角膜上皮障害治療用点眼剤
【課題】細胞毒性が低く、かつ、効果的に腐敗が防止されて保存効力が高く、さらに低刺激で使用感が良好な、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上の高濃度含有するマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤を提供する。
【解決手段】以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であるマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【解決手段】以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であるマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一定期間、同一容器から繰返して使用されるマルチドーズ型の角膜上皮障害治療用点眼剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
角膜上皮障害治療剤は、ダメージを受けた角膜上皮に投与されるものであるため、細胞毒性が低いことが求められる。また、点眼剤等の水性組成物は、使用時の微生物汚染等による製品の腐敗を防止する（保存効力を確保する）ことが求められる。しかしながら、一般に保存効力と細胞毒性とは逆相関であり、保存効力を高めると、細胞毒性が強くなるという問題があった。また、角膜上皮障害の治療において、ヒアルロン酸濃度０．１ｗ／ｖ％又は０．３ｗ／ｖ％の製剤が一般に使用されているが、ヒアルロン酸やその塩を含有する製剤は微生物が繁殖しやすく、特に、ヒアルロン酸濃度が０．３ｗ／ｖ％と高濃度であると、ヒアルロン酸濃度０．１ｗ／ｖ％のものと比べ毒性が弱く、このため保存効力を確保しづらいという問題があった。
【０００３】
点眼剤は、通常、ユニットドーズ型容器又はマルチドーズ型容器に収納して使用される。マルチドーズ型点眼剤は、開封後一定期間にわたり何度も使用することが前提とされているが、一旦開封した点眼剤は、使用時に雑菌を含んだ空気混入が避けられない。また、使用時に接触した眼組織や皮膚から微生物汚染が引き起こされる可能性が高い。このため、ヒアルロン酸を含有するマルチドーズ型点眼剤においては、その腐敗を防止して保存効力を確保することが必須であり、防腐剤が配合されていることが多い。しかしながら、上述したように、一般に保存効力を高めると、細胞毒性が強くなるという問題がある。
【０００４】
ユニットドーズ型容器に収納される場合、開封後一度で使い切ることを前提に防腐剤を非配合とすることも可能であるが、ユニットドーズ型製剤は、一般に長期間の使用において高価であり、保管時にかさばるなどの問題もある。また、１回で使いきれない場合には、残液が無駄になるという問題もある。
【０００５】
このため、ヒアルロン酸を高濃度（例えば０．３ｗ／ｖ％以上）含有するマルチドーズ型の角膜上皮治療用点眼剤において、細胞毒性を低くし、かつ保存効力を高くできる技術が求められていた。
【０００６】
細胞毒性を低くし、かつ保存効力を高くすることを目的として、防腐剤フリー容器が提案されている（特許文献１〜７）。しかしながら、製造が複雑である、高価であるといった問題点があった。
【０００７】
特許文献８には、ヒアルロン酸に、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸エステル及びキレート剤（ＥＤＴＡ）を配合した点眼液が開示されている。しかしながら、防腐効果（保存効力）は改善されるものの、ＥＤＴＡを配合した製剤は眼への刺激が強いという問題点があった。また、防腐剤として塩化ベンザルコニウムが使用されているが、ヒアルロン酸と共に塩化ベンザルコニウムを使用すると、点眼液が白濁し、霧視等の問題があった。
【０００８】
特許文献９には、白濁を抑制する技術として、防腐剤として炭素数１２の塩化ベンザルコニウムを用いる配合禁忌防止方法が開示されている。特許文献１０には、ヒアルロン酸に、炭素数１２の塩化ベンザルコニウム及びエデト酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）を配合し防腐効果を高めた点眼剤が開示されている。しかしながら、ＥＤＴＡを配合した製剤は眼への刺激が強いという問題点があった。
【０００９】
特許文献１１には、ヒアルロン酸に、塩化ベンザルコニウム及びホウ酸を配合することにより、白濁せず、ヒアルロン酸濃度が０．１７％でも防腐効果が得られたことが開示されている。特許文献１２には、ヒアルロン酸又はその塩を０．００１〜２％含有する水溶液に、防腐剤として塩酸クロルヘキシジンを０．００１〜０．０１％配合した外用水溶液製剤が開示されている。特許文献１３には、ホウ酸よりなるヒアルロン酸を含有する水性製剤の増粘剤が開示されている。
しかしながら、ヒアルロン酸を０．３％以上の高濃度含有するマルチドーズ型点眼剤において、優れた保存効力と低い細胞毒性とを両立させる技術は未だ開発されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００３−２９０３１６号公報
【特許文献２】特開２００４−５１１７０号公報
【特許文献３】特開２００４−１６６９７８号公報
【特許文献４】特開２００２−８００５５号公報
【特許文献５】特開２００２−２６３１６６号公報
【特許文献６】特開２００５−１１１０９４号公報
【特許文献７】特開２００５−１４５４７０号公報
【特許文献８】特公平０７−５４５６号公報
【特許文献９】特公平０６−７４２１２号公報
【特許文献１０】特許２５３０４９１号
【特許文献１１】特許３０５０８９８号
【特許文献１２】特開平１１−５７４４号公報
【特許文献１３】特開平１１−４３４４６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記現状に鑑み、細胞毒性が低く、かつ、効果的に腐敗が防止されて保存効力が高く、さらに低刺激で使用感が良好な、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上の高濃度含有するマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究した結果、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上含有するマルチドーズ型上皮障害治療用点眼剤において、（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩と共に、（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂、及び（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを配合することにより、該点眼剤の細胞毒性を低くすることができ、しかも該点眼剤における微生物の繁殖を効果的に抑制できることを見出した。このような点眼剤は、一定期間、同一容器から繰返して使用される場合において、該期間を通して微生物等による汚染を防ぐのに十分な保存効力を有しているものであった。本発明者らはまた、防腐剤として使用する（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量を、眼科用剤に通常使用される量（０．０１ｗ／ｖ％）の半分程度としても、十分な保存効力が得られることを見出した。
【００１３】
本発明者らは、マルチドーズ型点眼剤において前記（ａ）〜（ｃ）を配合することにより、ヒアルロン酸濃度が０．３ｗ／ｖ％以上であっても、細胞毒性の低減と保存効力の確保を両立させることができた。前記（ａ）〜（ｃ）を配合したマルチドーズ型点眼剤は、防腐剤（前記（ｃ））を含有するにもかかわらず、驚くべきことに、防腐剤を含有しないヒアルロン酸含有量０．３ｗ／ｖ％のユニットドーズ型点眼剤よりも細胞毒性が低く、安全性が高いものであった。本発明者らは、上記知見に基づき、更に研究を進め、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（５）に関する。
