表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）活性粒子を使用するアッセイ
本明細書では、液体ベースアッセイ、磁気捕捉アッセイ、アッセイにおいてシグナル増幅を行うための微小粒子−ナノ粒子サテライト構造、標的の増強検出に有用な複合ＳＥＲＳ活性粒子、ならびに試料チューブおよびそれを使用するためのプロセスを含む、表面増強ラマン分光法（ＳＥＲＳ）活性粒子を使用する診断アッセイが開示されている。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つの基準標識が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が第１の検出可能なシグナルを発生し、前記基準標識が第２の検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと、
（ｆ）前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記第１の検出可能なシグナルと前記基準標識の前記第２の検出可能なシグナルとを比較して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項２】
前記基準標識は、前記１つまたは複数の分析対象と複合体を形成する前記１つまたは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子と異なるレポーター分子を有する第２のＳＥＲＳ活性ナノ粒子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）１つもしくは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）（ｉ）前記アッセイ容器の軸に関して中心外れの位置に、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させることができる磁石を位置付けるステップと、
（ｉｉ）前記アッセイ容器をその軸を中心に回転させて、前記アッセイ容器の局在領域で前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含むペレットを形成するステップと
をさらに含む、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項４】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記アッセイ容器内に、前記試料をその中に配置する前に、または配置したと同時に、または配置した後に前記試料の細胞内容物を溶解するのに有効な量の１つまたは複数の溶解試薬を配置するステップと、
（ｄ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｅ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｆ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項５】
前記溶解試薬は、（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）緩衝液、塩化ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、β−グリセロリン酸、Ｔｒｉｔｏｎ、プロテアーゼ阻害剤、およびこれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の試薬を含むことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している検出可能なシグナルを発生することができる第１のアリコートの１つもしくは複数のレポーター分子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記１つもしくは複数のレポーター分子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記第１のアリコートのレポーター分子のうちの前記１つまたは複数のレポーター分子と同じである、前記第１のアリコートのレポーター分子の前記特異的結合要素に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している検出可能なシグナルを発生することができる第２のアリコートの１つまたは複数のレポーター分子を、前記試料および／または前記第１のアリコートの１つまたは複数のレポーター分子を中に配置する前に、または配置したと同時に、または配置した後に前記アッセイ容器内に配置するステップと、
（ｄ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−レポーター分子複合体を形成するステップと、
（ｅ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−レポーター分子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｆ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記レポーター分子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項７】
前記レポーター分子は、ＳＥＲＳシグナルを発生することができるナノ粒子と会合しているＳＥＲＳ活性レポーター分子を含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記第２のアリコートのレポーター分子の前記特異的結合要素は、前記１つまたは複数の磁気捕捉粒子の前記特異的結合要素を認識しないことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記分析対象は、ポリヌクレオチドであることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、磁気ペレット内の前記１つまたは複数の分析対象の知られている組成から得られる、対象とする前記１つまたは複数の分析対象の１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルと比較される検出可能なシグナルを前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項１１】
前記生体試料中の対象とする前記１つまたは複数の分析対象の存在または量は、多変量解析法によって決定されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記多変量解析法は、最小二乗フィッティング法であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）（ｉ）第１のスペクトル範囲にわたって前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルを対象とする前記１つまたは複数の分析対象の前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルと比較して、前記第１のスペクトル範囲にわたる、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと対象とする前記１つまたは複数の分析対象の前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度に関係する第１の値を報告する、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量の第１の推定を得るステップと、
