ＧＬＰ−１の類似体
【課題】グルカゴン用ペプチド−１のペプチド類似体を提供する。
【解決手段】Ｂｏｃアミノ酸プロトコールを使用して、Ｏ−ベンジル−ポリスチレン樹脂上でペプチドを組み立てる。完成したペプチド−樹脂を好適な低級アルキルアミンの薄いＤＭＦ溶液に懸濁させ、加熱撹拌し、濾過して、減圧下で溶媒を除去し、開裂したペプチド油分をエーテルで粉砕して、固形の、保護下アルキルアミドペプチドを得る。次いで、これをＨＦで開裂させ、追加の側鎖保護基を除去し、ＨＰＬＣで精製する。
【解決手段】Ｂｏｃアミノ酸プロトコールを使用して、Ｏ−ベンジル−ポリスチレン樹脂上でペプチドを組み立てる。完成したペプチド−樹脂を好適な低級アルキルアミンの薄いＤＭＦ溶液に懸濁させ、加熱撹拌し、濾過して、減圧下で溶媒を除去し、開裂したペプチド油分をエーテルで粉砕して、固形の、保護下アルキルアミドペプチドを得る。次いで、これをＨＦで開裂させ、追加の側鎖保護基を除去し、ＨＰＬＣで精製する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１のペプチド類似体、その製剤的に許容される塩、哺乳動物を治療するためにそのような類似体を使用する方法、及びそのために有用な、前記類似体を含んでなる医薬組成物に向けられている。
【０００２】
グルカゴン様ペプチド−１（７−３６）アミド（ＧＬＰ−１）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）は、グルカゴン前駆体のプレプログルカゴンの組織特異的な翻訳後プロセシングにより腸のＬ細胞において合成され（Varndell, J. M., et al., J. Histochem Cytochem, 1985: 33: 1080-6）、食事に反応して循環中へ放出される。ＧＬＰ−１の血漿濃度は、約１５ピコモル／Ｌの絶食レベルから４０ピコモル／Ｌのピーク食後レベルへ上昇する。血漿インスリンの増加は、血漿グルコース濃度における一定の上昇について、グルコースを静脈内投与した場合に比較して経口投与したほうが約３倍大きいことが示されている（Kreymann, B., et al., Lancet 1987: 2, 1300-4）。このインクレチン（incretin）効果として知られるインスリン放出の食事による増強は主に体液性のものであり、ＧＬＰ−１はヒトにおいて最も強力な生理学的インクレチンであると今日考えられている。インスリン放出効果だけでなく、ＧＬＰ−１はグルカゴンの分泌を抑制し、胃の空洞化を遅らせ（Wettergren A., et al., Dig Dis Sci 1993: 38: 665-73）、末梢のグルコース処理を高める可能性がある（D'Alessio, D. A. et al., J. Clin Invest 1994: 93: 2293-6）。
【０００３】
１９９４年、ＧＬＰ−１の単回皮下（ｓ／ｃ）投与によりインスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の患者において食後のグルコースレベルが完全に正常化され得るという観察事実から、ＧＬＰ−１の治療薬としての可能性が示唆された（Gutniak, M. K., et al., Diabetes Care 1994: 17: 1039-44）。この効果は、インスリン放出の増加とグルカゴン分泌の減少の両方により介在されると考えられた。さらに、ＧＬＰ−１を静脈内注入すると、ＮＩＤＤＭ患者において食後の胃の空洞化を遅らせることが示された（Williams, B., et al., J. Clin Endo Metab 1996: 81: 327-32）。スルホニル尿素と異なり、ＧＬＰ−１のインスリン放出促進作用は血漿グルコース濃度に依存している（Holz, G. G. 4th, et al., Nature 1993: 361: 362-5）。つまり、低い血漿グルコース濃度ではＧＬＰ−１介在性のインスリン放出がないために、重篤な低血糖症を招かないのである。この複合的な作用により、ＧＬＰ−１は、ＮＩＤＤＭを治療するために現在使用されている他の薬剤に対する独自の潜在的な治療優位性を有している。
【０００４】
数多くの研究は、健常被検者へ与えたとき、ＧＬＰ−１がインスリン及びグルカゴンの濃度だけでなく血糖レベルにも強力に影響を及ぼすこと（Orskov, C, Diabetologia 35: 701-711, 1992; Holst, J. J., et al., Potential of GLP-1 in diabetes management in Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology, Lefevbre PJ, Ed. Berlin, Springer Verlag, 1996, p. 311-326）、及びこの効果がグルコース依存的であること（Kreymann, B., et al., Lancet ii: 1300-1304, 1987; Weir, G. C., et al., Diabetes 38: 338-342, 1989）を示した。さらに、それはまた糖尿病を有する患者にも有効であり（Gutniak, M., N. Engl J Med 226: 1316-1322, 1992; Nathan, D. M., et al., Diabetes Care 15: 270-276, 1992）、２型糖尿病の被検者において血糖レベルを正常化し（Nauck, M. A., et al., Diabetologia 36: 741-744, 1993）、１型患者において血糖コントロールを改善し（Creutzfeldt, W. O., et al., Diabetes Care 19: 580-586, 1996）、治療薬としてのその使用の可能性を高めている。
【０００５】
しかしながら、ＧＬＰ−１は代謝的に不安定であり、in vivo での血漿半減期（ｔ1/2）は１〜２分にすぎない。外から投与したＧＬＰ−１も急速に分解される（Deacon, C. F., et al., Diabetes 44: 1126-1131, 1995）。この代謝不安定性はネーティブなＧＬＰ−１の治療薬としての可能性を制限する。従って、ネーティブなＧＬＰ−１より活性であるか又はより代謝的に安定であるＧＬＰ−１類似体に対するニーズが存在するのである。
【０００６】
発明の要約
１つの側面では、本発明は、式（Ｉ）の化合物に向けられている
（Ｒ2Ｒ3）−Ａ7−Ａ8−Ａ9−Ａ10−Ａ11−Ａ12−Ａ13−Ａ14−Ａ15−Ａ16−Ａ17−Ａ18−Ａ19−Ａ20−Ａ21−Ａ22−Ａ23−Ａ24−Ａ25−Ａ26−Ａ27−Ａ28−Ａ29−Ａ30−Ａ31−Ａ32−Ａ33−Ａ34−Ａ35−Ａ36−Ａ37−Ｒ1 （Ｉ）
［式中：
Ａ7はＬ−Ｈｉｓ、Ｕｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ｈｐｐａ、Ｔｍａ−Ｈｉｓ、Ａｍｐであるか又は削除され（但し、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ又はＨｐｐａである場合、Ｒ2及びＲ3は削除される）；
Ａ8はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｒｇ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；
Ａ9はＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ又はＡｓｐであり；
Ａ10はＧｌｙ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＡｉｂであり；
Ａ11はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ12はＰｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｃ、Ａｉｂ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ13はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ14はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ15はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｓｐ又はＧｌｕであり；
Ａ16はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｂａ又はＣｈａであり；
Ａ17はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ又はＴｈｒであり；
Ａ18はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ又はＴｈｒであり；
Ａ19はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｃｈａ、Ｐｈｅ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ａｃｃ、β−Ｎａｌ、Ａｍｐ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ20はＬｅｕ、Ａｌａ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ21はＧｌｕ、Ａｌａ又はＡｓｐであり；
Ａ22はＧｌｙ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ23はＧｌｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ａｓｎ又はＧｌｕであり；
Ａ24はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ25はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ26はＬｙｓ、Ａｌａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ａｍｐ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ27はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ又はＡｓｐであり；
Ａ28はＰｈｅ、Ａｌａ、Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ａｉｃ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ又はＴｒｐであり；
Ａ29はＩｌｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｔｂａ又はＰｈｅであり；
Ａ30はＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃであるか又は削除され；
Ａ31はＴｒｐ、Ａｌａ、β−Ｎａｌ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ、Ａｍｐであるか又は削除され；
Ａ32はＬｅｕ、Ａｌａ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｐｈｅ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ａｌａであるか又は削除され；
Ａ33はＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｂｕ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ｔｂａ、Ｇａｂａであるか又は削除され；
Ａ34はＬｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ａｍｐ、Ｇａｂａ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除され；
Ａ35はＧｌｙであるか又は削除され；
Ａ36はＬ−又はＤ−Ａｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ｄ−又はＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｏｒｎ、Ａｍｐ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除され；
Ａ37はＧｌｙであるか又は削除され；
Ｘ1は、それぞれの出現につき、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＯＨ及びハロからなる群から独立して選択され；
Ｒ1はＯＨ、ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ12）アルコキシ又はＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−Ｚ0であり｛ここでＸ2は（Ｃ1−Ｃ12）炭化水素部分であり、Ｚ0はＨ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ又はＣＯＮＨ2である｝；
Ｘ3は、
【０００７】
【化１】
又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ12であり｛ここで、Ｘ4は、それぞれの出現につき独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−又は−ＣＨ2−であり、及びｆは、それぞれの出現につき独立して、１から２９の整数である｝；
Ｒ2及びＲ3のそれぞれは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、及びヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキルからなる群から独立して選択されるか；又はＲ2及びＲ3の１つはＣ（Ｏ）Ｘ5であり｛ここで、Ｘ5は（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、
【０００８】
【化２】
【０００９】
【化３】
又は
【００１０】
【化４】
であり、ここでＹはＨ又はＯＨであり、ｒは０〜４であって、ｑは０〜４である｝；
ｎは、それぞれの出現につき独立して、１から５の整数であり；及び
Ｒ10及びＲ11は、それぞれの出現につき、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１１】
【化５】
であり｛但し、Ｒ10が（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１２】
【化６】
である場合、Ｒ11はＨ又は（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである｝；及び
Ｒ12は（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである；
但し：
（ｉ）式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つのアミノ酸は、ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１，２）又はｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４）のネーティブ配列と同じではなく；
（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、１つの位置がＡｌａにより置換された、ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１，２）又はｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４）の類似体ではなく；
（ｉｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、［Ｌｙｓ26（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５〜８）、［Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：９〜１２）、［Ｌｙｓ26,34−ビス（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１３〜１６）、［Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（８−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１７〜２０）又は［Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２１〜２４）（ここでＥは−ＯＨ又は−ＮＨ2である）ではなく；
（ｉｖ）式（Ｉ）の化合物は、Ｚ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−ＯＨ、Ｚ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−ＮＨ2ではなく｛ここでＺ1は以下の群から選択される：
