Ｐ３８阻害剤
本発明は、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分を薬学的に許容可能なキャリヤー中に新規ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤、並びにその使用に関する。マイコバクテリウム・ｗおよび／またはその成分は哺乳類に投与されると、ｐ３８阻害を生じる。当該阻害は２８日間以上持続することが判明している。また、それはＴＮＦ−αの阻害を誘導することが判明している。それは糖質コルチコイドと同一のパターンでサイトカインを抑制する。形質転換細胞において、それはまたアポトーシスを誘導する。Ｐ３８に媒介される状態としては、炎症、細胞分化、細胞増殖、細胞阻害、細胞周期調節、抗炎症性反応、免疫調節、血管新生、外部刺激に対する応答、および血管新生が挙げられる。ｐ３８タンパク質キナーゼの阻害のための、すなわち（ｉ）形質転換細胞においてアポトーシスを誘導するため、（ｉｉ）ＴＮＦ−αの阻害のための、（ｉｉｉ）サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ｐ３８阻害剤、その調製製法、ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の治療におけるその使用、および上記治療における使用のための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は、二重リン酸化によって基質を活性化するプロリン指向性セリン／スレオニンキナーゼのファミリーである。当該キナーゼは、栄養ストレスおよび浸透圧ストレス、ＵＶ光、増殖因子、エンドトキシンおよび炎症性サイトカインを含む多様なシグナルによって活性化される。
【０００３】
１つの特に興味深いＭＡＰＫはｐ３８であり、別名サイトカイン抑制抗炎症薬結合タンパク質（ＣＳＢＰ）ともいう。ｐ３８キナーゼは、転写因子および他のキナーゼのリン酸化および活性化を担う。それらは、浸透圧、アニソマイシン、ＵＶなどの物理的、化学的および照射ストレスによって活性化される。それらは、ＩＬ−１およびＴＮＦなどの炎症性サイトカインおよび細菌リポ多糖によっても活性化される。より重要なことに、ｐ３８リン酸化活性化の産物は、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６を含む炎症性サイトカイン、およびシクロオキシゲナーゼ−２の産生を媒介することが示されている。これらのサイトカインの各々は、多数の疾患状態および症状に関係している。
【０００４】
ｐ３８に媒介される症状としては、アップレギュレーションされたｐ３８がその症状の病因に関与するか、および／またはｐ３８の阻害がその管理に有用である任意の疾患または有害な症状が挙げられる。ｐ３８に媒介される症状としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、脳卒中における再灌流／虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状が挙げられる。ｐ３８は、癌、免疫不全疾患、細胞死および骨粗鬆症に関連している。
【０００５】
ｐ３８キナーゼの阻害は、ＩＬ−１およびＴＮＦの両方の産生の遮断に繋がる。ＩＬ−１およびＴＮＦは、急性および慢性炎症性疾患および閉経後骨粗鬆症に関与している、ＩＬ−６およびＩＬ−８などの他の炎症性サイトカインの産生を刺激する[Ｒ．Ｂ．キンブル（Ｋｉｍｂｌｅ）他，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１３６，ｐｐ．３０５４−６１ （１９９５）]。これらのサイトカインの調節異常で特徴づけられる疾患は、ｐ３８阻害剤による治療に適している。
【０００６】
ＩＬ−１に媒介される疾患または症状としては、関節リウマチ、変形性関節症、脳卒中、内毒血症および／または毒素性ショック症候群、エンドトキシンによって誘導される炎症性反応、炎症性腸疾患、結核、アテローム性動脈硬化、筋変性、悪液質、乾癬性関節炎、ライター症候群、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎、急性滑膜炎、糖尿病、膵ベータ細胞疾患およびアルツハイマー病が挙げられる。
【０００７】
ＴＮＦ−αレベルは各種医薬組成物によって変化させることができ、哺乳類において現在使用されているＴＮＦ−α拮抗薬活性を有するものは、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、アダルリム（Ａｄａｌｕｌｉｍｂ）、エターンセプト（Ｅｔａｒｎｃｅｐｔ）、サリドマイド（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）などが挙げられる。それらは、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍、全身性エリテマトーデス、骨髄腫、ブドウ膜炎などの管理に用いられる。
【０００８】
糖質コルチコイドは公知の抗炎症性化合物である。一般的に用いられる糖質コルチコイドとしては、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｉｎｏｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、プレドニゾンが挙げられる。それらは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン及びＣＯＸ−２を抑制する。ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αは炎症性サイトカインとして知られ、一方、ＩＬ−４、ＩＬ−５などは抗炎症性サイトカインとして知られる。糖質コルチコイドは、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎、ブドウ膜炎、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含む広範囲の疾患の管理に用いられている。
【０００９】
形質転換細胞は、分裂促進因子による刺激なしで増殖して連続培養になる細胞である。真核細胞は非形質転換細胞であり、連続培養で増殖しない。形質転換によって、真核細胞は静止／定常期からアップレギュレートされた増殖に転換し、連続培養で維持できるようになる。ｐ３８阻害剤は、これらの形質転換細胞の連続増殖を阻害し、アポトーシスを引き起こすことが知られている。
【００１０】
下記の特許、特許出願には、ｐ３８ 阻害剤およびその使用が記載されている。
特許／出願番号 表題 特許／出願番号 表題
US7186737B2 p38の阻害剤 US7169779B2 p38の阻害剤
US6635644B2 p38の阻害剤 US6608060B1 p38の阻害剤
US6632945B2 p38の阻害剤 US6528508B2 p38の阻害剤
US6509363B2 ヘテロ環式p38の阻害剤 US6147080A p38の阻害剤
US6800626B2 p38の阻害剤 US6093742A p38の阻害剤
US6949560B2 p38キナーゼ阻害剤として WO2000017175A1 p38の阻害剤
のイミダゾ置換化合物 WO2000017204A1 p38の阻害剤
WO1996021654A1 新規化合物 WO1999058502A1 p38のヘテロ環式阻害剤
WO1999000357A1 p38の阻害剤
WO1999064400A1 p38の阻害剤
US6162613A セリン/スレオニンキナーゼおよびチロシンキナーゼの阻害剤の設計方法
US7151010B2 高密度集積回路用スタックパッケージを組み立てるための方法
US6852740B2 p38キナーゼ阻害剤としてのピラゾール誘導体
US6982270B1 csbp/p38キナーゼ阻害剤としての3,4-ジヒドロ-(1h)キナゾリン-2-オン化合物
US6630485B2 p38 mapキナーゼ阻害剤
US7189400B2 mu-1の拮抗薬を用いる治療方法
US7115557B2 神経根傷害を治療するためのある種の薬剤の使用
US7078431B2 1,3-ビス-(置換-フェニル)-2-プロペン-1-オン及びvcam-1媒介疾患を治療するためのその使用
US6759410B2 3,4-ジヒドロ-(1h)-キナゾリン-2オンおよびcsbp/p38キナーゼ阻害剤としてのその使用
US6696471B2 アミノピロール 化合物
US6696443B2 p38キナーゼのピペリジン／ピペラジン型阻害剤
US6649637B2 ピリジニルイミダゾールによる細胞内複製の阻害
US6638765B1 細胞の分化のためのプラットフォーム
US6509361B1 p38キナーゼ阻害剤としての1,5-ジアリール置換ピラゾール
US6479507B2 p38mapキナーゼ阻害剤
US6444696B1 ピラゾール誘導体p38mapキナーゼ阻害剤
US6410540B1 P38αキナーゼの阻害剤
US6376527B1 ピラゾール誘導体P38Mapキナーゼ阻害剤
US6316466B1 ピラゾール誘導体P38Mapキナーゼ阻害剤
US6316464B1 P38Mapキナーゼ阻害剤
US6096711A HSP72誘導および用途
US6414150B1およびUS6335336B1には、TNF-αの抑制による血管新生の阻害が転移の阻害または防止に有用であることが記載されている。
US6994981B2には、パラアポトーシスの調節因子および関連する方法が記載されている。MAPK阻害剤に基づいた複数の他の先行技術特許としては、EP1208748A1、WO2004089929、WO2006117567が挙げられる。
US6852740B2にはp38キナーゼ阻害剤としてのピラゾール誘導体が記載されている。WO95/31451には、MAPK、特にp38を阻害するピラゾール組成物が記載されている。これらの阻害剤のin vivoの効力はまだ調査中である。
【００１１】
ＷＯ９８／２７０９８、ＷＯ９９／００３５７、ＷＯ９９／１０２９１、ＷＯ９９／５８５０２、ＷＯ９９／６４４００、ＷＯ００／１７１７５およびＷＯ００／１７２０４に記載されたものを含めて、他のｐ３８阻害剤が製造されている。さらに、ＷＯ９７／２４３２８、ＷＯ９８／３４９２０、ＷＯ９８／３５９５８およびＵＳ５１４５８５７Ａには、治療用途を有するアミノ置換ヘテロ環が開示されている。
【００１２】
従って、ｐ３８に媒介される活性に伴う各種症状の治療に有用な、ｐ３８の阻害剤を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の主な目的は、 ｐ３８キナーゼ阻害のための Ｍｗ細胞 および／またはその成分を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、ｐ３８に媒介される症状の治療または予防のための方法を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに別の目的は、ｐ３８キナーゼ活性によって媒介される、またはｐ３８キナーゼ活性によって産生されるサイトカインによって媒介される、症状または疾患状態の治療のための方法であって、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分を対象（たとえば哺乳類）へ投与することを含む上記方法を提供することである。
