間葉系様腫瘍細胞またはこの形成を阻害する作用剤の同定のための方法
本発明は、抗癌剤を同定するために、ＥＭＴ過程のモデルとして使用するための腫瘍細胞調製物であって、受容体リガンドにより刺激されてＥＭＴを誘導するか、または、ＥＭＴを促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株ＩＩ３５８の細胞を含む腫瘍細胞調製物を提供する。また、本発明は、このような腫瘍細胞調製物を用いて、ＥＭＴを抑制する作用剤、ＭＥＴを促進する作用剤、または間葉系様細胞の増殖を抑制する作用剤を同定することにより抗癌剤候補を同定する方法も提供する。このような作用剤は、ＥＭＴを起こした腫瘍細胞を抑制するのにはあまり有効ではないと考えられている他の抗癌薬、例えば、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤およびＩＧＦ−ＩＲキナーゼ阻害剤と併用すると特に有用なはずである。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていないＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項１の方法。
【請求項３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項２の方法。
【請求項４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項３の方法。
【請求項５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項１の方法。
【請求項６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項５の方法。
【請求項７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項６の方法。
【請求項８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項７の方法。
【請求項９】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項１の方法。
【請求項１０】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、ＣＤＨ１プロモーター活性、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂ３である、請求項９の方法。
【請求項１１】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項１の方法。
【請求項１２】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項１１の方法。
【請求項１３】
上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞を阻害する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項１４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項１の方法。
【請求項１５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦ−β、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項１４の方法。
【請求項１６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項１５の方法。
【請求項１７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項１３の方法。
【請求項１８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項１７の方法。
【請求項１９】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項１９の方法。
【請求項２１】
被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程の後に、さらに、
間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤が、上皮様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖も阻害するか否かを判定する工程、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を特異的に阻害する作用剤であるか否かを判定する工程
を含む、請求項１３の方法。
【請求項２２】
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程において、被験作用剤が、該腫瘍細胞のアポトーシスを促進することによって、このような阻害をすると判定される、請求項１３の方法。
【請求項２３】
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程において、被験作用剤が、該腫瘍細胞の増殖を阻害することによって、このような阻害をすると判定される、請求項１３の方法。
【請求項２４】
間葉系様腫瘍細胞が間葉から上皮への転換を起こすのを促進する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞において、上皮−間葉転換を誘導すること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項２５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し、これを活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項２４の方法。
【請求項２６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項２５の方法。
【請求項２７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項２６の方法。
【請求項２８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化させる受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項２４の方法。
【請求項２９】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項２８の方法。
【請求項３０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項２９の方法。
【請求項３１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項３０の方法。
【請求項３２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項２４の方法。
【請求項３３】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、ＣＤＨ１プロモーター活性、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂ３である、請求項３２の方法。
【請求項３４】
この量が前記試料腫瘍細胞の前記ＥＭＴ状態を示すものである前記バイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項２４の方法。
【請求項３５】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項３４の方法。
【請求項３６】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料をスクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、該試料を、Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていないＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系への転換を起こすことを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉への転換を起こすのを阻害する作用剤であるか否かを判定すること、
および同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３７】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
その結果、該被験作用剤が、上皮から間葉への転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること、
およびこうして同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３８】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを判定すること、
およびこうして同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３９】
抗癌剤の同定に使用するための間葉系様腫瘍細胞調製物であって、前記腫瘍細胞調製物は
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一もしくは二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導することを含む方法によって調製され、