（ａ）［Ａｒｇ26］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２５〜２８）、［Ａｒｇ34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２９〜３２）、［Ａｒｇ26,34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３３〜３６），［Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３７〜４０）、［Ａｒｇ26，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４１〜４４）、［Ａｒｇ34，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４５〜４８）、［Ｄ−Ｌｙｓ36］，［Ａｒｇ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４，１，２）、［Ｄ−Ａｒｇ36］，［Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４９〜５２）又は［Ａｒｇ26,36，Ｌｙｓ34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２５〜２８）；
（ｂ）［Ａｓｐ21］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５３〜５６）；
（ｃ）［Ａｉｂ8］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５７〜６０）、［Ｄ−Ａｌａ8］及び［Ａｓｐ9］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６１〜６４）のうち少なくとも１つ；及び
（ｄ）［Ｔｙｒ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６５〜６８）、［Ｎ−アシル−Ｈｉｓ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６９〜７２）、［Ｎ−アルキル−Ｈｉｓ7］［Ｎ−アシル−Ｄ−Ｈｉｓ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３〜７６）、又は［Ｎ−アルキル−Ｄ−Ｈｉｓ7］｝；
（ｖ）式（Ｉ）の化合物は、群（ａ）〜（ｄ）に列挙した置換基のいずれか２つの組み合わせではなく；及び
（ｖｉ）式（Ｉ）の化合物は、［Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ8］ｈＧＬＰ−１（８−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７７，７８）、［Ｇｌｕ15］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７９，８０）、［Ａｓｐ21］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５３，５４）又は［Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：８１，８２）ではない］。
【００１３】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ11がＴｈｒであり；Ａ13がＴｈｒであり；Ａ14がＳｅｒ、Ａｉｂ又はＡｌａであり；Ａ17がＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ18がＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ21がＧｌｕ又はＡｌａであり；Ａ23がＧｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｌａであり；及びＡ27がＧｌｕ又はＡｌａである化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１４】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ9がＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ又はＮ−Ｍｅ−Ａｓｐであり；Ａ12がＰｈｅ、Ａｃｃ又はＡｉｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ａｌａ、Ｔｌｅ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ19がＴｙｒ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ又はＤ−Ｔｙｒであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａｃｃ、Ｃｈａ、Ａｌａ又はＴｌｅであり；Ａ24がＡｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；Ａ25がＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−ＮＨＲ10）−Ｃ（Ｏ）であり；Ａ28がＰｈｅ又はＡｌａであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａｃｃ又はＴｌｅであり；Ａ30がＡｌａ、Ａｉｂであるか又は削除され；Ａ31がＴｒｐ、Ａｌａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌであるか又は削除され；Ａ32がＬｅｕ、Ａｃｃ、Ｃｈａ、Ａｌａであるか又は削除され；Ａ33がＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ｔｌｅであるか又は削除される化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１５】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ8がＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；Ａ10がＧｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ又はＰｈｅであり；Ａ12がＰｈｅ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ａｌａ、Ｔｌｅ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＤ−Ｖａｌであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｃｈａ、Ａｌａ又はＴｌｅであり；Ａ22がＧｌｙ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、Ｌ−Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ24がＡｌａ又はＡｉｂであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＴｌｅであり；Ａ32がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｃｈａ、Ａｌａであるか又は削除され；Ａ33がＶａｌ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ｔｌｅであるか又は削除される化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１６】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ｒ1がＯＨ又はＮＨ2である化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物又はその製剤的に許容される塩では、Ｒ2がＨであり、Ｒ3が（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、
【００１７】
【化７】
【００１８】
【化８】
又は
【００１９】
【化９】
である。
【００２０】
式（Ｉ）の最も好ましい化合物は、
【００２１】
【化１０】
【００２２】
【化１１】
である前記化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００２３】
式（Ｉ）のもう１つの最も好ましい化合物は、
【００２４】
【化１２】
【００２５】
【化１３】
である前記化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００２６】
もう１つの側面では、本発明は、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量と製剤的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００２７】
さらにもう１つの側面では、本発明は、ＧＬＰ−１受容体からの作動薬効果をそれが必要とされる被検者において誘導する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。
【００２８】
さらなる側面では、本発明は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の低減が所望される障害からなる群から選択される疾患を治療が必要とされる被検者において治療する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。直前の方法の好ましい方法では、疾患はＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である。
【００２９】
Ｎ末端アミノ酸を例外とし、本明細書に開示されるアミノ酸のあらゆる略号（例、Ａｌａ）は、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖である（例えば、ＡｌａではＣＨ3）。Ｎ末端アミノ酸では、略号は（Ｒ2Ｒ3）−Ｎ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖であり、Ｒ2及びＲ3は上記の定義通りであるが、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ又はＨｐｐａである場合、Ｕｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ及びＨｐｐａがここではｄｅｓ−アミノアミノ酸と考えられるので、Ｒ2とＲ3は存在しない。β−Ｎａｌ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｍｐ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ及びＡｉｂという略号は、以下のα−アミノ酸をそれぞれ表す：β−（２−ナフチル）アラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、４−アミノ−フェニルアラニン、β−（３−ピリジニル）アラニン、β−（４−ピリジニル）アラニン及びα−アミノイソ酪酸。他のアミノ酸の定義は以下の通りである：Ｕｒａはウロカン酸；Ｐｔａは（４−ピリジルチオ）酢酸；Ｐａａはｔｒａｎｓ−３−（３−ピリジル）アクリル酸；Ｔｍａ−ＨｉｓはＮ，Ｎ−テトラメチルアミジノ−ヒスチジン；Ｎ−Ｍｅ−ＡｌａはＮ−メチル−アラニン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｙはＮ−メチル−グリシン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｕはＮ−メチル−グルタミン酸；Ｔｌｅはｔｅｒｔ−ブチルグリシン；Ａｂｕはα−アミノ酪酸；Ｔｂａはｔｅｒｔ−ブチルアラニン；Ｏｒｎはオルニチン；Ａｉｂはα−アミノイソ酪酸；β−Ａｌａはβ−アラニン；Ｇａｂａはγ−アミノ酪酸；Ａｖａは５−アミノ吉草酸；及びＡｉｃは２−アミノインダン−２−カルボン酸である。
【００３０】
Ａｃｃが意味するものは、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸（Ａ３ｃ）；１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸（Ａ４ｃ）；１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸（Ａ５ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａ６ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボン酸（Ａ７ｃ）；１−アミノ−１−シクロオクタンカルボン酸（Ａ８ｃ）；及び１−アミノ−１−シクロノナンカルボン酸（Ａ９ｃ）の群から選択されるアミノ酸である。上記の式では、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフェニルアルキル、及びヒドロキシナフチルアルキルは、１〜４個のヒドロキシ置換基を含有し得る。ＣＯＸ5は−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5を表す。−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5の例には、限定しないが、アセチル及びフェニルプロピオニルが含まれる。
【００３１】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３２】
【化１４】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３３】
【化１５】
Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））が意味するものは以下の構造により表される：
【００３４】
【化１６】
Ａｓｐ（１−（４−アルキル−ピペラジン））が意味するものは以下の構造により表される：
【００３５】
【化１７】
Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３６】
【化１８】
上述した諸構造におけるｎの変数は１〜３０である。
【００３７】
本明細書に使用される他の略号の完全な名称は以下の通りである：Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦ＝フッ化水素、Ｆｍ＝ホルミル、Ｘａｎ＝キサンチル、Ｂｚｌ＝ベンジル、Ｔｏｓ＝トシル、ＤＮＰ＝２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃ＝酢酸、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、２ＣｌＺ＝２−クロロベンジルオキシカルボニル、及びＯｃＨｅｘ＝Ｏ−シクロヘキシル。
【００３８】
本発明のペプチドはまた、本明細書では別の形式により、例えば［Ａ５ｃ8］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）と示されるが、ここでは天然の配列から置換されたアミノ酸が最初の括弧のなかに配置される（例えば、ｈＧＬＰ−１のＡｌａ8に対するＡ５ｃ8）。略号ＧＬＰ−１はグルカゴン様ペプチド−１を意味し、ｈＧＬＰ−１はヒトグルカゴン様ペプチド−１を意味する。括弧内の数字はこのペプチドに存在するアミノ酸の位数を意味する（例えば、ｈＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）は、ヒトＧＬＰ−１のペプチド配列のアミノ酸７位〜３６位である）。ｈＧＬＰ−１（７−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の配列が Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Res., 40, 1992, pp. 333-342 に挙げられている。ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）における「ＮＨ2」の明示は、このペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示す。ｈＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）は、Ｃ末端がフリーの酸であることを示す。
発明の詳細な説明
本発明のペプチドは標準的な固相ペプチド合成により製造し得る。例えば、Stewart, J. M., et al., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2d ed. 1984) を参照のこと。上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシ基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＥ1は、処理済の樹脂を３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、遊離酸、例えばＥ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。遊離酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００３９】
Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2（即ち、Ｚ0＝ＣＯＮＨ2）である場合、ペプチドの合成は、ＭＢＨＡ樹脂へカップルしたＢｏｃＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨから始まる。Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ（即ち、Ｚ0＝ＣＯＯＨ）である場合、ペプチドの合成は、ＰＡＭ樹脂へカップルしたＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨから始まる。