【００１６】
本発明のさらに別の目的は、ｐ３８キナーゼ活性によって媒介される、またはｐ３８キナーゼ活性によって産生されるサイトカインによって媒介される、症状または疾患状態の治療のための薬剤の製造のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分の使用を提供することである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ｐ３８タンパク質キナーゼの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）細胞および／またはその成分の使用に関する。
【００１８】
本発明はまた、サイトカイン産生の阻害のための、Ｍｗ細胞 および／またはその 成分の使用を含む。
【００１９】
本発明はまた、セリン／スレオニンキナーゼｐ３８およびサイトカイン産生の阻害剤である、Ｍｗ細胞および／またはその成分を含む組成物を包含する。
【００２０】
本発明によれば、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）細胞および／またはその成分は、ｐ３８に媒介される疾患の治療において有用である。
【００２１】
本発明は、 ｐ３８ キナーゼに媒介される疾患、ＴＮＦに媒介される疾患、炎症および／または 関節炎の治療のための、治療上有効な量のＭｗ細胞 および／またはその成分を含む組成物を含む。
【００２２】
本発明は、Ｍｗおよび／またはその成分を含む組成物の有効なサイトカイン干渉量を投与することを含む、サイトカインに媒介される疾患を治療する方法を提供する。用途としては、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含むが、それらに限定されない。
【００２３】
Ｍｗ細胞は、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、再灌流、脳卒中における虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、プロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状、癌、免疫不全疾患、細胞死、骨粗鬆症を含む、ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の治療に有用である。
【００２４】
Ｍｗ細胞は、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含む、ＴＮＦ−αに媒介される疾患または症状の治療に使用できる。
【００２５】
本発明に含まれるＭｗ細胞および／またはその成分はまた、一部または完全に、他の従来の抗炎症剤の代わりに、たとえばステロイド、デキサメタゾン、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤＳ、免疫抑制剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ＬＴＢ４拮抗薬およびＬＴＡ、ヒドロラーゼ阻害剤と共に、同時治療に使用してもよい。
【００２６】
本発明によれば、Ｍｗ細胞は、 ｐ３８ に媒介される症状の阻害に用いられ、ここで Ｍｗ細胞は下記の工程を含む製法によって調製される；
ａ：マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）の培養、
ｂ：採集および濃縮、
ｃ：細胞を洗浄、
ｄ：薬学的に許容可能なキャリヤーを添加、
ｅ：保存料を添加、
ｆ：最終滅菌、
ｇ：品質管理、
ｈ：Ｍｗの成分の調製。
【００２７】
当該製法はさらに詳細に下記の通り記載される。
Ａ． Ｍｗの培養：
i. ＬＪ培地といった固体培地、またはミドルブルック培地またはソートン液体培地といった液体培地でＭｗを培養。より良い収量のために、ミドルブルック培地は強化される。それは好ましくはグルコース、バクトトリプトン、およびＢＳＡの添加によって強化することができる。それらは好ましくは２０：３０：２の比で使用される。強化培地はミドルブルック培地へ添加される。それは好ましくは１５：１から２５：１の比で、より好ましくは２０：１の比で行われる。培地は温度３７±０．５℃にて、当初ｐＨ６．７から６．８にて調製する。
ii. バイオリアクター操作
a) 容器の準備：汚染を回避するため容器の内側接触部（ジョイント、メカニカルシール、ｏリング／ガスケット溝など）を清掃。容器を０．１Ｎ ＮａＯＨで満たし、２４時間放置して発熱(pyrogenic)物質および他の汚染物質を除去。容器を酸性水、次いで水で清掃。容器を蒸留水でリンスする。
b) バイオリアクターの滅菌：蒸留水９Ｌ入りのバイオリアクターを蒸気で滅菌。ミドルブルック培地入りのバイオリアクターをさらに滅菌。瓶、入口／出口エアフィルターなどを１２１℃にて１５分間オートクレーブする（２回）。容器を使用前に５０℃のオーブンで乾燥。
Ｂ． 採集および濃縮：培養６日目の終わりに無菌条件下で細胞を採集。遠心分離によって細胞を濃縮（ペレット化（ｐａｌｌｅｔｉｚａｔｉｏｎ））。
Ｃ． 細胞を洗浄：ペレットを生理食塩水で、好ましくは等張液で洗浄。
Ｄ． 薬学的に許容可能なキャリヤーを添加：発熱物質(pyrogen)フリー生理食塩水をペレットに添加。任意の他の発熱物質フリー等張液を医薬キャリヤーとして使用できる。キャリヤーは最終形で目的濃度が得られる量で添加される。
Ｅ． 保存料を添加：細胞／ペレットを汚染無しに保つために保存料を添加。好ましくは濃度０．０１％ｗ／ｖのチオメロサールを使用する。
Ｆ． 最終滅菌：熱またはイオン化放射または滅菌ろ過の適用などの各種物理的方法によって細胞／ペレットを滅菌。熱は乾熱または湿熱の何れの形態でもよい。熱は、沸騰または低温殺菌の形態でもよい。イオン化放射は、紫外線またはガンマ線またはマイクロ波または任意の他の形態でもよい。
Ｇ． 品質管理：細胞／ペレットの品質を検査するために、いくつかの処理を通す。
i. 細胞／ペレットの純度および無菌性を評価
ii. 生物をグラム染色後に抗酸性を検査
iii. ＬＪ培地上で産物を培養して生細胞があれば見つけることにより不活性化試験を実施
iv. 細胞／ペレットの病原性および／または汚染を検査。培養生物をＢａｌｂ／ｃマウスに注射する。すべてのマウスは体重が増加し、健常であることがわかった。マウスの肝臓、肺、脾臓または他の臓器には肉眼的または顕微鏡的病変は観察されない。
v. 生化学試験：生物を含む細胞／ペレットを下記の生化学試験に供する：
ウレアーゼ − ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０加水分解
ナイアシン試験 − 硝酸還元試験
当該生物は、ウレアーゼ、ツイーン８０加水分解およびナイアシンで試験した場合、陰性結果を与える。当該生物は硝酸還元試験で陽性結果を与える。
Ｈ． マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）成分の調製：Ｍｗ成分は下記の方法によって調製できる。
i. 細胞破壊
ii. 溶媒抽出
iii. 酵素抽出
【００２８】
細胞破壊は、超音波処理によって、または高圧フラクショノメーター（ｆｒａｃｔｉｏｎｏｍｅｔｅｒ）を用いて、または浸透圧を与えて、実施される。
【００２９】
溶媒抽出は、クロロホルム、エタノール、メタノール、アセトン、フェノール、イソプロピルアルコール、酢酸、尿素、ヘキサンなどの任意の有機溶媒によって実施される。
【００３０】
酵素抽出は、細胞壁／膜を消化できるタンパク質分解酵素によって実施される。リチカーゼ（Ｌｉｔｉｃａｓｅ）およびプロナーゼが好ましい酵素である。Ｍｗ細胞成分を、Ｍｗの代わりに使用することができる。Ｍｗ細胞成分の添加は、産物の効力改善をもたらす。そのように調製されたＭｗを含む細胞／ペレットはさらに、そのｐ３８阻害活性について評価される。
【００３１】
本発明によれば、前述の製法によって調製されたＭｗ細胞は、医薬組成物の調製に用いられる。
Ａ． 治療剤は０．１ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（加熱殺菌）０．５０ｘ１０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０ ０．１％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ （保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ ｍｌとする
Ｂ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ．（加熱殺菌） ０．５０ ｘ １０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
Ｔｒｉｔｏｎ ｘ １００ ０．１％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｃ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ．，（加熱殺菌） ０．５０ ｘ １０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｄ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗ由来超音波処理後のマイコバクテリウム・ｗ 抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ （保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｅ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗ のメタノール抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｆ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのクロロホルム抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｇ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのアセトン抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｈ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのエタノール抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｉ． 治療剤は ０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのリチカーゼ（ｌｉｔｉｃａｓｅ）抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｊ． 治療剤は ０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
マイコバクテリウム・ｗ （加熱殺菌） ０．５ｘ１０７
