超音波によって活性化可能なエマルション及びその製造方法
本発明は、水溶液中のエマルションにおいて、２０μｍ未満の直径（Ｄ）を有し、第１乳化剤（４）によってカプセル化された、活性剤と、超音波によって活性化可能な液体状態の気体前駆体（３）とを含む、ミクロ粒子（１）を含む、超音波によって活性化可能なエマルションであって、前記ミクロ粒子（１）が、前記気体前駆体（３）中のエマルションにおいて５μｍ未満の直径（ｄ）を有するナノ粒子（５）を包含し、前記ナノ粒子（５）の各々が、前記活性剤を包含し、第２乳化剤（７）によってカプセル化された、内部液体（６）を含み、前記気体前駆体が前記活性剤の拡散に対するバリアを形成している、エマルションに関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、超音波によって活性化可能なエマルション及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
超音波によって活性化可能なエマルションが現在知られている。例えば、これらは局所的活性化の目的で人体のターゲット領域へと薬物を輸送するために使用される。このような周知のエマルションは、例えば、界面活性剤でカプセル化され、かつ輸送されるべき薬物を含有する、懸濁液状態の気体前駆体のミクロ粒子を含有する水溶液の形態であり得る。使用の間、この溶液は患者に注射され、循環系に拡散した後、ターゲット領域に超音波を集束させることによってミクロ粒子がターゲット領域において破裂する。その結果、ミクロ粒子中に含まれた薬剤は、ターゲット領域のみに放出され、ミクロ粒子の残りの部分は患者の代謝によって排せつされる。
【０００３】
この種のエマルションの例は、特許文献１（ＵＳ−Ａ−２００２／１５９９５２（Ｕｎｇｅｒ））に記載されている。
しかし、この種のエマルションの欠点は、ミクロ粒子によって輸送される活性剤がこれらのミクロ粒子の表面に存在するため、輸送される活性剤の量が制限される。
【０００４】
特許文献２（ＷＯ２００７／０１０４４２）には、気体前駆体とは異なる相を形成し、油に溶解された疎水性活性剤と、超音波によって活性化可能な液体の気体前駆体とを含有する、高分子膜によってカプセル化されたミクロ粒子が開示されている。しかし、この種のミクロ粒子は、実際に得ることが非常に困難であるかまたは不可能でさえあり、活性剤の最適な投入量が許容されず、かつ活性剤の不随意な放出のリスクが存在するようである。最後に、この文献では、疎水性活性剤を使用する必要があり、この技術の利用が大幅に制限される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／１５９９５２号明細書
【特許文献２】国際公開第２００７／０１０４４２号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈｏｌｚｅ ｅｔ ａｌ，“Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ｆｏｒ ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ”， Ｌａｂ Ｃｈｉｐ， ２００８， １６３２−１６３９， ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００８
【非特許文献２】Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ，“Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｔｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｐｏｌｙ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ）”， Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌ．７０， Ｎｏ． ２３， Ｄｅｃ １， １９９８， ｐｐ．４９７４−４９８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の特定の目的は、上記の欠点を克服することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的のため、本発明は、水溶液中のエマルションにおいて、２０μｍ未満の直径を有し、第１乳化剤によってカプセル化された、活性剤（マーカーまたは薬物）と、超音波によって活性化可能な液体状態の気体前駆体とを含む、ミクロ粒子を含む、超音波によって活性化可能なエマルションであって、
前記ミクロ粒子が、気体前駆体中のエマルションにおいて、５μｍ未満の直径を有するナノ粒子を包含し、ナノ粒子の各々が、活性剤を包含し、第２乳化剤によってカプセル化された、内部液体を含み、前記気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアを形成している、エマルションを提案する。
【０００９】
従って、活性剤は、もはや単純なエマルションの形態ではなく、二重エマルションの形態で輸送される。
【００１０】
これらの手段によって、活性剤はミクロ粒子の全体（ナノ粒子内部）を通して輸送されるため、輸送される活性剤の量が増加する。
【００１１】
さらに、本発明のエマルションの安定性は特に高く、製造と使用との間の製品の貯蔵寿命が延長される。
【００１２】
また、液体状態にある気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアとして機能するため、超音波で照射されるターゲット領域の外部にある患者の組織内に活性剤が不随意に放出されることが避けられる。
【００１３】
最後に、二重エマルションは、疎水性活性剤と同様に容易に親水性活性剤を運ぶことができるため、本発明の二重エマルションは非常に順応性がある。
【００１４】
本発明のエマルションの多様な実施形態では、以下の１つまたは複数を採用することができる：
−気体前駆体がフッ素化油である；
−気体前駆体がペルフルオロカーボンである；
−気体前駆体がペルフルオロヘキサン及び／またはペルフルオロペンタンである；
−第２乳化剤がフッ素系界面活性剤を含む；
−フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレートを含む；
−フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから得られる；
−活性剤がマーカーと、薬物とからなる群から選択される；
−活性剤が光学色素と、医療画像用の造影剤とからなる群から選択されるマーカーである；
−活性剤がフルオレセインを含む光学色素である；
−活性剤が癌の化学療法薬剤と、メッセンジャーＲＮＡとからなる群から選択される治療薬である；
−内部液体が水性であり、活性剤が親水性である；
−内部液体が油であり、活性剤が疎水性である；
−内部液体が水性であり、活性剤が疎水性であり、内部液体中のエマルションにおいて１μｍより小さな粒子内部に封入されている；
−ミクロ粒子の直径が１０μｍ未満であり、有利には約５マイクロｍであり、ナノ粒子の直径が４μｍ未満であり、有利には約０．３から１μｍである。
