ヒト胚盤胞幹細胞に、胚体内胚葉（ＤＥ‐ｈｅｐ）を介して由来する新規な肝細胞の集団
本発明は、ヒト胚盤胞由来幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来する新規な肝細胞様細胞前駆体および／または新規な肝細胞様細胞に、このような細胞の調製のための方法に、ならびにこのような細胞の、例えば、薬物の発見および開発、毒性試験、細胞治療、および医学的処置における潜在的な使用に関する。特に、肝臓で発現される重要なマーカー遺伝子および重要な代謝酵素、ならびに薬物輸送体を備える胚体内胚葉由来の肝細胞様細胞が示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト胚盤胞由来の幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来するＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞の調製のための方法であって、
ｉ）第Ｉ段階であって、ここでｈＢＳ細胞は、胚体内胚葉に発達するように誘導され、第一段階は、アクチビンを含む第１の第Ｉ段階の培養培地中でのｈＢＳ細胞の１〜７日間、好ましくは２〜６日間の培養を包含し、ここで培地は、培養の１〜２日後に、アクチビン、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて血清を含む第２の第Ｉ段階の培養培地により置き換えられる、第Ｉ段階、
ｉｉ）第ＩＩ段階であって、ここで第Ｉ段階から得られる細胞は増殖され、そして第ＩＩ段階は、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて骨形態形成タンパク質を含む第ＩＩ段階の培養培地中で、第Ｉ段階からの細胞を培養する工程、
必要に応じて、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体を採集する工程を包含する、第ＩＩ段階
を包含する、方法。
【請求項２】
第１および／または第２の、第Ｉ段階の培養培地が、ＲＰＭ１改変培地またはＤＭＥＭ培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１および／または第２の、第Ｉ段階の培養培地が、１つ以上の増殖因子、特に、ＦＧＦ２、Ｗｎｔ３ａ、および血清、特にＦＢＳで補充される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンおよび必要に応じてＷｎｔ３ａを含む（例えば、プロトコル１）、
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンおよび増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２および３）、
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンを含む（例えば、プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
２日目：第２の培養培地は、アクチビンおよび血清を含む（例えば、プロトコル１）、
２日目：第２の培養培地は、アクチビン、血清、および増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２、３、および４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
３〜４日目：第２の培養培地は、アクチビンおよび血清を含む（例えば、プロトコル１）、
３〜５日目：第２の培養培地は、アクチビン、血清、および増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２、３、および４）、
に従って培養される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
第２の第ＩＩ段階の培養培地が、増殖因子、特にＦＧＦ２、および必要に応じて骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ４を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
第ＩＩ段階の培養培地が、ＲＰＭ１改変培地、ＤＭＥＭ培地、ＨＣＭ培地、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ基本培地、またはＶｉｔｒｏＨＥＳ（登録商標）などを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
第ＩＩ段階の培養培地が、ＦＧＦ２、ＰＥＳＴ、および／またはＧｌｕｔａＭＡＸで補充される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
第ＩＩ段階の培地が、毎日、または２日毎に交換される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
第ＩＩ段階の培地がさらに、１つ以上の増殖因子、特にａＦＧＦ、および骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ２を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
第ＩＩ段階の培地が、例えばＦＢＳのような血清をさらに含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
第ＩＩ段階の培地がさらにＨＧＦを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
細胞が以下のスキーム：
第ＩＩ段階の１〜４日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、１つ以上のさらなる骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ２、血清、特にＦＢＳ、ＰＥＳＴ、およびＧｌｕｔａＭＡＸ、ならびに必要に応じて１つ以上のさらなる増殖因子、特にαＦＧＦを含む（例えば、プロトコル１）、
第ＩＩ段階の１〜８日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＨＧＦを含む（例えば、プロトコル２）、
第ＩＩ段階の１〜５日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ４、ＢＭＰ２を含む（例えば、プロトコル３）、
第ＩＩ段階の１〜３日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、血清、特にＦＢＳを含む（例えば、プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
細胞が以下のスキーム：
第ＩＩ段階の４〜１０日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、血清、特にＦＢＳ、およびＨＧＦを含む（例えば、プロトコル１）、
第ＩＩ段階の６〜１０日目：ＨＧＦ（例えば、プロトコル３）、