【００４０】
以下に、本発明のペプチドを製造するための合成法を説明するが、この方法は当業者によく知られている。当業者に知られている他の方法もある。
塩化イオンの形態にあるベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）（０．９ｇ，０．３ミリモル）を、以下の反応サイクルを実行するようにプログラムされた、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ２００の反応槽へ入れる：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）３３％トリフルオロ酢酸／塩化メチレン（１分及び１５分をそれぞれ２回）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）１０％ジイソプロピルエチルアミン／塩化メチレン。
【００４１】
中和した樹脂を、合成される所望のペプチドのＣ末端アミノ酸になるべきＢｏｃ−保護化アミノ酸とジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ３ミリモル）とともに塩化メチレンにおいて１時間撹拌し、次いで、生成したアミノ酸樹脂を上記の洗浄プログラムの工程（ａ）〜（ｆ）で処理する。次いで、所望されるペプチドの他のアミノ酸（３ミリモル）を同じ方法により連続的にカップルさせる。完成したペプチドを、アニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（１００ｍｇ）及び無水フッ化水素（３５ｍｌ）と約０℃で混合し、それを約４５分撹拌することによって樹脂から開裂させる。乾燥窒素流の下で過剰なフッ化水素を速やかに蒸発させ、遊離したペプチドをエーテルで沈澱させて洗浄する。次いで、この粗ペプチドを最少量の希酢酸に溶かし、ＶＹＤＡＣ（登録商標）オクタデシルシランシリカ（１０ｍＭ）のカラム（２．５ｘ２５ｃｍ）にかけ、２０〜６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸水溶液の線形勾配で約１時間にわたり溶出させる。薄層クロマトグラフィーと分析用高速液体クロマトグラフィー（Ｂ：４０〜７０％、１％／分、溶液Ｂ：８０％アセトニトリル／０．１％ ＴＦＡを含有する水）により分画を試験し、収量よりも純度を最大化するようにプールする。この溶液を水から繰り返し凍結乾燥させることにより、白色の綿毛様の粉末として生成物を得る。
【００４２】
ペプチド生成物をＨＰＬＣにより分析する。ペプチド生成物の酸加水分解物のアミノ酸分析により、ペプチドの組成を確認することができる。レーザー脱着ＭＳを使用して、ペプチドの分子量を決定する。
【００４３】
保護化アミノ酸、１−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ］−１−シクロヘキサン−カルボン酸（Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ）を以下のように合成した。１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ピッツバーグ、ＰＡ）１９．１ｇ（０．１３３モル）をジオキサン２００ｍｌ及び水１００ｍｌに溶かした。それへ２Ｎ ＮａＯＨ ６７ｍｌを加えた。この溶液を氷水浴に冷やした。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート３２．０ｇ（０．１４７モル）をこの溶液へ加えた。この反応混合液を室温で一晩撹拌した。次いで、減圧下でジオキサンを除去した。この残存した水溶液へ酢酸エチル２００ｍｌを加えた。この混合液を氷水浴に冷やした。４Ｎ ＨＣｌを加えることによって、水層のｐＨを約３へ調整した。有機層を分離した。水層を酢酸エチル（１ｘ１００ｍｌ）で抽出した。２つの有機層を一緒にし、水（２ｘ１５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。酢酸エチル／ヘキサンにおいて残渣を再結晶させた。純生成物９．２ｇを得た。収率２９％。
【００４４】
Ｂｏｃ−Ａ５ｃ−ＯＨはＢｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨに類似したやり方で合成した。他の保護化Ａｃｃアミノ酸も、本明細書の教示により可能なように、類似したやり方で当業者により製造し得る。
【００４５】
Ａ５ｃ、Ａ６ｃ及び／又はＡｉｂを含有する本発明のペプチドの合成においては、上記の残基群とその直後に述べた残基につき、カップリング時間は約２時間である。［Ｔｍａ−Ｈｉｓ7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）の合成については、最終のカップリング反応において、ＨＢＴＵ（２ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌを使用して、ペプチド−樹脂のＮ末端フリーアミンと反応させるが、このカップリング時間は約２時間である。
【００４６】
上記に使用した略号の完全な名称は以下の通りである：Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦ＝フッ化水素、Ｆｍ＝ホルミル、Ｘａｎ＝キサンチル、Ｂｚｌ＝ベンジル、Ｔｏｓ＝トシル、ＤＮＰ＝２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃ＝酢酸、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、２ＣｌＺ＝２−クロロベンジルオキシカルボニル、２ＢｒＺ＝２−ブロモベンジルオキシカルボニル、及びＯｃＨｅｘ＝Ｏ−シクロヘキシル。
【００４７】
上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシル基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＸ1は、処理済の樹脂を３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、遊離酸、例えばＸ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。遊離酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００４８】
本発明の化合物は、以下の方法により、ＧＬＰ−１受容体に結合する化合物としての活性について試験し得る。
細胞培養：
ＧＬＰ−１受容体を発現する、ＲＩＮ ５Ｆ ラットインスリノーマ細胞（ＡＴＣＣ−＃ ＣＲＬ−２０５８，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，マナッサス、ＶＡ）を、１０％胎仔血清含有ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養し、５％ ＣＯ2／９５％空気の加湿気体において約３７℃に維持した。
放射リガンド結合：
放射リガンド結合試験のために、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ウェストベリー、ＮＹ）（目盛６にセット、１５秒）を用いて、氷冷５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ ２０ｍｌにおいてＲＩＮ細胞を均質化することにより膜を調製した。このホモジェネートを遠心分離（３９，０００ｇ／１０分）により２回洗浄し、最終ペレットを、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ2，バシトラシン（シグマケミカル、セントルイス、ＭＯ）０．１ｍｇ／ｍｌ、及び０．１％ ＢＳＡを含有する５０ｍＭ トリス−ＨＣｌに再懸濁させた。アッセイでは、０．０５ｎＭ［125Ｉ］ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）（〜２２００Ｃｉ／ミリモル、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、ボストン、ＭＡ）とともに、非標識の競合試験ペプチド０．０５ｍｌとともにか、又は含まずに、アリコート（０．４ｍｌ）をインキュベートした。１００分のインキュベーション（２５℃）後に、０．５％ポリエチレンイミンに前もって浸漬しておいたＧＦ／Ｃフィルター（Ｂｒａｎｄｅｌ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）を通す高速濾過により、結合した［125Ｉ］ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）をフリーのものから分離した。次いで、氷冷した５０ｍＭトリス−ＨＣｌのアリコート５ｍｌを用いてこのフィルターを３回洗浄し、フィルター上にトラップされた結合放射活性をガンマ分析計（Ｗａｌｌａｃ ＬＫＢ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）により計数した。［全（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）結合］から［ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）（Ｂａｃｈｅｍ，トーランス、ＣＡ）１０００ｎＭ存在下での結合］を差引いたものを特異的な結合と定義した。
【００４９】
本発明のペプチドは製剤的に許容される塩の形態で提供され得る。そのような塩の例には、限定しないが、有機酸（例、酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸又はパモン酸）、無機酸（例、塩酸、硫酸、又はリン酸）及び高分子酸（例、タンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はポリ乳酸−グリコール酸のコポリマー）とともに形成されるものが含まれる。本発明のペプチドの塩を製造する典型的な方法は当技術分野でよく知られていて、塩交換の標準法により達成し得る。従って、本発明のペプチドのＴＦＡ塩（ＴＦＡ塩は、緩衝溶液含有ＴＦＡで溶出させる調製用ＨＰＬＣを使用することによってペプチドの精製から生じる）は、少量の０．２５Ｎ酢酸水溶液にこのペプチドを溶かすことによって酢酸塩のような別の塩へ変換することができる。生成した溶液を半調製用ＨＰＬＣカラム（Ｚｏｒｂａｘ，３００ＳＢ，Ｃ−８）にかける。このカラムを（１）０．１Ｎ酢酸アンモニウム水溶液、０．５時間、（２）０．２５Ｎ酢酸水溶液、０．５時間、及び（３）線形勾配（２０％〜１００％のＢ溶液、３０分）、流速４ｍｌ／分（Ａ溶液：０．２５Ｎ酢酸水溶液；Ｂ溶液：０．２５Ｎ酢酸のアセトニトリル／水、８０：２０溶液）で溶出させる。ペプチド含有分画を回収し、凍結乾燥させる。
【００５０】
当業者によく知られているように、ＧＬＰ−１の既知の使用と潜在的な使用は様々で、多岐に渡っている［Todd, J. F. et al., Clinical Science, 1998, 95, pp. 325-329; 及びTodd, J. F. et al., European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27 pp. 533-536 を参照のこと］。従って、作動薬効果を誘導する目的のために本発明の化合物を投与すると、ＧＬＰ−１そのものと同じ効果及び使用を有し得る。こういったＧＬＰ−１の様々な使用は以下のように要約し得る：Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄及び神経変性疾患の治療。被検者から拮抗薬効果を誘導する本発明のＧＬＰ−１類似体は、以下を治療するために使用し得る：低血糖症、及び胃切除又は小腸切除に関連した吸収不全症候群。
【００５１】
従って、本発明は、製剤的に許容される担体とともに有効成分として式（Ｉ）の化合物群の少なくとも１つを含んでなる医薬組成物をその範囲内に包含する。
本発明の組成物にある有効成分の用量は変化し得るが、有効成分の量は好適な剤形が得られるようなものであることが必要である。選択される投与量は、所望される治療効果、投与経路、及び治療期間に依存する。一般に、本発明の諸活性に有効な投与量は、１ｘ１０-7〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１ｘ１０-4〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあり、これは単回用量として投与し得るか又は数回投与へ分割し得る。
【００５２】
本発明の化合物は、経口、腸管外（例、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下注射、又は埋込み）、鼻、膣、直腸、舌下又は局所の投与経路により投与され、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために、製剤的に許容される担体と製剤化され得る。
【００５３】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末及び顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、活性化合物が、スクロース、ラクトース又はデンプンのような少なくとも１種の製剤的に許容される不活性な担体とともに混和される。そのような剤形は、普通の方法として、そのような不活性希釈剤以外の追加物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤も含み得る。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含む場合がある。錠剤と丸剤は、さらに腸溶コーティング剤とともに製造し得る。
【００５４】
経口投与用の液体剤形には、当技術分野で通常使用される水のような不活性希釈剤を含有する、製剤的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル液が含まれる。そのような不活性希釈剤とは別に、組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、フレーバー及び芳香剤のようなアジュバントを包含し得る。
【００５５】
本発明による腸管外投与の調製物には、滅菌の水溶液又は非水溶液、懸濁液又は乳液が含まれる。非水性の溶媒又は担体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油のような植物油、ゼラチン、及びオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。そのような剤形はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のようなアジュバントを含有し得る。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過、滅菌剤を組成物へ取込むこと、組成物に照射すること、又は組成物を加熱することによって滅菌し得る。それらはまた、使用直前に滅菌水か又は他の無菌で注射可能な媒体に溶かし得る無菌の固体組成物の形態でも製造し得る。
【００５６】
直腸又は膣に投与する組成物は、好ましくは、有効成分に加えて、ココア脂や坐剤用ワックスのような賦形剤を含有し得る坐剤である。
鼻内又は舌下に投与する組成物もまた当技術分野でよく知られている標準的な賦形剤とともに製造される。
【００５７】
さらに、本発明の化合物は、以下の特許及び特許出願に記載されたような徐放性組成物において投与し得る。米国特許第５，６７２，６５９号は、生物活性剤及びポリエステルを含んでなる徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、ゲル化し得る形態に生物活性剤を含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９７年９月９日に出願された米国特許出願第０８／９２９，３６３号は、生物活性剤及びキトサンを含んでなる高分子性の徐放性組成物を教示する。１９９６年１１月１日に出願された米国特許出願第０８／７４０，７７８号は、生物活性剤及びシクロデキストリンを含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９８年１月２９日に出願された米国特許出願第０９／０１５，３９４号は、生物活性剤の吸収可能な徐放性組成物を教示する。１９９８年７月２３日に出願された米国特許出願第０９／１２１，６５３号は、ペプチドのような治療薬を含んでなるミクロ粒子を水中油型の方法で製造する方法を教示する。１９９８年８月１０日に出願された米国特許出願第０９／１３１，４７２号は、ペプチドのような治療薬とリン酸化したポリマーを含んでなる複合体を教示する。１９９８年１１月２日に出願された米国特許出願第０９／１８４，４１３号は、ペプチドのような治療薬と非重合化ラクトンを担うポリマーを含んでなる複合体を教示する。上述の特許及び出願の教示は、参照により本明細書に組込まれている。
【００５８】
特に断らなければ、本明細書に使用されるあらゆる技術及び科学の用語は、本発明が属する当技術分野の当業者により普通に理解されるのと同じ意味を有する。また、上記に述べたあらゆる出版物、特許出願、特許及び他の文献は、参照により本明細書に組込まれている。
【００５９】
以下の実施例では本発明のペプチドを製造する合成法について説明するが、この方法は当業者のよく知るところである。当業者に知られている他の方法もある。この実施例は説明のために提供されるのであって、本発明の範囲を決して制限するためのものではない。
【実施例】
【００６０】