【００１５】
本発明の別の目的は、上記で定義した超音波によって活性化可能なエマルションの製造方法であって、
（ａ）一方は活性剤を含む内部液体と、他方は液体形態の気体前駆体及び第２乳化剤との間の一次エマルションを調製して、気体前駆体中のエマルションにおける前記ナノ粒子（５）を得るステップと、
（ｂ）一方は一次エマルションと、他方は水溶液及び第１乳化剤との間の二次エマルションを調製して、水溶液中に前記ミクロ粒子を得るステップと、を含む方法である。
【００１６】
本発明の多様な実施形態では、以下の１つまたは複数を採用することができる：
−二次エマルションを調製するステップを、それぞれ一次エマルションならびに水溶液及び第１乳化剤を供給する少なくとも１つの第１及び第２マイクロ流体供給管の間の合流点で、マイクロ流体素子における流体力学的集中によって実施し、前記供給管が超音波によって活性化可能なエマルションを運び出すマイクロ流体排出管へと通じている；
−第１及び第２供給管、並びに排出管が前記合流点に親水性の内部表面を有する；
−第１供給管及び排出管が、第１及び第２供給管の間の合流点で、２０μｍ未満の幅及び２０μｍ未満の深さを有する；
−第１供給管及び排出管が、第１及び第２供給管の間の合流点で、１０μｍ未満の幅及び１０μｍ未満の深さを有する；
−マイクロ流体素子が、第１供給管に実質的に垂直であり、かつ前記合流点で互いに向かい合う２つの第２供給管を備える。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の１実施形態における、水溶液中のエマルションにおけるミクロ粒子の概略図である。
【図２】図１のようなエマルションにおけるミクロ粒子を得るためのマイクロ流体素子の例の図である。
【図３】患者の体のターゲット領域における図１のようなミクロ粒子を含有するエマルションを局所的に活性化するための超音波装置を示す図である。
【図４】図３の装置のブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明のその他の特徴及び利点は、添付の図面を参照して、非限定的な実施例として提供された実施形態の１つの説明から明らかになるであろう。
別々の図面において、同一の参照符号は同一または類似の要素を示す。
【００１９】
本発明は、二重エマルションを提案する。該二重エマルションは、患者に注射され、患者の体内のターゲット領域において、前記ターゲット領域に集束した超音波でターゲット領域を照射することによって、局所的に活性化され得る。
【００２０】
図１に概略的に示されているように、この二重エマルションは、水溶液２中にミクロ粒子１の二次エマルションを含む。これらのミクロ粒子１は、２０μｍ未満の直径Ｄを有する。簡略化のために、図１にはミクロ粒子１の１つのみが示されている。
【００２１】
直径Ｄは、有利には２０μｍ未満、好ましくは１０μｍ未満、例えば８μｍ未満、特に約５μｍであり、以下で説明されるように、二重エマルションが注射されると、患者の毛細血管中をミクロ粒子が循環することを可能にする。
【００２２】
ミクロ粒子１は外壁４を有し、これは実質的に球形であり、第１乳化剤、特に例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）などの界面活性剤によって形成される。
【００２３】
この外壁４（液体状の泡の壁）は、ナノ粒子５の一次エマルションを含有する、超音波によって気化可能な気体前駆体液体３（またはより一般的に超音波で活性化可能な化合物）を封入する。気体前駆体は、フッ素化油、特に、例えばペルフルオロヘキサンまたはペルフルオロペンタンなどのペルフルオロカーボンとすることができる。
【００２４】
ナノ粒子５は、５μｍ未満、好ましくは０．３から１μｍ、例えば約５００ｎｍの直径を有する。これらのナノ粒子５の各々は、第２乳化剤、例えばポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート（デュポン社からＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）として販売）などのフッ素系界面活性剤によって形成される、実質的に球形の外壁７ （液体状の泡の壁）を有する。より具体的には、フッ素系界面活性剤は、ポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから調製され得る。例として、この界面活性剤は、１０ｍｇのＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）及び１０ｍｌの水酸化アンモニウムを１０ｍｇのペルフルオロヘキサンに加えることによって得ることができる（非特許文献１参照）。
【００２５】
外壁７は、活性剤、特にトレーサーまたは薬物を含む、例えば水またはより一般的に水溶液である内部液体６を封入する。
【００２６】
より具体的には、活性剤は、
−光学色素（例えばフルオレセインフルオレセイン）及び医用画像用の造影剤（特にＭＲＩ、Ｘ線、超音波、またはその他の画像用の造影剤）からなる群から選択されるマーカー、
−治療薬用のターゲットとして作用することを意図されたマーカー、
−癌の化学療法薬剤、血管標的薬剤、毒素、及びメッセンジャーＲＮＡ、ＤＮＡなどからなる群から選択される治療薬、とすることができる。
【００２７】
活性剤は、親水性とすることができる。
活性剤は、疎水性とすることができ、その場合は例えば、
−例えばフッ素化油などの非水性内部液体中の溶液、または、
−水性内部液体中のエマルションであって、内部液体中のエマルションにおける１μｍ未満（例えば０．３から０．４μｍ）の径の粒子内に、活性剤が（例えばフッ素化油で）内部に封入されたエマルション、のいずれか中に存在するものとすることができる。
【００２８】
活性剤がミクロ粒子１の体積全体（ナノ粒子内部）に分散されることを考慮すると、ミクロ粒子で輸送される活性剤の量は、現在使用されている超音波によって活性化可能な単純なエマルションと比較して増加する。
【００２９】
さらに、気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアを形成するため、本発明の二重エマルションの安定性は特に高く、製造と使用との間の製品の貯蔵寿命を延長し、超音波によって照射されるターゲット領域の外部にある患者の組織内に活性剤が不随意に放出されることが避けられる。
【００３０】
前述の二重エマルションは、以下の２つの基本ステップを有する方法によって得ることができる：
（ａ）一方は活性剤を含有する内部液体と、他方は液体状態の気体前駆体及び第２乳化剤との間で一次エマルションを調製し、前記気体前駆体中のエマルションにおけるナノ粒子を得るステップ、及び、
（ｂ）一方は一次エマルションと、他方は水溶液及び第１乳化剤との間で二次エマルションを調製し、水溶液中のミクロ粒子を得るステップ。
【００３１】
［一次エマルションの調製の実施例］