１ｘ１０３マイコバクテリウム・ｗの破壊，溶媒抽出または酵素抽出によって得られたマイコバクテリウム・ｗ抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
【００３２】
キャリヤー 材料と合わせて１用量剤形を生じうるＭｗ細胞の量は、治療される宿主および具体的な投与様式に応じて変化する。
【００３３】
投与経路は、皮内、静脈内、小胞内（ｉｎｔｒａ ｖｅｓｉｃｌｅ）、腹腔内、関節内、脳内、筋肉内、皮下への注入または当該特定治療について本分野で公知の任意の他の経路とすることができる。経皮投与については、当該医薬組成物は、経皮イオン泳動パッチなどの経皮パッチの形態で投与することができる。
【００３４】
上記のように製造された医薬組成物は、驚くべきことに下記の特性を有することがわかった。それらは、ｐ３８阻害剤、ＴＮＦ−α阻害剤、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｅ）の抑制、および形質転換細胞の死を含む。
【００３５】
形質転換細胞の死が生じる濃度は、脾細胞、ＰＢＭＣ、骨髄細胞、線維芽細胞（ｆｉｂｅｒ ｂｌａｓｓ）、マクロファージなどの正常細胞にとっては安全である。
【００３６】
本発明の範囲を限定しない下記の実施例によって、本発明をさらに説明する。
【実施例】
【００３７】
実施例１：皮内経路によるＭｗによるｉｎ ｖｉｖｏ ｐ３８阻害：
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２つの無作為化群に分けた。すべてのマウスは皮内注射を受けた。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）１０８細胞）を投与した。８日目にマウスを屠殺し、全個体から脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００３８】
表１に示す結果は、本発明の医薬組成物の皮内投与後のｐ３８ＭＡＰＫの顕著な阻害を示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
実施例２：静脈内経路によるＭｗによるｉｎ ｖｉｖｏ ｐ３８阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２つの無作為化群に分けた。すべてのマウスはＭｗのＰＢＳ （プラセボ）の静脈内注射を受けた。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）を投与した。８日目にマウスを屠殺し、全個体から脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４１】
表１に示す結果は、静脈内経路によるＭｗの投与後のｐ３８の顕著な阻害を示す。
【００４２】
実施例３：Ｍｗによるｐ３８のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、および脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。ウェルの数を２群に分け、一方をＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で刺激し、他方をプラセボ（ＰＢＳ）１００ｍｃＬ（μＬ）で刺激した。インキュベート４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４３】
表２に示す結果は、マウス脾細胞とＭｗとのｉｎ ｖｉｔｒｏインキュベートの際におけるｐ３８ ＭＡＰＫの顕著なダウンレギュレーションを示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例４：ＭｗによるＮＦＳ−６０細胞におけるｐ３８阻害
ＮＦＳ６０細胞を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質およびＩＬ−３ １０ｎＧ／ｍＬを含むダルベッコ最小イーグル培地（Ｄｕｂａｌｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｌ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉａ）（ＤＭＥＭ） で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を２群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を４ Ｘ １０６ のＭｗ細胞で刺激した。培養２４時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４６】
表２に示す結果は、２４時間目に対照（非刺激細胞）と比較したＭｗ刺激細胞におけるｐ３８レベルのダウンレギュレーションされたレベルを示す。４ｘ１０６のＭｗ細胞を上回るすべての濃度で、４８時間にて細胞死が観察された。見られた細胞死はアポトーシスによるものであった。
【００４７】
実施例５：ＭｗによるＭｉａ−ｐａ−ｃａ２細胞におけるｐ３８阻害
Ｍａｉ−ｐａ−ｃａ２細胞（膵癌細胞株）をＡＴＣＣから入手し、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質を含むＤＭＥＭ培地で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を２群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を２Ｘ１０６のＭｗ細胞で刺激した。培養４８時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４８】
表２に示す結果は、４８時間目における対照 （非刺激細胞）と比較したＭｗ刺激細胞におけるｐ３８レベルのダウンレギュレーションされたレベルを示す。１０７を上回るＭｗ濃度では、Ｍｉａ−ｐａ−ｃａ２細胞はアポトーシス細胞死が起こることが見出された。
【００４９】
実施例６：マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）皮内投与の７回注射と比較した単回注射でのｐ３８ ＭＡＰＫの阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを３つの無作為化群に分けた。すべてのマウスに薬剤を皮内投与した。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）を１回のみ投与し、第３群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で毎日７日間免疫した。最初の免疫化後８日目に、マウスを屠殺し、３群すべてについて脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。
【００５０】
培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５１】
結果は、対照と比較してＭｗの単回注射の投与はｐ３８ＭＡＰＫを２０％阻害し、７回注射はｐ３８レベルを２５％阻害することを示す。
【００５２】
実施例７：Ｍｗによるｐ３８ 阻害の持続期間
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを６群に無作為化し、ＰＢＳ１ｍＬを第１群に静脈内投与し、第２〜６群にはＭｗ１ｍＬ（１０９細胞）を投与した。第１群および第２群を１日目に、第３群を７日目に、第４群を１４日目に、第５群を２１日目に、第６群を２８日目に屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。４８時間後、細胞を採集し、ＭＡＰＫ ＥＬＩＳＡをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５３】
表３に示す結果は、２４時間から第２８日までのＭｗ細胞での免疫化の際のダウンレギュレートされたｐ３８レベルを示す（１７．４％および１７．３％）。ｐ３８の最大阻害は第１４日に（２５．１％）に生じる。ｐ３８レベルは試験の全期間（すなわち２８日間）にわたって阻害されたままである。
【００５４】
【表３】
【００５５】
実施例８：Ｍｗによるｐ３８ＭＡＰＫの阻害：用量依存作用
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。ウェルの数を３群に分け、第１群はプラセボ１００ｍｃＬ（μＬ）（ＰＢＳ）で刺激した。第２群はＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で刺激した。第３群はＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０６細胞）で刺激した。４８時間インキュベート後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５６】
結果は、脾細胞とＭｗ（１０８）細胞とのｉｎ ｖｉｔｒｏインキュベーションによりｐ３８ ＭＡＰＫが４６％ダウンレギュレートする一方、Ｍｗ（１０６）細胞の場合は５％の阻害作用を有することを示す。
【００５７】
実施例９：ＭｗによるＮＦＳ−６０細胞における用量依存性のｐ３８ＭＡＰＫ阻害
ＮＦＳ６０細胞を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質およびＩＬ−３ １０ｎＧ／ｍＬを含むＤＭＥＭ培地で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を５群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を６Ｘ１０７のＭｗ細胞で、第３群を３Ｘ１０７のＭｗ細胞で、第４群を７Ｘ１０６のＭｗ細胞で、第５群を４Ｘ１０６のＭｗ細胞で刺激した。培養２４時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５８】
表４に示す結果は、ダウンレギュレートされた２４時間目に対照と比較したＭｗにおけるｐ３８レベルの変化を示す。用量依存性はＭｗ濃度と逆相関する。最大阻害は４Ｘ１０６Ｍｗ細胞で観察された。刺激のための４ｘ１０６のＭｗ細胞の使用を上回るすべての濃度で、ＮＦＳ６０細胞は４８時間を越えて生存しない。細胞はアポトーシスによる細胞死を起こすことが見出される。
【００５９】
【表４】
【００６０】
実施例１０：ＭｗによるＴＮＦα阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２群に無作為化した。第１群および第２群を屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。第１群をＰＢＳと共に培養し、第２群を１０８のＭｗ細胞と共に培養した。４８時間後、細胞上清を分離し、ＴＮＦαのレベルをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番ＭＴＡ００）の市販キットを用いて検査した。
【００６１】
表５に示す結果は、Ｍｗで刺激された群におけるＴＮＦ−αの阻害を示す。驚くべきことに、ＴＮＦ−α阻害は約７４％である一方、ｐ３８阻害は約４７％だけであることが観察される。