実施例１：［Ｄ−Ａｌａ8，Ａｌａ17,22,23,27，３−Ｐａｌ19,31，Ｇａｂａ34］−ＧＬＰ−１（７−３４）ＮＨ2
塩素イオンの形態にあるベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）（０．９ｇ，０．３ミリモル）を、以下の反応サイクルを実行するようにプログラムされた、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ２００の反応槽に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）３３％トリフルオロ酢酸／塩化メチレン（１分及び１５分をそれぞれ２回）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）１０％ジイソプロピルエチルアミン／塩化メチレン。
【００６１】
中和した樹脂を、Ｂｏｃ−Ｇａｂａとジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ３ミリモル）とともに塩化メチレンにおいて１時間撹拌し、次いで、生成したアミノ酸樹脂を上記の洗浄プログラム工程（ａ）〜（ｆ）で処理した。次いで、以下のアミノ酸（３ミリモル）を同じ方法により連続的にカップルさせる：Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、Ｂｏｃ−３−Ｐａｌ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｚ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、Ｂｏｃ−３−Ｐａｌ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）。
【００６２】
完成したペプチド配列の付いた樹脂を、アニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（１００ｍｇ）及び無水フッ化水素（３５ｍｌ）と約０℃で混合し、それを約４５分撹拌した。乾燥窒素流の下で過剰なフッ化水素を速やかに蒸発させ、遊離したペプチドをエーテルで沈澱させて洗浄した。次いで、この粗ペプチドを最少量の希酢酸に溶かし、ＶＹＤＡＣ（登録商標）オクタデシルシランシリカ（１０ｍＭ）のカラム（２．５ｘ２５ｃｍ）にかけ、２０〜６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸水溶液の線形勾配で約１時間にわたり溶出させた。薄層クロマトグラフィーと分析用高速液体クロマトグラフィー（Ｂ：４０〜７０％、１％／分；室温；１４．１分）により分画を試験し、収量よりも純度を最大化するようにプールした。この溶液を水から繰り返し凍結乾燥させることにより、白色の綿毛様の粉末として生成物（４９．９ｍｇ）を得た。
【００６３】
この生成物は、ＨＰＬＣ及びｔｌｃにより、均質であることが見出された。酸加水分解物のアミノ酸分析により、ペプチドの組成を確認する。レーザー脱着ＭＳにより、分子量は２８８０とされた（Ｍ＋Ｈの計算値：２８７３）。
実施例２：ペプチド−低級アルキルアミドの合成
実施例１に記載のＢｏｃアミノ酸プロトコールを使用して、Ｏ−ベンジル−ポリスチレン樹脂（しばしばメリフィールド樹脂と呼ばれる）上でペプチドを組み立てる。但し、Ａｓｐ及びＧｌｕアミノ酸のカルボキシル側鎖はＦｍ（フルオレニルメチルエステル）基で保護する。完成したペプチド−樹脂を好適な（エチルアミン、プロピルアミン、フェネチルアミン、１，２−ジアミノエタン等のような）低級アルキルアミンの薄いＤＭＦ溶液に懸濁させ、約６０℃で（約１８時間）撹拌し、濾過して、減圧下で溶媒を除去し、開裂したペプチド油分をエーテルで粉砕して、固形の、保護化アルキルアミドペプチドを得る。次いで、これをＨＦで開裂させ、追加の側鎖保護基を除去し、実施例１に記載のようにＨＰＬＣで精製する。
実施例３〜５
実施例３〜５は、当該ペプチドを産生するのに適した保護化アミノ酸を使用して、実質的に実施例１に記載の方法により合成し得る。
【００６４】
【化１９】
実施例６〜５１
実施例６〜５１は、当該ペプチドを産生するのに適した保護化アミノ酸を使用すること以外は、実質的に実施例１に記載の方法により合成した。レーザー脱着ＭＳによりＭＳを得た（ＮＡはデータなしを意味する）。
【００６５】
【化２０】
【００６６】
【化２１】
【００６７】
【化２２】
実施例５２：［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）
加速化Ｂｏｃ−ケミストリー固相ペプチド合成を実行するように改良されたＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（フォスターシティ、ＣＡ）モデル ４３０Ａペプチド合成機において、表題ペプチドを合成した。Schnolzer, et al., Int. J. Peptide Protein Res., 40: 180 (1992) を参照のこと。０．９１ミリモル／ｇの置換を有する４−メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ，ベルモント、ＣＡ）を使用した。以下の側鎖保護を有するＢｏｃアミノ酸（Ｂａｃｈｅｍ，ＣＡ，トーランス、ＣＡ；Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ラジョラ、ＣＡ）を使用した：Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｍ）−ＯＨ。合成は０．２０ミリモルのスケールで実行した。Ｂｏｃ基は、１００％ ＴＦＡ、２ｘ１分の処理により除去した。Ｂｏｃアミノ酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌでプレ活性化し、ペプチド−樹脂ＴＦＡ塩の先行中和をせずにカップルさせた。カップリング時間は５分であったが、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ残基及びＢｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ残基と以下の残基、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｍ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨではカップリング時間は約２時間であった。
【００６８】
ペプチド鎖の組立ての終了時に、２０％メルカプトエタノール／１０％ ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で樹脂を２ｘ３０分間処理し、Ｈｉｓ側鎖上のＤＮＰ基を除去した。次いで、１００％ ＴＦＡ、２ｘ２分の処理によりＮ末端Ｂｏｃ基を除去した。ペプチド−樹脂を１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ（１ｘ１分）で中和した後に、１５％エタノールアミン／１５％水／７０％ ＤＭＦの溶液で２ｘ３０分処理することにより、Ｔｒｐの側鎖上のホルミル基を除去した。この部分的に脱保護したペプチド−樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧下で乾燥させた。アニソール１ｍｌ及びジチオスレイトール（２４ｍｇ）を含有するＨＦ １０ｍｌにおいて、このペプチド−樹脂を０℃で約７５分間撹拌することによって、最後の開裂を実施した。窒素流を用いてＨＦを除去した。残渣をエーテル（６ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、４Ｎ ＨＯＡｃ（６ｘ１０ｍｌ）で抽出した。
【００６９】
水性抽出液中のペプチド混合物を、逆相ＶＹＤＡＣ（登録商標）Ｃ18カラム（Ｎｅｓｔ Ｇｒｏｕｐ，Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用する調製用逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製した。流速１０ｍｌ／分の線形勾配液（２０％〜５０％の溶液Ｂ、１０５分）を用いてカラムを溶出させた（溶液Ａ＝０．１％ ＴＦＡを含有する水；溶液Ｂ＝０．１％ ＴＦＡ含有アセトニトリル）。分画を回収し、分析用ＨＰＬＣで検査した。純生成物を含有する分画を一緒にし、凍結乾燥させて、白色の固形物９２ｍｇを得た。分析用ＨＰＬＣ分析に基づけば、純度は＞９９％であった。エレクトロ−スプレイ質量分析（ＭＳ（ＥＳ））は、分子量３３２４．２を示した（計算される分子量は３３２３．７である）。
【００７０】
本発明の他の化合物の合成は、所望されるペプチドに依存して適切な保護化アミノ酸を使用すること以外は、実施例５２の［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）の合成についての記載と同じやり方で実行し得る。
【００７１】
［（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）｛ＨＥＰＥＳは（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸）である｝は、以下のように合成し得る：ＭＢＨＡ樹脂（０．２０ミリモル）上でこのペプチド長鎖を組立てた後に、このペプチド−樹脂を１００％ ＴＦＡ（２ｘ２分）で処理し、ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄する。次いで、１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、約２分間でこの樹脂を中和する。ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した後、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリド（０．２３ミリモル）及びＤＩＥＡ（０．７ミリモル）／ＤＭＦでこの樹脂を約１時間処理する。この樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、２−ヒドロキシエチルピペラジン１．２ミリモルで約２時間処理する。この樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、種々の試薬（（１）２０％メルカプトエタノール／１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、及び（２）１５％エタノールアミン／１５％水／７０％ ＤＭＦ）で処理し、上記のように、ペプチドの樹脂からの最終的なＨＦ開裂の前に、Ｈｉｓ側鎖とＴｒｐ側鎖上のホルミル基からＤＮＰ基を除去する。
【００７２】
［（Ｎα−ＨＥＰＡ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）（［（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンアセチル）−Ｈｉｓ7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2）は、［（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）を合成するための直前に記載した方法により実質的に合成し得る。ただし、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリドの代わりに２−ブロモ無水酢酸を使用する。
実施例５３〜９０及び１０４
実施例５３〜９０及び１０４は、好適な保護化アミノ酸を使用すること以外は、実質的に実施例５２により合成した。
【００７３】
【化２３】
【００７４】
【化２４】
【００７５】
【化２５】
【００７６】
【化２６】
実施例９１：［Ａｉｂ8，Ａ５ｃ33］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）
表題化合物は、適切な保護化アミノ酸を使用して、実質的に実施例５２により合成し得る。
実施例９２：［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）
使用すべきＢｏｃアミノ酸は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）（実施例５２）の合成と同じであるが、この実施例ではＬｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）残基のためにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを使用する。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ２．５ミリモルを０．５Ｎ ＨＢＴＵ／ＤＭＦ ４ｍｌに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ １ｍｌを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、１００％ ＴＦＡで２ｘ２分処理してＢｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄する。ミリスチン酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌで２分間プレ活性化し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−樹脂にカップルさせる。カップリング時間は約１時間である。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理してＦｍｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移す。ペプチドの合成及び精製法の残り工程は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）の合成と同じである。
【００７７】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する他の化合物の合成は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）について記載の方法に類似したやり方で実行される。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基がＣ末端でない場合、ペプチド合成機の樹脂上で、Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基の直前にあるペプチドフラグメントを最初に組立てる。
実施例９３〜９８
実施例９３〜９８は、好適なアミノ酸を使用して、実質的に実施例９２に記載の方法により合成し得る。
【００７８】
【化２７】
実施例９９：［Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）−ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）
使用するＢｏｃアミノ酸は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）（実施例９２）の合成に使用されるものと同じである。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）、ＨＯＢｔ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（２．５ｍｌ）／ＤＭＦ（４ｍｌ）で約２分間プレ活性化する。このアミノ酸を、シェーカー上、手動でＰＡＭ樹脂（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ，Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，ＩＬ；置換＝０．８５ミリモル／ｇ）へカップルさせる。カップリング時間は約８時間である。ペプチドを製造するための合成及び精製法の残り工程は実施例５２に記載したものと同じである。
【００７９】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する他の類似体、ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）及びｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の合成は、［Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）−ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）の合成についての記載に類似したやり方で実行される。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。
実施例１００〜１０３
実施例１００〜１０３は、好適なアミノ酸を使用して、実質的に実施例９９に記載の方法により合成し得る。
【００８０】
【化２８】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
本発明は、グルカゴン様ペプチド−１のペプチド類似体、その製剤的に許容される塩、哺乳動物を治療するためにそのような類似体を使用する方法、及びそのために有用な、前記類似体を含んでなる医薬組成物に向けられている。
【０００２】
