「ＣＥＳＴ」用途のための、磁気共鳴シフト試薬と交換性プロトンを含有する基質との付加物
鉄（II）（高スピン配置）、鉄（III）、コバルト（II）、ロジウム（II）、銅（II）、ニッケル（II）、セリウム（III）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、ジスプロシウム（III）、エルビウム（III）、テルビウム（III）、ホルミウム（III）、ツリウム（III）、イッテルビウム（III）及びユーロピウム（III）から選択される金属を含有する常磁性キレート（ＳＲ）に結合した、可動プロトンを含有する基質（ＳＨ）を含む常磁性ＣＥＳＴ剤を開示する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飽和移動を使用して画像コントラストを創り出す磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）法に有用な常磁性付加物に関する。
【０００２】
発明の背景
組織中への可動プロトンの照射によるＭＲＩ画像におけるコントラストの生成はＵＳ５，０５０，６０９ですでに報告されている。水と引き換えに少なくとも１個の可動プロトンを含有する外来性コントラスト剤（当初ＣＥＤＳＴ剤と呼ばれ、今はＣＥＳＴ剤と呼ばれている）の使用がＷＯ００／６６１８０に開示されている。この文献は、常磁性錯体をＣＥＳＴ剤として使用する可能性を明示的には述べていない。好ましい化合物は、反磁性分子、たとえば糖、アミノ酸、複素環式化合物、ヌクレオシド、イミダゾール類及び誘導体、グアニジンなどである。
【０００３】
この同じ文献はまた、磁気的に不等な２組の可動プロトンを有するコントラスト剤を投与することによってｐＨ、温度及び代謝産物濃度をインビトロ及びインビボ測定する方法を特許請求している。２種のプールの選択的照射及び比率計測法の適用が、移動効果を造影剤の濃度から独立して計測することを可能にする。飽和移動は、ＣＥＳＴ剤の可動プロトンがバルク水と融合しない、すなわち、２組の可動プロトンの共鳴周波数の間の距離が交換速度よりも大きくなければならないことを暗示する。そのうえ、移動の程度は、ＣＥＳＴ剤のプロトンの交換速度と正比例し、それは、２個の交換シグナルの共鳴周波数の距離の増大が飽和移動の効率を高めることを意味する。したがって、ＣＥＳＴ常磁性コントラスト剤の使用は、診断対象のパラメータ、たとえばｐＨ、温度、代謝産物濃度などに敏感であることができる飽和移動（ＵＳ５，０５０，６０９で例示されている反磁性化合物の飽和移動よりも良好）を有する可動プロトンをもつ常磁性錯体の使用を特許請求するＷＯ０２／４３７７５で考慮されている。
【０００４】
しかし、バルク水と引き換えにプロトンを有する基質（ＵＳ５，０５０，６０９で例示されているものに類似するタイプを含む）と、バルク水からの共鳴周波数の距離を増すことができる常磁性錯体とによって形成される非共有結合性付加物により構成されるＣＥＳＴ剤系を使用する可能性は、上述の文書でも文献でも考慮されていない。この手法により、常磁性剤は、交換性プロトンを含有する化合物の性質に対するそのシフト試薬（ＳＲ）特性に基づいて選択される。
【０００５】
発明の詳細な説明
本発明は、飽和移動を観察するために照射されなければならない可動プロトンの化学シフトが、基質と、鉄（II）（高スピン配置）、鉄（III）、コバルト（II）、ロジウム（II）、銅（II）、ニッケル（II）、セリウム（III）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、ジスプロシウム（III）、エルビウム（III）、テルビウム（III）、ホルミウム（III）、ツリウム（III）、イッテルビウム（III）及びユーロピウム（III）から選択される金属を含有する常磁性キレート化合物との相互作用の結果として適切に「シフト」されている、常磁性ＣＥＳＴ剤の調製及び使用に関する。可動プロトンは、反磁性又は常磁性基質に属することができるが、後者の場合、それらの化学シフトは、常磁性種との非共有結合性相互作用によって影響を受けるものとする。
【０００６】
したがって、本発明の第一の態様は、反磁性基質と可逆的に相互作用する常磁性キレート化合物（ＳＲ単位）に静電気的相互作用又は共有結合によって結合した、可動プロトン（ＳＨ単位）を含有する反磁性基質によって構成される常磁性ＣＥＳＴ剤に関する。
【０００７】
本発明はまた、先に定義したＣＥＳＴ剤を適切な賦形剤と混合した状態で含有する診断組成物に関する。
【０００８】