（ｉｉ）第２のスペクトル範囲を選択するか、または対象とする前記１つもしくは複数の分析対象の１つもしくは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルを取り除くか、またはこの組合せを行い、ステップ（ａ）の比較を繰り返して、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度に関係する第２の値を報告する、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量の第２の推定を得るステップと、
（ｉｉｉ）必要に応じてステップ（ｂ）を繰り返して、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと前記許容可能な範囲内に入る前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度を得て、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象を検出するステップと
を含む、前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項１４】
前記磁石は、永久磁石および電磁石からなる群から選択されることを特徴とする請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
コア粒子に結合した、レポーター分子を含む複数の粒子を含むことを特徴とするサテライト構造。
【請求項１６】
前記コア粒子に結合している前記複数の粒子は、１つまたは複数のナノ粒子を含むことを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項１７】
前記ナノ粒子は、金属ナノ粒子、半導体ナノ粒子、有機ナノ粒子、および無機ナノ粒子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１６に記載のサテライト構造。
【請求項１８】
前記金属ナノ粒子は、金ナノ粒子であることを特徴とする請求項１７に記載のサテライト構造。
【請求項１９】
前記コア粒子は、微小粒子であることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２０】
前記微小粒子は、磁性微小粒子、無機微小粒子、金属微小粒子、および有機微小粒子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１９に記載のサテライト構造。
【請求項２１】
前記複数の粒子および前記コア粒子の一方または両方は、球形を有することを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２２】
前記レポーター分子は、ＳＥＲＳレポーター分子であることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２３】
前記複数の粒子および前記コア粒子の一方または両方に、対象とする前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する特異的結合要素が会合していることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２４】
第１のコア粒子に結合している複数の第１の種類の粒子を有し、第１の検出可能なシグナルを有する第１のサテライト構造と、第２のコア粒子に結合している複数の第２の種類の粒子を有し、第２の検出可能なシグナルを有する第２のサテライト構造とをさらに備え、前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルは異なっており、前記第１のコア粒子と前記第２のコア粒子は、同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２５】
複数のサテライト構造を備え、それぞれのサテライト構造は、他のサテライト構造の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２６】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とするアッセイ容器。
【請求項２７】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とするキット。
【請求項２８】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのシステム。
【請求項２９】
コア、前記コアを囲む活性物質、および前記活性物質の周りにある連続したシェルを備え、前記コアおよび前記連続したシェルは同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とするナノ粒子。
【請求項３０】
前記活性物質は、検出可能なＳＥＲＳシグナルを発生することができるラマンレポーター分子を含むことを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３１】
前記コアおよび前記連続したシェルは、それぞれ金であることを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３２】
前記活性物質と前記連続したシェルとの間に追加の材料層をさらに備えることを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３３】
前記追加の材料層は、シリカを含むことを特徴とする請求項３２に記載のナノ粒子。
【請求項３４】
前記追加の材料層は、二官能性物質を含むことを特徴とする請求項３２に記載のナノ粒子。
【請求項３５】
前記コアは、約２０ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有することを特徴とする請求項２９から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３６】
前記連続したシェルは、約２ｎｍから約２０ｎｍまでの範囲の厚さを有することを特徴とする請求項２９から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３７】
前記活性物質と前記連続したシェルとの間の前記追加の材料層は、約５ｎｍの厚さを有することを特徴とする請求項３２から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３８】
前記連続したシェルは、複数のナノ粒子を含むことを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３９】
前記コアは、約２０ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し、前記連続したシェルを含む前記複数のナノ粒子はそれぞれ、約２ｎｍから前記コアの前記直径程度までの直径を有することを特徴とする請求項３８に記載のナノ粒子。
【請求項４０】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とするアッセイ容器。
【請求項４１】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４０に記載のアッセイ容器。
【請求項４２】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とするキット。
【請求項４３】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とする生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのシステム。
【請求項４５】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４４に記載のシステム。