グルカゴン様ペプチド−１（７−３６）アミド（ＧＬＰ−１）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）は、グルカゴン前駆体のプレプログルカゴンの組織特異的な翻訳後プロセシングにより腸のＬ細胞において合成され（Varndell, J. M., et al., J. Histochem Cytochem, 1985: 33: 1080-6）、食事に反応して循環中へ放出される。ＧＬＰ−１の血漿濃度は、約１５ピコモル／Ｌの絶食レベルから４０ピコモル／Ｌのピーク食後レベルへ上昇する。血漿インスリンの増加は、血漿グルコース濃度における一定の上昇について、グルコースを静脈内投与した場合に比較して経口投与したほうが約３倍大きいことが示されている（Kreymann, B., et al., Lancet 1987: 2, 1300-4）。このインクレチン（incretin）効果として知られるインスリン放出の食事による増強は主に体液性のものであり、ＧＬＰ−１はヒトにおいて最も強力な生理学的インクレチンであると今日考えられている。インスリン放出効果だけでなく、ＧＬＰ−１はグルカゴンの分泌を抑制し、胃の空洞化を遅らせ（Wettergren A., et al., Dig Dis Sci 1993: 38: 665-73）、末梢のグルコース処理を高める可能性がある（D'Alessio, D. A. et al., J. Clin Invest 1994: 93: 2293-6）。
【０００３】
１９９４年、ＧＬＰ−１の単回皮下（ｓ／ｃ）投与によりインスリン非依存型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）の患者において食後のグルコースレベルが完全に正常化され得るという観察事実から、ＧＬＰ−１の治療薬としての可能性が示唆された（Gutniak, M. K., et al., Diabetes Care 1994: 17: 1039-44）。この効果は、インスリン放出の増加とグルカゴン分泌の減少の両方により介在されると考えられた。さらに、ＧＬＰ−１を静脈内注入すると、ＮＩＤＤＭ患者において食後の胃の空洞化を遅らせることが示された（Williams, B., et al., J. Clin Endo Metab 1996: 81: 327-32）。スルホニル尿素と異なり、ＧＬＰ−１のインスリン放出促進作用は血漿グルコース濃度に依存している（Holz, G. G. 4th, et al., Nature 1993: 361: 362-5）。つまり、低い血漿グルコース濃度ではＧＬＰ−１介在性のインスリン放出がないために、重篤な低血糖症を招かないのである。この複合的な作用により、ＧＬＰ−１は、ＮＩＤＤＭを治療するために現在使用されている他の薬剤に対する独自の潜在的な治療優位性を有している。
【０００４】
数多くの研究は、健常被検者へ与えたとき、ＧＬＰ−１がインスリン及びグルカゴンの濃度だけでなく血糖レベルにも強力に影響を及ぼすこと（Orskov, C, Diabetologia 35: 701-711, 1992; Holst, J. J., et al., Potential of GLP-1 in diabetes management in Glucagon III, Handbook of Experimental Pharmacology, Lefevbre PJ, Ed. Berlin, Springer Verlag, 1996, p. 311-326）、及びこの効果がグルコース依存的であること（Kreymann, B., et al., Lancet ii: 1300-1304, 1987; Weir, G. C., et al., Diabetes 38: 338-342, 1989）を示した。さらに、それはまた糖尿病を有する患者にも有効であり（Gutniak, M., N. Engl J Med 226: 1316-1322, 1992; Nathan, D. M., et al., Diabetes Care 15: 270-276, 1992）、２型糖尿病の被検者において血糖レベルを正常化し（Nauck, M. A., et al., Diabetologia 36: 741-744, 1993）、１型患者において血糖コントロールを改善し（Creutzfeldt, W. O., et al., Diabetes Care 19: 580-586, 1996）、治療薬としてのその使用の可能性を高めている。
【０００５】
しかしながら、ＧＬＰ−１は代謝的に不安定であり、in vivo での血漿半減期（ｔ1/2）は１〜２分にすぎない。外から投与したＧＬＰ−１も急速に分解される（Deacon, C. F., et al., Diabetes 44: 1126-1131, 1995）。この代謝不安定性はネーティブなＧＬＰ−１の治療薬としての可能性を制限する。従って、ネーティブなＧＬＰ−１より活性であるか又はより代謝的に安定であるＧＬＰ−１類似体に対するニーズが存在するのである。
【０００６】
発明の要約
１つの側面では、本発明は、式（Ｉ）の化合物に向けられている
（Ｒ2Ｒ3）−Ａ7−Ａ8−Ａ9−Ａ10−Ａ11−Ａ12−Ａ13−Ａ14−Ａ15−Ａ16−Ａ17−Ａ18−Ａ19−Ａ20−Ａ21−Ａ22−Ａ23−Ａ24−Ａ25−Ａ26−Ａ27−Ａ28−Ａ29−Ａ30−Ａ31−Ａ32−Ａ33−Ａ34−Ａ35−Ａ36−Ａ37−Ｒ1 （Ｉ）
［式中：
Ａ7はＬ−Ｈｉｓ、Ｕｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｔｙｒ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ｈｐｐａ、Ｔｍａ−Ｈｉｓ、Ａｍｐであるか又は削除され（但し、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ又はＨｐｐａである場合、Ｒ2及びＲ3は削除される）；
Ａ8はＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｒｇ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；
Ａ9はＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｓｐ又はＡｓｐであり；
Ａ10はＧｌｙ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｐｈｅ又はＡｉｂであり；
Ａ11はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ12はＰｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｃ、Ａｉｂ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｃｈａ、Ｔｒｐ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ13はＴｈｒ又はＳｅｒであり；
Ａ14はＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ15はＡｓｐ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｓｐ又はＧｌｕであり；
Ａ16はＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｔｂａ又はＣｈａであり；
Ａ17はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ又はＴｈｒであり；
Ａ18はＳｅｒ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ又はＴｈｒであり；
Ａ19はＴｙｒ、Ｄ−Ｔｙｒ、Ｃｈａ、Ｐｈｅ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ａｃｃ、β−Ｎａｌ、Ａｍｐ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ20はＬｅｕ、Ａｌａ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ又はＸ1−Ｐｈｅであり；
Ａ21はＧｌｕ、Ａｌａ又はＡｓｐであり；
Ａ22はＧｌｙ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、β−Ａｌａ又はＡｉｂであり；
Ａ23はＧｌｎ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ａｓｎ又はＧｌｕであり；
Ａ24はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ又はＡｃｃであり；
Ａ25はＡｌａ、Ａｉｂ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ｔｌｅ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ26はＬｙｓ、Ａｌａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ａｍｐ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）又はＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であり；
Ａ27はＧｌｕ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ又はＡｓｐであり；
Ａ28はＰｈｅ、Ａｌａ、Ｐａｌ、β−Ｎａｌ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ａｉｃ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ又はＴｒｐであり；
Ａ29はＩｌｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｖａｌ、Ａｂｕ、Ａｌａ、Ｔｂａ又はＰｈｅであり；
Ａ30はＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃであるか又は削除され；
Ａ31はＴｒｐ、Ａｌａ、β−Ｎａｌ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ、Ｐｈｅ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｃｈａ、Ａｍｐであるか又は削除され；
Ａ32はＬｅｕ、Ａｌａ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｎｌｅ、Ｉｌｅ、Ｃｈａ、Ｔｌｅ、Ｐｈｅ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ａｌａであるか又は削除され；
Ａ33はＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｌｅ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ａｂｕ、Ｘ1−Ｐｈｅ、Ｔｂａ、Ｇａｂａであるか又は削除され；
Ａ34はＬｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、Ａｍｐ、Ｇａｂａ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除され；
Ａ35はＧｌｙであるか又は削除され；
Ａ36はＬ−又はＤ−Ａｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｌｙｓ、Ｄ−又はＬ−ｈＡｒｇ、Ｄ−又はＬ−Ｏｒｎ、Ａｍｐ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−Ｎ（Ｒ10Ｒ11））−Ｃ（Ｏ）、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）e−Ｘ3）−Ｃ（Ｏ）であるか又は削除され；
Ａ37はＧｌｙであるか又は削除され；
Ｘ1は、それぞれの出現につき、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＯＨ及びハロからなる群から独立して選択され；
Ｒ1はＯＨ、ＮＨ2、（Ｃ1−Ｃ12）アルコキシ又はＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−Ｚ0であり｛ここでＸ2は（Ｃ1−Ｃ12）炭化水素部分であり、Ｚ0はＨ、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ又はＣＯＮＨ2である｝；
Ｘ3は、
【０００７】
【化１】
又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＲ12であり｛ここで、Ｘ4は、それぞれの出現につき独立して、−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−又は−ＣＨ2−であり、及びｆは、それぞれの出現につき独立して、１から２９の整数である｝；
Ｒ2及びＲ3のそれぞれは、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、及びヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキルからなる群から独立して選択されるか；又はＲ2及びＲ3の１つはＣ（Ｏ）Ｘ5であり｛ここで、Ｘ5は（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、フェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、ヒドロキシフェニル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、ヒドロキシナフチル（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、
【０００８】
【化２】
【０００９】
【化３】
又は
【００１０】
【化４】
であり、ここでＹはＨ又はＯＨであり、ｒは０〜４であって、ｑは０〜４である｝；
ｎは、それぞれの出現につき独立して、１から５の整数であり；及び
Ｒ10及びＲ11は、それぞれの出現につき、それぞれ独立して、Ｈ、（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１１】
【化５】
であり｛但し、Ｒ10が（Ｃ1−Ｃ30）アシル、（Ｃ1−Ｃ30）アルキルスルホニル、−Ｃ（（ＮＨ）（ＮＨ2））又は
【００１２】
【化６】
である場合、Ｒ11はＨ又は（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである｝；及び
Ｒ12は（Ｃ1−Ｃ30）アルキルである；
但し：
（ｉ）式（Ｉ）の化合物の少なくとも１つのアミノ酸は、ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１，２）又はｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４）のネーティブ配列と同じではなく；
（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、１つの位置がＡｌａにより置換された、ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１，２）又はｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４）の類似体ではなく；
（ｉｉｉ）式（Ｉ）の化合物は、［Ｌｙｓ26（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５〜８）、［Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：９〜１２）、［Ｌｙｓ26,34−ビス（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１３〜１６）、［Ａｒｇ26，Ｌｙｓ34（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（８−３６又は−３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：１７〜２０）又は［Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36（Ｎε−アルカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−Ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２１〜２４）（ここでＥは−ＯＨ又は−ＮＨ2である）ではなく；
（ｉｖ）式（Ｉ）の化合物は、Ｚ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−ＯＨ、Ｚ1−ｈＧＬＰ−１（７−３６又は３７）−ＮＨ2ではなく｛ここでＺ1は以下の群から選択される：
（ａ）［Ａｒｇ26］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２５〜２８）、［Ａｒｇ34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２９〜３２）、［Ａｒｇ26,34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３３〜３６），［Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３７〜４０）、［Ａｒｇ26，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４１〜４４）、［Ａｒｇ34，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４５〜４８）、［Ｄ−Ｌｙｓ36］，［Ａｒｇ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：３，４，１，２）、［Ｄ−Ａｒｇ36］，［Ａｒｇ26,34，Ｌｙｓ36］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：４９〜５２）又は［Ａｒｇ26,36，Ｌｙｓ34］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：２５〜２８）；