【００６２】
【表５】
【００６３】
このように、本発明により治療できるＴＮＦに媒介される疾患または症状は、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、 全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含むが、それらに限定されず、媒介される疾患の前記管理は、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のＭｗおよび／またはＭｗ成分により処置することを含む。
【００６４】
実施例１１：Ｍｗによるサイトカイン抑制
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２群に無作為化した。第１および２群を屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。第１群をＰＢＳと共にインキュベートし、第２群を１０８のＭｗ細胞と共にインキュベートした。４８時間後、細胞上清を分離し、サイトカインのレベルを、Ｒ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番Ｍ２０００、品番Ｍ４０００Ｂ、品番Ｍ１２４０）の市販キットを用いて検査した。
【００６５】
表６に示す結果は、Ｍｗと共にインキュベートされた第２群におけるサイトカインＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１２ｐ４０の阻害を示す。
【００６６】
驚くべきことに、全ての型のサイトカインが阻害されることが観察される。その作用はｐ３８阻害の量を顕著に上回る（ＩＬ−１２ｐ４０についての６４％からＩＬ−４についての９５％。ｐ３８阻害活性は約４７％である）。
【００６７】
【表６】
【００６８】
実施例１２：サイトカイン抑制についてデキサメタゾンとの比較
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、５つの群すべてについて脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。細胞はマイクロタイタープレートに播種した。ウェルを５群に分けた。第１群は対照であり、第２群はＭｗで刺激し、第３群はデキサメタゾン１０ｍＭで、第４群はデキサメタゾン１０μＭで、そして第５群はデキサメタゾン１μＭで刺激した。培養４８時間後、細胞を採集し、サイトカインアッセイを、Ｒ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番Ｍ５０００、品番Ｍ４０００Ｂ、品番Ｍ２０００、品番Ｍ１２４０）の市販キットを用いて実施した。
【００６９】
表７に示す結果は、Ｍｗはデキサメタゾンのようにすべてのサイトカインの抑制に有効であることを明らかにする。見られた抑制作用は、１０ｍＭデキサメタゾンで観察されるのと同一である。デキサメタゾンのこの濃度は、典型的には、デキサメタゾン２００ｍｇの静脈内投与後にＣｍａｘとして見られる。デキサメタゾン２００ｍｇは非常に重度の炎症症状においてパルス療法として用いられる。一般的にデキサメタゾンは経口用量として顕著に低い用量で用いられる。一般的に成人は１日当たりデキサメタゾン４．０から８．０ｍｇを経口または非経口経路で投与される。
【００７０】
【表７】
【００７１】
デキサメタゾンのような糖質コルチコイドは公知の抗炎症性化合物である。一般的に用いられる糖質コルチコイドとしては、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｉｎｏｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、プレドニゾンを挙げることができる。それらは抗炎症性および炎症性サイトカインを抑制する。それらは、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含む幅広い疾患の管理に用いられる。このように、サイトカイン、インターロイキンおよびケモカインのアップレギュレーションを含むすべての疾患／疾患症状は、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分を用いて、前記炎症性および抗炎症性サイトカイン抑制のより有効な抑制とともに、治療することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ｐ３８阻害剤、その調製製法、ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の治療におけるその使用、および上記治療における使用のための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）は、二重リン酸化によって基質を活性化するプロリン指向性セリン／スレオニンキナーゼのファミリーである。当該キナーゼは、栄養ストレスおよび浸透圧ストレス、ＵＶ光、増殖因子、エンドトキシンおよび炎症性サイトカインを含む多様なシグナルによって活性化される。
【０００３】
１つの特に興味深いＭＡＰＫはｐ３８であり、別名サイトカイン抑制抗炎症薬結合タンパク質（ＣＳＢＰ）ともいう。ｐ３８キナーゼは、転写因子および他のキナーゼのリン酸化および活性化を担う。それらは、浸透圧、アニソマイシン、ＵＶなどの物理的、化学的および照射ストレスによって活性化される。それらは、ＩＬ−１およびＴＮＦなどの炎症性サイトカインおよび細菌リポ多糖によっても活性化される。より重要なことに、ｐ３８リン酸化活性化の産物は、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６を含む炎症性サイトカイン、およびシクロオキシゲナーゼ−２の産生を媒介することが示されている。これらのサイトカインの各々は、多数の疾患状態および症状に関係している。
【０００４】
ｐ３８に媒介される症状としては、アップレギュレーションされたｐ３８がその症状の病因に関与するか、および／またはｐ３８の阻害がその管理に有用である任意の疾患または有害な症状が挙げられる。ｐ３８に媒介される症状としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、脳卒中における再灌流／虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状が挙げられる。ｐ３８は、癌、免疫不全疾患、細胞死および骨粗鬆症に関連している。
【０００５】
ｐ３８キナーゼの阻害は、ＩＬ−１およびＴＮＦの両方の産生の遮断に繋がる。ＩＬ−１およびＴＮＦは、急性および慢性炎症性疾患および閉経後骨粗鬆症に関与している、ＩＬ−６およびＩＬ−８などの他の炎症性サイトカインの産生を刺激する[Ｒ．Ｂ．キンブル（Ｋｉｍｂｌｅ）他，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１３６，ｐｐ．３０５４−６１ （１９９５）]。これらのサイトカインの調節異常で特徴づけられる疾患は、ｐ３８阻害剤による治療に適している。
【０００６】
ＩＬ−１に媒介される疾患または症状としては、関節リウマチ、変形性関節症、脳卒中、内毒血症および／または毒素性ショック症候群、エンドトキシンによって誘導される炎症性反応、炎症性腸疾患、結核、アテローム性動脈硬化、筋変性、悪液質、乾癬性関節炎、ライター症候群、痛風、外傷性関節炎、風疹性関節炎、急性滑膜炎、糖尿病、膵ベータ細胞疾患およびアルツハイマー病が挙げられる。
【０００７】
ＴＮＦ−αレベルは各種医薬組成物によって変化させることができ、哺乳類において現在使用されているＴＮＦ−α拮抗薬活性を有するものは、インフリキシマブ（Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）、アダルリム（Ａｄａｌｕｌｉｍｂ）、エターンセプト（Ｅｔａｒｎｃｅｐｔ）、サリドマイド（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）などが挙げられる。それらは、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍、全身性エリテマトーデス、骨髄腫、ブドウ膜炎などの管理に用いられる。
【０００８】
糖質コルチコイドは公知の抗炎症性化合物である。一般的に用いられる糖質コルチコイドとしては、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｉｎｏｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、プレドニゾンが挙げられる。それらは、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αなどのサイトカイン及びＣＯＸ−２を抑制する。ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αは炎症性サイトカインとして知られ、一方、ＩＬ−４、ＩＬ−５などは抗炎症性サイトカインとして知られる。糖質コルチコイドは、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎、ブドウ膜炎、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含む広範囲の疾患の管理に用いられている。
【０００９】
形質転換細胞は、分裂促進因子による刺激なしで増殖して連続培養になる細胞である。真核細胞は非形質転換細胞であり、連続培養で増殖しない。形質転換によって、真核細胞は静止／定常期からアップレギュレートされた増殖に転換し、連続培養で維持できるようになる。ｐ３８阻害剤は、これらの形質転換細胞の連続増殖を阻害し、アポトーシスを引き起こすことが知られている。
【００１０】
下記の特許、特許出願には、ｐ３８ 阻害剤およびその使用が記載されている。
特許／出願番号 表題 特許／出願番号 表題
US7186737B2 p38の阻害剤 US7169779B2 p38の阻害剤
US6635644B2 p38の阻害剤 US6608060B1 p38の阻害剤
US6632945B2 p38の阻害剤 US6528508B2 p38の阻害剤
US6509363B2 ヘテロ環式p38の阻害剤 US6147080A p38の阻害剤
US6800626B2 p38の阻害剤 US6093742A p38の阻害剤
US6949560B2 p38キナーゼ阻害剤として WO2000017175A1 p38の阻害剤
のイミダゾ置換化合物 WO2000017204A1 p38の阻害剤
WO1996021654A1 新規化合物 WO1999058502A1 p38のヘテロ環式阻害剤
WO1999000357A1 p38の阻害剤
WO1999064400A1 p38の阻害剤
US6162613A セリン/スレオニンキナーゼおよびチロシンキナーゼの阻害剤の設計方法
US7151010B2 高密度集積回路用スタックパッケージを組み立てるための方法
US6852740B2 p38キナーゼ阻害剤としてのピラゾール誘導体
US6982270B1 csbp/p38キナーゼ阻害剤としての3,4-ジヒドロ-(1h)キナゾリン-2-オン化合物
US6630485B2 p38 mapキナーゼ阻害剤