第ＩＩ段階の４〜８日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＨＧＦ、ＦＧＦ２、ＥＧＦ、および血清、例えばＦＢＳを含む（プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
第ＩＩ段階における細胞が８日間培養され、血清、例えばＦＢＳの濃度が６日目に増加され、および増殖因子、特にＥＧＦの補充が６日目に与えられ、ならびに培地が６日目〜８日目まで毎日に交換された、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
第ＩＩ段階から得られた細胞が、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａ、ＥｐＣＡＭ、Ｄｅｓｍｉｎ、ＣＤ１３３、ＩＣＡＭ１、ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９のうちの１つ以上の遺伝子発現を表す、項目１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ＨＮＦ１、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａ、ＥｐＣＡＭ、ＡＦＰ、Ｄｅｓｍｉｎ、ＣＤ１３３、ＩＣＡＭ１（ＣＤ５４）、ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９のうちの１つ以上のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項１９】
ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９、ＩＣＡＭの遺伝子発現を表す、請求項１８に記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２０】
ＥｐＣＡＭ、およびＨＮＦ１、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａのうちの１つ以上、好ましくは全てのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項１８または１９に記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれかにおいて規定されるような方法により得ることが可能な請求項１８〜２０のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２２】
請求項１８〜２１のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞を含む細胞集団。
【請求項２３】
少なくとも２５％の細胞がＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項２４】
ヒト胚盤胞由来幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来するＤＥ‐ｈｅｐ細胞の調製のための方法であって、方法は、以下
ｉｉ）第ＩＩ段階であって、ここでＤＥ細胞は増殖され、そして第ＩＩ段階は１つ以上の増殖因子および必要に応じて骨形態形成タンパク質を含む第ＩＩ段階の培養培地中で第Ｉ段階からの細胞を培養する工程を含む、第ＩＩ段階、
ｉｉｉ）第ＩＩＩ段階であって、ここで第ＩＩ段階から得られる細胞は、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体に成熟され、第ＩＩＩ段階は、１つ以上の増殖因子および分化誘導物質を含む第ＩＩＩ段階の培養培地中で、第ＩＩ段階からの細胞を培養する工程を含む、第ＩＩＩ段階、
を含む培養条件にｈＢＳ細胞を供する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、
ｉ）第Ｉ段階であって、ここでｈＢＳ細胞は胚体内胚葉に発達するように誘導され、第Ｉ段階は、アクチビンを含む第１の第Ｉ段階の培養培地中の１〜７日間、好ましくは２〜６日間のｈＢＳ細胞の培養を含み、ここで培地は、培養の１日後に、アクチビン、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて血清を含む第２の第Ｉ段階の培養培地により置き換えられる、第Ｉ段階を含み、
ここで工程ｉ）は工程ｉｉ）の前であり、および工程ｉｉ）において用いられるＤＥ細胞は、第Ｉ段階から得られる細胞である、方法。
【請求項２６】
第Ｉ段階および／または第ＩＩ段階が、請求項１〜１６いずれかにおいて規定されるように行われる、請求項２４および２５に記載の方法。
【請求項２７】
得られるＤＥ‐ｈｅｐ細胞が、同じ種類の細胞を使用するが、内因的な分化に細胞を供して調製される細胞に比較して、以下：アルブミン、ＵＧＴ２Ｂ７、ＣＹＰ３Ａ４の増加されたタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項２４〜２６に記載の方法。
【請求項２８】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも５倍である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも４倍である、請求項２７〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現が、少なくとも５倍であり、ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現が、少なくとも３倍である、請求項２７〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
第ＩＩＩ段階の培地が、例えば、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ基本培地またはＨＣＭ Ｃａｍｂｒｅｘ培地のような培養培地を含み、必要に応じて、
例えば、デキサメタゾン、オメプラゾール、ＯＳＭ、リファムピシン、デソキシフェノバルビタール、エタノール、イソニアジド、のような誘導物質が、単独で、または；
ＩＴＳ混合物；
ＢＭＰおよび／またはＴＧＦＰ、特にＢＭＰ４、および／または
ＨＧＦ
と組み合わせて補充される、請求項２４〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
第ＩＩＩ段階の培養が、１０〜６０日間またはそれ以上行われる、請求項２４〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
第ＩＩＩ段階の培養培地が、１５日目まで２〜３日毎に交換され、適切な場合、残りの培養期間は２日または３日毎に交換される、請求項２４〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
ヒトまたはマウスの支持細胞のような支持細胞の使用をさらに包含する、請求項２４〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
