本発明は、治療学の分野を提供する。最も具体的には、本発明は、活性化リガンド存在下で遺伝子発現を調節するシステムの制御下でインターロイキン-12（IL-12）を条件的に発現する、インビトロで遺伝子操作した樹状細胞を生成する方法、およびヒトを含む動物における治療目的のための使用を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドを含む、インターロイキン-12（IL-12）の機能を有するタンパク質を条件的に発現するためのベクターであって、該遺伝子スイッチが、（1）プロモーターに機能的に連結された、リガンド依存的転写因子をコードする少なくとも1つの転写因子配列、および（2）該リガンド依存的転写因子によって活性化するプロモーターに連結された、IL-12の機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２】
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドが、（1）プロモーターに機能的に連結された、リガンド依存的転写因子をコードする少なくとも1つの転写因子配列、および（2）該リガンド依存的転写因子によって活性化するプロモーターに連結された、IL-12の機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項1記載のベクター。
【請求項３】
アデノウイルスベクターである、請求項1または2記載のベクター。
【請求項４】
rAD.RheoIL12である、請求項3記載のベクター。
【請求項５】
遺伝子スイッチがエクジソン受容体（EcR）に基づく遺伝子スイッチである、請求項1〜4のいずれか一項記載のベクター。
【請求項６】
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドがプロモーター制御下にある第一の転写因子配列および第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によってコードされるタンパク質が相互作用してリガンド依存的転写因子として機能するタンパク質複合体を形成する、請求項1〜5のいずれか一項記載のベクター。
【請求項７】
第一の転写因子および第二の転写因子が内部リボソーム侵入部位によって連結されている、請求項6記載のベクター。
【請求項８】
内部リボソーム侵入部位がEMCV IRESである、請求項7記載のベクター。
【請求項９】
遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドが第一のプロモーター制御下にある第一の転写因子配列および第二のプロモーター制御下にある第二の転写因子配列を含み、該第一の転写因子配列および該第二の転写因子配列によってコードされるタンパク質が相互作用してリガンド依存的転写因子として機能するタンパク質複合体を形成する、請求項1または2記載のベクター。
【請求項１０】
第一の転写因子配列がVP-16トランス活性化ドメインおよびレチノイン酸X受容体（RXR）タンパク質をコードする核酸を含む、請求項5〜9のいずれか一項記載のベクター。
【請求項１１】
第二の転写因子配列がGAL-4 DNA結合ドメインおよびエクジソン受容体（EcR）タンパク質をコードする核酸を含む、請求項5〜10のいずれか一項記載のベクター。
【請求項１２】
リガンド依存的転写因子によって活性化するプロモーターに連結された、IFN-アルファの機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項1〜11のいずれか一項記載のベクター。
【請求項１３】
IL-12の機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドがヒトIL-12をコードする、請求項1〜12のいずれか一項記載のベクター。
【請求項１４】
IL-12の機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドが、野生型ヒトIL-12と少なくとも85％同一のポリペプチドをコードする、請求項13記載のベクター。
【請求項１５】
IL-12の機能を有するタンパク質を条件的に発現する樹状細胞の集団を生成する方法であって、請求項1〜14のいずれか一項記載のベクターを樹状細胞に導入することにより、該樹状細胞の少なくとも一部を改変する段階を含む、方法。
【請求項１６】
樹状細胞がヒト樹状細胞である、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
樹状細胞が骨髄樹状細胞である、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
請求項1〜14のいずれか一項記載のベクターを含む、インビトロで遺伝子操作した樹状細胞。
【請求項１９】
IFN-アルファの機能を有するタンパク質を条件的に発現するベクターをさらに含むインビトロで遺伝子操作した樹状細胞であって、該ベクターが遺伝子スイッチをコードするポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドが、（1）プロモーターに機能的に連結された、リガンド依存的転写因子をコードする少なくとも1つの転写因子配列、および（2）該リガンド依存的転写因子によって活性化するプロモーターに連結された、IFN-アルファの機能を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項18記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞。
【請求項２０】
請求項18記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団を含む、薬学的組成物。
【請求項２１】
腫瘍内、腹腔内または皮下投与に適した、請求項20記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団が少なくとも10⁴個の細胞を含む、請求項20または21記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団が少なくとも10⁷個の細胞を含む、請求項20または21記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
哺乳動物の腫瘍治療用の医薬の製造における、請求項18または19記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団の使用。
【請求項２５】
腫瘍が良性腫瘍である、請求項24記載の使用。
【請求項２６】
腫瘍が悪性腫瘍である、請求項24記載の使用。
【請求項２７】
腫瘍が黒色腫である、請求項24記載の使用。
【請求項２８】
腫瘍が悪性黒色腫皮膚癌である、請求項27記載の使用。
【請求項２９】
前記細胞をそれを必要としている哺乳動物に投与する、請求項24〜28のいずれか一項記載の使用。
【請求項３０】
リガンド依存的転写因子を活性化するリガンドの有効量を前記哺乳動物にさらに投与する、請求項29記載の使用。
【請求項３１】
リガンドがRG-115819、RG-115932、およびRG-115830からなる群より選択される、請求項30記載の使用。
【請求項３２】
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項30または31記載の使用。
【請求項３３】
リガンドを腫瘍内、経口、腹腔内、または皮下に投与する、請求項30〜32のいずれか一項記載の使用。
【請求項３４】
リガンドを、インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の前または後1時間未満で投与する、請求項30〜33のいずれか一項記載の使用。
【請求項３５】
リガンドを、インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後24時間未満で投与する、請求項30〜33のいずれか一項記載の使用。