（１）以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とするマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（２）さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有する前記（１）に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（３）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．０１ｗ／ｖ％未満である前記（１）又は（２）に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（４）浸透圧比が、０．８〜１．２である前記（１）〜（３）のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（５）ｐＨが６〜８である前記（１）〜（４）のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上含有するマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤において、細胞毒性を低くし、かつ微生物の繁殖を効果的に抑制して保存効力を高くすることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤は、以下の（ａ）ないし（ｃ）を含有するものである。
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
【００１７】
「マルチドーズ型点眼剤」とは、マルチドーズ型点眼容器に収納されている点眼剤を意味する。「マルチドーズ型点眼容器」とは、点眼剤を反復使用する期間、例えば数日〜数ヶ月（好ましくは数日〜１ヶ月程度）にわたり、同一容器からの多数回、反復使用が可能なように、開封後も携帯が可能な程度に密閉状態を復元できる容器を意味する。
【００１８】
本発明におけるヒアルロン酸は、外用水溶液製剤として使用され得るヒアルロン酸であればよい。ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩は、１種又は２種以上を使用することができる。ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム等が挙げられる。好ましくは、ヒアルロン酸ナトリウムである。
【００１９】
ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩の質量平均分子量は、好ましくは、約３０万〜４００万であり、より好ましくは約５０万〜１２０万である。
本発明の点眼剤において、（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上である。ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して約０．３〜２ｗ／ｖ％であることが好ましい。より好ましくは、約０．３〜１ｗ／ｖ％であり、さらに好ましくは、約０．３ｗ／ｖ％である。前記範囲下限を下回ると、充分な薬効が得られないおそれがあり、また、前記範囲上限を超えると、使用時に霧視が発生するなどの問題が生じるおそれがある。前記配合量は、ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩が配合される場合には、これらの合計量である。
【００２０】
ホウ酸及びホウ砂は、外用水溶液製剤として使用され得るものであればよい。本発明においては、ホウ酸として、テトラホウ酸カリウム、メタホウ酸カリウム、ホウ酸アンモニウム等のホウ酸の塩の１種又は２種以上を使用してもよい。
【００２１】
ホウ酸の配合量は、製剤全体に対して０．０５〜２ｗ／ｖ％であることが好ましく、より好ましくは、０．１〜１ｗ／ｖ％である。ホウ砂の配合量は、製剤全体に対して０．０１〜０．４ｗ／ｖ％であることが好ましく、より好ましくは、０．０２〜０．３ｗ／ｖ％である。本発明においては、ホウ酸及びホウ砂を使用することが好ましい。ホウ酸及びホウ砂を使用する場合には、ホウ酸及びホウ砂それぞれの配合量が、前記範囲内となるようにすることが好ましい。ホウ酸及びホウ砂の配合量が前記範囲であると、より細胞毒性を低減しつつ、充分な保存効力を得ることができる。また、低刺激であるため使用感が良好となる。
【００２２】
クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩、並びにパラオキシ安息香酸エステルは、防腐剤として使用される。クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩は、１種又は２種以上を使用することができる。本発明においては、（ｃ）として（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩を用いることが好ましい。
クロルヘキシジンの薬学的に許容される塩としては、グルコン酸塩、塩酸塩、酢酸塩、等が挙げられる。好ましくは、クロルヘキシジンのグルコン酸塩を使用する。
【００２３】
本発明におけるクロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％であることが好ましい。また、配合量の上限は、０．０１ｗ／ｖ％未満であることが好ましい。配合量は、より好ましくは、０．０００５ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満である。さらに好ましくは、０．０００５ｗ／ｖ％を超えて０．０１ｗ／ｖ％未満であり、さらにより好ましくは０．００１ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満であり、特に好ましくは、０．００１〜０．００７ｗ／ｖ％である。クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が前記範囲であると、より細胞毒性を低減しつつ、十分な保存効力を得ることができる。
【００２４】
パラオキシ安息香酸エステルとしては、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が使用でき、これらの２種以上を併用しても良い。これらの中でも、特に、パラオキシ安息香酸プロピル及び／又はパラオキシ安息香酸メチルが好ましい。また、パラオキシ安息香酸エステルの配合量は、製剤全体に対して０．００１〜０．１ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜０．０５ｗ／ｖ％であることがより好ましい。前記配合量は、２種以上のパラオキシ安息香酸エステルを使用する場合には、その合計量である。また、例えば、パラオキシ安息香酸プロピル及びパラオキシ安息香酸メチルを用いる場合、その配合比率は、質量比で、パラオキシ安息香酸プロピル１に対してパラオキシ安息香酸メチルを２〜４とすることが好ましい。
【００２５】
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを同時に配合する場合には、上述の好ましい範囲に対し、各々３０％〜９０％の配合量とすることが好ましい。
【００２６】
前記ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩、ホウ酸及びホウ砂、クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩、並びにパラオキシ安息香酸エステルは、例えば、市販されており容易に入手できる。
【００２７】
本発明の点眼剤は、さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有することが好ましい。より好ましくは、ナトリウムイオン供与性物質及びカリウムイオン供与性物質を用いる。