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体；ＴＧＦβ受容体ＩＩ；ＴＮＦα受容体；またはＩＬ−４受容体に結合し、これを活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択され、ならびに
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化させる受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである
細胞調製物。
【請求項４０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項３９の細胞調製物。
【請求項４１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項４０の細胞調製物。
【請求項４２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項３９の細胞調製物。
【請求項４３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項４２の細胞調製物。
【請求項４４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項４３の細胞調製物。
【請求項４５】
腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、改変されたＨ３５８細胞において上皮から間葉系への転換を促進する該タンパク質の発現を誘導する化合物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない改変されたＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項４６】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項４５の方法。
【請求項４７】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１、Ｓｎａｉｌ、または恒常活性型ＴＧＦβである、請求項４６の方法。
【請求項４８】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項４５の方法。
【請求項４９】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項４８の方法。
【請求項５０】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項４５の方法。
【請求項５１】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂＢ３である、請求項５０の方法。
【請求項５２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである上皮細胞バイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターである、請求項４５の方法。
【請求項５３】
上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項５２の方法。
【請求項５４】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、Ｅ−カドヘリンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項５３の方法。
【請求項５５】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項４５の方法。
【請求項５６】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項５５の方法。
【請求項５７】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである間葉系細胞バイオマーカーが、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項４５の方法。
【請求項５８】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項５７の方法。
【請求項５９】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、ビメンチンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項５８の方法。
【請求項６０】
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項４５の方法。
【請求項６１】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞を阻害する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、該タンパク質発現を誘導して細胞内で上皮−間葉転換を誘導する化合物と接触させること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項６２】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項６１の方法。
【請求項６３】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項６１の方法。
【請求項６４】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項６１の方法。
【請求項６５】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項６４の方法。
【請求項６６】
間葉系様腫瘍細胞が間葉から上皮への転換を起こすのを促進する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、該タンパク質発現を誘導して細胞内で上皮−間葉転換を誘導する化合物と接触させること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを決定すること
を含む方法。
【請求項６７】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項６６の方法。
【請求項６８】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項６６の方法。
【請求項７０】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項６６の方法。
【請求項７１】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項７０の方法。
【請求項７２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターである、請求項６６の方法。
【請求項７３】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂＢ３である、請求項７２の方法。
【請求項７４】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである上皮細胞バイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項６６の方法。
【請求項７５】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、上皮バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項７４の方法。
【請求項７６】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、Ｅ−カドヘリンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項７５の方法。
【請求項７７】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項６６の方法。
【請求項７８】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項７７の方法。
【請求項７９】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである間葉系細胞バイオマーカーが、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項７８の方法。
【請求項８０】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項７９の方法。
【請求項８１】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、ビメンチンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項８０の方法。
【請求項８２】
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項６６の方法。
【請求項８３】
抗癌剤の同定に使用するための腫瘍細胞調製物であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料
を含む腫瘍細胞調製物。
【請求項８４】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８５】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８６】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項８５の腫瘍細胞調製物。
