的部分片として用いられ得るし、規定容積の標的成分を含み得る。しかしながら、あるいは、例えば、計量キャピラリーの２つの両端を折り取り、真ん中の部分片だけを、規定容積の標的成分を含む標的部分片として用いるような、いくつかの部分片への分割もまた可能である。様々な形態が可能である。
【００３９】
上で説明したように、方法は、規定容積の標的成分を少なくとも医療用途及び／又は診断用途に提供することを更に含み得る。例えば、この提供は、標的成分中の少なくとも１つの分析物の検出のための分析方法、及び／又は、標的成分の少なくとも１つの他の性質を測定する別の方法の提供を含み得る。この提供のために、例えば、規定容積の標的成分が標的部分片から分注され得る。例えば、この場合、例えば、少なくとも１つの部分片、すなわち、その中に受容した規定容積の標的成分を有する標的部分片の部分片開口部を試験エレメント及び／又は試料キャリアと接触させることによって、毛細管力を再び利用することができる。例えば、この接触は、部分片開口部を試料キャリアの上に置くことによって行なわれ得る。例えば、この試験エレメント及び／又は試料キャリアは、例えば、試験紙又は平らな顕微鏡用スライドのように、フラットに設計され得る。規定容積の標的成分を分注する、すなわち、提供するための部分片開口部は、例えば、計量キャピラリーに予めすでに存在していた開口部、好ましくは、遠位開口部又は近位開口部からなり得る。しかしながら、あるいは、部分片開口部はまた、計量キャピラリーが少なくとも２つの部分片に分割される場合にのみ形成される少なくとも１つの開口部、例えば、切断端にある開口部からなり得る。しかしながら、すでに存在する開口部を介する分注が好ましい。なぜなら、この開口部は、異なる分割手順の場合であっても、常に規定されたままであるからである。
【００４０】
成分分離では、特に、血液試料の場合、血液試料の血球成分は、遠心力及び／又は重力の作用の下、血漿から少なくとも部分的に分離され得る。次いで、計量キャピラリーは、好ましくは、規定容積の標的成分ができる限り血漿だけを含むような方法で分割される。しかし、他の血液成分による汚染は、所定の許容限度内で適切な場合には、許容され得る。代わりに又は追加で、他の標的成分も言うまでもなく選択することができる。例えば、血球成分が、特に、標的成分として選択され得る。しかし、以下では、別の可能な実施形態について限定することなく、選択される標的成分は血漿であることを前提とする。
【００４１】
上で説明したように、少なくとも１つの標的成分は、特に、成分分離後の計量キャピラリーから標的成分を選択するために計量キャピラリーを分割することによって選択される。これは、特に、計量キャピラリーを少なくとも２つの部分片への分割によって行なわれ得る。一例に基づいて以下に詳細に説明するように、例えば、少なくとも１つの機械的な切断方法が計量キャピラリーを分割するために用いられ得る。例えば、計量キャピラリーは、少なくとも１つの所定の区切り点を、例えば、全体的に又は部分的に周囲に切れ込みが入った形状で有し得る。切れ込みという用語は、広義に解釈され、原則として、壁厚の所望の局所的減少を含む。例えば、研削面も含み得る。特に、切れ込みは、切断の際に、円滑に切断されるように作られ得る。いくつかの所定の区切り点を設けることも可能である。所定の区切り点は、例えば、１５０μｍ〜３００μｍの間、特に１７５μｍ、又は２００μｍの壁厚で、１０μｍ〜１００μｍの間、特に３５μｍ〜５０μｍの間の切れ込み深さの切れ込みを有し得る。切れ込み深さの壁厚に対する比は、例えば、１／４〜１／６の間であり得る。
【００４２】
計量キャピラリーは、さらに１つ以上の視覚的に認識可能な印を含み得る。所定の区切り点は、特に、色によって、例えば、所定の切断点の周辺の計量キャピラリーの外表面に設けられる、使用者が認識できる１つ以上の標識によって、印が付けられ得る。例えば、１つ以上のリングマークが、所定の区切り点の一端又は両端に、例えば、所定の区切り点に対して対称的に設けられ得る。この色の標識は、計量キャピラリーの取り扱い、特に、部分片の分割を容易にし得る。
【００４３】
計量キャピラリーは、例えば、適当な切断によって、例えば、目標容積が計量キャピラリーのキャピラリー容積の５０％未満、好ましくは最大４５％、特に好ましくは３７％を占めるように分割され得る。例えば、キャピラリーの直径が一定のキャピラリーが用いられ得る。例えば、計量キャピラリーは、７０μｌ〜１５０μｌの間、好ましくは８０μｌ〜９０μｌの間、特に好ましくは８４μｌのキャピラリー容積を有し得る。上記分割で、標的成分の容積は、全キャピラリー容積が約８４μｌの場合には、例えば、３１μｌであり得る。
【００４４】
特に、キャピラリーの直径が一定のキャピラリーを計量キャピラリーとして用いる場合、計量キャピラリーは、例えば、上記の切断方法によって、例えば、２つ以上の部分片に分割され得る。例えば、計量キャピラリーは、ｘ比で分割され得る。例えば、この比ｘは、計量キャピラリーの全長、及び／又は、最初に充填した計量キャピラリーの全長に対する、規定容積の標的成分を含む部分片におけるキャピラリーの部分的な長さに対応している。この好ましい比は、通常６０％を超えない典型的なヘマトクリット値から導かれる。このように、例えば、３７％の比ｘによって、例えば、所定の区切り点の位置の適切な選択によって、血液試料を用いる場合に、分割が、血漿のみで満たされた計量キャピラリーの領域内で常に確実に行なわれるようにすることが可能となる。規定容積の標的成分は、次いで、特に２つの部分片のより短い方、言い換えると、計量キャピラリーの全長の５０％未満、又は、好ましくは最大４５％、特に計量キャピラリーの全長の３７％の長さを有する部分片から取り出され得る。
【００４５】
成分分離が行なわれた後であって、且つ、計量キャピラリーが分割される前に、例えば、試料の別の性質を測定するために、別の措置が行なわれ得る。例えば、成分分離が行なわれた後であって、且つ、計量キャピラリーが分割される前に、少なくとも１つの中間の分析工程が行なわれ得る。この少なくとも１つの中間の分析工程では、例えば、試料中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離から、例えば、血漿の血液試料及び血液試料の血球部分の場合に、計量キャピラリー内で、試料の少なくとも１つの性質に関する結果を得ることが可能である。例えば、血液試料の血球成分の割合に関する、特に、ヘマトクリット値に関する結果を得ることができる。
【００４６】
この中間の分析工程は、特に、比較的簡単な方法、例えば、光学的測定及び／又は光学的検査によって行なわれ得る。これは、完全に自動で、或いは、手動でも行なわれ得る。
【００４７】
例えば、計量キャピラリー内の成分の分離を視覚的に観察できるように、ガラス又は少なくとも部分的に透明な材料でできている計量キャピラリーが用いられ得る。このように、少なくとも２つの成分間に少なくとも１つの仕切り線の位置を設けることによって、例えば、ヘマトクリット値等の少なくとも１つの性質に関する結果を得ることができる。計量キャピラリーの直径が一定であれば、これは、ヘマトクリット値を算出するためには、例えば、血球成分で満たされた計量キャピラリー部分の長さを、例えば、簡単な定規又は他の測定器具を用いることによって測定すること、及びこの長さを計量キャピラリーの全長又は計量キャピラリーの充填された全長と比較することを含み得る。
【００４８】
上で説明したように、少なくとも１つの計量キャピラリーは、例えば、線形の形状の計量キャピラリーとして設計され得るが、他のデザインも可能である。例えば、計量キャピラリーは、遠位端及び近位端を有してもよく、遠位開口部が遠位端に配置され、近位開口部が近位端に配置される。それゆえに、遠位及び近位開口部は、好ましくは互いに計量キャピラリーの反対端に配置される。
【００４９】
本発明によれば、計量キャピラリーの開口部の少なくとも１つが狭窄部を有する。狭窄部の可能なデザインに関しては、上記記述を参照のこと。特に、少なくとも１つの遠位開口部は、かかる狭窄部をもつように設計され得る。少なくとも１つの近位開口部、すなわち、計量キャピラリーに充填するための開口部は、かかる狭窄をもつことなく設計され得る。遠位開口部にある狭窄部の代わりに、又は、それに加えて、近位開口部等の他の開口部にも、言うまでもなく、かかる狭窄部が設けられ得る。
【００５０】
上で説明したように、計量キャピラリーは、具体的には、近位開口部の方から充填され得る。上で説明したように、充填操作中、ある量の試料が遠位開口部に現れ得る。これが、計量キャピラリーが完全に満たされたことを裏付ける。遠位開口部に現れた試料は、成分分離が行なわれる前、及び／又は、本発明の方法中の他のときに、例えば、計量キャピラリーを拭くか、或いは、他のクリーニング手順によって除き得る。この発明によって提案しているように、狭窄部を有する計量キャピラリーが用いられる場合、計量キャピラリーの遠位端における試料のこの出現は、ほとんどの場合、防止され得るか、或いは、少なくとも抑え得る。
【００５１】
上で説明したように、計量キャピラリーが分割された後、したがって、規定容積の標的成分が得られた後、この規定容積の標的成分は、特に、少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に提供され得る。この提供は、例えば、開口部の少なくとも１つを介して達成され得る。例えば、仕切り線に面した開口部、例えば、計量キャピラリーが切断された後の区切り点にある開口部が用いられ得る。しかしながら、切断端は、場合によっては、不明確であり得るため、規定容積の標的成分はもともと存在する開口部、例えば遠位開口部を介して少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に提供される場合が特に好ましい。
【００５２】
上で説明したように、計量キャピラリーの充填は、好ましくは、計量キャピラリーが試料によって実質的に完全に満たされるように行なわれる。例えば、これは、遠位開口部からの少量の試料の上記出現によって成し遂げられ得る。成分分離、特に、遠心分離方法による成分分離が行なわれる前に、開口部の少なくとも１つが閉じられる必要がある。
【００５３】
近位開口部が、特に、閉じられ得る。しかし、代わりに又は追加で、別の開口部、例えば、いずれにしても成分分離で試料が送りこまれる方向にある開口部も閉じられ得る。これはまた、特に、近位開口部であってもよい。しかし、他の実施形態も原則として可能である。
【００５４】
少なくとも１つの開口部は、様々な方法で閉じられ得る。特に、１つ以上の以下の閉鎖片が用いられ得る：しっくい；キャップ、特にプラスチックキャップ、好ましくはシリコーンキャップ；ワックス、特にヘマトクリットワックス、樹脂、接着剤。
【００５５】
少なくとも１つの計量キャピラリーとして、原則として、従来から知られている材料を用いることが可能である。例えば、少なくとも１つの計量キャピラリーは、少なくとも１つのガラス物質を含み得、及び／又は全体がガラスから作られ得る。しかしながら、原則として、石英、セラミック、プラスチック等の他の材料も可能である。特に、用いられる材料は、用いられる特定の分割方法に適応され得る。破壊方法が用いられる場合には、硬い脆性材料を用いることが好ましい。他の分割方法、例えば、切断方法が用いられる場合には、容易に切断され得る材料、例えば、プラスチックを用いることが好ましい。特に、透明な、或いは、少なくとも部分的に透明な材料を用いることが可能である。
【００５６】
計量キャピラリーは、特に０．５ｍｍ〜４ｍｍの間、特に１．０ｍｍ〜１．２ｍｍの間のキャピラリー内径を有し得る。これらのキャピラリー径は、特に、実際に血液試料を受け入れる上で、適切であることが証明されている。しかしながら、他のキャピラリー径も、原則として可能である。
【００５７】
さらに、計量キャピラリーはまた、１つ以上の活性物質を含み得る。特に、計量キャピラリーは、少なくとも１つの抗凝固剤物質、すなわち、血液試料の凝固を少なくとも部分的に防止する活性物質を含み得る。例えば、この活性物質は、計量キャピラリーの材料に組み込まれ得る。しかしながら、代わりに又は追加で、活性物質が計量キャピラリーの内面にコーティングとして、特に、抗凝固剤コーティングの形で塗布される場合が特に好ましい。一般的に用いられる抗凝固剤、例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）コーティング、及び／又は、Ｎａ−ヘパリン及び／又はＬｉ−ヘパリン及び／又はアンモニウムへパリン等のヘパリンコーティングが用いられ得る。しかし、他の抗凝固剤もまた知られており、代わりに又は追加で、用いられ得る。
【００５８】
計量キャピラリーの他の好ましい実施形態では、計量キャピラリーは、狭窄部を備えている開口部、すなわち、狭窄部末端が滑らか、且つ／或いは、平らである。特に、計量キャピラリーは、この狭窄部末端が平面状であるか、扁平状であり得る。特に、鋭利な切断端は、このようにして避けられ得る。例えば、この滑らか、且つ／或いは、平らなデザインは、研磨及び／又は熱による丸み付け等の熱処理によって形成され得る。例えば、狭窄部が設けられている開口部における外表面は、計量キャピラリーの縦軸に対して、実質上、垂直に、例えば、計量キャピラリーの縦軸に対して９０°から５°を超えない偏差で延びていることができる。例えば、ここでいう「滑らか」とは、１００μｍ未満、好ましくは５０μｍ未満、特に好ましくは２０μｍ未満、又は１０μｍ未満、５μｍ未満、または２μｍ未満の粗さ値（二乗平均平方根粗さ）であることを意味し得る。
【００５９】
例えば、このように、狭窄部末端は、例えば、破壊方法によって作り出され、成分分離及びそれに続く計量キャピラリーの少なくとも２つの部分片への分割の後、規定容積の標的成分を含む第１の部分片の一部であり得る。以下においてより詳しく説明されるように、第１の部分片の狭窄部末端は、少なくとも１つの試験エレメント、例えば、試験エレメントの適用領域及び／又は試験領域に接触させ得る。狭窄部末端の動き、例えば、円運動を試験エレメント上で行うことができ、第１の部分片から試験エレメント上に試料を広げることを促進する。試験エレメントの損傷は、狭窄部末端の望ましい滑らかな性質によって防止される。
【００６０】
記載されている方法のバリエーションの１つでは、記載されている方法に加えて、前述の実施形態の１つにかかる方法に用いるのに、特に適切であることが期待できる計量キャピラリーがまた、提案される。この計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部を含む。開口部の少なくとも１つは、少なくとも１つの狭窄部を有する。計量キャピラリーはまた、開口部の間に、少なくとも１つの仕切り線、特に、少なくとも１つの所定の区切り点を備える少なくとも１つの仕切り線を有する。仕切り線とは、一般に、ここでは特に、キャピラリーの長手方向に対して、特に使用者が肉眼で確認できるように垂直に延びる線であって、これに沿って分割され得る線として理解され得る。所定の区切り点の代わりに、又はそれに加えて、仕切り線もまた、計量キャピラリーが少なくとも２つの部分片に分割される場合に、計量キャピラリーの仕切りの位置を特定する、例えば、リング状の印又は同様の形態で、例えば、少なくとも１つの仕切り印を付けるといった、他の方法で形成され得る。さらなる可能な詳細については、上記記述を参照のこと。
