ＳＥＣ系分泌によって改良された発現系
Ｓｅｃ系分泌シグナルペプチドを用いる、組換えタンパク質を生産するための改良された方法および原核生物の発現系を記載し、シュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ分泌系が用いられる。組換えタンパク質およびペプチドの改良された分泌のための融合タンパク質およびコード配列のような、具体的で新規なＳｅｃ系分泌シグナルペプチドを記載する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens)のＳｅｃ系分泌ペプチドについての分泌シグナルのコード配列か、またはそのコード配列と実質的に相同な配列を含む、単離された核酸配列。
【請求項２】
配列が、リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、またはそのpbpシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項３】
配列が、配列番号：２と少なくとも８０％または少なくとも８５％同一である、請求項２の核酸。
【請求項４】
配列が、配列番号：２と少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項２の核酸。
【請求項５】
配列が、pbp分泌シグナルをコードする配列、配列番号：２の配列、配列番号：２と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：２と少なくとも８５％同一な配列、配列番号：２と少なくとも９０％同一な配列および配列番号：２と少なくとも９５％同一な配列から選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項１の核酸。
【請求項６】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：２の配列を含む、請求項１の核酸。
【請求項７】
配列が、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナル、またはそのOprEシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項８】
配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項７の核酸。
【請求項９】
配列が、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１０】
配列が、配列番号：６と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項９の核酸。
【請求項１１】
配列が、アズリン分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１２】
配列が、配列番号：８と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１１の核酸。
【請求項１３】
配列が、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１４】
配列が、配列番号：１０と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１３の核酸。
【請求項１５】
配列が、リポタンパク質Ｂ分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１６】
配列が、配列番号：１２と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１５の核酸。
【請求項１７】
配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：６と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：８と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：１０と少なくとも８０％同一な配列および配列番号：１２と少なくとも８０％同一な配列からなる群より選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項１の核酸。
【請求項１８】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた核酸配列であって、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１２からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項１の核酸。
【請求項１９】
ハイブリダイゼーションがストリンジェントな条件下である、請求項５または１７の核酸。
【請求項２０】
ハイブリダイゼーションが６８℃である、請求項１９の核酸。
【請求項２１】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択される、シュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードする核酸の分泌シグナル配列；その分泌シグナル配列と実質的に相同な配列；またはその分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列を含む、組換えベクター。
【請求項２２】
分泌シグナル配列が、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２および配列番号：１２からなる群より選択されるか、またはその分泌シグナル配列と実質的に相同な配列である、請求項２１のベクター。
【請求項２３】
分泌シグナル配列が、リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、またはそのｐｂｐシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項２４】
分泌シグナル配列が、配列番号：２と少なくとも８０％または少なくとも８５％同一である、請求項２３のベクター。
【請求項２５】
分泌シグナル配列が、配列番号：２と少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項２３のベクター。
【請求項２６】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：２の分泌シグナル配列を含む、請求項２３のベクター。
【請求項２７】
分泌シグナル配列が、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナルをコードするか、または配列がそのシグナル配列と実質的に相同である、請求項２１のベクター。
【請求項２８】
分泌シグナル配列が、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項２９】
分泌シグナル配列が、アズリン分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３０】
分泌シグナル配列が、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３１】
分泌シグナル配列が、リポタンパク質Ｂ分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３２】
分泌シグナル配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：６と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：８と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：１０と少なくとも８０％同一な配列および配列番号：１２と少なくとも８０％同一な配列からなる群より選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項２１のベクター。
