ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とビンクリスチンとを含有する抗腫瘍組合せ
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体とビンクリスチンとを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体とビンクリスチンとの組合せに関する。これは腫瘍疾患の治療において治療上有用である。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋から環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換を触媒しうる、そしてまた、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへと加水分解しうる二官能性エクト酵素である。ＣＤ３８はアップレギュレーションされ、多数の造血悪性疾患に関連づけられている。
【０００３】
ＣＤ３８を特異的に認識するモノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９はＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されている。前記抗ＣＤ３８抗体は、３つの異なる細胞傷害メカニズム、すなわち、アポトーシスの誘導、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により、ＣＤ３８＋細胞を殺しうる。また、これらの抗体は、ストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの存在を伴わない場合であっても、ＣＤ３８＋細胞のアポトーシスを直接的に誘導しうる。ビンクリスチンは、化学療法において使用されるアルカロイドである。癌の治療に使用されうる新規かつ有効な医薬が尚も必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００８／０４７２４２号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ヒト化抗ＣＤ３８抗体が少なくとも１つの物質と組合されて投与されると、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の効力が相当に改善されうることが、今回、本発明で見出された。前記の少なくとも１つの物質は抗癌治療において治療上有用な物質であり、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の１つと同じ又は異なるメカニズムを有し、本発明においてはビンクリスチンに限定される。
【０００６】
「抗体」なる語は本明細書においては最も広い意味で用いられ、特に、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのような任意のイソタイプのモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体および抗体フラグメントを含む。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により連結された２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖から構成される。各重鎖および軽鎖は定常領域および可変領域を含有する。各可変領域は、主として抗原のエピトープへの結合をもたらす「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と称される３つのセグメントを含有する。それらは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（Ｎ末端から順次番号付けされている）と称される。ＣＤＲ以外の可変領域の、より高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と称される。
【０００７】
本明細書中で用いる「ＶＨ」または「ＶＨ」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を意味する。「ＶＬ」または「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの軽鎖を含む抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を意味する。
【０００８】
３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号３８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１、２および３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号４、５および６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【０００９】
３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号７、８および９よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１０】
３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１３、１４および１５よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１１】
３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１２】
３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１３】
３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１４】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９マウス抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞系はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｉｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）に２００６年６月２１日付けでそれぞれＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８およびＰＴＡ−７６７１の寄託番号として寄託されている（ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されているとおり）。
【００１５】