ナトリウムイオン供与性物質は、水溶液中で解離してナトリウムイオンを発生する化合物であればよい。カリウムイオン供与性物質は、水溶液中で解離してカリウムイオンを発生する化合物であればよい。
【００２８】
ナトリウムイオン供与性物質として、ナトリウム塩が好適である。ナトリウム塩として、塩化ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸二水素一ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等が挙げられる。好ましくは、塩化ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等であり、より好ましくは、塩化ナトリウムである。カリウムイオン供与性物質として、カリウム塩が好適である。カリウム塩として、塩化カリウム、リン酸一水素二カリウム、リン酸二水素一カリウム、酢酸カリウム等が挙げられる。好ましくは、塩化カリウム、リン酸一水素二カリウム、リン酸二水素一カリウム等であり、より好ましくは、塩化カリウムである。ナトリウムイオン供与性物質及びカリウムイオン供与性物質は、それぞれ１種又は２種以上を用いることができる。
【００２９】
ナトリウムイオン供与性物質の配合量は、通例、製剤全体に対して約０．０１〜３ｗ／ｖ％であり、好ましくは、約０．１〜１ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．３〜０．８ｗ／ｖ％である。カリウムイオン供与性物質の配合量は、通例、製剤全体に対して約０．０１〜３ｗ／ｖ％であり、好ましくは、約０．０５〜０．５ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．１〜０．３ｗ／ｖ％である。
【００３０】
本発明の点眼剤には、上記成分の他に本発明の効果を損なわない範囲で、他の薬物、各種添加剤（安定化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、溶解補助剤、酸化防止剤、溶剤、可溶化剤、懸濁剤、着香剤・香料、清涼化剤、着色剤、塩類等）等を添加することができる。これら任意成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲で通常量配合することができる。
【００３１】
本発明の点眼剤には、本発明の効果を奏することになる限り、（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル以外の防腐剤が配合されていてもよいが、該（ｃ）を含有することにより、十分高い保存効力を発揮することができるものであることから、該（ｃ）以外の防腐剤を、実質的に防腐効果を奏する量含有しないことが好ましい。より好ましくは、（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩以外の防腐剤を、実質的に防腐効果を奏する量含有しないことが好ましい。また、エデト酸（ＥＤＴＡ）及びその塩は、眼への刺激があることが知られている。本発明の点眼剤は、ＥＤＴＡやその塩を実質的に含有しないことが好ましい。
【００３２】
本発明の点眼剤は、浸透圧比が、０．８〜１．２であることが好ましい。より好ましくは、約０．９〜１．１である。
本発明の点眼剤は、ｐＨが、約６〜８であることが好ましい。より好ましくは、約６．８〜７．８である。浸透圧比やｐＨの調整は、既述のｐＨ調整剤、等張化剤、塩類等を用いて、当該技術分野で既知の方法で行うことができる。
【００３３】
本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤は、通常、前記成分を含有する溶液（角膜上皮障害治療用組成物）が長期間の反復使用に適したマルチドーズ型点眼容器に収納されているものである。マルチドーズ型点眼容器の内容積は、通常５ｍＬ〜２０ｍＬ程度である。マルチドーズ型点眼容器の形状、材質等は特に限定されず、通常点眼剤に使用されるマルチドーズ型容器を使用することができる。容器は、遮光である必要はないが、遮光容器であってもよい。
【００３４】
本発明の点眼剤は、通常、前述した（ａ）〜（ｃ）、並びに必要に応じて配合される（ｄ）やその他の成分を、所定量水に溶解させ、得られた溶液（角膜上皮障害治療用組成物）をマルチドーズ型点眼容器に充填することにより調製される。各成分を水に溶解後に、得られた溶液のｐＨや浸透圧を公知の方法により適宜調整することが好ましい。通常、前述した（ａ）〜（ｃ）並びに必要に応じて配合される（ｄ）やその他の成分を含有する溶液の浸透圧及びｐＨ調整後、無菌環境下、ろ過滅菌処理し、洗浄滅菌済みのマルチドーズ型点眼容器に無菌充填することにより、本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤を製造できる。
【００３５】
本発明の点眼剤の製造に用いる水は、眼科用剤に使用可能な水であれば特に限定されず、例えば、精製水等を用いることができる。各成分の混合順序、混合方法等は特に限定されず、公知の調製法により各成分を水に溶解させればよい。
【００３６】
本発明の点眼剤は、角膜上皮傷害の治療のために好適に使用されるものである。「治療」とは、症状又は疾患及び／又はその付随する症候を緩和し、又は治癒すること、及び緩和することを意味するものとする。
【００３７】
「角膜上皮傷害」は、臨床上、欠損部位や病態所見等により細かく分類されるが、本明細書中では角膜上皮傷害と診断される疾患はもとより、コンタクトレンズの装用、薬剤性、外傷、手術等により一時的に角膜表面に生じた傷、ドライアイ等の眼の乾燥、紫外線やＸ線等の光線の曝露など、様々な外的要因（外因性疾患）により角膜上皮のバリアー機能が損なわれることで生じる眼の不快症状を包含する。またこれに伴って現れる自覚症状としては、眼の不快感、眼の乾き、眼の痒みなどが挙げられる。
【００３８】
本発明の点眼剤の好ましい投与対象は、前記角膜上皮傷害を有する又は発症するおそれのある個体（動物）である。好ましくは、前記角膜上皮傷害を有する個体である。個体としてはヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等の哺乳類が好ましく、特にヒトが好ましい。
【００３９】
本発明の点眼剤の投与量及び投与回数は、投与対象の症状等に応じて適宜選択することができる。通常、成人に対し１回につき１〜３滴程度を一日あたり１〜６回程度点眼すればよい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。
【００４１】
（製剤の調製方法）
以下の方法により、眼科用剤１〜１４及び参考製剤を調製した。
【００４２】
（製剤例１）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１を得た。
【００４３】
（製剤例２）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤２を得た。
【００４４】
（製剤例３）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤３を得た。
【００４５】
（製剤例４）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０３ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤４を得た。
【００４６】
（製剤例５）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０３５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤５を得た。
【００４７】
（製剤例６）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤６を得た。
【００４８】
（製剤例７）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンザルコニウム塩化物液（１０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤７を得た。