【００６１】
上述の１つ以上の実施形態のバリエーションにおける方法及び計量キャピラリーに加えて、本発明はまた、試料中、特に、血液試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するため、特に、規定容積の血漿を提供するための装置を提案する。装置は、特に、上述の１つ以上の実施形態のバリエーションにかかる方法を実施するために設計され得る。装置は、少なくとも１つの計量キャピラリー、特に、上記タイプの計量キャピラリーを含む。計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部、及び、少なくとも１つの仕切り線、特に、所定の区切り点を備えるか、及び／又は、少なくとも１つの仕切り印を備える仕切り線を含む。さらに、装置は、計量キャピラリー内の血液試料の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なうための少なくとも１つの分離装置を含む。この分離装置は、特に、ヘマトクリット遠心分離機等の遠心分離機を含み得る。さらなる装置の任意の実施形態については、例えば、上記記述を参照のこと。
【００６２】
装置は、計量キャピラリーに試料を少なくとも部分的に充填するための規定位置に計量キャピラリーを固定するように設計された少なくとも１つの保持装置をさらに含み得る。この規定位置とは、空間位置も方向も含む表現であり、特に、実質的に水平位置であり得る。実質的に水平位置とは、ここでは、わずかな偏差、例えば、最大２０°まで、好ましくは最大５°までの偏差も許容され得るが、計量キャピラリーが水平線に対して０°の角であろう位置として理解される。しかしながら、他の方向もまた、原則として可能である。例えば、保持装置は、簡単なキャピラリークランプ状のキャピラリーホルダー等を含み得る。代わりに又は追加で、例えば、保持装置はまた、例えば、上記の成分分離も続いて保持装置にて行なわれ得るというように、成分分離を実施するための分離装置の一部であり得る。
【００６３】
提案した方法、提案している計量キャピラリー、及び提案している装置は、この種の既知の方法及び装置に勝る数多くの利点がある。例えば、提案している方法は、非常に単純な方法で、且つ、実際のヘマトクリット値とは無関係に、８４μｌの毛細管血から正確に３１μｌ採集する等、毛細管血漿中の正確に規定された試料の採集を可能にする。好ましくは遠位端に少なくとも１つの狭窄部を備える計量キャピラリーが、特に有益であることがわかる。特に、狭窄部は、一方では、計量キャピラリーが折られる場合等に、計量キャピラリーの分割中及び分割後に血漿の漏れを防止し得るし、他方では、充填操作中、毛管移動を止めることによって、計量キャピラリーの過剰充填を回避し得る。この種の狭窄部は、原理上、例えば、計量キャピラリーの斜め状態での保管にとっても、有益であることがわかる。
【００６４】
計量キャピラリーは、原則として、１つ以上の開口部の方向から充填され得る。計量キャピラリーは、例えば、近位端が閉じられ得る。あるいは、遠位端の閉鎖もまた、原則として可能である。この場合の利点は、計量キャピラリーの遠位端閉鎖用の栓、例えば、しっくいの塊が試料によってあまり汚染されないことである。このように、遠位端はしっくいで閉じられ得る。そして、それは血液採集部位を有するその外表面に、例えば、指に接触していなかった。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
さらに、本発明の詳細及び特徴を、特に従属クレームとともに、以下の好ましい実施形態の記載から明らかにする。それぞれの特徴は、個々に、或いは、互いに組み合わせたいくつかに当てはめられ得る。本発明は、実施形態に限定されない。実施例は、図に概略的に示される。個々の図における同一の参照番号は、同一の要素を指すか、又は同一の機能を有する要素若しくはそれらの機能の観点から互いに対応する要素を表す。
【図１】本発明にかかる計量キャピラリーの実施形態を示す図である。
【図２Ａ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｂ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｃ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｄ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｅ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｆ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【実施例】
【００６６】
図１は、本発明にかかる計量キャピラリー１１０の簡単な例示の実施形態を示す。計量キャピラリー１１０は、例えば、ガラスキャピラリーとして設計され、例えば０．０５〜５ｍｍ、特に約０．２ｍｍの壁厚を有する。計量キャピラリーは、好ましくは５０〜１５０ｍｍ、特に約７５ｍｍの長さｌを有する。計量キャピラリーの内径は、例えば１．１〜１．２ｍｍであり、一方外径は、例えば１．６ｍｍであり得る。図１では外径をΦＡで表し、さらに、内径をΦＩで表す。
【００６７】
図示した実施形態で、計量キャピラリーは、好ましくは、計量キャピラリー１１０の内容積が計量キャピラリー１１０の長さに沿って均一に分布するように、実質的に一定の内径ΦＩを有する。
【００６８】
図示した実施形態で、計量キャピラリー１１０は、両端が２つの対向する開口部１１２、１１４で開口している真っ直ぐな形状の計量キャピラリー１１０として設計されている。これらの２つの開口部１１２、１１４の１つ目を、以下、遠位開口部１１６と表し、一方、これらの開口部１１２、１１４の２つ目を、近位開口部１１８と表す。図１を見てわかるように、遠位開口部１１６は、図示した実施形態では、狭窄部１２０を有する。この狭窄部１２０では、計量キャピラリー１１０の内径ΦＩは、例えば半分に、特に４分の１あるいはそれ以下に縮小されている。
【００６９】
計量キャピラリー１１０はまた、仕切り線１２２を有する。この仕切り線１２２は、例えば、視覚的に認識可能な印を含み得る。しかしながら、図１に示すように、この仕切り線１２２は、特に好ましくは、計量キャピラリー１１０に切り込まれた、所定の区切り点１２４からなる。この切り込みの切り込み深さは、例えば、計量キャピラリー１１０の壁厚の１／２０〜１／２、特に、１／４〜１／６であり得る。例えば、約０．２ｍｍの壁厚で、切り込み深さ、例えば、開先深さが３５μｍ〜５０μｍであることが好ましい。
【００７０】
仕切り線１２２は、２つの開口部１１２、１１４の１つから、好ましくは遠位開口部１１６から距離ｌ’離れて配置される。ｌ’のｌに対する比は以下ｘとも表す。好ましくは、ｘは＜５０％であり、特に、最大４５％或いはそれ以下であり、特に３７％である。したがって、容積Ｖ’は、仕切り線１２２から遠位開口部１１６がある遠位端１２６までの間の計量キャピラリー１１０の内部に受け入れられ、この容積Ｖ’（遠位端１２６にある狭窄部１２０によって見込まれるわずかな偏差を考慮する）は、遠位端１２６と近位端１２８との間の全容積Ｖに対してｘと同様に考えられる。例えば、全容積Ｖは、約８４μｌからなり得るし、さらに、以下参照番号１３０でも表される規定容積Ｖ’は、好ましくは３１μｌ±１．５μｌである。しかしながら、他の容積及び区切りも、原則として可能である。以下に示した方法では、規定容積１３０が標的成分を受け入れる。
【００７１】
計量キャピラリー１１０は、様々な方法で任意に発展させ得る。例えば、図１にも示されているように、計量キャピラリー１１０は、その内表面にＥＤＴＡコーティング等の抗凝固剤コーティング１３２を有し得る。
【００７２】
図２Ａから図２Ｆは、試料１３４中の規定容積の標的成分を提供するための本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す。本例では、試料１３４は、例えば、血漿と血球成分とに分けられる血液試料である。以下の本文では、試料が、最初から最後まで参照番号１３４で表されるように、方法の前後の試料１３４間で用語の区別は行なわれていない。それに加えて、これらの図は、試料１３４中の規定容積の標的成分を提供するための本発明にかかる計量キャピラリー１１０と、ある部分では、装置１３６の使用を示す。
【００７３】
図２Ａでは、まず初めに、装置１３６の一部である計量キャピラリー１１０が提供される。例えば、それは、図１に記載のタイプの計量キャピラリー１１０であり得る。例えば、約８４μｌの容積と、７５ｍｍの長さｌと、１．２ｍｍの内径ΦＩを有し、ＥＤＴＡでコーティングされ、その遠位端１２６に小さい狭窄部１２０を有する計量キャピラリー１１０を用いることが可能である。さらに、計量キャピラリー１１０は、適当な場所に、例えば、遠位端１２６から約２７ｍｍの距離ｌ’に、仕切り線１２２、特に、所定の区切り点１２４を有し得る。
【００７４】
図２Ａはまた、計量キャピラリー１１０が、例えば毛細管血の形態で、その開口部１１２、１１４の１つの方から試料１３４で満たされる操作も示している。図の実施形態に示すように、この充填は開口部１１２の方から行なわれ、その結果開口部１１２は定義により近位開口部１１８となる。しかしながら、代わりに、充填は、他の開口部１１４の方からも行なうことができよう。充填は、好ましくは、少なくともほぼ完全に行なわれる。
【００７５】
充填操作の間、計量キャピラリー１１０は、例えば、保持装置１３８に支えられ得る。この保持装置１３８は、例えば、クランプ装置として設計され得る。図２Ａにおいて、参照番号１４０で示されるように、この保持装置１３８はまた、分離装置、例えば、遠心分離機、特に、ヘマトクリット遠心分離機の一部であり得る。しかしながら、分離保持装置１３８も、原則として、考えられ得る。保持装置１３８は、特に、水平位置で計量キャピラリー１１０を保持するように設計され得る。このようにして、計量キャピラリー１１０は、患者の指腹１４４上の血液滴１４２で充填され得る。しかしながら、代わりに又は追加で、他のタイプの試料、例えば、前もって血液を充填してある別の容器からの試料も提供され得る。しかしながら、提案したように血液滴１４２から直接充填することは、非常に多くの利点を有する。
【００７６】
図２Ａに示すように計量キャピラリー１１０を充填した後、計量キャピラリー１１０の少なくとも１つの開口部１１２、１１４が図２Ｂに示す方法手順で閉じられる。計量キャピラリー１１０は、図２Ｂには示されていないが、今までどおり保持装置１３８に支えられていてもよい。図２Ｂに示す実施形態では、近位開口部１１８が閉じられる。通常、閉じられる開口部１１２、１１４は、特に、以下に記載する、分離装置１４０として遠心分離機を用いる分離工程で、試料１３４がこの閉じられた開口部１１２、１１４の方に送り込まれるように、遠心分離機の回転軸から１番遠くに位置している１つであり得る。本例では、それは近位開口部１１８である。
【００７７】
例えば、開口部１１２、１１４は、例えば、シリコンキャップ、ヘマトクリットワックス、樹脂、又は適切な接着剤を含み得る、閉鎖片１４６で閉じられ得る。
【００７８】
図２Ａに示すように計量キャピラリー１１０を充填する間、また、閉鎖片１４６で近位開口部１１８を閉鎖する間も、その正反対の位置にある、計量キャピラリー１１０の遠位端１２６の狭窄部１２０は、特に好ましい効果を有する。例えば、この狭窄部１２０は、充填操作の間、又は、閉鎖片１４６が装着される時に、比較的多量の試料１３４が遠位開口部１１６から出てくることを防止することができる。しかしながら、図２Ｂに示されるように、比較的少量の試料１３４が遠位開口部１１６から現れることがあり、その後、例えば単に拭き取られることによって除去され得る。遠位開口部１１６から現れるこの過剰分を、図２Ｂでは参照番号１４８で表す。
【００７９】
最後に、図２Ｃは、閉鎖片１４６で閉じられた充填した計量キャピラリー１１０を示す。この計量キャピラリー１１０は、ここでも図２Ｃには示されていないが、保持装置１３８に今までどおり保持されてもよい。しかしながら、計量キャピラリー１１０の輸送の代わりに、又は加えて、他のタイプの保管も、原則として、可能である。この目的のために、例えば、遠位開口部１１６も、例えば、キャップによって、及び／又は、接着剤によって、又は、同様の閉鎖物によって、任意に閉じられ得る。
【００８０】
その後、図２Ｄに象徴的に示される、成分分離を伴う手順が行なわれる（上からの斜視図をここに示す）。この成分分離は、試料１３４中の第１の成分と第２の成分１５４との少なくとも実質的な分離を含み、第１の成分は試料１３４中の血球部分１５２からなり、第２の成分は図示の例では血漿１５６からなる。この分離は、例えば、上記分離装置１４０、特に、遠心分離機を用いて行なわれる。遠心分離機は、例えば、ヘマトクリット遠心分離機又は同等のものとして設計され得る。具体的には、単純な遠心分離機が、調節の可能性なしで、例えば所定の回転速度及び／又は運転時間で、用いられ得る。この場合には、２つの成分１５０、１５４の分離が、遠心力によって行なわれ、ここでは、高密度の血球成分１５２が、計量キャピラリー１１０の近位端１２８へ向かって動かされる。それに対し、低密度成分の血漿１５６は、遠位端１２６に向かって落ち着く。図２Ｄに示されるように、２つの成分１５０、１５４の間には、相境界１５８ができる。この相境界１５８の位置は、現在のヘマトクリット値によって決められる。仕切り線１２２の、例えば、所定の区切り点１２４の位置は、通常のヘマトクリット値で、第２の成分１５４の領域内であって、相境界１５８に限りなく近くに位置されるように選択される。具体的には、上述したように、遠位端１２６から３０ｍｍ離れて配置され得る。
【００８１】
分離工程では、場合によって、気泡が計量キャピラリー１１０の遠位端１２６に留まる可能性がある。このような場合には、これらの気泡は、例えば、さらなる任意の方法手順において、例えば、近位開口部１１８で閉鎖片１４６のしっくいをさらに押し込むことによって、遠位開口部１１６から押し出すことができる。例えば、近位端１２８は、分離工程後、しっくい組成物中に押し戻され得る。このように、規定容積１３０が気泡を含まないことを確実なものとすることが可能である。
【００８２】
分離工程後、計量キャピラリー１１０は、分離装置１４０から取り出され、少なくとも２つの部分片１６０、１６２に分割され得る。これを、図２Ｅに、所定の区切り点１２４に沿った計量キャピラリー１１０の単純な破壊によって示す。しかしながら、計量キャピラリー１１０はまた、２つ以上の部分片にも分割され得る。
【００８３】