【請求項４６】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を請求項１５〜２５のいずれか一項に記載のサテライト構造、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子、またはこれらの組合せのうちの少なくとも１つに接触させるステップと、
（ｃ）検出ステップを実行して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項４７】
第１のコア粒子に結合している複数の第１の種類の粒子を有し、第１の検出可能なシグナルを有する第１のサテライト構造と、第２のコア粒子に結合している複数の第２の種類の粒子を有し、第２の検出可能なシグナルを有する第２のサテライト構造とさらにを備え、前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルは異なっており、前記第１のコア粒子と前記第２のコア粒子は、同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の複数のサテライト構造を備え、請求項１５〜２５に記載のそれぞれのサテライト構造は、他のサテライト構造の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備え、それぞれのナノ粒子は、他のナノ粒子の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素、および前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している磁気捕捉粒子が会合している、前記磁気捕捉粒子に会合している前記結合要素と同じであるかまたは異なるものとすることができる請求項１５〜２５のいずれか一項に記載のサテライト構造、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子、またはこれらの組合せのうちの少なくとも１つを含み、検出可能なシグナルを発生することができる試薬が中に配置されているか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合されたアッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子、分析対象、および請求項１５〜２５に記載の前記サテライト構造、または請求項２９〜３９に記載の前記ナノ粒子の間で複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域にある波長の入射光を照射して、前記サテライト構造が検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと、
（ｆ）前記検出可能なシグナルを測定して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項５１】
前記生体試料は、全血試料、血清、血漿、腹水、尿、唾液、汗、ミルク、滑液、腹膜液、羊水、経脳脊髄液、リンパ液、肺塞栓症、脳脊髄液、心嚢液、頚腟部試料、組織抽出物、細胞抽出物、およびこれらの組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記１つまたは複数の分析対象は、核酸、ＤＮＡフラグメント、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の分析対象は、細胞であることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、一定体積の磁性粒子を中に入れて保持することができる試料チューブと、
前記試料チューブの平坦な底面の隣下に位置付けられ、前記容積内に入っている磁性粒子を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給して、磁性粒子ペレットを形成することができる磁石と
を備えることを特徴とする、試料チューブ内に磁性粒子ペレットを形成するためのシステム。
【請求項５５】
前記試料チューブ内に配置されている磁性粒子をさらに備えることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５６】
前記磁性粒子は、約０．０５ミクロンから約５．０ミクロンまでの範囲の直径を有することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５７】
前記磁性粒子は、酸化鉄、マグネタイト、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５８】
前記平坦な底面は、第１の表面積を有する第１の表面を備え、前記磁石は、前記第１の表面積より大きい第２の表面積を有する第２の表面を備え、前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５９】
前記第２の表面積は、第１の表面積より約１パーセントから約２００パーセント大きいことを特徴とする請求項５８に記載のシステム。
【請求項６０】
前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であり、前記第１の表面に完全に重なることを特徴とする請求項５８に記載のシステム。
【請求項６１】
前記磁石は、強磁性体、電磁石、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６２】
前記試料チューブは、第１の長手方向軸を有し、前記磁石は、前記第１の長手方向軸に対し実質的に平行に整列した磁場を供給することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６３】
前記平坦な底面は内面を備え、前記磁石は、前記内面に対し実質的に法線方向となるように整列した磁場を供給することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６４】
前記試料チューブは、第１の長手方向軸を有し、前記磁石は、第２の長手方向軸を有する磁場を供給し、前記試料チューブと前記磁石は、前記磁場が前記第１の長手方向軸に実質的に整列するように隣接して位置付けられることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６５】
前記平坦な底面は内径を有し、前記内径と実質的に同じ直径を有する磁性粒子ペレットが形成されることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６６】
前記磁石は、約１ミリテスラ（ｍＴ）から約１０テスラ（Ｔ）までの範囲の強さを有することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６７】
細長い本体と閉じた平坦な底面を有する円錐部分とを備え、中に内部容積を定める、前記内部容積内に磁性粒子を収納する試料チューブを供給するステップと、
前記磁性粒子を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給することができる磁石を前記平坦な底面の隣下に位置付けるステップと、
前記平坦な底面上に磁性粒子ペレットを形成するステップと
を含むことを特徴とする、試料チューブ内に磁性粒子ペレットを形成する方法。
【請求項６８】
