金属フレロール及び腫瘍（癌）生長抑制薬物を製造するための金属フレロールの使用
本発明は金属フレロール及びその腫瘍（癌）生長抑制薬物の調製とその応用に及んでいる。具体的に言うと、一般式がＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの水酸化金属フラーレン及びその腫瘍（癌）成長抑制薬物の調製とその応用に及んでいる。その中で、ＭはＧｄ，Ｌａなどの希土類元素金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０（しかし、隣の水酸基の再配置によって、実際にＣ８２炭バッキーボールの表面のＯとＨの数は異なりごとがあり、Ｍ＠Ｃ２ｍＯｘＨｙの式で書いてもいい。）である。目前、臨床で普遍的に使用されている抗癌薬剤ＣＴＸ、シスプラチン、イチイアルコールなどと比べ、金属フレロールＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ（又Ｍ＠Ｃ２ｍＯｘＨｙ）は、使用量が少なく、毒性が小さく、腫瘍生長の抑制効率も高いという特徴がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新型ナノメートル材料及びその生物医学でのアプリケーションに及んでいる。具体的に言うと、一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの金属フレロールの及びその腫瘍成長抑制薬物の調製でのアプリケーションである。その中で、ＭはＧｄ，Ｌａなどの希土類元素金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍は人類健康を威す重要な病気であり、目前、人類死亡の要因になっている。中国や日本でも、肝臓癌、肺癌、胃癌と乳腺癌は最高の発病率の腫瘍である。目前、世界で毎年、７００万人が癌で死に、その中で中国では１３０万人を占めている。癌は人を殺すばかりでなく、家族と社会の巨大な経済負担になっている。抗腫瘍薬物の発見とその研究で、腫瘍化学の治療が一つの学科になり、腫瘍内科学も誕生した。ただし、抗腫瘍薬の研究は厳しい問題に臨んでいる。それは、通常に見られる実体腫れ物例えば、肺癌、肝臓癌、大腸癌と膵臓癌に有効的な薬物が缺乏し、抗腫瘍薬は臨床のアプリケーションの中で副作用が大きいということである。ＣＴＸ、エピルビシン、シスプラチン、イチイアルコール等は治療すると同時に、骨髄の抑制、腎毒性消化器管との痛烈な反応、腎毒性などの毒副作用が発生され、そのため、臨床治療で抗腫瘍薬の使用量が制限されている。人類が悪性腫瘍を抑える為に、必ず新型抗腫瘍薬物を開発すべきである。
【０００３】
生命科学の研究で、ナノ粒子はすでにその独特な優勢とアプリケーションを表している。例えば、ナノ薬物のキャリア、効率的に病気を検定できる量子点、効率的な医学画像及び腫瘍治療技術関連のナノ材料等は、すでに国際で先端的な科学問題になっている。
【０００４】
フラーレン（例えばＣ６０）は炭原子で構成され、ナノ尺度の球体分子であり、独特な物理性と化学性を持ち、生物医学、材料科学などの分野にて重要なアプリケーションを持っている。Friedman等（非特許文献１参照）は、フラーレンＣ６０の誘導体がＨＩＶ病毒の活性を抑制できることを、理論的に模擬計算をした。Ｃ６０は水に溶解されない球体分子として、直径が０．７１ｎｍである。ＨＩＶは末端が開いている圓柱模様の分子として、サイズはＣ６０の直径と大体同じである。その活性表面も水に溶解されなく、この両者は共係合の結合で、ＨＩＶ病毒の成長を阻止することができる。１４ヌクレオシダーゼフラーレンの誘導体とＤＮＡの結合物は、より安定した３螺旋構造を形成し、光の触媒作用で、ＤＮＡに対して選択的な位置切断をする。
【０００５】
フラーレンとその多くの誘導体は水に溶解されないので、人体の「標的分子」と作用できなく、生物化学領域においての研究とアプリケーションが制限されている。近年来、合成水溶性フラーレン誘導体研究に成功して、Ｃ６０誘導体の生物でのアプリケーションを加速し、広くした。水の中で、水酸基が誘導されたフラーレンは独立の分子で存在するのではなく、大分子と相互作用して、ナノ粒子の形式で存在し、こうした粒子はとても良い生物親和性を持っている（非特許文献２〜５参照）。２００４年１０月に発表したNano Lettの論文の中で（非特許文献６参照）、Rice大学のColvinは、フラーレンの細胞毒性はそのバッキーボールの表面の修飾可否と修飾した基団に依頼していると指摘した。二種類の細胞の系列で、構造によってその毒性は７つのレベルの違いがある。フラーレンの毒性が最大で、フレロール（Ｃ６０（ＯＨ）２４）は最小です。細胞毒性を調べると、フレロール（Ｃ６０（ＯＨ）２４）のＬＤ５０＞５，０００ｐｐｍで、フラーレンのＬＤ５０は２０ｐｐｂである。人々はフラーレンとその誘導体に対して、実験される動物の体の中での分部について初歩の研究をした。Nakamura等は１９９４年、初めて１４Ｃと言う表記のフラーレン誘導体を合成し、ラットの中での生物分布と薬物の代謝を研究した。ＳＤラットの尾静脈を注射したら、化合物はラットの各器官に分布され、９０〜９５％が肝臓に集まった。それに対して１６６Ｈｏ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘはより生物分布が広く、肝臓、骨格、脾臓、腎臓、肺の含有量は順に減少し、他の器官には余り分布されていなかった（非特許文献７参照）。
【０００６】
数年来、バッキーボール金属フラーレンの研究はすでに大きく進展し、今まで、三価染色体金属原子（Ｓｃ，Ｙ）、アルカリ土類金属原子（Ｃａ，Ｓｒ，Ｂａ）、アルカリ金属原子（Ｌｉ，Ｎａ，Ｋ，Ｃｓ）と四価染色体金属原子（Ｚｒ，Ｈｆ）等はすでにフラーレンの中に属され、単一原子、二原子、三原子と言う金属バッキーボールを形成した。バッキーボール金属フラーレンの素晴らしい物理的性質と化学的性質によって、有機鉄磁体、非線形光学材料、機能的な分子スイッチ、核の磁造影剤、生物追跡剤などの新型材料へ発展する可能性がある。（非特許文献８参照）。
【０００７】
【非特許文献１】J.Am.Chem.Soc.，１９９３年，１１５：６５０６−６５０９
【非特許文献２】Sayes C M et al，Nano Lett，２００４，４（１０）：１８８１−１８８７
【非特許文献３】Dugan L L et al，Proc Natl Acad Sci USA，１９９７；９４：９４３４−９４３９
【非特許文献４】Mirkova S M et al，Nitric Oxide，２００４；１１：２０１−２０７
【非特許文献５】Chiang L Y et al，J Org Chem，１９９４，５９；３９６０−３９６８）
【非特許文献６】Sayes C M et al，Nano Lett，２００４，４（１０）：１８８１−１８８７
【非特許文献７】Cagle D W et al.，Proc Natl Acad Sci，１９９９；９６：５１８２−５１８７
【非特許文献８】Bolskar R D et al.，J Am Chem Soc，２００３；１２５：５４７１−５４７８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
腫瘍組織は普通の組織より血管が多く、そして、腫瘍組織の毛細血管の壁には多くのナノサイズの穴があって、栄養物質はこれらの穴を通じて腫瘍組織の中にしみ込むことができる。もし、これらの血液の道がちょうど同じサイズのナノ粒子によって詰まったら、血液の流通を抑制して、腫瘍は十分な栄養物質を獲得することができなく、そして腫瘤組織の成長を中断することになる。このことを証明するために、発明者は金属フレロールの化合物を設計し、調製した。その分子の直径は１ｎｍである。金属フラーアルコールナノ粒子は強い腫瘍抑制の作用があり、溶液の中で直径が１−２００ｎｍの粒子を形成する時、腫瘍抑制の作用はもっと大きくなる。ただし、腫瘍細胞を直接に殺すことではない。
【０００９】
本発明の目的は、１種類の金属フレロールを提供することである。
もう一つの目的は、１種類の腫瘤抑制の組合せ物を提供することである。中には、治療に有効な金属フレロール顆粒と薬学で受け取られるキャリヤーが含まれる。
最後の目的は、金属フレロールの腫瘤成長抑制薬物の調製におけるアプリケーションを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の目的を実現するために、下記の方案を提出した。
一つの金属フレロールは一般式で表示され、一般式の中で、ＭはＬａ，Ｇｄなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０である。
【００１１】
上記の化合物は一つの磁性中心の金属イオンＭと一つのＣ原子で構成されたナノバッキーボールからなる。その表面には多くの水酸基の基団があり、そのゆえＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは生物体の中で良い生物親和性を持っている（図１参照）。同時に、水酸基の基団によって、金属フラーレンと比べて毒性が大いに下がる。
【００１２】
隣の水酸基の再配置によって、実際にバッキーボールのＯとＨの数は異なり、上記の一般式をＭ＠Ｃ２ｍＯｘＨｙの式と書いてもよい。
【００１３】
本発明の一般式はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ（ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０）の金属フレロールであり、そのうちＭはＬａである。
【００１４】
本発明の一般式はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ（ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０）の金属フレロールであり、そのうちＭはＧｄである。
【００１５】
１種類の腫瘍抑制の組合せ物の中には、一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘで表す金属フレロールを含み、その中で、ＭはＧｄ、Ｌａなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、 １０≦Ｘ＜５０である。
【００１６】
１種の腫瘍抑制の組合せ物の中には、一般式［Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ］ｎで表す金属フレロールナノ顆粒を含み、その中でＭはＧｄ又は、Ｌａから選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。ｎはこの金属フレロールナノ顆粒を構成する金属フレロール分子の数を示し、１≦ｎ＜２００である。
【００１７】
一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの金属フレロールは分子間の相互作用によって、ナノ顆粒物になり、溶剤のある環境で、溶剤の選択、濃さの制御、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、サイズが１−２００ｎｍの顆粒を構成することができる。
【００１８】
上記の組合せ物には、溶剤と薬学で受け取られるキャリヤーを含んでいる。上記の溶剤で水、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ溶液、燐酸塩緩衝液が優先される。上記の薬学上で受け取られるキャリヤーは、薬学領域で通常の薬物キャリヤーで、例えば：希釈剤、賦形剤、フィリング剤、吸収促進剤等が取上げられる。
【００１９】
本発明の腫瘤抑制組合せ物の中で、金属フレロール溶剤の濃度は１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌが最適である。濃度が１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合、金属フレロールの溶解能力が低くなり、大きい顆粒に固まりやすくなる。金属フレロールの濃度が１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌの場合、細胞に対する毒性は非常に少ない。
【００２０】
上記の腫瘤への応用には下記の病気を含んでいるが、それだけには限らない。肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸大腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、血管肉腫、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫又は皮膚癌。
【００２１】
１種類の金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調製における応用。
この金属フレロールは一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘで表示し、一般式の中でＭはＧｄ、Ｌａなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。上記の腫瘍には下記の病気を含んでいるが、それだけには限らない。肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸大腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、血管肉腫、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫又は皮膚癌。
