説明

顕微鏡照明装置

【課題】光源からの照明光を無駄なく試料面に投影するためのフライアイ光学系を提供する。
【解決手段】光源から射出した発散光を平行光束に変換するコレクタレンズと、前記コレクタレンズの後側焦点位置近傍に配置されたフライアイレンズと、前記フライアイレンズにより結像された複数光源像を対物レンズの瞳に投影する落射投光管光学系と、前記対物レンズより射出された観察光を結像する結像レンズと、前記対物レンズと前記落射投光管光学系の間に配置された、少なくともーつのフィルターを有する蛍光キューブをそなえる顕微鏡照明装置において、以下の条件式
γ2・ffly・D < γ・ffly・φ−h・p
を満たす。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、顕微鏡照明装置に関する。
【背景技術】
【0002】
従来の顕微鏡照明装置においては、ケーラー照明が備えられた顕微鏡照明装置が一般的に利用されている。このケーラー照明は光源の配光特性に対応する僅かなムラは見られるが、光源内の位置による輝度分布に対応するムラは見られない。そのため、照明ムラが発生しにくい最適な照明装置であるとして普及されてきた。
【0003】
しかし、近年のCCDなどの光電変換素子の技術改良や普及により、顕微鏡分野においてもデジタル画像の撮影が一般化された結果、目視での観察では気にならない僅かな照明ムラでも、照明ムラが目立つ傾向にあり、これが問題となるようになった。
【0004】
この照明ムラを軽減する技術としてフライアイレンズを利用したものが知られている。例えば、特許文献1や特許文献2では、コレクタレンズの後ろ側焦点位置にフライアイレンズが設けられ、このフライアイレンズのフライアイレンズ素子に形成された疑似面光源を開口絞り及び投光レンズに投影させ、角度による照明ムラを解消した顕微鏡照明装置が開示されている。
【0005】
しかし、フライアイレンズを利用した照明光学系は通常の照明光学系と比べて複雑になってしまう。その結果、試料面に投影するまでの光路の途中で照明光の欠損が起きてしまうことがあった。
【特許文献1】特開2002−6225号公報
【特許文献2】特開2005−43517号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【0006】
そこで本発明では、光源からの照明光を無駄なく試料面に投影するためのフライアイ光学系を提供する。
【課題を解決するための手段】
【0007】
本発明の上記課題は、光源から射出した発散光を平行光束に変換するコレクタレンズと、前記コレクタレンズの後側焦点位置近傍に配置されたフライアイレンズと、前記フライアイレンズにより結像された複数光源像を対物レンズの瞳に投影する落射投光管光学系と、
前記対物レンズより射出された観察光を結像する結像レンズと、前記対物レンズと前記落射投光管光学系の間に配置された、少なくともーつのフィルターを有する蛍光キューブを備えた顕微鏡照明装置において、以下の条件式
γ2・ffly・D < γ・ffly・φ−h・p ・・・(8)’
を満たすことによって解決される。
【0008】
ただし、γは前記落射投光管光学系の投影倍率であり、fflyは前記フライアイレンズの焦点距離であり、Dは前記フライアイレンズの有効径であり、φは前記蛍光キューブ内の前記フィルターの有効径であり、hは前記フィルターと前記対物レンズの瞳位置の間の距離であり、pは前記フライアイレンズのピッチ間隔である。
【0009】
上記条件式を満たすことにより、蛍光キューブ内のフィルター(典型的には励起フィルター)によるケラレが避けられ、視野周辺においても均質な照明が達成される。
上記構成に加えて、以下の条件式
18.0・γ・ffly<p・β・fOB<26.5・γ・ffly ・・・(11)’
を満たすことが好ましい。ただし、βは前記対物レンズの倍率であり、fOBは前記対物レンズの焦点距離である。
【0010】
顕微鏡の対物レンズには視野数と呼ばれる見掛けの視野を定める性能があり、この値は人間の視野角に合わせて、18.0から26.5までの範囲で設計される。すなわち、この範囲を超えた照明範囲はオーバースペックであり、また、この範囲を下回っては目的を達していない。上記条件式を満たすような顕微鏡照明装置では、視野数の範囲を考慮した最適な照明が実現される。
【0011】
上記条件式(11)’を、以下の条件式