US7189400B2 mu-1の拮抗薬を用いる治療方法
US7115557B2 神経根傷害を治療するためのある種の薬剤の使用
US7078431B2 1,3-ビス-(置換-フェニル)-2-プロペン-1-オン及びvcam-1媒介疾患を治療するためのその使用
US6759410B2 3,4-ジヒドロ-(1h)-キナゾリン-2オンおよびcsbp/p38キナーゼ阻害剤としてのその使用
US6696471B2 アミノピロール 化合物
US6696443B2 p38キナーゼのピペリジン／ピペラジン型阻害剤
US6649637B2 ピリジニルイミダゾールによる細胞内複製の阻害
US6638765B1 細胞の分化のためのプラットフォーム
US6509361B1 p38キナーゼ阻害剤としての1,5-ジアリール置換ピラゾール
US6479507B2 p38mapキナーゼ阻害剤
US6444696B1 ピラゾール誘導体p38mapキナーゼ阻害剤
US6410540B1 P38αキナーゼの阻害剤
US6376527B1 ピラゾール誘導体P38Mapキナーゼ阻害剤
US6316466B1 ピラゾール誘導体P38Mapキナーゼ阻害剤
US6316464B1 P38Mapキナーゼ阻害剤
US6096711A HSP72誘導および用途
US6414150B1およびUS6335336B1には、TNF-αの抑制による血管新生の阻害が転移の阻害または防止に有用であることが記載されている。
US6994981B2には、パラアポトーシスの調節因子および関連する方法が記載されている。MAPK阻害剤に基づいた複数の他の先行技術特許としては、EP1208748A1、WO2004089929、WO2006117567が挙げられる。
US6852740B2にはp38キナーゼ阻害剤としてのピラゾール誘導体が記載されている。WO95/31451には、MAPK、特にp38を阻害するピラゾール組成物が記載されている。これらの阻害剤のin vivoの効力はまだ調査中である。
【００１１】
ＷＯ９８／２７０９８、ＷＯ９９／００３５７、ＷＯ９９／１０２９１、ＷＯ９９／５８５０２、ＷＯ９９／６４４００、ＷＯ００／１７１７５およびＷＯ００／１７２０４に記載されたものを含めて、他のｐ３８阻害剤が製造されている。さらに、ＷＯ９７／２４３２８、ＷＯ９８／３４９２０、ＷＯ９８／３５９５８およびＵＳ５１４５８５７Ａには、治療用途を有するアミノ置換ヘテロ環が開示されている。
【００１２】
従って、ｐ３８に媒介される活性に伴う各種症状の治療に有用な、ｐ３８の阻害剤を開発する必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明の主な目的は、 ｐ３８キナーゼ阻害のための Ｍｗ細胞 および／またはその成分を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、ｐ３８に媒介される症状の治療または予防のための方法を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに別の目的は、ｐ３８キナーゼ活性によって媒介される、またはｐ３８キナーゼ活性によって産生されるサイトカインによって媒介される、症状または疾患状態の治療のための方法であって、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分を対象（たとえば哺乳類）へ投与することを含む上記方法を提供することである。
【００１６】
本発明のさらに別の目的は、ｐ３８キナーゼ活性によって媒介される、またはｐ３８キナーゼ活性によって産生されるサイトカインによって媒介される、症状または疾患状態の治療のための薬剤の製造のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分の使用を提供することである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、ｐ３８タンパク質キナーゼの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）細胞および／またはその成分の使用に関する。
【００１８】
本発明はまた、サイトカイン産生の阻害のための、Ｍｗ細胞 および／またはその 成分の使用を含む。
【００１９】
本発明はまた、セリン／スレオニンキナーゼｐ３８およびサイトカイン産生の阻害剤である、Ｍｗ細胞および／またはその成分を含む組成物を包含する。
【００２０】
本発明によれば、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）細胞および／またはその成分は、ｐ３８に媒介される疾患の治療において有用である。
【００２１】
本発明は、 ｐ３８ キナーゼに媒介される疾患、ＴＮＦに媒介される疾患、炎症および／または 関節炎の治療のための、治療上有効な量のＭｗ細胞 および／またはその成分を含む組成物を含む。
【００２２】
本発明は、Ｍｗおよび／またはその成分を含む組成物の有効なサイトカイン干渉量を投与することを含む、サイトカインに媒介される疾患を治療する方法を提供する。用途としては、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含むが、それらに限定されない。
【００２３】
Ｍｗ細胞は、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、再灌流、脳卒中における虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、プロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状、癌、免疫不全疾患、細胞死、骨粗鬆症を含む、ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の治療に有用である。
【００２４】
Ｍｗ細胞は、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含む、ＴＮＦ−αに媒介される疾患または症状の治療に使用できる。
【００２５】
本発明に含まれるＭｗ細胞および／またはその成分はまた、一部または完全に、他の従来の抗炎症剤の代わりに、たとえばステロイド、デキサメタゾン、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤＳ、免疫抑制剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ＬＴＢ４拮抗薬およびＬＴＡ、ヒドロラーゼ阻害剤と共に、同時治療に使用してもよい。
【００２６】
本発明によれば、Ｍｗ細胞は、 ｐ３８ に媒介される症状の阻害に用いられ、ここで Ｍｗ細胞は下記の工程を含む製法によって調製される；
ａ：マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ）の培養、
ｂ：採集および濃縮、
ｃ：細胞を洗浄、
ｄ：薬学的に許容可能なキャリヤーを添加、
ｅ：保存料を添加、
ｆ：最終滅菌、
ｇ：品質管理、
ｈ：Ｍｗの成分の調製。
【００２７】
当該製法はさらに詳細に下記の通り記載される。
Ａ． Ｍｗの培養：
i. ＬＪ培地といった固体培地、またはミドルブルック培地またはソートン液体培地といった液体培地でＭｗを培養。より良い収量のために、ミドルブルック培地は強化される。それは好ましくはグルコース、バクトトリプトン、およびＢＳＡの添加によって強化することができる。それらは好ましくは２０：３０：２の比で使用される。強化培地はミドルブルック培地へ添加される。それは好ましくは１５：１から２５：１の比で、より好ましくは２０：１の比で行われる。培地は温度３７±０．５℃にて、当初ｐＨ６．７から６．８にて調製する。
ii. バイオリアクター操作
a) 容器の準備：汚染を回避するため容器の内側接触部（ジョイント、メカニカルシール、ｏリング／ガスケット溝など）を清掃。容器を０．１Ｎ ＮａＯＨで満たし、２４時間放置して発熱(pyrogenic)物質および他の汚染物質を除去。容器を酸性水、次いで水で清掃。容器を蒸留水でリンスする。
b) バイオリアクターの滅菌：蒸留水９Ｌ入りのバイオリアクターを蒸気で滅菌。ミドルブルック培地入りのバイオリアクターをさらに滅菌。瓶、入口／出口エアフィルターなどを１２１℃にて１５分間オートクレーブする（２回）。容器を使用前に５０℃のオーブンで乾燥。
Ｂ． 採集および濃縮：培養６日目の終わりに無菌条件下で細胞を採集。遠心分離によって細胞を濃縮（ペレット化（ｐａｌｌｅｔｉｚａｔｉｏｎ））。
Ｃ． 細胞を洗浄：ペレットを生理食塩水で、好ましくは等張液で洗浄。
Ｄ． 薬学的に許容可能なキャリヤーを添加：発熱物質(pyrogen)フリー生理食塩水をペレットに添加。任意の他の発熱物質フリー等張液を医薬キャリヤーとして使用できる。キャリヤーは最終形で目的濃度が得られる量で添加される。
Ｅ． 保存料を添加：細胞／ペレットを汚染無しに保つために保存料を添加。好ましくは濃度０．０１％ｗ／ｖのチオメロサールを使用する。
Ｆ． 最終滅菌：熱またはイオン化放射または滅菌ろ過の適用などの各種物理的方法によって細胞／ペレットを滅菌。熱は乾熱または湿熱の何れの形態でもよい。熱は、沸騰または低温殺菌の形態でもよい。イオン化放射は、紫外線またはガンマ線またはマイクロ波または任意の他の形態でもよい。
Ｇ． 品質管理：細胞／ペレットの品質を検査するために、いくつかの処理を通す。
i. 細胞／ペレットの純度および無菌性を評価
ii. 生物をグラム染色後に抗酸性を検査
iii. ＬＪ培地上で産物を培養して生細胞があれば見つけることにより不活性化試験を実施
iv. 細胞／ペレットの病原性および／または汚染を検査。培養生物をＢａｌｂ／ｃマウスに注射する。すべてのマウスは体重が増加し、健常であることがわかった。マウスの肝臓、肺、脾臓または他の臓器には肉眼的または顕微鏡的病変は観察されない。
v. 生化学試験：生物を含む細胞／ペレットを下記の生化学試験に供する：
ウレアーゼ − ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０加水分解
ナイアシン試験 − 硝酸還元試験
当該生物は、ウレアーゼ、ツイーン８０加水分解およびナイアシンで試験した場合、陰性結果を与える。当該生物は硝酸還元試験で陽性結果を与える。
Ｈ． マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）成分の調製：Ｍｗ成分は下記の方法によって調製できる。
i. 細胞破壊
ii. 溶媒抽出
iii. 酵素抽出
【００２８】
細胞破壊は、超音波処理によって、または高圧フラクショノメーター（ｆｒａｃｔｉｏｎｏｍｅｔｅｒ）を用いて、または浸透圧を与えて、実施される。
【００２９】
溶媒抽出は、クロロホルム、エタノール、メタノール、アセトン、フェノール、イソプロピルアルコール、酢酸、尿素、ヘキサンなどの任意の有機溶媒によって実施される。
【００３０】
酵素抽出は、細胞壁／膜を消化できるタンパク質分解酵素によって実施される。リチカーゼ（Ｌｉｔｉｃａｓｅ）およびプロナーゼが好ましい酵素である。Ｍｗ細胞成分を、Ｍｗの代わりに使用することができる。Ｍｗ細胞成分の添加は、産物の効力改善をもたらす。そのように調製されたＭｗを含む細胞／ペレットはさらに、そのｐ３８阻害活性について評価される。
【００３１】