【００４９】
（製剤例８）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンゼトニウム塩化物０．００２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤８を得た。
【００５０】
（製剤例９）
パラオキシ安息香酸メチル０．０２８ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０．０１４ｇを温水６０ｇ中に加えて加温溶解させ、冷却後ヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加え溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、及び塩化ナトリウム０．６１ｇを加え、溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤９を得た。
【００５１】
（製剤例１０）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、トロメタモール０．０２６ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１０を得た。
【００５２】
（製剤例１１）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、クエン酸水和物０．１１２ｇ、ホウ砂０．３ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１１を得た。
【００５３】
（製剤例１２）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、リン酸二水素ナトリウム２水和物０．１５６ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物０．４５２ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１２を得た。
【００５４】
（製剤例１３）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇを加え、溶解させた後、希塩酸１．０ｇ及び水酸化ナトリウムを適量加え、ｐＨを７．３に合わせた。これにクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて混合した後、精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１３を得た。
【００５５】
（製剤例１４）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、リン酸二水素ナトリウム２水和物０．１５６ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物０．４５２ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンザルコニウム塩化物液（１０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１４を得た。
【００５６】
（参考製剤１）
ヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％（参天製薬社製）を、そのまま、参考製剤１として使用した。
【００５７】
（参考製剤２）
ヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％（参天製薬社製） １００ｍＬにヒアルロン酸ナトリウム０．２ｇを加えて溶解させ参考製剤２を得た（ヒアルロン酸合計濃度 ０．３％）。
【００５８】
前記で調製した眼科用剤１〜１４の組成を、表１〜２に示す。表１〜２中の数値は、ｗ／ｖ％を意味する。
【００５９】
【表１】
【００６０】
【表２】
【００６１】
前記製剤例で調製した各眼科用剤を試験薬剤として用いて、以下の方法により、細胞毒性試験及び保存効力試験を実施した。
（細胞毒性試験の実施方法）
96 well マイクロプレート に1×10４cells /wellの培養角膜細胞を播種し、５％二酸化炭素雰囲気下、３７℃で２４時間培養し、細胞をプレート底面に接着させた。その後、培地を取り除き、各試験薬剤を作用させ、試験薬剤接触前（０分）と接触後（３０分）にCelltiter-Blue（登録商標） Cell Viability Assay (promega社)を用いて蛍光測定を行い、細胞の生存率を算出した。各群４検体ずつ行った。
【００６２】
（評価基準）
細胞毒性の判定は、細胞の生存率（％）から、以下の判定基準を用いて行った。
【００６３】
【表３】
【００６４】
（保存効力試験の実施方法）
第１５局改正 日本薬局方 参考情報 保存効力試験法に準拠し、真菌（アスペルギルス・ニガー）に対する保存効力を調べた。
【００６５】
保存効力試験の判定は、接種４日後に接種菌の生存率（全細菌数に対する全生細菌数の％）を測定し、該生存率（％）から以下の判定基準により行った。
【００６６】
【表４】
【００６７】
細胞毒性試験及び保存効力試験の結果から、以下の基準で総合評価を行なった。
【００６８】
【表５】
【００６９】
細胞毒性試験及び保存効力試験の結果、並びに総合評価を、表６〜７に示す。表中、−は、未実施を意味する。
【００７０】
【表６】
【００７１】
【表７】
【００７２】
眼科用剤４及び５の保存効力試験は未実施であるが、クロルヘキシジングルコン酸塩濃度のみが異なる処方である、眼科用剤３及び眼科用剤６の保存効力試験結果がいずれも０．１％未満であることから、眼科用剤４及び５の保存効力試験結果は、０．１％未満であると考えられた。
表６〜７より、ヒアルロン酸ナトリウムと共に、（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂、並びに（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを含有する眼科用剤は、低細胞毒性と高い保存効力とを兼ね備えるものであった。特に、クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が０．００１ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満である眼科用剤は、総合評価において特に優れるものであった。
【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明は、医療分野等において有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一定期間、同一容器から繰返して使用されるマルチドーズ型の角膜上皮障害治療用点眼剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
角膜上皮障害治療剤は、ダメージを受けた角膜上皮に投与されるものであるため、細胞毒性が低いことが求められる。また、点眼剤等の水性組成物は、使用時の微生物汚染等による製品の腐敗を防止する（保存効力を確保する）ことが求められる。しかしながら、一般に保存効力と細胞毒性とは逆相関であり、保存効力を高めると、細胞毒性が強くなるという問題があった。また、角膜上皮障害の治療において、ヒアルロン酸濃度０．１ｗ／ｖ％又は０．３ｗ／ｖ％の製剤が一般に使用されているが、ヒアルロン酸やその塩を含有する製剤は微生物が繁殖しやすく、特に、ヒアルロン酸濃度が０．３ｗ／ｖ％と高濃度であると、ヒアルロン酸濃度０．１ｗ／ｖ％のものと比べ毒性が弱く、このため保存効力を確保しづらいという問題があった。
【０００３】