（ｂ）［Ａｓｐ21］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５３〜５６）；
（ｃ）［Ａｉｂ8］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５７〜６０）、［Ｄ−Ａｌａ8］及び［Ａｓｐ9］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６１〜６４）のうち少なくとも１つ；及び
（ｄ）［Ｔｙｒ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６５〜６８）、［Ｎ−アシル−Ｈｉｓ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：６９〜７２）、［Ｎ−アルキル−Ｈｉｓ7］［Ｎ−アシル−Ｄ−Ｈｉｓ7］（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３〜７６）、又は［Ｎ−アルキル−Ｄ−Ｈｉｓ7］｝；
（ｖ）式（Ｉ）の化合物は、群（ａ）〜（ｄ）に列挙した置換基のいずれか２つの組み合わせではなく；及び
（ｖｉ）式（Ｉ）の化合物は、［Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ8］ｈＧＬＰ−１（８−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７７，７８）、［Ｇｌｕ15］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：７９，８０）、［Ａｓｐ21］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：５３，５４）又は［Ｐｈｅ31］ｈＧＬＰ−１（７−３６又は−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯＳ：８１，８２）ではない］。
【００１３】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ11がＴｈｒであり；Ａ13がＴｈｒであり；Ａ14がＳｅｒ、Ａｉｂ又はＡｌａであり；Ａ17がＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ18がＳｅｒ、Ａｌａ、Ａｉｂ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ21がＧｌｕ又はＡｌａであり；Ａ23がＧｌｎ、Ｇｌｕ又はＡｌａであり；及びＡ27がＧｌｕ又はＡｌａである化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１４】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ9がＧｌｕ、Ｎ−Ｍｅ−Ｇｌｕ又はＮ−Ｍｅ−Ａｓｐであり；Ａ12がＰｈｅ、Ａｃｃ又はＡｉｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ｄ−Ｖａｌ、Ａｃｃ、Ａｉｂ、Ａｌａ、Ｔｌｅ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ19がＴｙｒ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ又はＤ−Ｔｙｒであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａｃｃ、Ｃｈａ、Ａｌａ又はＴｌｅであり；Ａ24がＡｌａ、Ａｉｂ又はＡｃｃであり；Ａ25がＡｌａ、Ａｉｂ、Ａｃｃ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、ｈＡｒｇ、Ｏｒｎ、ＨＮ−ＣＨ（（ＣＨ2）n−ＮＨＲ10）−Ｃ（Ｏ）であり；Ａ28がＰｈｅ又はＡｌａであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａｃｃ又はＴｌｅであり；Ａ30がＡｌａ、Ａｉｂであるか又は削除され；Ａ31がＴｒｐ、Ａｌａ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌであるか又は削除され；Ａ32がＬｅｕ、Ａｃｃ、Ｃｈａ、Ａｌａであるか又は削除され；Ａ33がＶａｌ、Ａｃｃ、Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ｔｌｅであるか又は削除される化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１５】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ａ8がＡｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ａｉｂ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｎ−Ｍｅ−Ａｌａ、Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ａｌａ又はＮ−Ｍｅ−Ｇｌｙであり；Ａ10がＧｌｙ、Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ又はＰｈｅであり；Ａ12がＰｈｅ、Ａ６ｃ又はＡ５ｃであり；Ａ16がＶａｌ、Ａｌａ、Ｔｌｅ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＤ−Ｖａｌであり；Ａ20がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｃｈａ、Ａｌａ又はＴｌｅであり；Ａ22がＧｌｙ、Ａｉｂ、β−Ａｌａ、Ｌ−Ａｌａ又はＤ−Ａｌａであり；Ａ24がＡｌａ又はＡｉｂであり；Ａ29がＩｌｅ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ又はＴｌｅであり；Ａ32がＬｅｕ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ｃｈａ、Ａｌａであるか又は削除され；Ａ33がＶａｌ、Ａ６ｃ、Ａ５ｃ、Ａｌａ、Ｇａｂａ、Ｔｌｅであるか又は削除される化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００１６】
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物は、Ｒ1がＯＨ又はＮＨ2である化合物、又はその製剤的に許容される塩である。
直前に述べた式（Ｉ）の化合物の好ましい化合物又はその製剤的に許容される塩では、Ｒ2がＨであり、Ｒ3が（Ｃ1−Ｃ30）アルキル、（Ｃ2−Ｃ30）アルケニル、（Ｃ1−Ｃ30）アシル、
【００１７】
【化７】
【００１８】
【化８】
又は
【００１９】
【化９】
である。
【００２０】
式（Ｉ）の最も好ましい化合物は、
【００２１】
【化１０】
【００２２】
【化１１】
である前記化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００２３】
式（Ｉ）のもう１つの最も好ましい化合物は、
【００２４】
【化１２】
【００２５】
【化１３】
である前記化合物；又はその製剤的に許容される塩である。
【００２６】
もう１つの側面では、本発明は、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量と製剤的に許容される担体又は希釈剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００２７】
さらにもう１つの側面では、本発明は、ＧＬＰ−１受容体からの作動薬効果をそれが必要とされる被検者において誘導する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。
【００２８】
さらなる側面では、本発明は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネフローゼ症候群、肝硬変、肺浮腫、高血圧、及び食物摂取の低減が所望される障害からなる群から選択される疾患を治療が必要とされる被検者において治療する、上記に定義したような式（Ｉ）の化合物又はその製剤的に許容される塩の有効量を前記被検者へ投与することを含む方法を提供する。直前の方法の好ましい方法では、疾患はＩ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病である。
【００２９】
Ｎ末端アミノ酸を例外とし、本明細書に開示されるアミノ酸のあらゆる略号（例、Ａｌａ）は、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖である（例えば、ＡｌａではＣＨ3）。Ｎ末端アミノ酸では、略号は（Ｒ2Ｒ3）−Ｎ−ＣＨ（Ｒ）−ＣＯ−の構造を表し、ここでＲはアミノ酸の側鎖であり、Ｒ2及びＲ3は上記の定義通りであるが、Ａ7がＵｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ又はＨｐｐａである場合、Ｕｒａ、Ｐａａ、Ｐｔａ及びＨｐｐａがここではｄｅｓ−アミノアミノ酸と考えられるので、Ｒ2とＲ3は存在しない。β−Ｎａｌ、Ｎｌｅ、Ｃｈａ、Ａｍｐ、３−Ｐａｌ、４−Ｐａｌ及びＡｉｂという略号は、以下のα−アミノ酸をそれぞれ表す：β−（２−ナフチル）アラニン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、４−アミノ−フェニルアラニン、β−（３−ピリジニル）アラニン、β−（４−ピリジニル）アラニン及びα−アミノイソ酪酸。他のアミノ酸の定義は以下の通りである：Ｕｒａはウロカン酸；Ｐｔａは（４−ピリジルチオ）酢酸；Ｐａａはｔｒａｎｓ−３−（３−ピリジル）アクリル酸；Ｔｍａ−ＨｉｓはＮ，Ｎ−テトラメチルアミジノ−ヒスチジン；Ｎ−Ｍｅ−ＡｌａはＮ−メチル−アラニン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｙはＮ−メチル−グリシン；Ｎ−Ｍｅ−ＧｌｕはＮ−メチル−グルタミン酸；Ｔｌｅはｔｅｒｔ−ブチルグリシン；Ａｂｕはα−アミノ酪酸；Ｔｂａはｔｅｒｔ−ブチルアラニン；Ｏｒｎはオルニチン；Ａｉｂはα−アミノイソ酪酸；β−Ａｌａはβ−アラニン；Ｇａｂａはγ−アミノ酪酸；Ａｖａは５−アミノ吉草酸；及びＡｉｃは２−アミノインダン−２−カルボン酸である。
【００３０】
Ａｃｃが意味するものは、１−アミノ−１−シクロプロパンカルボン酸（Ａ３ｃ）；１−アミノ−１−シクロブタンカルボン酸（Ａ４ｃ）；１−アミノ−１−シクロペンタンカルボン酸（Ａ５ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａ６ｃ）；１−アミノ−１−シクロヘプタンカルボン酸（Ａ７ｃ）；１−アミノ−１−シクロオクタンカルボン酸（Ａ８ｃ）；及び１−アミノ−１−シクロノナンカルボン酸（Ａ９ｃ）の群から選択されるアミノ酸である。上記の式では、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシフェニルアルキル、及びヒドロキシナフチルアルキルは、１〜４個のヒドロキシ置換基を含有し得る。ＣＯＸ5は−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5を表す。−Ｃ＝Ｏ・Ｘ5の例には、限定しないが、アセチル及びフェニルプロピオニルが含まれる。
【００３１】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３２】
【化１４】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルキルスルホニル）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３３】
【化１５】
Ｌｙｓ（Ｎε−（２−（４−アルキル−１−ピペラジン）−アセチル））が意味するものは以下の構造により表される：
【００３４】
【化１６】
Ａｓｐ（１−（４−アルキル−ピペラジン））が意味するものは以下の構造により表される：
【００３５】
【化１７】
Ａｓｐ（１−アルキルアミノ）が意味するものは以下の構造により表される：
【００３６】
【化１８】
上述した諸構造におけるｎの変数は１〜３０である。
【００３７】
本明細書に使用される他の略号の完全な名称は以下の通りである：Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦ＝フッ化水素、Ｆｍ＝ホルミル、Ｘａｎ＝キサンチル、Ｂｚｌ＝ベンジル、Ｔｏｓ＝トシル、ＤＮＰ＝２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃ＝酢酸、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、２ＣｌＺ＝２−クロロベンジルオキシカルボニル、及びＯｃＨｅｘ＝Ｏ−シクロヘキシル。
【００３８】
本発明のペプチドはまた、本明細書では別の形式により、例えば［Ａ５ｃ8］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３０）と示されるが、ここでは天然の配列から置換されたアミノ酸が最初の括弧のなかに配置される（例えば、ｈＧＬＰ−１のＡｌａ8に対するＡ５ｃ8）。略号ＧＬＰ−１はグルカゴン様ペプチド−１を意味し、ｈＧＬＰ−１はヒトグルカゴン様ペプチド−１を意味する。括弧内の数字はこのペプチドに存在するアミノ酸の位数を意味する（例えば、ｈＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）は、ヒトＧＬＰ−１のペプチド配列のアミノ酸７位〜３６位である）。ｈＧＬＰ−１（７−３７）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の配列が Mojsov, S., Int. J. Peptide Protein Res., 40, 1992, pp. 333-342 に挙げられている。ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）における「ＮＨ2」の明示は、このペプチドのＣ末端がアミド化されていることを示す。ｈＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）は、Ｃ末端がフリーの酸であることを示す。
発明の詳細な説明
本発明のペプチドは標準的な固相ペプチド合成により製造し得る。例えば、Stewart, J. M., et al., Solid Phase Synthesis (Pierce Chemical Co., 2d ed. 1984) を参照のこと。上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシ基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＥ1は、処理済の樹脂を３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、遊離酸、例えばＥ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。遊離酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００３９】
Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＮＨ2（即ち、Ｚ0＝ＣＯＮＨ2）である場合、ペプチドの合成は、ＭＢＨＡ樹脂へカップルしたＢｏｃＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨから始まる。Ｒ1がＮＨ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨ（即ち、Ｚ0＝ＣＯＯＨ）である場合、ペプチドの合成は、ＰＡＭ樹脂へカップルしたＢｏｃ−ＨＮ−Ｘ2−ＣＨ2−ＣＯＯＨから始まる。
【００４０】
以下に、本発明のペプチドを製造するための合成法を説明するが、この方法は当業者によく知られている。当業者に知られている他の方法もある。
塩化イオンの形態にあるベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）（０．９ｇ，０．３ミリモル）を、以下の反応サイクルを実行するようにプログラムされた、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ２００の反応槽へ入れる：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）３３％トリフルオロ酢酸／塩化メチレン（１分及び１５分をそれぞれ２回）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）１０％ジイソプロピルエチルアミン／塩化メチレン。
【００４１】