実施例として、特定の初期量のペルフルオロヘキサンまたはフッ素化油形態のその他の気体前駆体、さらに第２乳化剤、特に、１０ｍｇのＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）及び１０ｍｌの水酸化アンモニウムを１０ｍｇのペルフルオロヘキサンに加えることによって得られる前述のようなフッ素系界面活性剤を使用することができる。
【００３２】
例えば活性剤（例えばフルオレセイン）を含有する水溶液である内部液体２０重量％をペルフルオロへキサンに加える。
【００３３】
その後、一次エマルションは、例えば円筒形のクエットセル（Ｃｏｕｅｔｔｅ ｃｅｌｌ）においてせん断加工することによって、例えばＰｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ１００（登録商標）ホモジナイザーを１５，０００ｒｐｍで１５分間使用することによって、得られる。
【００３４】
これにより、約５００ｎｍの直径ｄを有するナノ粒子５のエマルションが得られる。
【００３５】
このエマルションは、次いで、油中水エマルション中のナノ粒子の体積割合が増加するように（例えば最大７０％）遠心分離され得る。
【００３６】
［二次エマルションの調製の実施例］
二次エマルションを調製するステップは、図２に示されるようなマイクロ流体素子１０における、第１のマイクロ流体供給管１１と、例えば第１の供給管１１と一直線上に配置されたマイクロ流体排出管１３へと開放された少なくとも１つの第２の供給管１２（好ましくは互いに向かい合い、第１の供給管１１に垂直な２つの第２の管１２）との間の合流点で、流体力学的集中（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇ）によって実施され得る。
【００３７】
マイクロ流体素子は特に、例えば非特許文献２に記載されたようなポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）を用いたソフトリソグラフィー技術を使用して作製することができる。
【００３８】
管１１−１３は、例えば０．５マイクロメートル超１０μｍ未満、特に１０μｍ未満、さらには３μｍ未満、例えば約２．５μｍの深さの長方形の断面を有する溝の形態とすることができる。管１１−１３の深さは、管１１と管１２との間の合流点に近接しない場合には、より大きい（例えば約３０μｍ）ほうが有利であり得る。
【００３９】
これらの管の幅Ｌは、２０μｍ未満、特に１０μｍ未満、例えば約５から１０μｍとすることができる。この幅Ｌは、実施例に示されているように管１１〜１３の全てにおいて同一とすることができ、または異なるものとすることができる。幅が異なる場合、前述の寸法は、少なくとも管１１、１３に適用される。
【００４０】
管の内壁の表面処理は、直接エマルションの形成を促進するために、好ましくは親水性である。
【００４１】
第１の供給管１１は、例えば約５ｂａｒであり得る圧縮空気からの外部圧力の影響によって、排出管に向かう矢印１１ａの方向に流れる一次エマルション３、５を供給する。
【００４２】
第２の供給管１２は、例えば約２ｂａｒであり得る圧縮空気からの外部圧力の影響によって、水溶液２及び第１乳化剤（例えば蒸留水にＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）などの界面活性剤を特に１重量％であり得る濃度で加えたもの）を、第１の供給管１１との合流点に向かう矢印１２ａの方向に供給する。
【００４３】
流体力学的集中の配置によって、図２に表されるように、外部水相に分散されたミクロ粒子１が形成される。この配置がミクロ粒子１の直径Ｄを決定し、その形成の条件によって形成される粒子１の優れた単分散が保証される。（Ｄ付近での分散は典型的に３％未満）。ここでは、液滴は約５μｍの直径Ｄを有するように形成される。
【００４４】
素子１０におけるミクロ粒子１のための伝送周波数は、典型的に約１０ｋＨｚである。
【００４５】
［適用例］
超音波によって活性化可能なエマルションを使用する場合、ミクロ粒子１が循環系によって患者の体２９の全体または一部に拡散されるように、このエマルションは例えば静脈注射によって患者に注射される。
【００４６】
これらのミクロ粒子いくつかは、図３に見られる超音波装置２１によって放出される集束超音波の影響によって該ミクロ粒子を破裂させることによって、ターゲット領域３０、例えば腫瘍中で活性化される。
【００４７】
超音波装置２１は、
−例えば超音波検査において一般的に使用されるタイプのアレイである、ｎ個の超音波トランスデューサ２２ａ（例えば約２．５ＭＨｚで伝送する例えば約１００から３００のトランスデューサ）を有する超音波トランスデューサのネットワーク２２と、
−伝送の間にトランスデューサのネットワーク２２を制御し、該ネットワークによってキャプチャされた信号を得るコントローラ２３と、
−コントローラ２３を制御するためのマイクロコンピュータ２４であって、該マイクロコンピュータ２４がトランスデューサのネットワーク２２によってキャプチャされた超音波画像をその上で見ることができるスクリーン２５を含むユーザーインターフェースを備え、該ユーザーインターフェースが例えばマウスまたは類似のデバイス（図示せず）と連結されたキーボード２６、及び可能であれば、例えば以下で説明されるように、操作者２８がスクリーン２５上の領域を囲むことを可能にする、ライトペンまたは類似のデバイスなどの指示デバイス２７を含む、マイクロコンピュータ２４と、を備える超音波診断装置である。
【００４８】
以下で説明されるように、トランスデューサのネットワーク２２は、ターゲット媒体中の１つまたは複数の対象領域３０を画定及びマークするために、例えば人間または動物の体の一部などの固体ターゲット媒体２９と接して配置されるように設計されている。対象領域３０は、例えば腫瘍などの病変であり得る。
【００４９】
コントローラ２３及びマイクロコンピュータ２４は共に、トランスデューサのネットワーク２２を制御し、かつ該ネットワークからの信号をキャプチャ及び処理するための制御装置を形成する。コントローラ２３及びマイクロコンピュータ２４の役割を単一の電子機器によって果たすことも可能である。
【００５０】
図４に示されるように、コントローラ２３は例えば、
−トランスデューサのネットワーク２２のうちのｎ個のトランスデューサ（Ｔ１−Ｔｎ）に（例えばケーブルによって）個別に接続されているｎ個のアナログ・デジタル変換器３１（Ａ／Ｄ１−Ａ／Ｄｎ）と、
−アナログ・デジタル変換器３１にそれぞれ接続されたｎ個のバッファ３２（Ｂ１−Ｂｎ）と、
−バッファ３２及びマイクロコンピュータ２４と連結された中央処理ユニット３３（ＣＰＵ）と、
−中央処理ユニット３３に接続された中央メモリ３４（ＭＥＭ）と、
−中央処理ユニット３３に接続されたデジタル信号プロセッサ３５（ＤＳＰ）と、を備え得る。
【００５１】
デバイス２１は、最初は、スクリーン２５上でターゲット３０の画像を見るために、超音波画像診断モードで通常使用され得る。操作者２は、例えば前述のライトペン２７または指示デバイスとして機能する任意のその他のユーザーインターフェースを使用して、例えばスクリーン２５上の画像の縁をトレースすることによってターゲット領域３０を画定することができる。
【００５２】