点眼剤は、通常、ユニットドーズ型容器又はマルチドーズ型容器に収納して使用される。マルチドーズ型点眼剤は、開封後一定期間にわたり何度も使用することが前提とされているが、一旦開封した点眼剤は、使用時に雑菌を含んだ空気混入が避けられない。また、使用時に接触した眼組織や皮膚から微生物汚染が引き起こされる可能性が高い。このため、ヒアルロン酸を含有するマルチドーズ型点眼剤においては、その腐敗を防止して保存効力を確保することが必須であり、防腐剤が配合されていることが多い。しかしながら、上述したように、一般に保存効力を高めると、細胞毒性が強くなるという問題がある。
【０００４】
ユニットドーズ型容器に収納される場合、開封後一度で使い切ることを前提に防腐剤を非配合とすることも可能であるが、ユニットドーズ型製剤は、一般に長期間の使用において高価であり、保管時にかさばるなどの問題もある。また、１回で使いきれない場合には、残液が無駄になるという問題もある。
【０００５】
このため、ヒアルロン酸を高濃度（例えば０．３ｗ／ｖ％以上）含有するマルチドーズ型の角膜上皮治療用点眼剤において、細胞毒性を低くし、かつ保存効力を高くできる技術が求められていた。
【０００６】
細胞毒性を低くし、かつ保存効力を高くすることを目的として、防腐剤フリー容器が提案されている（特許文献１〜７）。しかしながら、製造が複雑である、高価であるといった問題点があった。
【０００７】
特許文献８には、ヒアルロン酸に、塩化ベンザルコニウム、パラオキシ安息香酸エステル及びキレート剤（ＥＤＴＡ）を配合した点眼液が開示されている。しかしながら、防腐効果（保存効力）は改善されるものの、ＥＤＴＡを配合した製剤は眼への刺激が強いという問題点があった。また、防腐剤として塩化ベンザルコニウムが使用されているが、ヒアルロン酸と共に塩化ベンザルコニウムを使用すると、点眼液が白濁し、霧視等の問題があった。
【０００８】
特許文献９には、白濁を抑制する技術として、防腐剤として炭素数１２の塩化ベンザルコニウムを用いる配合禁忌防止方法が開示されている。特許文献１０には、ヒアルロン酸に、炭素数１２の塩化ベンザルコニウム及びエデト酸ナトリウム（ＥＤＴＡ）を配合し防腐効果を高めた点眼剤が開示されている。しかしながら、ＥＤＴＡを配合した製剤は眼への刺激が強いという問題点があった。
【０００９】
特許文献１１には、ヒアルロン酸に、塩化ベンザルコニウム及びホウ酸を配合することにより、白濁せず、ヒアルロン酸濃度が０．１７％でも防腐効果が得られたことが開示されている。特許文献１２には、ヒアルロン酸又はその塩を０．００１〜２％含有する水溶液に、防腐剤として塩酸クロルヘキシジンを０．００１〜０．０１％配合した外用水溶液製剤が開示されている。特許文献１３には、ホウ酸よりなるヒアルロン酸を含有する水性製剤の増粘剤が開示されている。
しかしながら、ヒアルロン酸を０．３％以上の高濃度含有するマルチドーズ型点眼剤において、優れた保存効力と低い細胞毒性とを両立させる技術は未だ開発されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００３−２９０３１６号公報
【特許文献２】特開２００４−５１１７０号公報
【特許文献３】特開２００４−１６６９７８号公報
【特許文献４】特開２００２−８００５５号公報
【特許文献５】特開２００２−２６３１６６号公報
【特許文献６】特開２００５−１１１０９４号公報
【特許文献７】特開２００５−１４５４７０号公報
【特許文献８】特公平０７−５４５６号公報
【特許文献９】特公平０６−７４２１２号公報
【特許文献１０】特許２５３０４９１号
【特許文献１１】特許３０５０８９８号
【特許文献１２】特開平１１−５７４４号公報
【特許文献１３】特開平１１−４３４４６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、上記現状に鑑み、細胞毒性が低く、かつ、効果的に腐敗が防止されて保存効力が高く、さらに低刺激で使用感が良好な、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上の高濃度含有するマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意研究した結果、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上含有するマルチドーズ型上皮障害治療用点眼剤において、（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩と共に、（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂、及び（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを配合することにより、該点眼剤の細胞毒性を低くすることができ、しかも該点眼剤における微生物の繁殖を効果的に抑制できることを見出した。このような点眼剤は、一定期間、同一容器から繰返して使用される場合において、該期間を通して微生物等による汚染を防ぐのに十分な保存効力を有しているものであった。本発明者らはまた、防腐剤として使用する（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量を、眼科用剤に通常使用される量（０．０１ｗ／ｖ％）の半分程度としても、十分な保存効力が得られることを見出した。
【００１３】
本発明者らは、マルチドーズ型点眼剤において前記（ａ）〜（ｃ）を配合することにより、ヒアルロン酸濃度が０．３ｗ／ｖ％以上であっても、細胞毒性の低減と保存効力の確保を両立させることができた。前記（ａ）〜（ｃ）を配合したマルチドーズ型点眼剤は、防腐剤（前記（ｃ））を含有するにもかかわらず、驚くべきことに、防腐剤を含有しないヒアルロン酸含有量０．３ｗ／ｖ％のユニットドーズ型点眼剤よりも細胞毒性が低く、安全性が高いものであった。本発明者らは、上記知見に基づき、更に研究を進め、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（５）に関する。
（１）以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とするマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（２）さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有する前記（１）に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（３）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．０１ｗ／ｖ％未満である前記（１）又は（２）に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（４）浸透圧比が、０．８〜１．２である前記（１）〜（３）のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
（５）ｐＨが６〜８である前記（１）〜（４）のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、ヒアルロン酸を０．３ｗ／ｖ％以上含有するマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤において、細胞毒性を低くし、かつ微生物の繁殖を効果的に抑制して保存効力を高くすることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤は、以下の（ａ）ないし（ｃ）を含有するものである。
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
【００１７】
「マルチドーズ型点眼剤」とは、マルチドーズ型点眼容器に収納されている点眼剤を意味する。「マルチドーズ型点眼容器」とは、点眼剤を反復使用する期間、例えば数日〜数ヶ月（好ましくは数日〜１ヶ月程度）にわたり、同一容器からの多数回、反復使用が可能なように、開封後も携帯が可能な程度に密閉状態を復元できる容器を意味する。
【００１８】