支持細胞の使用を何ら包含しない、請求項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
適切な場合、自己支持細胞の使用を包含する、請求項２４〜３６のいずれか記載の方法。
【請求項３８】
細胞の培養が、内側に１つ以上のタンパク質が、単独で、または組み合わせて、コートされるプラスチック製細胞培養容器の使用を包含する、請求項２４〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
１つ以上のタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞集団が、３Ｄ環境、例えば多孔性フィルターを使用して得られる、請求項３８または３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
薬物輸送、薬物代謝酵素、および／または１つ以上の転写因子についてのマーカーのうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、ＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４２】
薬物輸送についてのマーカー、特にＢＳＥＰ、ＭＲＰ２、ＯＡＴＰ‐２（＝ＯＡＴＰ‐Ｃ、ＯＡＴＰ１Ｂ１）、ＯＡＴＰ‐８（ＯＡＴＰ１Ｂ３）、ＯＡＴＰ‐Ａ（＝ＯＡＴＰ１Ａ２）、ＮＴＣＰ、ＭＤＲ１、ＭＤＲ３、ＯＣＴ‐１のうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４３】
薬物輸送についての以下のマーカー：ＭＲＰ２、ＯＡＴＰ‐２（＝ＯＡＴＰ‐Ｃ、ＯＡＴＰ１Ｂ１）、ＯＡＴＰ‐Ａ（＝ＯＡＴＰ１Ａ２）、ＮＴＣＰ、およびＯＣＴ‐１のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４２に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４４】
薬物輸送についての以下のマーカー：ＭＤＲ１および／またはＭＤＲ３のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４２または４３に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４５】
薬物代謝酵素についてのマーカー、特に、ＧＳＴ Ａ１‐１、ＧＳＴＭ１‐１、ＣＹＰ（ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ７、ＣＹＰ７Ａ１、ＵＧＴ１Ａ６、ＵＧＴ１Ａ、および／またはＵＧＴ２Ｂ７のうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４６】
以下の薬物代謝酵素、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、およびＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４５に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４７】
ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ７、ＣＹＰ７Ａ１の、ならびにＵＧＴ１Ａ６、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ２Ｂ７の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４６に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４８】
転写因子についてのマーカー、特にＦＸＲ、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、ＲＸＲγ、ＨＮＦ１α、ＨＮＦ３α、ＨＮＦ３β、ＨＮＦ４α、ＨＮＦ６、Ｃ／ＥＢＰ Ａ、Ｃ／ＥＢＰ Ｂのうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４９】
転写因子についての以下のマーカー：ＲＸＲγのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４８に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５０】
ＦＸＲ、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、ＨＮＦ１α、ＨＮＦ３α、ＨＮＦ３β、ＨＮＦ４α、ＨＮＦ６、Ｃ／ＥＢＰ Ａ、Ｃ／ＥＢＰ Ｂのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４８または４９のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５１】
請求項２４〜４０のいずれかにおいて規定されるような方法により得ることができる、請求項４２〜５０のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５２】
請求項４２〜５１のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ細胞を含む細胞集団。
【請求項５３】
少なくとも２５％の細胞が、請求項４２〜５２のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ細胞である、細胞集団。
【請求項５４】
インビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞であって、ここで細胞は、同じ種類の細胞を使用するが、内因的な分化に細胞を供して調製される細胞に比較して、以下：アルブミン、ＵＧＴ２Ｂ７、ＣＹＰ３Ａ４の増加されたタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、細胞。
【請求項５５】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも５倍である、請求項５４に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５６】
ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍である、請求項５４〜５５に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５７】
ＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも４倍である、請求項５４〜５６に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５８】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも５倍、ならびにＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも３倍である、請求項５４〜５７に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５９】