可動プロトンを有する分子としては、ＵＳ５，０５０，６０９及びＷＯ００／６６１８０にすでに記載されているすべての分子、特に好ましくは直鎖状及び大環式ポリアミン、たとえばシクレン（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）、ポリアミノ酸、たとえばポリアルギニン、タンパク質、たとえばヒト血清アルブミン、多糖類、ポリシクロデキストリン、合成ポリマー（ポリアミドアミン、ペルアミド化ポリアミノ酸及びアミド基を含むデンドリマー）を使用することができる。シクレン、ポリアルギニン及びアルブミンが特に好ましい。
【０００９】
また、交換可能なプロトンは、ＳＨ基質との相互作用ののち、付加物［（ＳＲ）（ＳＨ）］の性質によってバルク水シグナルから「シフト」され、それと適切な交換状態になる水分子に属することができる。このカテゴリーのＳＨ物質としては、多糖系、特に、水分子及びＳＲ単位をトラップすることができる超分子凝集体を形成する系がある。この概念のさらなる拡張は、ＳＲ及び水分子が同じ区画にトラップされ、同時に、水分子（化学シフトがＳＲ単位によって影響される）がバルク水と適切な交換状態にある系を含む。この区画化を得るために使用することができる系の非限定的なリストは、リポソーム、ナノ及びミクロ小胞系、タンパク質キャビティ及びセルを含む。
【００１０】
本発明の付加物は、可動プロトンを有する分子を常磁性キレート化合物と共に、基質とＳＲ単位との間の親和力に依存する適切なモル比で単に混合することによって調製することができる。
【００１１】
【化２】
【００１２】
この親和力は、熱力学的会合定数（ＫA）の値によって表すことができ、この値が１０よりも大きくなければならない。そして、クロマトグラフィー技術及び／又は凍結乾燥、沈殿、蒸発などによって付加物を単離し、精製することができる。
【００１３】
本発明の第一の実施態様によると、ＳＲ単位は、可動プロトンを含有する基質分子部分を認識して可動プロトンの化学シフトに有意に影響することができる化学特性を有する。たとえば、［ＬｎＤＯＴＰ］4-（Ｌｎはランタニドである）と、好ましい基質であるシクレン、ポリアルギニン及びＨＳＡとの付加物の場合、相互作用は静電気的結合によって起こる。
【００１４】
基質とＳＲ単位との間の静電気的相互作用に関する他の例は、［ＬｎＤＯＴＰ］4-が反磁性分子、たとえばＣｏ（III）サルコファジン、Ｃｏ（III）（エチレンジアミン）3及びアグマチンの可動プロトンの化学シフト値に影響することができる場合の例である。
【００１５】
基質−ＳＲ単位の認識はまた、疎水性相互作用（たとえばポリシクロデキストリンの場合）又は混合相互作用（たとえばタンパク質の場合）を介して起こることができる。
【００１６】
あるいはまた、ＳＲ単位は、高い生体適合性を有するポリマー系、たとえばヒドロゲル又は架橋タンパク質中にトラップされて、これらの系中に存在する低速交換性水分子に対してその効果を発揮することができる。
【００１７】
他の対象の系は、区画化の効果の結果として、交換可能なプロトンのプール間の区別が生ずる系である。
【００１８】
本発明のこの実施態様によると、ＳＲ単位及びＳＨ基質は、水（ＳＲ単位及び基質とは違って）を区画の内外で自由に交換することができる適切な生体適合性系、たとえばリポソーム、ナノ粒子、マイクロエマルション及びタンパク質キャビティ（たとえばアポフェリチン）中で区画化することができる。このように、ＳＲ単位の効果はまた、区画中の基質の可動プロトンの相互作用を要することなくそれらの共鳴周波数に影響することができる磁化性の簡単な変化によって、発揮させることができ、基質の可動プロトンの照射周波数をほぼ一定にする利点を有する。
【００１９】
区画の内と外との間での水交換の速度が非常に遅い系の中でＳＨ−ＳＲ剤が区画化され、かつ単位を含む区画中の水の量がＭＲ画像中でそれを観察するのに十分である場合、ＳＲの局所濃度の増大及び可動プロトンを含む基質の増大によって飽和移動の効果を相当に増すことができる。
【００２０】
あるいはまた、バルク水シグナルの共鳴だけに影響するためのシフト剤を選択することもできる。この効果は、いずれにしても、水と基質との間で共鳴周波数の距離を増し、それにより、基質の可動プロトンの照射を可能にするであろう。ＣＥＳＴに関連しないこの種の例がOttingら（J. Am. Chem. Soc., 1991, 113, 4363）によって報告されている。Ottingらは、Ｃｏ（II）を使用してバルク水シグナルを「シフト」させ、それにより、シフト剤が侵入することができないタンパク質ＢＰＴＩの部位にトラップされた水分子の観察を可能にしている。
【００２１】
また、ＳＲ単位とＳＲ単位とを共有結合によって共役化して、二つの単位の同じ生体分布をインビボで保証することもできる。この場合、ＳＲ単位の効果は、ＳＨ単位のプロトンに対して分子内的には発揮されないが、自己同定／自己凝集の機構を介して、分子間的に発揮される。
【００２２】
このカテゴリーの好ましい化合物は以下の化合物である。
【００２３】
【化３】
【００２４】