【００２２】
金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調整における応用。この薬物は各種の溶剤に調製され、こうした溶剤の使用量は、金属フレロールで表すと、一日あたり５×１０−８〜１×１０−２ｍｍｏｌ／ｋｇになる。病人に対する使用量を、マウス実験で得られた使用量（１×１０−６〜２×１０−１ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から人に換算して得る。
【００２３】
金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調整における応用。この薬物は各種の溶剤に調製され、こうした溶剤の使用量は、一日あたり金属フレロール５×１０−６〜１．２５×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇで表す。病人に対する使用量を、マウス実験で得られた使用量（１×１０−４〜２．５×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から人に換算して得る。
【００２４】
上記の腫瘍抑制の組合せ物は、静脈注射、腹腔内注射、口服用又は局部に塗布するなどの方法で治療に使用される。本発明の実施法案の中で、腫瘤抑制組合せ物を注射用溶液に作成することがベストである。
【発明の効果】
【００２５】
本発明は：現在、臨床でよく使用されているシクロホスファミド、シスプラチン、イチイアルコールなどと比べて、金属フレロールのＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは使用量が少なく、毒性が低く、そのうえ腫瘤抑制の比率も高い、という長所がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
発明者は化学的な合成方法で金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘ，Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘ，Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘ，Ｌａ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘを調製し、その調製方法は、Robert D. Bolskarら，J. AM. CHEM. SOC. ２００３，１２５，５４７１−５４７８の文献を参考する。
【００２７】
本発明の方法で調製された金属フレロールＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは、その水酸基の数は１０〜５０の範囲で、本文で水酸基の数を具体的に表示する場合、水酸基の数の平均値を指している。この数は合成金属フレロール反応中のＮａＯＨ溶液の濃さによって決められ、需要によってＮａＯＨ溶液の濃さを調節することができ、水酸基の数が定められる金属フラーアルコールを獲得する。水酸基の数が１０より小さい場合、金属フレロールの生物相容性良くない；水酸基の数が５０より多かったら、バッキーボールの構造は安定できなくなる。
【００２８】
精確にフレロールの水酸基の数を測定するのは極めて重要であり、本発明の中では、北京放射光施設Ｘ線光電子分光装置（ＸＰＳ）を利用して、元素分析法と合わせて、金属フラーレンの表面修飾後の水酸基の数を確定する。
【００２９】
ＸＰＳ実験は中国科学院北京放射光施設で行われている。マグネトロンスパッタリングによって、高純度ＰｔがめっきされたシリコンウェーハでＸＰＳサンプルテストを行う。Ｍ＠Ｃ８２とＭ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘを上記のシリコンウェーハにたらし、薄膜を獲得する。そして、サンプルに付いた空気の不純物を取り除くように、薄膜を超真空システムである８×１０−１０ＴｏｒｒのＸＰＳサンプル調整室に長く置いとく。金属フレロールのＣ１ｓ光電子分光スペクトルはサンプルに含まれる水酸基の数を測定するのに使用する。入射光子のエネルギーを変えて、価電子帯光電子スペクトルを収集する。サンプルの一部の全電子収量スペクトルの測定によって吸収スペクトルを収集する。装置のエネルギー分解能は約〜０．５ｅＶである。サンプル表面の清潔さと器械の良好な稼動状態を確保するために、データ収集をする前に、サンプルはＸＰＳでスキャニングされなければならない。
【００３０】
金属フレロールのＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの分子の顆粒の直径は約１ｎｍである。金属フレロール分子は巨大分子間の相互作用によってナノ顆粒物になる。溶剤のある環境で、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、直径が１−２００ｎｍの顆粒を構成する。本文の下記の実例に言及される金属フレロール溶液の顆粒の直径は１−２００ｎｍである。
【実施例】
【００３１】
下記では、実例と対比例で本発明をもっと深く説明する。ただし、本発明を単にこうした実例に制限するものではない。
【００３２】
（実施例１）
Ｇｄ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの調製
第１工程 Ｇｄ＠Ｃ２ｍの合成
高純度（９９．９９９％）のＧｄ２Ｏ３と高純度の石墨の粉（９９．９９９％）を原子比率Ｇｄ：Ｃ＝０．５〜３：１００で混合して、圧入して模型を作り、石墨−金属の混合電極を作成する。又は、直径が６〜２０ｍｍの石墨の棒に穴を開け、酸化Ｇｄを詰め込んで石墨−金属混合電極を作成する。１０００〜２０００℃の高温で焼き、不活性気体弧状放電の方法で、金属フラーレンのＧｄ＠Ｃ２ｍを合成する。不活性気体はＨｅ又はＡｒ、圧力は５０〜６００Ｔｏｒｒ、電流は８０〜５００Ａである。
【００３３】
第２工程 Ｇｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０分離純化
ａ．高温回流と高温高圧で高効率的に炭ナノ類物質を抽出する。まず、弧状の放電した煙すすを１００〜２００℃でトルエンに１２〜２４時間流し、それからＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）に１００〜２００℃で高温高圧（５０〜１００ＭＰａ）で１２〜２４時間抽出し、炭ナノ類物質を抽出する。
【００３４】
ｂ．よく使用されている循環式のＨＰＬＣ（高効率の液体のクロマトグラフィ）両歩法、又は抽出法で需要の金属フラーレンのＧｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０を純化して、純度が９９．９９％以上の目標産物Ｇｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０を獲得する。Ｇｄ＠Ｃ８２の産出率は炭棒の１０％であり；Ｇｄ＠Ｃ６０の産出率は炭棒の３５％である。ＨＰＬＣ分離結果のグラフは図２を参考する（５ＰＢＢの柱）。
【００３５】
第３工程 金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液の中でＧｄ＠Ｃ８２と濃度が３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、それから濾過、イオン交換層析などの分離、純化でＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００３６】
金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２の合成
トルエン溶液の中に、Ｇｄ＠Ｃ８２と濃度が３０％のＮａＯＨ溶液を反応し、それから濾過、イオン交換層析などの分離、純化でＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００３７】
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘ的合成：
２０ｍＬのＴＨＦの中に、３００ｍｇのＧｄ＠Ｃ６０の懸濁コロイドと２１０ｍｇのＫＨを混合して、１５分間連続にかき混ぜ、１．２５５ｇのブロモマロン酸ジエチルを一粒、一粒加える。４０分間分かき混ぜたら、コーヒー色の溶液が生成される。それから濾過して反応のないＫＨを取り去る。粗い産物をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）で分離させ、それから水素化ヘキシルで濯ぎ、低圧で乾いて、トルエンとＮａＨを一緒に回流させ、メタノールで反応を終らせる。酸性イオン交換柱で分離、純化し、ＮａＯＨで溶液のｐＨを７．０に調整し、乾いて蒸してＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘを獲得する。
【００３８】
第４工程 金属フレロール顆粒［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎ（１≦ｎ＜２００）の合成
金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２を生理食塩水に溶かして、超音を１分間したら、直径が１−２００ｎｍの粒子［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎ，１＜ｎ＜２００ができる。
【００３９】
（実施例２）
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２水酸基の数の測定
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２（ａ）とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２（ｂ）のＣ１ｓのエレクトロニックＸＰＳグラフは、図３の通りである。Ｃ−ＣとＣ−Ｏキー間の相対的強さはＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘの水酸基の数を分析するのに使う。図２の実線のＨＰＬＣ分析は、分子の中に２種類の炭原子が存在することを表している。ピーク２８４．４ ｅＶのものは、他の基団と連接していないｓｐ２雑化した炭原子（Ｃ−Ｃ）のエネルギー結合であり；ピーク２８５．３ｅＶのものは水酸基化の炭原子（Ｃ−ＯＨ）である。
【００４０】
（実施例３）
Ｌａ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの調製
上記のＧｄ＠Ｃ８２の調製方法に似ている方法でＬａ＠Ｃ８２およびＬａ＠Ｃ６０を調製する。
（１）金属フレロールＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液媒質の中にＬａ＠Ｃ８２と濃さ３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、一連の分離、純化の後、ＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００４１】
（２）金属フレロールＬａ＠Ｃ６０（ＯＨ）２２の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液媒質の中にＬａ＠Ｃ８２と濃さ３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、一連の分離、純化の後、ＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｌａ＠Ｃ６０（ＯＨ）２２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００４２】
（実施例４）
ナノ顆粒の測定
金属フレロール分子Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの粒の直径は１ｎｍである。溶剤の環境で、金属フレロールは巨大分子の相互作用によって、ナノ顆粒物になり、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、サイズが１−２００ｎｍの顆粒を構成する。
【００４３】
シンクロトロン放射小角Ｘ線散乱（ＳＲ−ＳＡＸＳ）で、生理食塩水溶液中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の直径範囲は１−２００ｎｍとなり、平均サイズは２２ｎｍであることを測定する。
【００４４】
高分解能原子力顕微鏡で（ＡＦＭ，Nano IIIａ ＳＰＭ，Digital Instruments Inc，３Ａ）生理食塩水溶液中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の直径範囲は１−２００ｎｍであり、平均の直径２２．４ｎｍは存在していることを実証している。図４参照。二つの独立した方法で取得した結果は同じである。
【００４５】
（実施例５）
［Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２］ｎ（１≦ｎ＜２００）を含んでいる注射用溶液
５００ｍｇのＧｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２を４００ｍｌの生理食塩水中に溶け、室温で超音を１分間し、１００個のガラス管に外装して、注射用溶液を作成する。
【００４６】
（実施例６）
マウスの肝臓癌腫瘍に対するＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ組み合わせ物の抑制作用