計量キャピラリー１１０を部分片１６０、１６２に分割することによって、標的成分１６４が選択される。この実施形態に示すように、この標的成分１６４は血漿１５６のできるだけ大きな部分であり、これが試料１３４の第２の成分１５４を形成する。図１を参照して既に記載したように、標的成分１６４は、正確に規定容積Ｖ’を含んでいる。
【００８４】
例えば、計量キャピラリー１１０のコーティング１３２に応じて、標的成分１６４中にこのように得られた血漿１５６は、それに対して添加する種々の抗凝固剤を有し得る。しかし、例えば、適切に迅速に行なわれる操作によって、非抗凝固処理血液から血漿１５６を調製することも可能である。
【００８５】
上述したように、遠心分離される標的成分１６４の標的容積は、例えば、正確に３１μｌであり得る。この標的成分１６４は、例えば、試験エレメント１６６に適用され得る。この例を図２Ｆに示す。ここでは、試験エレメント１６６を、少なくとも１つの試験領域１６８を有するテストストリップの形態で一例として示す。例えば、試験領域１６８は、適切な試験化学物質を含み得る。例えば、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ（登録商標）系分析器用のＨＤＬＣ試薬ホルダーが用いられ得る。第１の部分片１６０中の標的成分１６４は、例えば、狭窄部１２０がある遠位開口部１１６を試験領域１６８の担体メッシュに接触させることによって適用され得る。しかしながら、代案として、図２Ｅに示される、所定の区切り点１２４に面し、２つの部分片１６０、１６２の分割により生じる開口部１７０が、担体メッシュに適用され得る。しかしながら、示されている改良型が優先され、ここでは、最初の開口部１１２、１１４の１つ、好ましくは狭窄部１２０がある開口部１１４が、試験領域１６８に適用される。なぜなら、この開口部は、より明確な界面、例えば、滑らかな、平滑化された、或いは、磨かれた界面を提供するからである。試験エレメント１６６に適用後、例えば、現時点では血漿試料である試料１３４の性質の測定、例えば、血漿試料中の少なくとも１つの分析物の定性的検出及び／又は定量的検出を行なうことが可能である。例えば、高密度リポタンパクコレステロールが検出され得る。
【００８６】
さらに、記載した方法及び図示した装置１３６はまた、毛細管血試料の他の性質の測定も可能である。このように、１つ以上の中間分析法もまた、例えば、図２Ｄに示す分離工程後であって、２つの部分片１６２、１６４の分割を含む図２Ｅに示す工程の前に、行なわれ得る。例えば、相境界１５８の位置は、例えば、適切な測定装置を用いることによって、測定され得る。このような方法で、例えば、血球部分１５２の割合について、そして、試料１３４のヘマトクリット値について、結果が直接導き出され得る。例えば、これは、赤血球カラムの長さ、すなわち、第１の成分の血球部分１５２の長さを測定するための目盛り付きの定規を用いることによって行なわれ得る。計量キャピラリー１１０は、常に均一に、且つ、好ましくは完全に満たされているので、ヘマトクリット管からヘマトクリットを測定するのと同様に、ノモグラムは通常、不要である。
【００８７】
測定後、計量キャピラリー１１０の両方の部分片１６０、１６２は、廃棄されるか、或いは、さらに測定に用いられ得る。適切な印及び／又は所定の区切り点１２４がある計量キャピラリーを製造するために求められるテクニックは、原則として、当業者に知られている。血漿等の得られる標的成分１６４の量に関する要求精度は、生産技術の観点から問題はない。
【００８８】
遠心分離機等の分離装置１４０の回転速度及び／又は運転時間の正確さも、通常、求められない。生じる遠心力は、計量キャピラリー１１０の近位端１２８にある閉鎖片１４６の栓にあまり多くの負担をかけないために、できるだけ低くなるように選択される必要がある。例えば、５，０００ｇ〜１０，０００ｇ、特に７，０００〜９，０００ｇ、特に好ましくは８，０００ｇの相対遠心力（ｒｃｆ）を用いることができる。ここで、ｇは、重力加速度である。例えば、最大６０％のヘマトクリット値のために提案したキャピラリーの容積は、３１μｌの血漿を得るのに十分である。
【００８９】
計量キャピラリー１１０の遠位端１２６にある所定の区切り点１２４の適切な位置決めによって、或いは、計量キャピラリー１１０の内径の変更によって、異なる規定容積の血漿、又は、異なる規定容積の標的成分１６４を得ることも可能である。これは、基本的な操作を変更しない。
【００９０】
記載した計量キャピラリー１１０はまた、分離工程が行なわれることなく用いられ得ることに留意されたい。例えば、所定量の血液を、遠心分離工程なしに、計量キャピラリー１１０によって、適用し得る。
【００９１】
方法は、図２Ａ〜２Ｆに象徴的にのみ示され、本発明の範囲内で任意の所望の方法に変更され得ることもまた留意されたい。例えば、狭窄部１２０はまた、代案として、又は加えて、もう１つ別の開口部１１２、１１４に備えられ得る。さらに、充填はまた、別の開口部１１２、１１４の方から行なわれ得る。開示された方法の様々なバリエーションが考えられ得る。
【００９２】
上述したように、狭窄部１２０は、特に、計量キャピラリー１１０の取り扱いを大幅に改善し、かつ、容易にする効果を有する。特に、望ましくない漏出から保護することによって、向上した操作の安全性を提供する。種々の試験がこれを確認するために行なわれた。
【００９３】
これらの試験では、計量キャピラリー１１０を、新鮮な毛細管血（以下、「Ｃ」とも表す）、又は、静脈血（以下、「Ｖ」とも表す）の形態の試料とともに用いた。計量キャピラリー１１０は、ＥＤＴＡでコーティングし、狭窄部１２０を有していた。計量キャピラリー１１０は、７５．００ｍｍ±０．５０ｍｍの長さ、１．２０ｍｍ±０．２ｍｍの内径、１．５５ｍｍ±０．０２ｍｍの外径、及び２８．００ｍｍ±０．９０ｍｍの長さの第１の部分片１６０を有していた。狭窄部１２０の周辺では、計量キャピラリー１１０は、０．５０ｍｍ±０．２０ｍｍの内径を有していた。所定の区切り点１２４は、０．８０ｍｍ±０．１０ｍｍの幅を有する黒いリングマークによって両側に印を付けた。マークは、所定の区切り点１２４から１．０ｍｍ±０．２０ｍｍの距離に各々配置した。
【００９４】
計量キャピラリー１１０を、試料１３４で完全に満たし、水平に対して所定の傾斜角で、各場合に５秒間、傾けて保った。分離測定は、両方の傾斜方向に対して、すなわち、狭窄部１２０を備えている開口部１１４が下方を指す（以下、「狭窄部末端下向き」又は「ＣＤ」とも表す）傾斜の各場合の１回、及び狭窄部１２０を備えていない開口部１１２が下方を指す（以下、「開口末端下向き」又は「ＯＤ」とも表す）傾斜の各場合の１回、行なった。
【００９５】
これらの測定結果を表１に示す。この表１で用いた略語「Ｃ」、「Ｖ」、「ＣＤ」、及び「ＯＤ」は、すでに上で説明した。さらに、表１はまた、傾斜角で表した欄において、試験毎に、試験に用いられた試料１３４が計量キャピラリー１１０内に留まっている（「＋」で表した）か、或いは漏れ出した（「−」で表した）かを示す。
【００９６】
表１の結果は、１つの例外（番号６）を除いて、両タイプの血液（毛細管血及び静脈血）が傾斜角３０°までの試験条件を満たすことを示す。これは、計量キャピラリー１１０を取り扱う間、例えば、ホルダーから取り外す間、ヘマトクリットワックスでの閉鎖の間、或いは、同様の取り扱い操作の間、漏出に対して十分な安全性を確実にする。これらの容積を有するが、狭窄部１２０を有さない完全に充填された計量キャピラリー１１０は、取り扱いの間に故意ではなくとも起こり得るように、約５°の傾斜角を保った場合であっても漏れる。さらに、狭窄部１２０によれば、計量キャピラリー１１０を１８０°ですばやく１回転させることができるようになり、そして、それは、狭窄部１２０なしでは可能でない。このように、狭窄部１２０は、計量キャピラリー１１０を取り扱う間、重要な安全機能を担う。
【表１】
【００９７】
記載されている試験において使用した５秒間の保持時間は、手で計量キャピラリー１１０の取り扱いを実行する上で十分な時間を提供している。試験はまた、計量キャピラリー１１０を取り扱う使用者の誰もが、試験の間に、計量キャピラリー１１０から漏れるという事故に遭わないことを示した。しかしながら、完全に充填される開放のヘマトクリットキャピラリーについては、実際に、このような事故が頻繁に起こる。さらに、試験は、例えば、ヘマトクリットワックスによる一端の任意の閉鎖後、狭窄部１２０を有する計量キャピラリー１１０が、少なくとも分割操作が行なわれるまで、漏出に対して実に完全に保護されていたことを明らかにした。
【００９８】
狭窄部１２０は、記載されている試験においても、好ましくは一端に備えられているに過ぎない。一端に狭窄部１２０を配置する他の重要な理由は、計量キャピラリー１１０の折り取った部分、例えば、図２Ｅにおける第１の部分片１６０の漏出挙動である。この第１の部分片１６０の内容物、例えば、血漿のその内容物は、例えば遠心分離後、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ ＨＤＬＣ試験サポート等の試験エレメント１６６に完全に適用されなければならない。しかしながら、多くの場合、これは、第１の部分片１６０が、試験領域１６８及び／又は適用領域、例えば、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ ＨＤＬＣ試験サポートにおける黄色の適用領域に、圧力なしに置かれ、完全に空になるまで、徐々に循環運動させる場合に、機能するに過ぎない。狭窄部１２０を有する狭窄部末端は、多くの場合、滑らかに磨かれるか、或いは、熱で丸くされる等、丸みをつけられる。それに対し、第１の部分片１６０の他端が適用の間、移動のために用いられることになっている場合、試験領域１６８、例えば、この試験領域１６８の被覆布上は、容易に損傷を受け得るし、この第１の部分片１６０の鋭利なキャピラリー端部に擦られることによって、使用不能の状態にされ得る。したがって、狭窄部末端は、特に好ましくは平面的である。
【００９９】
計量キャピラリー１１０はまた、好ましくは狭窄部末端を経由して試料１３４で満たされる。それにより、充填操作の後、計量キャピラリー１１０は、もっぱら狭窄部末端で、通常、血液等の試料１３４で外側が汚染される。しかしながら、外側から計量キャピラリー１１０を洗浄することは、実際のところ、比較的難しく、熟練を必要とする。例えば、開放のキャピラリーである計量キャピラリー１１０を拭くことは、例えば、拭くために用いるセルロース布が、その吸引力等で計量キャピラリー１１０から血液等の試料１３４の一部を引き出さないことを確実にするために、スピードと熟練とを必要とする。それに対し、狭窄部１２０が用いられる場合、洗浄操作は、この狭窄部１２０のため、実際のところ、全く問題がなく、熟練していない者によって容易に行なわれ得る。狭窄部１２０で増大した毛細管力は、確実に、血液等の試料１３４が拭う布によって吸引されることを防止する。
【符号の説明】
【０１００】
１１０：計量キャピラリー
１１２：開口部
１１４：開口部
１１６：遠位開口部
１１８：近位開口部
１２０：狭窄部
１２２：仕切り線
１２４：所定の区切り点
１２６：遠位端
１２８：近位端
１３０：規定容積
１３２：抗凝固剤コーティング
１３４：試料
１３６：血液試料の標的成分を提供する装置
１３８：保持装置
１４０：分離装置
１４２：血液滴
１４４：指腹
１４６：閉鎖片
１４８：過剰分
１５０：第１の成分
１５２：血球部分
１５４：第２の成分
１５６：血漿
１５８：相境界
１６０：第１の部分片
１６２：第２の部分片
１６４：標的成分
１６６：試験エレメント
１６８：試験領域
１７０：開口部
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中、特に血液試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための方法に関する。本発明は、さらに、試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための計量キャピラリー及び装置に関する。かかる方法、計量キャピラリー、及び装置は、特に、毛細管血から規定量の血漿を得るために使用され得る。
【背景技術】
【０００２】
体液、例えば血液の検査は、医療診断の重要な要素であることが多い。かかる検査は、病院、及びポイントオブケア部門又はホームモニタリングで行なわれ得る。以下に記載の本発明は、特に血液試料に関するものであるが、他のタイプの試料、特に液体試料、好ましくは体液も同様に検査することができる。他の検査可能な試料に対して制限を加えるものではないが、以下では主に血液試料に関して本発明を説明する。
【０００３】
試料は、通常、少なくとも１つの医療用及び／又は診断用に提供される。診断用では、例えばそれらは少なくとも１つの性質、例えば、物理的に、及び／又は化学的に、又は生化学的に測定することが可能な少なくとも１つのパラメータに関して検査され得る。例えば、試料は、少なくとも１つの検体、特に、少なくとも１つの代謝物の定性的検出及び／又は定量的検出の対象となり得る。そのため、従来から多くの検出方法が知られている。
【０００４】
例えば、グルコース、コレステロール、トリグリセリド、ヘモグロビン、尿素、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、ガンマ−グルタミントランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、クレアチニン（ＣＲＥＡ）若しくは高比重リポタンパクコレステロール（ＨＤＬＣ）、又は上記分析物若しくは他の分析物の組み合わせの検出が可能である。さらに、血液の他の性質、例えば、血球成分の割合（ヘマトクリット値）が測定され得る。
【０００５】
血液試料を検査する上での問題は、例えば、他のタイプの試料でも言えることだが、多くの場合、これらの血液試料を、更なる使用の前に処理しなければならないことである。具体的には、多くの用途で、血液試料を血球成分と血漿とに分離する等、血液試料をそれらの構成成分に分画する必要がある。血液試料をその構成成分にするこの分離は、正確な規定量の試料を用いると同時に、多くの検査が高い純度、すなわち、高い分離度を必要とするので、一般に、非常に慎重に行なわれる必要がある。多くの場合、これらの試料調製の正確さという点での厳しい要件は、未熟練者による分析を困難又は不可能にする。なぜなら、規定の要件を満たす試料調製は、一般に、熟練者によって行なわざるを得ないからである。例えば、現在、パラメータＨＤＬＣ（高比重リポタンパクコレステロール）を測定することが可能な装置は市場にはないか、或いはほんのわずかの装置しか存在しない。その主な理由は、分離の際に凝固が生じるため、このパラメータが、抗凝固剤が添加される血漿で、且つ、正確に規定された試料容積（例えば、３１±１．５μｌ）を用いる場合にのみ、すなわち、非常に慎重な試料調製の後においてのみ、測定され得るからである。
【０００６】
血液試料から血漿、例えば、毛細管血漿を得る既知の方法は、毛細管血を得た後、遠心分離を行なう方法である。例えば、体表面の切開により出てくる血液は、キャピラリーを用いて採集され、次いで、遠心分離され得る。
【０００７】
