【課題】多能性のヒト胚盤胞由来幹細胞株を樹立し、その細胞株を未分化の状態で分裂増殖させる新規な方法の提供。
【解決手段】ヒト胚盤胞由来幹細胞を不活性化支持細胞層上で培養、増殖させ、形成されたコロニーをより小さな集団又は個々の細胞へ分離することにより胚盤胞由来幹細胞体を創出し、続いて該細胞集団を非付着性のコンテナーに移した後、好適な培地中でプレーティングし、膵臓の内分泌前駆細胞を塩基性線維芽細胞増殖因子を含む培地中で増殖させるステップを含む、インスリン産生分化幹細胞の調製物を生成する方法。 （もっと読む）

本発明は、ヒト胚盤胞由来幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来する新規な肝細胞様細胞前駆体および／または新規な肝細胞様細胞に、このような細胞の調製のための方法に、ならびにこのような細胞の、例えば、薬物の発見および開発、毒性試験、細胞治療、および医学的処置における潜在的な使用に関する。特に、肝臓で発現される重要なマーカー遺伝子および重要な代謝酵素、ならびに薬物輸送体を備える胚体内胚葉由来の肝細胞様細胞が示される。 （もっと読む）

本発明は、ヒトにおける毒性の検出のためのヒト胚盤胞由来の幹細胞に基づくインビトロ毒性アッセイに関し、これはある物質についてのインビトロヒト毒性の新規な検出を可能にし、および／または非ヒトアッセイに比較してより効果的にヒト毒性を検出する。本発明はさらに、種間の差異を示すことが知られており、およびマウスにおける毒物学的実験により毒性効果が検出可能でなかった物質についての毒性の検出を、可能にし得る。 （もっと読む）

ヒト胚盤胞由来幹細胞に由来する多能性心臓前駆（ＭＣＰ）細胞の新規の集団、その調製方法、およびインビトロ試験に対するその細胞の使用が開示される。ｈＢＳ細胞に由来する基底細胞、および基底細胞からＭＣＰ細胞を調製する方法も開示される。ＭＣＰ細胞は以下の特徴を有する：
ｉ）細胞の少なくとも１％は未分化細胞に対する１つまたはそれ以上のマーカの抗原発現を示さず、そのマーカはＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＴＲＡ−１−６０、ＴＲＡ−１−８１、およびＯｃｔ−４からなる群より選択される、
ｉｉ）細胞の少なくとも１％は、ネスチンまたはＧＦＡＰを含む神経系マーカの１つまたはそれ以上のタンパク質発現を示さない、
ｉｉｉ）細胞の少なくとも１％は、ブラキウリ、ビメンチンまたはデスミンを含む中胚葉マーカの１つまたはそれ以上のタンパク質および／または遺伝子発現を示す、
ｉｖ）細胞の少なくとも１％は、Ｆｌｋ−１（ＫＤＲ）のタンパク質および／または遺伝子発現を示す。
さらに、ＭＣＰ細胞は特徴的な形態を有する。ＭＣＰ細胞は小さく丸い明位相差像を示す細胞のクラスタとして生育し、個々の細胞は直径５〜２０μｍであり、各クラスタは２〜５００個の細胞からなる。図２のパネルａ、ｂおよびｃに例示されるとおり、ＭＣＰ細胞は円形または細長い形のクラスタを形成し、そのクラスタは緩く付着した細胞の塊として現れる。さらに、ＭＣＰ細胞は核対細胞質の比率が比較的高く、たとえば細胞の合計体積の１：２〜１：６４であり、および／または図１８の概略スケッチに例示されるような糸に付いた風船の形で現れる。さらに、ＭＣＰ細胞は収縮しない。 （もっと読む）

本発明は、ｈＢＳ細胞に由来する新しい肝細胞様細胞集団、及び、薬剤スクリーニング及び毒性テストのような医療における前記肝細胞様細胞の潜在的応用に関連する。さらに、本発明は、肝細胞様細胞と同じ応用として使われることができて、さらに、例えば初期肝形成または肝再生障害などの試験管内の肝形成研究に使用されることも可能な適切な特性を有する肝芽細胞様細胞に関連する。本発明に記載の肝細胞様細胞及び肝芽細胞様細胞は、遺伝子またはタンパク質発現レベルにおいて、薬物輸送体特性および／または薬物代謝特性のどちらかを表す。
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本願発明は酵素解離による単細胞懸濁液へヒト胚盤胞（ｈＢＳ細胞）からの幹細胞を培養するための培養系に関する。ヒト胚盤胞からの幹（ｈＢＳ）細胞を培養するための培養系は、ｉ） 密度が５０，０００細胞／ｃｍ^２以上のヒト支持細胞、ｉｉ） 単細胞懸濁液へｈＢＳ細胞コロニーを解離するための一つ以上の解離薬品、および、ｉｉｉ） 有効な培養基、を含み、ｈＢＳ細胞の重要特徴を保全しながら長期間の各連続的な継代において、単一細胞懸濁液へｈＢＳ細胞コロニーを解離することによってｈＢＳ細胞を培養することを可能にする。 （もっと読む）