【請求項８７】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項８６の腫瘍細胞調製物。
【請求項８８】
プロモーターレポーター活性をレポーター遺伝子の量または活性で観察することができるように、改変Ｈ３５８細胞の中に安定して取り込まれている上皮および／または間葉系のバイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物をさらに含む、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８９】
レポーター遺伝子の量または活性を利用してＥＭＴ誘導を観察するために、レポーター遺伝子を誘導的に発現するよう、Ｈ３５８細胞がさらに改変されている、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項９０】
Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項９１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項４の方法。
【請求項９２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項１６の方法。
【請求項９３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項２７の方法。
【請求項９４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項４１の方法。
【請求項１】
腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていないＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項１の方法。
【請求項３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項２の方法。
【請求項４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項３の方法。
【請求項５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項１の方法。
【請求項６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項５の方法。
【請求項７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項６の方法。
【請求項８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項７の方法。
【請求項９】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項１の方法。
【請求項１０】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、ＣＤＨ１プロモーター活性、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂ３である、請求項９の方法。
【請求項１１】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項１の方法。
【請求項１２】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項１１の方法。
【請求項１３】
上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞を阻害する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項１４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項１の方法。
【請求項１５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦ−β、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項１４の方法。
【請求項１６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項１５の方法。
【請求項１７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化する受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項１３の方法。
【請求項１８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項１７の方法。
【請求項１９】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項１９の方法。
【請求項２１】
被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程の後に、さらに、
間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤が、上皮様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖も阻害するか否かを判定する工程、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮から間葉系へ転換を起こした腫瘍細胞の増殖を特異的に阻害する作用剤であるか否かを判定する工程
を含む、請求項１３の方法。
【請求項２２】
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程において、被験作用剤が、該腫瘍細胞のアポトーシスを促進することによって、このような阻害をすると判定される、請求項１３の方法。
【請求項２３】
被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８腫瘍細胞の増殖を阻害するか否かを判定する工程において、被験作用剤が、該腫瘍細胞の増殖を阻害することによって、このような阻害をすると判定される、請求項１３の方法。
【請求項２４】
間葉系様腫瘍細胞が間葉から上皮への転換を起こすのを促進する作用剤を同定する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞において、上皮−間葉転換を誘導すること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項２５】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体、ＴＧＦβ受容体ＩＩ、ＴＮＦ受容体、またはＩＬ−４受容体に結合し、これを活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択される、請求項２４の方法。
【請求項２６】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項２５の方法。
【請求項２７】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項２６の方法。
【請求項２８】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化させる受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである、請求項２４の方法。
【請求項２９】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項２８の方法。
【請求項３０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項２９の方法。
【請求項３１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項３０の方法。
【請求項３２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項２４の方法。
【請求項３３】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、ＣＤＨ１プロモーター活性、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂ３である、請求項３２の方法。
【請求項３４】
この量が前記試料腫瘍細胞の前記ＥＭＴ状態を示すものである前記バイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項２４の方法。
【請求項３５】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項３４の方法。
【請求項３６】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料をスクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、該試料を、Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていないＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系への転換を起こすことを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉への転換を起こすのを阻害する作用剤であるか否かを判定すること、
および同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３７】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
