ｐ４０依存性疾患の治療におけるベンジダミンの使用
サイトカインサブユニットｐ４０の発現又は過剰発現に起因した炎症性疾患、特にクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬の治療におけるベンジダミンの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｐ４０依存性疾患の治療におけるベンジダミンの使用に関する。
特に、本発明は、サイトカインサブユニットｐ４０の発現又は過剰発現に起因した炎症性疾患の治療におけるベンジダミンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ベンジダミン（メルクインデックス、第９編、１９７６年、第１４７頁、Ｎｏ．１１３６）は鎮痛性、抗炎症性および筋弛緩作用を有する一群の物質に関する特許文献１に初めて記述された。
【０００３】
ベンジダミンは、実際に塩酸塩としてヒトの治療に広く使用される。これは主に全身性経路により消炎剤や鎮痛剤として使用される。しかも、これは例えば筋肉痛、腱炎、外陰膣炎、歯肉炎、口内炎、口腔粘膜炎などのような局所炎症を含む疾患に主に局部的に使用される。さらに、ベンジダミンサリチル酸塩はリウマチ性疾患に使用される。
【０００４】
特許文献２は、膣トリコモナスおよびガードネレラ・バジナリス感染症の治療におけるベンジダミンの使用を開示する。膣トリコモナスは、男性と女性の両方の尿生殖路の感染症を引き起こす原虫である。ガードネレラ・バジナリスは、直径０．２５〜０．４４ｍｍのコロニーを形成するグラム不定性の多形性小桿菌である。
【０００５】
特許文献３は、抗炎症量のベンジダミンと抗菌有効量の抗菌剤とを含む医薬組成物を開示する。ベンジダミンと抗菌剤との組合せは、ベンジダミンの活性を損なうことなく抗菌剤の活性を高めて、特に歯茎、口およびのどの細菌感染症に対する有効な防腐、抗炎および鎮痛治療をもたらす。
【０００６】
特許文献４は、口腔の粘膜との重要な接触を可能にし、中枢作用性鎮咳薬およびベンジダミンを含む経口鎮咳医薬組成物を開示する。ベンジダミンは、中枢作用性鎮咳薬単独の場合と比較して、特定の病理における咳の末梢刺激に対する中枢作用性鎮咳薬の作用の発現時間を短縮し得ることが示された。
【０００７】
特許文献５は、ＴＮＦ、すなわちαＴＮＦとしても既知の非グリコシル化ポリペプチド、またはカケクチンに起因した病理状態の治療用薬剤を調製するためのベンジダミンの使用を開示する。ＴＮＦは、サイトカイン群に属し、それ自体外部攻撃から生体を防御する免疫応答を刺激する一因となる。他方、ＴＮＦそれ自体の過剰な作用は、ＴＮＦの相当な毒性を付与する実際の病原因子となり得る。ベンジダミン治療の利益と言われるＴＮＦに起因した病理状態の代表的な例としては、敗血症性ショック、悪液質、結核若しくはエイズのような慢性ウイルス又は細菌の感染症、或いは多発性硬化症又は潰瘍性大腸炎のような変性疾患が挙げられる。
【０００８】
しかし、ベンジダミンの作用は、ＴＮＦに関する限り、抗炎症効果を達成するために投与したものよりも多い投与量で実行される。その後、２０ｍｇ／ｋｇの投与量、またマウスで４０ｍｇ／ｋｇの高い投与量がＴＮＦ産生に対し大きな抑制効果を有するのに必要とされることが報告されている（非特許文献１及び２）。
【０００９】
近年、エタネルセプト、インフリキシマブ及びアダリムマブのようなＴＮＦに干渉し得る化合物の使用が開発され、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬及び強直性脊椎炎の治療のための臨床試験がなされている。
【００１０】
しかし、別の機構によるものであるが、ＴＮＦに干渉し得る化合物の使用は、安全性の問題によりかなり制限される。実際、免疫活性におけるＴＮＦの重要な役割により、抗ＴＮＦ剤の使用が感染症、悪性腫瘍又は自己免疫疾患のような一般的な免疫抑制後遺症の出現をしばしば伴うことが臨床試験と臨床診療とで実証されている。
【００１１】
さらに最近、いくつかの科学的研究は、サイトカインサブユニットｐ４０が乾癬の病理に基本的な役割を果たし得ることを示した（非特許文献３）。
【００１２】
サイトカインサブユニットｐ４０は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）及びインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）の両方の成分である。ｐ４０サイトカインサブユニットは、ジスルフィド結合を介してサイトカインサブユニットｐ３５に結合してＩＬ−１２を形成し、またサイトカインサブユニットｐ１９に結合してＩＬ−２３を形成する。ＩＬ−１２及びＩＬ−２３は炎症誘発性ヘテロ二量体サイトカインの小さい一群の構成体である。ＩＬ−１２用受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１及びＩＬ−２３Ｒβ２のサブユニットにより構成される一方、ＩＬ−２３用受容体はＩＬ−１２Ｒβ１及びＩＬ−２３Ｒのサブユニットにより構成される。
【００１３】
ＩＬ−１２及びＩＬ−２３は、主として活性化樹枝状細胞及び食細胞によって発現する。二つのサイトカイン用受容体は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞並びにＮＫ Ｔ細胞に発現するが、ＩＬ−２３用受容体の低レベルの複合体は単球、マクロファージ及び樹枝状細胞にも存在する。
【００１４】
これら類似性にもかかわらず、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３が異なる免疫学的回路を制御することを示唆する多くの証拠がある。実際、ＩＬ−１２はγ―インターフェロン（ＩＦＮ−γ）を産生し得るＴｈ１細胞の発達を制御し、細胞毒性、抗菌性及び坑腫瘍性の応答を増加する一方、ＩＬ−２３はＩＬ−１７を産生し得るＣＤ４＋細胞の発生に至る回路を調節する。ＩＬ−２３依存プロセスの誘導は、様々な種類の炎症性細胞、例えばＴＨ−１７の可動化をもたらし、免疫学的応答により仲介される多数の炎症性病理の発症に不可欠であることが実証されている。
【００１５】
ｐ４０の発現に伴う病理の代表的な例としては、関節器官の慢性炎症性疾患（例えば関節リウマチ）、皮膚組織の慢性炎症性疾患（例えば乾癬）、胃腸器官の慢性炎症性疾患（例えばクローン病）がある。しかし、ＩＬ−２３はまた、腫瘍の発生や成長を促進するという役割を果たす。実際、ＩＬ−２３は、腫瘍微小環境における一連の回路を調整し、血管新生と炎症媒体物の産生とを刺激する。
【００１６】
乾癬は世界人口の３％に影響を与える慢性炎症性皮膚疾患である（非特許文献４及び５）。１型の異常な免疫応答が乾癬の病理と相関し、この応答を誘導するＩＬ−１２及びＩＬ−２３のようなサイトカインが適当な治療対象物を表す場合がある。サブユニットｐ４０を共有するＩＬ−１２及びＩＬ−２３の発現が乾癬斑において著しく増加され、また前臨床研究によりこれらサイトカインの役割が乾癬の病理において実証された。最近、乾癬を患っている患者に対する抗ＩＬ−１２及び抗ＩＬ−２３のモノクローナル抗体による治療が、疾患の進行や重篤さの兆候の改善に有効であることが証明され、その後乾癬の病理におけるＩＬ−１２及びＩＬ−２３の役割を強固にした。
【００１７】
クローン病は、消化器の慢性炎症性病理であり、その口から肛門までのあらゆる領域に影響を及ぼす可能性がある。クローン病は通常回腸の末端管や大腸の特定の領域を苦しめる。これは口内炎やリウマチ性関節炎のような全身性自己免疫疾患をしばしば伴う。ヨーロッパでは５０００００人、米国では６０００００人を超える人がクローン病により影響を受けている。
【００１８】
クローン病は、サイトカインのＴｈ１細胞媒介過剰活性に伴う病理である。ＩＬ−１２は、Ｔｈ１細胞により仲介された炎症応答の初期における主要なサイトカインである。クローン病は、腸組織での抗原提示細胞によるＩＬ−１２の増大した産生と、リンパ球と腸管マクロファージによるγ―インターフェン（ＩＦＮ−γ）およびＴＮＦ−αとの増大した産生を特徴とする。これらサイトカインは、病理の特徴的な兆候である腸壁の炎症プロセスおよび肥厚を誘導、支持する。ＩＬ−１２の抑制が腸の炎症のモデル及び／又はクローン病を患っている患者における炎症応答を制御するのに有効であることが前臨床的および臨床的証拠により実証された。