細胞または細胞核が、アルコールデヒドロゲナーゼ１（ＡＤＨ１Ａ）のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜５８に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６０】
細胞または細胞核が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、およびＣＹＰ２Ｄ６のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜５９に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６１】
細胞または細胞核が、ＣＹＰ７Ａ１のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６０に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６２】
細胞または細胞核が、ＵＧＴ１Ａ６およびＵＧＴ１Ａのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６１に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６３】
細胞または細胞核が、薬物輸送体についての少なくとも１つのマーカーおよび薬物代謝についての１つのマーカーのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６２のいずれかに記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６４】
薬物輸送体が、ＯＡＴ、ＭＤＲ、ＢＳＥＰ、ＭＲＰ、およびＮＴＣＰからなる群より選択される、請求項６３に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６５】
薬物代謝についてのマーカーがチトクローム４５０およびＵＧＴから選択される、請求項６３に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６６】
細胞または細胞核が、本明細書中の表４、表５Ａ、または表５Ｂにおいて列挙されるマーカーのタンパク質および／または遺伝子の発現を表し、０とは異なって計数される、請求項５４〜６２に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６７】
薬物送達プロセスにおける使用のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項６８】
薬物輸送体を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項６９】
薬物代謝酵素を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７０】
肝形成、例えば、初期肝形成を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７１】
ヒト肝再生異常を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７２】
インビトロ肝毒性試験のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７３】
医薬品における、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７４】
組織変性、例えば、肝組織の変性により引き起こされる、病変および／または疾患の予防および／または処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７５】
肝臓異常の処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７６】
原発性胆汁性肝硬変を含む自己免疫異常；脂質異常症を含む代謝異常；例えば、アルコール乱用によって引き起こされる肝臓異常；例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびＡ型肝炎のようなウイルスにより引き起こされる疾患；例えば、薬物に対する急性毒性反応により引き起こされる肝臓壊死；ならびに例えば、肝細胞癌を被る患者における腫瘍除去からなる群より選択される、肝臓異常の予防および／または処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７７】
代謝病変および／または疾患の処置および／または予防のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７８】
代謝的に改善される肝細胞様細胞を得るための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞からの１つ以上の細胞の使用。
【請求項７９】
肝細胞様細胞に向かう成熟を研究するための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞のからの１つ以上の細胞の使用。
【請求項８０】
化合物を、肝細胞毒性についてスクリーニングするための方法であって、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞を、化合物に曝露する工程、および化合物が細胞に対して毒性であるか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項８１】
化合物を、肝細胞機能を調節するその能力についてスクリーニングするための方法であって、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞を、化合物に曝露する工程、化合物との接触から得られる細胞における任意の表現型的な、および代謝的な変化を決定する工程、ならびに肝細胞機能を調節する能力と変化とを相関する工程を包含する、方法。
【請求項１】
ヒト胚盤胞由来の幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来するＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞の調製のための方法であって、
ｉ）第Ｉ段階であって、ここでｈＢＳ細胞は、胚体内胚葉に発達するように誘導され、第一段階は、アクチビンを含む第１の第Ｉ段階の培養培地中でのｈＢＳ細胞の１〜７日間、好ましくは２〜６日間の培養を包含し、ここで培地は、培養の１〜２日後に、アクチビン、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて血清を含む第２の第Ｉ段階の培養培地により置き換えられる、第Ｉ段階、
ｉｉ）第ＩＩ段階であって、ここで第Ｉ段階から得られる細胞は増殖され、そして第ＩＩ段階は、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて骨形態形成タンパク質を含む第ＩＩ段階の培養培地中で、第Ｉ段階からの細胞を培養する工程、