この化合物では、分子間自己同定が、１個の分子の負荷電ＳＲ単位と別の分子の正ポリアルギニン鎖との間で起こる。ＨＩＶ−１ウイルスのペプチド断片４８〜６０を連想させる構造モチーフ（Ａｒｇ）8について、細胞によって認識され、内在化される能力が知られているという事実によってこの化合物における側鎖上のアルギニン残基の数の選択は、一部には決定される（Suzuki et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 2437）。
【００２５】
この化合物は、以下の合成式にしたがって調製することができる。
【００２６】
【化４】
【００２７】
提案されている診断用途の場合、本発明の薬剤は、非経口投与に適した適切な組成物として処方される。
【００２８】
本発明の診断組成物は、診断対象の化学−物理的パラメータ、たとえばヒト又は動物の組織又は身体中の温度、ｐＨ、代謝産物濃度、Ｏ2及びＣＯ2分圧ならびに酵素活性をＣＥＳＴ法によって測定するために使用することができる。このために、好ましい診断組成物は、磁気的に異なる２組の可動プロトンを含有するべきであり、好ましくはそれらの移動効果が対象の化学−物理的パラメータに対して異なるべきである。このようにして、比率計測法（ＷＯ００／６６１８０にすでに記載）を使用することにより、診断組成物の局所濃度から独立して診断パラメータを測定することが可能である。
【００２９】
もう一つの好ましい実施態様は、そのような系を使用して内皮透過性に関する情報を得る可能性に関する。このために、従来の診断剤（すなわち、水プロトンのＴ1又はＴ2に基づく診断剤）（Min-Ying S. et al, Magn. Res. Med. 1998, 39, 259-269）は現在、ＤＣＥ−ＭＲＩ（ＤＣＥ＝ダイナミックコントラスト増強）技術とともに使用されている。方法は、異なる大きさの診断剤（そのままで、又はＨＳＡのような高分子と相互作用させた後）を投与して毛細血管の透過性を評価することを含む。毛管透過性の定量的評価は、異なる診断剤の連続的な使用を要する動力学的実験で実施される。しかし、ＣＥＳＴ法を使用すると、診断系のシグナルの選択的照射によってコントラストを「刺激」することができるため、各ＳＲ単位（又は各ＳＨ単位）の血管外遊出を評価することができる。これに基づき、基質ＳＨの可動プロトンのシグナルを異なるふうにシフトすることが可能な（たとえば常磁性金属を変えることによって）異なるサイズのＳＲ単位を使用することができる。内皮を通過する種の同定して、１回の投与後、動力学的実験を実施することが可能となる。
【００３０】
あるいはまた、同じＳＲ単位を使用し、相互作用する基質のサイズ及びタイプを調整して、可動プロトンの共鳴周波数を変化させることにより、同じ目的を達成することもできる。選択された系（リポソーム、ナノスフェアなど）に含まれる溶液の適切な配合によって内皮を通過する診断剤を容易に同定することが可能な、異なる大きさの区画化された系を使用することにより、同様な結果を得ることができる。
【００３１】
組成物は、好ましくは、本発明の付加物を、約０．００１〜１．０Mのモル濃度で、適切な賦形剤と混合した状態で含む。
【００３２】
本発明の組成物は、好適には、血管内経路（たとえば静脈内、動脈内、心室内経路）で投与することもできるし、鞘内、腹腔内、リンパ内、腔内、経口又は経腸経路で投与することもできる。
【００３３】
好ましい形態は、すぐに使用できるか、使用直前に無菌溶剤で再構成される凍結乾燥物の形態にある無菌水溶液又は懸濁液である。具体的な診断要件に依存して、投与量は、体重１kgあたり０．０１〜０．５mmolの範囲で異なることができる。
【００３４】
以下の実施例で本発明をさらに詳細に記載する。
【００３５】
実施例１
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ６、５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図１）は、水に対するppm単位で表した照射周波数に対するバルク水のＮＭＲシグナルの強さを示す。
【００３６】
水から２ppm及び４ppmのあたりで二つのＣＥＳＴピークが観察され、グアニジンプロトンの照射及びポリマーのアミド主鎖それぞれによって生じる飽和移動を示す。
【００３７】
実施例２
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図２）は、ｐＨの上昇によって生じるポリマープロトンの交換速度の増大がバルク水シグナルとのそれらの融合に通じることを実証する。
【００３８】
実施例３
［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図３）は、基質の共鳴周波数に対するＳＲ単位の影響を示す。