中和した樹脂を、合成される所望のペプチドのＣ末端アミノ酸になるべきＢｏｃ−保護化アミノ酸とジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ３ミリモル）とともに塩化メチレンにおいて１時間撹拌し、次いで、生成したアミノ酸樹脂を上記の洗浄プログラムの工程（ａ）〜（ｆ）で処理する。次いで、所望されるペプチドの他のアミノ酸（３ミリモル）を同じ方法により連続的にカップルさせる。完成したペプチドを、アニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（１００ｍｇ）及び無水フッ化水素（３５ｍｌ）と約０℃で混合し、それを約４５分撹拌することによって樹脂から開裂させる。乾燥窒素流の下で過剰なフッ化水素を速やかに蒸発させ、遊離したペプチドをエーテルで沈澱させて洗浄する。次いで、この粗ペプチドを最少量の希酢酸に溶かし、ＶＹＤＡＣ（登録商標）オクタデシルシランシリカ（１０ｍＭ）のカラム（２．５ｘ２５ｃｍ）にかけ、２０〜６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸水溶液の線形勾配で約１時間にわたり溶出させる。薄層クロマトグラフィーと分析用高速液体クロマトグラフィー（Ｂ：４０〜７０％、１％／分、溶液Ｂ：８０％アセトニトリル／０．１％ ＴＦＡを含有する水）により分画を試験し、収量よりも純度を最大化するようにプールする。この溶液を水から繰り返し凍結乾燥させることにより、白色の綿毛様の粉末として生成物を得る。
【００４２】
ペプチド生成物をＨＰＬＣにより分析する。ペプチド生成物の酸加水分解物のアミノ酸分析により、ペプチドの組成を確認することができる。レーザー脱着ＭＳを使用して、ペプチドの分子量を決定する。
【００４３】
保護化アミノ酸、１−［Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ］−１−シクロヘキサン−カルボン酸（Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ）を以下のように合成した。１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ピッツバーグ、ＰＡ）１９．１ｇ（０．１３３モル）をジオキサン２００ｍｌ及び水１００ｍｌに溶かした。それへ２Ｎ ＮａＯＨ ６７ｍｌを加えた。この溶液を氷水浴に冷やした。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート３２．０ｇ（０．１４７モル）をこの溶液へ加えた。この反応混合液を室温で一晩撹拌した。次いで、減圧下でジオキサンを除去した。この残存した水溶液へ酢酸エチル２００ｍｌを加えた。この混合液を氷水浴に冷やした。４Ｎ ＨＣｌを加えることによって、水層のｐＨを約３へ調整した。有機層を分離した。水層を酢酸エチル（１ｘ１００ｍｌ）で抽出した。２つの有機層を一緒にし、水（２ｘ１５０ｍｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮乾固させた。酢酸エチル／ヘキサンにおいて残渣を再結晶させた。純生成物９．２ｇを得た。収率２９％。
【００４４】
Ｂｏｃ−Ａ５ｃ−ＯＨはＢｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨに類似したやり方で合成した。他の保護化Ａｃｃアミノ酸も、本明細書の教示により可能なように、類似したやり方で当業者により製造し得る。
【００４５】
Ａ５ｃ、Ａ６ｃ及び／又はＡｉｂを含有する本発明のペプチドの合成においては、上記の残基群とその直後に述べた残基につき、カップリング時間は約２時間である。［Ｔｍａ−Ｈｉｓ7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７）の合成については、最終のカップリング反応において、ＨＢＴＵ（２ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌを使用して、ペプチド−樹脂のＮ末端フリーアミンと反応させるが、このカップリング時間は約２時間である。
【００４６】
上記に使用した略号の完全な名称は以下の通りである：Ｂｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル、ＨＦ＝フッ化水素、Ｆｍ＝ホルミル、Ｘａｎ＝キサンチル、Ｂｚｌ＝ベンジル、Ｔｏｓ＝トシル、ＤＮＰ＝２，４−ジニトロフェニル、ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム・ヘキサフルオロリン酸、ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン、ＨＯＡｃ＝酢酸、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、２ＣｌＺ＝２−クロロベンジルオキシカルボニル、２ＢｒＺ＝２−ブロモベンジルオキシカルボニル、及びＯｃＨｅｘ＝Ｏ−シクロヘキシル。
【００４７】
上記一般式の置換基Ｒ2及びＲ3は、当技術分野で知られている標準法により、Ｎ末端アミノ酸のフリーアミンに付けることが可能である。例えば、アルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）アルキルは、還元的アルキル化を使用して付けることができる。ヒドロキシアルキル基、例えば（Ｃ1−Ｃ30）ヒドロキシアルキルも、フリーのヒドロキシル基がｔ−ブチルエステルで保護されている還元的アルキル化を使用して付けることができる。アシル基、例えばＣＯＸ1は、処理済の樹脂を３モル当量の遊離酸及びジイソプロピルカルボジイミドとともに塩化メチレンにおいて１時間混合することにより、遊離酸、例えばＸ1ＣＯＯＨをＮ末端アミノ酸のフリーアミンへカップリングさせることによって付けることができる。遊離酸がフリーのヒドロキシ基を含有する場合（例えば、ｐ−ヒドロキシフェニルプロピオン酸）、このカップリングはさらに３モル当量のＨＯＢＴとともに実施されるべきである。
【００４８】
本発明の化合物は、以下の方法により、ＧＬＰ−１受容体に結合する化合物としての活性について試験し得る。
細胞培養：
ＧＬＰ−１受容体を発現する、ＲＩＮ ５Ｆ ラットインスリノーマ細胞（ＡＴＣＣ−＃ ＣＲＬ−２０５８，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，マナッサス、ＶＡ）を、１０％胎仔血清含有ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養し、５％ ＣＯ2／９５％空気の加湿気体において約３７℃に維持した。
放射リガンド結合：
放射リガンド結合試験のために、Ｂｒｉｎｋｍａｎ Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ウェストベリー、ＮＹ）（目盛６にセット、１５秒）を用いて、氷冷５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ ２０ｍｌにおいてＲＩＮ細胞を均質化することにより膜を調製した。このホモジェネートを遠心分離（３９，０００ｇ／１０分）により２回洗浄し、最終ペレットを、２．５ｍＭ ＭｇＣｌ2，バシトラシン（シグマケミカル、セントルイス、ＭＯ）０．１ｍｇ／ｍｌ、及び０．１％ ＢＳＡを含有する５０ｍＭ トリス−ＨＣｌに再懸濁させた。アッセイでは、０．０５ｎＭ［125Ｉ］ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）（〜２２００Ｃｉ／ミリモル、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ、ボストン、ＭＡ）とともに、非標識の競合試験ペプチド０．０５ｍｌとともにか、又は含まずに、アリコート（０．４ｍｌ）をインキュベートした。１００分のインキュベーション（２５℃）後に、０．５％ポリエチレンイミンに前もって浸漬しておいたＧＦ／Ｃフィルター（Ｂｒａｎｄｅｌ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）を通す高速濾過により、結合した［125Ｉ］ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）をフリーのものから分離した。次いで、氷冷した５０ｍＭトリス−ＨＣｌのアリコート５ｍｌを用いてこのフィルターを３回洗浄し、フィルター上にトラップされた結合放射活性をガンマ分析計（Ｗａｌｌａｃ ＬＫＢ，ゲイサースブルグ、ＭＤ）により計数した。［全（125Ｉ）ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５１）結合］から［ＧＬＰ−１（７−３６）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）（Ｂａｃｈｅｍ，トーランス、ＣＡ）１０００ｎＭ存在下での結合］を差引いたものを特異的な結合と定義した。
【００４９】
本発明のペプチドは製剤的に許容される塩の形態で提供され得る。そのような塩の例には、限定しないが、有機酸（例、酢酸、乳酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸又はパモン酸）、無機酸（例、塩酸、硫酸、又はリン酸）及び高分子酸（例、タンニン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はポリ乳酸−グリコール酸のコポリマー）とともに形成されるものが含まれる。本発明のペプチドの塩を製造する典型的な方法は当技術分野でよく知られていて、塩交換の標準法により達成し得る。従って、本発明のペプチドのＴＦＡ塩（ＴＦＡ塩は、緩衝溶液含有ＴＦＡで溶出させる調製用ＨＰＬＣを使用することによってペプチドの精製から生じる）は、少量の０．２５Ｎ酢酸水溶液にこのペプチドを溶かすことによって酢酸塩のような別の塩へ変換することができる。生成した溶液を半調製用ＨＰＬＣカラム（Ｚｏｒｂａｘ，３００ＳＢ，Ｃ−８）にかける。このカラムを（１）０．１Ｎ酢酸アンモニウム水溶液、０．５時間、（２）０．２５Ｎ酢酸水溶液、０．５時間、及び（３）線形勾配（２０％〜１００％のＢ溶液、３０分）、流速４ｍｌ／分（Ａ溶液：０．２５Ｎ酢酸水溶液；Ｂ溶液：０．２５Ｎ酢酸のアセトニトリル／水、８０：２０溶液）で溶出させる。ペプチド含有分画を回収し、凍結乾燥させる。
【００５０】
当業者によく知られているように、ＧＬＰ−１の既知の使用と潜在的な使用は様々で、多岐に渡っている［Todd, J. F. et al., Clinical Science, 1998, 95, pp. 325-329; 及びTodd, J. F. et al., European Journal of Clinical Investigation, 1997, 27 pp. 533-536 を参照のこと］。従って、作動薬効果を誘導する目的のために本発明の化合物を投与すると、ＧＬＰ−１そのものと同じ効果及び使用を有し得る。こういったＧＬＰ−１の様々な使用は以下のように要約し得る：Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、グルカゴノーマ、気道の分泌障害、代謝性障害、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄及び神経変性疾患の治療。被検者から拮抗薬効果を誘導する本発明のＧＬＰ−１類似体は、以下を治療するために使用し得る：低血糖症、及び胃切除又は小腸切除に関連した吸収不全症候群。
【００５１】
従って、本発明は、製剤的に許容される担体とともに有効成分として式（Ｉ）の化合物群の少なくとも１つを含んでなる医薬組成物をその範囲内に包含する。
本発明の組成物にある有効成分の用量は変化し得るが、有効成分の量は好適な剤形が得られるようなものであることが必要である。選択される投与量は、所望される治療効果、投与経路、及び治療期間に依存する。一般に、本発明の諸活性に有効な投与量は、１ｘ１０-7〜２００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１ｘ１０-4〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあり、これは単回用量として投与し得るか又は数回投与へ分割し得る。
【００５２】
本発明の化合物は、経口、腸管外（例、筋肉内、腹腔内、静脈内又は皮下注射、又は埋込み）、鼻、膣、直腸、舌下又は局所の投与経路により投与され、それぞれの投与経路に適した剤形を提供するために、製剤的に許容される担体と製剤化され得る。
【００５３】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉末及び顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形では、活性化合物が、スクロース、ラクトース又はデンプンのような少なくとも１種の製剤的に許容される不活性な担体とともに混和される。そのような剤形は、普通の方法として、そのような不活性希釈剤以外の追加物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤も含み得る。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合、剤形は緩衝剤を含む場合がある。錠剤と丸剤は、さらに腸溶コーティング剤とともに製造し得る。
【００５４】
経口投与用の液体剤形には、当技術分野で通常使用される水のような不活性希釈剤を含有する、製剤的に許容される乳液、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル液が含まれる。そのような不活性希釈剤とは別に、組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、フレーバー及び芳香剤のようなアジュバントを包含し得る。
【００５５】
本発明による腸管外投与の調製物には、滅菌の水溶液又は非水溶液、懸濁液又は乳液が含まれる。非水性の溶媒又は担体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油のような植物油、ゼラチン、及びオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである。そのような剤形はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤のようなアジュバントを含有し得る。それらは、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過、滅菌剤を組成物へ取込むこと、組成物に照射すること、又は組成物を加熱することによって滅菌し得る。それらはまた、使用直前に滅菌水か又は他の無菌で注射可能な媒体に溶かし得る無菌の固体組成物の形態でも製造し得る。
【００５６】
直腸又は膣に投与する組成物は、好ましくは、有効成分に加えて、ココア脂や坐剤用ワックスのような賦形剤を含有し得る坐剤である。
鼻内又は舌下に投与する組成物もまた当技術分野でよく知られている標準的な賦形剤とともに製造される。
【００５７】
さらに、本発明の化合物は、以下の特許及び特許出願に記載されたような徐放性組成物において投与し得る。米国特許第５，６７２，６５９号は、生物活性剤及びポリエステルを含んでなる徐放性組成物を教示する。米国特許第５，５９５，７６０号は、ゲル化し得る形態に生物活性剤を含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９７年９月９日に出願された米国特許出願第０８／９２９，３６３号は、生物活性剤及びキトサンを含んでなる高分子性の徐放性組成物を教示する。１９９６年１１月１日に出願された米国特許出願第０８／７４０，７７８号は、生物活性剤及びシクロデキストリンを含んでなる徐放性組成物を教示する。１９９８年１月２９日に出願された米国特許出願第０９／０１５，３９４号は、生物活性剤の吸収可能な徐放性組成物を教示する。１９９８年７月２３日に出願された米国特許出願第０９／１２１，６５３号は、ペプチドのような治療薬を含んでなるミクロ粒子を水中油型の方法で製造する方法を教示する。１９９８年８月１０日に出願された米国特許出願第０９／１３１，４７２号は、ペプチドのような治療薬とリン酸化したポリマーを含んでなる複合体を教示する。１９９８年１１月２日に出願された米国特許出願第０９／１８４，４１３号は、ペプチドのような治療薬と非重合化ラクトンを担うポリマーを含んでなる複合体を教示する。上述の特許及び出願の教示は、参照により本明細書に組込まれている。
【００５８】
特に断らなければ、本明細書に使用されるあらゆる技術及び科学の用語は、本発明が属する当技術分野の当業者により普通に理解されるのと同じ意味を有する。また、上記に述べたあらゆる出版物、特許出願、特許及び他の文献は、参照により本明細書に組込まれている。
【００５９】
以下の実施例では本発明のペプチドを製造する合成法について説明するが、この方法は当業者のよく知るところである。当業者に知られている他の方法もある。この実施例は説明のために提供されるのであって、本発明の範囲を決して制限するためのものではない。
【実施例】
【００６０】
実施例１：［Ｄ−Ａｌａ8，Ａｌａ17,22,23,27，３−Ｐａｌ19,31，Ｇａｂａ34］−ＧＬＰ−１（７−３４）ＮＨ2
塩素イオンの形態にあるベンズヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）（０．９ｇ，０．３ミリモル）を、以下の反応サイクルを実行するようにプログラムされた、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ Ｍｏｄｅｌ ２００の反応槽に入れた：（ａ）塩化メチレン；（ｂ）３３％トリフルオロ酢酸／塩化メチレン（１分及び１５分をそれぞれ２回）；（ｃ）塩化メチレン；（ｄ）エタノール；（ｅ）塩化メチレン；（ｆ）１０％ジイソプロピルエチルアミン／塩化メチレン。
【００６１】