本発明によれば、前述の製法によって調製されたＭｗ細胞は、医薬組成物の調製に用いられる。
Ａ． 治療剤は０．１ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（加熱殺菌）０．５０ｘ１０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０ ０．１％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ （保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ ｍｌとする
Ｂ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ．（加熱殺菌） ０．５０ ｘ １０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
Ｔｒｉｔｏｎ ｘ １００ ０．１％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｃ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
マイコバクテリウム・ｗ．，（加熱殺菌） ０．５０ ｘ １０９
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｄ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗ由来超音波処理後のマイコバクテリウム・ｗ 抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ （保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｅ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗ のメタノール抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｆ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む：
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのクロロホルム抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｇ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのアセトン抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｈ． 治療剤は０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのエタノール抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｉ． 治療剤は ０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
１ｘ１０１０マイコバクテリウム・ｗのリチカーゼ（ｌｉｔｉｃａｓｅ）抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
Ｊ． 治療剤は ０．１ ｍｌ用量当たり下記を含む
マイコバクテリウム・ｗ （加熱殺菌） ０．５ｘ１０７
１ｘ１０３マイコバクテリウム・ｗの破壊，溶媒抽出または酵素抽出によって得られたマイコバクテリウム・ｗ抽出物
塩化ナトリウム Ｉ．Ｐ． ０．９０％ ｗ／ｖ
チオメロサール Ｉ．Ｐ． ０．０１％ ｗ／ｖ（保存料として）
注射用水 Ｉ．Ｐ． 適量で０．１ｍｌとする
【００３２】
キャリヤー 材料と合わせて１用量剤形を生じうるＭｗ細胞の量は、治療される宿主および具体的な投与様式に応じて変化する。
【００３３】
投与経路は、皮内、静脈内、小胞内（ｉｎｔｒａ ｖｅｓｉｃｌｅ）、腹腔内、関節内、脳内、筋肉内、皮下への注入または当該特定治療について本分野で公知の任意の他の経路とすることができる。経皮投与については、当該医薬組成物は、経皮イオン泳動パッチなどの経皮パッチの形態で投与することができる。
【００３４】
上記のように製造された医薬組成物は、驚くべきことに下記の特性を有することがわかった。それらは、ｐ３８阻害剤、ＴＮＦ−α阻害剤、サイトカイン（ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｅ）の抑制、および形質転換細胞の死を含む。
【００３５】
形質転換細胞の死が生じる濃度は、脾細胞、ＰＢＭＣ、骨髄細胞、線維芽細胞（ｆｉｂｅｒ ｂｌａｓｓ）、マクロファージなどの正常細胞にとっては安全である。
【００３６】
本発明の範囲を限定しない下記の実施例によって、本発明をさらに説明する。
【実施例】
【００３７】
実施例１：皮内経路によるＭｗによるｉｎ ｖｉｖｏ ｐ３８阻害：
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２つの無作為化群に分けた。すべてのマウスは皮内注射を受けた。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）１０８細胞）を投与した。８日目にマウスを屠殺し、全個体から脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００３８】
表１に示す結果は、本発明の医薬組成物の皮内投与後のｐ３８ＭＡＰＫの顕著な阻害を示す。
【００３９】
【表１】
【００４０】
実施例２：静脈内経路によるＭｗによるｉｎ ｖｉｖｏ ｐ３８阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２つの無作為化群に分けた。すべてのマウスはＭｗのＰＢＳ （プラセボ）の静脈内注射を受けた。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）を投与した。８日目にマウスを屠殺し、全個体から脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）および１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４１】
表１に示す結果は、静脈内経路によるＭｗの投与後のｐ３８の顕著な阻害を示す。
【００４２】
実施例３：Ｍｗによるｐ３８のｉｎ ｖｉｔｒｏ阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、および脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。ウェルの数を２群に分け、一方をＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で刺激し、他方をプラセボ（ＰＢＳ）１００ｍｃＬ（μＬ）で刺激した。インキュベート４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４３】
表２に示す結果は、マウス脾細胞とＭｗとのｉｎ ｖｉｔｒｏインキュベートの際におけるｐ３８ ＭＡＰＫの顕著なダウンレギュレーションを示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例４：ＭｗによるＮＦＳ−６０細胞におけるｐ３８阻害
ＮＦＳ６０細胞を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質およびＩＬ−３ １０ｎＧ／ｍＬを含むダルベッコ最小イーグル培地（Ｄｕｂａｌｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｌ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉａ）（ＤＭＥＭ） で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を２群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を４ Ｘ １０６ のＭｗ細胞で刺激した。培養２４時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４６】
表２に示す結果は、２４時間目に対照（非刺激細胞）と比較したＭｗ刺激細胞におけるｐ３８レベルのダウンレギュレーションされたレベルを示す。４ｘ１０６のＭｗ細胞を上回るすべての濃度で、４８時間にて細胞死が観察された。見られた細胞死はアポトーシスによるものであった。
【００４７】
実施例５：ＭｗによるＭｉａ−ｐａ−ｃａ２細胞におけるｐ３８阻害
Ｍａｉ−ｐａ−ｃａ２細胞（膵癌細胞株）をＡＴＣＣから入手し、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質を含むＤＭＥＭ培地で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を２群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を２Ｘ１０６のＭｗ細胞で刺激した。培養４８時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００４８】
表２に示す結果は、４８時間目における対照 （非刺激細胞）と比較したＭｗ刺激細胞におけるｐ３８レベルのダウンレギュレーションされたレベルを示す。１０７を上回るＭｗ濃度では、Ｍｉａ−ｐａ−ｃａ２細胞はアポトーシス細胞死が起こることが見出された。
【００４９】
実施例６：マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）皮内投与の７回注射と比較した単回注射でのｐ３８ ＭＡＰＫの阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを３つの無作為化群に分けた。すべてのマウスに薬剤を皮内投与した。第１群にはＰＢＳ１００ｍｃＬ（μＬ）を投与し、第２群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）を１回のみ投与し、第３群にはＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で毎日７日間免疫した。最初の免疫化後８日目に、マウスを屠殺し、３群すべてについて脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。
【００５０】
培養４８時間後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５１】
結果は、対照と比較してＭｗの単回注射の投与はｐ３８ＭＡＰＫを２０％阻害し、７回注射はｐ３８レベルを２５％阻害することを示す。
【００５２】
実施例７：Ｍｗによるｐ３８ 阻害の持続期間