【００３９】
実施例４
［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図４）は、溶液のｐＨを高めることにより、バルク水から５〜１０ppmの間隔での照射によってＳＲ単位の効果がグアニジンプロトンの飽和移動の計測を可能にすることを実証する。
【００４０】
実施例５
［ＤｙＤＯＴＰ］4-３．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．２５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図５）は、グアニジン可動プロトンの共鳴に対するＤｙ（III）イオンの影響がＹｂ（III）イオンの使用の場合とで反対の数学的符号を有することを示す。
【００４１】
実施例６
［ＴｍＤＯＴＰ］4-１．２mM及び２．４mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図６）は、３０〜４０ppm間隔（ＳＲ２．４mM）で照射を実施することができるこの錯体の、グアニジン可動プロトンの共鳴周波数に対する顕著な影響を示す。
【００４２】
実施例７
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の６．２５μM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から８４００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、［ＴｍＤＯＴＰ］4の濃度に対する飽和移動（ＳＴ％）の依存性
この図は、約４０μMのＳＲ単位濃度で５％のＳＴ効果を計測するために使用することができるこの系の相当な感度を示す。
【００４３】
実施例８
ポリアルギニン（ＤＰ２７０）の０．１１mM及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-２mMの溶液、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から６０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、飽和移動（ＳＴ％）のｐＨ依存性
効果は、主にグアニジンプロトンの交換速度の低下のせいで、酸性ｐＨで相当に低下する。
【００４４】
実施例９
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と［ＴｍＤＯＴＰ］4-との相互作用（３１２Ｋ、ｐＨ７．４）
図８は、ＨＳＡ１mMのみの溶液の場合（□）及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-を３mM量で添加した場合（■）の、１．３ppmと１０ppmとの間のＮＭＲスペクトルの周波数を照射することによって計測した飽和移動を示す。Ａｒｇタンパク質残基のグアニジンプロトンの照射に起因して、最大移動が観察される周波数が約２ppmシフトしている。
【００４５】
実施例１０
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とＣｏ（ｅｎ）33+との相互作用
図１０は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-及びＣｏ（ｅｎ）33+の１：１溶液の場合の、２９８Ｋ、ｐＨ５．７、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の濃度依存性を示す。これらの実験条件下、０．１mMのＳＲ単位濃度で５％のＣＥＳＴ効果が得られた。生理的温度及びｐＨでは、第一級アミンプロトンの高い交換速度のせいで最大効果はわずか９％である。
【００４６】
実施例１１
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１１は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-の４mM溶液の場合の、３１２Ｋ、ｐＨ６、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、シクレンと［ＴｍＤＯＴＰ］4-との濃度比に対するＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の依存性を示す。約３〜４：１の基質／ＳＲ単位濃度比の場合に最大効果を観察することができる。より低い基質濃度では、効果は、主として照射されるプロトンの数の少なさのせいで低下するが、より高い濃度では、主としてシクレンの遊離画分の増大のせいで低下し、その後、可動プロトンシグナルが反磁性区域にシフトする。
【００４７】
実施例１２