中和した樹脂を、Ｂｏｃ−Ｇａｂａとジイソプロピルカルボジイミド（それぞれ３ミリモル）とともに塩化メチレンにおいて１時間撹拌し、次いで、生成したアミノ酸樹脂を上記の洗浄プログラム工程（ａ）〜（ｆ）で処理した。次いで、以下のアミノ酸（３ミリモル）を同じ方法により連続的にカップルさせる：Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、Ｂｏｃ−３−Ｐａｌ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｚ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、Ｂｏｃ−３−Ｐａｌ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｄ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｍ）。
【００６２】
完成したペプチド配列の付いた樹脂を、アニソール（５ｍｌ）、ジチオスレイトール（１００ｍｇ）及び無水フッ化水素（３５ｍｌ）と約０℃で混合し、それを約４５分撹拌した。乾燥窒素流の下で過剰なフッ化水素を速やかに蒸発させ、遊離したペプチドをエーテルで沈澱させて洗浄した。次いで、この粗ペプチドを最少量の希酢酸に溶かし、ＶＹＤＡＣ（登録商標）オクタデシルシランシリカ（１０ｍＭ）のカラム（２．５ｘ２５ｃｍ）にかけ、２０〜６０％アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸水溶液の線形勾配で約１時間にわたり溶出させた。薄層クロマトグラフィーと分析用高速液体クロマトグラフィー（Ｂ：４０〜７０％、１％／分；室温；１４．１分）により分画を試験し、収量よりも純度を最大化するようにプールした。この溶液を水から繰り返し凍結乾燥させることにより、白色の綿毛様の粉末として生成物（４９．９ｍｇ）を得た。
【００６３】
この生成物は、ＨＰＬＣ及びｔｌｃにより、均質であることが見出された。酸加水分解物のアミノ酸分析により、ペプチドの組成を確認する。レーザー脱着ＭＳにより、分子量は２８８０とされた（Ｍ＋Ｈの計算値：２８７３）。
実施例２：ペプチド−低級アルキルアミドの合成
実施例１に記載のＢｏｃアミノ酸プロトコールを使用して、Ｏ−ベンジル−ポリスチレン樹脂（しばしばメリフィールド樹脂と呼ばれる）上でペプチドを組み立てる。但し、Ａｓｐ及びＧｌｕアミノ酸のカルボキシル側鎖はＦｍ（フルオレニルメチルエステル）基で保護する。完成したペプチド−樹脂を好適な（エチルアミン、プロピルアミン、フェネチルアミン、１，２−ジアミノエタン等のような）低級アルキルアミンの薄いＤＭＦ溶液に懸濁させ、約６０℃で（約１８時間）撹拌し、濾過して、減圧下で溶媒を除去し、開裂したペプチド油分をエーテルで粉砕して、固形の、保護化アルキルアミドペプチドを得る。次いで、これをＨＦで開裂させ、追加の側鎖保護基を除去し、実施例１に記載のようにＨＰＬＣで精製する。
実施例３〜５
実施例３〜５は、当該ペプチドを産生するのに適した保護化アミノ酸を使用して、実質的に実施例１に記載の方法により合成し得る。
【００６４】
【化１９】
実施例６〜５１
実施例６〜５１は、当該ペプチドを産生するのに適した保護化アミノ酸を使用すること以外は、実質的に実施例１に記載の方法により合成した。レーザー脱着ＭＳによりＭＳを得た（ＮＡはデータなしを意味する）。
【００６５】
【化２０】
【００６６】
【化２１】
【００６７】
【化２２】
実施例５２：［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）
加速化Ｂｏｃ−ケミストリー固相ペプチド合成を実行するように改良されたＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（フォスターシティ、ＣＡ）モデル ４３０Ａペプチド合成機において、表題ペプチドを合成した。Schnolzer, et al., Int. J. Peptide Protein Res., 40: 180 (1992) を参照のこと。０．９１ミリモル／ｇの置換を有する４−メチルベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ，ベルモント、ＣＡ）を使用した。以下の側鎖保護を有するＢｏｃアミノ酸（Ｂａｃｈｅｍ，ＣＡ，トーランス、ＣＡ；Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ラジョラ、ＣＡ）を使用した：Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（２ＢｒＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｃＨｅｘ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｍ）−ＯＨ。合成は０．２０ミリモルのスケールで実行した。Ｂｏｃ基は、１００％ ＴＦＡ、２ｘ１分の処理により除去した。Ｂｏｃアミノ酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌでプレ活性化し、ペプチド−樹脂ＴＦＡ塩の先行中和をせずにカップルさせた。カップリング時間は５分であったが、Ｂｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨ残基及びＢｏｃ−Ａ６ｃ−ＯＨ残基と以下の残基、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｍ）−ＯＨ及びＢｏｃ−Ｈｉｓ（ＤＮＰ）−ＯＨではカップリング時間は約２時間であった。
【００６８】
ペプチド鎖の組立ての終了時に、２０％メルカプトエタノール／１０％ ＤＩＥＡのＤＭＦ溶液で樹脂を２ｘ３０分間処理し、Ｈｉｓ側鎖上のＤＮＰ基を除去した。次いで、１００％ ＴＦＡ、２ｘ２分の処理によりＮ末端Ｂｏｃ基を除去した。ペプチド−樹脂を１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ（１ｘ１分）で中和した後に、１５％エタノールアミン／１５％水／７０％ ＤＭＦの溶液で２ｘ３０分処理することにより、Ｔｒｐの側鎖上のホルミル基を除去した。この部分的に脱保護したペプチド−樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、減圧下で乾燥させた。アニソール１ｍｌ及びジチオスレイトール（２４ｍｇ）を含有するＨＦ １０ｍｌにおいて、このペプチド−樹脂を０℃で約７５分間撹拌することによって、最後の開裂を実施した。窒素流を用いてＨＦを除去した。残渣をエーテル（６ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、４Ｎ ＨＯＡｃ（６ｘ１０ｍｌ）で抽出した。
【００６９】
水性抽出液中のペプチド混合物を、逆相ＶＹＤＡＣ（登録商標）Ｃ18カラム（Ｎｅｓｔ Ｇｒｏｕｐ，Ｓｏｕｔｈｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用する調製用逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で精製した。流速１０ｍｌ／分の線形勾配液（２０％〜５０％の溶液Ｂ、１０５分）を用いてカラムを溶出させた（溶液Ａ＝０．１％ ＴＦＡを含有する水；溶液Ｂ＝０．１％ ＴＦＡ含有アセトニトリル）。分画を回収し、分析用ＨＰＬＣで検査した。純生成物を含有する分画を一緒にし、凍結乾燥させて、白色の固形物９２ｍｇを得た。分析用ＨＰＬＣ分析に基づけば、純度は＞９９％であった。エレクトロ−スプレイ質量分析（ＭＳ（ＥＳ））は、分子量３３２４．２を示した（計算される分子量は３３２３．７である）。
【００７０】
本発明の他の化合物の合成は、所望されるペプチドに依存して適切な保護化アミノ酸を使用すること以外は、実施例５２の［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）の合成についての記載と同じやり方で実行し得る。
【００７１】
［（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）｛ＨＥＰＥＳは（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸）である｝は、以下のように合成し得る：ＭＢＨＡ樹脂（０．２０ミリモル）上でこのペプチド長鎖を組立てた後に、このペプチド−樹脂を１００％ ＴＦＡ（２ｘ２分）で処理し、ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄する。次いで、１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、約２分間でこの樹脂を中和する。ＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄した後、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリド（０．２３ミリモル）及びＤＩＥＡ（０．７ミリモル）／ＤＭＦでこの樹脂を約１時間処理する。この樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、２−ヒドロキシエチルピペラジン１．２ミリモルで約２時間処理する。この樹脂をＤＭＦ及びＤＣＭで洗浄し、種々の試薬（（１）２０％メルカプトエタノール／１０％ ＤＩＥＡ／ＤＭＦ、及び（２）１５％エタノールアミン／１５％水／７０％ ＤＭＦ）で処理し、上記のように、ペプチドの樹脂からの最終的なＨＦ開裂の前に、Ｈｉｓ側鎖とＴｒｐ側鎖上のホルミル基からＤＮＰ基を除去する。
【００７２】
［（Ｎα−ＨＥＰＡ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５３）（［（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンアセチル）−Ｈｉｓ7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2）は、［（Ｎα−ＨＥＰＥＳ−Ｈｉｓ）7］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５２）を合成するための直前に記載した方法により実質的に合成し得る。ただし、２−クロロ−１−エタンスルホニルクロリドの代わりに２−ブロモ無水酢酸を使用する。
実施例５３〜９０及び１０４
実施例５３〜９０及び１０４は、好適な保護化アミノ酸を使用すること以外は、実質的に実施例５２により合成した。
【００７３】
【化２３】
【００７４】
【化２４】
【００７５】
【化２５】
【００７６】
【化２６】
実施例９１：［Ａｉｂ8，Ａ５ｃ33］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５４）
表題化合物は、適切な保護化アミノ酸を使用して、実質的に実施例５２により合成し得る。
実施例９２：［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）
使用すべきＢｏｃアミノ酸は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）（実施例５２）の合成と同じであるが、この実施例ではＬｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）残基のためにＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨを使用する。最初のアミノ酸残基をシェーカー上で手動により樹脂へカップルさせる。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ２．５ミリモルを０．５Ｎ ＨＢＴＵ／ＤＭＦ ４ｍｌに溶かす。この溶液へＤＩＥＡ １ｍｌを加える。この混合液を約２分間振盪する。次いで、この溶液へＭＢＨＡ樹脂（置換＝０．９１ミリモル／ｇ）０．２ミリモルを加える。この混合液を約１時間振盪する。この樹脂をＤＭＦで洗浄し、１００％ ＴＦＡで２ｘ２分処理してＢｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄する。ミリスチン酸（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（１．０ｍｌ）／ＤＭＦ ４ｍｌで２分間プレ活性化し、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ−樹脂にカップルさせる。カップリング時間は約１時間である。ＤＭＦで樹脂を洗浄し、２５％ピペリジン／ＤＭＦで２ｘ２０分処理してＦｍｏｃ保護基を除去する。樹脂をＤＭＦで洗浄し、ペプチド合成機の反応槽へ移す。ペプチドの合成及び精製法の残り工程は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４）の合成と同じである。
【００７７】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する他の化合物の合成は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）について記載の方法に類似したやり方で実行される。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基がＣ末端でない場合、ペプチド合成機の樹脂上で、Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基の直前にあるペプチドフラグメントを最初に組立てる。
実施例９３〜９８
実施例９３〜９８は、好適なアミノ酸を使用して、実質的に実施例９２に記載の方法により合成し得る。
【００７８】
【化２７】
実施例９９：［Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）−ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）
使用するＢｏｃアミノ酸は、［Ａｉｂ8，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ2（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５５）（実施例９２）の合成に使用されるものと同じである。Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（２．５ミリモル）をＨＢＴＵ（２．０ミリモル）、ＨＯＢｔ（２．０ミリモル）及びＤＩＥＡ（２．５ｍｌ）／ＤＭＦ（４ｍｌ）で約２分間プレ活性化する。このアミノ酸を、シェーカー上、手動でＰＡＭ樹脂（Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ，Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ，ＩＬ；置換＝０．８５ミリモル／ｇ）へカップルさせる。カップリング時間は約８時間である。ペプチドを製造するための合成及び精製法の残り工程は実施例５２に記載したものと同じである。
【００７９】
Ｌｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基を含有する他の類似体、ｈＧＬＰ−１（７−３６）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）及びｈＧＬＰ−１（７−３７）ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）の合成は、［Ａｉｂ8，Ａｒｇ26,34，Ａ６ｃ32，Ｌｙｓ36（Ｎε−テトラデカノイル）］ｈＧＬＰ−１（７−３６）−ＯＨ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６１）の合成についての記載に類似したやり方で実行される。このペプチドのＬｙｓ（Ｎε−アルカノイル）残基にＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨアミノ酸を使用し、Ｌｙｓの残基にはＢｏｃ−Ｌｙｓ（２ＣｌＺ）−ＯＨアミノ酸を使用する。
実施例１００〜１０３
実施例１００〜１０３は、好適なアミノ酸を使用して、実質的に実施例９９に記載の方法により合成し得る。
【００８０】
【化２８】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の群から選択されるいずれか１つの化合物：
【化１】
【化２】
【化３】
又はその製剤的に許容される塩。
【請求項１】
以下の群から選択されるいずれか１つの化合物：
【化１】
【化２】
【化３】
又はその製剤的に許容される塩。
【公開番号】特開２０１０−１３０１（Ｐ２０１０−１３０１Ａ）
【公開日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１８８０４６（Ｐ２００９−１８８０４６）
【出願日】平成２１年８月１４日（２００９．８．１４）
【分割の表示】特願２００５−２９８４１８（Ｐ２００５−２９８４１８）の分割
【原出願日】平成１１年１２月７日（１９９９．１２．７）
【出願人】（５０５４７４７１７）ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス (41)
【出願人】（５０１２２８４１７）ジ・アドミニストレーターズ・オブ・ザ・ツーレイン・エデュケイショナル・ファンド (6)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年８月１４日（２００９．８．１４）
【分割の表示】特願２００５−２９８４１８（Ｐ２００５−２９８４１８）の分割
【原出願日】平成１１年１２月７日（１９９９．１２．７）
【出願人】（５０５４７４７１７）ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス (41)
【出願人】（５０１２２８４１７）ジ・アドミニストレーターズ・オブ・ザ・ツーレイン・エデュケイショナル・ファンド (6)
【Ｆターム（参考）】
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