【００１９】
癌と炎症との関係は現在確立された事実である。多くの腫瘍の形態が炎症部位に由来し、炎症媒体物が腫瘍にしばしば産生される。
【００２０】
ＩＬ−２３は、癌に関連するサイトカインとして同定され、特に隣接する正常組織と比較した場合、ＩＬ−２３の発現はヒト悪性腫瘍の試料において著しく高い。さらに、隣接する正常組織におけるＩＬ−２３の有意な発現の欠如は、腫瘍発生の役割を強固にする腫瘍中のＩＬ−２３の過剰調節を示唆する。
【００２１】
出願人は、クローン病、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎および乾癬などの慢性炎症性疾患のより安全かつ安価な治療用の医薬を開発し、これまで報告された治療に関連したいくつかの副作用及び高いコストを回避する必要性が依然としてあることに気付いた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２２】
【特許文献１】米国特許第３３１８９０５号明細書
【特許文献２】欧州特許第１９５７４９号明細書
【特許文献３】欧州特許第８１２１９３号明細書
【特許文献４】米国特許第５９３２５８９号明細書
【特許文献５】米国特許第６３００３５８号明細書
【非特許文献】
【００２３】
【非特許文献１】Ｍ．Ｓｉｒｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｙ ｂｅｎｚｉｄａｍｉｎｅ”，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１９９６年９月第８巻，第９号，第７１０−７１６頁
【非特許文献２】Ａ．Ｇｕｇｌｉｅｌｍｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．“Ｂｅｎｚｙｄａｍｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ”，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７年９月第４６巻，第９号，第３３２−３３５頁
【非特許文献３】Ｍ．Ｃａｒｇｉｌｌ，“Ａ ｌａｒｇｅ−ｓｃａｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｃｏｎｆｉｒｍｓ ＩＬ１２Ｂ ａｎｄ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ２３Ｒ ａｓ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｒｉｓｋ ｇｅｎｅｓ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７年２月第８０巻，第２号，第２７３−２９０頁
【非特許文献４】Ｋｏｏ Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｃｌｉｎ．１９９６；１４：４８５−９６。
【非特許文献５】Ｓｃｈｏｎ ＭＰ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００５；３５２：１８９９−９１２。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２４】
驚くべきことに、出願人はベンジダミンがサイトカインサブユニットｐ４０の発現と過剰発現を抑制することができることを見出した。また、出願人は驚くべきことに、ベンジダミンがＴＮＦに対する活性について以前報告されたものに関してより低濃度でサイトカインサブユニットｐ４０に対して活性であることを見出した。
【００２５】
驚くべきことに、出願人はサイトカインサブユニットｐ４０の発現または過剰発現に起因した、例えばクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬のような炎症性疾患の治療にベンジダミンを使用し得ることを見出した。
【００２６】
従って、本発明はサイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００２７】
好ましくは、本発明は、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群から選択した炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００２８】
別の実施形態において、本発明は、治療有効量のベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の投与を備える治療を必要とする患者における、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療方法に関する。
【００２９】
有利なことに、出願人は、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬の治療におけるベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、現在既知のＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも良好な結果を付与することを見出した。
【００３０】
さらに、出願人はまた、本発明に係るベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、ＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも副作用が低いことを見出した。
【００３１】
加えて、出願人はまた、本発明に係るベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、ＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも安価な治療的処置を提供するのを可能にすることを見出した。
【００３２】
最後に、出願人は、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩をＴＮＦ産生の抑制に予め既知の投与量よりも低い投与量で使用し得ることを見出した。
【００３３】
従って、本発明の好ましい実施形態は、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の全身または局所投与による治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００３４】
有利なことに、全身投与用の本発明の薬剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む。
【００３５】
有利なことに、局所投与用の本発明の薬剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む。
【００３６】
より好ましい実施形態において、本発明は、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を遊離塩基として表されるベンジダミン０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量で投与することを備える治療を必要とする患者における、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療方法に関する。
【００３７】
本発明の方法は、全身または局所投与を備えるのが好ましい。
【００３８】
有利なことに、本発明の方法は、遊離塩基として表されるベンジダミンの０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量でベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を全身投与することを備える。