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１２は、［シクレン］／［ＴｍＤＯＴＰ］4-濃度比を３：１に維持しながら３１２Ｋ、ｐＨ６、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の［ＴｍＤＯＴＰ］4-濃度依存性を示す。
【００４８】
図は、約６０μMのＳＲ単位濃度で５％のＳＴ効果を計測するために使用することができるこの系の相当な感度を示す。
【００４９】
実施例１３
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１３は、シクレン（１２mM）及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-（４mM）の３：１溶液の場合の、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）のｐＨ依存性を示す。
【００５０】
移動効果は、アミンプロトン交換速度のｐＨ依存性を反映する。換言するならば、遅すぎる場合には低下し（ｐＨ＜５）、速すぎる場合には融合状態に近づく（ｐＨ＞７）。
【００５１】
実施例１４
図１４のヒストグラムは、ＳＲ単位［ＴｍＤＯＴＰ］4-と相互作用する一連の基質に関して、３１２Ｋ、ｐＨ７．４、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＳＴ％値を比較したものである。［ＴｍＤＯＴＰ］4-の濃度はすべての場合で４mMであるが、基質の濃度は、先に評価した最適濃度比にしたがって異なる。Triaza＝１，４，７−トリアザシクロノナン１０：１；Hexaaza＝１，４，７，１０，１３，１６−ヘキサアザシクロオクタデカン２：１；シクレン３：１；シクラム２：１及びポリアルギニン０．０５５：１
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ６、５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図２】図２は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図３】図３は、［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図４】図４は、［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図５】図５は、［ＤｙＤＯＴＰ］4-３．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．２５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図６】図６は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-１．２mM及び２．４mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図７】図７は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の６．２５μM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から８４００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、［ＴｍＤＯＴＰ］4の濃度に対する飽和移動（ＳＴ％）の依存性を示す図である。
【図８】図８は、ポリアルギニン（ＤＰ２７０）の０．１１mM及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-２mMの溶液、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から６０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、飽和移動（ＳＴ％）のｐＨ依存性を示す図である。
【図９】図９は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と［ＴｍＤＯＴＰ］4-との相互作用（３１２Ｋ、ｐＨ７．４）を示す図である。
【図１０】図１０は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とＣｏ（ｅｎ）33+との相互作用を示す図である。