【請求項３３】
分泌シグナル配列が、核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１２からなる群より選択される、請求項２１のベクター。
【請求項３４】
分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列を含む、請求項２１のベクター。
【請求項３５】
ハイブリダイゼーションがストリンジェントな条件下である、請求項３４のベクター。
【請求項３６】
ハイブリダイゼーションが６８℃である、請求項３５のベクター。
【請求項３７】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドについてコードする配列に結合している、請求項２１のベクター。
【請求項３８】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主を起源とする、請求項３７のベクター。
【請求項３９】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンスを起源とする、請求項３８のベクター。
【請求項４０】
組換えタンパク質またはペプチドが、宿主生物を起源としないタンパク質またはペプチドに由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス(Pseudomonad)ではない生物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４２】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４３】
組換えタンパク質またはペプチドが哺乳動物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４４】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項３７のベクター。
【請求項４５】
連結配列がシグナルペプチダーゼによって切断される、請求項４４のベクター。
【請求項４６】
組換えタンパク質またはペプチド配列が機能できるように、第二のシグナル配列に結合している、請求項３７のベクター。
【請求項４７】
第二のシグナル配列が、外膜分泌シグナルを対象とする配列を含む、請求項４６のベクター。
【請求項４８】
ベクターがプロモーターをさらに含む、請求項２１のベクター。
【請求項４９】
プロモーターが細菌の宿主細胞を起源とする、請求項４８のベクター。
【請求項５０】
プロモーターが細菌の宿主細胞を起源としない、請求項４８のベクター。
【請求項５１】
プロモーターがエシェリキア・コリ(E.coli)を起源とする、請求項４８のベクター。
【請求項５２】
プロモーターが誘導性プロモーターである、請求項４８のベクター。
【請求項５３】
プロモーターがｌａｃプロモーターまたはｌａｃプロモーターの誘導体である、請求項４８のベクター。
【請求項５４】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードする核酸分泌シグナル配列；その分泌シグナル配列と実質的に相同な配列；もしくは分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列、またはそのコード配列と実質的に相同な配列を含む、組換え細胞。
【請求項５５】
分泌シグナル配列が発現ベクター内に存在する、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５６】
分泌シグナル配列がｐｂｐ配列である、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５７】
分泌シグナル配列がＯｐｒＥ配列である、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５８】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに結合している、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５９】
細胞が、その核酸によってコードされる分泌シグナルペプチドに機能できるように結合している関心対象のタンパク質またはペプチドを発現する、請求項５４の組換え細胞。
【請求項６０】
タンパク質またはペプチドがその細胞のペリプラスム領域内で発現する、請求項５９の細胞。
【請求項６１】
細胞内の酵素が関心対象のタンパク質またはペプチドからシグナルペプチドを切断する、請求項５４の細胞。
【請求項６２】
細胞が細菌の宿主に由来する、請求項５４の細胞。
【請求項６３】
宿主がシュードモナスである、請求項６２の細胞。
【請求項６４】
宿主がシュードモナス・フルオレッセンスである、請求項６３の細胞。
【請求項６５】
宿主がエシェリキア・コリである、請求項６２の細胞。
【請求項６６】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードするアミノ酸配列か、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、単離されたペプチド。
【請求項６７】
分泌ペプチドが、リン酸結合タンパク質（ｐｂｐ）分泌シグナルを含むか、またはそのｐｂｐシグナル配列と実質的に相同な配列である、請求項６６のペプチド。
【請求項６８】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９０％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項６９】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９５％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７０】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９８％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７１】
分泌ペプチドが、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナルか、またはそのＯｐｒＥシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７２】
アミノ酸配列が、配列番号：３のアミノ酸２−２１と少なくとも９０％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７３】
分泌ペプチドが、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７４】
分泌ペプチドが、アズリン分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７５】
分泌ペプチドが、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７６】
分泌ペプチドが、リポタンパク質Ｂ分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７７】
関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに機能できるように結合している、請求項６６のペプチド。
【請求項７８】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンス生物ではない生物に由来する、請求項７７のペプチド。