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を意味する。ヒト化の目的は、ヒト体内への導入のために、異種抗体、例えばマウス抗体の免疫原性を、前記抗体の完全抗原結合アフィニティおよび特異性を維持しながら、軽減することである。ヒト化抗体、または他の哺乳類による非拒絶に適合化された抗体は、例えばリサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲグラフティングのような幾つかの技術を用いて製造されうる。本明細書中で用いるリサーフィシング技術は、標的宿主の既知抗体の表面に類似したものとするために抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変するために分子モデリング、統計解析および突然変異誘発の組合せを利用する。ＣＤＲグラフティング技術は、例えばマウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメイン内に置換することを含む（例えば、ＷＯ ９２／２２６５３を参照されたい）。ヒト化キメラ抗体は、好ましくは、ヒト以外の哺乳類に実質的また排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）および対応ヒト抗体領域に実質的または排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変領域および定常領域を有する。
【００１６】
抗体のリサーフィシングのための戦略および方法、ならびに異なる宿主における抗体の免疫原性を軽減するための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。抗体は、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ ０ ２３９ ４００；ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフィシング（ＥＰ ０ ５９２ １０６；ＥＰ ０ ５１９ ５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ．Ｍ．ら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ら，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）および柔軟性残基の特定（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）を含む種々の他の技術を用いてヒト化されうる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む当技術分野で公知の種々の方法により製造されうる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、第５，５４５，８０６号および第５，８１４，３１８号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５およびＷＯ ９１／１０７４１号（前記文献の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）も参照されたい。
【００１７】
本発明の医薬組合せの抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識しＣＤ３８＋細胞をアポトーシス、ＡＤＣＣおよびＣＤＣにより殺すヒト化抗体である。もう１つの実施形態においては、本発明のヒト化抗体はストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの非存在下であってもアポトーシスにより前記ＣＤ３８＋細胞を死滅させ得る。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
そのようなヒト化抗体の好ましい実施形態はヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１もしくは３８ＳＢ３９抗体またはそれらのエピトープ結合性フラグメントである。
【００１９】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲはモデリングにより特定され、それらの分子構造が推定されている。したがって、１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＣＤＲを含むヒト化抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１、２および３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号４、５および６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１３のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号７、８および９により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１８のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１９のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３０のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３１のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３９のヒト化形態を提供する。
【００２０】
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６６および７２よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【００２１】
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６２、６４、６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号６８および７０によりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【００２２】
前記３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のヒト化形態のそれぞれは抗癌剤として特に有利であることが示されている。それらの製造、物理特性および有益な薬理学的特性はＷＯ ２００８／０４７２４２（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。一般に、ヒトを治療するために使用される用量は、治療対象に特有の要因に左右され、経口投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇ、または静脈内投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇである。
【００２３】
ビンクリスチン（商標，Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））はリューロクリスチンとしても公知であり、白血病、リンパ腫、乳癌および肺癌を含む癌を治療するために使用されるビンカルカロイドである、ビンクリスチンは有糸分裂インヒビターであり、これはチューブリン二量体に結合し、微小管構造（例えば、紡錘体）の集合を抑制する。紡錘体集合の抑制は分裂中期における細胞周期阻止を招く。ビンクリスチンは通常、静脈内に投与される。