その結果、該被験作用剤が、上皮から間葉への転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること、
およびこうして同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３８】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する化合物を含む組成物を調製する方法であって、
皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一または二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導すること、
該試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを判定すること、
およびこうして同定された被験作用剤を担体と混合して、前記組成物を調製すること
を含む方法。
【請求項３９】
抗癌剤の同定に使用するための間葉系様腫瘍細胞調製物であって、前記腫瘍細胞調製物は
上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、単一もしくは二重のタンパク質リガンド調製物と接触させて、Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を誘導することを含む方法によって調製され、
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ受容体；ＴＧＦβ受容体ＩＩ；ＴＮＦα受容体；またはＩＬ−４受容体に結合し、これを活性化するタンパク質リガンドのいずれかから選択され、ならびに
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭのこの受容体への結合によって活性化されるシグナル伝達経路を活性化させる受容体に結合するタンパク質リガンド、それに加えて、チロシンキナーゼ受容体に結合して、ＨＧＦがこの受容体に結合することによって活性化される同じシグナル伝達経路を活性化する一つのリガンドである
細胞調製物。
【請求項４０】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、ＩＬ−４、ＴＧＦα、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ＴＮＦβ、ＴＧＦβ−１、ＴＧＦβ−２、ＴＧＦβ−３、ＴＧＦβヘテロ二量体、またはＩＬ−１３から選択される、請求項３９の細胞調製物。
【請求項４１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、ＥＧＦ、ＴＧＦβ、ＴＮＦα、またはＩＬ−４から選択される、請求項４０の細胞調製物。
【請求項４２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭに結合して、これを活性化する一つのリガンド、それに加えて、ＩＧＦ１−Ｒ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦ受容体のヘテロ二量体、ＲＯＮ、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ−４、ＨＥＲ受容体のヘテロ二量体、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＰＤＧＦＲαα、ＰＤＧＦＲββ、またはＰＤＧＦＲαβに結合して、これを活性化する一つのリガンドである、請求項３９の細胞調製物。
【請求項４３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭと、それに加えて、ＨＧＦ、ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ８、ＦＧＦ１０、ＭＳＰ、ＴＧＦ−α、ＨＢ−ＥＧＦ、アンフィレグリン、ベタセルリン、エピレグリン、エピジェン、ヘレグリン、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＰＤＧＦ−ＡＡ、ＰＤＧＦ−ＡＢ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦ−ＣＣ、またはＰＤＧＦ−ＤＤである、請求項４２の細胞調製物。
【請求項４４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する二重タンパク質リガンドが、オンコスタチンＭ＋ＨＧＦである、請求項４３の細胞調製物。
【請求項４５】
腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該試料を、改変されたＨ３５８細胞において上皮から間葉系への転換を促進する該タンパク質の発現を誘導する化合物と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない改変されたＨ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、試料内の腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、腫瘍細胞が上皮から間葉系へ転換することを阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項４６】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項４５の方法。
【請求項４７】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１、Ｓｎａｉｌ、または恒常活性型ＴＧＦβである、請求項４６の方法。
【請求項４８】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項４５の方法。
【請求項４９】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項４８の方法。
【請求項５０】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカーである、請求項４５の方法。
【請求項５１】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂＢ３である、請求項５０の方法。
【請求項５２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである上皮細胞バイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターである、請求項４５の方法。
【請求項５３】
上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項５２の方法。
【請求項５４】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、Ｅ−カドヘリンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項５３の方法。
【請求項５５】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項４５の方法。
【請求項５６】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項５５の方法。
【請求項５７】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである間葉系細胞バイオマーカーが、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項４５の方法。
【請求項５８】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項５７の方法。
【請求項５９】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、ビメンチンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項５８の方法。
【請求項６０】
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項４５の方法。
【請求項６１】
上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞を阻害する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、該タンパク質発現を誘導して細胞内で上皮−間葉転換を誘導する化合物と接触させること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
該被験作用剤が、間葉系様Ｈ３５８細胞の増殖を阻害するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、上皮−間葉転換を起こした腫瘍細胞の増殖を阻害する作用剤であるか否かを判定すること
を含む方法。
【請求項６２】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項６１の方法。
【請求項６３】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項６１の方法。
【請求項６４】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項６１の方法。
【請求項６５】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項６４の方法。
【請求項６６】