18.0・γ・ffly<p・fTL<26.5・γ・ffly ・・・(12)’
に置き換えても、同等の効果を持つ顕微鏡照明装置が実現される。ただし、fTLは前記結像レンズの焦点距離である。
【0012】
顕微鏡の対物レンズは無限遠補正型と呼ばれるものであり、結像レンズと共に利用される。そのとき、対物レンズの倍率βは対物レンズの焦点距離fOBと結像レンズの焦点距離fTLをつかってfTL=fOB・βと表現される。この関係式により、条件式(12)’は条件式(11)’と同等であることが解る。
【0013】
また、前記光源の最大直径をaとし、前記フライアイレンズの焦点距離をffly とし、前記コレクタレンズの焦点距離をfclとしたとき、以下の条件式
a・(ffly/fcl)≦ p ・・・(1)
を満たすことが好ましい。
【0014】
上記条件を満たす顕微鏡照明装置ではフライアイレンズでの照明光の欠損を防ぐことができる。
また、前記光源の最大直径をaとし、前記フライアイレンズの焦点距離をffly とし、前記コレクタレンズのNAをNAclとし、前記フライアイレンズのピッチ間隔をpとし、以下の条件式
D≧2a・ffly・NAcl/p ・・・(2)
を満たすことも好ましい。
【0015】
上記条件を満たす顕微鏡照明装置でもフライアイレンズでの照明光の欠損を防ぐことができる。
さらに、前記対物レンズの瞳径をqとしたとき、以下の条件式
D≦q/γ
を満たすことも好ましい。上記条件を満たすことによって、対物レンズの瞳径での欠損を防ぐことができる。
【発明の効果】
【0016】
本発明によれば、光源からの照明光を無駄なく試料面に投影するためのフライアイ光学系を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【0017】
以下、本発明の実施の形態について図を参照して説明を行う。
図1はフライアイレンズの形状の一例を示した図である。図1(a)の上面図に示されるように、フライアイレンズ1は小型のエレメンタルレンズ2を規則正しく配置して作られた光学素子である。そしてこの形状により、フライアイレンズまたはレンズアレイと呼ばれる。
【0018】
図1(b)はフライアイレンズ1の断面を示す略図である。同図に示されるように、フライアイレンズ1のエレメンタルレンズ2の曲率は表面と裏面で光軸が一致するように配置されている。また、図1(c)はフライアイレンズ1の変形例の断面を示す略図である。同図に示されるフライアイレンズ1は凸平フライアイレンズを2枚組み合わせたような構成をしている。この構成によるフライアイレンズ1は焦点距離が長いものに対し、製造が容易である。
【0019】
図2はフライアイレンズを顕微鏡の落射照明光学系に組み入れた場合の全体の概略図である。同図に示された顕微鏡の照明光学系は、照明光を放射する光源3と、照明光を平行光束化するコレクタレンズ4と、平行光束中に配置されたフライアイレンズ1と、フライアイレンズ1によって作られる光源3の像を対物レンズ6の瞳位置7に投影する投光管光学系8,9を備え、投光管光学系8、9の間には視野絞り10が配置されている。
【0020】
本構成の顕微鏡の観察光学系は、主に対物レンズ6と結像レンズによって構成され、いわゆる無限遠補正型の光学系をなしている。また、照明光学系と観察光学系は、対物レンズ6と結像レンズ11の間に配置されたダイクロイックミラー12によって分離され、そのダイクロイックミラー12の付近にはより光線分離を確実にするために励起フィルター13とバリアフィルター14を備えている。
【0021】
次に本構成における光線の流れを説明する。光源3から放射された照明光はコレクタレンズ4によって平行光束に変換され、フライアイレンズ1に照射される。このとき、フライアイレンズの焦点距離をフライアイレンズ1の表面と裏面の間の距離程度に設計しておけば、フライアイレンズ1の射出面付近に、光源3の像がエレメンタルレンズの数だけ結像する。つまり、フライアイレンズ1の射出面にが多数の小光源(光源3の像5、5’、…)で構成された新しい光源と見做すことができる。
【0022】
このとき、光源3の像5、5’、…は光源3から射出される照明光の射出角度に対応して輝度が決まる。つまり光源3の像5、5’、…は光源3の配光分布を分割した光源となっている。そこで、フライアイレンズ1の射出面を対物レンズ6の瞳面(あるいは瞳面の共役の位置)に設定することにより、光源3の配光特性を打ち消した照明が実現される。