必要に応じて、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体を採集する工程を包含する、第ＩＩ段階
を包含する、方法。
【請求項２】
第１および／または第２の、第Ｉ段階の培養培地が、ＲＰＭ１改変培地またはＤＭＥＭ培地である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第１および／または第２の、第Ｉ段階の培養培地が、１つ以上の増殖因子、特に、ＦＧＦ２、Ｗｎｔ３ａ、および血清、特にＦＢＳで補充される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンおよび必要に応じてＷｎｔ３ａを含む（例えば、プロトコル１）、
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンおよび増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２および３）、
１日目：第１の第Ｉ段階の培養培地は、アクチビンを含む（例えば、プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
２日目：第２の培養培地は、アクチビンおよび血清を含む（例えば、プロトコル１）、
２日目：第２の培養培地は、アクチビン、血清、および増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２、３、および４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
ｈＢＳ細胞が以下のスキーム：
３〜４日目：第２の培養培地は、アクチビンおよび血清を含む（例えば、プロトコル１）、
３〜５日目：第２の培養培地は、アクチビン、血清、および増殖因子、特にＦＧＦ２を含む（例えば、プロトコル２、３、および４）、
に従って培養される、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
第２の第ＩＩ段階の培養培地が、増殖因子、特にＦＧＦ２、および必要に応じて骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ４を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
第ＩＩ段階の培養培地が、ＲＰＭ１改変培地、ＤＭＥＭ培地、ＨＣＭ培地、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ基本培地、またはＶｉｔｒｏＨＥＳ（登録商標）などを含む、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
第ＩＩ段階の培養培地が、ＦＧＦ２、ＰＥＳＴ、および／またはＧｌｕｔａＭＡＸで補充される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
第ＩＩ段階の培地が、毎日、または２日毎に交換される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
第ＩＩ段階の培地がさらに、１つ以上の増殖因子、特にａＦＧＦ、および骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ２を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
第ＩＩ段階の培地が、例えばＦＢＳのような血清をさらに含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
第ＩＩ段階の培地がさらにＨＧＦを含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
細胞が以下のスキーム：
第ＩＩ段階の１〜４日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、１つ以上のさらなる骨形態形成タンパク質、特にＢＭＰ２、血清、特にＦＢＳ、ＰＥＳＴ、およびＧｌｕｔａＭＡＸ、ならびに必要に応じて１つ以上のさらなる増殖因子、特にαＦＧＦを含む（例えば、プロトコル１）、
第ＩＩ段階の１〜８日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＨＧＦを含む（例えば、プロトコル２）、
第ＩＩ段階の１〜５日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ４、ＢＭＰ２を含む（例えば、プロトコル３）、
第ＩＩ段階の１〜３日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、血清、特にＦＢＳを含む（例えば、プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
細胞が以下のスキーム：
第ＩＩ段階の４〜１０日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＦＧＦ２、ＢＭＰ４、血清、特にＦＢＳ、およびＨＧＦを含む（例えば、プロトコル１）、
第ＩＩ段階の６〜１０日目：ＨＧＦ（例えば、プロトコル３）、
第ＩＩ段階の４〜８日目：第ＩＩ段階の培養培地は、ＨＧＦ、ＦＧＦ２、ＥＧＦ、および血清、例えばＦＢＳを含む（プロトコル４）、
のうちの１つに従って培養される、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
第ＩＩ段階における細胞が８日間培養され、血清、例えばＦＢＳの濃度が６日目に増加され、および増殖因子、特にＥＧＦの補充が６日目に与えられ、ならびに培地が６日目〜８日目まで毎日に交換された、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
第ＩＩ段階から得られた細胞が、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａ、ＥｐＣＡＭ、Ｄｅｓｍｉｎ、ＣＤ１３３、ＩＣＡＭ１、ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９のうちの１つ以上の遺伝子発現を表す、項目１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ＨＮＦ１、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａ、ＥｐＣＡＭ、ＡＦＰ、Ｄｅｓｍｉｎ、ＣＤ１３３、ＩＣＡＭ１（ＣＤ５４）、ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９のうちの１つ以上のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項１９】
ＣＫ８、ＣＫ１８、およびＣＫ１９、ＩＣＡＭの遺伝子発現を表す、請求項１８に記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２０】