【００３９】
有利なことに、本発明の方法は、遊離塩基として表されるベンジダミンの１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量でベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を局所投与することを備える。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明の目的のために、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩をそれ自体として投与することができる。
【００４１】
有利なことに、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を、全身または局所投与用の医薬製剤の形状で投与することができる。
【００４２】
ベンジダミンは、生理学的に許容し得る有機又は無機酸で生理学的に許容し得る酸付加塩を形成することができる。生理学的に許容し得る無機酸の代表的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸及び硝酸がある。適当な生理学的に許容し得る有機酸の代表的な例としては、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラトルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸及び酒石酸がある。
【００４３】
全身経路により使用する場合、医薬製剤は錠剤、糖衣錠、カプセル、粉末および徐放製剤のような固体、または筋肉若しくは静脈内注射用無菌溶液、懸濁剤および乳剤のような液体である。
【００４４】
局所用医薬製剤は、洗浄溶液、クリーム及び発泡体のような膣投与形態、口内洗浄液およびスプレーのような口腔治療用の投与形態、並びに軟膏、ペースト、クリーム、発泡体、ゲル、溶液および粉末のような鼻及び耳用の投与形態とすることができる。
【００４５】
従来の賦形剤に加えて、本発明の製剤は、防腐剤、安定剤、乳化剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液、着色剤および香料などの他の適当な医薬添加剤を含んでもよい。
【００４６】
特定の治療にとって必要である場合、本発明の製剤はまた、同時投与が有益な他の混合可能な活性成分を含むことができる。
【００４７】
有利なことに、本発明の全身投与用医薬製剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む。
【００４８】
有利なことに、本発明の局所投与用医薬製剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む。
【００４９】
治療の実用的用途に対し、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の有効量は、必要な特定の治療法、選択された医薬製剤および投与経路並びに特定の患者の年齢、体重および応答のような既知の要因に応じてかなり幅広い範囲にわたって変えることができる。しかし、最適な有効量及び投与間隔は、関与する医師により単純な日常的手順にしたがって容易に達成することができる。
【００５０】
一般に、ベンジダミン遊離塩基の１日投与量は、好ましくは５０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ未満、更に好ましくは５ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００５１】
一方、ベンジダミン遊離塩基の１日投与量は、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇより高く、より好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇより高く、更に好ましくは１ｍｇ／ｋｇより高い。
【００５２】
当然、その酸付加塩の場合、上述したベンジダミン遊離塩基の量に相当する量が投与される。
【００５３】
有利なことに、全身投与の場合、遊離塩基として表されるベンジダミンの１日投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇであるのが好ましい。
【００５４】
有利なことに、局所投与の場合、遊離塩基として表されるベンジダミンの１日投与量は、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇであるのが好ましい。
【００５５】
本発明の医薬製剤は、必要に応じて混合、造粒及び圧縮を含む薬剤師による従来の手法に従うか、又は望ましい結果を与えるのに見合った成分を様々に混合し及び溶解することにより作製することができる。
【００５６】
次の例は、本発明を実施するための少なくとも一つの方法を説明するが、添付された請求の範囲によって定義される保護が求められている事項をいかなる方法においても制限することはない。
【実施例】
【００５７】
実施例１
生体外でのｐ４０ ｍＲＮＡ発現に対するベンジダミンの効果
【００５８】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）で刺激されたＭｏｎｏＭａｃ６細胞によるｐ４０の発現を抑制するベンジダミンの能力を評価した。
【００５９】
細胞を５００００細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を７５μＭの濃度で試験し、１時間培養した。その後、細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で４時間刺激した。
【００６０】
全ＲＮＡを細胞ペレットからＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ社製）を使用して抽出し、ＴａｑＭａｎ逆転写試薬合成キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）で逆転写し、そして得られたｃＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ反応に使用した。
【００６１】
次の温度プロファイル、５０℃を２分間、９５℃を１０分間、そして９５℃で１５秒間と６０℃で１分間の４５サイクルを適用することによりＡＢＩプリズム７０００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、増幅を９６ウェルプレートで得た。増幅のために、ヒトｐ４０に特異のプライマー及びプローブのセットを用いた（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製, ＲｅｆＳｅｑ ＮＭ＿００２１８７．２）。
【００６２】
β−アクチン用のプライマー及びプローブのセットを別のウェルに規格化の目的用試料の内部対照として用いた。一度反応が生起すると、各試料の閾値サイクル（Ｃｔ）を計算し、その後ΔΔＣｔ法により相対定量化を行うことにより、ＡＢＩプリズム７０００ＳＤＳソフトウェアを用いて蛍光データを分析した。
【００６３】
得られた結果を抑制の百分率で表し、下記の表１に対照する。
【００６４】
【表１】
【００６５】
表１に得られた結果により示されるように、ベンジダミンはヒト単球ラインにおけるｐ４０のＬＰＳ−誘導発現を著しく抑制する能力があり、特定のｍＲＮＡの濃度で８０％減少を示した。
【００６６】
実施例２
生体外でのｐ４０タンパク質産生に対するベンジダミンの効果
【００６７】
抗ＣＤ３で刺激したヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）によるタンパク質ｐ４０の産生を抑制する化合物の能力を評価した。
【００６８】