【請求項７９】
組換えタンパク質またはペプチドを発現させるための発現系であって：
ａ．宿主細胞；ならびに
ｂ． ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列に、機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドを含むベクター
を含む発現系。
【請求項８０】
分泌シグナル配列がｐｂｐ配列である、請求項７９の系。
【請求項８１】
分泌シグナル配列がＯｐｒＥ配列である、請求項７９の系。
【請求項８２】
分泌シグナル配列がＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８３】
分泌シグナル配列がアズリン分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８４】
分泌シグナル配列が鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８５】
分泌シグナル配列がリポタンパク質Ｂ分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８６】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに結合している、請求項７９の系。
【請求項８７】
細胞が、その核酸によってコードされる分泌シグナルペプチドに機能できるように結合している関心対象のタンパク質またはペプチドを発現する、請求項７９の系。
【請求項８８】
タンパク質またはペプチドがその細胞のペリプラスム領域内で発現する、請求項８７の系。
【請求項８９】
細胞内の酵素が関心対象のタンパク質またはペプチドからシグナルペプチドを切断する、請求項８７の系。
【請求項９０】
細胞が細菌の宿主に由来する、請求項７９の系。
【請求項９１】
宿主がシュードモナスである、請求項９０の系。
【請求項９２】
宿主がシュードモナス・フルオレッセンスである、請求項９１の系。
【請求項９３】
宿主がエシェリキア・コリである、請求項９０の系。
【請求項９４】
発酵培地をさらに含む、請求項７９の系。
【請求項９５】
発酵培地がケミカルインデューサーを含む、請求項９４の系。
【請求項９６】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列に、機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドをコードするベクターを含む細胞を提供する工程、ならびにその組換えタンパク質またはペプチドの発現を実現する条件下でその細胞を培養する工程を含む、宿主細胞内で組換えタンパク質またはペプチドを発現させるための方法。
【請求項９７】
分泌シグナルがｐｂｐ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項９８】
分泌シグナルがＯｐｒＥ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項９９】
分泌シグナルがＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１００】
分泌シグナルがアズリン分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０１】
分泌シグナルが鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０２】
分泌シグナルがリポタンパク質Ｂ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０３】
細胞を無機塩培地で培養する、請求項９６の方法。
【請求項１０４】
細胞を高い細胞密度で培養する、請求項９６の方法。
【請求項１０５】
細胞を少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で培養する、請求項１０４の方法。
【請求項１０６】
組換えタンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項９６の方法。
【請求項１０７】
アフィニティークロマトグラフィーによって組換えタンパク質を精製する、請求項９６の方法。
【請求項１０８】
組換えタンパク質と分泌シグナルとの機能的な連結が、宿主細胞を起源とする酵素によって切断され得る、請求項９６の方法。
【請求項１０９】
発現の間に組換えタンパク質から分泌シグナルが切断される、請求項１０９の方法。
【請求項１１０】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主生物を起源とするタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンス生物を起源とするタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１２】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主生物を起源としないタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１３】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナスではない生物に由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１４】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１５】
組換えタンパク質が少なくとも二つのシステイン残基を含む配列を含む、請求項９６の方法。
【請求項１１６】
細胞内の組換えタンパク質において少なくとも一つのジスルフィド結合が形成される、請求項９６の方法。
【請求項１１７】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質配列またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項９６の方法。
【請求項１１８】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１１９】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１２０】
少なくとも９０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１２１】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が活性である、請求項９６の方法。
【請求項１２２】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が活性である、請求項９６の方法。
【請求項１２３】
少なくとも５０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２４】
少なくとも７５％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２５】
少なくとも９０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２６】
細胞がシュードモナス細胞である、請求項９６の方法。
【請求項１２７】
細胞がシュードモナス・フルオレッセンス細胞である、請求項１２６の方法。
【請求項１２８】
細胞がエシェリキア・コリ細胞である、請求項９６の方法。
【請求項１２９】
組換えＳｅｃ系分泌シグナル配列に機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドをコードするベクターを含むシュードモナス・フルオレッセンス細胞を提供する工程、ならびにそのタンパク質またはペプチドの発現を実現する条件下でその細胞を培養する工程を含む、シュードモナス・フルオレッセンス宿主細胞内での組換えタンパク質の改良された発現のための方法。