前記平坦な底面は、約０．５ｍｍから約２．０ｍｍまでの範囲の内径を有することを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記試料チューブは、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、環状オレフィンコポリマー、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記平坦な底面は、第１の表面積を有する第１の表面を備え、前記磁石は、前記第１の表面積より大きい第２の表面積を有する第２の表面を備え、前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であることを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であり、前記第１の表面に完全に重なることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記平坦な底面は、内径を有し、前記磁性粒子ペレットは、前記内径と実質的に同じ直径を有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記磁石は、約１Ｔから約１０Ｔまでの範囲の強さを有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記磁性粒子ペレットは、約１秒から約５分までの範囲の時間で前記平坦な底面上に形成されることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、検出可能なシグナルを発生することができる一定体積の磁性粒子複合体を中に入れて保持することができる試料チューブと、
前記試料チューブの平坦な底面の隣下に位置付けられ、前記容積内に入っている磁性粒子複合体を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給して、磁性粒子複合体ペレットを形成することができる磁石と、
前記ペレット内の前記磁性粒子複合体から発生した前記シグナルを検出することができる検出器と
を備えることを特徴とする、シグナルを検出するシステム。
【請求項７６】
前記磁性粒子複合体は、（ｉ）標的分析対象に特異的な第１の捕捉プローブを含む磁性粒子、（ｉｉ）前記標的分析対象に特異的な第２の捕捉プローブを含むＳＥＲＳ活性粒子、および（ｉｉｉ）前記標的分析対象を備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７７】
前記磁性粒子複合体は、ラマンシグナルを発生することができることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７８】
前記検出器は、前記磁性粒子複合体を探索することができるレーザーを備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７９】
前記検出器は分光計を備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項８０】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、検出可能なシグナルを発生することができる、標的分析対象を含む一定体積の磁性粒子複合体を中に入れて保持することができる試料チューブを供給するステップと、
前記試料チューブ内に収納されている前記磁性粒子複合体を前記平坦な底面に引き付けて磁性粒子複合体ペレットを形成するのに十分な磁力を供給することができる磁石を前記平坦な底面の隣下に位置付けるステップと、
前記平坦な底面上に磁性粒子複合体ペレットを形成するステップと、
前記磁性粒子複合体ペレットから発生したシグナルを検出するステップと、
前記シグナルを分析して前記標的分析対象の有無を判定するステップと
を含むことを特徴とする、試料中の標的分析対象を検出する方法。
【請求項８１】
前記磁性粒子複合体は、（ｉ）前記標的分析対象に特異的な第１の捕捉プローブを含む磁性粒子、（ｉｉ）前記標的分析対象に特異的な第２の捕捉プローブを含むＳＥＲＳ活性粒子、および（ｉｉｉ）前記標的分析対象を備えることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記標的分析対象は、第１のエピトープおよび前記第１のエピトープと異なる第２のエピトープを含み、前記第１の捕捉プローブは、前記第１のエピトープに特異的に結合する第１の部分を含み、前記第２の捕捉プローブは、前記第２のエピトープに特異的に結合する第２の部分を含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記磁性粒子複合体は、ラマンシグナルを発生することができることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
シグナルを検出するステップは、レーザーで前記磁性粒子複合体を探索するステップを含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記シグナルは、分光計で検出されることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８６】
（ａ）（ｉ）アッセイ容器の局在領域に位置付けることができる１つまたは複数の磁性粒子と、
（ｉｉ）前記生体試料中の１つまたは複数の分析対象の量に依存する第１の検出可能なシグナルを発生することができる第１のＳＥＲＳ活性ナノ粒子と、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数の磁性粒子の量および位置に依存するが、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の量には実質的に依存しない第２の検出可能なシグナルを発生することができる第２のＳＥＲＳ活性ナノ粒子とを供給するステップと、
（ｂ）前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルとを比較して、前記アッセイを較正し、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのアッセイを較正する方法。
【請求項１】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つの基準標識が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が第１の検出可能なシグナルを発生し、前記基準標識が第２の検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと、
（ｆ）前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記第１の検出可能なシグナルと前記基準標識の前記第２の検出可能なシグナルとを比較して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項２】
前記基準標識は、前記１つまたは複数の分析対象と複合体を形成する前記１つまたは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子と異なるレポーター分子を有する第２のＳＥＲＳ活性ナノ粒子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）１つもしくは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）（ｉ）前記アッセイ容器の軸に関して中心外れの位置に、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させることができる磁石を位置付けるステップと、
（ｉｉ）前記アッセイ容器をその軸を中心に回転させて、前記アッセイ容器の局在領域で前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含むペレットを形成するステップと