細胞を２×１０５細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を六点１／２の対数投与曲線（０．３〜１００μＭの範囲）で試験し、１時間培養した。その後、細胞を抗ＣＤ３（４μｇ／ｍｌ）で４８時間刺激した。
【００６９】
産生されたｐ４０の量を、緩衝液で適当に希釈された上清についてＬｕｍｉｎｅｘ１００システムの使用により測定した。
【００７０】
得られた結果を下記表２に示す。
【００７１】
【表２】
【００７２】
表２に得られた結果により示されるように、化合物はヒトＰＢＭＣにおけるｐ４０の抗ＣＤ３誘導産生を著しく抑制する能力があり、２３〜９９％の範囲の抑制を示し、１０．１μＭのＩＣ５０をもたらした。
【００７３】
実施例３
生体外でのＴＮＦに対するベンジダミンの効果
【００７４】
抗ＣＤ３で刺激したヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）によるタンパク質ＴＮＦの発現を抑制する化合物の能力を評価した。
【００７５】
細胞を２×１０５細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を六点１／２の対数投与曲線（０．３〜１００μＭの範囲）で試験し、１時間培養した。その後、細胞を抗ＣＤ３.（４μｇ／ｍｌ）で４８時間刺激した。
【００７６】
産生されたＴＮＦの量を、緩衝液で適当に希釈された上清についてＬｕｍｉｎｅｘ１００システムの使用により測定した。
【００７７】
得られた結果を下記表３に示す。
【００７８】
【表３】
【００７９】
表３に得られた結果により示されるように、化合物はヒトＰＢＭＣにおけるＴＮＦの抗ＣＤ３誘導産生を８〜７０％の範囲で抑制する能力があり、ｐ４０で得られるものより約４倍も高い４３．１μＭのＩＣ５０をもたらした。
【００８０】
実施例４
斑性乾癬に対するベンジダミンの効果
【００８１】
乾癬用の信頼できる実験動物モデルがなく（Ｌｏｗｅｓ ＭＡ ｅｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ、２００７、４４５：８６６−７３）、またヒトにおけるベンジダミンを用いた長期的な経験と、その局所投与後の低い全身暴露と、優れた安全性プロファイルとを考慮すると、ベンジダミンを５％のクリーム（下記表８の製剤に対応）として乾癬の影響を受ける患者の小群において試験した。
【００８２】
クリームを、軽度から中程度の斑性乾癬（ＰＡＳＩ＜１０）に影響を受けた７人の患者において試験した。ＰＡＳＩ（乾癬の面積重症度指数）は、皮膚病変の平均重症度の有効な尺度であり、“赤み”、“厚さ”および“スケーリング”として評価され、存在する領域の百分率および病変の部位に対し重み付けがされている。クリームを連続３０日間１日１回患部に塗布し、皮膚に吸収されるまで軽くマッサージした。
【００８３】
ベンジダミン５％含有クリームによる治療は、ＰＡＳＩにおける５０％以上の相当な減少を示し、７人の治療した患者のうち４人で効果的な結果となった。
【００８４】
実施例５
次の表４〜９は本発明に係る医薬製剤の特定例を示す。
【００８５】
【表４】
【００８６】
【表５】
【００８７】
【表６】
【００８８】
【表７】
【００８９】
【表８】
【００９０】
【表９】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｐ４０依存性疾患の治療におけるベンジダミンの使用に関する。
特に、本発明は、サイトカインサブユニットｐ４０の発現又は過剰発現に起因した炎症性疾患の治療におけるベンジダミンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ベンジダミン（メルクインデックス、第９編、１９７６年、第１４７頁、Ｎｏ．１１３６）は鎮痛性、抗炎症性および筋弛緩作用を有する一群の物質に関する特許文献１に初めて記述された。
【０００３】
ベンジダミンは、実際に塩酸塩としてヒトの治療に広く使用される。これは主に全身性経路により消炎剤や鎮痛剤として使用される。しかも、これは例えば筋肉痛、腱炎、外陰膣炎、歯肉炎、口内炎、口腔粘膜炎などのような局所炎症を含む疾患に主に局部的に使用される。さらに、ベンジダミンサリチル酸塩はリウマチ性疾患に使用される。
【０００４】
特許文献２は、膣トリコモナスおよびガードネレラ・バジナリス感染症の治療におけるベンジダミンの使用を開示する。膣トリコモナスは、男性と女性の両方の尿生殖路の感染症を引き起こす原虫である。ガードネレラ・バジナリスは、直径０．２５〜０．４４ｍｍのコロニーを形成するグラム不定性の多形性小桿菌である。
【０００５】
特許文献３は、抗炎症量のベンジダミンと抗菌有効量の抗菌剤とを含む医薬組成物を開示する。ベンジダミンと抗菌剤との組合せは、ベンジダミンの活性を損なうことなく抗菌剤の活性を高めて、特に歯茎、口およびのどの細菌感染症に対する有効な防腐、抗炎および鎮痛治療をもたらす。
【０００６】
特許文献４は、口腔の粘膜との重要な接触を可能にし、中枢作用性鎮咳薬およびベンジダミンを含む経口鎮咳医薬組成物を開示する。ベンジダミンは、中枢作用性鎮咳薬単独の場合と比較して、特定の病理における咳の末梢刺激に対する中枢作用性鎮咳薬の作用の発現時間を短縮し得ることが示された。
【０００７】
特許文献５は、ＴＮＦ、すなわちαＴＮＦとしても既知の非グリコシル化ポリペプチド、またはカケクチンに起因した病理状態の治療用薬剤を調製するためのベンジダミンの使用を開示する。ＴＮＦは、サイトカイン群に属し、それ自体外部攻撃から生体を防御する免疫応答を刺激する一因となる。他方、ＴＮＦそれ自体の過剰な作用は、ＴＮＦの相当な毒性を付与する実際の病原因子となり得る。ベンジダミン治療の利益と言われるＴＮＦに起因した病理状態の代表的な例としては、敗血症性ショック、悪液質、結核若しくはエイズのような慢性ウイルス又は細菌の感染症、或いは多発性硬化症又は潰瘍性大腸炎のような変性疾患が挙げられる。
【０００８】
しかし、ベンジダミンの作用は、ＴＮＦに関する限り、抗炎症効果を達成するために投与したものよりも多い投与量で実行される。その後、２０ｍｇ／ｋｇの投与量、またマウスで４０ｍｇ／ｋｇの高い投与量がＴＮＦ産生に対し大きな抑制効果を有するのに必要とされることが報告されている（非特許文献１及び２）。
【０００９】
近年、エタネルセプト、インフリキシマブ及びアダリムマブのようなＴＮＦに干渉し得る化合物の使用が開発され、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬及び強直性脊椎炎の治療のための臨床試験がなされている。
【００１０】
しかし、別の機構によるものであるが、ＴＮＦに干渉し得る化合物の使用は、安全性の問題によりかなり制限される。実際、免疫活性におけるＴＮＦの重要な役割により、抗ＴＮＦ剤の使用が感染症、悪性腫瘍又は自己免疫疾患のような一般的な免疫抑制後遺症の出現をしばしば伴うことが臨床試験と臨床診療とで実証されている。
【００１１】
さらに最近、いくつかの科学的研究は、サイトカインサブユニットｐ４０が乾癬の病理に基本的な役割を果たし得ることを示した（非特許文献３）。
【００１２】
サイトカインサブユニットｐ４０は、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）及びインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）の両方の成分である。ｐ４０サイトカインサブユニットは、ジスルフィド結合を介してサイトカインサブユニットｐ３５に結合してＩＬ−１２を形成し、またサイトカインサブユニットｐ１９に結合してＩＬ−２３を形成する。ＩＬ−１２及びＩＬ−２３は炎症誘発性ヘテロ二量体サイトカインの小さい一群の構成体である。ＩＬ−１２用受容体は、ＩＬ−１２Ｒβ１及びＩＬ−２３Ｒβ２のサブユニットにより構成される一方、ＩＬ−２３用受容体はＩＬ−１２Ｒβ１及びＩＬ−２３Ｒのサブユニットにより構成される。
【００１３】