【図１１】図１１は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１２】図１２は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１３】図１３は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１４】図１４は、ＳＲ単位［ＴｍＤＯＴＰ］4-と相互作用する一連の基質に関する、３１２Ｋ、ｐＨ７．４、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＳＴ％値の比較を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、飽和移動を使用して画像コントラストを創り出す磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）法に有用な常磁性付加物に関する。
【０００２】
発明の背景
組織中への可動プロトンの照射によるＭＲＩ画像におけるコントラストの生成はＵＳ５，０５０，６０９ですでに報告されている。水と引き換えに少なくとも１個の可動プロトンを含有する外来性コントラスト剤（当初ＣＥＤＳＴ剤と呼ばれ、今はＣＥＳＴ剤と呼ばれている）の使用がＷＯ００／６６１８０に開示されている。この文献は、常磁性錯体をＣＥＳＴ剤として使用する可能性を明示的には述べていない。好ましい化合物は、反磁性分子、たとえば糖、アミノ酸、複素環式化合物、ヌクレオシド、イミダゾール類及び誘導体、グアニジンなどである。
【０００３】
この同じ文献はまた、磁気的に不等な２組の可動プロトンを有するコントラスト剤を投与することによってｐＨ、温度及び代謝産物濃度をインビトロ及びインビボ測定する方法を特許請求している。２種のプールの選択的照射及び比率計測法の適用が、移動効果を造影剤の濃度から独立して計測することを可能にする。飽和移動は、ＣＥＳＴ剤の可動プロトンがバルク水と融合しない、すなわち、２組の可動プロトンの共鳴周波数の間の距離が交換速度よりも大きくなければならないことを暗示する。そのうえ、移動の程度は、ＣＥＳＴ剤のプロトンの交換速度と正比例し、それは、２個の交換シグナルの共鳴周波数の距離の増大が飽和移動の効率を高めることを意味する。したがって、ＣＥＳＴ常磁性コントラスト剤の使用は、診断対象のパラメータ、たとえばｐＨ、温度、代謝産物濃度などに敏感であることができる飽和移動（ＵＳ５，０５０，６０９で例示されている反磁性化合物の飽和移動よりも良好）を有する可動プロトンをもつ常磁性錯体の使用を特許請求するＷＯ０２／４３７７５で考慮されている。
【０００４】
しかし、バルク水と引き換えにプロトンを有する基質（ＵＳ５，０５０，６０９で例示されているものに類似するタイプを含む）と、バルク水からの共鳴周波数の距離を増すことができる常磁性錯体とによって形成される非共有結合性付加物により構成されるＣＥＳＴ剤系を使用する可能性は、上述の文書でも文献でも考慮されていない。この手法により、常磁性剤は、交換性プロトンを含有する化合物の性質に対するそのシフト試薬（ＳＲ）特性に基づいて選択される。
【０００５】
発明の詳細な説明
本発明は、飽和移動を観察するために照射されなければならない可動プロトンの化学シフトが、基質と、鉄（II）（高スピン配置）、鉄（III）、コバルト（II）、ロジウム（II）、銅（II）、ニッケル（II）、セリウム（III）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、ジスプロシウム（III）、エルビウム（III）、テルビウム（III）、ホルミウム（III）、ツリウム（III）、イッテルビウム（III）及びユーロピウム（III）から選択される金属を含有する常磁性キレート化合物との相互作用の結果として適切に「シフト」されている、常磁性ＣＥＳＴ剤の調製及び使用に関する。可動プロトンは、反磁性又は常磁性基質に属することができるが、後者の場合、それらの化学シフトは、常磁性種との非共有結合性相互作用によって影響を受けるものとする。
【０００６】
したがって、本発明の第一の態様は、反磁性基質と可逆的に相互作用する常磁性キレート化合物（ＳＲ単位）に静電気的相互作用又は共有結合によって結合した、可動プロトン（ＳＨ単位）を含有する反磁性基質によって構成される常磁性ＣＥＳＴ剤に関する。
【０００７】
本発明はまた、先に定義したＣＥＳＴ剤を適切な賦形剤と混合した状態で含有する診断組成物に関する。
【０００８】
可動プロトンを有する分子としては、ＵＳ５，０５０，６０９及びＷＯ００／６６１８０にすでに記載されているすべての分子、特に好ましくは直鎖状及び大環式ポリアミン、たとえばシクレン（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）、ポリアミノ酸、たとえばポリアルギニン、タンパク質、たとえばヒト血清アルブミン、多糖類、ポリシクロデキストリン、合成ポリマー（ポリアミドアミン、ペルアミド化ポリアミノ酸及びアミド基を含むデンドリマー）を使用することができる。シクレン、ポリアルギニン及びアルブミンが特に好ましい。