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを６群に無作為化し、ＰＢＳ１ｍＬを第１群に静脈内投与し、第２〜６群にはＭｗ１ｍＬ（１０９細胞）を投与した。第１群および第２群を１日目に、第３群を７日目に、第４群を１４日目に、第５群を２１日目に、第６群を２８日目に屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。４８時間後、細胞を採集し、ＭＡＰＫ ＥＬＩＳＡをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット （品番＃ ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５３】
表３に示す結果は、２４時間から第２８日までのＭｗ細胞での免疫化の際のダウンレギュレートされたｐ３８レベルを示す（１７．４％および１７．３％）。ｐ３８の最大阻害は第１４日に（２５．１％）に生じる。ｐ３８レベルは試験の全期間（すなわち２８日間）にわたって阻害されたままである。
【００５４】
【表３】
【００５５】
実施例８：Ｍｗによるｐ３８ＭＡＰＫの阻害：用量依存作用
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。ウェルの数を３群に分け、第１群はプラセボ１００ｍｃＬ（μＬ）（ＰＢＳ）で刺激した。第２群はＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０８細胞）で刺激した。第３群はＭｗ１００ｍｃＬ（μＬ）（１０６細胞）で刺激した。４８時間インキュベート後、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５６】
結果は、脾細胞とＭｗ（１０８）細胞とのｉｎ ｖｉｔｒｏインキュベーションによりｐ３８ ＭＡＰＫが４６％ダウンレギュレートする一方、Ｍｗ（１０６）細胞の場合は５％の阻害作用を有することを示す。
【００５７】
実施例９：ＭｗによるＮＦＳ−６０細胞における用量依存性のｐ３８ＭＡＰＫ阻害
ＮＦＳ６０細胞を、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質およびＩＬ−３ １０ｎＧ／ｍＬを含むＤＭＥＭ培地で培養した。細胞をマイクロタイターウェルに濃度１ｘ１０５細胞にて播種した。ウェルの数を５群に分けた。第１群を対照としてＰＢＳで刺激し、第２群を６Ｘ１０７のＭｗ細胞で、第３群を３Ｘ１０７のＭｗ細胞で、第４群を７Ｘ１０６のＭｗ細胞で、第５群を４Ｘ１０６のＭｗ細胞で刺激した。培養２４時間目に、細胞を採集し、細胞シグナル伝達アッセイをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の市販キット（品番＃ＤＹＣ８６９−５）を用いて取扱説明書に従って実施した。
【００５８】
表４に示す結果は、ダウンレギュレートされた２４時間目に対照と比較したＭｗにおけるｐ３８レベルの変化を示す。用量依存性はＭｗ濃度と逆相関する。最大阻害は４Ｘ１０６Ｍｗ細胞で観察された。刺激のための４ｘ１０６のＭｗ細胞の使用を上回るすべての濃度で、ＮＦＳ６０細胞は４８時間を越えて生存しない。細胞はアポトーシスによる細胞死を起こすことが見出される。
【００５９】
【表４】
【００６０】
実施例１０：ＭｗによるＴＮＦα阻害
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２群に無作為化した。第１群および第２群を屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。第１群をＰＢＳと共に培養し、第２群を１０８のＭｗ細胞と共に培養した。４８時間後、細胞上清を分離し、ＴＮＦαのレベルをＲ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番ＭＴＡ００）の市販キットを用いて検査した。
【００６１】
表５に示す結果は、Ｍｗで刺激された群におけるＴＮＦ−αの阻害を示す。驚くべきことに、ＴＮＦ−α阻害は約７４％である一方、ｐ３８阻害は約４７％だけであることが観察される。
【００６２】
【表５】
【００６３】
このように、本発明により治療できるＴＮＦに媒介される疾患または症状は、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、 全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含むが、それらに限定されず、媒介される疾患の前記管理は、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のＭｗおよび／またはＭｗ成分により処置することを含む。
【００６４】
実施例１１：Ｍｗによるサイトカイン抑制
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを２群に無作為化した。第１および２群を屠殺し、脾臓を摘出した。脾細胞を単離し、１０％ＦＢＳおよび１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。第１群をＰＢＳと共にインキュベートし、第２群を１０８のＭｗ細胞と共にインキュベートした。４８時間後、細胞上清を分離し、サイトカインのレベルを、Ｒ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番Ｍ２０００、品番Ｍ４０００Ｂ、品番Ｍ１２４０）の市販キットを用いて検査した。
【００６５】
表６に示す結果は、Ｍｗと共にインキュベートされた第２群におけるサイトカインＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１２ｐ４０の阻害を示す。
【００６６】
驚くべきことに、全ての型のサイトカインが阻害されることが観察される。その作用はｐ３８阻害の量を顕著に上回る（ＩＬ−１２ｐ４０についての６４％からＩＬ−４についての９５％。ｐ３８阻害活性は約４７％である）。
【００６７】
【表６】
【００６８】
実施例１２：サイトカイン抑制についてデキサメタゾンとの比較
未処理Ｂａｌｂ／Ｃマウスを屠殺し、５つの群すべてについて脾臓を摘出した。脾細胞を各群から単離し、１０％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０培地中でマイクロタイタープレートで培養した。細胞はマイクロタイタープレートに播種した。ウェルを５群に分けた。第１群は対照であり、第２群はＭｗで刺激し、第３群はデキサメタゾン１０ｍＭで、第４群はデキサメタゾン１０μＭで、そして第５群はデキサメタゾン１μＭで刺激した。培養４８時間後、細胞を採集し、サイトカインアッセイを、Ｒ＆Ｄシステムズ社（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（品番Ｍ５０００、品番Ｍ４０００Ｂ、品番Ｍ２０００、品番Ｍ１２４０）の市販キットを用いて実施した。
【００６９】
表７に示す結果は、Ｍｗはデキサメタゾンのようにすべてのサイトカインの抑制に有効であることを明らかにする。見られた抑制作用は、１０ｍＭデキサメタゾンで観察されるのと同一である。デキサメタゾンのこの濃度は、典型的には、デキサメタゾン２００ｍｇの静脈内投与後にＣｍａｘとして見られる。デキサメタゾン２００ｍｇは非常に重度の炎症症状においてパルス療法として用いられる。一般的にデキサメタゾンは経口用量として顕著に低い用量で用いられる。一般的に成人は１日当たりデキサメタゾン４．０から８．０ｍｇを経口または非経口経路で投与される。
【００７０】
【表７】
【００７１】
デキサメタゾンのような糖質コルチコイドは公知の抗炎症性化合物である。一般的に用いられる糖質コルチコイドとしては、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、ベタメタゾン、デキサメタゾン、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｉｎｏｌｏｎｅ）、メチルプレドニゾロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｅｎｅ）、プレドニゾンを挙げることができる。それらは抗炎症性および炎症性サイトカインを抑制する。それらは、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスを含む幅広い疾患の管理に用いられる。このように、サイトカイン、インターロイキンおよびケモカインのアップレギュレーションを含むすべての疾患／疾患症状は、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）および／またはその成分を用いて、前記炎症性および抗炎症性サイトカイン抑制のより有効な抑制とともに、治療することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｐ３８ タンパク質キナーゼの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項２】
ｐ３８ タンパク質キナーゼが 正常細胞および形質転換細胞において阻害される、請求項１に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項３】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の管理のための、請求項１に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項４】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が炎症である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項５】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が関節炎である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項６】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が喘息である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項７】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、再灌流、脳卒中における虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、プロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状、癌、免疫不全疾患、細胞死、骨粗鬆症から成る疾患の群から選択され、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） および／または マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） 成分で処置することを含む、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項８】
形質転換細胞においてアポトーシスを誘導するための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項９】