ＩＬ−１２及びＩＬ−２３は、主として活性化樹枝状細胞及び食細胞によって発現する。二つのサイトカイン用受容体は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞並びにＮＫ Ｔ細胞に発現するが、ＩＬ−２３用受容体の低レベルの複合体は単球、マクロファージ及び樹枝状細胞にも存在する。
【００１４】
これら類似性にもかかわらず、ＩＬ−１２及びＩＬ−２３が異なる免疫学的回路を制御することを示唆する多くの証拠がある。実際、ＩＬ−１２はγ―インターフェロン（ＩＦＮ−γ）を産生し得るＴｈ１細胞の発達を制御し、細胞毒性、抗菌性及び坑腫瘍性の応答を増加する一方、ＩＬ−２３はＩＬ−１７を産生し得るＣＤ４＋細胞の発生に至る回路を調節する。ＩＬ−２３依存プロセスの誘導は、様々な種類の炎症性細胞、例えばＴＨ−１７の可動化をもたらし、免疫学的応答により仲介される多数の炎症性病理の発症に不可欠であることが実証されている。
【００１５】
ｐ４０の発現に伴う病理の代表的な例としては、関節器官の慢性炎症性疾患（例えば関節リウマチ）、皮膚組織の慢性炎症性疾患（例えば乾癬）、胃腸器官の慢性炎症性疾患（例えばクローン病）がある。しかし、ＩＬ−２３はまた、腫瘍の発生や成長を促進するという役割を果たす。実際、ＩＬ−２３は、腫瘍微小環境における一連の回路を調整し、血管新生と炎症媒体物の産生とを刺激する。
【００１６】
乾癬は世界人口の３％に影響を与える慢性炎症性皮膚疾患である（非特許文献４及び５）。１型の異常な免疫応答が乾癬の病理と相関し、この応答を誘導するＩＬ−１２及びＩＬ−２３のようなサイトカインが適当な治療対象物を表す場合がある。サブユニットｐ４０を共有するＩＬ−１２及びＩＬ−２３の発現が乾癬斑において著しく増加され、また前臨床研究によりこれらサイトカインの役割が乾癬の病理において実証された。最近、乾癬を患っている患者に対する抗ＩＬ−１２及び抗ＩＬ−２３のモノクローナル抗体による治療が、疾患の進行や重篤さの兆候の改善に有効であることが証明され、その後乾癬の病理におけるＩＬ−１２及びＩＬ−２３の役割を強固にした。
【００１７】
クローン病は、消化器の慢性炎症性病理であり、その口から肛門までのあらゆる領域に影響を及ぼす可能性がある。クローン病は通常回腸の末端管や大腸の特定の領域を苦しめる。これは口内炎やリウマチ性関節炎のような全身性自己免疫疾患をしばしば伴う。ヨーロッパでは５０００００人、米国では６０００００人を超える人がクローン病により影響を受けている。
【００１８】
クローン病は、サイトカインのＴｈ１細胞媒介過剰活性に伴う病理である。ＩＬ−１２は、Ｔｈ１細胞により仲介された炎症応答の初期における主要なサイトカインである。クローン病は、腸組織での抗原提示細胞によるＩＬ−１２の増大した産生と、リンパ球と腸管マクロファージによるγ―インターフェン（ＩＦＮ−γ）およびＴＮＦ−αとの増大した産生を特徴とする。これらサイトカインは、病理の特徴的な兆候である腸壁の炎症プロセスおよび肥厚を誘導、支持する。ＩＬ−１２の抑制が腸の炎症のモデル及び／又はクローン病を患っている患者における炎症応答を制御するのに有効であることが前臨床的および臨床的証拠により実証された。
【００１９】
癌と炎症との関係は現在確立された事実である。多くの腫瘍の形態が炎症部位に由来し、炎症媒体物が腫瘍にしばしば産生される。
【００２０】
ＩＬ−２３は、癌に関連するサイトカインとして同定され、特に隣接する正常組織と比較した場合、ＩＬ−２３の発現はヒト悪性腫瘍の試料において著しく高い。さらに、隣接する正常組織におけるＩＬ−２３の有意な発現の欠如は、腫瘍発生の役割を強固にする腫瘍中のＩＬ−２３の過剰調節を示唆する。
【００２１】
出願人は、クローン病、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎および乾癬などの慢性炎症性疾患のより安全かつ安価な治療用の医薬を開発し、これまで報告された治療に関連したいくつかの副作用及び高いコストを回避する必要性が依然としてあることに気付いた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２２】
【特許文献１】米国特許第３３１８９０５号明細書
【特許文献２】欧州特許第１９５７４９号明細書
【特許文献３】欧州特許第８１２１９３号明細書
【特許文献４】米国特許第５９３２５８９号明細書
【特許文献５】米国特許第６３００３５８号明細書
【非特許文献】
【００２３】
【非特許文献１】Ｍ．Ｓｉｒｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｙ ｂｅｎｚｉｄａｍｉｎｅ”，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，１９９６年９月第８巻，第９号，第７１０−７１６頁
【非特許文献２】Ａ．Ｇｕｇｌｉｅｌｍｏｔｔｉ ｅｔ ａｌ．“Ｂｅｎｚｙｄａｍｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｅｎｄｏｔｏｘｅｍｉａ”，Ｊｏｕｒｎａｌ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７年９月第４６巻，第９号，第３３２−３３５頁
【非特許文献３】Ｍ．Ｃａｒｇｉｌｌ，“Ａ ｌａｒｇｅ−ｓｃａｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ ｃｏｎｆｉｒｍｓ ＩＬ１２Ｂ ａｎｄ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＩＬ２３Ｒ ａｓ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ−ｒｉｓｋ ｇｅｎｅｓ”，Ａｍｅｒｉｃａｎ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００７年２月第８０巻，第２号，第２７３−２９０頁
【非特許文献４】Ｋｏｏ Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｃｌｉｎ．１９９６；１４：４８５−９６。
【非特許文献５】Ｓｃｈｏｎ ＭＰ．ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００５；３５２：１８９９−９１２。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２４】
驚くべきことに、出願人はベンジダミンがサイトカインサブユニットｐ４０の発現と過剰発現を抑制することができることを見出した。また、出願人は驚くべきことに、ベンジダミンがＴＮＦに対する活性について以前報告されたものに関してより低濃度でサイトカインサブユニットｐ４０に対して活性であることを見出した。
【００２５】
驚くべきことに、出願人はサイトカインサブユニットｐ４０の発現または過剰発現に起因した、例えばクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬のような炎症性疾患の治療にベンジダミンを使用し得ることを見出した。
【００２６】
従って、本発明はサイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００２７】
好ましくは、本発明は、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群から選択した炎症性疾患の治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００２８】
別の実施形態において、本発明は、治療有効量のベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の投与を備える治療を必要とする患者における、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療方法に関する。
【００２９】