動物品種：昆明種類雌のマウス、体重は１８〜２２ｇ。
腫瘍モデル：マウス肝臓癌のＨ２２瘤株。
実験グループ：Ａ．陰性対照グループ：生理食塩水（saline）；Ｂ．陽性対照グループ：ＣＴＸ（Cyclophosphamide，ＣＴＸ）、臨床で普遍的に使われる抗癌剤；Ｃ．薬物のグループ：Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ，グループあたり５〜７匹。
薬の方式：腹腔内注射（intraperitoneal，ｉ．ｐ．）。
ＣＴＸとＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ（ｍ＝２２と２６）溶液は０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
使用量：（１×１０−６〜２×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇマウス）
【００４７】
本実験は使用量によって二つのグループ分けられる。
Ａ．高用量のグループ：
ＣＴＸ：３０ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ），実験する７日前に注射する；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２，２×１０−４ｍｍｏｌＧｄ／ｋｇ；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６，２×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇ；
注射容積は全て０．２ｍｌ。
【００４８】
低用量のグループ：
ＣＴＸ：１５ｍｇ／ｋｇ（０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ）；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２，１×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇ；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６，１×１０−６ｍｍｏｌ／ｋｇ；
注射容積は全て０．２ｍｌ。
【００４９】
実験方法：マウスの右側後足に肝臓癌のＨ２２瘤株１×１０６癌細胞（１００μｌ０．９％の生理食塩水に分散させる）を接種し、２４時間後一匹あたり０．２ｍｌの薬をやる。実験の間、２４時間ごとに薬を１回やり、１日おきに腫瘍を接種した後足の直径を測量して、成長を記録し、マウスの反応を観察する。生理食塩水のグループの後足が２０ｍｍまで成長したら、実験を終らせる。（マウスの後足は普通６ｍｍである。）
【００５０】
実験終わり：眼球を取り出して採血する。１０９ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸ナトリウム抗凝固剤で、血液と抗凝剤を１：９の比率で；腫瘍を取り出して、重さを計る。臓器／器官を取って重さと計り、臓器の掛け目を計算する。それから１０％のホルマリンで臓器／器官を固める。
【００５１】
実験結果：Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ組み合わせ物の抗肝臓癌活性は表１の通りである。Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨｍのナノ粒子を注射するのとＣＴＸを注射するのは同じようで、マウスの腫瘍成長を抑制することができ、且つ、ナノ材料の腫瘍抑制特徴は、普通の腫瘍抑制の薬物ＣＴＸよりよいのである。
【００５２】
高用量のグループＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が荷瘤マウスの血清ビリルビン、ＡＬＴ、ＡＳＴとイノシンに対する影響は下記の表２通りである。肝臓細胞が損害する最も敏感な指標のＡＬＴとＡＳＴの活性から分析すると、Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２ナノ材料を注射すると、荷瘤マウスの２種類酵素の増加を抑制することができ、普通の水準に達している。しかし、ＣＴＸグループのＡＬＴは増加し、動物肝臓の損傷を増やすのである。
【００５３】
公式Ｖ＝４πｒ３／３によって腫瘍体積を計算し、腫瘍の抑制効率を取得する。低使用量のグループで、０．１μｍｏｌ／ｋｇのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２腫瘍成長の抑制率は３２．９％で（図５と図６）、０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇのＣＴＸ抑制率５２．０％に比べて低いが、その使用量はただＣＴＸの１／５００である。
【００５４】
そして、抑制効率と使用量との関係を比較した。ＣＴＸの使用量を０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ増えたら、腫瘤抑制率は１５％高まり、Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２ナノ材料の使用量を０．１μｍｏｌ／ｋｇ増えたら、その抑制率は２６％上昇した（図７および図８）。
【００５５】
マウスの肝臓癌Ｈ２２モデルグループの腫瘍組織病理切片の結果：
下記の図９を参照、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２治療グループのマウスの腫瘍浸潤範囲はもっと小さく、瘍体は剥離しやすく、腫瘍の重さも明らかに軽くなる。ＨＥ染め切片で見られるように、腫瘍の回りには腫瘤包絡帯を形成（炎症細胞、ファイバーの雌細胞及び毛細血管）して、機体免疫機能を生かせることができる。
対照グループ：腫瘍細胞が骨格筋に浸潤している。
ＣＴＸグループ：腫瘍細胞が大量に壊れたが、腫瘤細胞が骨格筋に浸潤することを防止できない。
【００５６】
【表１】
【００５７】
【表２】
【００５８】
（実施例７）
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍの人間ＭＣＦ−７乳癌、マウス乳癌のモデルに対する腫瘍抑制効果
実験方法：ＢＡＬＢ／ｃ雌のマウス（１６．０±１．０ｇ）の皮下にＭＣＦ−７の細胞液（１×１０７細胞）を接種して、２０日を飼ってから、皮下にできた腫瘍を取り出して、３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍで切り、再びＢＡＬＢ／ｃ雌のマウスに植えて予備用にする。
３日後薬をやり、それぞれＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ（ｍ＝３２又は１２）、ＣＴＸ、イチイアルコール、生理食塩水をやる。
【００５９】
薬の方法：
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２ ２．５μｍｏｌ／ｋｇ／日×１３日（Ｇｄの濃さで計算する）；注射液の濃さは０．２５μｍｏｌ／ｍｌである。
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２１．０μｍｏｌ／ｋｇ ／日×１３日，Ｇｄの濃さで計算する；注射液の濃さは０．１μｍｏｌ／ｍｌ。
ＣＴＸ 第一週７１．６μｍｏｌ／ｋｇ／日×７日間，第８−１２日生理食塩水
イチイアルコール 第０、３、６、９、１２日は１５．２μｍｏｌ／ｋｇ／日，薬をやらないで、生理食塩水を注射する。
生理食塩水 ０．２ｍｌ ｑ．ｄ．×１３
動物品種： ＢＡＬＢ／ｃ雌のマウス，
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２グループ １０匹；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２グループ １０匹；
ＣＴＸグループ １０匹；
イチイアルコールグループ ９匹；
生理食塩水グループ ８匹
【００６０】
腫瘍モデル：ＭＣＦ−７の人間乳癌
薬の方式：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
ＣＴＸとＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍの溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とし、イチイアルコールはビジネス用液体調合剤を使用する。
【００６１】
腫瘍抑制の実験結果は図３の通りである。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２グループは体重２．５μｍｏｌ／ｋｇの時、１３日間薬をやったら、抑制率が４７％に達し；これはＣＴＸグループの体重７１．６μｍｏｌ／ｋｇの時、７日間薬をやって取得した結果と同じである。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２グループは体重１μｍｏｌ／ｋｇの時、１３日間薬をやったら、抑制率が３５．６％に達した。ただし、ＣＴＸグループのマウスは毒副作用が出現して、明らかに体重が軽減したり、痩せたり、元気なかったり等の状態を見られている。イチイアルコールは体重１５．２μｍｏｌ／ｋｇの場合、２日おきに薬をやって、抑制率が８２％に達したが、４５％のマウスが死んでしまい、その毒性が酷い。それに対して、金属フレロールのグループは、実験が終わるまでマウスに明らかな毒性反応が現れなかった。
【００６２】
この実験は目前臨床で普遍的に使用されているＣＴＸ、イチイアルコールに比べて、異なる水酸基の数を持っている金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）は、使用量が少なく、毒性が低く、腫瘍の抑制率が高いなどの優勢があるのである。
【００６３】
【表３】
【００６４】
（実施例８）
マウスのルイス肺癌モデルに対するＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８合わせ物の腫瘍抑制の効果
実験方法：Ｃ５７雌のマウス（１８．０±１．０ｇ）の皮下にルイスの肺癌細胞液を接種して、翌日から薬をやり、それぞれＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８、ＣＴＸ、生理食塩水をやり，グループあたりマウス１０匹。
【００６５】
薬の処方：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
薬の方法：
Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８ １μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×１４
ＣＴＸ 第一週７１．６ μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×７，第８−１４日に生理食塩水をやる
生理食塩水 ０．２ｍｌｑ．ｄ．×１４
ＣＴＸとＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
【００６６】
腫瘍抑制の実験結果は図１０の通りである。Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８は体重１μｍｏｌ／ｋｇの時、１４日間薬をやったら、腫瘍抑制率が明らかで、腫瘍の重さは余り重くなっていない。これはＣＴＸグループの体重７１．６μｍｏｌ／ｋｇの時、７日間薬をやって取得した結果と大体同じである。ただし、ＣＴＸグループのマウスは毒副作用が酷い。例えば、明らかに体重が軽減したり、痩せたり、元気ない等の状態を見られている。それに対して、金属フレロールのグループは、実験が終わるまでマウスに明らかな毒性反応が現れなかった。
【００６７】
上記の実験で、目前臨床で普通に使用されているＣＴＸに比べて、金属フレロールＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８ナノ粒子は、使用量が少なく、毒性が低く、且つ腫瘍抑制率が高いなどの優勢があるのである。
【００６８】
（実施例９）
マウスのルイス肺癌に対するＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０の腫瘍抑制の効果
実験方法：Ｃ５７雌のマウス（２０．０±１．０ｇ）の皮下にルイス肺癌細胞液（１×１０７細胞）を接種して、翌日から薬をやり、それぞれＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０、生理食塩水をやる。グループあたりマウス１０匹。Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
【００６９】
薬の処方：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
薬の方法：
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０ ０．５μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×１８
生理食塩水 ０．２ｍｌｑ．ｄ．×１８
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０は体重０．５μｍｏｌ／ｋｇの時、１８日間薬をやったら、腫瘍抑制率が明らかで、生理食塩水グループと比べ、接種した腫瘍の体積が余り大きくならなく、抑制率が４２％に達した。