をさらに含む、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項４】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記アッセイ容器内に、前記試料をその中に配置する前に、または配置したと同時に、または配置した後に前記試料の細胞内容物を溶解するのに有効な量の１つまたは複数の溶解試薬を配置するステップと、
（ｄ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｅ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｆ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項５】
前記溶解試薬は、（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）緩衝液、塩化ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸、β−グリセロリン酸、Ｔｒｉｔｏｎ、プロテアーゼ阻害剤、およびこれらの組合せからなる群から選択される１つまたは複数の試薬を含むことを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している検出可能なシグナルを発生することができる第１のアリコートの１つもしくは複数のレポーター分子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記１つもしくは複数のレポーター分子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記第１のアリコートのレポーター分子のうちの前記１つまたは複数のレポーター分子と同じである、前記第１のアリコートのレポーター分子の前記特異的結合要素に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している検出可能なシグナルを発生することができる第２のアリコートの１つまたは複数のレポーター分子を、前記試料および／または前記第１のアリコートの１つまたは複数のレポーター分子を中に配置する前に、または配置したと同時に、または配置した後に前記アッセイ容器内に配置するステップと、
（ｄ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−レポーター分子複合体を形成するステップと、
（ｅ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−レポーター分子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｆ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記レポーター分子が検出可能なシグナルを発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項７】
前記レポーター分子は、ＳＥＲＳシグナルを発生することができるナノ粒子と会合しているＳＥＲＳ活性レポーター分子を含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記第２のアリコートのレポーター分子の前記特異的結合要素は、前記１つまたは複数の磁気捕捉粒子の前記特異的結合要素を認識しないことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記分析対象は、ポリヌクレオチドであることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、磁気ペレット内の前記１つまたは複数の分析対象の知られている組成から得られる、対象とする前記１つまたは複数の分析対象の１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルと比較される検出可能なシグナルを前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が発生するように誘導して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項１１】
前記生体試料中の対象とする前記１つまたは複数の分析対象の存在または量は、多変量解析法によって決定されることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記多変量解析法は、最小二乗フィッティング法であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素および検出可能なシグナルを発生することができる少なくとも１つのＳＥＲＳ活性レポーター分子が会合している１つもしくは複数のＳＥＲＳ活性ナノ粒子、ならびに前記１つもしくは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している１つもしくは複数の磁気捕捉粒子を含み、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子と会合している前記結合要素が前記磁気捕捉粒子と会合している前記結合要素と同じであるか、もしくは異なるものとすることができる試薬が中に配置されるか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合された
アッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）（ｉ）第１のスペクトル範囲にわたって前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルを対象とする前記１つまたは複数の分析対象の前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルと比較して、前記第１のスペクトル範囲にわたる、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと対象とする前記１つまたは複数の分析対象の前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度に関係する第１の値を報告する、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量の第１の推定を得るステップと、
（ｉｉ）第２のスペクトル範囲を選択するか、または対象とする前記１つもしくは複数の分析対象の１つもしくは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルを取り除くか、またはこの組合せを行い、ステップ（ａ）の比較を繰り返して、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度に関係する第２の値を報告する、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量の第２の推定を得るステップと、
（ｉｉｉ）必要に応じてステップ（ｂ）を繰り返して、前記磁気捕捉粒子−分析対象−ＳＥＲＳ活性ナノ粒子複合体を含む前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子の前記検出可能なシグナルと前記許容可能な範囲内に入る前記１つまたは複数の基準ＳＥＲＳスペクトルとの間の適合度を得て、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象を検出するステップと
を含む、前記アッセイ容器の前記局在領域に１つまたは複数の波長の入射光を照射して、前記ＳＥＲＳ活性ナノ粒子が検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項１４】
前記磁石は、永久磁石および電磁石からなる群から選択されることを特徴とする請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