【請求項３６】
リガンドを、インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後48時間未満で投与する、請求項30〜33のいずれか一項記載の使用。
【請求項３７】
治療が腫瘍成長を低減させる、請求項24〜36のいずれか一項記載の使用。
【請求項３８】
治療が腫瘍成長を阻害する、請求項24〜36のいずれか一項記載の使用。
【請求項３９】
患者におけるインビトロで遺伝子操作した樹状細胞に基づく治療レジメンの有効性を判定するための方法であって：
（a）それを必要としている患者からインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の投与前に得た、第一の生体試料中のインターフェロン-ガンマ（IFN-γ）の発現のレベルもしくは活性のレベルまたは両方を測定し、それにより対照レベルをもとめる段階；
（b）それを必要としている患者に、請求項18または19記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞を投与する段階；
（c）それを必要としている患者に、活性化リガンドの有効量を投与する段階；
（d）それを必要としている患者からインビトロで遺伝子操作したDCおよび活性化リガンドの投与後に得た、第二の生体試料中のIFN-γの発現のレベルもしくは活性のレベルまたは両方を測定し、それにより試験レベルをもとめる段階；および
（e）IFN-γの対照レベルと試験レベルとを比較し、ここでIFN-γの発現、活性、または両方の対照レベルに対する試験レベルの上昇が、それを必要としている該患者において治療レジメンが有効であることを示す段階
を含む方法。
【請求項４０】
それを必要としている患者がヒト患者である、請求項39記載の方法。
【請求項４１】
患者が癌患者である、請求項39記載の方法。
【請求項４２】
癌患者が黒色腫患者である、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
IFN-γのレベルをELISAで測定する、請求項39記載の方法。
【請求項４４】
リガンドがジアシルヒドラジンである、請求項39〜43のいずれか一項記載の方法。
【請求項４５】
リガンドがRG-115819、RG-115932、およびRG-115830からなる群より選択される、請求項44記載の方法。
【請求項４６】
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項39記載の方法。
【請求項４７】
リガンドを腫瘍内、経口、腹腔内、または皮下に投与する、請求項39〜46のいずれか一項記載の方法。
【請求項４８】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の前または後1時間未満で投与する、請求項39〜47のいずれか一項記載の方法。
【請求項４９】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後24時間未満で投与する、請求項39〜47のいずれか一項記載の方法。
【請求項５０】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後48時間未満で投与する、請求項39〜47のいずれか一項記載の方法。
【請求項５１】
請求項18または19記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞を含むキット。
【請求項５２】
RG-115819、RG-115830、またはRG-115932からなる群より選択されるリガンドをさらに含む、請求項51記載のキット。
【請求項５３】
樹状細胞におけるインターロイキン-12（IL-12）の機能を有するタンパク質の条件的発現を誘導するための医薬の製造における、請求項18または19記載のインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団の使用。
【請求項５４】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞をそれを必要としている哺乳動物に投与する、請求項53記載の使用。
【請求項５５】
リガンド依存的転写因子を活性化するリガンドの有効量を前記哺乳動物にさらに投与する、請求項54記載の使用。
【請求項５６】
哺乳動物が腫瘍を有する、請求項54または55記載の使用。
【請求項５７】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞を腫瘍内、腹腔内または皮下に投与する、請求項56記載の使用。
【請求項５８】
腫瘍が良性腫瘍である、請求項56記載の使用。
【請求項５９】
腫瘍が悪性腫瘍である、請求項56記載の使用。
【請求項６０】
腫瘍が黒色腫である、請求項56記載の使用。
【請求項６１】
腫瘍が悪性黒色腫皮膚癌である、請求項60記載の使用。
【請求項６２】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞がヒト樹状細胞である、請求項53〜61のいずれか一項記載の使用。
【請求項６３】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞が骨髄樹状細胞である、請求項62記載の使用。
【請求項６４】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団が少なくとも10⁷個の細胞を含む、請求項53〜63のいずれか一項記載の使用。
【請求項６５】
インビトロで遺伝子操作した樹状細胞の集団が少なくとも5×10⁷個の細胞を含む、請求項53〜64のいずれか一項記載の使用。
【請求項６６】
リガンドがRG-115819、RG-115932、およびRG-115830からなる群より選択される、請求項55〜65のいずれか一項記載の使用。
【請求項６７】
リガンドがアミドケトンまたはオキサジアゾリンである、請求項55〜65のいずれか一項記載の使用。
【請求項６８】
リガンドを腫瘍内、経口、腹腔内、または皮下に投与する、請求項66または67記載の使用。
【請求項６９】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の前または後1時間未満で投与する、請求項66〜68のいずれか一項記載の使用。
【請求項７０】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後24時間未満で投与する、請求項66〜68のいずれか一項記載の使用。
【請求項７１】
リガンドをインビトロで遺伝子操作した樹状細胞の後48時間未満で投与する、請求項66〜68のいずれか一項記載の使用。
【請求項７２】
それを必要としている哺乳動物の腫瘍成長を低減させる、請求項53〜71のいずれか一項記載の使用。
【請求項７３】
それを必要としている哺乳動物の腫瘍を阻害する、請求項53〜71のいずれか一項記載の使用。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【公表番号】特表２０１０−５３９９９３（Ｐ２０１０−５３９９９３Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２８８７６（Ｐ２０１０−５２８８７６）
【出願日】平成２０年１０月８日（２００８．１０．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１１５６３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４８５６０
【国際公開日】平成２１年４月１６日（２００９．４．１６）
【出願人】（５０８０８７０４４）イントレキソン　コーポレーション (12)
【出願人】（５０１１０２９８８）ユニバーシティ　オブ　ピッツバーグ　オブ　ザ　コモンウェルス　システム　オブ　ハイヤー　エデュケイション (24)
【Ｆターム（参考）】