毛細管血を採集して遠心分離する装置は、原則的には、従来から知られている。例えば、採集し、分離し、そして二相の液体に分配する管が、米国特許第５，４５６，８８５号明細書に開示されている。他方で、充填された後、正確な検体容積を得るために、所定の区切り点で切断されるキャピラリーも市販されている。かかるキャピラリーは、例えばＤｒ． Ｍｕｌｌｅｒ Ｇｅｒａｔｅｂａｕ ＧｍｂＨ， Ｄ−０１７０５ Ｆｒｅｉｔａｌ， Ｇｅｒｍａｎｙから市販されているか、或いは、例えば、ドイツ実用新案第２９５２０９１８号に開示されている。切断されたキャピラリー部分は、その中にある血液とともに、次いで、試料管、例えばカップに入れられる。かかる試料管は、次いで、遠心分離機にかけられ、遠心分離される。また別の方法として、毛細管血漿の試料はまた、毛細管血を試料管に直接、採集することによって、毛細管血から得ることができる。血液試料中の血球部分が血漿と分離する遠心分離の後、余剰の血漿から、所望量の過剰な血漿がピペットで取り除かれる。
【０００８】
しかしながら、このピペット操作では、一般に、ピペット操作中に試料管の底部の凝血塊に触れ、その結果、非血漿成分もピペットで取るという危険があるので、この操作は非常に慎重に行なわれなければならないという課題がある。血漿画分がこのように汚染され得るので、その結果として、測定値が大きな影響を受け得る。
【０００９】
この血漿画分の汚染の危険性は、不必要に多量の血液又は血漿を採集することによってのみ、低減され得る。例えば、汚染の危険性のない必要量の血漿を得るためには、必要な血漿の約５〜７倍の量が毛細管血として採集されなければならない。
【００１０】
しかしながら、非常に多量の血液を抜くことは、それ自体、非常に困難である。例えば、一般に、約３１±１．５μｌの純粋な血漿が、通常の検査、例えば、１つ以上の上記検体の定量的検出に必要とされる。上記の方法では、毛細管血が多量に入手できることを前提とするが、これは必ずしも可能とは限らない。例えば、上記によれば、約１５０〜２００μｌの毛細管血がこのために必要とされるが、多くの場合、現実には入手することだけでも難しい。
【００１１】
所定の区切り点を備えるキャピラリーもまた、他の先行技術文献で知られている。例えば、血液又は他の液体を検査する混合装置が米国特許第４，０６６，４０７号明細書に開示されている。とりわけ、ピペットが切り込みによってあらかじめ分離されることが記載されている。遠心分離後、ピペットは切り込みに沿って分割される。
【００１２】
キャピラリー管内の正確な試料量を測定する方法及び装置がドイツ特許第１５９８５０１号に開示されている。とりわけ、上記文献には、試料で満たされたキャピラリー管がどのようにキャップで閉じられて、遠心分離されるかが記載されている。ヘマトクリット値は、次いで、測定され得る。キャピラリー管はまた、正確な規定容積の血漿量を検査するためにキャピラリー管を切断させる刻み目を有する。
【００１３】
正確な量の液体試料を分離するための使い捨て器具もまた、ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号に開示されている。所定の区切り点を有する精密測定用のキャピラリー管が用いられる。
【００１４】
同様に、液体の容量測定を行なうピペット操作のための、特に、毛細管血を採集するための使い捨てマイクロピペットがドイツ特許出願公開第２７２４４６５号に開示されている。例えば、それを正確なマイクロ単位の量の血漿を得るために用いることができる。そのマイクロピペットは所定の区切り点を多数有している。これら所定の区切り点は、マイクロピペットの外側の表面に配置されている。
【００１５】
水性液体試料を採集する器具及び方法がドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号に開示されている。キャピラリーと閉鎖エレメントが用いられ、その周囲にキャピラリー部分を含む閉鎖エレメントは、所定の区切り点によって切断され得るか、又は破壊開放され得る。さらに、キャピラリーはその内部に、強磁性物質でできた混合エレメント及び混合エレメントを保持する役割を有する保持エレメントを有する。しかしながら、強磁性の混合エレメントとこれらの保持エレメントは、高速でキャピラリーを遠心分離する際に、該キャピラリーチャンネルに損傷をもたらし得る。キャピラリー端部のひとつの可能な構造として、特にルアーコーン、すなわち、キャピラリー端部の周辺において外径が縮小された円錐形が開示されている。
【００１６】
しかしながら、実際のところ、従来技術により既知の装置及び方法には、多くの技術的課題及び技術的欠点がある。特に、重要な欠点は、既知の装置の取り扱いの安全性にある。このように、所定の区切り点を有するキャピラリーは、特に、試料中の所望の標的成分を提供することができるまでに、手動で又は自動で、数回操作される必要がある。この操作は、その性質上、測定結果のずれを引き起こし得る、多くの振盪動作と、多種多様の位置及び方向へのキャピラリーの反復位置決めとを含んでいる。これが、試料の漏れ、試料成分の望ましくない混合、或いは計量の人為的な影響につながり得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第５，４５６，８８５号
【特許文献２】ドイツ実用新案第２９５２０９１８号
【特許文献３】米国特許第４，０６６，４０７号
【特許文献４】ドイツ特許第１５９８５０１号
【特許文献５】ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号
【特許文献６】ドイツ特許出願公開第２７２４４６５号
【特許文献７】ドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
したがって、本発明の目的は、試料中の正確な容積の標的成分を提供するための既知の方法及び装置の欠点を少なくとも実質的に回避する方法及び装置を利用可能にすることである。詳細には、提案の方法及び装置は、試料中の他の成分による標的成分の汚染の危険を伴うことなく、同時に高純度を確保する一方で、試料中の標的成分、特に、血液試料中の血漿成分の容積を、安全に、一定に、かつ正確に提供することを可能とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
この目的は、独立項に規定の特徴を有する方法及び装置によって達成される。個々に、又は、一緒に実現され得る本発明の有利な成果は、従属項に規定されている。以下に記載の方法は、特に、記載されている装置の１つ以上を用いることによって実施され得る。そして、該装置は、記載されている変形例の１つ以上で本発明に係る方法を実施するように設計され得る。したがって、本方法の可能な実施態様に関して、装置の説明を参照することができ、その逆もまた同様である。
【００２０】
本発明は、まずキャピラリーによって毛細管血を採集した後、規定容積の血液を得るためにキャピラリーを切断し、次いで、得られた血液（適当な場合には任意の追加処理後）を遠心分離するという従来から知られている方法が、血液を遠心分離前にキャピラリーから取り除かない場合には、非常に簡略化、且つ、改良され得るとの認識に基づく。したがって、本発明は、特に、正確に規定された容積の血漿の採集及び利用に用い得る方法及び装置に関する。少なくともその開口部の１つに狭窄部を有する、特別に改造された計量キャピラリーが用いられる。したがって、本発明は、特別なキャピラリー内に血液を採集すること、このキャピラリー内の血液を遠心分離して血漿を採集すること、そして最後に、正確に規定された内部容積を有するこのキャピラリーの一端を折り取り、その後の試験のためにこの規定容積の血漿を空にすることによって、一定容積の血漿採取・適用(volume-dosed plasma application)を実施する、例えばテストストリップにそれを塗布することの組み合わせを含み得る。本発明は、血液の必要量を大幅に抑え、かつ、手作業の分離やピペット操作を不要にする。同時に、得られる血漿の量は容積が一定で正確である。
【００２１】
概して、試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するための方法が提案される。上述したように、この試料は、特に、毛細管血等の血液試料、及び／又は、他の体液試料であり得る。しかし、原則として、他の試料も用いることができる。
【００２２】
標的成分とは、一般に、更なる使用に利用できるようにするため等、提供に関心が持たれている試料成分であると理解され得る。上述したように、標的成分は、特に、血漿であり得る。提供とは、この標的成分の採集、及び／又は、この標的成分の利用、詳細にはそれを少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に利用することであると理解される。「規定」容積とは、所定の誤差限界の範囲内、例えば、±５％以下、好ましくは±１％以下の誤差限界の範囲内で再現可能な方法で提供され得る容積であると理解される。
【００２３】
提案している方法は、以下の方法手順を含み、記載された順序で実施することが好ましいが、必ずしもそうする必要はない。また、記載されていない追加の方法手順を実施してもよい。さらに、個々の方法手順又は追加の方法手順を繰り返したり、同時に又は時間をずらして実施したりしてもよい。
【００２４】
最初の方法手順では、少なくとも２つの開口部を有する少なくとも１つの計量キャピラリーを準備する。計量キャピラリーとは、広く知られている寸法のキャピラリーチャンネルを有するキャピラリーであると理解される。寸法は、少なくとも既知であるか、或いは上記の許容誤差が満たされ得る程度に再現性があるものでなければならない。計量キャピラリー及び計量チャンネルは、好ましくは実質的に真っ直ぐな形状であり得る。しかし、他の形状もまた、原則として、可能であり、例えば、Ｕ字形に曲がった計量キャピラリー等、湾曲した計量キャピラリーも可能である。
【００２５】
計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部を有する。例えば、開口部は、計量キャピラリーの両端、又は、計量キャピラリーの両端近傍、例えば、その両端から計量キャピラリーの外径の最大２０倍離れたところに配置され得る。代わりに、或いは、追加で、開口部の少なくとも１つはまた、計量キャピラリーの他の位置に配置されてもよい。例えば、計量キャピラリーは、計量キャピラリーの少なくとも１つのキャピラリーチャンネルの両末端等、互いに向き合う２つの開口部を有してもよい。計量キャピラリーは、それゆえに、好ましくは両端が開口する線形の計量キャピラリーとして設計される。より詳しく以下に説明するように、これらの少なくとも２つの開口部は、少なくとも１つの遠位開口部及び少なくとも１つの近位開口部から構成され得る。近位開口部とは、充填が行なわれる開口部であると理解されるのに対して、遠位開口部とは、充填が行なわれない別の開口部であると理解される。
【００２６】
本発明によれば、計量キャピラリーの開口部の少なくとも１つは、狭窄部を有する。本発明との関連において、狭窄部とは、概して、計量キャピラリーの内径が、計量キャピラリーの長手方向で見て、狭窄部の上流及び／又は下流等狭窄部周辺領域の計量キャピラリーの内径に比べて狭くなっていることであると理解される。例えば、狭窄部の外側で、キャピラリーチャンネルは、実質的に一定の内径を有していてもよい。しかし、他の形状もまた、原則として可能であり、例えば、円錐形のキャピラリーチャンネルも可能である。特に、狭窄部は、計量キャピラリーの内径を半分以下、より特定的には４分の１以下に狭くすることができる。
【００２７】
狭窄部は、キャピラリーチャンネルの長手方向の広がりに沿って、好ましくは狭窄部の外側でキャピラリーチャンネルの平均内径の２０倍以下、特に好ましくは１０倍以下、又は５倍以下又は２倍以下の長さを有する。したがって、狭窄部は、キャピラリーチャンネルの内径の局部的な狭窄として形成され得る。しかし、他の形状も可能である。
【００２８】
１つの開口部がかかる狭窄部を有する場合、これは、本発明では、狭窄部が開口部に直接、又は、開口部のすぐ近くに、配置されていることを意味し得る。すぐ近くとは、例えば、開口部から、開口部の直径の２０倍以下、好ましくは１０倍以下、特に好ましくは５倍以下、もしくは２倍以下の距離離れて配置されていることであると理解される。上述したように、開口部は、特に計量キャピラリーの一端又は一端の近傍に配置され得るので、狭窄部も同様に、特に一端又は一端の近傍に配置され得ることになる。したがって、狭窄部は、特に、端部に位置している狭窄部として形成され得る。
【００２９】
例えば、狭窄部は、キャピラリーの少なくとも１つの内側に突出した周縁エッジを含み得る。しかし、キャピラリーの他のタイプの狭窄形状の他の狭窄部も可能である。一般に、狭窄部は、キャピラリーに適した押出成形法等により、技術的に簡単に作られる。
【００３０】
狭窄部は、特に計量キャピラリーの一端に配置され得、その末端は以下で狭窄部末端とも称される。例えば、狭窄部は、狭窄によって、計量キャピラリーの内径が、この狭窄部外側領域における内径の１０〜８０％の値に、特に２０〜６０％の値に、特に好ましくはおよそ４０％の値に、例えば４２％に縮小されるように設計され得る。狭窄部領域、すなわち、狭窄部末端等の狭窄によって最も狭くなった計量キャピラリーの位置では、計量キャピラリーの内径は、好ましくは１．０ｍｍ以下、特に好ましくは０．８ｍｍ以下、特に０．６ｍｍ以下で、例えば０．５±０．２ｍｍである。例えば、狭窄部領域における計量キャピラリーの内径は、０．２ｍｍから０．８ｍｍの間、好ましくは０．３ｍｍから０．７ｍｍの間、そして、特に好ましくは０．５±０．２ｍｍであり得る。狭窄部外側領域では、計量キャピラリーは、例えば、０．５ｍｍ〜２．０ｍｍ、特に０．８ｍｍ〜１．６ｍｍ、好ましくは１．０ｍｍ〜１．４ｍｍ、そして、特に好ましくは１．２ｍｍで、例えば１．２０±０．０２ｍｍの内径を有し得る。計量キャピラリーは、例えば、０．０５ｍｍ〜３．０ｍｍ、好ましくは０．０７ｍｍ〜０．５ｍｍ、そして、特に好ましくは０．１ｍｍ〜０．２ｍｍ、例えば０．１７５ｍｍ±０．０２ｍｍの壁厚を有し得る。分割されていない状態では、計量キャピラリーは、例えば、２０ｍｍ〜２００ｍｍ、好ましくは３０ｍｍ〜１２０ｍｍ、そして、特に好ましくは７０ｍｍ〜８０ｍｍで、例えば７５．０ｍｍ±０．５ｍｍの長さを有し得る。分割操作によって、計量キャピラリーは、例えば２分割され得る。ここで、望ましくは狭窄部末端に面する第１の部分片は、例えば５ｍｍから６０ｍｍの間、特に２０ｍｍから４０ｍｍの間、そして、特に好ましくは２５ｍｍから３０ｍｍの間で、例えば２８．０±０．９ｍｍの長さを有する。計量キャピラリーの全容積に対する第１の部分片の容積の割合は、例えば、１０％〜７０％、好ましくは２０％〜６０％、そして、特に好ましくは３０％〜４０％で、例えば３７％±２％であり得る。
【００３１】