ＥｐＣＡＭ、およびＨＮＦ１、ＨＮＦ３ｂ、ＨＮＦ４ａのうちの１つ以上、好ましくは全てのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項１８または１９に記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２１】
請求項１〜１７のいずれかにおいて規定されるような方法により得ることが可能な請求項１８〜２０のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞。
【請求項２２】
請求項１８〜２１のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞を含む細胞集団。
【請求項２３】
少なくとも２５％の細胞がＤＥ‐ｈｅｐ前駆体細胞である、請求項２２に記載の細胞集団。
【請求項２４】
ヒト胚盤胞由来幹（ｈＢＳ）細胞に、胚体内胚葉を介して由来するＤＥ‐ｈｅｐ細胞の調製のための方法であって、方法は、以下
ｉｉ）第ＩＩ段階であって、ここでＤＥ細胞は増殖され、そして第ＩＩ段階は１つ以上の増殖因子および必要に応じて骨形態形成タンパク質を含む第ＩＩ段階の培養培地中で第Ｉ段階からの細胞を培養する工程を含む、第ＩＩ段階、
ｉｉｉ）第ＩＩＩ段階であって、ここで第ＩＩ段階から得られる細胞は、ＤＥ‐ｈｅｐ前駆体に成熟され、第ＩＩＩ段階は、１つ以上の増殖因子および分化誘導物質を含む第ＩＩＩ段階の培養培地中で、第ＩＩ段階からの細胞を培養する工程を含む、第ＩＩＩ段階、
を含む培養条件にｈＢＳ細胞を供する工程を包含する、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、
ｉ）第Ｉ段階であって、ここでｈＢＳ細胞は胚体内胚葉に発達するように誘導され、第Ｉ段階は、アクチビンを含む第１の第Ｉ段階の培養培地中の１〜７日間、好ましくは２〜６日間のｈＢＳ細胞の培養を含み、ここで培地は、培養の１日後に、アクチビン、１つ以上の増殖因子、および必要に応じて血清を含む第２の第Ｉ段階の培養培地により置き換えられる、第Ｉ段階を含み、
ここで工程ｉ）は工程ｉｉ）の前であり、および工程ｉｉ）において用いられるＤＥ細胞は、第Ｉ段階から得られる細胞である、方法。
【請求項２６】
第Ｉ段階および／または第ＩＩ段階が、請求項１〜１６いずれかにおいて規定されるように行われる、請求項２４および２５に記載の方法。
【請求項２７】
得られるＤＥ‐ｈｅｐ細胞が、同じ種類の細胞を使用するが、内因的な分化に細胞を供して調製される細胞に比較して、以下：アルブミン、ＵＧＴ２Ｂ７、ＣＹＰ３Ａ４の増加されたタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項２４〜２６に記載の方法。
【請求項２８】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも５倍である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍である、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
ＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも４倍である、請求項２７〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現が、少なくとも５倍であり、ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現が、少なくとも３倍である、請求項２７〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
第ＩＩＩ段階の培地が、例えば、Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ基本培地またはＨＣＭ Ｃａｍｂｒｅｘ培地のような培養培地を含み、必要に応じて、
例えば、デキサメタゾン、オメプラゾール、ＯＳＭ、リファムピシン、デソキシフェノバルビタール、エタノール、イソニアジド、のような誘導物質が、単独で、または；
ＩＴＳ混合物；
ＢＭＰおよび／またはＴＧＦＰ、特にＢＭＰ４、および／または
ＨＧＦ
と組み合わせて補充される、請求項２４〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
第ＩＩＩ段階の培養が、１０〜６０日間またはそれ以上行われる、請求項２４〜３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
第ＩＩＩ段階の培養培地が、１５日目まで２〜３日毎に交換され、適切な場合、残りの培養期間は２日または３日毎に交換される、請求項２４〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
ヒトまたはマウスの支持細胞のような支持細胞の使用をさらに包含する、請求項２４〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
支持細胞の使用を何ら包含しない、請求項２４〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
適切な場合、自己支持細胞の使用を包含する、請求項２４〜３６のいずれか記載の方法。
【請求項３８】
細胞の培養が、内側に１つ以上のタンパク質が、単独で、または組み合わせて、コートされるプラスチック製細胞培養容器の使用を包含する、請求項２４〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
１つ以上のタンパク質が、コラーゲン、ラミニン、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記細胞集団が、３Ｄ環境、例えば多孔性フィルターを使用して得られる、請求項３８または３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
薬物輸送、薬物代謝酵素、および／または１つ以上の転写因子についてのマーカーのうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、ＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４２】
薬物輸送についてのマーカー、特にＢＳＥＰ、ＭＲＰ２、ＯＡＴＰ‐２（＝ＯＡＴＰ‐Ｃ、ＯＡＴＰ１Ｂ１）、ＯＡＴＰ‐８（ＯＡＴＰ１Ｂ３）、ＯＡＴＰ‐Ａ（＝ＯＡＴＰ１Ａ２）、ＮＴＣＰ、ＭＤＲ１、ＭＤＲ３、ＯＣＴ‐１のうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４３】
薬物輸送についての以下のマーカー：ＭＲＰ２、ＯＡＴＰ‐２（＝ＯＡＴＰ‐Ｃ、ＯＡＴＰ１Ｂ１）、ＯＡＴＰ‐Ａ（＝ＯＡＴＰ１Ａ２）、ＮＴＣＰ、およびＯＣＴ‐１のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４２に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４４】