本発明におけるヒアルロン酸は、外用水溶液製剤として使用され得るヒアルロン酸であればよい。ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩は、１種又は２種以上を使用することができる。ヒアルロン酸の薬学的に許容される塩としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒアルロン酸カリウム、ヒアルロン酸マグネシウム、ヒアルロン酸カルシウム等が挙げられる。好ましくは、ヒアルロン酸ナトリウムである。
【００１９】
ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩の質量平均分子量は、好ましくは、約３０万〜４００万であり、より好ましくは約５０万〜１２０万である。
本発明の点眼剤において、（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上である。ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して約０．３〜２ｗ／ｖ％であることが好ましい。より好ましくは、約０．３〜１ｗ／ｖ％であり、さらに好ましくは、約０．３ｗ／ｖ％である。前記範囲下限を下回ると、充分な薬効が得られないおそれがあり、また、前記範囲上限を超えると、使用時に霧視が発生するなどの問題が生じるおそれがある。前記配合量は、ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩が配合される場合には、これらの合計量である。
【００２０】
ホウ酸及びホウ砂は、外用水溶液製剤として使用され得るものであればよい。本発明においては、ホウ酸として、テトラホウ酸カリウム、メタホウ酸カリウム、ホウ酸アンモニウム等のホウ酸の塩の１種又は２種以上を使用してもよい。
【００２１】
ホウ酸の配合量は、製剤全体に対して０．０５〜２ｗ／ｖ％であることが好ましく、より好ましくは、０．１〜１ｗ／ｖ％である。ホウ砂の配合量は、製剤全体に対して０．０１〜０．４ｗ／ｖ％であることが好ましく、より好ましくは、０．０２〜０．３ｗ／ｖ％である。本発明においては、ホウ酸及びホウ砂を使用することが好ましい。ホウ酸及びホウ砂を使用する場合には、ホウ酸及びホウ砂それぞれの配合量が、前記範囲内となるようにすることが好ましい。ホウ酸及びホウ砂の配合量が前記範囲であると、より細胞毒性を低減しつつ、充分な保存効力を得ることができる。また、低刺激であるため使用感が良好となる。
【００２２】
クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩、並びにパラオキシ安息香酸エステルは、防腐剤として使用される。クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩は、１種又は２種以上を使用することができる。本発明においては、（ｃ）として（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩を用いることが好ましい。
クロルヘキシジンの薬学的に許容される塩としては、グルコン酸塩、塩酸塩、酢酸塩、等が挙げられる。好ましくは、クロルヘキシジンのグルコン酸塩を使用する。
【００２３】
本発明におけるクロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量は、製剤全体に対して０．０００１〜０．０１ｗ／ｖ％であることが好ましい。また、配合量の上限は、０．０１ｗ／ｖ％未満であることが好ましい。配合量は、より好ましくは、０．０００５ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満である。さらに好ましくは、０．０００５ｗ／ｖ％を超えて０．０１ｗ／ｖ％未満であり、さらにより好ましくは０．００１ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満であり、特に好ましくは、０．００１〜０．００７ｗ／ｖ％である。クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が前記範囲であると、より細胞毒性を低減しつつ、十分な保存効力を得ることができる。
【００２４】
パラオキシ安息香酸エステルとしては、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が使用でき、これらの２種以上を併用しても良い。これらの中でも、特に、パラオキシ安息香酸プロピル及び／又はパラオキシ安息香酸メチルが好ましい。また、パラオキシ安息香酸エステルの配合量は、製剤全体に対して０．００１〜０．１ｗ／ｖ％であることが好ましく、０．０１〜０．０５ｗ／ｖ％であることがより好ましい。前記配合量は、２種以上のパラオキシ安息香酸エステルを使用する場合には、その合計量である。また、例えば、パラオキシ安息香酸プロピル及びパラオキシ安息香酸メチルを用いる場合、その配合比率は、質量比で、パラオキシ安息香酸プロピル１に対してパラオキシ安息香酸メチルを２〜４とすることが好ましい。
【００２５】
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを同時に配合する場合には、上述の好ましい範囲に対し、各々３０％〜９０％の配合量とすることが好ましい。
【００２６】
前記ヒアルロン酸及びその薬学的に許容される塩、ホウ酸及びホウ砂、クロルヘキシジン及びその薬学的に許容される塩、並びにパラオキシ安息香酸エステルは、例えば、市販されており容易に入手できる。
【００２７】
本発明の点眼剤は、さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有することが好ましい。より好ましくは、ナトリウムイオン供与性物質及びカリウムイオン供与性物質を用いる。
ナトリウムイオン供与性物質は、水溶液中で解離してナトリウムイオンを発生する化合物であればよい。カリウムイオン供与性物質は、水溶液中で解離してカリウムイオンを発生する化合物であればよい。
【００２８】
ナトリウムイオン供与性物質として、ナトリウム塩が好適である。ナトリウム塩として、塩化ナトリウム、リン酸一水素二ナトリウム、リン酸二水素一ナトリウム、硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等が挙げられる。好ましくは、塩化ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等であり、より好ましくは、塩化ナトリウムである。カリウムイオン供与性物質として、カリウム塩が好適である。カリウム塩として、塩化カリウム、リン酸一水素二カリウム、リン酸二水素一カリウム、酢酸カリウム等が挙げられる。好ましくは、塩化カリウム、リン酸一水素二カリウム、リン酸二水素一カリウム等であり、より好ましくは、塩化カリウムである。ナトリウムイオン供与性物質及びカリウムイオン供与性物質は、それぞれ１種又は２種以上を用いることができる。
【００２９】
ナトリウムイオン供与性物質の配合量は、通例、製剤全体に対して約０．０１〜３ｗ／ｖ％であり、好ましくは、約０．１〜１ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．３〜０．８ｗ／ｖ％である。カリウムイオン供与性物質の配合量は、通例、製剤全体に対して約０．０１〜３ｗ／ｖ％であり、好ましくは、約０．０５〜０．５ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．１〜０．３ｗ／ｖ％である。
【００３０】
本発明の点眼剤には、上記成分の他に本発明の効果を損なわない範囲で、他の薬物、各種添加剤（安定化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、溶解補助剤、酸化防止剤、溶剤、可溶化剤、懸濁剤、着香剤・香料、清涼化剤、着色剤、塩類等）等を添加することができる。これら任意成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲で通常量配合することができる。
【００３１】