【００２４】
本発明の１つの態様は、少なくともビンクリスチンと共に、抗ＣＤ３８抗体を含む医薬組成物である。前記産物の活性は使用用量に左右されるため、より低い用量を使用すること、および毒性現象を軽減すると同時に活性を増強することが可能である。本発明の組合せの、改善された効力は、治療相乗作用の決定により示されうる。組合せが治療相乗作用を現すのは、それが、単独で使用された試験用最良物質より、その最高許容用量において又は動物種で毒性がもたらされ得ない場合の試験されたその最高用量において、治療上優れている場合である。
【００２５】
この効力は、例えば、ｌｏｇ１０ 殺細胞により定量可能であり、これは以下の式により決定される。
ｌｏｇ１０ 殺細胞＝Ｔ−Ｃ（日）／３．３２×Ｔｄ
（ここで、Ｔ−Ｃは腫瘍成長遅延を表し、これは、治療群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍が所定値（例えば１ｇ）に達するまでの日数の中央値であり、Ｔｄは、対照動物において腫瘍体積が２倍になるのに要する日数を表す）［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら，Ｃａｎｃｅｒ，４０：２６６０−２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：３−５１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ１０ 殺細胞が０．７以上である場合、産物は活性だとみなされる。ｌｏｇ１０ 殺細胞が２．８以上である場合、産物は非常に活性だとみなされる。
【００２６】
前記ｌｏｇ１０ 殺細胞が、単独で投与された最良成分のその最高許容用量またはその最高試験用量におけるｌｏｇ１０ 殺細胞の値より大きい場合、前記組合せは治療相乗作用を現すであろう。
【００２７】
充実性腫瘍に対する前記組合せの効力は以下の方法で実験的に決定されうる。
【００２８】
前記実験に付される動物（一般にはマウス）の両側に３０〜６０ｍｇの腫瘍断片を第０日に皮下移植する。前記腫瘍担持動物を、種々の治療および対照に付す前に、それらの腫瘍サイズに基づいてランダム化する。腫瘍のタイプに応じた移植後所定サイズに腫瘍が達したら、化学療法を開始し、前記動物を毎日観察する。最大体重減少に達し、ついで完全な体重回復が生じるまで、それらの異なる動物群を治療中に毎日秤量する。ついでそれらの群を試験終了まで週１回または２回秤量する。
【００２９】
腫瘍が約２ｇに達するまで、または前記動物が死亡するまで（腫瘍が２ｇに達するまでにこれが生じた場合）、前記腫瘍を、腫瘍倍加時間に応じて週１〜５回測定する。安楽死または死亡の直後に前記動物を剖検する。
【００３０】
記録した種々のパラメーターにより抗腫瘍活性を決定する。
【００３１】
ｈｕ３８ＳＢ１９とビンクリスチンとの組合せをそれらの最適用量で使用して得られた結果を後記実施例として示す。
【００３２】
したがって、本発明はまた、本発明の組合せを含有する医薬組成物に関する。
【００３３】
前記組合せを構成する成分は、前記組合せの最大効力が得られるよう、同時に、半同時に、別々に、または或る期間を隔てて投与されることが可能であり、各投与は、その持続時間において、急速投与から連続的な潅流まで、様々であることが可能である。
【００３４】
したがって、本発明の目的においては、前記組合せは、前記構成成分の物理的会合により得られるもののみに限定されるものではなく、同時のもの又は或る期間を隔てたものでありうる別々の投与を可能にするものも含まれる。
【００３５】
本発明の組成物は、好ましくは、非経口投与されうる組成物である。しかし、局所領域療法の場合、これらの組成物は経口、皮下または腹腔内投与しうる。
【００３６】
非経口投与用の組成物は、一般に、医薬上許容される無菌溶液または懸濁液であり、これは、場合によっては、使用時に必要に応じて製造（調製）されうる。非水性溶液または懸濁液の製造の場合、天然植物油、例えばオリーブ油、ゴマ油もしくは液体石油、または有機エステル、例えばオレイン酸エチルが使用しうる。前記無菌水溶液は水中の前記産物の溶液よりなることが可能である。ｐＨが適切に調節され前記溶液が例えば十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで等張にされれば、前記水溶液は静脈内投与に適している。滅菌は、加熱により、または前記組成物に悪影響を及ぼさないいずれかの他の手段により行われうる。また、前記組合せは、リポソームの形態、またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールとしての担体に結合した形態をとりうる。
【００３７】
経口、皮下または腹腔内投与用の組成物は、好ましくは、水性懸濁液または溶液である。
【００３８】
成分の適用が同時に、別々に又は或る時間を隔てて行われうる本発明の組合せにおいては、ヒト化抗ＣＤ３８抗体が前記組成物の１０〜９０重量％に相当するのが特に有利であり、この含量は、関連物質の性質、求められる効力および治療すべき癌の性質によって様々となることが可能である。
【００３９】
本発明の組合せは、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む幾つかのタイプの癌の治療において特に有用である：癌腫および腺癌、例えば膀胱、乳房、結腸、頭頚部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頚部、甲状腺および皮膚におけるもの、ならびに扁平上皮癌；リンパ球系の造血腫瘍、例えば多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ球性（またはリンパ系）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；骨髄系の造血腫瘍、例えば急性および慢性骨髄性（骨髄球様または骨髄球性）白血病、および前骨髄球性白血病；間様由来の腫瘍、例えば線維肉腫、骨肉腫および横紋筋；中枢および末梢神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫；ならびに他の腫瘍、例えばメラノーマ、奇形癌、色素性乾皮症、角化棘細胞腫およびセミノーム、およびＣＤ３８が発現されることが未だ確認されていない他の癌。本発明の抗ＣＤ３８抗体は特有の作用メカニズムを有するため、それらは、主として、一般に使用される抗癌剤に抵抗性である白血病、リンパ腫および癌を治療するのに有用である。
【００４０】
したがって、本発明は、癌治療用医薬の製造のための前記組合せの使用をも含む。
【実施例】
【００４１】
本実施例においては、腫瘍成長抑制に関する本発明の抗ＣＤ３８抗体／ビンクリスチン組合せの有効性をインビボで実証した。
【００４２】
選択された腫瘍モデルは、ＳＣＩＤマウス内に移植された、移植可能なＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）細胞系ＤＮＤ−４１であった。
【００４３】