薬物輸送についての以下のマーカー：ＭＤＲ１および／またはＭＤＲ３のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４２または４３に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４５】
薬物代謝酵素についてのマーカー、特に、ＧＳＴ Ａ１‐１、ＧＳＴＭ１‐１、ＣＹＰ（ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ７、ＣＹＰ７Ａ１、ＵＧＴ１Ａ６、ＵＧＴ１Ａ、および／またはＵＧＴ２Ｂ７のうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４６】
以下の薬物代謝酵素、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、およびＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４５に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４７】
ＣＹＰ１Ａ１、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｂ６、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ３Ａ７、ＣＹＰ７Ａ１の、ならびにＵＧＴ１Ａ６、ＵＧＴ１Ａ、ＵＧＴ２Ｂ７の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４６に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４８】
転写因子についてのマーカー、特にＦＸＲ、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、ＲＸＲγ、ＨＮＦ１α、ＨＮＦ３α、ＨＮＦ３β、ＨＮＦ４α、ＨＮＦ６、Ｃ／ＥＢＰ Ａ、Ｃ／ＥＢＰ Ｂのうちの１つ以上の、タンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４１に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項４９】
転写因子についての以下のマーカー：ＲＸＲγのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４８に記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５０】
ＦＸＲ、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、ＨＮＦ１α、ＨＮＦ３α、ＨＮＦ３β、ＨＮＦ４α、ＨＮＦ６、Ｃ／ＥＢＰ Ａ、Ｃ／ＥＢＰ Ｂのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項４８または４９のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５１】
請求項２４〜４０のいずれかにおいて規定されるような方法により得ることができる、請求項４２〜５０のいずれかに記載のＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５２】
請求項４２〜５１のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ細胞を含む細胞集団。
【請求項５３】
少なくとも２５％の細胞が、請求項４２〜５２のいずれかにおいて規定されるようなＤＥ‐ｈｅｐ細胞である、細胞集団。
【請求項５４】
インビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞であって、ここで細胞は、同じ種類の細胞を使用するが、内因的な分化に細胞を供して調製される細胞に比較して、以下：アルブミン、ＵＧＴ２Ｂ７、ＣＹＰ３Ａ４の増加されたタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、細胞。
【請求項５５】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも５倍である、請求項５４に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５６】
ＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも３倍である、請求項５４〜５５に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５７】
ＣＹＰ３Ａ４のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも２倍、例えば、少なくとも４倍である、請求項５４〜５６に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５８】
アルブミンのタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも５倍、ならびにＵＧＴ２Ｂ７のタンパク質および／または遺伝子の発現の増加が、少なくとも３倍である、請求項５４〜５７に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項５９】
細胞または細胞核が、アルコールデヒドロゲナーゼ１（ＡＤＨ１Ａ）のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜５８に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６０】
細胞または細胞核が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、およびＣＹＰ２Ｄ６のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜５９に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６１】
細胞または細胞核が、ＣＹＰ７Ａ１のタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６０に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６２】
細胞または細胞核が、ＵＧＴ１Ａ６およびＵＧＴ１Ａのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６１に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６３】
細胞または細胞核が、薬物輸送体についての少なくとも１つのマーカーおよび薬物代謝についての１つのマーカーのタンパク質および／または遺伝子の発現を表す、請求項５４〜６２のいずれかに記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６４】
薬物輸送体が、ＯＡＴ、ＭＤＲ、ＢＳＥＰ、ＭＲＰ、およびＮＴＣＰからなる群より選択される、請求項６３に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６５】