この少なくとも１つの狭窄部が、従来から知られている装置を上回る、本発明にかかる計量キャピラリーの顕著に有利な効果を示す。例えば、前述したドイツ特許出願公開第２２１７２３０号には、提案されている装置の取り扱い中、血液の漏出を防ぐために特別なおさえが必要とされる旨が開示されている。さらに、ドイツ特許出願公開第２２１７２３０号によれば、提案されている装置は、非常に慎重に操作される必要があり、また、キャピラリー管を水平な位置で保持する必要がある。
【００３２】
本発明にかかる今回提案している計量キャピラリー、および本発明にかかる方法では、取り扱いにおけるこれらの制約をほぼ完全に回避することができる。このように、サンプリング及び相分離の間、計量キャピラリーを水平に保持することは、今ではもはや不可欠ではなく、それどころか狭窄部によれば、試料漏出の危険を冒すことなく、傾斜状態の保管、取扱位置、及び取扱方向を採択することも可能である。ここでいう方向とは、計量キャピラリーの長手方向が水平面に対して０°以外の角度、例えば少なくとも２０°、又は少なくとも５０°、さらにはおよそ垂直方向までの角度であることを想定している。一方では、これがこの方法及びこの計量キャピラリーのユーザーフレンドリーな使い勝手の良い特質を高めている。けれども、他方では、それはまた、特に医療用途の場合に、誤りの可能性を大きく低減させる。その理由は、例えば計量キャピラリーを斜めに保持することによりユーザーによって引き起こされる誤りが、例えば、液体試料の漏れやその結果としての計量キャピラリーの不完全な充填に起因する人為的なサンプリングミス及び／又は人為的な計量ミスを引き起こし、結果的に測定結果を歪めることが今ではもはや必ずしも起こるというわけではないからである。
【００３３】
また一方、それと同時に、提案している計量キャピラリーは、上述のドイツ特許出願公開第１０１０６３６２号に記載された設計等と比較して、より詳しく以下に記載される方法であって、計量キャピラリー内で成分分離した後、計量キャピラリーを部分片に分割することを含む方法に適している。このように、提案している計量キャピラリーは、特に、混合エレメント及び保持エレメントの影響を受けることなく、また、試料成分の損傷又は混ざり合いの危険を伴うことなく遠心分離することが可能である。切断方法はまた、混合エレメント及び／又は保持エレメントがこの作業に影響を与え得ることなく、構成成分を分離するために、例えば所定の区切り点で行なわれ得る。さらに、これらの方法手順の詳細は、以下でより詳細に説明される。
【００３４】
さらなる方法手順において、計量キャピラリーは、少なくとも一部が試料で満たされる。例えば、充填は、少なくとも２つの開口部の１つ以上、すなわち、近位開口部を介して行なわれる。充填は、好ましくはキャピラリーチャンネルが試料で完全に満たされるように、少なくとも実質的に完全であることが好ましい。このため、少量の試料が充填には用いられない開口部、例えば上述の遠位開口部から出現し得る。遠位開口部から出てくる過剰量は、充填操作の後、例えば単に拭き取られることによって除去することができる。しかし、キャピラリーチャンネルの主要部、即ち後に規定容積を提供する部分が実質的に完全に充填される限りにおいて、計量キャピラリーの不完全な充填もまた原則として起こり得る。
【００３５】
さらに、この方法は、計量キャピラリー内で試料中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離のために行なう成分分離の方法手順を実施することを含む。特に、血液試料の場合、これら少なくとも２つの成分は、血液試料のすでに述べた血漿と血球部分（凝血塊）とを含み得る。しかしながら、一方では、別の種類の分離、例えば、２つ以上の構成成分への分離もまた可能である。従来から知られている方法とは対照的に、この場合の成分分離は、試料を計量キャピラリーから取り除くことなく、キャピラリー自体の中で行なわれる。それゆえ、例えば、この提案している方法は、キャピラリーの内容物を遠心分離容器に入れるために、そしてその後、遠心分離にかけるために、キャピラリーの切断部分を遠心分離容器に入れるという、既知の方法とは異なる。
【００３６】
この成分分離は、特に、計量キャピラリー及び／又は該計量キャピラリーに入っている試料に対する力の作用により行なわれる。具体的には、これらは、重力及び／又は慣性力であり得る。例えば、重力は、成分分離のための静的分離又は沈降という状況において用いられ得る。例えば、慣性力は、例えば遠心分離機、特にヘマトクリット遠心分離機等によって、計量キャピラリー及び／又は計量キャピラリー内の試料に対して加えられる遠心力を含み得る。
【００３７】
さらなる方法手順では、計量キャピラリーは、少なくとも２つの部分片に分割され、部分片の少なくとも１つは、規定容積の標的成分を含む。
【００３８】
この計量キャピラリーの少なくとも２つの部分片への分割は、成分分離に好適な様々な方法で行なわれ得る。例えば、２つの部分片は、例えば、計量キャピラリーが、該計量キャピラリーの両端に各々対応する２つの部分片に正確に分割され得るように、提供され得る。これらの部分片の１つは、次いで、例えば、標的部分片として用いられ得るし、規定容積の標的成分を含み得る。しかしながら、あるいは、例えば、計量キャピラリーの２つの両端を折り取り、真ん中の部分片だけを、規定容積の標的成分を含む標的部分片として用いるような、いくつかの部分片への分割もまた可能である。様々な形態が可能である。
【００３９】
上で説明したように、方法は、規定容積の標的成分を少なくとも医療用途及び／又は診断用途に提供することを更に含み得る。例えば、この提供は、標的成分中の少なくとも１つの分析物の検出のための分析方法、及び／又は、標的成分の少なくとも１つの他の性質を測定する別の方法の提供を含み得る。この提供のために、例えば、規定容積の標的成分が標的部分片から分注され得る。例えば、この場合、例えば、少なくとも１つの部分片、すなわち、その中に受容した規定容積の標的成分を有する標的部分片の部分片開口部を試験エレメント及び／又は試料キャリアと接触させることによって、毛細管力を再び利用することができる。例えば、この接触は、部分片開口部を試料キャリアの上に置くことによって行なわれ得る。例えば、この試験エレメント及び／又は試料キャリアは、例えば、試験紙又は平らな顕微鏡用スライドのように、フラットに設計され得る。規定容積の標的成分を分注する、すなわち、提供するための部分片開口部は、例えば、計量キャピラリーに予めすでに存在していた開口部、好ましくは、遠位開口部又は近位開口部からなり得る。しかしながら、あるいは、部分片開口部はまた、計量キャピラリーが少なくとも２つの部分片に分割される場合にのみ形成される少なくとも１つの開口部、例えば、切断端にある開口部からなり得る。しかしながら、すでに存在する開口部を介する分注が好ましい。なぜなら、この開口部は、異なる分割手順の場合であっても、常に規定されたままであるからである。
【００４０】
成分分離では、特に、血液試料の場合、血液試料の血球成分は、遠心力及び／又は重力の作用の下、血漿から少なくとも部分的に分離され得る。次いで、計量キャピラリーは、好ましくは、規定容積の標的成分ができる限り血漿だけを含むような方法で分割される。しかし、他の血液成分による汚染は、所定の許容限度内で適切な場合には、許容され得る。代わりに又は追加で、他の標的成分も言うまでもなく選択することができる。例えば、血球成分が、特に、標的成分として選択され得る。しかし、以下では、別の可能な実施形態について限定することなく、選択される標的成分は血漿であることを前提とする。
【００４１】
上で説明したように、少なくとも１つの標的成分は、特に、成分分離後の計量キャピラリーから標的成分を選択するために計量キャピラリーを分割することによって選択される。これは、特に、計量キャピラリーを少なくとも２つの部分片への分割によって行なわれ得る。一例に基づいて以下に詳細に説明するように、例えば、少なくとも１つの機械的な切断方法が計量キャピラリーを分割するために用いられ得る。例えば、計量キャピラリーは、少なくとも１つの所定の区切り点を、例えば、全体的に又は部分的に周囲に切れ込みが入った形状で有し得る。切れ込みという用語は、広義に解釈され、原則として、壁厚の所望の局所的減少を含む。例えば、研削面も含み得る。特に、切れ込みは、切断の際に、円滑に切断されるように作られ得る。いくつかの所定の区切り点を設けることも可能である。所定の区切り点は、例えば、１５０μｍ〜３００μｍの間、特に１７５μｍ、又は２００μｍの壁厚で、１０μｍ〜１００μｍの間、特に３５μｍ〜５０μｍの間の切れ込み深さの切れ込みを有し得る。切れ込み深さの壁厚に対する比は、例えば、１／４〜１／６の間であり得る。
【００４２】
計量キャピラリーは、さらに１つ以上の視覚的に認識可能な印を含み得る。所定の区切り点は、特に、色によって、例えば、所定の切断点の周辺の計量キャピラリーの外表面に設けられる、使用者が認識できる１つ以上の標識によって、印が付けられ得る。例えば、１つ以上のリングマークが、所定の区切り点の一端又は両端に、例えば、所定の区切り点に対して対称的に設けられ得る。この色の標識は、計量キャピラリーの取り扱い、特に、部分片の分割を容易にし得る。
【００４３】
計量キャピラリーは、例えば、適当な切断によって、例えば、目標容積が計量キャピラリーのキャピラリー容積の５０％未満、好ましくは最大４５％、特に好ましくは３７％を占めるように分割され得る。例えば、キャピラリーの直径が一定のキャピラリーが用いられ得る。例えば、計量キャピラリーは、７０μｌ〜１５０μｌの間、好ましくは８０μｌ〜９０μｌの間、特に好ましくは８４μｌのキャピラリー容積を有し得る。上記分割で、標的成分の容積は、全キャピラリー容積が約８４μｌの場合には、例えば、３１μｌであり得る。
【００４４】
特に、キャピラリーの直径が一定のキャピラリーを計量キャピラリーとして用いる場合、計量キャピラリーは、例えば、上記の切断方法によって、例えば、２つ以上の部分片に分割され得る。例えば、計量キャピラリーは、ｘ比で分割され得る。例えば、この比ｘは、計量キャピラリーの全長、及び／又は、最初に充填した計量キャピラリーの全長に対する、規定容積の標的成分を含む部分片におけるキャピラリーの部分的な長さに対応している。この好ましい比は、通常６０％を超えない典型的なヘマトクリット値から導かれる。このように、例えば、３７％の比ｘによって、例えば、所定の区切り点の位置の適切な選択によって、血液試料を用いる場合に、分割が、血漿のみで満たされた計量キャピラリーの領域内で常に確実に行なわれるようにすることが可能となる。規定容積の標的成分は、次いで、特に２つの部分片のより短い方、言い換えると、計量キャピラリーの全長の５０％未満、又は、好ましくは最大４５％、特に計量キャピラリーの全長の３７％の長さを有する部分片から取り出され得る。
【００４５】
成分分離が行なわれた後であって、且つ、計量キャピラリーが分割される前に、例えば、試料の別の性質を測定するために、別の措置が行なわれ得る。例えば、成分分離が行なわれた後であって、且つ、計量キャピラリーが分割される前に、少なくとも１つの中間の分析工程が行なわれ得る。この少なくとも１つの中間の分析工程では、例えば、試料中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離から、例えば、血漿の血液試料及び血液試料の血球部分の場合に、計量キャピラリー内で、試料の少なくとも１つの性質に関する結果を得ることが可能である。例えば、血液試料の血球成分の割合に関する、特に、ヘマトクリット値に関する結果を得ることができる。
【００４６】
この中間の分析工程は、特に、比較的簡単な方法、例えば、光学的測定及び／又は光学的検査によって行なわれ得る。これは、完全に自動で、或いは、手動でも行なわれ得る。
【００４７】
例えば、計量キャピラリー内の成分の分離を視覚的に観察できるように、ガラス又は少なくとも部分的に透明な材料でできている計量キャピラリーが用いられ得る。このように、少なくとも２つの成分間に少なくとも１つの仕切り線の位置を設けることによって、例えば、ヘマトクリット値等の少なくとも１つの性質に関する結果を得ることができる。計量キャピラリーの直径が一定であれば、これは、ヘマトクリット値を算出するためには、例えば、血球成分で満たされた計量キャピラリー部分の長さを、例えば、簡単な定規又は他の測定器具を用いることによって測定すること、及びこの長さを計量キャピラリーの全長又は計量キャピラリーの充填された全長と比較することを含み得る。
【００４８】
上で説明したように、少なくとも１つの計量キャピラリーは、例えば、線形の形状の計量キャピラリーとして設計され得るが、他のデザインも可能である。例えば、計量キャピラリーは、遠位端及び近位端を有してもよく、遠位開口部が遠位端に配置され、近位開口部が近位端に配置される。それゆえに、遠位及び近位開口部は、好ましくは互いに計量キャピラリーの反対端に配置される。
【００４９】
本発明によれば、計量キャピラリーの開口部の少なくとも１つが狭窄部を有する。狭窄部の可能なデザインに関しては、上記記述を参照のこと。特に、少なくとも１つの遠位開口部は、かかる狭窄部をもつように設計され得る。少なくとも１つの近位開口部、すなわち、計量キャピラリーに充填するための開口部は、かかる狭窄をもつことなく設計され得る。遠位開口部にある狭窄部の代わりに、又は、それに加えて、近位開口部等の他の開口部にも、言うまでもなく、かかる狭窄部が設けられ得る。
【００５０】
上で説明したように、計量キャピラリーは、具体的には、近位開口部の方から充填され得る。上で説明したように、充填操作中、ある量の試料が遠位開口部に現れ得る。これが、計量キャピラリーが完全に満たされたことを裏付ける。遠位開口部に現れた試料は、成分分離が行なわれる前、及び／又は、本発明の方法中の他のときに、例えば、計量キャピラリーを拭くか、或いは、他のクリーニング手順によって除き得る。この発明によって提案しているように、狭窄部を有する計量キャピラリーが用いられる場合、計量キャピラリーの遠位端における試料のこの出現は、ほとんどの場合、防止され得るか、或いは、少なくとも抑え得る。
【００５１】
上で説明したように、計量キャピラリーが分割された後、したがって、規定容積の標的成分が得られた後、この規定容積の標的成分は、特に、少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に提供され得る。この提供は、例えば、開口部の少なくとも１つを介して達成され得る。例えば、仕切り線に面した開口部、例えば、計量キャピラリーが切断された後の区切り点にある開口部が用いられ得る。しかしながら、切断端は、場合によっては、不明確であり得るため、規定容積の標的成分はもともと存在する開口部、例えば遠位開口部を介して少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途に提供される場合が特に好ましい。
【００５２】
上で説明したように、計量キャピラリーの充填は、好ましくは、計量キャピラリーが試料によって実質的に完全に満たされるように行なわれる。例えば、これは、遠位開口部からの少量の試料の上記出現によって成し遂げられ得る。成分分離、特に、遠心分離方法による成分分離が行なわれる前に、開口部の少なくとも１つが閉じられる必要がある。