ｈｕ３８ＳＢ１９を、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含有しないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）中に配合した。ｈｕ３８ＳＢ１９を腫瘍移植後の第１８、２１、２４、２７日に静脈内投与した。
【００４４】
ビンクリスチンを水中の５％グルコース中に配合した。ビンクリスチンをｈｕ３８ＳＢ１９と同時に腫瘍移植後の第１８、２１、２４、２７日に静脈内投与した。
【００４５】
前記実験の結果を表１に示す。
【００４６】
腫瘍倍加時間＝３．４日。
【００４７】
以下のエンドポイントを用いた。
・２０％以上の体重減少または１０％以上の薬物死を誘発した投与量において毒性を宣言した。
・ｌｏｇ１０ 殺細胞＝（Ｔ−Ｃ）／［３．３２×（腫瘍倍加時間（日））］を計算することにより、抗腫瘍効力を決定した（Ｔは、前記処理マウスが７５０ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは、前記対照マウスが同一サイズに達するまでの時間の中央値（２６．９日）を意味する；腫瘍非含有生存体はこれらの計算から除外され、別々にまとめられる）。ｌｏｇ殺細胞＜０．７の場合には抗腫瘍活性は宣言されず、ｌｏｇ殺細胞＞２．８の場合に、治療は高活性であると宣言された。
・腫瘍非含有生存体（ＴＦＳ）：前記研究の全持続期間（最終処理後１００日超）にわたる触診の限界（６３ｍｇ）未満の完全退縮に対応する。
・治療相乗作用：組合せは、それが前記研究の最良単独物質より（少なくとも１ ｌｏｇ殺細胞）活性である場合、治療相乗作用を有する。
【００４８】
ビンクリスチンの毒性は１．３ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観察され、第２７日に最低体重である２５．２％の体重減少（すなわち、２０％の閾値を超える）を示した。ビンクリスチンの最高無毒性用量（ＨＮＴＤ）は０．８ｍｇ／ｋｇ／注射（合計注射用量＝３．２ｍｇ／ｋｇ）であった。また、その０．８ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は４．４のｌｏｇ殺細胞の高い活性であることが判明した。最低用量である０．３ｍｇ／ｋｇ／注射は、１．４ｌｏｇ殺細胞を示し、活性なままであった。
【００４９】
ｈｕ３８ＳＢ１９に関しては、前記産物は４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で十分に許容された。毒性は観察されなかったが、これは、マウスＣＤ３８との前記抗体の交差反応性の欠如により説明されうる。ｌｏｇ殺細胞は０．５であったが、これは、ｈｕ３８ＤＢ１９がこれらの条件下で活性でなかったことを示している。
【００５０】
１．３ｍｇ／ｋｇ／注射のビンクリスチンと４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９との組合せは毒性であった。この場合、第２７日に最低体重である２４．６％の体重減少を示した（すなわち、同じ用量のビンクリスチン単独で観察されたものに非常に類似している）。ｈｕ３８ＳＢ１９の４０ｍｇ／ｋｇ／注射とのビンクリスチンの０．８ｍｇ／ｋｇ／注射の用量がＨＮＴＤであるとみなされた。注目すべきことに、この用量は研究終了時（第１６０日）に５／６のＴＦＳを示した。同様に、より低い用量である０．５ｍｇ／ｋｇ／注射のビンクリスチンおよび４０ｍｇ／ｋｇ／注射のＨｕ３８ＳＢ１９においては、腫瘍移植後第１６０日に５／６のＴＦＳの回復がもたらされた。ビンクリスチン単独の両方の同等毒性用量においては、ＴＦＳは記録されなかった。本発明者らは、この組合せが治療相乗作用を示すと結論づけている。
【００５１】
【表１】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体とビンクリスチンとの組合せに関する。これは腫瘍疾患の治療において治療上有用である。
【背景技術】
【０００２】
ＣＤ３８は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤａのＩＩ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ＋から環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換を触媒しうる、そしてまた、ｃＡＤＰＲをＡＤＰ−リボースへと加水分解しうる二官能性エクト酵素である。ＣＤ３８はアップレギュレーションされ、多数の造血悪性疾患に関連づけられている。
【０００３】
ＣＤ３８を特異的に認識するモノクローナル抗体３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９はＰＣＴ出願ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されている。前記抗ＣＤ３８抗体は、３つの異なる細胞傷害メカニズム、すなわち、アポトーシスの誘導、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により、ＣＤ３８＋細胞を殺しうる。また、これらの抗体は、ストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの存在を伴わない場合であっても、ＣＤ３８＋細胞のアポトーシスを直接的に誘導しうる。ビンクリスチンは、化学療法において使用されるアルカロイドである。癌の治療に使用されうる新規かつ有効な医薬が尚も必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００８／０４７２４２号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ヒト化抗ＣＤ３８抗体が少なくとも１つの物質と組合されて投与されると、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の効力が相当に改善されうることが、今回、本発明で見出された。前記の少なくとも１つの物質は抗癌治療において治療上有用な物質であり、ヒト化抗ＣＤ３８抗体の１つと同じ又は異なるメカニズムを有し、本発明においてはビンクリスチンに限定される。
【０００６】
「抗体」なる語は本明細書においては最も広い意味で用いられ、特に、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのような任意のイソタイプのモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体、キメラ抗体および抗体フラグメントを含む。典型的なＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合により連結された２つの同一重鎖および２つの同一軽鎖から構成される。各重鎖および軽鎖は定常領域および可変領域を含有する。各可変領域は、主として抗原のエピトープへの結合をもたらす「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）または「超可変領域」と称される３つのセグメントを含有する。それらは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（Ｎ末端から順次番号付けされている）と称される。ＣＤＲ以外の可変領域の、より高度に保存された部分は、「フレームワーク領域」と称される。