対象領域３０が操作者によって画定されると、ターゲット領域３０全体が、ミクロ粒子のフッ素化油３を気化させることによってミクロ粒子１を破裂させる超音波を受けるように、前記ターゲット領域３０の異なる点に集束する活性化超音波ビームの連続的放射を引き起こすことによって、エマルション活性化ステップが開始される。ナノ粒子５の封入はもはや気相では有効でないため、ナノ粒子５内に当初含まれていた活性剤が放出される。この放出後、活性剤は、拡散及び対流によって外部媒体中に拡散される。ミクロ粒子１の気化相の拡大及び音場に起因するソノポレーション（ｓｏｎｏｐｏｒａｔｉｏｎ）は、活性剤の組織への効果的な分散に寄与する。活性剤がフルオレセインなどの任意の色素である場合、ターゲット領域３０の組織は、長期的に染色されるため、切除の間に外科医によって容易に見分けられる。
【００５３】
活性化超音波ビームの各々の圧力及び時間は、患者２９の組織を損傷せずにマーカーを活性化させるのに適当なものである。例えば、活性化超音波ビームの各々は、１から１０００μｓ、特に１０から１０００μｓ（マイクロ秒）の時間を有し、該活性化超音波ビームは、８ＭＰａ未満、特に６ＭＰａ（メガパスカル）未満の圧力を組織に加え、該圧力は、従来のイメージング圧力に対応する。
【符号の説明】
【００５４】
１ マイクロ粒子
２ 水溶液
３ 気体前駆体
４ 第１乳化剤
５ ナノ粒子
６ 内部液体
７ 第２乳化剤
１１、１２ 供給管
１３ 排出管
【技術分野】
【０００１】
本発明は、超音波によって活性化可能なエマルション及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
超音波によって活性化可能なエマルションが現在知られている。例えば、これらは局所的活性化の目的で人体のターゲット領域へと薬物を輸送するために使用される。このような周知のエマルションは、例えば、界面活性剤でカプセル化され、かつ輸送されるべき薬物を含有する、懸濁液状態の気体前駆体のミクロ粒子を含有する水溶液の形態であり得る。使用の間、この溶液は患者に注射され、循環系に拡散した後、ターゲット領域に超音波を集束させることによってミクロ粒子がターゲット領域において破裂する。その結果、ミクロ粒子中に含まれた薬剤は、ターゲット領域のみに放出され、ミクロ粒子の残りの部分は患者の代謝によって排せつされる。
【０００３】
この種のエマルションの例は、特許文献１（ＵＳ−Ａ−２００２／１５９９５２（Ｕｎｇｅｒ））に記載されている。
しかし、この種のエマルションの欠点は、ミクロ粒子によって輸送される活性剤がこれらのミクロ粒子の表面に存在するため、輸送される活性剤の量が制限される。
【０００４】
特許文献２（ＷＯ２００７／０１０４４２）には、気体前駆体とは異なる相を形成し、油に溶解された疎水性活性剤と、超音波によって活性化可能な液体の気体前駆体とを含有する、高分子膜によってカプセル化されたミクロ粒子が開示されている。しかし、この種のミクロ粒子は、実際に得ることが非常に困難であるかまたは不可能でさえあり、活性剤の最適な投入量が許容されず、かつ活性剤の不随意な放出のリスクが存在するようである。最後に、この文献では、疎水性活性剤を使用する必要があり、この技術の利用が大幅に制限される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００２／１５９９５２号明細書
【特許文献２】国際公開第２００７／０１０４４２号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈｏｌｚｅ ｅｔ ａｌ，“Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ｆｏｒ ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｆｌｕｏｒｏｃａｒｂｏｎ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ”， Ｌａｂ Ｃｈｉｐ， ２００８， １６３２−１６３９， ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００８
【非特許文献２】Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ，“Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｔｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃ ｓｙｓｔｅｍｓ ｉｎ Ｐｏｌｙ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｉｌｏｘａｎｅ）”， Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌ．７０， Ｎｏ． ２３， Ｄｅｃ １， １９９８， ｐｐ．４９７４−４９８４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の特定の目的は、上記の欠点を克服することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的のため、本発明は、水溶液中のエマルションにおいて、２０μｍ未満の直径を有し、第１乳化剤によってカプセル化された、活性剤（マーカーまたは薬物）と、超音波によって活性化可能な液体状態の気体前駆体とを含む、ミクロ粒子を含む、超音波によって活性化可能なエマルションであって、
前記ミクロ粒子が、気体前駆体中のエマルションにおいて、５μｍ未満の直径を有するナノ粒子を包含し、ナノ粒子の各々が、活性剤を包含し、第２乳化剤によってカプセル化された、内部液体を含み、前記気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアを形成している、エマルションを提案する。
【０００９】
従って、活性剤は、もはや単純なエマルションの形態ではなく、二重エマルションの形態で輸送される。
【００１０】
これらの手段によって、活性剤はミクロ粒子の全体（ナノ粒子内部）を通して輸送されるため、輸送される活性剤の量が増加する。
【００１１】
さらに、本発明のエマルションの安定性は特に高く、製造と使用との間の製品の貯蔵寿命が延長される。
【００１２】
また、液体状態にある気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアとして機能するため、超音波で照射されるターゲット領域の外部にある患者の組織内に活性剤が不随意に放出されることが避けられる。
【００１３】
最後に、二重エマルションは、疎水性活性剤と同様に容易に親水性活性剤を運ぶことができるため、本発明の二重エマルションは非常に順応性がある。
【００１４】
本発明のエマルションの多様な実施形態では、以下の１つまたは複数を採用することができる：
−気体前駆体がフッ素化油である；
−気体前駆体がペルフルオロカーボンである；
−気体前駆体がペルフルオロヘキサン及び／またはペルフルオロペンタンである；
−第２乳化剤がフッ素系界面活性剤を含む；
−フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレートを含む；
−フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから得られる；
−活性剤がマーカーと、薬物とからなる群から選択される；
−活性剤が光学色素と、医療画像用の造影剤とからなる群から選択されるマーカーである；
−活性剤がフルオレセインを含む光学色素である；
−活性剤が癌の化学療法薬剤と、メッセンジャーＲＮＡとからなる群から選択される治療薬である；
−内部液体が水性であり、活性剤が親水性である；
−内部液体が油であり、活性剤が疎水性である；
−内部液体が水性であり、活性剤が疎水性であり、内部液体中のエマルションにおいて１μｍより小さな粒子内部に封入されている；
−ミクロ粒子の直径が１０μｍ未満であり、有利には約５マイクロｍであり、ナノ粒子の直径が４μｍ未満であり、有利には約０．３から１μｍである。
【００１５】
本発明の別の目的は、上記で定義した超音波によって活性化可能なエマルションの製造方法であって、
（ａ）一方は活性剤を含む内部液体と、他方は液体形態の気体前駆体及び第２乳化剤との間の一次エマルションを調製して、気体前駆体中のエマルションにおける前記ナノ粒子（５）を得るステップと、
（ｂ）一方は一次エマルションと、他方は水溶液及び第１乳化剤との間の二次エマルションを調製して、水溶液中に前記ミクロ粒子を得るステップと、を含む方法である。
【００１６】
本発明の多様な実施形態では、以下の１つまたは複数を採用することができる：
−二次エマルションを調製するステップを、それぞれ一次エマルションならびに水溶液及び第１乳化剤を供給する少なくとも１つの第１及び第２マイクロ流体供給管の間の合流点で、マイクロ流体素子における流体力学的集中によって実施し、前記供給管が超音波によって活性化可能なエマルションを運び出すマイクロ流体排出管へと通じている；
−第１及び第２供給管、並びに排出管が前記合流点に親水性の内部表面を有する；
−第１供給管及び排出管が、第１及び第２供給管の間の合流点で、２０μｍ未満の幅及び２０μｍ未満の深さを有する；
−第１供給管及び排出管が、第１及び第２供給管の間の合流点で、１０μｍ未満の幅及び１０μｍ未満の深さを有する；
−マイクロ流体素子が、第１供給管に実質的に垂直であり、かつ前記合流点で互いに向かい合う２つの第２供給管を備える。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の１実施形態における、水溶液中のエマルションにおけるミクロ粒子の概略図である。
【図２】図１のようなエマルションにおけるミクロ粒子を得るためのマイクロ流体素子の例の図である。
【図３】患者の体のターゲット領域における図１のようなミクロ粒子を含有するエマルションを局所的に活性化するための超音波装置を示す図である。
【図４】図３の装置のブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明のその他の特徴及び利点は、添付の図面を参照して、非限定的な実施例として提供された実施形態の１つの説明から明らかになるであろう。
別々の図面において、同一の参照符号は同一または類似の要素を示す。
【００１９】
本発明は、二重エマルションを提案する。該二重エマルションは、患者に注射され、患者の体内のターゲット領域において、前記ターゲット領域に集束した超音波でターゲット領域を照射することによって、局所的に活性化され得る。
【００２０】
図１に概略的に示されているように、この二重エマルションは、水溶液２中にミクロ粒子１の二次エマルションを含む。これらのミクロ粒子１は、２０μｍ未満の直径Ｄを有する。簡略化のために、図１にはミクロ粒子１の１つのみが示されている。
【００２１】
直径Ｄは、有利には２０μｍ未満、好ましくは１０μｍ未満、例えば８μｍ未満、特に約５μｍであり、以下で説明されるように、二重エマルションが注射されると、患者の毛細血管中をミクロ粒子が循環することを可能にする。
【００２２】
ミクロ粒子１は外壁４を有し、これは実質的に球形であり、第１乳化剤、特に例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）などの界面活性剤によって形成される。
【００２３】
この外壁４（液体状の泡の壁）は、ナノ粒子５の一次エマルションを含有する、超音波によって気化可能な気体前駆体液体３（またはより一般的に超音波で活性化可能な化合物）を封入する。気体前駆体は、フッ素化油、特に、例えばペルフルオロヘキサンまたはペルフルオロペンタンなどのペルフルオロカーボンとすることができる。
【００２４】
ナノ粒子５は、５μｍ未満、好ましくは０．３から１μｍ、例えば約５００ｎｍの直径を有する。これらのナノ粒子５の各々は、第２乳化剤、例えばポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート（デュポン社からＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）として販売）などのフッ素系界面活性剤によって形成される、実質的に球形の外壁７ （液体状の泡の壁）を有する。より具体的には、フッ素系界面活性剤は、ポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから調製され得る。例として、この界面活性剤は、１０ｍｇのＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）及び１０ｍｌの水酸化アンモニウムを１０ｍｇのペルフルオロヘキサンに加えることによって得ることができる（非特許文献１参照）。
【００２５】
外壁７は、活性剤、特にトレーサーまたは薬物を含む、例えば水またはより一般的に水溶液である内部液体６を封入する。
【００２６】
より具体的には、活性剤は、
−光学色素（例えばフルオレセインフルオレセイン）及び医用画像用の造影剤（特にＭＲＩ、Ｘ線、超音波、またはその他の画像用の造影剤）からなる群から選択されるマーカー、
−治療薬用のターゲットとして作用することを意図されたマーカー、
−癌の化学療法薬剤、血管標的薬剤、毒素、及びメッセンジャーＲＮＡ、ＤＮＡなどからなる群から選択される治療薬、とすることができる。
【００２７】
活性剤は、親水性とすることができる。
活性剤は、疎水性とすることができ、その場合は例えば、
−例えばフッ素化油などの非水性内部液体中の溶液、または、
−水性内部液体中のエマルションであって、内部液体中のエマルションにおける１μｍ未満（例えば０．３から０．４μｍ）の径の粒子内に、活性剤が（例えばフッ素化油で）内部に封入されたエマルション、のいずれか中に存在するものとすることができる。
【００２８】
活性剤がミクロ粒子１の体積全体（ナノ粒子内部）に分散されることを考慮すると、ミクロ粒子で輸送される活性剤の量は、現在使用されている超音波によって活性化可能な単純なエマルションと比較して増加する。
【００２９】
さらに、気体前駆体が活性剤の拡散に対するバリアを形成するため、本発明の二重エマルションの安定性は特に高く、製造と使用との間の製品の貯蔵寿命を延長し、超音波によって照射されるターゲット領域の外部にある患者の組織内に活性剤が不随意に放出されることが避けられる。
【００３０】