有利なことに、出願人は、クローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬の治療におけるベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、現在既知のＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも良好な結果を付与することを見出した。
【００３０】
さらに、出願人はまた、本発明に係るベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、ＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも副作用が低いことを見出した。
【００３１】
加えて、出願人はまた、本発明に係るベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用が、ＴＮＦに干渉し得る化合物での治療的処置についてよりも安価な治療的処置を提供するのを可能にすることを見出した。
【００３２】
最後に、出願人は、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩をＴＮＦ産生の抑制に予め既知の投与量よりも低い投与量で使用し得ることを見出した。
【００３３】
従って、本発明の好ましい実施形態は、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の全身または局所投与による治療用薬剤の製造における、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用に関する。
【００３４】
有利なことに、全身投与用の本発明の薬剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む。
【００３５】
有利なことに、局所投与用の本発明の薬剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む。
【００３６】
より好ましい実施形態において、本発明は、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を遊離塩基として表されるベンジダミン０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量で投与することを備える治療を必要とする患者における、サイトカインサブユニットｐ４０の発現に基づく炎症性疾患の治療方法に関する。
【００３７】
本発明の方法は、全身または局所投与を備えるのが好ましい。
【００３８】
有利なことに、本発明の方法は、遊離塩基として表されるベンジダミンの０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量でベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を全身投与することを備える。
【００３９】
有利なことに、本発明の方法は、遊離塩基として表されるベンジダミンの１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの１日投与量でベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を局所投与することを備える。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明の目的のために、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩をそれ自体として投与することができる。
【００４１】
有利なことに、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩を、全身または局所投与用の医薬製剤の形状で投与することができる。
【００４２】
ベンジダミンは、生理学的に許容し得る有機又は無機酸で生理学的に許容し得る酸付加塩を形成することができる。生理学的に許容し得る無機酸の代表的な例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸及び硝酸がある。適当な生理学的に許容し得る有機酸の代表的な例としては、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラトルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸及び酒石酸がある。
【００４３】
全身経路により使用する場合、医薬製剤は錠剤、糖衣錠、カプセル、粉末および徐放製剤のような固体、または筋肉若しくは静脈内注射用無菌溶液、懸濁剤および乳剤のような液体である。
【００４４】
局所用医薬製剤は、洗浄溶液、クリーム及び発泡体のような膣投与形態、口内洗浄液およびスプレーのような口腔治療用の投与形態、並びに軟膏、ペースト、クリーム、発泡体、ゲル、溶液および粉末のような鼻及び耳用の投与形態とすることができる。
【００４５】
従来の賦形剤に加えて、本発明の製剤は、防腐剤、安定剤、乳化剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液、着色剤および香料などの他の適当な医薬添加剤を含んでもよい。
【００４６】
特定の治療にとって必要である場合、本発明の製剤はまた、同時投与が有益な他の混合可能な活性成分を含むことができる。
【００４７】
有利なことに、本発明の全身投与用医薬製剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む。
【００４８】
有利なことに、本発明の局所投与用医薬製剤は、遊離塩基として表されるベンジダミンを薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む。
【００４９】
治療の実用的用途に対し、ベンジダミンまたはその生理学的に許容し得る酸付加塩の有効量は、必要な特定の治療法、選択された医薬製剤および投与経路並びに特定の患者の年齢、体重および応答のような既知の要因に応じてかなり幅広い範囲にわたって変えることができる。しかし、最適な有効量及び投与間隔は、関与する医師により単純な日常的手順にしたがって容易に達成することができる。
【００５０】
一般に、ベンジダミン遊離塩基の１日投与量は、好ましくは５０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ未満、更に好ましくは５ｍｇ／ｋｇ未満である。
【００５１】
一方、ベンジダミン遊離塩基の１日投与量は、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇより高く、より好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇより高く、更に好ましくは１ｍｇ／ｋｇより高い。
【００５２】
当然、その酸付加塩の場合、上述したベンジダミン遊離塩基の量に相当する量が投与される。
【００５３】
有利なことに、全身投与の場合、遊離塩基として表されるベンジダミンの１日投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇであるのが好ましい。
【００５４】
有利なことに、局所投与の場合、遊離塩基として表されるベンジダミンの１日投与量は、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇであるのが好ましい。
【００５５】
本発明の医薬製剤は、必要に応じて混合、造粒及び圧縮を含む薬剤師による従来の手法に従うか、又は望ましい結果を与えるのに見合った成分を様々に混合し及び溶解することにより作製することができる。
【００５６】
次の例は、本発明を実施するための少なくとも一つの方法を説明するが、添付された請求の範囲によって定義される保護が求められている事項をいかなる方法においても制限することはない。
【実施例】
【００５７】
実施例１
生体外でのｐ４０ ｍＲＮＡ発現に対するベンジダミンの効果