【０００７】
本明細書中で用いる「ＶＨ」または「ＶＨ」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を意味する。「ＶＬ」または「ＶＬ」に対する言及は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）２フラグメントの軽鎖を含む抗体の免疫グロブリン軽鎖の可変領域を意味する。
【０００８】
３８ＳＢ１３抗体は、配列番号５０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号３８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１、２および３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号４、５および６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【０００９】
３８ＳＢ１８抗体は、配列番号５２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号７、８および９よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１０】
３８ＳＢ１９抗体は、配列番号５４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４２よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１３、１４および１５よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１１】
３８ＳＢ３０抗体は、配列番号５６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４４よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１２】
３８ＳＢ３１抗体は、配列番号５８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４６よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１３】
３８ＳＢ３９抗体は、配列番号６０よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの重鎖と、配列番号４８よりなるアミノ酸配列を有する少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含み、前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６よりなるアミノ酸配列を有する３つの連続的ＣＤＲを含む。
【００１４】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９マウス抗ＣＤ３８抗体を産生するハイブリドーマ細胞系はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｉｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，２０１１０−２２０９，ＵＳＡ）に２００６年６月２１日付けでそれぞれＰＴＡ−７６６７、ＰＴＡ−７６６９、ＰＴＡ−７６７０、ＰＴＡ−７６６６、ＰＴＡ−７６６８およびＰＴＡ−７６７１の寄託番号として寄託されている（ＷＯ２００８／０４７２４２に記載されているとおり）。
【００１５】
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体を意味する。ヒト化の目的は、ヒト体内への導入のために、異種抗体、例えばマウス抗体の免疫原性を、前記抗体の完全抗原結合アフィニティおよび特異性を維持しながら、軽減することである。ヒト化抗体、または他の哺乳類による非拒絶に適合化された抗体は、例えばリサーフィシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）およびＣＤＲグラフティングのような幾つかの技術を用いて製造されうる。本明細書中で用いるリサーフィシング技術は、標的宿主の既知抗体の表面に類似したものとするために抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を改変するために分子モデリング、統計解析および突然変異誘発の組合せを利用する。ＣＤＲグラフティング技術は、例えばマウス抗体の相補性決定領域をヒトフレームワークドメイン内に置換することを含む（例えば、ＷＯ ９２／２２６５３を参照されたい）。ヒト化キメラ抗体は、好ましくは、ヒト以外の哺乳類に実質的また排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）および対応ヒト抗体領域に実質的または排他的に由来する相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変領域および定常領域を有する。
【００１６】
抗体のリサーフィシングのための戦略および方法、ならびに異なる宿主における抗体の免疫原性を軽減するための他の方法は、米国特許第５，６３９，６４１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。抗体は、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ ０ ２３９ ４００；ＷＯ ９１／０９９６７；米国特許第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフィシング（ＥＰ ０ ５９２ １０６；ＥＰ ０ ５１９ ５９６；Ｐａｄｌａｎ Ｅ．Ａ．，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ Ｇ．Ｍ．ら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａ Ｍ．Ａ．ら，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）および柔軟性残基の特定（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７４３８１）を含む種々の他の技術を用いてヒト化されうる。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法を含む当技術分野で公知の種々の方法により製造されうる。米国特許第４，４４４，８８７号、第４，７１６，１１１号、第５，５４５，８０６号および第５，８１４，３１８号；ならびに国際特許出願公開第ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５およびＷＯ ９１／１０７４１号（前記文献の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）も参照されたい。