前述の二重エマルションは、以下の２つの基本ステップを有する方法によって得ることができる：
（ａ）一方は活性剤を含有する内部液体と、他方は液体状態の気体前駆体及び第２乳化剤との間で一次エマルションを調製し、前記気体前駆体中のエマルションにおけるナノ粒子を得るステップ、及び、
（ｂ）一方は一次エマルションと、他方は水溶液及び第１乳化剤との間で二次エマルションを調製し、水溶液中のミクロ粒子を得るステップ。
【００３１】
［一次エマルションの調製の実施例］
実施例として、特定の初期量のペルフルオロヘキサンまたはフッ素化油形態のその他の気体前駆体、さらに第２乳化剤、特に、１０ｍｇのＫｒｙｔｏｘ１５７ＦＳＨ（登録商標）及び１０ｍｌの水酸化アンモニウムを１０ｍｇのペルフルオロヘキサンに加えることによって得られる前述のようなフッ素系界面活性剤を使用することができる。
【００３２】
例えば活性剤（例えばフルオレセイン）を含有する水溶液である内部液体２０重量％をペルフルオロへキサンに加える。
【００３３】
その後、一次エマルションは、例えば円筒形のクエットセル（Ｃｏｕｅｔｔｅ ｃｅｌｌ）においてせん断加工することによって、例えばＰｏｌｙｔｒｏｎ ＰＴ１００（登録商標）ホモジナイザーを１５，０００ｒｐｍで１５分間使用することによって、得られる。
【００３４】
これにより、約５００ｎｍの直径ｄを有するナノ粒子５のエマルションが得られる。
【００３５】
このエマルションは、次いで、油中水エマルション中のナノ粒子の体積割合が増加するように（例えば最大７０％）遠心分離され得る。
【００３６】
［二次エマルションの調製の実施例］
二次エマルションを調製するステップは、図２に示されるようなマイクロ流体素子１０における、第１のマイクロ流体供給管１１と、例えば第１の供給管１１と一直線上に配置されたマイクロ流体排出管１３へと開放された少なくとも１つの第２の供給管１２（好ましくは互いに向かい合い、第１の供給管１１に垂直な２つの第２の管１２）との間の合流点で、流体力学的集中（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ ｆｏｃｕｓｉｎｇ）によって実施され得る。
【００３７】
マイクロ流体素子は特に、例えば非特許文献２に記載されたようなポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）を用いたソフトリソグラフィー技術を使用して作製することができる。
【００３８】
管１１−１３は、例えば０．５マイクロメートル超１０μｍ未満、特に１０μｍ未満、さらには３μｍ未満、例えば約２．５μｍの深さの長方形の断面を有する溝の形態とすることができる。管１１−１３の深さは、管１１と管１２との間の合流点に近接しない場合には、より大きい（例えば約３０μｍ）ほうが有利であり得る。
【００３９】
これらの管の幅Ｌは、２０μｍ未満、特に１０μｍ未満、例えば約５から１０μｍとすることができる。この幅Ｌは、実施例に示されているように管１１〜１３の全てにおいて同一とすることができ、または異なるものとすることができる。幅が異なる場合、前述の寸法は、少なくとも管１１、１３に適用される。
【００４０】
管の内壁の表面処理は、直接エマルションの形成を促進するために、好ましくは親水性である。
【００４１】
第１の供給管１１は、例えば約５ｂａｒであり得る圧縮空気からの外部圧力の影響によって、排出管に向かう矢印１１ａの方向に流れる一次エマルション３、５を供給する。
【００４２】
第２の供給管１２は、例えば約２ｂａｒであり得る圧縮空気からの外部圧力の影響によって、水溶液２及び第１乳化剤（例えば蒸留水にＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８（登録商標）などの界面活性剤を特に１重量％であり得る濃度で加えたもの）を、第１の供給管１１との合流点に向かう矢印１２ａの方向に供給する。
【００４３】
流体力学的集中の配置によって、図２に表されるように、外部水相に分散されたミクロ粒子１が形成される。この配置がミクロ粒子１の直径Ｄを決定し、その形成の条件によって形成される粒子１の優れた単分散が保証される。（Ｄ付近での分散は典型的に３％未満）。ここでは、液滴は約５μｍの直径Ｄを有するように形成される。
【００４４】
素子１０におけるミクロ粒子１のための伝送周波数は、典型的に約１０ｋＨｚである。
【００４５】
［適用例］
超音波によって活性化可能なエマルションを使用する場合、ミクロ粒子１が循環系によって患者の体２９の全体または一部に拡散されるように、このエマルションは例えば静脈注射によって患者に注射される。
【００４６】
これらのミクロ粒子いくつかは、図３に見られる超音波装置２１によって放出される集束超音波の影響によって該ミクロ粒子を破裂させることによって、ターゲット領域３０、例えば腫瘍中で活性化される。
【００４７】
超音波装置２１は、
−例えば超音波検査において一般的に使用されるタイプのアレイである、ｎ個の超音波トランスデューサ２２ａ（例えば約２．５ＭＨｚで伝送する例えば約１００から３００のトランスデューサ）を有する超音波トランスデューサのネットワーク２２と、
−伝送の間にトランスデューサのネットワーク２２を制御し、該ネットワークによってキャプチャされた信号を得るコントローラ２３と、
−コントローラ２３を制御するためのマイクロコンピュータ２４であって、該マイクロコンピュータ２４がトランスデューサのネットワーク２２によってキャプチャされた超音波画像をその上で見ることができるスクリーン２５を含むユーザーインターフェースを備え、該ユーザーインターフェースが例えばマウスまたは類似のデバイス（図示せず）と連結されたキーボード２６、及び可能であれば、例えば以下で説明されるように、操作者２８がスクリーン２５上の領域を囲むことを可能にする、ライトペンまたは類似のデバイスなどの指示デバイス２７を含む、マイクロコンピュータ２４と、を備える超音波診断装置である。
【００４８】
以下で説明されるように、トランスデューサのネットワーク２２は、ターゲット媒体中の１つまたは複数の対象領域３０を画定及びマークするために、例えば人間または動物の体の一部などの固体ターゲット媒体２９と接して配置されるように設計されている。対象領域３０は、例えば腫瘍などの病変であり得る。
【００４９】
コントローラ２３及びマイクロコンピュータ２４は共に、トランスデューサのネットワーク２２を制御し、かつ該ネットワークからの信号をキャプチャ及び処理するための制御装置を形成する。コントローラ２３及びマイクロコンピュータ２４の役割を単一の電子機器によって果たすことも可能である。
【００５０】
図４に示されるように、コントローラ２３は例えば、
−トランスデューサのネットワーク２２のうちのｎ個のトランスデューサ（Ｔ１−Ｔｎ）に（例えばケーブルによって）個別に接続されているｎ個のアナログ・デジタル変換器３１（Ａ／Ｄ１−Ａ／Ｄｎ）と、
−アナログ・デジタル変換器３１にそれぞれ接続されたｎ個のバッファ３２（Ｂ１−Ｂｎ）と、
−バッファ３２及びマイクロコンピュータ２４と連結された中央処理ユニット３３（ＣＰＵ）と、
−中央処理ユニット３３に接続された中央メモリ３４（ＭＥＭ）と、
−中央処理ユニット３３に接続されたデジタル信号プロセッサ３５（ＤＳＰ）と、を備え得る。