【００７０】
（実施例１０）
細胞毒性の試験
実験方法：
（１）ＭＴＴ法による金属フレロールが異なる種類の癌細胞の生存率に与える影響分析
ＭＴＴ法：１Ｈ−テトラゾール類染料の１つとしてのＭＴＴがセルに入ってから、ＳＡＤ（琥珀酸脱水素酵素など）によって不溶性有色産物に還元される。光吸収の方法によって、有色産物の量を測定し、それによって間接的に細胞の活性が反映される。
対数成長期の細胞を単個細胞浮遊液に消化し、その濃度を２×１０４／ｍｌに調合して、９６穴のセル育成プレートに接種して、穴あたり１００μｌ接種し、使用量によって６つのグループに分け、グループあたり８個の８繰り返された穴がある。２４時間後、オリジナルの培地を無血清の培地に替える。１穴に１００μｌで、使用量グループの濃度によって、薬物を入れる。４８時間引き続き培養して、上に浮かぶ部分を捨てて、各穴に１００μｌ ＭＴＴ緩衝液と１０μｌ ＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を入れ、３時間引き続き培養してから，上に浮かぶ部分を捨てて、１Ｈ−テトラゾール類染料の１つとしてのＭＴＴがセルに入ってから、ＳＡＤ（琥珀酸脱水素酵素など）によって不溶性有色産物に還元される。光吸収の方法によって、有色産物の量を測定し、それによって間接的に細胞の活性が反映されられる。各穴にＤＭＳＯ１５０μｌを入れ、揺るがして、自動酵素サインメーターによって、５９５ｎｍでの各穴の吸収した値を測定する。
【００７１】
（２）フローサイトメトリー（Flow cytometry）分析法：ＰＩ（propidium iodide）アポトーシスセル数染色測定
濃度１０５／ｍｌのセルを５ｍｌ培養瓶に接種して、２４時間後、５ｍｌの無血清培地に替えて、それぞれ異なった濃度の金属フレロールを追加して、２４時以降セルを取り入れる。培地の中の少量セルをも含める。取り入れておいたセルを生理食塩水溶液で二度洗って、４℃で７０％のエタノールで固定させる。分析が行われる前、生理食塩水溶液で二度と洗って、最後に生理食塩水溶液でセルを浮遊させる。２５ｐｐｍのＲＮａｓｅＡと５０ｐｐｍのpresidiumヨウ化物（ＰＩ）を追加して、３７℃の水溶液の中に３０分間放置した後、ナイロンのガーゼで濾過してから機械測定をあげる。ＰＩは完全な細胞膜に対する透過性がないが、アポトーシス中晩期の細胞核が赤色蛍光で染色させられる。ＤＮＡがＰＩと染色結合後、フローサイトメータ（ＦＣＭ）器具で分析する。アポトーシスセルの量はＧ１ピークの横で現れるＡｐピークによって測定される。
【００７２】
実験の結果例：
［１］ＭＴＴ法による金属フレロールが人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞の生存率に与える影響分析
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の最終濃度が１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内にあって、実験の結果が図１１の示したようである。細胞の活性が薬物追加されない細胞よりある程度増加してきたが、薬物の各投与量組の間の差があまり大きくない。明らかな線形関係がもない。
【００７３】
［２］フローサイトメトリー（Flow cytometry）による金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞への毒性分析
結果が図１２の示したように、細胞のアポトーシス比率は皆３．５％〜７％間にあって、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、細胞のアポトーシス比率が参照組と殆ど一致していて、薬物の各投与量組の間には著しい差がない。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２はＨｅｐＧ２細胞がアポトーシスするように誘導せず、細胞の増殖と成長には影響与えられないと示している。
【００７４】
［３］フローサイトメトリー（Flow cytometry）によるＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がネズミの肝臓癌Ｒｈ３５細胞への毒性分析
結果は図１３の示したように、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、誘導剤追加しない参照組と比べて、細胞アポトーシス比率が相当なレベルで、アポトーシス細胞の比率は皆２．０％〜３．５％の間で、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がネズミの肝臓癌Ｒｈ３５細胞をアポトーシスするように誘導しないと示している。
【００７５】
［４］フローサイトメトリー（Flow cytometry）によるＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳癌ＭＣＦ−７細胞への毒性分析
結果は図１４の示したように、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、参照組細胞のアポトーシス率と相当で、３．０％〜９％の間で、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳癌ＭＣＦ−７細胞をアポトーシスするように誘導しないと示して、細胞への毒性が比較的小さい。
【００７６】
［５］ＭＴＴ法による金属フレロールが神経膠質のこぶ細胞の生存率への影響分析
Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）２０の最終濃度は１００〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、実験の結果の図１５の示したように、細胞の生存率がと薬物追加しない参照組と殆ど一致していて、神経膠質のこぶ細胞の生長へ明らかな影響がない。
【００７７】
上記の異なった濃度の金属フレロールが多様の腫瘍細胞に対する細胞毒性実験の結果から見ると、１０−１００００００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度範囲内、金属フレロールが異なったタイプの腫瘍細胞株の生長へ影響与えないもので、細胞がアポトーシスするように誘導しない。同時に細胞の生存率が薬物追加しない参照組と一致していて、金属フレロールが直接の細胞毒性がなく、直接に細胞を殺さないと示している。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの分子構造図である。
【図２】図２はＧｄ＠Ｃ２ｍのＨＰＬＣの分離結果図である。（５ＰＢＢ柱）。
【図３】図３はＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２（ａ）とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２（ｂ）のＣ１ｓ電子ＸＰＳスペクトルである。
【図４】図４は生理食塩水溶液の中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の高分解能ＡＦＭの図である。
【図５】図５はＧｄ＠８２（ＯＨ）２２の低用量の組をマウスに注射後、マウスのＨ２２肝臓癌の成長グラフである。
【図６】図６はＧｄ＠８２（ＯＨ）２２の高用量の組をマウスに注射後、マウスのＨ２２肝臓癌の成長グラフである。
【図７】図７はＣＴＸ組の腫瘤抑制率と用量関係グラフである。
【図８】図８はＧｄ＠Ｃ８２ＯｘＨｙ組の腫瘤抑制率と用量関係グラフである。
【図９】図９はマウスの肝臓癌Ｈ２２のモデル、異なる治療組の腫瘤病組織の病理切片写真である。その中で、Ａ、Ｂは対比組であり；Ｃ、ＤはＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２治療組であり；Ｅ、Ｆはシクロホスファミド治療組である。
【図１０】図１０はＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８の注射後、マウスのLewis肺癌の成長グラフである。
【図１１】図１１は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の人の肝臓癌ＨｅｐＧ２に対する細胞生存率の影響である。
【図１２】図１２は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１３】図１３は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がマウスの肝臓癌Ｒｈ３５細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１４】図１４は金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳腺癌ＭＣＦ−７細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１５】図１５は金属フレロールのＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）２０神経ゴム腫瘤細胞生存率に対する影響である。
【符号の説明】
【００７９】
図１１、１２、１３と１４で、横座標の数値はＭ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘモル濃度の累乗。
【技術分野】
【０００１】
本発明は新型ナノメートル材料及びその生物医学でのアプリケーションに及んでいる。具体的に言うと、一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの金属フレロールの及びその腫瘍成長抑制薬物の調製でのアプリケーションである。その中で、ＭはＧｄ，Ｌａなどの希土類元素金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍は人類健康を威す重要な病気であり、目前、人類死亡の要因になっている。中国や日本でも、肝臓癌、肺癌、胃癌と乳腺癌は最高の発病率の腫瘍である。目前、世界で毎年、７００万人が癌で死に、その中で中国では１３０万人を占めている。癌は人を殺すばかりでなく、家族と社会の巨大な経済負担になっている。抗腫瘍薬物の発見とその研究で、腫瘍化学の治療が一つの学科になり、腫瘍内科学も誕生した。ただし、抗腫瘍薬の研究は厳しい問題に臨んでいる。それは、通常に見られる実体腫れ物例えば、肺癌、肝臓癌、大腸癌と膵臓癌に有効的な薬物が缺乏し、抗腫瘍薬は臨床のアプリケーションの中で副作用が大きいということである。ＣＴＸ、エピルビシン、シスプラチン、イチイアルコール等は治療すると同時に、骨髄の抑制、腎毒性消化器管との痛烈な反応、腎毒性などの毒副作用が発生され、そのため、臨床治療で抗腫瘍薬の使用量が制限されている。人類が悪性腫瘍を抑える為に、必ず新型抗腫瘍薬物を開発すべきである。
【０００３】
生命科学の研究で、ナノ粒子はすでにその独特な優勢とアプリケーションを表している。例えば、ナノ薬物のキャリア、効率的に病気を検定できる量子点、効率的な医学画像及び腫瘍治療技術関連のナノ材料等は、すでに国際で先端的な科学問題になっている。
【０００４】
フラーレン（例えばＣ６０）は炭原子で構成され、ナノ尺度の球体分子であり、独特な物理性と化学性を持ち、生物医学、材料科学などの分野にて重要なアプリケーションを持っている。Friedman等（非特許文献１参照）は、フラーレンＣ６０の誘導体がＨＩＶ病毒の活性を抑制できることを、理論的に模擬計算をした。Ｃ６０は水に溶解されない球体分子として、直径が０．７１ｎｍである。ＨＩＶは末端が開いている圓柱模様の分子として、サイズはＣ６０の直径と大体同じである。その活性表面も水に溶解されなく、この両者は共係合の結合で、ＨＩＶ病毒の成長を阻止することができる。１４ヌクレオシダーゼフラーレンの誘導体とＤＮＡの結合物は、より安定した３螺旋構造を形成し、光の触媒作用で、ＤＮＡに対して選択的な位置切断をする。
【０００５】
フラーレンとその多くの誘導体は水に溶解されないので、人体の「標的分子」と作用できなく、生物化学領域においての研究とアプリケーションが制限されている。近年来、合成水溶性フラーレン誘導体研究に成功して、Ｃ６０誘導体の生物でのアプリケーションを加速し、広くした。水の中で、水酸基が誘導されたフラーレンは独立の分子で存在するのではなく、大分子と相互作用して、ナノ粒子の形式で存在し、こうした粒子はとても良い生物親和性を持っている（非特許文献２〜５参照）。２００４年１０月に発表したNano Lettの論文の中で（非特許文献６参照）、Rice大学のColvinは、フラーレンの細胞毒性はそのバッキーボールの表面の修飾可否と修飾した基団に依頼していると指摘した。二種類の細胞の系列で、構造によってその毒性は７つのレベルの違いがある。フラーレンの毒性が最大で、フレロール（Ｃ６０（ＯＨ）２４）は最小です。細胞毒性を調べると、フレロール（Ｃ６０（ＯＨ）２４）のＬＤ５０＞５，０００ｐｐｍで、フラーレンのＬＤ５０は２０ｐｐｂである。人々はフラーレンとその誘導体に対して、実験される動物の体の中での分部について初歩の研究をした。Nakamura等は１９９４年、初めて１４Ｃと言う表記のフラーレン誘導体を合成し、ラットの中での生物分布と薬物の代謝を研究した。ＳＤラットの尾静脈を注射したら、化合物はラットの各器官に分布され、９０〜９５％が肝臓に集まった。それに対して１６６Ｈｏ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘはより生物分布が広く、肝臓、骨格、脾臓、腎臓、肺の含有量は順に減少し、他の器官には余り分布されていなかった（非特許文献７参照）。