【００５３】
近位開口部が、特に、閉じられ得る。しかし、代わりに又は追加で、別の開口部、例えば、いずれにしても成分分離で試料が送りこまれる方向にある開口部も閉じられ得る。これはまた、特に、近位開口部であってもよい。しかし、他の実施形態も原則として可能である。
【００５４】
少なくとも１つの開口部は、様々な方法で閉じられ得る。特に、１つ以上の以下の閉鎖片が用いられ得る：しっくい；キャップ、特にプラスチックキャップ、好ましくはシリコーンキャップ；ワックス、特にヘマトクリットワックス、樹脂、接着剤。
【００５５】
少なくとも１つの計量キャピラリーとして、原則として、従来から知られている材料を用いることが可能である。例えば、少なくとも１つの計量キャピラリーは、少なくとも１つのガラス物質を含み得、及び／又は全体がガラスから作られ得る。しかしながら、原則として、石英、セラミック、プラスチック等の他の材料も可能である。特に、用いられる材料は、用いられる特定の分割方法に適応され得る。破壊方法が用いられる場合には、硬い脆性材料を用いることが好ましい。他の分割方法、例えば、切断方法が用いられる場合には、容易に切断され得る材料、例えば、プラスチックを用いることが好ましい。特に、透明な、或いは、少なくとも部分的に透明な材料を用いることが可能である。
【００５６】
計量キャピラリーは、特に０．５ｍｍ〜４ｍｍの間、特に１．０ｍｍ〜１．２ｍｍの間のキャピラリー内径を有し得る。これらのキャピラリー径は、特に、実際に血液試料を受け入れる上で、適切であることが証明されている。しかしながら、他のキャピラリー径も、原則として可能である。
【００５７】
さらに、計量キャピラリーはまた、１つ以上の活性物質を含み得る。特に、計量キャピラリーは、少なくとも１つの抗凝固剤物質、すなわち、血液試料の凝固を少なくとも部分的に防止する活性物質を含み得る。例えば、この活性物質は、計量キャピラリーの材料に組み込まれ得る。しかしながら、代わりに又は追加で、活性物質が計量キャピラリーの内面にコーティングとして、特に、抗凝固剤コーティングの形で塗布される場合が特に好ましい。一般的に用いられる抗凝固剤、例えば、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）コーティング、及び／又は、Ｎａ−ヘパリン及び／又はＬｉ−ヘパリン及び／又はアンモニウムへパリン等のヘパリンコーティングが用いられ得る。しかし、他の抗凝固剤もまた知られており、代わりに又は追加で、用いられ得る。
【００５８】
計量キャピラリーの他の好ましい実施形態では、計量キャピラリーは、狭窄部を備えている開口部、すなわち、狭窄部末端が滑らか、且つ／或いは、平らである。特に、計量キャピラリーは、この狭窄部末端が平面状であるか、扁平状であり得る。特に、鋭利な切断端は、このようにして避けられ得る。例えば、この滑らか、且つ／或いは、平らなデザインは、研磨及び／又は熱による丸み付け等の熱処理によって形成され得る。例えば、狭窄部が設けられている開口部における外表面は、計量キャピラリーの縦軸に対して、実質上、垂直に、例えば、計量キャピラリーの縦軸に対して９０°から５°を超えない偏差で延びていることができる。例えば、ここでいう「滑らか」とは、１００μｍ未満、好ましくは５０μｍ未満、特に好ましくは２０μｍ未満、又は１０μｍ未満、５μｍ未満、または２μｍ未満の粗さ値（二乗平均平方根粗さ）であることを意味し得る。
【００５９】
例えば、このように、狭窄部末端は、例えば、破壊方法によって作り出され、成分分離及びそれに続く計量キャピラリーの少なくとも２つの部分片への分割の後、規定容積の標的成分を含む第１の部分片の一部であり得る。以下においてより詳しく説明されるように、第１の部分片の狭窄部末端は、少なくとも１つの試験エレメント、例えば、試験エレメントの適用領域及び／又は試験領域に接触させ得る。狭窄部末端の動き、例えば、円運動を試験エレメント上で行うことができ、第１の部分片から試験エレメント上に試料を広げることを促進する。試験エレメントの損傷は、狭窄部末端の望ましい滑らかな性質によって防止される。
【００６０】
記載されている方法のバリエーションの１つでは、記載されている方法に加えて、前述の実施形態の１つにかかる方法に用いるのに、特に適切であることが期待できる計量キャピラリーがまた、提案される。この計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部を含む。開口部の少なくとも１つは、少なくとも１つの狭窄部を有する。計量キャピラリーはまた、開口部の間に、少なくとも１つの仕切り線、特に、少なくとも１つの所定の区切り点を備える少なくとも１つの仕切り線を有する。仕切り線とは、一般に、ここでは特に、キャピラリーの長手方向に対して、特に使用者が肉眼で確認できるように垂直に延びる線であって、これに沿って分割され得る線として理解され得る。所定の区切り点の代わりに、又はそれに加えて、仕切り線もまた、計量キャピラリーが少なくとも２つの部分片に分割される場合に、計量キャピラリーの仕切りの位置を特定する、例えば、リング状の印又は同様の形態で、例えば、少なくとも１つの仕切り印を付けるといった、他の方法で形成され得る。さらなる可能な詳細については、上記記述を参照のこと。
【００６１】
上述の１つ以上の実施形態のバリエーションにおける方法及び計量キャピラリーに加えて、本発明はまた、試料中、特に、血液試料中の少なくとも１つの規定容積の標的成分を提供するため、特に、規定容積の血漿を提供するための装置を提案する。装置は、特に、上述の１つ以上の実施形態のバリエーションにかかる方法を実施するために設計され得る。装置は、少なくとも１つの計量キャピラリー、特に、上記タイプの計量キャピラリーを含む。計量キャピラリーは、少なくとも２つの開口部、及び、少なくとも１つの仕切り線、特に、所定の区切り点を備えるか、及び／又は、少なくとも１つの仕切り印を備える仕切り線を含む。さらに、装置は、計量キャピラリー内の血液試料の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なうための少なくとも１つの分離装置を含む。この分離装置は、特に、ヘマトクリット遠心分離機等の遠心分離機を含み得る。さらなる装置の任意の実施形態については、例えば、上記記述を参照のこと。
【００６２】
装置は、計量キャピラリーに試料を少なくとも部分的に充填するための規定位置に計量キャピラリーを固定するように設計された少なくとも１つの保持装置をさらに含み得る。この規定位置とは、空間位置も方向も含む表現であり、特に、実質的に水平位置であり得る。実質的に水平位置とは、ここでは、わずかな偏差、例えば、最大２０°まで、好ましくは最大５°までの偏差も許容され得るが、計量キャピラリーが水平線に対して０°の角であろう位置として理解される。しかしながら、他の方向もまた、原則として可能である。例えば、保持装置は、簡単なキャピラリークランプ状のキャピラリーホルダー等を含み得る。代わりに又は追加で、例えば、保持装置はまた、例えば、上記の成分分離も続いて保持装置にて行なわれ得るというように、成分分離を実施するための分離装置の一部であり得る。
【００６３】
提案した方法、提案している計量キャピラリー、及び提案している装置は、この種の既知の方法及び装置に勝る数多くの利点がある。例えば、提案している方法は、非常に単純な方法で、且つ、実際のヘマトクリット値とは無関係に、８４μｌの毛細管血から正確に３１μｌ採集する等、毛細管血漿中の正確に規定された試料の採集を可能にする。好ましくは遠位端に少なくとも１つの狭窄部を備える計量キャピラリーが、特に有益であることがわかる。特に、狭窄部は、一方では、計量キャピラリーが折られる場合等に、計量キャピラリーの分割中及び分割後に血漿の漏れを防止し得るし、他方では、充填操作中、毛管移動を止めることによって、計量キャピラリーの過剰充填を回避し得る。この種の狭窄部は、原理上、例えば、計量キャピラリーの斜め状態での保管にとっても、有益であることがわかる。
【００６４】
計量キャピラリーは、原則として、１つ以上の開口部の方向から充填され得る。計量キャピラリーは、例えば、近位端が閉じられ得る。あるいは、遠位端の閉鎖もまた、原則として可能である。この場合の利点は、計量キャピラリーの遠位端閉鎖用の栓、例えば、しっくいの塊が試料によってあまり汚染されないことである。このように、遠位端はしっくいで閉じられ得る。そして、それは血液採集部位を有するその外表面に、例えば、指に接触していなかった。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
さらに、本発明の詳細及び特徴を、特に従属クレームとともに、以下の好ましい実施形態の記載から明らかにする。それぞれの特徴は、個々に、或いは、互いに組み合わせたいくつかに当てはめられ得る。本発明は、実施形態に限定されない。実施例は、図に概略的に示される。個々の図における同一の参照番号は、同一の要素を指すか、又は同一の機能を有する要素若しくはそれらの機能の観点から互いに対応する要素を表す。
【図１】本発明にかかる計量キャピラリーの実施形態を示す図である。
【図２Ａ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｂ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｃ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｄ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｅ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【図２Ｆ】本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す図である。
【実施例】
【００６６】
図１は、本発明にかかる計量キャピラリー１１０の簡単な例示の実施形態を示す。計量キャピラリー１１０は、例えば、ガラスキャピラリーとして設計され、例えば０．０５〜５ｍｍ、特に約０．２ｍｍの壁厚を有する。計量キャピラリーは、好ましくは５０〜１５０ｍｍ、特に約７５ｍｍの長さｌを有する。計量キャピラリーの内径は、例えば１．１〜１．２ｍｍであり、一方外径は、例えば１．６ｍｍであり得る。図１では外径をΦＡで表し、さらに、内径をΦＩで表す。
【００６７】
図示した実施形態で、計量キャピラリーは、好ましくは、計量キャピラリー１１０の内容積が計量キャピラリー１１０の長さに沿って均一に分布するように、実質的に一定の内径ΦＩを有する。
【００６８】
図示した実施形態で、計量キャピラリー１１０は、両端が２つの対向する開口部１１２、１１４で開口している真っ直ぐな形状の計量キャピラリー１１０として設計されている。これらの２つの開口部１１２、１１４の１つ目を、以下、遠位開口部１１６と表し、一方、これらの開口部１１２、１１４の２つ目を、近位開口部１１８と表す。図１を見てわかるように、遠位開口部１１６は、図示した実施形態では、狭窄部１２０を有する。この狭窄部１２０では、計量キャピラリー１１０の内径ΦＩは、例えば半分に、特に４分の１あるいはそれ以下に縮小されている。
【００６９】
計量キャピラリー１１０はまた、仕切り線１２２を有する。この仕切り線１２２は、例えば、視覚的に認識可能な印を含み得る。しかしながら、図１に示すように、この仕切り線１２２は、特に好ましくは、計量キャピラリー１１０に切り込まれた、所定の区切り点１２４からなる。この切り込みの切り込み深さは、例えば、計量キャピラリー１１０の壁厚の１／２０〜１／２、特に、１／４〜１／６であり得る。例えば、約０．２ｍｍの壁厚で、切り込み深さ、例えば、開先深さが３５μｍ〜５０μｍであることが好ましい。
【００７０】
仕切り線１２２は、２つの開口部１１２、１１４の１つから、好ましくは遠位開口部１１６から距離ｌ’離れて配置される。ｌ’のｌに対する比は以下ｘとも表す。好ましくは、ｘは＜５０％であり、特に、最大４５％或いはそれ以下であり、特に３７％である。したがって、容積Ｖ’は、仕切り線１２２から遠位開口部１１６がある遠位端１２６までの間の計量キャピラリー１１０の内部に受け入れられ、この容積Ｖ’（遠位端１２６にある狭窄部１２０によって見込まれるわずかな偏差を考慮する）は、遠位端１２６と近位端１２８との間の全容積Ｖに対してｘと同様に考えられる。例えば、全容積Ｖは、約８４μｌからなり得るし、さらに、以下参照番号１３０でも表される規定容積Ｖ’は、好ましくは３１μｌ±１．５μｌである。しかしながら、他の容積及び区切りも、原則として可能である。以下に示した方法では、規定容積１３０が標的成分を受け入れる。
【００７１】
計量キャピラリー１１０は、様々な方法で任意に発展させ得る。例えば、図１にも示されているように、計量キャピラリー１１０は、その内表面にＥＤＴＡコーティング等の抗凝固剤コーティング１３２を有し得る。
【００７２】
図２Ａから図２Ｆは、試料１３４中の規定容積の標的成分を提供するための本発明にかかる方法の実施形態の方法手順を示す。本例では、試料１３４は、例えば、血漿と血球成分とに分けられる血液試料である。以下の本文では、試料が、最初から最後まで参照番号１３４で表されるように、方法の前後の試料１３４間で用語の区別は行なわれていない。それに加えて、これらの図は、試料１３４中の規定容積の標的成分を提供するための本発明にかかる計量キャピラリー１１０と、ある部分では、装置１３６の使用を示す。
【００７３】
図２Ａでは、まず初めに、装置１３６の一部である計量キャピラリー１１０が提供される。例えば、それは、図１に記載のタイプの計量キャピラリー１１０であり得る。例えば、約８４μｌの容積と、７５ｍｍの長さｌと、１．２ｍｍの内径ΦＩを有し、ＥＤＴＡでコーティングされ、その遠位端１２６に小さい狭窄部１２０を有する計量キャピラリー１１０を用いることが可能である。さらに、計量キャピラリー１１０は、適当な場所に、例えば、遠位端１２６から約２７ｍｍの距離ｌ’に、仕切り線１２２、特に、所定の区切り点１２４を有し得る。
【００７４】
図２Ａはまた、計量キャピラリー１１０が、例えば毛細管血の形態で、その開口部１１２、１１４の１つの方から試料１３４で満たされる操作も示している。図の実施形態に示すように、この充填は開口部１１２の方から行なわれ、その結果開口部１１２は定義により近位開口部１１８となる。しかしながら、代わりに、充填は、他の開口部１１４の方からも行なうことができよう。充填は、好ましくは、少なくともほぼ完全に行なわれる。
【００７５】
充填操作の間、計量キャピラリー１１０は、例えば、保持装置１３８に支えられ得る。この保持装置１３８は、例えば、クランプ装置として設計され得る。図２Ａにおいて、参照番号１４０で示されるように、この保持装置１３８はまた、分離装置、例えば、遠心分離機、特に、ヘマトクリット遠心分離機の一部であり得る。しかしながら、分離保持装置１３８も、原則として、考えられ得る。保持装置１３８は、特に、水平位置で計量キャピラリー１１０を保持するように設計され得る。このようにして、計量キャピラリー１１０は、患者の指腹１４４上の血液滴１４２で充填され得る。しかしながら、代わりに又は追加で、他のタイプの試料、例えば、前もって血液を充填してある別の容器からの試料も提供され得る。しかしながら、提案したように血液滴１４２から直接充填することは、非常に多くの利点を有する。