【0023】
投光管光学系8、9はフライアイレンズ1の射出面に形成される面光源を対物レンズ6の瞳面にリレーする。本構成の投光管光学系は正パワーのレンズ8と正パワーのレンズ9によって構成され、正パワーのレンズ8と正パワーのレンズ9の間には標本面と共役な面ができる構成となっている。つまり、この標本面と共役な面に視野絞り10を配置することによって、標本面での照明範囲を調節することができる。
【0024】
本構成の観察光学系は無限遠補正型となっている。すなわち、対物レンズ6と結像レンズ11の間では、標本から光線追跡を行った場合に平行光束となっている。このことによって、対物レンズ6と結像レンズ11の間の光束中にダイクロイックミラー12を配置した場合でも結像に影響が少ない。
【0025】
以上のようにフライアイレンズを用いた照明は光源の配光特性によるムラを補正することが出来るが、照明光の欠損を考慮する必要がある場合がある。そこで、以下ではフライアイレンズを使った照明光学系の最適化に関して説明する。
【0026】
図3は光源3からフライアイレンズ1の射出面までの光学系を抜き出したものである。さらに図3では光学系の最適化のために必要なパラメータを付している。
同図において、光源3の最大直径をaとする。また、コレクタレンズ4の焦点距離をfclとし、開口数をNAclとする。フライアイレンズ1の焦点距離はfflyである。なお、ここでの光源3は、フライアイレンズの照明光学系の性能を議論するために、理想的に直径aの円形で輝度分布が一定なものを考える。例えばそのような光源としては、LEDのような面光源や、インテグレーターロッドの端面等の2次光源が考えられるが、本発明がこれらの光源に限定されるものではない。
【0027】
このとき、フライアイレンズ1の射出面における光源3の像の最大直径をbとすると、b=a×ffly/fclで与えられる。また、コレクタレンズ4から射出される光束径をD’とすると、D’=2fcl×NAclで与えられる。このとき、コレクタレンズ4の有効径を十分に大きくしておけば、コレクタレンズ4から射出される光束径D’は後段のフライアイレンズ1の有効径Dと見做しうる。
【0028】
ここで一つの条件が与えられる。つまり、光源の像5の大きさがフライアイレンズ1のエレメンタルレンズ2の内接円の直径(すなわちピッチ間隔)を上回った場合は、光源3の像がエレメンタルレンズ2の内径によってケラレてしまい好ましくない。つまり、本発明で利用される最適化の条件は
b=a×(ffly/ fcl )≦p ・・・(1)
である。ただし、エレメンタルレンズ2のピッチ間隔をpとする。図3はこの条件を図示したものである。
【0029】
また、この条件は
D’≧2a×ffly×NAcl/p ・・・(2)
とも表現される。
【0030】
次に、図4を使ってフライアイレンズ1から対物レンズ6の瞳位置7までの光路で生じる照明光の欠損を説明する。同図は図2におけるフライアイレンズ1から標本面までの光線図を、便宜上ダイクロイックミラー12で折り返さずに記載したものである。さらに必要な光学的パラメータを付している。
【0031】
フライアイレンズ1の端面から射出した照明光のNAをNAflyとし、これが投光管光学系8,9を通じて対物レンズ6の瞳位置7に入射するときのNAをNAOBとすると、投光管光学系8、9の投影倍率γを使って以下のように表現される。
【0032】
NAfly=γNAOB ・・・(3)
ここで、投光管光学系8、9の焦点距離をそれぞれf、fと置けば、γ=f/fとなる。
【0033】
また、フライアイレンズ1の有効径をDとし、対物レンズ6の瞳位置7での投影像の径をq’とすると、
q’=γD ・・・(4)
という関係が成り立つ。この値q’が対物レンズ6の瞳径qよりも小さいことが好ましいので、
q>γD ・・・(5)
という条件ができる。
【0034】
このとき、照明光が励起フィルター13によってケラレが生じない条件は
φBP>q’+2h・NAOB ・・・(6)
となる。
【0035】
一方、フライアイレンズ1の端面から射出した照明光のNAは、
NAfly=p/2ffly ・・・(7)
となる。
【0036】
よって上記の(3)、(4)、(6)、(7)から、射出された照明光が励起フィルターによってけられずに対物レンズ6の瞳位置7まで到達するためのフライアイレンズ1の条件は、
【0037】
【数1】