【００１７】
本発明の医薬組合せの抗ＣＤ３８抗体は、ＣＤ３８を認識しＣＤ３８＋細胞をアポトーシス、ＡＤＣＣおよびＣＤＣにより殺すヒト化抗体である。もう１つの実施形態においては、本発明のヒト化抗体はストロマ細胞またはストロマ由来サイトカインの非存在下であってもアポトーシスにより前記ＣＤ３８＋細胞を死滅させ得る。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
そのようなヒト化抗体の好ましい実施形態はヒト化３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１もしくは３８ＳＢ３９抗体またはそれらのエピトープ結合性フラグメントである。
【００１９】
３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のＣＤＲはモデリングにより特定され、それらの分子構造が推定されている。したがって、１つの実施形態においては、本発明は、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上のＣＤＲを含むヒト化抗体またはそのエピトープ結合性フラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１、２および３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号４、５および６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１３のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号７、８および９により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１０、１１および１２により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１８のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ１９のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号１９、２０および２１により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２２、２３および２４により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３０のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３１のヒト化形態を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、少なくとも１つの重鎖（前記重鎖は、配列番号３１、３２および３３により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）と少なくとも１つの軽鎖（前記軽鎖は、配列番号３４、３５および３６により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む）とを含む３８ＳＢ３９のヒト化形態を提供する。
【００２０】
１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６６および７２よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有するＶＨを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【００２１】
もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号６２、６４、６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト抗体またはそのフラグメントを提供する。好ましい実施形態においては、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ１９抗体を提供する。もう１つの好ましい実施形態においては、配列番号６８および７０によりなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬを含むヒト化３８ＳＢ３１抗体を提供する。
【００２２】
前記３８ＳＢ１３、３８ＳＢ１８、３８ＳＢ１９、３８ＳＢ３０、３８ＳＢ３１および３８ＳＢ３９抗体のヒト化形態のそれぞれは抗癌剤として特に有利であることが示されている。それらの製造、物理特性および有益な薬理学的特性はＷＯ ２００８／０４７２４２（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。一般に、ヒトを治療するために使用される用量は、治療対象に特有の要因に左右され、経口投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇ、または静脈内投与で１〜１５０ｍｇ／ｋｇである。
【００２３】
ビンクリスチン（商標，Ｏｎｃｏｖｉｎ（商標））はリューロクリスチンとしても公知であり、白血病、リンパ腫、乳癌および肺癌を含む癌を治療するために使用されるビンカルカロイドである、ビンクリスチンは有糸分裂インヒビターであり、これはチューブリン二量体に結合し、微小管構造（例えば、紡錘体）の集合を抑制する。紡錘体集合の抑制は分裂中期における細胞周期阻止を招く。ビンクリスチンは通常、静脈内に投与される。
【００２４】
本発明の１つの態様は、少なくともビンクリスチンと共に、抗ＣＤ３８抗体を含む医薬組成物である。前記産物の活性は使用用量に左右されるため、より低い用量を使用すること、および毒性現象を軽減すると同時に活性を増強することが可能である。本発明の組合せの、改善された効力は、治療相乗作用の決定により示されうる。組合せが治療相乗作用を現すのは、それが、単独で使用された試験用最良物質より、その最高許容用量において又は動物種で毒性がもたらされ得ない場合の試験されたその最高用量において、治療上優れている場合である。
【００２５】
この効力は、例えば、ｌｏｇ１０ 殺細胞により定量可能であり、これは以下の式により決定される。
ｌｏｇ１０ 殺細胞＝Ｔ−Ｃ（日）／３．３２×Ｔｄ
（ここで、Ｔ−Ｃは腫瘍成長遅延を表し、これは、治療群（Ｔ）の腫瘍および対照群（Ｃ）の腫瘍が所定値（例えば１ｇ）に達するまでの日数の中央値であり、Ｔｄは、対照動物において腫瘍体積が２倍になるのに要する日数を表す）［Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら，Ｃａｎｃｅｒ，４０：２６６０−２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：３−５１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９７９）］。ｌｏｇ１０ 殺細胞が０．７以上である場合、産物は活性だとみなされる。ｌｏｇ１０ 殺細胞が２．８以上である場合、産物は非常に活性だとみなされる。
【００２６】
前記ｌｏｇ１０ 殺細胞が、単独で投与された最良成分のその最高許容用量またはその最高試験用量におけるｌｏｇ１０ 殺細胞の値より大きい場合、前記組合せは治療相乗作用を現すであろう。