【０００６】
数年来、バッキーボール金属フラーレンの研究はすでに大きく進展し、今まで、三価染色体金属原子（Ｓｃ，Ｙ）、アルカリ土類金属原子（Ｃａ，Ｓｒ，Ｂａ）、アルカリ金属原子（Ｌｉ，Ｎａ，Ｋ，Ｃｓ）と四価染色体金属原子（Ｚｒ，Ｈｆ）等はすでにフラーレンの中に属され、単一原子、二原子、三原子と言う金属バッキーボールを形成した。バッキーボール金属フラーレンの素晴らしい物理的性質と化学的性質によって、有機鉄磁体、非線形光学材料、機能的な分子スイッチ、核の磁造影剤、生物追跡剤などの新型材料へ発展する可能性がある。（非特許文献８参照）。
【０００７】
【非特許文献１】J.Am.Chem.Soc.，１９９３年，１１５：６５０６−６５０９
【非特許文献２】Sayes C M et al，Nano Lett，２００４，４（１０）：１８８１−１８８７
【非特許文献３】Dugan L L et al，Proc Natl Acad Sci USA，１９９７；９４：９４３４−９４３９
【非特許文献４】Mirkova S M et al，Nitric Oxide，２００４；１１：２０１−２０７
【非特許文献５】Chiang L Y et al，J Org Chem，１９９４，５９；３９６０−３９６８）
【非特許文献６】Sayes C M et al，Nano Lett，２００４，４（１０）：１８８１−１８８７
【非特許文献７】Cagle D W et al.，Proc Natl Acad Sci，１９９９；９６：５１８２−５１８７
【非特許文献８】Bolskar R D et al.，J Am Chem Soc，２００３；１２５：５４７１−５４７８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
腫瘍組織は普通の組織より血管が多く、そして、腫瘍組織の毛細血管の壁には多くのナノサイズの穴があって、栄養物質はこれらの穴を通じて腫瘍組織の中にしみ込むことができる。もし、これらの血液の道がちょうど同じサイズのナノ粒子によって詰まったら、血液の流通を抑制して、腫瘍は十分な栄養物質を獲得することができなく、そして腫瘤組織の成長を中断することになる。このことを証明するために、発明者は金属フレロールの化合物を設計し、調製した。その分子の直径は１ｎｍである。金属フラーアルコールナノ粒子は強い腫瘍抑制の作用があり、溶液の中で直径が１−２００ｎｍの粒子を形成する時、腫瘍抑制の作用はもっと大きくなる。ただし、腫瘍細胞を直接に殺すことではない。
【０００９】
本発明の目的は、１種類の金属フレロールを提供することである。
もう一つの目的は、１種類の腫瘤抑制の組合せ物を提供することである。中には、治療に有効な金属フレロール顆粒と薬学で受け取られるキャリヤーが含まれる。
最後の目的は、金属フレロールの腫瘤成長抑制薬物の調製におけるアプリケーションを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記の目的を実現するために、下記の方案を提出した。
一つの金属フレロールは一般式で表示され、一般式の中で、ＭはＬａ，Ｇｄなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０である。
【００１１】
上記の化合物は一つの磁性中心の金属イオンＭと一つのＣ原子で構成されたナノバッキーボールからなる。その表面には多くの水酸基の基団があり、そのゆえＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは生物体の中で良い生物親和性を持っている（図１参照）。同時に、水酸基の基団によって、金属フラーレンと比べて毒性が大いに下がる。
【００１２】
隣の水酸基の再配置によって、実際にバッキーボールのＯとＨの数は異なり、上記の一般式をＭ＠Ｃ２ｍＯｘＨｙの式と書いてもよい。
【００１３】
本発明の一般式はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ（ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０）の金属フレロールであり、そのうちＭはＬａである。
【００１４】
本発明の一般式はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ（ｍ＝４１又は３０；１０≦Ｘ＜５０）の金属フレロールであり、そのうちＭはＧｄである。
【００１５】
１種類の腫瘍抑制の組合せ物の中には、一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘで表す金属フレロールを含み、その中で、ＭはＧｄ、Ｌａなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、 １０≦Ｘ＜５０である。
【００１６】
１種の腫瘍抑制の組合せ物の中には、一般式［Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ］ｎで表す金属フレロールナノ顆粒を含み、その中でＭはＧｄ又は、Ｌａから選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。ｎはこの金属フレロールナノ顆粒を構成する金属フレロール分子の数を示し、１≦ｎ＜２００である。
【００１７】
一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの金属フレロールは分子間の相互作用によって、ナノ顆粒物になり、溶剤のある環境で、溶剤の選択、濃さの制御、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、サイズが１−２００ｎｍの顆粒を構成することができる。
【００１８】
上記の組合せ物には、溶剤と薬学で受け取られるキャリヤーを含んでいる。上記の溶剤で水、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ溶液、燐酸塩緩衝液が優先される。上記の薬学上で受け取られるキャリヤーは、薬学領域で通常の薬物キャリヤーで、例えば：希釈剤、賦形剤、フィリング剤、吸収促進剤等が取上げられる。
【００１９】
本発明の腫瘤抑制組合せ物の中で、金属フレロール溶剤の濃度は１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌが最適である。濃度が１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌを超える場合、金属フレロールの溶解能力が低くなり、大きい顆粒に固まりやすくなる。金属フレロールの濃度が１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌの場合、細胞に対する毒性は非常に少ない。
【００２０】
上記の腫瘤への応用には下記の病気を含んでいるが、それだけには限らない。肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸大腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、血管肉腫、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫又は皮膚癌。
【００２１】
１種類の金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調製における応用。
この金属フレロールは一般式Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘで表示し、一般式の中でＭはＧｄ、Ｌａなどの希土類金属から選ばれ、ｍ＝４１又は３０、１０≦Ｘ＜５０である。上記の腫瘍には下記の病気を含んでいるが、それだけには限らない。肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸大腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、骨肉腫、血管肉腫、リンパ腫、白血病、悪性黒色腫又は皮膚癌。
【００２２】
金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調整における応用。この薬物は各種の溶剤に調製され、こうした溶剤の使用量は、金属フレロールで表すと、一日あたり５×１０−８〜１×１０−２ｍｍｏｌ／ｋｇになる。病人に対する使用量を、マウス実験で得られた使用量（１×１０−６〜２×１０−１ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から人に換算して得る。
【００２３】
金属フレロールの腫瘍成長抑制薬物の調整における応用。この薬物は各種の溶剤に調製され、こうした溶剤の使用量は、一日あたり金属フレロール５×１０−６〜１．２５×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇで表す。病人に対する使用量を、マウス実験で得られた使用量（１×１０−４〜２．５×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇ／日）から人に換算して得る。
【００２４】
上記の腫瘍抑制の組合せ物は、静脈注射、腹腔内注射、口服用又は局部に塗布するなどの方法で治療に使用される。本発明の実施法案の中で、腫瘤抑制組合せ物を注射用溶液に作成することがベストである。
【発明の効果】
【００２５】
本発明は：現在、臨床でよく使用されているシクロホスファミド、シスプラチン、イチイアルコールなどと比べて、金属フレロールのＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは使用量が少なく、毒性が低く、そのうえ腫瘤抑制の比率も高い、という長所がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
発明者は化学的な合成方法で金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘ，Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘ，Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘ，Ｌａ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘを調製し、その調製方法は、Robert D. Bolskarら，J. AM. CHEM. SOC. ２００３，１２５，５４７１−５４７８の文献を参考する。
【００２７】
本発明の方法で調製された金属フレロールＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘは、その水酸基の数は１０〜５０の範囲で、本文で水酸基の数を具体的に表示する場合、水酸基の数の平均値を指している。この数は合成金属フレロール反応中のＮａＯＨ溶液の濃さによって決められ、需要によってＮａＯＨ溶液の濃さを調節することができ、水酸基の数が定められる金属フラーアルコールを獲得する。水酸基の数が１０より小さい場合、金属フレロールの生物相容性良くない；水酸基の数が５０より多かったら、バッキーボールの構造は安定できなくなる。
【００２８】
精確にフレロールの水酸基の数を測定するのは極めて重要であり、本発明の中では、北京放射光施設Ｘ線光電子分光装置（ＸＰＳ）を利用して、元素分析法と合わせて、金属フラーレンの表面修飾後の水酸基の数を確定する。
【００２９】
ＸＰＳ実験は中国科学院北京放射光施設で行われている。マグネトロンスパッタリングによって、高純度ＰｔがめっきされたシリコンウェーハでＸＰＳサンプルテストを行う。Ｍ＠Ｃ８２とＭ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘを上記のシリコンウェーハにたらし、薄膜を獲得する。そして、サンプルに付いた空気の不純物を取り除くように、薄膜を超真空システムである８×１０−１０ＴｏｒｒのＸＰＳサンプル調整室に長く置いとく。金属フレロールのＣ１ｓ光電子分光スペクトルはサンプルに含まれる水酸基の数を測定するのに使用する。入射光子のエネルギーを変えて、価電子帯光電子スペクトルを収集する。サンプルの一部の全電子収量スペクトルの測定によって吸収スペクトルを収集する。装置のエネルギー分解能は約〜０．５ｅＶである。サンプル表面の清潔さと器械の良好な稼動状態を確保するために、データ収集をする前に、サンプルはＸＰＳでスキャニングされなければならない。
【００３０】
金属フレロールのＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの分子の顆粒の直径は約１ｎｍである。金属フレロール分子は巨大分子間の相互作用によってナノ顆粒物になる。溶剤のある環境で、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、直径が１−２００ｎｍの顆粒を構成する。本文の下記の実例に言及される金属フレロール溶液の顆粒の直径は１−２００ｎｍである。
【実施例】
【００３１】
下記では、実例と対比例で本発明をもっと深く説明する。ただし、本発明を単にこうした実例に制限するものではない。
【００３２】
（実施例１）
Ｇｄ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの調製
第１工程 Ｇｄ＠Ｃ２ｍの合成