となる。
次に対物レンズが持っている視野数Sと倍率βによる制限を考える。図5はこの視野数Sと倍率βによる制限について模式的に説明したものである。一般に対物レンズには視野数と呼ばれる見掛けの視野範囲を表す性能をもっている。そして実視野範囲はこの視野数Sと倍率βによって、S/βと表される。この視野数は実際的には接眼レンズに配置された視野絞りの大きさを表しているのだが、対物レンズの性能として考えると、瞳位置7での最大の照明光の入射NAを意味する。このことは、条件式(6)との関係を考慮すると、本発明に関連が深い。
【0038】
すなわち、ここに対物レンズの性能から生じる照明光の制限が存在する。たとえムラのない照明が実現されていても、それが必要な範囲を照らしていなければ役に立たないし、逆にあまりにも広い照明範囲を実現しようとしてもオーバースペックとなってしまう。
【0039】
なお、この視野数は見掛けの視野範囲を表していることから、人間の視界の能力に合わせて略決まっており、18.0から26.5の範囲で設計される。
図5より読み取れるように、視野数S、倍率β、焦点距離fOBの対物レンズでは瞳位置7での最大のNAは以下のように表される。
【0040】
【数2】

すなわち、視野数が18.0から26.5の範囲であるときにNA’OBは以下のような範囲をとる。
【0041】
【数3】

そしてこのNA’OBが関係式(3)で与えられるNAOBを制限する。
関係式(3)と関係式(7)を使うと条件式(10)は以下のように書かれる。
【0042】
【数4】

また、対物レンズの倍率βは対物レンズの焦点距離fOBと結像レンズの焦点距離fTLを使って表現できるので、この条件式(11)は以下の表現も可能である。
【0043】
【数5】

以下では、上述の条件式を満たした実施例の数値データを開示する。
【実施例1】
【0044】
以下に示される数値データは、正立型顕微鏡において水銀アーク光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは10倍のものを想定してある。
【0045】
【表1】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例2】
【0046】
以下に示される数値データは、正立型顕微鏡において水銀アーク光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは40倍のものを想定してある。
【0047】
【表2】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例3】
【0048】
以下に示される数値データは、倒立型顕微鏡において水銀アーク光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは100倍のものを想定してある。
【0049】
【表3】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例4】
【0050】
以下に示される数値データは、倒立型顕微鏡においてリキッドファイバーによる2次光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは100倍のものを想定してある。
【0051】
【表4】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例5】
【0052】
以下に示される数値データは、倒立型顕微鏡においてLED光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは10倍のものを想定してある。
【0053】
【表5】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例6】
【0054】
以下に示される数値データは、倒立型顕微鏡においてLED光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは100倍のものを想定してある。
【0055】
【表6】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【実施例7】
【0056】
以下に示される数値データは、倒立型顕微鏡においてLED光源を使った落射照明を用いたものを想定している。なお、対物レンズのデータは10倍のものを想定してある。
【0057】
【表7】