【請求項１３０】
シグナル配列がシュードモナス・フルオレッセンスのゲノムに由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１３１】
シグナル配列がシュードモナス・フルオレッセンスのゲノムに由来しない、請求項１２９の方法。
【請求項１３２】
シグナル配列がエシェリキア・コリのゲノムに由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１３３】
細胞を無機塩培地で培養する、請求項１２９の方法。
【請求項１３４】
細胞を高い細胞密度で培養する、請求項１２９の方法。
【請求項１３５】
細胞を少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で培養する、請求項１３４の方法。
【請求項１３６】
組換えタンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項１２９の方法。
【請求項１３７】
アフィニティークロマトグラフィーによって組換えタンパク質を精製する、請求項１３６の方法。
【請求項１３８】
組換えタンパク質と分泌シグナルとの機能的な連結が、宿主細胞を起源とする酵素によって切断され得る、請求項１２９の方法。
【請求項１３９】
発現の間に組換えタンパク質から分泌シグナルが切断される、請求項１３８の方法。
【請求項１４０】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナスではない生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４２】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４３】
組換えタンパク質が、少なくとも二つのシステイン残基を含む配列を含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４４】
細胞内の組換えタンパク質において少なくとも一つのジスルフィド結合が形成される、請求項１２９の方法。
【請求項１４５】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質配列またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４６】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４７】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が活性である、請求項１２９の方法。
【請求項１４８】
少なくとも９０％の組換えタンパク質が活性である、請求項１２９の方法。
【請求項１４９】
少なくとも５０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【請求項１５０】
少なくとも７５％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【請求項１５１】
少なくとも９０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【請求項１】
リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens)のＳｅｃ系分泌ペプチドについての分泌シグナルのコード配列か、またはそのコード配列と実質的に相同な配列を含む、単離された核酸配列。
【請求項２】
配列が、リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、またはそのpbpシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項３】
配列が、配列番号：２と少なくとも８０％または少なくとも８５％同一である、請求項２の核酸。
【請求項４】
配列が、配列番号：２と少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項２の核酸。
【請求項５】
配列が、pbp分泌シグナルをコードする配列、配列番号：２の配列、配列番号：２と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：２と少なくとも８５％同一な配列、配列番号：２と少なくとも９０％同一な配列および配列番号：２と少なくとも９５％同一な配列から選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項１の核酸。
【請求項６】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：２の配列を含む、請求項１の核酸。
【請求項７】
配列が、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナル、またはそのOprEシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項８】
配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項７の核酸。
【請求項９】
配列が、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１０】
配列が、配列番号：６と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項９の核酸。
【請求項１１】
配列が、アズリン分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１２】
配列が、配列番号：８と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１１の核酸。
【請求項１３】
配列が、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１４】
配列が、配列番号：１０と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１３の核酸。
【請求項１５】
配列が、リポタンパク質Ｂ分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項１の核酸。
【請求項１６】
配列が、配列番号：１２と少なくとも８０％同一であるか、もしくは少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項１５の核酸。
【請求項１７】
配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：６と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：８と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：１０と少なくとも８０％同一な配列および配列番号：１２と少なくとも８０％同一な配列からなる群より選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項１の核酸。
【請求項１８】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた核酸配列であって、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１２からなる群より選択される核酸配列を含む、請求項１の核酸。
【請求項１９】
ハイブリダイゼーションがストリンジェントな条件下である、請求項５または１７の核酸。
【請求項２０】