高純度（９９．９９９％）のＧｄ２Ｏ３と高純度の石墨の粉（９９．９９９％）を原子比率Ｇｄ：Ｃ＝０．５〜３：１００で混合して、圧入して模型を作り、石墨−金属の混合電極を作成する。又は、直径が６〜２０ｍｍの石墨の棒に穴を開け、酸化Ｇｄを詰め込んで石墨−金属混合電極を作成する。１０００〜２０００℃の高温で焼き、不活性気体弧状放電の方法で、金属フラーレンのＧｄ＠Ｃ２ｍを合成する。不活性気体はＨｅ又はＡｒ、圧力は５０〜６００Ｔｏｒｒ、電流は８０〜５００Ａである。
【００３３】
第２工程 Ｇｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０分離純化
ａ．高温回流と高温高圧で高効率的に炭ナノ類物質を抽出する。まず、弧状の放電した煙すすを１００〜２００℃でトルエンに１２〜２４時間流し、それからＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）に１００〜２００℃で高温高圧（５０〜１００ＭＰａ）で１２〜２４時間抽出し、炭ナノ類物質を抽出する。
【００３４】
ｂ．よく使用されている循環式のＨＰＬＣ（高効率の液体のクロマトグラフィ）両歩法、又は抽出法で需要の金属フラーレンのＧｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０を純化して、純度が９９．９９％以上の目標産物Ｇｄ＠Ｃ８２とＧｄ＠Ｃ６０を獲得する。Ｇｄ＠Ｃ８２の産出率は炭棒の１０％であり；Ｇｄ＠Ｃ６０の産出率は炭棒の３５％である。ＨＰＬＣ分離結果のグラフは図２を参考する（５ＰＢＢの柱）。
【００３５】
第３工程 金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液の中でＧｄ＠Ｃ８２と濃度が３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、それから濾過、イオン交換層析などの分離、純化でＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００３６】
金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２の合成
トルエン溶液の中に、Ｇｄ＠Ｃ８２と濃度が３０％のＮａＯＨ溶液を反応し、それから濾過、イオン交換層析などの分離、純化でＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００３７】
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘ的合成：
２０ｍＬのＴＨＦの中に、３００ｍｇのＧｄ＠Ｃ６０の懸濁コロイドと２１０ｍｇのＫＨを混合して、１５分間連続にかき混ぜ、１．２５５ｇのブロモマロン酸ジエチルを一粒、一粒加える。４０分間分かき混ぜたら、コーヒー色の溶液が生成される。それから濾過して反応のないＫＨを取り去る。粗い産物をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）で分離させ、それから水素化ヘキシルで濯ぎ、低圧で乾いて、トルエンとＮａＨを一緒に回流させ、メタノールで反応を終らせる。酸性イオン交換柱で分離、純化し、ＮａＯＨで溶液のｐＨを７．０に調整し、乾いて蒸してＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）ｘを獲得する。
【００３８】
第４工程 金属フレロール顆粒［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎ（１≦ｎ＜２００）の合成
金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２を生理食塩水に溶かして、超音を１分間したら、直径が１−２００ｎｍの粒子［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎ，１＜ｎ＜２００ができる。
【００３９】
（実施例２）
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２水酸基の数の測定
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２（ａ）とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２（ｂ）のＣ１ｓのエレクトロニックＸＰＳグラフは、図３の通りである。Ｃ−ＣとＣ−Ｏキー間の相対的強さはＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘの水酸基の数を分析するのに使う。図２の実線のＨＰＬＣ分析は、分子の中に２種類の炭原子が存在することを表している。ピーク２８４．４ ｅＶのものは、他の基団と連接していないｓｐ２雑化した炭原子（Ｃ−Ｃ）のエネルギー結合であり；ピーク２８５．３ｅＶのものは水酸基化の炭原子（Ｃ−ＯＨ）である。
【００４０】
（実施例３）
Ｌａ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの調製
上記のＧｄ＠Ｃ８２の調製方法に似ている方法でＬａ＠Ｃ８２およびＬａ＠Ｃ６０を調製する。
（１）金属フレロールＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液媒質の中にＬａ＠Ｃ８２と濃さ３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、一連の分離、純化の後、ＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００４１】
（２）金属フレロールＬａ＠Ｃ６０（ＯＨ）２２の合成
ＮａＯＨ法で、トルエン溶液媒質の中にＬａ＠Ｃ８２と濃さ３５％のＮａＯＨ溶液を反応し、一連の分離、純化の後、ＮａＯＨを取り去ってから、純度が９９．９９％以上の産物Ｌａ＠Ｃ６０（ＯＨ）２２を獲得し、冷凍乾燥して保存する。
【００４２】
（実施例４）
ナノ顆粒の測定
金属フレロール分子Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの粒の直径は１ｎｍである。溶剤の環境で、金属フレロールは巨大分子の相互作用によって、ナノ顆粒物になり、超音波などの方法で顆粒のサイズをコントロールし、サイズが１−２００ｎｍの顆粒を構成する。
【００４３】
シンクロトロン放射小角Ｘ線散乱（ＳＲ−ＳＡＸＳ）で、生理食塩水溶液中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の直径範囲は１−２００ｎｍとなり、平均サイズは２２ｎｍであることを測定する。
【００４４】
高分解能原子力顕微鏡で（ＡＦＭ，Nano IIIａ ＳＰＭ，Digital Instruments Inc，３Ａ）生理食塩水溶液中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の直径範囲は１−２００ｎｍであり、平均の直径２２．４ｎｍは存在していることを実証している。図４参照。二つの独立した方法で取得した結果は同じである。
【００４５】
（実施例５）
［Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２］ｎ（１≦ｎ＜２００）を含んでいる注射用溶液
５００ｍｇのＧｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２を４００ｍｌの生理食塩水中に溶け、室温で超音を１分間し、１００個のガラス管に外装して、注射用溶液を作成する。
【００４６】
（実施例６）
マウスの肝臓癌腫瘍に対するＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ組み合わせ物の抑制作用
動物品種：昆明種類雌のマウス、体重は１８〜２２ｇ。
腫瘍モデル：マウス肝臓癌のＨ２２瘤株。
実験グループ：Ａ．陰性対照グループ：生理食塩水（saline）；Ｂ．陽性対照グループ：ＣＴＸ（Cyclophosphamide，ＣＴＸ）、臨床で普遍的に使われる抗癌剤；Ｃ．薬物のグループ：Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ，グループあたり５〜７匹。
薬の方式：腹腔内注射（intraperitoneal，ｉ．ｐ．）。
ＣＴＸとＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ（ｍ＝２２と２６）溶液は０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
使用量：（１×１０−６〜２×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇマウス）
【００４７】
本実験は使用量によって二つのグループ分けられる。
Ａ．高用量のグループ：
ＣＴＸ：３０ｍｇ／ｋｇ（０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ），実験する７日前に注射する；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２，２×１０−４ｍｍｏｌＧｄ／ｋｇ；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６，２×１０−３ｍｍｏｌ／ｋｇ；
注射容積は全て０．２ｍｌ。
【００４８】
低用量のグループ：
ＣＴＸ：１５ｍｇ／ｋｇ（０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ）；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２，１×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇ；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６，１×１０−６ｍｍｏｌ／ｋｇ；
注射容積は全て０．２ｍｌ。
【００４９】
実験方法：マウスの右側後足に肝臓癌のＨ２２瘤株１×１０６癌細胞（１００μｌ０．９％の生理食塩水に分散させる）を接種し、２４時間後一匹あたり０．２ｍｌの薬をやる。実験の間、２４時間ごとに薬を１回やり、１日おきに腫瘍を接種した後足の直径を測量して、成長を記録し、マウスの反応を観察する。生理食塩水のグループの後足が２０ｍｍまで成長したら、実験を終らせる。（マウスの後足は普通６ｍｍである。）
【００５０】
実験終わり：眼球を取り出して採血する。１０９ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸ナトリウム抗凝固剤で、血液と抗凝剤を１：９の比率で；腫瘍を取り出して、重さを計る。臓器／器官を取って重さと計り、臓器の掛け目を計算する。それから１０％のホルマリンで臓器／器官を固める。
【００５１】
実験結果：Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ組み合わせ物の抗肝臓癌活性は表１の通りである。Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨｍのナノ粒子を注射するのとＣＴＸを注射するのは同じようで、マウスの腫瘍成長を抑制することができ、且つ、ナノ材料の腫瘍抑制特徴は、普通の腫瘍抑制の薬物ＣＴＸよりよいのである。
【００５２】
高用量のグループＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が荷瘤マウスの血清ビリルビン、ＡＬＴ、ＡＳＴとイノシンに対する影響は下記の表２通りである。肝臓細胞が損害する最も敏感な指標のＡＬＴとＡＳＴの活性から分析すると、Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２ナノ材料を注射すると、荷瘤マウスの２種類酵素の増加を抑制することができ、普通の水準に達している。しかし、ＣＴＸグループのＡＬＴは増加し、動物肝臓の損傷を増やすのである。
【００５３】
公式Ｖ＝４πｒ３／３によって腫瘍体積を計算し、腫瘍の抑制効率を取得する。低使用量のグループで、０．１μｍｏｌ／ｋｇのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２腫瘍成長の抑制率は３２．９％で（図５と図６）、０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇのＣＴＸ抑制率５２．０％に比べて低いが、その使用量はただＣＴＸの１／５００である。
【００５４】
そして、抑制効率と使用量との関係を比較した。ＣＴＸの使用量を０．０５ｍｍｏｌ／ｋｇ増えたら、腫瘤抑制率は１５％高まり、Ｇｄ＠Ｃ８２ＯＨ２２ナノ材料の使用量を０．１μｍｏｌ／ｋｇ増えたら、その抑制率は２６％上昇した（図７および図８）。
【００５５】
マウスの肝臓癌Ｈ２２モデルグループの腫瘍組織病理切片の結果：
下記の図９を参照、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２治療グループのマウスの腫瘍浸潤範囲はもっと小さく、瘍体は剥離しやすく、腫瘍の重さも明らかに軽くなる。ＨＥ染め切片で見られるように、腫瘍の回りには腫瘤包絡帯を形成（炎症細胞、ファイバーの雌細胞及び毛細血管）して、機体免疫機能を生かせることができる。
対照グループ：腫瘍細胞が骨格筋に浸潤している。
ＣＴＸグループ：腫瘍細胞が大量に壊れたが、腫瘤細胞が骨格筋に浸潤することを防止できない。
【００５６】
【表１】
【００５７】
【表２】
【００５８】
（実施例７）
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍの人間ＭＣＦ−７乳癌、マウス乳癌のモデルに対する腫瘍抑制効果