ＴＮＦ−αの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１０】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患の管理のための、請求項８に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１１】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が炎症である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１２】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が関節炎である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１３】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が喘息である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１４】
ＴＮＦに媒介される疾患または症状が、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含み、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） および／または マイコバクテリウム・ｗ成分で処置することを含む、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１５】
サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１６】
炎症性サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１７】
抗炎症性サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１８】
サイトカインに媒介される疾患の管理のための、請求項１４に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１９】
サイトカインに媒介される疾患が、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスから成る疾患の群から選択され、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のＭｗおよび／またはＭｗ成分で処置することを含む、請求項１５に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１】
ｐ３８ タンパク質キナーゼの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項２】
ｐ３８ タンパク質キナーゼが 正常細胞および形質転換細胞において阻害される、請求項１に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項３】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患の管理のための、請求項１に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項４】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が炎症である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項５】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が関節炎である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項６】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が喘息である、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項７】
ｐ３８キナーゼに媒介される疾患が、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨破壊疾患、腫瘍進行を含む増殖性疾患、感染症、神経変性疾患、アレルギー、再灌流、脳卒中における虚血、心臓発作、血管新生疾患、臓器低酸素症、血管増生癌性悪液質、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、プロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２に関連する症状、癌、免疫不全疾患、細胞死、骨粗鬆症から成る疾患の群から選択され、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） および／または マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） 成分で処置することを含む、請求項３に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項８】
形質転換細胞においてアポトーシスを誘導するための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項９】
ＴＮＦ−αの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１０】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患の管理のための、請求項８に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１１】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が炎症である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１２】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が関節炎である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１３】
ＴＮＦ−αに媒介される疾患が喘息である、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１４】
ＴＮＦに媒介される疾患または症状が、関節リウマチ、クローン病、強直性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、アフタ性潰瘍（ａｐｔｈｏｕｓ ｕｌｃｅｒ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、骨髄腫ブドウ膜炎を含み、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ） および／または マイコバクテリウム・ｗ成分で処置することを含む、請求項９に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１５】
サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１６】
炎症性サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１７】
抗炎症性サイトカインの阻害のための、マイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）（Ｍｗ） および／またはマイコバクテリウム・ｗの成分の使用。
【請求項１８】
サイトカインに媒介される疾患の管理のための、請求項１４に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【請求項１９】
サイトカインに媒介される疾患が、関節リウマチ、リウマチ性脊椎炎、喘息、アトピー性皮膚炎、薬物過敏反応、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、剥離性紅皮症、菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｓ）、天疱瘡、重症型多型紅斑（スティーブンス（Ｓｔｅｖｅｎｅｓ））、潰瘍性大腸炎、特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、側頭動脈炎（ｔｅｍｐｏｒａｌ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ）、ブドウ膜炎（ｕｖｅｔｉｔｉｓ）、特発性腎炎におけるタンパク尿、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシス、急性痛風性関節炎、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、多発性筋炎、全身性ループス、不応性多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、重症ＣＯＰＤ、慢性肉芽腫症、血管新生、サルコイドーシスから成る疾患の群から選択され、および媒介される疾患の前記管理が、そのような疾患を有するかまたはそれに感受性である対象を、治療上有効な量のＭｗおよび／またはＭｗ成分で処置することを含む、請求項１５に記載のマイコバクテリウム・ｗ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｗ）の使用。
【公表番号】特表２０１０−５２２１５５（Ｐ２０１０−５２２１５５Ａ）
【公表日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５４０９５（Ｐ２００９−５５４０９５）
【出願日】平成２０年３月１８日（２００８．３．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／０００６３３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１４１１９
【国際公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【出願人】（５０７４２１３９３）カディラ ファーマシューティカルズ リミテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年７月１日（２０１０．７．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月１８日（２００８．３．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／０００６３３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１１４１１９
【国際公開日】平成２０年９月２５日（２００８．９．２５）
【出願人】（５０７４２１３９３）カディラ ファーマシューティカルズ リミテッド (7)
【Ｆターム（参考）】
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