【００５１】
デバイス２１は、最初は、スクリーン２５上でターゲット３０の画像を見るために、超音波画像診断モードで通常使用され得る。操作者２は、例えば前述のライトペン２７または指示デバイスとして機能する任意のその他のユーザーインターフェースを使用して、例えばスクリーン２５上の画像の縁をトレースすることによってターゲット領域３０を画定することができる。
【００５２】
対象領域３０が操作者によって画定されると、ターゲット領域３０全体が、ミクロ粒子のフッ素化油３を気化させることによってミクロ粒子１を破裂させる超音波を受けるように、前記ターゲット領域３０の異なる点に集束する活性化超音波ビームの連続的放射を引き起こすことによって、エマルション活性化ステップが開始される。ナノ粒子５の封入はもはや気相では有効でないため、ナノ粒子５内に当初含まれていた活性剤が放出される。この放出後、活性剤は、拡散及び対流によって外部媒体中に拡散される。ミクロ粒子１の気化相の拡大及び音場に起因するソノポレーション（ｓｏｎｏｐｏｒａｔｉｏｎ）は、活性剤の組織への効果的な分散に寄与する。活性剤がフルオレセインなどの任意の色素である場合、ターゲット領域３０の組織は、長期的に染色されるため、切除の間に外科医によって容易に見分けられる。
【００５３】
活性化超音波ビームの各々の圧力及び時間は、患者２９の組織を損傷せずにマーカーを活性化させるのに適当なものである。例えば、活性化超音波ビームの各々は、１から１０００μｓ、特に１０から１０００μｓ（マイクロ秒）の時間を有し、該活性化超音波ビームは、８ＭＰａ未満、特に６ＭＰａ（メガパスカル）未満の圧力を組織に加え、該圧力は、従来のイメージング圧力に対応する。
【符号の説明】
【００５４】
１ マイクロ粒子
２ 水溶液
３ 気体前駆体
４ 第１乳化剤
５ ナノ粒子
６ 内部液体
７ 第２乳化剤
１１、１２ 供給管
１３ 排出管
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶液中のエマルションにおいて、２０μｍ未満の直径（Ｄ）を有し、第１乳化剤（４）によってカプセル化された、活性剤と、超音波によって活性化可能な液体状態の気体前駆体（３）とを含む、ミクロ粒子（１）を含む、超音波によって活性化可能なエマルションであって、
前記ミクロ粒子（１）が、前記気体前駆体（３）中のエマルションにおいて５μｍ未満の直径（ｄ）を有するナノ粒子（５）を包含し、前記ナノ粒子（５）の各々が、前記活性剤を包含し、第２乳化剤（７）によってカプセル化された、内部液体（６）を含み、前記気体前駆体が前記活性剤の拡散に対するバリアを形成している、エマルション。
【請求項２】
前記気体前駆体がフッ素化油である、請求項１に記載のエマルション。
【請求項３】
前記気体前駆体がペルフルオロカーボンである、請求項２に記載のエマルション。
【請求項４】
前記気体前駆体がペルフルオロヘキサン及び／またはペルフルオロペンタンである、請求項３に記載のエマルション。
【請求項５】
前記第２乳化剤がフッ素系界面活性剤を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項６】
前記フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレートを含む、請求項５に記載のエマルション。
【請求項７】
前記フッ素系界面活性剤が、ポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから得られる、請求項６に記載のエマルション。
【請求項８】
前記活性剤が、マーカーと、薬物とからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項９】
前記活性剤が、光学色素と、医用画像用の造影剤とからなる群から選択されるマーカーである、請求項８に記載のエマルション。
【請求項１０】
前記活性剤が、フルオレセインを含む光学色素である、請求項９に記載のエマルション。
【請求項１１】
前記活性剤が、癌の化学療法薬剤と、メッセンジャーＲＮＡとからなる群から選択される治療薬である、請求項８に記載のエマルション。
【請求項１２】
前記内部液体（６）が水性であり、前記活性剤が親水性である、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１３】
前記内部液体が油であり、前記活性剤が疎水性である、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１４】
前記内部液体が水性であり、前記活性剤が疎水性であり、かつ前記内部液体中のエマルションにおいて１μｍより小さな粒子内に封入されている、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１５】
前記ミクロ粒子（１）の直径（Ｄ）が１０μｍ未満であり、有利には約５μｍであり、前記ナノ粒子（５）の直径（ｄ）が４μｍ未満であり、有利には約０．３から１μｍである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の超音波によって活性化可能なエマルションの製造方法であって、
（ａ）一方は前記活性剤を含む前記内部液体と、他方は液体形態の前記気体前駆体及び前記第２乳化剤との間の一次エマルションを調製して、前記気体前駆体（３）中のエマルションにおける前記ナノ粒子（５）を得るステップと、
（ｂ）一方は前記一次エマルションと、他方は前記水溶液及び前記第１乳化剤との間の二次エマルションを調製して、前記水溶液（２）中に前記ミクロ粒子（１）を得るステップと、を含む方法。
【請求項１７】
前記二次エマルションを調製するステップを、それぞれ前記一次エマルションならびに前記水溶液及び前記第１乳化剤を供給する少なくとも１つの第１及び第２マイクロ流体供給管（１１，１２）の間の合流点で、マイクロ流体素子（１０）における流体力学的集中によって実施し、前記供給管（１１，１２）が前記超音波によって活性化可能なエマルションを運び出すマイクロ流体排出管（１３）へと通じている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１及び第２供給管（１１，１２）、ならびに前記排出管（１３）が前記合流点に親水性の内部表面を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１供給管（１１）及び前記排出管（１３）の各々が、前記第１及び第２供給管（１１，１２）の間の合流点で、２０μｍ未満の幅（Ｌ）及び２０μｍ未満の深さを有する、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１供給管（１１）及び前記排出管（１３）の各々が、前記第１及び第２供給管（１１，１２）の間の合流点で、１０μｍ未満の幅（Ｌ）及び１０μｍ未満の深さを有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記マイクロ流体素子が、前記第１供給管（１１）に実質的に垂直でありかつ前記合流点で互いに向かい合う２つの第２供給管（１２）を備える、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１】