【００２７】
充実性腫瘍に対する前記組合せの効力は以下の方法で実験的に決定されうる。
【００２８】
前記実験に付される動物（一般にはマウス）の両側に３０〜６０ｍｇの腫瘍断片を第０日に皮下移植する。前記腫瘍担持動物を、種々の治療および対照に付す前に、それらの腫瘍サイズに基づいてランダム化する。腫瘍のタイプに応じた移植後所定サイズに腫瘍が達したら、化学療法を開始し、前記動物を毎日観察する。最大体重減少に達し、ついで完全な体重回復が生じるまで、それらの異なる動物群を治療中に毎日秤量する。ついでそれらの群を試験終了まで週１回または２回秤量する。
【００２９】
腫瘍が約２ｇに達するまで、または前記動物が死亡するまで（腫瘍が２ｇに達するまでにこれが生じた場合）、前記腫瘍を、腫瘍倍加時間に応じて週１〜５回測定する。安楽死または死亡の直後に前記動物を剖検する。
【００３０】
記録した種々のパラメーターにより抗腫瘍活性を決定する。
【００３１】
ｈｕ３８ＳＢ１９とビンクリスチンとの組合せをそれらの最適用量で使用して得られた結果を後記実施例として示す。
【００３２】
したがって、本発明はまた、本発明の組合せを含有する医薬組成物に関する。
【００３３】
前記組合せを構成する成分は、前記組合せの最大効力が得られるよう、同時に、半同時に、別々に、または或る期間を隔てて投与されることが可能であり、各投与は、その持続時間において、急速投与から連続的な潅流まで、様々であることが可能である。
【００３４】
したがって、本発明の目的においては、前記組合せは、前記構成成分の物理的会合により得られるもののみに限定されるものではなく、同時のもの又は或る期間を隔てたものでありうる別々の投与を可能にするものも含まれる。
【００３５】
本発明の組成物は、好ましくは、非経口投与されうる組成物である。しかし、局所領域療法の場合、これらの組成物は経口、皮下または腹腔内投与しうる。
【００３６】
非経口投与用の組成物は、一般に、医薬上許容される無菌溶液または懸濁液であり、これは、場合によっては、使用時に必要に応じて製造（調製）されうる。非水性溶液または懸濁液の製造の場合、天然植物油、例えばオリーブ油、ゴマ油もしくは液体石油、または有機エステル、例えばオレイン酸エチルが使用しうる。前記無菌水溶液は水中の前記産物の溶液よりなることが可能である。ｐＨが適切に調節され前記溶液が例えば十分な量の塩化ナトリウムまたはグルコースで等張にされれば、前記水溶液は静脈内投与に適している。滅菌は、加熱により、または前記組成物に悪影響を及ぼさないいずれかの他の手段により行われうる。また、前記組合せは、リポソームの形態、またはシクロデキストリンもしくはポリエチレングリコールとしての担体に結合した形態をとりうる。
【００３７】
経口、皮下または腹腔内投与用の組成物は、好ましくは、水性懸濁液または溶液である。
【００３８】
成分の適用が同時に、別々に又は或る時間を隔てて行われうる本発明の組合せにおいては、ヒト化抗ＣＤ３８抗体が前記組成物の１０〜９０重量％に相当するのが特に有利であり、この含量は、関連物質の性質、求められる効力および治療すべき癌の性質によって様々となることが可能である。
【００３９】
本発明の組合せは、以下のもの（それらに限定されるものではない）を含む幾つかのタイプの癌の治療において特に有用である：癌腫および腺癌、例えば膀胱、乳房、結腸、頭頚部、前立腺、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頚部、甲状腺および皮膚におけるもの、ならびに扁平上皮癌；リンパ球系の造血腫瘍、例えば多発性骨髄腫、白血病、急性および慢性リンパ球性（またはリンパ系）白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫）；骨髄系の造血腫瘍、例えば急性および慢性骨髄性（骨髄球様または骨髄球性）白血病、および前骨髄球性白血病；間様由来の腫瘍、例えば線維肉腫、骨肉腫および横紋筋；中枢および末梢神経系の腫瘍、例えば星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫；ならびに他の腫瘍、例えばメラノーマ、奇形癌、色素性乾皮症、角化棘細胞腫およびセミノーム、およびＣＤ３８が発現されることが未だ確認されていない他の癌。本発明の抗ＣＤ３８抗体は特有の作用メカニズムを有するため、それらは、主として、一般に使用される抗癌剤に抵抗性である白血病、リンパ腫および癌を治療するのに有用である。
【００４０】
したがって、本発明は、癌治療用医薬の製造のための前記組合せの使用をも含む。
【実施例】
【００４１】
本実施例においては、腫瘍成長抑制に関する本発明の抗ＣＤ３８抗体／ビンクリスチン組合せの有効性をインビボで実証した。
【００４２】
選択された腫瘍モデルは、ＳＣＩＤマウス内に移植された、移植可能なＴ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ−ＡＬＬ）細胞系ＤＮＤ−４１であった。
【００４３】
ｈｕ３８ＳＢ１９を、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋を含有しないリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７．４）中に配合した。ｈｕ３８ＳＢ１９を腫瘍移植後の第１８、２１、２４、２７日に静脈内投与した。
【００４４】
ビンクリスチンを水中の５％グルコース中に配合した。ビンクリスチンをｈｕ３８ＳＢ１９と同時に腫瘍移植後の第１８、２１、２４、２７日に静脈内投与した。
【００４５】
前記実験の結果を表１に示す。
【００４６】
腫瘍倍加時間＝３．４日。
【００４７】
以下のエンドポイントを用いた。
・２０％以上の体重減少または１０％以上の薬物死を誘発した投与量において毒性を宣言した。
・ｌｏｇ１０ 殺細胞＝（Ｔ−Ｃ）／［３．３２×（腫瘍倍加時間（日））］を計算することにより、抗腫瘍効力を決定した（Ｔは、前記処理マウスが７５０ｍｇに達するまでの時間の中央値を意味し、Ｃは、前記対照マウスが同一サイズに達するまでの時間の中央値（２６．９日）を意味する；腫瘍非含有生存体はこれらの計算から除外され、別々にまとめられる）。ｌｏｇ殺細胞＜０．７の場合には抗腫瘍活性は宣言されず、ｌｏｇ殺細胞＞２．８の場合に、治療は高活性であると宣言された。
・腫瘍非含有生存体（ＴＦＳ）：前記研究の全持続期間（最終処理後１００日超）にわたる触診の限界（６３ｍｇ）未満の完全退縮に対応する。
・治療相乗作用：組合せは、それが前記研究の最良単独物質より（少なくとも１ ｌｏｇ殺細胞）活性である場合、治療相乗作用を有する。
【００４８】
ビンクリスチンの毒性は１．３ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で観察され、第２７日に最低体重である２５．２％の体重減少（すなわち、２０％の閾値を超える）を示した。ビンクリスチンの最高無毒性用量（ＨＮＴＤ）は０．８ｍｇ／ｋｇ／注射（合計注射用量＝３．２ｍｇ／ｋｇ）であった。また、その０．８ｍｇ／ｋｇ／注射の用量は４．４のｌｏｇ殺細胞の高い活性であることが判明した。最低用量である０．３ｍｇ／ｋｇ／注射は、１．４ｌｏｇ殺細胞を示し、活性なままであった。
【００４９】