コア粒子に結合した、レポーター分子を含む複数の粒子を含むことを特徴とするサテライト構造。
【請求項１６】
前記コア粒子に結合している前記複数の粒子は、１つまたは複数のナノ粒子を含むことを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項１７】
前記ナノ粒子は、金属ナノ粒子、半導体ナノ粒子、有機ナノ粒子、および無機ナノ粒子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１６に記載のサテライト構造。
【請求項１８】
前記金属ナノ粒子は、金ナノ粒子であることを特徴とする請求項１７に記載のサテライト構造。
【請求項１９】
前記コア粒子は、微小粒子であることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２０】
前記微小粒子は、磁性微小粒子、無機微小粒子、金属微小粒子、および有機微小粒子からなる群から選択されることを特徴とする請求項１９に記載のサテライト構造。
【請求項２１】
前記複数の粒子および前記コア粒子の一方または両方は、球形を有することを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２２】
前記レポーター分子は、ＳＥＲＳレポーター分子であることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２３】
前記複数の粒子および前記コア粒子の一方または両方に、対象とする前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する特異的結合要素が会合していることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２４】
第１のコア粒子に結合している複数の第１の種類の粒子を有し、第１の検出可能なシグナルを有する第１のサテライト構造と、第２のコア粒子に結合している複数の第２の種類の粒子を有し、第２の検出可能なシグナルを有する第２のサテライト構造とをさらに備え、前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルは異なっており、前記第１のコア粒子と前記第２のコア粒子は、同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２５】
複数のサテライト構造を備え、それぞれのサテライト構造は、他のサテライト構造の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項１５に記載のサテライト構造。
【請求項２６】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とするアッセイ容器。
【請求項２７】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とするキット。
【請求項２８】
請求項１５から２５のいずれか一項に記載のサテライト構造を備えることを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのシステム。
【請求項２９】
コア、前記コアを囲む活性物質、および前記活性物質の周りにある連続したシェルを備え、前記コアおよび前記連続したシェルは同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とするナノ粒子。
【請求項３０】
前記活性物質は、検出可能なＳＥＲＳシグナルを発生することができるラマンレポーター分子を含むことを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３１】
前記コアおよび前記連続したシェルは、それぞれ金であることを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３２】
前記活性物質と前記連続したシェルとの間に追加の材料層をさらに備えることを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３３】
前記追加の材料層は、シリカを含むことを特徴とする請求項３２に記載のナノ粒子。
【請求項３４】
前記追加の材料層は、二官能性物質を含むことを特徴とする請求項３２に記載のナノ粒子。
【請求項３５】
前記コアは、約２０ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有することを特徴とする請求項２９から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３６】
前記連続したシェルは、約２ｎｍから約２０ｎｍまでの範囲の厚さを有することを特徴とする請求項２９から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３７】
前記活性物質と前記連続したシェルとの間の前記追加の材料層は、約５ｎｍの厚さを有することを特徴とする請求項３２から３４のいずれか一項に記載のナノ粒子。
【請求項３８】
前記連続したシェルは、複数のナノ粒子を含むことを特徴とする請求項２９に記載のナノ粒子。
【請求項３９】
前記コアは、約２０ｎｍから約２００ｎｍまでの直径を有し、前記連続したシェルを含む前記複数のナノ粒子はそれぞれ、約２ｎｍから前記コアの前記直径程度までの直径を有することを特徴とする請求項３８に記載のナノ粒子。
【請求項４０】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とするアッセイ容器。
【請求項４１】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４０に記載のアッセイ容器。
【請求項４２】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とするキット。
【請求項４３】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載のナノ粒子を備えることを特徴とする生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのシステム。
【請求項４５】
前記複数のナノ粒子は、別個のＳＥＲＳシグナルを発生することができることを特徴とする請求項２９〜３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備える請求項４４に記載のシステム。
【請求項４６】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を請求項１５〜２５のいずれか一項に記載のサテライト構造、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子、またはこれらの組合せのうちの少なくとも１つに接触させるステップと、
（ｃ）検出ステップを実行して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項４７】
第１のコア粒子に結合している複数の第１の種類の粒子を有し、第１の検出可能なシグナルを有する第１のサテライト構造と、第２のコア粒子に結合している複数の第２の種類の粒子を有し、第２の検出可能なシグナルを有する第２のサテライト構造とさらにを備え、前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルは異なっており、前記第１のコア粒子と前記第２のコア粒子は、同じであるか、または異なるものとすることができることを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の複数のサテライト構造を備え、請求項１５〜２５に記載のそれぞれのサテライト構造は、他のサテライト構造の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