薬物代謝についてのマーカーがチトクローム４５０およびＵＧＴから選択される、請求項６３に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６６】
細胞または細胞核が、本明細書中の表４、表５Ａ、または表５Ｂにおいて列挙されるマーカーのタンパク質および／または遺伝子の発現を表し、０とは異なって計数される、請求項５４〜６２に記載のインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞。
【請求項６７】
薬物送達プロセスにおける使用のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項６８】
薬物輸送体を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項６９】
薬物代謝酵素を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７０】
肝形成、例えば、初期肝形成を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７１】
ヒト肝再生異常を研究するためのインビトロモデルにおける、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７２】
インビトロ肝毒性試験のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７３】
医薬品における、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７４】
組織変性、例えば、肝組織の変性により引き起こされる、病変および／または疾患の予防および／または処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７５】
肝臓異常の処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７６】
原発性胆汁性肝硬変を含む自己免疫異常；脂質異常症を含む代謝異常；例えば、アルコール乱用によって引き起こされる肝臓異常；例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、およびＡ型肝炎のようなウイルスにより引き起こされる疾患；例えば、薬物に対する急性毒性反応により引き起こされる肝臓壊死；ならびに例えば、肝細胞癌を被る患者における腫瘍除去からなる群より選択される、肝臓異常の予防および／または処置のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７７】
代謝病変および／または疾患の処置および／または予防のための医薬品の製造のための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞の使用。
【請求項７８】
代謝的に改善される肝細胞様細胞を得るための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞からの１つ以上の細胞の使用。
【請求項７９】
肝細胞様細胞に向かう成熟を研究するための、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞のからの１つ以上の細胞の使用。
【請求項８０】
化合物を、肝細胞毒性についてスクリーニングするための方法であって、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞を、化合物に曝露する工程、および化合物が細胞に対して毒性であるか否かを決定する工程を包含する、方法。
【請求項８１】
化合物を、肝細胞機能を調節するその能力についてスクリーニングするための方法であって、請求項５４〜６６のいずれかにおいて規定されるようなインビトロで誘導されるＤＥ‐ｈｅｐ細胞を、化合物に曝露する工程、化合物との接触から得られる細胞における任意の表現型的な、および代謝的な変化を決定する工程、ならびに肝細胞機能を調節する能力と変化とを相関する工程を包含する、方法。
【図１−１】
【図１−２】
【図１−３】
【図１−４】
【図１−５】
【図１−６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【図７−５】
【図７−６】
【図７−７】
【図７−８】
【図７−９】
【図７−１０】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８−１】
【図１８−２】
【図１８−３】
【図１８−４】
【図１９−１】
【図１９−２】
【図２０】
【図２１】
【図２２−１】
【図２２−２】
【図２２−３】
【図２２−４】
【図２２−５】
【図２３−１】
【図２３−２】
【図２３−３】
【図２３−４】
【図２３−５】
【図２３−６】
【図２３−７】
【図１−２】
【図１−３】
【図１−４】
【図１−５】
【図１−６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図７−４】
【図７−５】
【図７−６】
【図７−７】
【図７−８】
【図７−９】
【図７−１０】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８−１】
【図１８−２】
【図１８−３】
【図１８−４】
【図１９−１】
【図１９−２】
【図２０】
【図２１】
【図２２−１】
【図２２−２】
【図２２−３】
【図２２−４】
【図２２−５】
【図２３−１】
【図２３−２】
【図２３−３】
【図２３−４】
【図２３−５】
【図２３−６】
【図２３−７】
【公表番号】特表２０１０−５３４０６５（Ｐ２０１０−５３４０６５Ａ）
【公表日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１７３７７（Ｐ２０１０−５１７３７７）
【出願日】平成２０年７月１８日（２００８．７．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５９４９１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１３２５４
【国際公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【出願人】（５０３０７１５９８）セルアーティス アーベー (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１８日（２００８．７．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５９４９１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１３２５４
【国際公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【出願人】（５０３０７１５９８）セルアーティス アーベー (10)
【Ｆターム（参考）】
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