間葉系様腫瘍細胞が間葉から上皮への転換を起こすのを促進する作用剤を同定する方法であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料を、該タンパク質発現を誘導して細胞内で上皮−間葉転換を誘導する化合物と接触させること、
該細胞試料を、スクリーニング対象である被験作用剤と接触させること、
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーの量を、被験作用剤に接触させていない間葉系様Ｈ３５８細胞の同一試料における同一のバイオマーカーの量と比較することにより、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう試料内の間葉系様Ｈ３５８細胞を刺激するか否かを判定すること、
およびその結果、該被験作用剤が、間葉系から上皮への転換を起こすよう間葉系様腫瘍細胞を刺激する作用剤であるか否かを決定すること
を含む方法。
【請求項６７】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項６６の方法。
【請求項６８】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項６６の方法。
【請求項７０】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項６６の方法。
【請求項７１】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項７０の方法。
【請求項７２】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターである、請求項６６の方法。
【請求項７３】
上皮細胞バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、サイトケラチン８、サイトケラチン１８、Ｐ−カドヘリン、またはｅｒｂＢ３である、請求項７２の方法。
【請求項７４】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである上皮細胞バイオマーカーが、上皮細胞バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項６６の方法。
【請求項７５】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、上皮バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項７４の方法。
【請求項７６】
上皮バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、Ｅ−カドヘリンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項７５の方法。
【請求項７７】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものであるバイオマーカーが、間葉系細胞バイオマーカーである、請求項６６の方法。
【請求項７８】
間葉系細胞バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、Ｎ−カドヘリン、ＣＤＨ１メチル化、ｚｅｂ１、ｔｗｉｓｔ、ＦＯＸＣ２、またはｓｎａｉｌである、請求項７７の方法。
【請求項７９】
この量が試料腫瘍細胞のＥＭＴ状態を示すものである間葉系細胞バイオマーカーが、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性である、請求項７８の方法。
【請求項８０】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物を改変Ｈ３５８細胞の中に含ませて、該プロモーターレポーター活性を、レポーター遺伝子の量または活性で観察することができるようにすることによって、間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーターの活性を評価する、請求項７９の方法。
【請求項８１】
間葉系バイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物が、ビメンチンプロモーター−蛍ルシフェラーゼ構築物である、請求項８０の方法。
【請求項８２】
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項６６の方法。
【請求項８３】
抗癌剤の同定に使用するための腫瘍細胞調製物であって、
Ｈ３５８細胞における上皮−間葉転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料
を含む腫瘍細胞調製物。
【請求項８４】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβ；同時発現されるＨＧＦおよびＯＳＭ；ＴＮＦα；恒常活性型ｃＭＥＴ受容体；活性化Ｓｒｃキナーゼ；ｖ−Ｓｒｃ；Ｓｒｃ Ｙ５３０Ｆ変異体；ＩＬ−４；ＩＬ−１３；ＥＧＦ；ＴＧＦ−α；ＨＢ−ＥＧＦ；アンフィレグリン；ベタセルリン；エピレグリン；エピジェン；またはＴＮＦβである、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８５】
誘導的に発現されて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質が、Ｚｅｂ−１；Ｓｎａｉｌ；恒常活性型ＴＧＦβである、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８６】
Ｔｅｔ−制御プロモーターを用いて、Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現させる、請求項８５の腫瘍細胞調製物。
【請求項８７】
Ｔｅｔ−制御プロモーターがＴｅｔ−ｏｎ系である、請求項８６の腫瘍細胞調製物。
【請求項８８】
プロモーターレポーター活性をレポーター遺伝子の量または活性で観察することができるように、改変Ｈ３５８細胞の中に安定して取り込まれている上皮および／または間葉系のバイオマーカー遺伝子プロモーター−レポーター遺伝子構築物をさらに含む、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項８９】
レポーター遺伝子の量または活性を利用してＥＭＴ誘導を観察するために、レポーター遺伝子を誘導的に発現するよう、Ｈ３５８細胞がさらに改変されている、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項９０】
Ｈ３５８細胞における上皮から間葉系への転換を促進するタンパク質を誘導的に発現するよう改変されている上皮腫瘍細胞株Ｈ３５８の細胞試料が、動物の体内で増殖する異種移植片である、請求項８３の腫瘍細胞調製物。
【請求項９１】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項４の方法。
【請求項９２】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項１６の方法。
【請求項９３】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項２７の方法。
【請求項９４】
Ｈ３５８細胞において上皮−間葉転換を誘導する単一タンパク質リガンドが、任意にＯＳＭまたはＨＧＦを加えられたＴＧＦβである、請求項４１の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ−１】
【図１１Ｂ−２】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１６Ｃ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９Ａ】
【図９Ｂ】
【図１０】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ−１】
【図１１Ｂ−２】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１３Ｃ】
【図１４】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１６Ｃ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１７Ｃ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【公表番号】特表２０１１−５１６８２６（Ｐ２０１１−５１６８２６Ａ）
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５４９６７５（Ｐ２０１０−５４９６７５）
【出願日】平成２１年３月６日（２００９．３．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００１４５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１１０６７
【国際公開日】平成２１年９月１１日（２００９．９．１１）
【出願人】（５１０１４３２６２）オーエスアイ・フアーマスーテイカルズ・インコーポレーテツド (8)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月６日（２００９．３．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００１４５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１１０６７
【国際公開日】平成２１年９月１１日（２００９．９．１１）
【出願人】（５１０１４３２６２）オーエスアイ・フアーマスーテイカルズ・インコーポレーテツド (8)
【Ｆターム（参考）】
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