実験方法：ＢＡＬＢ／ｃ雌のマウス（１６．０±１．０ｇ）の皮下にＭＣＦ−７の細胞液（１×１０７細胞）を接種して、２０日を飼ってから、皮下にできた腫瘍を取り出して、３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍで切り、再びＢＡＬＢ／ｃ雌のマウスに植えて予備用にする。
３日後薬をやり、それぞれＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍ（ｍ＝３２又は１２）、ＣＴＸ、イチイアルコール、生理食塩水をやる。
【００５９】
薬の方法：
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２ ２．５μｍｏｌ／ｋｇ／日×１３日（Ｇｄの濃さで計算する）；注射液の濃さは０．２５μｍｏｌ／ｍｌである。
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２１．０μｍｏｌ／ｋｇ ／日×１３日，Ｇｄの濃さで計算する；注射液の濃さは０．１μｍｏｌ／ｍｌ。
ＣＴＸ 第一週７１．６μｍｏｌ／ｋｇ／日×７日間，第８−１２日生理食塩水
イチイアルコール 第０、３、６、９、１２日は１５．２μｍｏｌ／ｋｇ／日，薬をやらないで、生理食塩水を注射する。
生理食塩水 ０．２ｍｌ ｑ．ｄ．×１３
動物品種： ＢＡＬＢ／ｃ雌のマウス，
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２グループ １０匹；
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２グループ １０匹；
ＣＴＸグループ １０匹；
イチイアルコールグループ ９匹；
生理食塩水グループ ８匹
【００６０】
腫瘍モデル：ＭＣＦ−７の人間乳癌
薬の方式：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
ＣＴＸとＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｍの溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とし、イチイアルコールはビジネス用液体調合剤を使用する。
【００６１】
腫瘍抑制の実験結果は図３の通りである。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２グループは体重２．５μｍｏｌ／ｋｇの時、１３日間薬をやったら、抑制率が４７％に達し；これはＣＴＸグループの体重７１．６μｍｏｌ／ｋｇの時、７日間薬をやって取得した結果と同じである。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２グループは体重１μｍｏｌ／ｋｇの時、１３日間薬をやったら、抑制率が３５．６％に達した。ただし、ＣＴＸグループのマウスは毒副作用が出現して、明らかに体重が軽減したり、痩せたり、元気なかったり等の状態を見られている。イチイアルコールは体重１５．２μｍｏｌ／ｋｇの場合、２日おきに薬をやって、抑制率が８２％に達したが、４５％のマウスが死んでしまい、その毒性が酷い。それに対して、金属フレロールのグループは、実験が終わるまでマウスに明らかな毒性反応が現れなかった。
【００６２】
この実験は目前臨床で普遍的に使用されているＣＴＸ、イチイアルコールに比べて、異なる水酸基の数を持っている金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）は、使用量が少なく、毒性が低く、腫瘍の抑制率が高いなどの優勢があるのである。
【００６３】
【表３】
【００６４】
（実施例８）
マウスのルイス肺癌モデルに対するＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８合わせ物の腫瘍抑制の効果
実験方法：Ｃ５７雌のマウス（１８．０±１．０ｇ）の皮下にルイスの肺癌細胞液を接種して、翌日から薬をやり、それぞれＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８、ＣＴＸ、生理食塩水をやり，グループあたりマウス１０匹。
【００６５】
薬の処方：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
薬の方法：
Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８ １μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×１４
ＣＴＸ 第一週７１．６ μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×７，第８−１４日に生理食塩水をやる
生理食塩水 ０．２ｍｌｑ．ｄ．×１４
ＣＴＸとＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
【００６６】
腫瘍抑制の実験結果は図１０の通りである。Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８は体重１μｍｏｌ／ｋｇの時、１４日間薬をやったら、腫瘍抑制率が明らかで、腫瘍の重さは余り重くなっていない。これはＣＴＸグループの体重７１．６μｍｏｌ／ｋｇの時、７日間薬をやって取得した結果と大体同じである。ただし、ＣＴＸグループのマウスは毒副作用が酷い。例えば、明らかに体重が軽減したり、痩せたり、元気ない等の状態を見られている。それに対して、金属フレロールのグループは、実験が終わるまでマウスに明らかな毒性反応が現れなかった。
【００６７】
上記の実験で、目前臨床で普通に使用されているＣＴＸに比べて、金属フレロールＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８ナノ粒子は、使用量が少なく、毒性が低く、且つ腫瘍抑制率が高いなどの優勢があるのである。
【００６８】
（実施例９）
マウスのルイス肺癌に対するＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０の腫瘍抑制の効果
実験方法：Ｃ５７雌のマウス（２０．０±１．０ｇ）の皮下にルイス肺癌細胞液（１×１０７細胞）を接種して、翌日から薬をやり、それぞれＧｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０、生理食塩水をやる。グループあたりマウス１０匹。Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０溶液は、０．９％の生理食塩水を溶剤とする。
【００６９】
薬の処方：腹腔内注射（intraperitoneal injection，ｉ．ｐ．）。
薬の方法：
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０ ０．５μｍｏｌ／ｋｇ ｑ．ｄ．×１８
生理食塩水 ０．２ｍｌｑ．ｄ．×１８
Ｇｄ＠Ｃ６０（ＯＨ）２０は体重０．５μｍｏｌ／ｋｇの時、１８日間薬をやったら、腫瘍抑制率が明らかで、生理食塩水グループと比べ、接種した腫瘍の体積が余り大きくならなく、抑制率が４２％に達した。
【００７０】
（実施例１０）
細胞毒性の試験
実験方法：
（１）ＭＴＴ法による金属フレロールが異なる種類の癌細胞の生存率に与える影響分析
ＭＴＴ法：１Ｈ−テトラゾール類染料の１つとしてのＭＴＴがセルに入ってから、ＳＡＤ（琥珀酸脱水素酵素など）によって不溶性有色産物に還元される。光吸収の方法によって、有色産物の量を測定し、それによって間接的に細胞の活性が反映される。
対数成長期の細胞を単個細胞浮遊液に消化し、その濃度を２×１０４／ｍｌに調合して、９６穴のセル育成プレートに接種して、穴あたり１００μｌ接種し、使用量によって６つのグループに分け、グループあたり８個の８繰り返された穴がある。２４時間後、オリジナルの培地を無血清の培地に替える。１穴に１００μｌで、使用量グループの濃度によって、薬物を入れる。４８時間引き続き培養して、上に浮かぶ部分を捨てて、各穴に１００μｌ ＭＴＴ緩衝液と１０μｌ ＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を入れ、３時間引き続き培養してから，上に浮かぶ部分を捨てて、１Ｈ−テトラゾール類染料の１つとしてのＭＴＴがセルに入ってから、ＳＡＤ（琥珀酸脱水素酵素など）によって不溶性有色産物に還元される。光吸収の方法によって、有色産物の量を測定し、それによって間接的に細胞の活性が反映されられる。各穴にＤＭＳＯ１５０μｌを入れ、揺るがして、自動酵素サインメーターによって、５９５ｎｍでの各穴の吸収した値を測定する。
【００７１】
（２）フローサイトメトリー（Flow cytometry）分析法：ＰＩ（propidium iodide）アポトーシスセル数染色測定
濃度１０５／ｍｌのセルを５ｍｌ培養瓶に接種して、２４時間後、５ｍｌの無血清培地に替えて、それぞれ異なった濃度の金属フレロールを追加して、２４時以降セルを取り入れる。培地の中の少量セルをも含める。取り入れておいたセルを生理食塩水溶液で二度洗って、４℃で７０％のエタノールで固定させる。分析が行われる前、生理食塩水溶液で二度と洗って、最後に生理食塩水溶液でセルを浮遊させる。２５ｐｐｍのＲＮａｓｅＡと５０ｐｐｍのpresidiumヨウ化物（ＰＩ）を追加して、３７℃の水溶液の中に３０分間放置した後、ナイロンのガーゼで濾過してから機械測定をあげる。ＰＩは完全な細胞膜に対する透過性がないが、アポトーシス中晩期の細胞核が赤色蛍光で染色させられる。ＤＮＡがＰＩと染色結合後、フローサイトメータ（ＦＣＭ）器具で分析する。アポトーシスセルの量はＧ１ピークの横で現れるＡｐピークによって測定される。
【００７２】
実験の結果例：
［１］ＭＴＴ法による金属フレロールが人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞の生存率に与える影響分析
Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の最終濃度が１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内にあって、実験の結果が図１１の示したようである。細胞の活性が薬物追加されない細胞よりある程度増加してきたが、薬物の各投与量組の間の差があまり大きくない。明らかな線形関係がもない。
【００７３】
［２］フローサイトメトリー（Flow cytometry）による金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞への毒性分析
結果が図１２の示したように、細胞のアポトーシス比率は皆３．５％〜７％間にあって、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、細胞のアポトーシス比率が参照組と殆ど一致していて、薬物の各投与量組の間には著しい差がない。Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２はＨｅｐＧ２細胞がアポトーシスするように誘導せず、細胞の増殖と成長には影響与えられないと示している。
【００７４】
［３］フローサイトメトリー（Flow cytometry）によるＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がネズミの肝臓癌Ｒｈ３５細胞への毒性分析
結果は図１３の示したように、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、誘導剤追加しない参照組と比べて、細胞アポトーシス比率が相当なレベルで、アポトーシス細胞の比率は皆２．０％〜３．５％の間で、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がネズミの肝臓癌Ｒｈ３５細胞をアポトーシスするように誘導しないと示している。
【００７５】
［４］フローサイトメトリー（Flow cytometry）によるＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳癌ＭＣＦ−７細胞への毒性分析
結果は図１４の示したように、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２の最終濃度は１０〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、参照組細胞のアポトーシス率と相当で、３．０％〜９％の間で、Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳癌ＭＣＦ−７細胞をアポトーシスするように誘導しないと示して、細胞への毒性が比較的小さい。
【００７６】
［５］ＭＴＴ法による金属フレロールが神経膠質のこぶ細胞の生存率への影響分析
Ｌａ＠Ｃ８２（ＯＨ）２０の最終濃度は１００〜１０６ｎｍｏｌ／Ｌ範囲内で、実験の結果の図１５の示したように、細胞の生存率がと薬物追加しない参照組と殆ど一致していて、神経膠質のこぶ細胞の生長へ明らかな影響がない。
【００７７】
上記の異なった濃度の金属フレロールが多様の腫瘍細胞に対する細胞毒性実験の結果から見ると、１０−１００００００ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度範囲内、金属フレロールが異なったタイプの腫瘍細胞株の生長へ影響与えないもので、細胞がアポトーシスするように誘導しない。同時に細胞の生存率が薬物追加しない参照組と一致していて、金属フレロールが直接の細胞毒性がなく、直接に細胞を殺さないと示している。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１はＭ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘの分子構造図である。