本発明の点眼剤には、本発明の効果を奏することになる限り、（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩、及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル以外の防腐剤が配合されていてもよいが、該（ｃ）を含有することにより、十分高い保存効力を発揮することができるものであることから、該（ｃ）以外の防腐剤を、実質的に防腐効果を奏する量含有しないことが好ましい。より好ましくは、（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩以外の防腐剤を、実質的に防腐効果を奏する量含有しないことが好ましい。また、エデト酸（ＥＤＴＡ）及びその塩は、眼への刺激があることが知られている。本発明の点眼剤は、ＥＤＴＡやその塩を実質的に含有しないことが好ましい。
【００３２】
本発明の点眼剤は、浸透圧比が、０．８〜１．２であることが好ましい。より好ましくは、約０．９〜１．１である。
本発明の点眼剤は、ｐＨが、約６〜８であることが好ましい。より好ましくは、約６．８〜７．８である。浸透圧比やｐＨの調整は、既述のｐＨ調整剤、等張化剤、塩類等を用いて、当該技術分野で既知の方法で行うことができる。
【００３３】
本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤は、通常、前記成分を含有する溶液（角膜上皮障害治療用組成物）が長期間の反復使用に適したマルチドーズ型点眼容器に収納されているものである。マルチドーズ型点眼容器の内容積は、通常５ｍＬ〜２０ｍＬ程度である。マルチドーズ型点眼容器の形状、材質等は特に限定されず、通常点眼剤に使用されるマルチドーズ型容器を使用することができる。容器は、遮光である必要はないが、遮光容器であってもよい。
【００３４】
本発明の点眼剤は、通常、前述した（ａ）〜（ｃ）、並びに必要に応じて配合される（ｄ）やその他の成分を、所定量水に溶解させ、得られた溶液（角膜上皮障害治療用組成物）をマルチドーズ型点眼容器に充填することにより調製される。各成分を水に溶解後に、得られた溶液のｐＨや浸透圧を公知の方法により適宜調整することが好ましい。通常、前述した（ａ）〜（ｃ）並びに必要に応じて配合される（ｄ）やその他の成分を含有する溶液の浸透圧及びｐＨ調整後、無菌環境下、ろ過滅菌処理し、洗浄滅菌済みのマルチドーズ型点眼容器に無菌充填することにより、本発明のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤を製造できる。
【００３５】
本発明の点眼剤の製造に用いる水は、眼科用剤に使用可能な水であれば特に限定されず、例えば、精製水等を用いることができる。各成分の混合順序、混合方法等は特に限定されず、公知の調製法により各成分を水に溶解させればよい。
【００３６】
本発明の点眼剤は、角膜上皮傷害の治療のために好適に使用されるものである。「治療」とは、症状又は疾患及び／又はその付随する症候を緩和し、又は治癒すること、及び緩和することを意味するものとする。
【００３７】
「角膜上皮傷害」は、臨床上、欠損部位や病態所見等により細かく分類されるが、本明細書中では角膜上皮傷害と診断される疾患はもとより、コンタクトレンズの装用、薬剤性、外傷、手術等により一時的に角膜表面に生じた傷、ドライアイ等の眼の乾燥、紫外線やＸ線等の光線の曝露など、様々な外的要因（外因性疾患）により角膜上皮のバリアー機能が損なわれることで生じる眼の不快症状を包含する。またこれに伴って現れる自覚症状としては、眼の不快感、眼の乾き、眼の痒みなどが挙げられる。
【００３８】
本発明の点眼剤の好ましい投与対象は、前記角膜上皮傷害を有する又は発症するおそれのある個体（動物）である。好ましくは、前記角膜上皮傷害を有する個体である。個体としてはヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル等の哺乳類が好ましく、特にヒトが好ましい。
【００３９】
本発明の点眼剤の投与量及び投与回数は、投与対象の症状等に応じて適宜選択することができる。通常、成人に対し１回につき１〜３滴程度を一日あたり１〜６回程度点眼すればよい。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、これらは本発明を何ら限定するものではない。
【００４１】
（製剤の調製方法）
以下の方法により、眼科用剤１〜１４及び参考製剤を調製した。
【００４２】
（製剤例１）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１を得た。
【００４３】
（製剤例２）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤２を得た。
【００４４】
（製剤例３）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤３を得た。
【００４５】
（製剤例４）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０３ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤４を得た。
【００４６】
（製剤例５）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０３５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤５を得た。
【００４７】
（製剤例６）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．０５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤６を得た。
【００４８】
（製剤例７）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンザルコニウム塩化物液（１０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤７を得た。
【００４９】
（製剤例８）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンゼトニウム塩化物０．００２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤８を得た。
【００５０】
（製剤例９）
パラオキシ安息香酸メチル０．０２８ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル０．０１４ｇを温水６０ｇ中に加えて加温溶解させ、冷却後ヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加え溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、ホウ砂０．０２５ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、及び塩化ナトリウム０．６１ｇを加え、溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤９を得た。
【００５１】
（製剤例１０）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて溶解させた後、ホウ酸０．３ｇ、トロメタモール０．０２６ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１０を得た。
【００５２】
（製剤例１１）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、クエン酸水和物０．１１２ｇ、ホウ砂０．３ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１１を得た。
【００５３】