ハイブリダイゼーションが６８℃である、請求項１９の核酸。
【請求項２１】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択される、シュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードする核酸の分泌シグナル配列；その分泌シグナル配列と実質的に相同な配列；またはその分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列を含む、組換えベクター。
【請求項２２】
分泌シグナル配列が、配列番号：２、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０、配列番号：１２および配列番号：１２からなる群より選択されるか、またはその分泌シグナル配列と実質的に相同な配列である、請求項２１のベクター。
【請求項２３】
分泌シグナル配列が、リン酸結合タンパク質(pbp)分泌シグナル、またはそのｐｂｐシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項２４】
分泌シグナル配列が、配列番号：２と少なくとも８０％または少なくとも８５％同一である、請求項２３のベクター。
【請求項２５】
分泌シグナル配列が、配列番号：２と少なくとも９０％または少なくとも９５％同一である、請求項２３のベクター。
【請求項２６】
核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：２の分泌シグナル配列を含む、請求項２３のベクター。
【請求項２７】
分泌シグナル配列が、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナルをコードするか、または配列がそのシグナル配列と実質的に相同である、請求項２１のベクター。
【請求項２８】
分泌シグナル配列が、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項２９】
分泌シグナル配列が、アズリン分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３０】
分泌シグナル配列が、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３１】
分泌シグナル配列が、リポタンパク質Ｂ分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同である配列をコードする、請求項２１のベクター。
【請求項３２】
分泌シグナル配列が、配列番号：４と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：６と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：８と少なくとも８０％同一な配列、配列番号：１０と少なくとも８０％同一な配列および配列番号：１２と少なくとも８０％同一な配列からなる群より選択される核酸配列にハイブリダイズする、請求項２１のベクター。
【請求項３３】
分泌シグナル配列が、核酸配列を発現させるために選択される宿主生物のコドンプレファレンスを反映させるために適応させた配列番号：４、配列番号：６、配列番号：８、配列番号：１０および配列番号：１２からなる群より選択される、請求項２１のベクター。
【請求項３４】
分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列を含む、請求項２１のベクター。
【請求項３５】
ハイブリダイゼーションがストリンジェントな条件下である、請求項３４のベクター。
【請求項３６】
ハイブリダイゼーションが６８℃である、請求項３５のベクター。
【請求項３７】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドについてコードする配列に結合している、請求項２１のベクター。
【請求項３８】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主を起源とする、請求項３７のベクター。
【請求項３９】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンスを起源とする、請求項３８のベクター。
【請求項４０】
組換えタンパク質またはペプチドが、宿主生物を起源としないタンパク質またはペプチドに由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス(Pseudomonad)ではない生物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４２】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４３】
組換えタンパク質またはペプチドが哺乳動物に由来する、請求項３７のベクター。
【請求項４４】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項３７のベクター。
【請求項４５】
連結配列がシグナルペプチダーゼによって切断される、請求項４４のベクター。
【請求項４６】
組換えタンパク質またはペプチド配列が機能できるように、第二のシグナル配列に結合している、請求項３７のベクター。
【請求項４７】
第二のシグナル配列が、外膜分泌シグナルを対象とする配列を含む、請求項４６のベクター。
【請求項４８】
ベクターがプロモーターをさらに含む、請求項２１のベクター。
【請求項４９】
プロモーターが細菌の宿主細胞を起源とする、請求項４８のベクター。
【請求項５０】
プロモーターが細菌の宿主細胞を起源としない、請求項４８のベクター。
【請求項５１】
プロモーターがエシェリキア・コリ(E.coli)を起源とする、請求項４８のベクター。
【請求項５２】
プロモーターが誘導性プロモーターである、請求項４８のベクター。
【請求項５３】
プロモーターがｌａｃプロモーターまたはｌａｃプロモーターの誘導体である、請求項４８のベクター。
【請求項５４】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードする核酸分泌シグナル配列；その分泌シグナル配列と実質的に相同な配列；もしくは分泌シグナル配列にハイブリダイズする配列、またはそのコード配列と実質的に相同な配列を含む、組換え細胞。
【請求項５５】
分泌シグナル配列が発現ベクター内に存在する、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５６】
分泌シグナル配列がｐｂｐ配列である、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５７】
分泌シグナル配列がＯｐｒＥ配列である、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５８】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに結合している、請求項５４の組換え細胞。
【請求項５９】
細胞が、その核酸によってコードされる分泌シグナルペプチドに機能できるように結合している関心対象のタンパク質またはペプチドを発現する、請求項５４の組換え細胞。
【請求項６０】
タンパク質またはペプチドがその細胞のペリプラスム領域内で発現する、請求項５９の細胞。
【請求項６１】
細胞内の酵素が関心対象のタンパク質またはペプチドからシグナルペプチドを切断する、請求項５４の細胞。
【請求項６２】
細胞が細菌の宿主に由来する、請求項５４の細胞。
【請求項６３】
宿主がシュードモナスである、請求項６２の細胞。
【請求項６４】
宿主がシュードモナス・フルオレッセンスである、請求項６３の細胞。
【請求項６５】
宿主がエシェリキア・コリである、請求項６２の細胞。