請求項２９から３９のいずれか一項に記載の複数のナノ粒子を備え、それぞれのナノ粒子は、他のナノ粒子の前記検出可能なシグナルから区別できる検出可能なシグナルを有することを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
（ａ）１つまたは複数の分析対象を含むことが疑われる生体試料を用意するステップと、
（ｂ）前記生体試料を、
（ｉ）前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素、および前記１つまたは複数の分析対象に対して親和性を有する少なくとも１つの特異的結合要素が会合している磁気捕捉粒子が会合している、前記磁気捕捉粒子に会合している前記結合要素と同じであるかまたは異なるものとすることができる請求項１５〜２５のいずれか一項に記載のサテライト構造、請求項２９〜３９のいずれか一項に記載のナノ粒子、またはこれらの組合せのうちの少なくとも１つを含み、検出可能なシグナルを発生することができる試薬が中に配置されているか、または
（ｉｉ）前記試料を中に配置する前に、もしくは配置したと同時に、もしくは配置した後に配置されるステップ（ｂ）（ｉ）の前記試薬が中に配置されるように適合されたアッセイ容器に配置するステップと、
（ｃ）前記１つまたは複数の分析対象が前記生体試料中に存在する場合に前記生体試料を一定期間インキュベートして、磁気捕捉粒子、分析対象、および請求項１５〜２５に記載の前記サテライト構造、または請求項２９〜３９に記載の前記ナノ粒子の間で複合体を形成するステップと、
（ｄ）前記複合体を磁場に曝すことで、前記複合体を前記アッセイ容器の局在領域に移動させるステップと、
（ｅ）前記アッセイ容器の前記局在領域にある波長の入射光を照射して、前記サテライト構造が検出可能なシグナルを発生するように誘導するステップと、
（ｆ）前記検出可能なシグナルを測定して、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するための方法。
【請求項５１】
前記生体試料は、全血試料、血清、血漿、腹水、尿、唾液、汗、ミルク、滑液、腹膜液、羊水、経脳脊髄液、リンパ液、肺塞栓症、脳脊髄液、心嚢液、頚腟部試料、組織抽出物、細胞抽出物、およびこれらの組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記１つまたは複数の分析対象は、核酸、ＤＮＡフラグメント、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、およびオリゴヌクレオチドからなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記１つまたは複数の分析対象は、細胞であることを特徴とする請求項１〜１４および４６〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、一定体積の磁性粒子を中に入れて保持することができる試料チューブと、
前記試料チューブの平坦な底面の隣下に位置付けられ、前記容積内に入っている磁性粒子を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給して、磁性粒子ペレットを形成することができる磁石と
を備えることを特徴とする、試料チューブ内に磁性粒子ペレットを形成するためのシステム。
【請求項５５】
前記試料チューブ内に配置されている磁性粒子をさらに備えることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５６】
前記磁性粒子は、約０．０５ミクロンから約５．０ミクロンまでの範囲の直径を有することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５７】
前記磁性粒子は、酸化鉄、マグネタイト、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５８】
前記平坦な底面は、第１の表面積を有する第１の表面を備え、前記磁石は、前記第１の表面積より大きい第２の表面積を有する第２の表面を備え、前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項５９】
前記第２の表面積は、第１の表面積より約１パーセントから約２００パーセント大きいことを特徴とする請求項５８に記載のシステム。
【請求項６０】
前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であり、前記第１の表面に完全に重なることを特徴とする請求項５８に記載のシステム。
【請求項６１】
前記磁石は、強磁性体、電磁石、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６２】
前記試料チューブは、第１の長手方向軸を有し、前記磁石は、前記第１の長手方向軸に対し実質的に平行に整列した磁場を供給することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６３】
前記平坦な底面は内面を備え、前記磁石は、前記内面に対し実質的に法線方向となるように整列した磁場を供給することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６４】
前記試料チューブは、第１の長手方向軸を有し、前記磁石は、第２の長手方向軸を有する磁場を供給し、前記試料チューブと前記磁石は、前記磁場が前記第１の長手方向軸に実質的に整列するように隣接して位置付けられることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６５】
前記平坦な底面は内径を有し、前記内径と実質的に同じ直径を有する磁性粒子ペレットが形成されることを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６６】
前記磁石は、約１ミリテスラ（ｍＴ）から約１０テスラ（Ｔ）までの範囲の強さを有することを特徴とする請求項５４に記載のシステム。
【請求項６７】
細長い本体と閉じた平坦な底面を有する円錐部分とを備え、中に内部容積を定める、前記内部容積内に磁性粒子を収納する試料チューブを供給するステップと、
前記磁性粒子を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給することができる磁石を前記平坦な底面の隣下に位置付けるステップと、
前記平坦な底面上に磁性粒子ペレットを形成するステップと
を含むことを特徴とする、試料チューブ内に磁性粒子ペレットを形成する方法。
【請求項６８】
前記平坦な底面は、約０．５ｍｍから約２．０ｍｍまでの範囲の内径を有することを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記試料チューブは、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、環状オレフィンコポリマー、またはこれらの組合せを含むことを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記平坦な底面は、第１の表面積を有する第１の表面を備え、前記磁石は、前記第１の表面積より大きい第２の表面積を有する第２の表面を備え、前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であることを特徴とする請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記第２の表面は、前記第１の表面に向かい合い、実質的に平行であり、前記第１の表面に完全に重なることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記平坦な底面は、内径を有し、前記磁性粒子ペレットは、前記内径と実質的に同じ直径を有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７３】