水溶液中のエマルションにおいて、２０μｍ未満の直径（Ｄ）を有し、第１乳化剤（４）によってカプセル化された、活性剤と、超音波によって活性化可能な液体状態の気体前駆体（３）とを含む、ミクロ粒子（１）を含む、超音波によって活性化可能なエマルションであって、
前記ミクロ粒子（１）が、前記気体前駆体（３）中のエマルションにおいて５μｍ未満の直径（ｄ）を有するナノ粒子（５）を包含し、前記ナノ粒子（５）の各々が、前記活性剤を包含し、第２乳化剤（７）によってカプセル化された、内部液体（６）を含み、前記気体前駆体が前記活性剤の拡散に対するバリアを形成している、エマルション。
【請求項２】
前記気体前駆体がフッ素化油である、請求項１に記載のエマルション。
【請求項３】
前記気体前駆体がペルフルオロカーボンである、請求項２に記載のエマルション。
【請求項４】
前記気体前駆体がペルフルオロヘキサン及び／またはペルフルオロペンタンである、請求項３に記載のエマルション。
【請求項５】
前記第２乳化剤がフッ素系界面活性剤を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項６】
前記フッ素系界面活性剤がポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレートを含む、請求項５に記載のエマルション。
【請求項７】
前記フッ素系界面活性剤が、ポリ（ペルフルオロプロピレングリコール）カルボキシレート、ペルフルオロカーボン、及び水酸化アンモニウムから得られる、請求項６に記載のエマルション。
【請求項８】
前記活性剤が、マーカーと、薬物とからなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項９】
前記活性剤が、光学色素と、医用画像用の造影剤とからなる群から選択されるマーカーである、請求項８に記載のエマルション。
【請求項１０】
前記活性剤が、フルオレセインを含む光学色素である、請求項９に記載のエマルション。
【請求項１１】
前記活性剤が、癌の化学療法薬剤と、メッセンジャーＲＮＡとからなる群から選択される治療薬である、請求項８に記載のエマルション。
【請求項１２】
前記内部液体（６）が水性であり、前記活性剤が親水性である、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１３】
前記内部液体が油であり、前記活性剤が疎水性である、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１４】
前記内部液体が水性であり、前記活性剤が疎水性であり、かつ前記内部液体中のエマルションにおいて１μｍより小さな粒子内に封入されている、請求項１から１１のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１５】
前記ミクロ粒子（１）の直径（Ｄ）が１０μｍ未満であり、有利には約５μｍであり、前記ナノ粒子（５）の直径（ｄ）が４μｍ未満であり、有利には約０．３から１μｍである、請求項１から１４のいずれか一項に記載のエマルション。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載の超音波によって活性化可能なエマルションの製造方法であって、
（ａ）一方は前記活性剤を含む前記内部液体と、他方は液体形態の前記気体前駆体及び前記第２乳化剤との間の一次エマルションを調製して、前記気体前駆体（３）中のエマルションにおける前記ナノ粒子（５）を得るステップと、
（ｂ）一方は前記一次エマルションと、他方は前記水溶液及び前記第１乳化剤との間の二次エマルションを調製して、前記水溶液（２）中に前記ミクロ粒子（１）を得るステップと、を含む方法。
【請求項１７】
前記二次エマルションを調製するステップを、それぞれ前記一次エマルションならびに前記水溶液及び前記第１乳化剤を供給する少なくとも１つの第１及び第２マイクロ流体供給管（１１，１２）の間の合流点で、マイクロ流体素子（１０）における流体力学的集中によって実施し、前記供給管（１１，１２）が前記超音波によって活性化可能なエマルションを運び出すマイクロ流体排出管（１３）へと通じている、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１及び第２供給管（１１，１２）、ならびに前記排出管（１３）が前記合流点に親水性の内部表面を有する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１供給管（１１）及び前記排出管（１３）の各々が、前記第１及び第２供給管（１１，１２）の間の合流点で、２０μｍ未満の幅（Ｌ）及び２０μｍ未満の深さを有する、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１供給管（１１）及び前記排出管（１３）の各々が、前記第１及び第２供給管（１１，１２）の間の合流点で、１０μｍ未満の幅（Ｌ）及び１０μｍ未満の深さを有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記マイクロ流体素子が、前記第１供給管（１１）に実質的に垂直でありかつ前記合流点で互いに向かい合う２つの第２供給管（１２）を備える、請求項１７から２０のいずれか一項に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１２−５３３５３１（Ｐ２０１２−５３３５３１Ａ）
【公表日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５２００６８（Ｐ２０１２−５２００６８）
【出願日】平成２２年７月７日（２０１０．７．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２０１０／０５１４３９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００７０８２
【国際公開日】平成２３年１月２０日（２０１１．１．２０）
【出願人】（５０７０３３０５９）サントル・ナショナル・ドゥ・ラ・レシェルシュ・サイエンティフィーク・（セ・エン・エール・エス） (17)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月２７日（２０１２．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年７月７日（２０１０．７．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２０１０／０５１４３９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００７０８２
【国際公開日】平成２３年１月２０日（２０１１．１．２０）
【出願人】（５０７０３３０５９）サントル・ナショナル・ドゥ・ラ・レシェルシュ・サイエンティフィーク・（セ・エン・エール・エス） (17)
【Ｆターム（参考）】
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