【請求項６６】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌ペプチドをコードするアミノ酸配列か、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、単離されたペプチド。
【請求項６７】
分泌ペプチドが、リン酸結合タンパク質（ｐｂｐ）分泌シグナルを含むか、またはそのｐｂｐシグナル配列と実質的に相同な配列である、請求項６６のペプチド。
【請求項６８】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９０％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項６９】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９５％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７０】
アミノ酸配列が、配列番号：１のアミノ酸２−２４と少なくとも９８％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７１】
分泌ペプチドが、外膜ポーリンＥ(OprE)分泌シグナルか、またはそのＯｐｒＥシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７２】
アミノ酸配列が、配列番号：３のアミノ酸２−２１と少なくとも９０％同一である、請求項６６のペプチド。
【請求項７３】
分泌ペプチドが、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７４】
分泌ペプチドが、アズリン分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７５】
分泌ペプチドが、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７６】
分泌ペプチドが、リポタンパク質Ｂ分泌シグナルか、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列を含む、請求項６６のペプチド。
【請求項７７】
関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに機能できるように結合している、請求項６６のペプチド。
【請求項７８】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンス生物ではない生物に由来する、請求項７７のペプチド。
【請求項７９】
組換えタンパク質またはペプチドを発現させるための発現系であって：
ａ．宿主細胞；ならびに
ｂ． ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列に、機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドを含むベクター
を含む発現系。
【請求項８０】
分泌シグナル配列がｐｂｐ配列である、請求項７９の系。
【請求項８１】
分泌シグナル配列がＯｐｒＥ配列である、請求項７９の系。
【請求項８２】
分泌シグナル配列がＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８３】
分泌シグナル配列がアズリン分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８４】
分泌シグナル配列が鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８５】
分泌シグナル配列がリポタンパク質Ｂ分泌シグナルである、請求項７９の系。
【請求項８６】
分泌シグナル配列が機能できるように、関心対象の組換えタンパク質またはペプチドに結合している、請求項７９の系。
【請求項８７】
細胞が、その核酸によってコードされる分泌シグナルペプチドに機能できるように結合している関心対象のタンパク質またはペプチドを発現する、請求項７９の系。
【請求項８８】
タンパク質またはペプチドがその細胞のペリプラスム領域内で発現する、請求項８７の系。
【請求項８９】
細胞内の酵素が関心対象のタンパク質またはペプチドからシグナルペプチドを切断する、請求項８７の系。
【請求項９０】
細胞が細菌の宿主に由来する、請求項７９の系。
【請求項９１】
宿主がシュードモナスである、請求項９０の系。
【請求項９２】
宿主がシュードモナス・フルオレッセンスである、請求項９１の系。
【請求項９３】
宿主がエシェリキア・コリである、請求項９０の系。
【請求項９４】
発酵培地をさらに含む、請求項７９の系。
【請求項９５】
発酵培地がケミカルインデューサーを含む、請求項９４の系。
【請求項９６】
ｐｂｐ分泌シグナル、ＯｐｒＥ分泌シグナル、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナル、アズリン分泌シグナル、鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルおよびリポタンパク質Ｂ分泌シグナルからなる群より選択されるシュードモナス・フルオレッセンスのＳｅｃ系分泌シグナル、またはそのシグナル配列と実質的に相同な配列に、機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドをコードするベクターを含む細胞を提供する工程、ならびにその組換えタンパク質またはペプチドの発現を実現する条件下でその細胞を培養する工程を含む、宿主細胞内で組換えタンパク質またはペプチドを発現させるための方法。
【請求項９７】
分泌シグナルがｐｂｐ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項９８】
分泌シグナルがＯｐｒＥ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項９９】
分泌シグナルがＬｙｓ−Ａｒｇ−Ｏｒｎ結合タンパク質分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１００】
分泌シグナルがアズリン分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０１】
分泌シグナルが鉄（ＩＩＩ）結合タンパク質分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０２】
分泌シグナルがリポタンパク質Ｂ分泌シグナルである、請求項９６の方法。
【請求項１０３】
細胞を無機塩培地で培養する、請求項９６の方法。
【請求項１０４】
細胞を高い細胞密度で培養する、請求項９６の方法。
【請求項１０５】
細胞を少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で培養する、請求項１０４の方法。
【請求項１０６】
組換えタンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項９６の方法。
【請求項１０７】
アフィニティークロマトグラフィーによって組換えタンパク質を精製する、請求項９６の方法。
【請求項１０８】
組換えタンパク質と分泌シグナルとの機能的な連結が、宿主細胞を起源とする酵素によって切断され得る、請求項９６の方法。
【請求項１０９】
発現の間に組換えタンパク質から分泌シグナルが切断される、請求項１０９の方法。
【請求項１１０】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主生物を起源とするタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス・フルオレッセンス生物を起源とするタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１２】