【００７６】
図２Ａに示すように計量キャピラリー１１０を充填した後、計量キャピラリー１１０の少なくとも１つの開口部１１２、１１４が図２Ｂに示す方法手順で閉じられる。計量キャピラリー１１０は、図２Ｂには示されていないが、今までどおり保持装置１３８に支えられていてもよい。図２Ｂに示す実施形態では、近位開口部１１８が閉じられる。通常、閉じられる開口部１１２、１１４は、特に、以下に記載する、分離装置１４０として遠心分離機を用いる分離工程で、試料１３４がこの閉じられた開口部１１２、１１４の方に送り込まれるように、遠心分離機の回転軸から１番遠くに位置している１つであり得る。本例では、それは近位開口部１１８である。
【００７７】
例えば、開口部１１２、１１４は、例えば、シリコンキャップ、ヘマトクリットワックス、樹脂、又は適切な接着剤を含み得る、閉鎖片１４６で閉じられ得る。
【００７８】
図２Ａに示すように計量キャピラリー１１０を充填する間、また、閉鎖片１４６で近位開口部１１８を閉鎖する間も、その正反対の位置にある、計量キャピラリー１１０の遠位端１２６の狭窄部１２０は、特に好ましい効果を有する。例えば、この狭窄部１２０は、充填操作の間、又は、閉鎖片１４６が装着される時に、比較的多量の試料１３４が遠位開口部１１６から出てくることを防止することができる。しかしながら、図２Ｂに示されるように、比較的少量の試料１３４が遠位開口部１１６から現れることがあり、その後、例えば単に拭き取られることによって除去され得る。遠位開口部１１６から現れるこの過剰分を、図２Ｂでは参照番号１４８で表す。
【００７９】
最後に、図２Ｃは、閉鎖片１４６で閉じられた充填した計量キャピラリー１１０を示す。この計量キャピラリー１１０は、ここでも図２Ｃには示されていないが、保持装置１３８に今までどおり保持されてもよい。しかしながら、計量キャピラリー１１０の輸送の代わりに、又は加えて、他のタイプの保管も、原則として、可能である。この目的のために、例えば、遠位開口部１１６も、例えば、キャップによって、及び／又は、接着剤によって、又は、同様の閉鎖物によって、任意に閉じられ得る。
【００８０】
その後、図２Ｄに象徴的に示される、成分分離を伴う手順が行なわれる（上からの斜視図をここに示す）。この成分分離は、試料１３４中の第１の成分と第２の成分１５４との少なくとも実質的な分離を含み、第１の成分は試料１３４中の血球部分１５２からなり、第２の成分は図示の例では血漿１５６からなる。この分離は、例えば、上記分離装置１４０、特に、遠心分離機を用いて行なわれる。遠心分離機は、例えば、ヘマトクリット遠心分離機又は同等のものとして設計され得る。具体的には、単純な遠心分離機が、調節の可能性なしで、例えば所定の回転速度及び／又は運転時間で、用いられ得る。この場合には、２つの成分１５０、１５４の分離が、遠心力によって行なわれ、ここでは、高密度の血球成分１５２が、計量キャピラリー１１０の近位端１２８へ向かって動かされる。それに対し、低密度成分の血漿１５６は、遠位端１２６に向かって落ち着く。図２Ｄに示されるように、２つの成分１５０、１５４の間には、相境界１５８ができる。この相境界１５８の位置は、現在のヘマトクリット値によって決められる。仕切り線１２２の、例えば、所定の区切り点１２４の位置は、通常のヘマトクリット値で、第２の成分１５４の領域内であって、相境界１５８に限りなく近くに位置されるように選択される。具体的には、上述したように、遠位端１２６から３０ｍｍ離れて配置され得る。
【００８１】
分離工程では、場合によって、気泡が計量キャピラリー１１０の遠位端１２６に留まる可能性がある。このような場合には、これらの気泡は、例えば、さらなる任意の方法手順において、例えば、近位開口部１１８で閉鎖片１４６のしっくいをさらに押し込むことによって、遠位開口部１１６から押し出すことができる。例えば、近位端１２８は、分離工程後、しっくい組成物中に押し戻され得る。このように、規定容積１３０が気泡を含まないことを確実なものとすることが可能である。
【００８２】
分離工程後、計量キャピラリー１１０は、分離装置１４０から取り出され、少なくとも２つの部分片１６０、１６２に分割され得る。これを、図２Ｅに、所定の区切り点１２４に沿った計量キャピラリー１１０の単純な破壊によって示す。しかしながら、計量キャピラリー１１０はまた、２つ以上の部分片にも分割され得る。
【００８３】
計量キャピラリー１１０を部分片１６０、１６２に分割することによって、標的成分１６４が選択される。この実施形態に示すように、この標的成分１６４は血漿１５６のできるだけ大きな部分であり、これが試料１３４の第２の成分１５４を形成する。図１を参照して既に記載したように、標的成分１６４は、正確に規定容積Ｖ’を含んでいる。
【００８４】
例えば、計量キャピラリー１１０のコーティング１３２に応じて、標的成分１６４中にこのように得られた血漿１５６は、それに対して添加する種々の抗凝固剤を有し得る。しかし、例えば、適切に迅速に行なわれる操作によって、非抗凝固処理血液から血漿１５６を調製することも可能である。
【００８５】
上述したように、遠心分離される標的成分１６４の標的容積は、例えば、正確に３１μｌであり得る。この標的成分１６４は、例えば、試験エレメント１６６に適用され得る。この例を図２Ｆに示す。ここでは、試験エレメント１６６を、少なくとも１つの試験領域１６８を有するテストストリップの形態で一例として示す。例えば、試験領域１６８は、適切な試験化学物質を含み得る。例えば、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ（登録商標）系分析器用のＨＤＬＣ試薬ホルダーが用いられ得る。第１の部分片１６０中の標的成分１６４は、例えば、狭窄部１２０がある遠位開口部１１６を試験領域１６８の担体メッシュに接触させることによって適用され得る。しかしながら、代案として、図２Ｅに示される、所定の区切り点１２４に面し、２つの部分片１６０、１６２の分割により生じる開口部１７０が、担体メッシュに適用され得る。しかしながら、示されている改良型が優先され、ここでは、最初の開口部１１２、１１４の１つ、好ましくは狭窄部１２０がある開口部１１４が、試験領域１６８に適用される。なぜなら、この開口部は、より明確な界面、例えば、滑らかな、平滑化された、或いは、磨かれた界面を提供するからである。試験エレメント１６６に適用後、例えば、現時点では血漿試料である試料１３４の性質の測定、例えば、血漿試料中の少なくとも１つの分析物の定性的検出及び／又は定量的検出を行なうことが可能である。例えば、高密度リポタンパクコレステロールが検出され得る。
【００８６】
さらに、記載した方法及び図示した装置１３６はまた、毛細管血試料の他の性質の測定も可能である。このように、１つ以上の中間分析法もまた、例えば、図２Ｄに示す分離工程後であって、２つの部分片１６２、１６４の分割を含む図２Ｅに示す工程の前に、行なわれ得る。例えば、相境界１５８の位置は、例えば、適切な測定装置を用いることによって、測定され得る。このような方法で、例えば、血球部分１５２の割合について、そして、試料１３４のヘマトクリット値について、結果が直接導き出され得る。例えば、これは、赤血球カラムの長さ、すなわち、第１の成分の血球部分１５２の長さを測定するための目盛り付きの定規を用いることによって行なわれ得る。計量キャピラリー１１０は、常に均一に、且つ、好ましくは完全に満たされているので、ヘマトクリット管からヘマトクリットを測定するのと同様に、ノモグラムは通常、不要である。
【００８７】
測定後、計量キャピラリー１１０の両方の部分片１６０、１６２は、廃棄されるか、或いは、さらに測定に用いられ得る。適切な印及び／又は所定の区切り点１２４がある計量キャピラリーを製造するために求められるテクニックは、原則として、当業者に知られている。血漿等の得られる標的成分１６４の量に関する要求精度は、生産技術の観点から問題はない。
【００８８】
遠心分離機等の分離装置１４０の回転速度及び／又は運転時間の正確さも、通常、求められない。生じる遠心力は、計量キャピラリー１１０の近位端１２８にある閉鎖片１４６の栓にあまり多くの負担をかけないために、できるだけ低くなるように選択される必要がある。例えば、５，０００ｇ〜１０，０００ｇ、特に７，０００〜９，０００ｇ、特に好ましくは８，０００ｇの相対遠心力（ｒｃｆ）を用いることができる。ここで、ｇは、重力加速度である。例えば、最大６０％のヘマトクリット値のために提案したキャピラリーの容積は、３１μｌの血漿を得るのに十分である。
【００８９】
計量キャピラリー１１０の遠位端１２６にある所定の区切り点１２４の適切な位置決めによって、或いは、計量キャピラリー１１０の内径の変更によって、異なる規定容積の血漿、又は、異なる規定容積の標的成分１６４を得ることも可能である。これは、基本的な操作を変更しない。
【００９０】
記載した計量キャピラリー１１０はまた、分離工程が行なわれることなく用いられ得ることに留意されたい。例えば、所定量の血液を、遠心分離工程なしに、計量キャピラリー１１０によって、適用し得る。
【００９１】
方法は、図２Ａ〜２Ｆに象徴的にのみ示され、本発明の範囲内で任意の所望の方法に変更され得ることもまた留意されたい。例えば、狭窄部１２０はまた、代案として、又は加えて、もう１つ別の開口部１１２、１１４に備えられ得る。さらに、充填はまた、別の開口部１１２、１１４の方から行なわれ得る。開示された方法の様々なバリエーションが考えられ得る。
【００９２】
上述したように、狭窄部１２０は、特に、計量キャピラリー１１０の取り扱いを大幅に改善し、かつ、容易にする効果を有する。特に、望ましくない漏出から保護することによって、向上した操作の安全性を提供する。種々の試験がこれを確認するために行なわれた。
【００９３】
これらの試験では、計量キャピラリー１１０を、新鮮な毛細管血（以下、「Ｃ」とも表す）、又は、静脈血（以下、「Ｖ」とも表す）の形態の試料とともに用いた。計量キャピラリー１１０は、ＥＤＴＡでコーティングし、狭窄部１２０を有していた。計量キャピラリー１１０は、７５．００ｍｍ±０．５０ｍｍの長さ、１．２０ｍｍ±０．２ｍｍの内径、１．５５ｍｍ±０．０２ｍｍの外径、及び２８．００ｍｍ±０．９０ｍｍの長さの第１の部分片１６０を有していた。狭窄部１２０の周辺では、計量キャピラリー１１０は、０．５０ｍｍ±０．２０ｍｍの内径を有していた。所定の区切り点１２４は、０．８０ｍｍ±０．１０ｍｍの幅を有する黒いリングマークによって両側に印を付けた。マークは、所定の区切り点１２４から１．０ｍｍ±０．２０ｍｍの距離に各々配置した。
【００９４】
計量キャピラリー１１０を、試料１３４で完全に満たし、水平に対して所定の傾斜角で、各場合に５秒間、傾けて保った。分離測定は、両方の傾斜方向に対して、すなわち、狭窄部１２０を備えている開口部１１４が下方を指す（以下、「狭窄部末端下向き」又は「ＣＤ」とも表す）傾斜の各場合の１回、及び狭窄部１２０を備えていない開口部１１２が下方を指す（以下、「開口末端下向き」又は「ＯＤ」とも表す）傾斜の各場合の１回、行なった。
【００９５】
これらの測定結果を表１に示す。この表１で用いた略語「Ｃ」、「Ｖ」、「ＣＤ」、及び「ＯＤ」は、すでに上で説明した。さらに、表１はまた、傾斜角で表した欄において、試験毎に、試験に用いられた試料１３４が計量キャピラリー１１０内に留まっている（「＋」で表した）か、或いは漏れ出した（「−」で表した）かを示す。
【００９６】
表１の結果は、１つの例外（番号６）を除いて、両タイプの血液（毛細管血及び静脈血）が傾斜角３０°までの試験条件を満たすことを示す。これは、計量キャピラリー１１０を取り扱う間、例えば、ホルダーから取り外す間、ヘマトクリットワックスでの閉鎖の間、或いは、同様の取り扱い操作の間、漏出に対して十分な安全性を確実にする。これらの容積を有するが、狭窄部１２０を有さない完全に充填された計量キャピラリー１１０は、取り扱いの間に故意ではなくとも起こり得るように、約５°の傾斜角を保った場合であっても漏れる。さらに、狭窄部１２０によれば、計量キャピラリー１１０を１８０°ですばやく１回転させることができるようになり、そして、それは、狭窄部１２０なしでは可能でない。このように、狭窄部１２０は、計量キャピラリー１１０を取り扱う間、重要な安全機能を担う。
【表１】
【００９７】
記載されている試験において使用した５秒間の保持時間は、手で計量キャピラリー１１０の取り扱いを実行する上で十分な時間を提供している。試験はまた、計量キャピラリー１１０を取り扱う使用者の誰もが、試験の間に、計量キャピラリー１１０から漏れるという事故に遭わないことを示した。しかしながら、完全に充填される開放のヘマトクリットキャピラリーについては、実際に、このような事故が頻繁に起こる。さらに、試験は、例えば、ヘマトクリットワックスによる一端の任意の閉鎖後、狭窄部１２０を有する計量キャピラリー１１０が、少なくとも分割操作が行なわれるまで、漏出に対して実に完全に保護されていたことを明らかにした。
【００９８】
狭窄部１２０は、記載されている試験においても、好ましくは一端に備えられているに過ぎない。一端に狭窄部１２０を配置する他の重要な理由は、計量キャピラリー１１０の折り取った部分、例えば、図２Ｅにおける第１の部分片１６０の漏出挙動である。この第１の部分片１６０の内容物、例えば、血漿のその内容物は、例えば遠心分離後、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ ＨＤＬＣ試験サポート等の試験エレメント１６６に完全に適用されなければならない。しかしながら、多くの場合、これは、第１の部分片１６０が、試験領域１６８及び／又は適用領域、例えば、Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ ＨＤＬＣ試験サポートにおける黄色の適用領域に、圧力なしに置かれ、完全に空になるまで、徐々に循環運動させる場合に、機能するに過ぎない。狭窄部１２０を有する狭窄部末端は、多くの場合、滑らかに磨かれるか、或いは、熱で丸くされる等、丸みをつけられる。それに対し、第１の部分片１６０の他端が適用の間、移動のために用いられることになっている場合、試験領域１６８、例えば、この試験領域１６８の被覆布上は、容易に損傷を受け得るし、この第１の部分片１６０の鋭利なキャピラリー端部に擦られることによって、使用不能の状態にされ得る。したがって、狭窄部末端は、特に好ましくは平面的である。
【００９９】