安定な異種非含有ｈＢＳ細胞株を得るための方法、当該方法に従って得られる異種非含有ｈＢＳ細胞株、およびその使用。方法は以下の工程：ｉ）異種非含有手順により、胚盤胞から透明帯を除去し、栄養外胚葉で囲まれた内細胞塊を得る工程、ｉｉ）異種非含有手順により、栄養外胚葉を少なくとも部分的に除去して内細胞塊の細胞を得る工程、ｉｉｉ）内細胞塊の細胞を異種非含有培地中のヒト支持細胞の層上に置く工程、ｉｖ）異種非含有培地中で約５日間から約５０日間、内細胞塊の細胞と、ヒト支持細胞とを共存培養する工程、ｖ）もしあれば、栄養外胚葉過増殖から、内細胞塊の細胞またはそれらの由来する細胞を、異種非含有手順により解放する工程、ｖｉ）内細胞塊の細胞またはその由来する細胞を、異種非含有培地の新鮮な層に選択的に移して異種非含有ｈＢＳ細胞を得る工程、ｖｉｉ）異種非含有培地中で、ヒト支持細胞と共存培養することにより、異種非含有ｈＢＳ細胞を増殖して異種非含有ｈＢＳ細胞株を得る工程、を包含する。異種非含有ｈＢＳ細胞株は、医薬における、およびインビトロ試験における使用に適切である。 （もっと読む）

ヒト胚盤胞由来幹細胞（ｈＢＳ細胞）をフィーダーなしの培養システムへ移送し、細胞をそのようなフィーダーなしの培養システム中にて増殖させる方法であって、該方法は以下のステップ：ａ．胚盤胞由来幹細胞をフィーダーからフィーダーなし培養へ機械的処理によって移送し、ｂ．状況に応じて胚盤胞由来幹細胞をフィーダー細胞なしの成長条件の下で好適な成長培地中及び／又は好適な支持基質上で培養し、そしてｃ．状況に応じて、胚盤胞由来幹細胞株を３−１０日ごとに酵素的及び／又は機械的処理により継代することからなる。本発明はまたフィーダーなしの条件の下で培養したｈＢＳ細胞の薬剤（例えば、心筋再生）、スクリーニング及び毒性試験における応用に関する。
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本発明は、生体細胞、特に胚盤胞由来幹細胞（ＢＳ細胞）のガラス化方法の改良に関する。本方法は解凍された後でも生存維持可能であるように細胞に対して非常に低刺激性である。本方法は、ｉ）細胞を第１溶液（溶液Ａ）に移し、ｉｉ）任意的に第１溶液の細胞を培養し、ｉｉｉ）工程ｉ）あるいはｉｉ）で得られた細胞を第２溶液（溶液Ｂ）に移し、ｉｖ）任意的に第２溶液の細胞を培養し、ｖ）工程ｉｉｉ）あるいはｉｖ）で得られた細胞を、少なくとも２０μｌの容量を収容可能な大きさの一つ以上の閉塞ストローに移し、ｖｉ）一つ以上の閉塞ストローをシールし、さらにｖｉｉ）一つ以上の閉塞ストローをガラス化する工程から構成される。本発明の非常に重要な特徴として、閉塞ストローを使用することと、大容量で効率的にガラス化及び続いて解凍が可能なことである。 （もっと読む）

本発明は内胚葉の前駆細胞を得る方法およびさらにこれを肝細胞様細胞へ分化させる方法に関する。最終分化の開始前の細胞構成についての知識が、結果として得られる肝細胞様細胞が要する目的によって2つの異なるプロトコールの1つおよび2つの型の中間前駆体の1つを選択するために使われる。本発明のプロトコールAは胚外類似の内胚葉前駆細胞の肝細胞様細胞への分化に関係し、得られる肝細胞様細胞の収率および純度が重要である場合に選ばれる。本発明のプロトコールBは内中胚葉類似の前駆細胞の肝細胞様細胞への分化に関係し、得られる肝細胞様細胞の質が重要である場合に選ばれる。 （もっと読む）