ｈｕ３８ＳＢ１９に関しては、前記産物は４０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量で十分に許容された。毒性は観察されなかったが、これは、マウスＣＤ３８との前記抗体の交差反応性の欠如により説明されうる。ｌｏｇ殺細胞は０．５であったが、これは、ｈｕ３８ＤＢ１９がこれらの条件下で活性でなかったことを示している。
【００５０】
１．３ｍｇ／ｋｇ／注射のビンクリスチンと４０ｍｇ／ｋｇ／注射のｈｕ３８ＳＢ１９との組合せは毒性であった。この場合、第２７日に最低体重である２４．６％の体重減少を示した（すなわち、同じ用量のビンクリスチン単独で観察されたものに非常に類似している）。ｈｕ３８ＳＢ１９の４０ｍｇ／ｋｇ／注射とのビンクリスチンの０．８ｍｇ／ｋｇ／注射の用量がＨＮＴＤであるとみなされた。注目すべきことに、この用量は研究終了時（第１６０日）に５／６のＴＦＳを示した。同様に、より低い用量である０．５ｍｇ／ｋｇ／注射のビンクリスチンおよび４０ｍｇ／ｋｇ／注射のＨｕ３８ＳＢ１９においては、腫瘍移植後第１６０日に５／６のＴＦＳの回復がもたらされた。ビンクリスチン単独の両方の同等毒性用量においては、ＴＦＳは記録されなかった。本発明者らは、この組合せが治療相乗作用を示すと結論づけている。
【００５１】
【表１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともビンクリスチンとを含む医薬組合せであって、アポトーシス、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により前記抗体がＣＤ３８＋細胞を死滅させることが可能である、医薬組合せ。
【請求項２】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１記載の組合せ。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上の相補性決定領域を含む、請求項２記載の組合せ。
【請求項４】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項３記載の組合せ。
【請求項５】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項３記載の組合せ。
【請求項６】
癌治療用医薬の製造のための請求項１記載の医薬組合せの製造のための、ＣＤ３８を特異的に認識する抗体の使用。
【請求項７】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上の相補性決定領域を含む、請求項７記載の使用。
【請求項９】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項８記載の使用。
【請求項１】
ＣＤ３８を特異的に認識する抗体と少なくともビンクリスチンとを含む医薬組合せであって、アポトーシス、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により前記抗体がＣＤ３８＋細胞を死滅させることが可能である、医薬組合せ。
【請求項２】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１記載の組合せ。
【請求項３】
前記抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上の相補性決定領域を含む、請求項２記載の組合せ。
【請求項４】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項３記載の組合せ。
【請求項５】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項３記載の組合せ。
【請求項６】
癌治療用医薬の製造のための請求項１記載の医薬組合せの製造のための、ＣＤ３８を特異的に認識する抗体の使用。
【請求項７】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記抗体が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５および３６よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有する１以上の相補性決定領域を含む、請求項７記載の使用。
【請求項９】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号６６により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号１３、１４および１５により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６２および６４よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号１６、１７および１８により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
前記抗体が少なくとも１つの重鎖と少なくとも１つの軽鎖とを含み、前記重鎖が、配列番号７２により表されるアミノ酸配列を有し、前記重鎖が、配列番号２５、２６および２７により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含み、前記軽鎖が、配列番号６８および７０よりなる群から選択されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、配列番号２８、２９および３０により表されるアミノ酸配列を有する３つの連続的な相補性決定領域を含む、請求項８記載の使用。
【公表番号】特表２０１２−５１０４６２（Ｐ２０１２−５１０４６２Ａ）
【公表日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３８０９３（Ｐ２０１１−５３８０９３）
【出願日】平成２１年１１月２７日（２００９．１１．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５５３９０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６１３５８
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５０４４５６７９８）サノフイ (433)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年５月１０日（２０１２．５．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月２７日（２００９．１１．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５５３９０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６１３５８
【国際公開日】平成２２年６月３日（２０１０．６．３）
【出願人】（５０４４５６７９８）サノフイ (433)
【Ｆターム（参考）】
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