【０００９】
また、交換可能なプロトンは、ＳＨ基質との相互作用ののち、付加物［（ＳＲ）（ＳＨ）］の性質によってバルク水シグナルから「シフト」され、それと適切な交換状態になる水分子に属することができる。このカテゴリーのＳＨ物質としては、多糖系、特に、水分子及びＳＲ単位をトラップすることができる超分子凝集体を形成する系がある。この概念のさらなる拡張は、ＳＲ及び水分子が同じ区画にトラップされ、同時に、水分子（化学シフトがＳＲ単位によって影響される）がバルク水と適切な交換状態にある系を含む。この区画化を得るために使用することができる系の非限定的なリストは、リポソーム、ナノ及びミクロ小胞系、タンパク質キャビティ及びセルを含む。
【００１０】
本発明の付加物は、可動プロトンを有する分子を常磁性キレート化合物と共に、基質とＳＲ単位との間の親和力に依存する適切なモル比で単に混合することによって調製することができる。
【００１１】
【化２】
【００１２】
この親和力は、熱力学的会合定数（ＫA）の値によって表すことができ、この値が１０よりも大きくなければならない。そして、クロマトグラフィー技術及び／又は凍結乾燥、沈殿、蒸発などによって付加物を単離し、精製することができる。
【００１３】
本発明の第一の実施態様によると、ＳＲ単位は、可動プロトンを含有する基質分子部分を認識して可動プロトンの化学シフトに有意に影響することができる化学特性を有する。たとえば、［ＬｎＤＯＴＰ］4-（Ｌｎはランタニドである）と、好ましい基質であるシクレン、ポリアルギニン及びＨＳＡとの付加物の場合、相互作用は静電気的結合によって起こる。
【００１４】
基質とＳＲ単位との間の静電気的相互作用に関する他の例は、［ＬｎＤＯＴＰ］4-が反磁性分子、たとえばＣｏ（III）サルコファジン、Ｃｏ（III）（エチレンジアミン）3及びアグマチンの可動プロトンの化学シフト値に影響することができる場合の例である。
【００１５】
基質−ＳＲ単位の認識はまた、疎水性相互作用（たとえばポリシクロデキストリンの場合）又は混合相互作用（たとえばタンパク質の場合）を介して起こることができる。
【００１６】
あるいはまた、ＳＲ単位は、高い生体適合性を有するポリマー系、たとえばヒドロゲル又は架橋タンパク質中にトラップされて、これらの系中に存在する低速交換性水分子に対してその効果を発揮することができる。
【００１７】
他の対象の系は、区画化の効果の結果として、交換可能なプロトンのプール間の区別が生ずる系である。
【００１８】
本発明のこの実施態様によると、ＳＲ単位及びＳＨ基質は、水（ＳＲ単位及び基質とは違って）を区画の内外で自由に交換することができる適切な生体適合性系、たとえばリポソーム、ナノ粒子、マイクロエマルション及びタンパク質キャビティ（たとえばアポフェリチン）中で区画化することができる。このように、ＳＲ単位の効果はまた、区画中の基質の可動プロトンの相互作用を要することなくそれらの共鳴周波数に影響することができる磁化性の簡単な変化によって、発揮させることができ、基質の可動プロトンの照射周波数をほぼ一定にする利点を有する。
【００１９】
区画の内と外との間での水交換の速度が非常に遅い系の中でＳＨ−ＳＲ剤が区画化され、かつ単位を含む区画中の水の量がＭＲ画像中でそれを観察するのに十分である場合、ＳＲの局所濃度の増大及び可動プロトンを含む基質の増大によって飽和移動の効果を相当に増すことができる。
【００２０】
あるいはまた、バルク水シグナルの共鳴だけに影響するためのシフト剤を選択することもできる。この効果は、いずれにしても、水と基質との間で共鳴周波数の距離を増し、それにより、基質の可動プロトンの照射を可能にするであろう。ＣＥＳＴに関連しないこの種の例がOttingら（J. Am. Chem. Soc., 1991, 113, 4363）によって報告されている。Ottingらは、Ｃｏ（II）を使用してバルク水シグナルを「シフト」させ、それにより、シフト剤が侵入することができないタンパク質ＢＰＴＩの部位にトラップされた水分子の観察を可能にしている。
【００２１】
また、ＳＲ単位とＳＲ単位とを共有結合によって共役化して、二つの単位の同じ生体分布をインビボで保証することもできる。この場合、ＳＲ単位の効果は、ＳＨ単位のプロトンに対して分子内的には発揮されないが、自己同定／自己凝集の機構を介して、分子間的に発揮される。
【００２２】
このカテゴリーの好ましい化合物は以下の化合物である。
【００２３】
【化３】
【００２４】
この化合物では、分子間自己同定が、１個の分子の負荷電ＳＲ単位と別の分子の正ポリアルギニン鎖との間で起こる。ＨＩＶ−１ウイルスのペプチド断片４８〜６０を連想させる構造モチーフ（Ａｒｇ）8について、細胞によって認識され、内在化される能力が知られているという事実によってこの化合物における側鎖上のアルギニン残基の数の選択は、一部には決定される（Suzuki et al., J. Biol. Chem., 2002, 277, 2437）。