【図２】図２はＧｄ＠Ｃ２ｍのＨＰＬＣの分離結果図である。（５ＰＢＢ柱）。
【図３】図３はＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２（ａ）とＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）１２（ｂ）のＣ１ｓ電子ＸＰＳスペクトルである。
【図４】図４は生理食塩水溶液の中の［Ｇｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２］ｎのナノ顆粒の高分解能ＡＦＭの図である。
【図５】図５はＧｄ＠８２（ＯＨ）２２の低用量の組をマウスに注射後、マウスのＨ２２肝臓癌の成長グラフである。
【図６】図６はＧｄ＠８２（ＯＨ）２２の高用量の組をマウスに注射後、マウスのＨ２２肝臓癌の成長グラフである。
【図７】図７はＣＴＸ組の腫瘤抑制率と用量関係グラフである。
【図８】図８はＧｄ＠Ｃ８２ＯｘＨｙ組の腫瘤抑制率と用量関係グラフである。
【図９】図９はマウスの肝臓癌Ｈ２２のモデル、異なる治療組の腫瘤病組織の病理切片写真である。その中で、Ａ、Ｂは対比組であり；Ｃ、ＤはＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２治療組であり；Ｅ、Ｆはシクロホスファミド治療組である。
【図１０】図１０はＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）１８の注射後、マウスのLewis肺癌の成長グラフである。
【図１１】図１１は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２の人の肝臓癌ＨｅｐＧ２に対する細胞生存率の影響である。
【図１２】図１２は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２２が人の肝臓癌ＨｅｐＧ２細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１３】図１３は金属フレロールのＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）２６がマウスの肝臓癌Ｒｈ３５細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１４】図１４は金属フレロールＧｄ＠Ｃ８２（ＯＨ）３２が乳腺癌ＭＣＦ−７細胞を死亡に誘導するパーセンテージである。
【図１５】図１５は金属フレロールのＬａ＠Ｃ８２（ＯＨ）２０神経ゴム腫瘤細胞生存率に対する影響である。
【符号の説明】
【００７９】
図１１、１２、１３と１４で、横座標の数値はＭ＠Ｃ８２（ＯＨ）ｘモル濃度の累乗。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式で表されることを特徴とする金属フレロール：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＬａ又はＧｄを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項２】
下記の一般式で表される金属フレロールを含むことを特徴とする腫瘍抑制の組成物：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＧｄ又はＬａを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項３】
下記の一般式で表される金属フレロールナノメートルの粒子を含むことを特徴とする腫瘍抑制の組成物：
［Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ］ｎ、
式中、ＭはＧｄ又はＬａを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０、ｎは集まって前記金属フレロールナノメートルの粒子になる金属フレロールの分子数を表し、１≦ｎ＜２００。
【請求項４】
前記組成物が、溶剤及び／又は薬学上で受け入れられるキャリヤーを含む請求項２又は３に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項５】
前記溶剤が、水、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ溶液又は燐酸塩緩衝液体である請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項６】
前記組成物中において、溶剤中の金属フレロールの濃度が、１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌである請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項７】
前記組成物中において、溶剤中の金属フレロールの濃度が、１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌである請求項５に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項８】
前記腫瘍が、肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸の結腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣の癌、骨肉腫、血管の肉腫、リンパ肉腫、白血病、黒色素瘤又は皮膚癌を含む請求項２又は３又は５又は６又は７に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項９】
前記腫瘍が、肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸の結腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣の癌、骨肉腫、血管の肉腫、リンパ肉腫、白血病、黒色素瘤又は皮膚癌を含む請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項１０】
金属フレロールが下記の一般式で表されることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための金属フレロールの使用：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＬａ又はＧｄを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項１１】
前記薬物が各種類の剤形に製造され、これらの剤形に対応する金属フレロールの投与量が５×１０−８〜１×１０−２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日になることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための請求項１０に記載の金属フレロールの使用。
【請求項１２】
前記薬物が各種類の剤形に製造され、これらの剤形に対応する金属フレロールの投与量が５×１０−６〜１．２５×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日になることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための請求項１１に記載の金属フレロールの使用。
【請求項１】
下記の一般式で表されることを特徴とする金属フレロール：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＬａ又はＧｄを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項２】
下記の一般式で表される金属フレロールを含むことを特徴とする腫瘍抑制の組成物：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＧｄ又はＬａを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項３】
下記の一般式で表される金属フレロールナノメートルの粒子を含むことを特徴とする腫瘍抑制の組成物：
［Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ］ｎ、
式中、ＭはＧｄ又はＬａを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０、ｎは集まって前記金属フレロールナノメートルの粒子になる金属フレロールの分子数を表し、１≦ｎ＜２００。
【請求項４】
前記組成物が、溶剤及び／又は薬学上で受け入れられるキャリヤーを含む請求項２又は３に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項５】
前記溶剤が、水、生理食塩水、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ溶液又は燐酸塩緩衝液体である請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項６】
前記組成物中において、溶剤中の金属フレロールの濃度が、１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌである請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項７】
前記組成物中において、溶剤中の金属フレロールの濃度が、１×１０−５〜１ｍｍｏｌ／Ｌである請求項５に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項８】
前記腫瘍が、肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸の結腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣の癌、骨肉腫、血管の肉腫、リンパ肉腫、白血病、黒色素瘤又は皮膚癌を含む請求項２又は３又は５又は６又は７に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項９】
前記腫瘍が、肺癌、肝臓癌、胃癌、食道癌、直腸の結腸癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、卵巣の癌、骨肉腫、血管の肉腫、リンパ肉腫、白血病、黒色素瘤又は皮膚癌を含む請求項４に記載の腫瘍抑制の組成物。
【請求項１０】
金属フレロールが下記の一般式で表されることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための金属フレロールの使用：
Ｍ＠Ｃ２ｍ（ＯＨ）ｘ、
式中、ＭはＬａ又はＧｄを表し、ｍ＝４１又は３０、１０≦ｘ＜５０。
【請求項１１】
前記薬物が各種類の剤形に製造され、これらの剤形に対応する金属フレロールの投与量が５×１０−８〜１×１０−２ｍｍｏｌ／ｋｇ／日になることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための請求項１０に記載の金属フレロールの使用。
【請求項１２】
前記薬物が各種類の剤形に製造され、これらの剤形に対応する金属フレロールの投与量が５×１０−６〜１．２５×１０−４ｍｍｏｌ／ｋｇ／日になることを特徴とする、腫瘍抑制の薬物を製造するための請求項１１に記載の金属フレロールの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２００９−５１１４３２（Ｐ２００９−５１１４３２Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３１５１１（Ｐ２００８−５３１５１１）
【出願日】平成１８年９月１５日（２００６．９．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００６／００２４０５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３３５７８
【国際公開日】平成１９年３月２９日（２００７．３．２９）
【出願人】（５０８０８５６８２）インスティテュート オブ ハイ エナジー フィジックス チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシズ (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年９月１５日（２００６．９．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００６／００２４０５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０３３５７８
【国際公開日】平成１９年３月２９日（２００７．３．２９）
【出願人】（５０８０８５６８２）インスティテュート オブ ハイ エナジー フィジックス チャイニーズ アカデミー オブ サイエンシズ (3)
【Ｆターム（参考）】
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