前記磁石は、約１Ｔから約１０Ｔまでの範囲の強さを有することを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７４】
前記磁性粒子ペレットは、約１秒から約５分までの範囲の時間で前記平坦な底面上に形成されることを特徴とする請求項７０に記載の方法。
【請求項７５】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、検出可能なシグナルを発生することができる一定体積の磁性粒子複合体を中に入れて保持することができる試料チューブと、
前記試料チューブの平坦な底面の隣下に位置付けられ、前記容積内に入っている磁性粒子複合体を前記平坦な底面に引き付けるのに十分な磁力を供給して、磁性粒子複合体ペレットを形成することができる磁石と、
前記ペレット内の前記磁性粒子複合体から発生した前記シグナルを検出することができる検出器と
を備えることを特徴とする、シグナルを検出するシステム。
【請求項７６】
前記磁性粒子複合体は、（ｉ）標的分析対象に特異的な第１の捕捉プローブを含む磁性粒子、（ｉｉ）前記標的分析対象に特異的な第２の捕捉プローブを含むＳＥＲＳ活性粒子、および（ｉｉｉ）前記標的分析対象を備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７７】
前記磁性粒子複合体は、ラマンシグナルを発生することができることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７８】
前記検出器は、前記磁性粒子複合体を探索することができるレーザーを備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項７９】
前記検出器は分光計を備えることを特徴とする請求項７５に記載のシステム。
【請求項８０】
閉じた平坦な底面を有する円錐部分を備え、検出可能なシグナルを発生することができる、標的分析対象を含む一定体積の磁性粒子複合体を中に入れて保持することができる試料チューブを供給するステップと、
前記試料チューブ内に収納されている前記磁性粒子複合体を前記平坦な底面に引き付けて磁性粒子複合体ペレットを形成するのに十分な磁力を供給することができる磁石を前記平坦な底面の隣下に位置付けるステップと、
前記平坦な底面上に磁性粒子複合体ペレットを形成するステップと、
前記磁性粒子複合体ペレットから発生したシグナルを検出するステップと、
前記シグナルを分析して前記標的分析対象の有無を判定するステップと
を含むことを特徴とする、試料中の標的分析対象を検出する方法。
【請求項８１】
前記磁性粒子複合体は、（ｉ）前記標的分析対象に特異的な第１の捕捉プローブを含む磁性粒子、（ｉｉ）前記標的分析対象に特異的な第２の捕捉プローブを含むＳＥＲＳ活性粒子、および（ｉｉｉ）前記標的分析対象を備えることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
前記標的分析対象は、第１のエピトープおよび前記第１のエピトープと異なる第２のエピトープを含み、前記第１の捕捉プローブは、前記第１のエピトープに特異的に結合する第１の部分を含み、前記第２の捕捉プローブは、前記第２のエピトープに特異的に結合する第２の部分を含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
前記磁性粒子複合体は、ラマンシグナルを発生することができることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
シグナルを検出するステップは、レーザーで前記磁性粒子複合体を探索するステップを含むことを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記シグナルは、分光計で検出されることを特徴とする請求項８０に記載の方法。
【請求項８６】
（ａ）（ｉ）アッセイ容器の局在領域に位置付けることができる１つまたは複数の磁性粒子と、
（ｉｉ）前記生体試料中の１つまたは複数の分析対象の量に依存する第１の検出可能なシグナルを発生することができる第１のＳＥＲＳ活性ナノ粒子と、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数の磁性粒子の量および位置に依存するが、前記生体試料中の前記１つまたは複数の分析対象の量には実質的に依存しない第２の検出可能なシグナルを発生することができる第２のＳＥＲＳ活性ナノ粒子とを供給するステップと、
（ｂ）前記第１の検出可能なシグナルと前記第２の検出可能なシグナルとを比較して、前記アッセイを較正し、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するステップと
を含むことを特徴とする、生体試料中の１つまたは複数の分析対象の存在または量を検出するためのアッセイを較正する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図６】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【公表番号】特表２０１０−５３７１５５（Ｐ２０１０−５３７１５５Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５０１１１０（Ｐ２０１０−５０１１１０）
【出願日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５７７００
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１６０９３
【国際公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【出願人】（５９５１１７０９１）ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー (539)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＣＴＯＮ， ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【住所又は居所原語表記】１ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ ０７４１７−１８８０， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５７７００
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１６０９３
【国際公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【出願人】（５９５１１７０９１）ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー (539)
【氏名又は名称原語表記】ＢＥＣＴＯＮ， ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ ＡＮＤ ＣＯＭＰＡＮＹ
【住所又は居所原語表記】１ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ ０７４１７−１８８０， ＵＮＩＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲＩＣＡ
【Ｆターム（参考）】
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