これらの数値を使った実施例では、上述の条件式(1)(5)(8)(11)を満たすことが容易に確かめられる。
【図面の簡単な説明】
【0058】
【図1】フライアイレンズの形状を説明する図
【図2】フライアイレンズを落射照明光学系に組み入れた概略図
【図3】光源からフライアイレンズの射出面までの光学系の概略図
【図4】フライアイレンズから対物レンズまでの光学系の概略図
【図5】対物レンズの視野数と瞳位置でのNAの関係を説明する図
【符号の説明】
【0059】
1 フライアイレンズ
2 エレメンタルレンズ
3 光源
4 コレクタレンズ
5 光源の像
6 対物レンズ
7 対物レンズの瞳位置
8 投光管光学系
9 投光管光学系
10 視野絞り
11 結像レンズ
12 ダイクロイックミラー
13 励起フィルター
14 バリアフィルター

【特許請求の範囲】
【請求項1】
光源から射出した発散光を平行光束に変換するコレクタレンズと、
前記コレクタレンズの後側焦点位置近傍に配置されたフライアイレンズと、
前記フライアイレンズにより結像された複数光源像を対物レンズの瞳に投影する落射投光管光学系と、
前記対物レンズより射出された観察光を結像する結像レンズと、
前記対物レンズと前記落射投光管光学系の間に配置された、少なくともーつのフィルターを有する蛍光キューブを有する顕微鏡照明装置において、
以下の条件式
γ2・ffly・D < γ・ffly・φ−h・p
を満たすことを特徴とする顕微鏡照明装置。
ただし、γは前記落射投光管光学系の投影倍率であり、fflyは前記フライアイレンズの焦点距離であり、Dは前記フライアイレンズの有効径であり、φは前記蛍光キューブ内の前記フィルターの有効径であり、hは前記フィルターと前記対物レンズの瞳位置の間の距離であり、pは前記フライアイレンズのピッチ間隔である。
【請求項2】
請求項1に記載の顕微鏡照明装置において、以下の条件式
18.0・γ・ffly<p・β・fOB<26.5・γ・ffly
を満たすことを特徴とする顕微鏡照明装置。
ただし、βは前記対物レンズの倍率であり、fOBは前記対物レンズの焦点距離である。
【請求項3】
請求項1に記載の顕微鏡照明装置において、以下の条件式
18.0・γ・ffly<p・fTL<26.5・γ・ffly
を満たすことを特徴とする顕微鏡照明装置。
ただし、fTLは前記結像レンズの焦点距離である。
【請求項4】
前記光源の最大直径をaとし、前記フライアイレンズの焦点距離をffly とし、前記コレクタレンズの焦点距離をfclとしたとき、
以下の条件式
a・(ffly/fcl)≦ p
を満たすことを特徴とする請求項1から請求項3の何れかに記載の顕微鏡照明装置。
【請求項5】
前記光源の最大直径をaとし、前記フライアイレンズの焦点距離をffly とし、前記コレクタレンズのNAをNAclとし、前記フライアイレンズの素子の内接直径をpとし、以下の条件式
D≧2a・ffly・NAcl/p
を満たすことを特徴とする請求項1から請求項4の何れかに記載の顕微鏡照明装置。
【請求項6】
前記対物レンズの瞳径をqとしたとき、以下の条件式
D≦q/γ
を満たすことを特徴とする請求項1から請求項5の何れかに記載の顕微鏡照明装置。

【図1】
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【図2】
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【図3】
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【図4】
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【図5】
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