（製剤例１２）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、リン酸二水素ナトリウム２水和物０．１５６ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物０．４５２ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１２を得た。
【００５４】
（製剤例１３）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇを加え、溶解させた後、希塩酸１．０ｇ及び水酸化ナトリウムを適量加え、ｐＨを７．３に合わせた。これにクロルヘキシジングルコン酸塩液（２０％液）０．００５ｇを加えて混合した後、精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１３を得た。
【００５５】
（製剤例１４）
精製水６０ｇにヒアルロン酸ナトリウム０．３ｇを加えて、溶解させた後、リン酸二水素ナトリウム２水和物０．１５６ｇ、リン酸水素二ナトリウム１２水和物０．４５２ｇ、塩化カリウム０．１５ｇ、塩化ナトリウム０．６１ｇ、及びベンザルコニウム塩化物液（１０％液）０．０２５ｇを加えて溶解させた。これに精製水を加えて全量を１００ｍＬとし、眼科用剤１４を得た。
【００５６】
（参考製剤１）
ヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％（参天製薬社製）を、そのまま、参考製剤１として使用した。
【００５７】
（参考製剤２）
ヒアレイン（登録商標）点眼液０．１％（参天製薬社製） １００ｍＬにヒアルロン酸ナトリウム０．２ｇを加えて溶解させ参考製剤２を得た（ヒアルロン酸合計濃度 ０．３％）。
【００５８】
前記で調製した眼科用剤１〜１４の組成を、表１〜２に示す。表１〜２中の数値は、ｗ／ｖ％を意味する。
【００５９】
【表１】
【００６０】
【表２】
【００６１】
前記製剤例で調製した各眼科用剤を試験薬剤として用いて、以下の方法により、細胞毒性試験及び保存効力試験を実施した。
（細胞毒性試験の実施方法）
96 well マイクロプレート に1×10４cells /wellの培養角膜細胞を播種し、５％二酸化炭素雰囲気下、３７℃で２４時間培養し、細胞をプレート底面に接着させた。その後、培地を取り除き、各試験薬剤を作用させ、試験薬剤接触前（０分）と接触後（３０分）にCelltiter-Blue（登録商標） Cell Viability Assay (promega社)を用いて蛍光測定を行い、細胞の生存率を算出した。各群４検体ずつ行った。
【００６２】
（評価基準）
細胞毒性の判定は、細胞の生存率（％）から、以下の判定基準を用いて行った。
【００６３】
【表３】
【００６４】
（保存効力試験の実施方法）
第１５局改正 日本薬局方 参考情報 保存効力試験法に準拠し、真菌（アスペルギルス・ニガー）に対する保存効力を調べた。
【００６５】
保存効力試験の判定は、接種４日後に接種菌の生存率（全細菌数に対する全生細菌数の％）を測定し、該生存率（％）から以下の判定基準により行った。
【００６６】
【表４】
【００６７】
細胞毒性試験及び保存効力試験の結果から、以下の基準で総合評価を行なった。
【００６８】
【表５】
【００６９】
細胞毒性試験及び保存効力試験の結果、並びに総合評価を、表６〜７に示す。表中、−は、未実施を意味する。
【００７０】
【表６】
【００７１】
【表７】
【００７２】
眼科用剤４及び５の保存効力試験は未実施であるが、クロルヘキシジングルコン酸塩濃度のみが異なる処方である、眼科用剤３及び眼科用剤６の保存効力試験結果がいずれも０．１％未満であることから、眼科用剤４及び５の保存効力試験結果は、０．１％未満であると考えられた。
表６〜７より、ヒアルロン酸ナトリウムと共に、（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂、並びに（ｃ）（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩及び／又は（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステルを含有する眼科用剤は、低細胞毒性と高い保存効力とを兼ね備えるものであった。特に、クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が０．００１ｗ／ｖ％以上０．０１ｗ／ｖ％未満である眼科用剤は、総合評価において特に優れるものであった。
【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明は、医療分野等において有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とするマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項２】
さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有する請求項１に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項３】
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．０１ｗ／ｖ％未満である請求項１又は２に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項４】
浸透圧比が、０．８〜１．２である請求項１〜３のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項５】
ｐＨが６〜８である請求項１〜４のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項１】
以下の（ａ）ないし（ｃ）
（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩
（ｂ）ホウ酸及び／又はホウ砂
（ｃ）以下の（ｃ１）及び／又は（ｃ２）
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩
（ｃ２）パラオキシ安息香酸エステル
を含有し、該（ａ）ヒアルロン酸又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．３ｗ／ｖ％以上であることを特徴とするマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項２】
さらに、（ｄ）ナトリウムイオン供与性物質及び／又はカリウムイオン供与性物質を含有する請求項１に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項３】
（ｃ１）クロルヘキシジン又はその薬学的に許容される塩の配合量が、製剤全体に対して０．０１ｗ／ｖ％未満である請求項１又は２に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項４】
浸透圧比が、０．８〜１．２である請求項１〜３のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【請求項５】
ｐＨが６〜８である請求項１〜４のいずれか一項に記載のマルチドーズ型角膜上皮障害治療用点眼剤。
【公開番号】特開２０１２−６２２６９（Ｐ２０１２−６２２６９Ａ）
【公開日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２０７１１０（Ｐ２０１０−２０７１１０）
【出願日】平成２２年９月１５日（２０１０．９．１５）
【出願人】（３９００３１０９３）テイカ製薬株式会社 (38)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年３月２９日（２０１２．３．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年９月１５日（２０１０．９．１５）
【出願人】（３９００３１０９３）テイカ製薬株式会社 (38)
【Ｆターム（参考）】
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