計量キャピラリー１１０はまた、好ましくは狭窄部末端を経由して試料１３４で満たされる。それにより、充填操作の後、計量キャピラリー１１０は、もっぱら狭窄部末端で、通常、血液等の試料１３４で外側が汚染される。しかしながら、外側から計量キャピラリー１１０を洗浄することは、実際のところ、比較的難しく、熟練を必要とする。例えば、開放のキャピラリーである計量キャピラリー１１０を拭くことは、例えば、拭くために用いるセルロース布が、その吸引力等で計量キャピラリー１１０から血液等の試料１３４の一部を引き出さないことを確実にするために、スピードと熟練とを必要とする。それに対し、狭窄部１２０が用いられる場合、洗浄操作は、この狭窄部１２０のため、実際のところ、全く問題がなく、熟練していない者によって容易に行なわれ得る。狭窄部１２０で増大した毛細管力は、確実に、血液等の試料１３４が拭う布によって吸引されることを防止する。
【符号の説明】
【０１００】
１１０：計量キャピラリー
１１２：開口部
１１４：開口部
１１６：遠位開口部
１１８：近位開口部
１２０：狭窄部
１２２：仕切り線
１２４：所定の区切り点
１２６：遠位端
１２８：近位端
１３０：規定容積
１３２：抗凝固剤コーティング
１３４：試料
１３６：血液試料の標的成分を提供する装置
１３８：保持装置
１４０：分離装置
１４２：血液滴
１４４：指腹
１４６：閉鎖片
１４８：過剰分
１５０：第１の成分
１５２：血球部分
１５４：第２の成分
１５６：血漿
１５８：相境界
１６０：第１の部分片
１６２：第２の部分片
１６４：標的成分
１６６：試験エレメント
１６８：試験領域
１７０：開口部
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための計量キャピラリー（１１０）であって、少なくとも２つの開口部（１１２、１１４）を有し、開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つは、少なくとも１つの狭窄部（１２０）を有し、計量キャピラリー（１１０）はまた、開口部（１１２、１１４）の間に、少なくとも１つの仕切り線（１２２）、特に、少なくとも１つの所定の区切り点（１２４）、及び／又は、少なくとも１つの仕切り印を備える少なくとも１つの仕切り線（１２２）を有する、計量キャピラリー（１１０）。
【請求項２】
計量キャピラリー（１１０）は、キャピラリー容積を有し、規定容積の標的成分（１６４）がキャピラリー容積の５０％未満を占める、請求項１に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項３】
計量キャピラリー（１１０）は、少なくとも１つの抗凝固剤物質、特に抗凝固剤コーティング（１３２）、特に、ＥＤＴＡコーティングを有する、請求項１又は２に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項４】
計量キャピラリー（１１０）は、狭窄部（１２０）を備えている開口部（１１２、１１４）が、滑らか、且つ／或いは、平らであり、特に、磨かれているか、且つ／或いは、熱で丸くされている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項５】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための装置であって、請求項１〜４いずれかに記載の少なくとも１つの計量キャピラリー（１１０）を含み、さらに、計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分（１５０、１５４）の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なう少なくとも１つの分離装置（１４０）を含む、装置。
【請求項６】
さらに、試料（１３４）で少なくとも部分的に満たされている計量キャピラリー（１１０）のために、計量キャピラリー（１１０）を規定位置で固定するように設計されている保持装置（１３８）を含む、請求項５に記載の装置。
【請求項７】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための方法、特に、計量キャピラリー（１１０）に関する請求項１〜４のいずれか１項に記載の計量キャピラリー（１１０）を用いる方法であって、前記方法は、以下の手順を含む：
少なくとも２つの開口部（１１２、１１４）を有する少なくとも１つの計量キャピラリー（１１０）を準備し、ここで、開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つ、特に、遠位開口部（１１６）は、狭窄部（１２０）を有する；
計量キャピラリー（１１０）を試料（１３４）で少なくとも部分的に満たすこと；
計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分（１５０、１５４）の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なうこと；及び、
計量キャピラリー（１１０）を少なくとも２つの部分片（１６０、１６２）に分割し、ここで、部分片の少なくとも１つ（１６０）は、規定容積の標的成分（１６４）を含有する。
【請求項８】
さらに、少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途、特に、標的成分（１６４）中の少なくとも１つの分析物を検出する分析方法のために、規定容積の標的成分（１６４）を提供することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
規定容積の標的成分（１６４）は、試験エレメント（１６６）及び／又は試料スライドに持ってこられる少なくとも１つの部分片（１６０）の部分片開口部（１１４、１１８、１７０）によって提供される、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
試料（１３４）は、血液試料を含み、成分分離は、試料（１３４）中の血球成分（１５２）が遠心力及び／又は重力の作用によって血漿（１５６）から少なくとも部分的に分離されることを伴い、計量キャピラリー（１１０）は、規定容積の標的成分（１６４）が血漿（１５６）のみを含むように分割される、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
計量キャピラリー（１１０）は、キャピラリー容積を有し、規定容積の標的成分（１６４）がキャピラリー容積の５０％未満を占める、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
さらに、成分分離が行なわれた後、計量キャピラリー（１１０）が分割される前に行なわれる少なくとも１つの中間分析工程を含み、計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離が、試料（１３４）の少なくとも１つの性質に関する、特に、試料（１３４）中の血球成分の割合に関する結果を引き出させる、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つ、特に、近位開口部（１１８）は、成分分離が行なわれる前に閉鎖され、閉鎖は、好ましくは少なくとも１つの以下の栓（１４６）：しっくい；キャップ、特にプラスチックキャップ、好ましくはシリコンキャップ；ワックス、特にヘマトクリットワックス；樹脂；接着剤によってもたらされる、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの機械的な切断方法が、計量キャピラリー（１１０）を分割するために用いられ、計量キャピラリー（１１０）は、好ましくは、少なくとも１つの所定の区切り点（１２４）を有する、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための計量キャピラリー（１１０）であって、少なくとも２つの開口部（１１２、１１４）を有し、開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つは、少なくとも１つの狭窄部（１２０）を有し、計量キャピラリー（１１０）はまた、開口部（１１２、１１４）の間に、少なくとも１つの仕切り線（１２２）、特に、少なくとも１つの所定の区切り点（１２４）、及び／又は、少なくとも１つの仕切り印を備える少なくとも１つの仕切り線（１２２）を有する、計量キャピラリー（１１０）。
【請求項２】
計量キャピラリー（１１０）は、キャピラリー容積を有し、規定容積の標的成分（１６４）がキャピラリー容積の５０％未満を占める、請求項１に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項３】
計量キャピラリー（１１０）は、少なくとも１つの抗凝固剤物質、特に抗凝固剤コーティング（１３２）、特に、ＥＤＴＡコーティングを有する、請求項１又は２に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項４】
計量キャピラリー（１１０）は、狭窄部（１２０）を備えている開口部（１１２、１１４）が、滑らか、且つ／或いは、平らであり、特に、磨かれているか、且つ／或いは、熱で丸くされている、請求項１〜３のいずれか１項に記載の計量キャピラリー（１１０）。
【請求項５】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための装置であって、請求項１〜４いずれかに記載の少なくとも１つの計量キャピラリー（１１０）を含み、さらに、計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分（１５０、１５４）の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なう少なくとも１つの分離装置（１４０）を含む、装置。
【請求項６】
さらに、試料（１３４）で少なくとも部分的に満たされている計量キャピラリー（１１０）のために、計量キャピラリー（１１０）を規定位置で固定するように設計されている保持装置（１３８）を含む、請求項５に記載の装置。
【請求項７】
試料（１３４）中の少なくとも１つの規定容積の標的成分（１６４）を提供するための方法、特に、計量キャピラリー（１１０）に関する請求項１〜４のいずれか１項に記載の計量キャピラリー（１１０）を用いる方法であって、前記方法は、以下の手順を含む：
少なくとも２つの開口部（１１２、１１４）を有する少なくとも１つの計量キャピラリー（１１０）を準備し、ここで、開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つ、特に、遠位開口部（１１６）は、狭窄部（１２０）を有する；
計量キャピラリー（１１０）を試料（１３４）で少なくとも部分的に満たすこと；
計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分（１５０、１５４）の少なくとも部分的な分離のために、成分分離を行なうこと；及び、
計量キャピラリー（１１０）を少なくとも２つの部分片（１６０、１６２）に分割し、ここで、部分片の少なくとも１つ（１６０）は、規定容積の標的成分（１６４）を含有する。
【請求項８】
さらに、少なくとも１つの医療用途及び／又は診断用途、特に、標的成分（１６４）中の少なくとも１つの分析物を検出する分析方法のために、規定容積の標的成分（１６４）を提供することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
規定容積の標的成分（１６４）は、試験エレメント（１６６）及び／又は試料スライドに持ってこられる少なくとも１つの部分片（１６０）の部分片開口部（１１４、１１８、１７０）によって提供される、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
試料（１３４）は、血液試料を含み、成分分離は、試料（１３４）中の血球成分（１５２）が遠心力及び／又は重力の作用によって血漿（１５６）から少なくとも部分的に分離されることを伴い、計量キャピラリー（１１０）は、規定容積の標的成分（１６４）が血漿（１５６）のみを含むように分割される、請求項７〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
計量キャピラリー（１１０）は、キャピラリー容積を有し、規定容積の標的成分（１６４）がキャピラリー容積の５０％未満を占める、請求項７〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
さらに、成分分離が行なわれた後、計量キャピラリー（１１０）が分割される前に行なわれる少なくとも１つの中間分析工程を含み、計量キャピラリー（１１０）内の試料（１３４）中の少なくとも２つの成分の少なくとも部分的な分離が、試料（１３４）の少なくとも１つの性質に関する、特に、試料（１３４）中の血球成分の割合に関する結果を引き出させる、請求項７〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
開口部（１１２、１１４）の少なくとも１つ、特に、近位開口部（１１８）は、成分分離が行なわれる前に閉鎖され、閉鎖は、好ましくは少なくとも１つの以下の栓（１４６）：しっくい；キャップ、特にプラスチックキャップ、好ましくはシリコンキャップ；ワックス、特にヘマトクリットワックス；樹脂；接着剤によってもたらされる、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
少なくとも１つの機械的な切断方法が、計量キャピラリー（１１０）を分割するために用いられ、計量キャピラリー（１１０）は、好ましくは、少なくとも１つの所定の区切り点（１２４）を有する、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図２Ｄ】
【図２Ｅ】
【図２Ｆ】
【公表番号】特表２０１２−５１８１５７（Ｐ２０１２−５１８１５７Ａ）
【公表日】平成２４年８月９日（２０１２．８．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４９４８９（Ｐ２０１１−５４９４８９）
【出願日】平成２２年２月１５日（２０１０．２．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０００９０８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９４４４０
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年８月９日（２０１２．８．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年２月１５日（２０１０．２．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０００９０８
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０９４４４０
【国際公開日】平成２２年８月２６日（２０１０．８．２６）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
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