【００５８】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）で刺激されたＭｏｎｏＭａｃ６細胞によるｐ４０の発現を抑制するベンジダミンの能力を評価した。
【００５９】
細胞を５００００細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を７５μＭの濃度で試験し、１時間培養した。その後、細胞をＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）で４時間刺激した。
【００６０】
全ＲＮＡを細胞ペレットからＲＮｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ社製）を使用して抽出し、ＴａｑＭａｎ逆転写試薬合成キット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）で逆転写し、そして得られたｃＤＮＡをリアルタイムＰＣＲ反応に使用した。
【００６１】
次の温度プロファイル、５０℃を２分間、９５℃を１０分間、そして９５℃で１５秒間と６０℃で１分間の４５サイクルを適用することによりＡＢＩプリズム７０００配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いて、増幅を９６ウェルプレートで得た。増幅のために、ヒトｐ４０に特異のプライマー及びプローブのセットを用いた（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製, ＲｅｆＳｅｑ ＮＭ＿００２１８７．２）。
【００６２】
β−アクチン用のプライマー及びプローブのセットを別のウェルに規格化の目的用試料の内部対照として用いた。一度反応が生起すると、各試料の閾値サイクル（Ｃｔ）を計算し、その後ΔΔＣｔ法により相対定量化を行うことにより、ＡＢＩプリズム７０００ＳＤＳソフトウェアを用いて蛍光データを分析した。
【００６３】
得られた結果を抑制の百分率で表し、下記の表１に対照する。
【００６４】
【表１】
【００６５】
表１に得られた結果により示されるように、ベンジダミンはヒト単球ラインにおけるｐ４０のＬＰＳ−誘導発現を著しく抑制する能力があり、特定のｍＲＮＡの濃度で８０％減少を示した。
【００６６】
実施例２
生体外でのｐ４０タンパク質産生に対するベンジダミンの効果
【００６７】
抗ＣＤ３で刺激したヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）によるタンパク質ｐ４０の産生を抑制する化合物の能力を評価した。
【００６８】
細胞を２×１０５細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を六点１／２の対数投与曲線（０．３〜１００μＭの範囲）で試験し、１時間培養した。その後、細胞を抗ＣＤ３（４μｇ／ｍｌ）で４８時間刺激した。
【００６９】
産生されたｐ４０の量を、緩衝液で適当に希釈された上清についてＬｕｍｉｎｅｘ１００システムの使用により測定した。
【００７０】
得られた結果を下記表２に示す。
【００７１】
【表２】
【００７２】
表２に得られた結果により示されるように、化合物はヒトＰＢＭＣにおけるｐ４０の抗ＣＤ３誘導産生を著しく抑制する能力があり、２３〜９９％の範囲の抑制を示し、１０．１μＭのＩＣ５０をもたらした。
【００７３】
実施例３
生体外でのＴＮＦに対するベンジダミンの効果
【００７４】
抗ＣＤ３で刺激したヒトＰＢＭＣ（末梢血単核細胞）によるタンパク質ＴＮＦの発現を抑制する化合物の能力を評価した。
【００７５】
細胞を２×１０５細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに置いた。化合物を六点１／２の対数投与曲線（０．３〜１００μＭの範囲）で試験し、１時間培養した。その後、細胞を抗ＣＤ３.（４μｇ／ｍｌ）で４８時間刺激した。
【００７６】
産生されたＴＮＦの量を、緩衝液で適当に希釈された上清についてＬｕｍｉｎｅｘ１００システムの使用により測定した。
【００７７】
得られた結果を下記表３に示す。
【００７８】
【表３】
【００７９】
表３に得られた結果により示されるように、化合物はヒトＰＢＭＣにおけるＴＮＦの抗ＣＤ３誘導産生を８〜７０％の範囲で抑制する能力があり、ｐ４０で得られるものより約４倍も高い４３．１μＭのＩＣ５０をもたらした。
【００８０】
実施例４
斑性乾癬に対するベンジダミンの効果
【００８１】
乾癬用の信頼できる実験動物モデルがなく（Ｌｏｗｅｓ ＭＡ ｅｔ ａｌ、Ｎａｔｕｒｅ、２００７、４４５：８６６−７３）、またヒトにおけるベンジダミンを用いた長期的な経験と、その局所投与後の低い全身暴露と、優れた安全性プロファイルとを考慮すると、ベンジダミンを５％のクリーム（下記表８の製剤に対応）として乾癬の影響を受ける患者の小群において試験した。
【００８２】
クリームを、軽度から中程度の斑性乾癬（ＰＡＳＩ＜１０）に影響を受けた７人の患者において試験した。ＰＡＳＩ（乾癬の面積重症度指数）は、皮膚病変の平均重症度の有効な尺度であり、“赤み”、“厚さ”および“スケーリング”として評価され、存在する領域の百分率および病変の部位に対し重み付けがされている。クリームを連続３０日間１日１回患部に塗布し、皮膚に吸収されるまで軽くマッサージした。
【００８３】
ベンジダミン５％含有クリームによる治療は、ＰＡＳＩにおける５０％以上の相当な減少を示し、７人の治療した患者のうち４人で効果的な結果となった。
【００８４】
実施例５
次の表４〜９は本発明に係る医薬製剤の特定例を示す。
【００８５】
【表４】
【００８６】
【表５】
【００８７】
【表６】
【００８８】
【表７】
【００８９】
【表８】
【００９０】
【表９】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の治療用薬剤の製造におけるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用。
【請求項２】
前記炎症性疾患がクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群より選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記薬剤が全身又は局所投与用に処方される請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記全身投与用薬剤が、遊離塩基として表される１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量のベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を含む請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記局所投与用薬剤が、遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む請求項３に記載の使用。
【請求項６】
治療を必要とする患者にベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の治療有効量を投与することを備えるサイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の治療方法。
【請求項７】
前記炎症性疾患がクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群より選択される請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与が、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記投与が、全身性又は局所性経路によってもたらされる請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記全身投与が、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記局所投与が、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
サイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の全身又は局所投与による治療用で、ベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を含む医薬組成物。
【請求項１３】
遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を全身投与用として１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を局所投与用として組成物の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ベンジダミンの生理学的に許容し得る酸付加塩が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラトルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸及び酒石酸からなる群より選択した無機酸又は有機酸で得られる請求項１２〜１４のいずれかに記載の局所投与用医薬組成物。
【請求項１】
サイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の治療用薬剤の製造におけるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の使用。
【請求項２】
前記炎症性疾患がクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群より選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記薬剤が全身又は局所投与用に処方される請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記全身投与用薬剤が、遊離塩基として表される１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量のベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を含む請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記局所投与用薬剤が、遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を薬剤の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む請求項３に記載の使用。
【請求項６】
治療を必要とする患者にベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の治療有効量を投与することを備えるサイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の治療方法。
【請求項７】
前記炎症性疾患がクローン病、関節リウマチ、乾癬性関節炎および乾癬からなる群より選択される請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記投与が、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記投与が、全身性又は局所性経路によってもたらされる請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記全身投与が、０．１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記局所投与が、１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩の１日投与量でもたらされる請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
サイトカインサブユニットｐ４０の発現に起因した炎症性疾患の全身又は局所投与による治療用で、ベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を含む医薬組成物。
【請求項１３】
遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を全身投与用として１ｍｇ〜１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜５０ｍｇの量で含む請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
遊離塩基として表されるベンジダミン又はその生理学的に許容し得る酸付加塩を局所投与用として組成物の総重量に対し１〜２０重量％、より好ましくは１〜１０重量％の量で含む請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記ベンジダミンの生理学的に許容し得る酸付加塩が、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、酢酸、アスコルビン酸、安息香酸、クエン酸、フマル酸、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、パラトルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、コハク酸、タンニン酸及び酒石酸からなる群より選択した無機酸又は有機酸で得られる請求項１２〜１４のいずれかに記載の局所投与用医薬組成物。
【公表番号】特表２０１２−５３２１７３（Ｐ２０１２−５３２１７３Ａ）
【公表日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１８８７０（Ｐ２０１２−５１８８７０）
【出願日】平成２２年６月２３日（２０１０．６．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５８８８１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００３７３７
【国際公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【出願人】（５９２１６０９７３）アジェンデ・キミケ・リウニテ・アンジェリニ・フランチェスコ・ア・チ・エレ・ア・エフェ・ソシエタ・ペル・アチオニ (36)
【氏名又は名称原語表記】ＡＺＩＥＮＤＥ ＣＨＩＭＩＣＨＥ ＲＩＵＮＩＴＥ ＡＮＧＥＬＩＮＩ ＦＲＡＮＣＥＳＣＯ Ａ．Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｆ．ＳＯＣＩＥＴＡ ＰＥＲ ＡＺＩＯＮＩ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年６月２３日（２０１０．６．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０５８８８１
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／００３７３７
【国際公開日】平成２３年１月１３日（２０１１．１．１３）
【出願人】（５９２１６０９７３）アジェンデ・キミケ・リウニテ・アンジェリニ・フランチェスコ・ア・チ・エレ・ア・エフェ・ソシエタ・ペル・アチオニ (36)
【氏名又は名称原語表記】ＡＺＩＥＮＤＥ ＣＨＩＭＩＣＨＥ ＲＩＵＮＩＴＥ ＡＮＧＥＬＩＮＩ ＦＲＡＮＣＥＳＣＯ Ａ．Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｆ．ＳＯＣＩＥＴＡ ＰＥＲ ＡＺＩＯＮＩ
【Ｆターム（参考）】
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