組換えタンパク質またはペプチドが宿主生物を起源としないタンパク質またはペプチドに由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１３】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナスではない生物に由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１４】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項９６の方法。
【請求項１１５】
組換えタンパク質が少なくとも二つのシステイン残基を含む配列を含む、請求項９６の方法。
【請求項１１６】
細胞内の組換えタンパク質において少なくとも一つのジスルフィド結合が形成される、請求項９６の方法。
【請求項１１７】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質配列またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項９６の方法。
【請求項１１８】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１１９】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１２０】
少なくとも９０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項９６の方法。
【請求項１２１】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が活性である、請求項９６の方法。
【請求項１２２】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が活性である、請求項９６の方法。
【請求項１２３】
少なくとも５０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２４】
少なくとも７５％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２５】
少なくとも９０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項９６の方法。
【請求項１２６】
細胞がシュードモナス細胞である、請求項９６の方法。
【請求項１２７】
細胞がシュードモナス・フルオレッセンス細胞である、請求項１２６の方法。
【請求項１２８】
細胞がエシェリキア・コリ細胞である、請求項９６の方法。
【請求項１２９】
組換えＳｅｃ系分泌シグナル配列に機能できるように結合している組換えタンパク質またはペプチドをコードするベクターを含むシュードモナス・フルオレッセンス細胞を提供する工程、ならびにそのタンパク質またはペプチドの発現を実現する条件下でその細胞を培養する工程を含む、シュードモナス・フルオレッセンス宿主細胞内での組換えタンパク質の改良された発現のための方法。
【請求項１３０】
シグナル配列がシュードモナス・フルオレッセンスのゲノムに由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１３１】
シグナル配列がシュードモナス・フルオレッセンスのゲノムに由来しない、請求項１２９の方法。
【請求項１３２】
シグナル配列がエシェリキア・コリのゲノムに由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１３３】
細胞を無機塩培地で培養する、請求項１２９の方法。
【請求項１３４】
細胞を高い細胞密度で培養する、請求項１２９の方法。
【請求項１３５】
細胞を少なくとも２０ｇ／Ｌの細胞密度で培養する、請求項１３４の方法。
【請求項１３６】
組換えタンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項１２９の方法。
【請求項１３７】
アフィニティークロマトグラフィーによって組換えタンパク質を精製する、請求項１３６の方法。
【請求項１３８】
組換えタンパク質と分泌シグナルとの機能的な連結が、宿主細胞を起源とする酵素によって切断され得る、請求項１２９の方法。
【請求項１３９】
発現の間に組換えタンパク質から分泌シグナルが切断される、請求項１３８の方法。
【請求項１４０】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナス生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４１】
組換えタンパク質またはペプチドがシュードモナスではない生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４２】
組換えタンパク質またはペプチドが真核生物に由来する、請求項１２９の方法。
【請求項１４３】
組換えタンパク質が、少なくとも二つのシステイン残基を含む配列を含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４４】
細胞内の組換えタンパク質において少なくとも一つのジスルフィド結合が形成される、請求項１２９の方法。
【請求項１４５】
シグナルペプチド配列と、組換えタンパク質配列またはペプチド配列との間に連結配列をさらに含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４６】
少なくとも５０％の組換えタンパク質が天然のアミノ末端を含む、請求項１２９の方法。
【請求項１４７】
少なくとも８０％の組換えタンパク質が活性である、請求項１２９の方法。
【請求項１４８】
少なくとも９０％の組換えタンパク質が活性である、請求項１２９の方法。
【請求項１４９】
少なくとも５０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【請求項１５０】
少なくとも７５％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【請求項１５１】
少なくとも９０％の組換えタンパク質がペリプラスム領域内で発現する、請求項１２９の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２００７−５１２０２８（Ｐ２００７−５１２０２８Ａ）
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４１６５１（Ｐ２００６−５４１６５１）
【出願日】平成１６年１１月２２日（２００４．１１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３９３１６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８９０９３
【国際公開日】平成１７年９月２９日（２００５．９．２９）
【出願人】（５０２１４１０５０）ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド (1,383)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月１７日（２００７．５．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月２２日（２００４．１１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３９３１６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８９０９３
【国際公開日】平成１７年９月２９日（２００５．９．２９）
【出願人】（５０２１４１０５０）ダウ グローバル テクノロジーズ インコーポレイティド (1,383)
【Ｆターム（参考）】
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