【００２５】
この化合物は、以下の合成式にしたがって調製することができる。
【００２６】
【化４】
【００２７】
提案されている診断用途の場合、本発明の薬剤は、非経口投与に適した適切な組成物として処方される。
【００２８】
本発明の診断組成物は、診断対象の化学−物理的パラメータ、たとえばヒト又は動物の組織又は身体中の温度、ｐＨ、代謝産物濃度、Ｏ2及びＣＯ2分圧ならびに酵素活性をＣＥＳＴ法によって測定するために使用することができる。このために、好ましい診断組成物は、磁気的に異なる２組の可動プロトンを含有するべきであり、好ましくはそれらの移動効果が対象の化学−物理的パラメータに対して異なるべきである。このようにして、比率計測法（ＷＯ００／６６１８０にすでに記載）を使用することにより、診断組成物の局所濃度から独立して診断パラメータを測定することが可能である。
【００２９】
もう一つの好ましい実施態様は、そのような系を使用して内皮透過性に関する情報を得る可能性に関する。このために、従来の診断剤（すなわち、水プロトンのＴ1又はＴ2に基づく診断剤）（Min-Ying S. et al, Magn. Res. Med. 1998, 39, 259-269）は現在、ＤＣＥ−ＭＲＩ（ＤＣＥ＝ダイナミックコントラスト増強）技術とともに使用されている。方法は、異なる大きさの診断剤（そのままで、又はＨＳＡのような高分子と相互作用させた後）を投与して毛細血管の透過性を評価することを含む。毛管透過性の定量的評価は、異なる診断剤の連続的な使用を要する動力学的実験で実施される。しかし、ＣＥＳＴ法を使用すると、診断系のシグナルの選択的照射によってコントラストを「刺激」することができるため、各ＳＲ単位（又は各ＳＨ単位）の血管外遊出を評価することができる。これに基づき、基質ＳＨの可動プロトンのシグナルを異なるふうにシフトすることが可能な（たとえば常磁性金属を変えることによって）異なるサイズのＳＲ単位を使用することができる。内皮を通過する種の同定して、１回の投与後、動力学的実験を実施することが可能となる。
【００３０】
あるいはまた、同じＳＲ単位を使用し、相互作用する基質のサイズ及びタイプを調整して、可動プロトンの共鳴周波数を変化させることにより、同じ目的を達成することもできる。選択された系（リポソーム、ナノスフェアなど）に含まれる溶液の適切な配合によって内皮を通過する診断剤を容易に同定することが可能な、異なる大きさの区画化された系を使用することにより、同様な結果を得ることができる。
【００３１】
組成物は、好ましくは、本発明の付加物を、約０．００１〜１．０Mのモル濃度で、適切な賦形剤と混合した状態で含む。
【００３２】
本発明の組成物は、好適には、血管内経路（たとえば静脈内、動脈内、心室内経路）で投与することもできるし、鞘内、腹腔内、リンパ内、腔内、経口又は経腸経路で投与することもできる。
【００３３】
好ましい形態は、すぐに使用できるか、使用直前に無菌溶剤で再構成される凍結乾燥物の形態にある無菌水溶液又は懸濁液である。具体的な診断要件に依存して、投与量は、体重１kgあたり０．０１〜０．５mmolの範囲で異なることができる。
【００３４】
以下の実施例で本発明をさらに詳細に記載する。
【００３５】
実施例１
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ６、５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図１）は、水に対するppm単位で表した照射周波数に対するバルク水のＮＭＲシグナルの強さを示す。
【００３６】
水から２ppm及び４ppmのあたりで二つのＣＥＳＴピークが観察され、グアニジンプロトンの照射及びポリマーのアミド主鎖それぞれによって生じる飽和移動を示す。
【００３７】
実施例２
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図２）は、ｐＨの上昇によって生じるポリマープロトンの交換速度の増大がバルク水シグナルとのそれらの融合に通じることを実証する。
【００３８】
実施例３
［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図３）は、基質の共鳴周波数に対するＳＲ単位の影響を示す。
【００３９】
実施例４
［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図４）は、溶液のｐＨを高めることにより、バルク水から５〜１０ppmの間隔での照射によってＳＲ単位の効果がグアニジンプロトンの飽和移動の計測を可能にすることを実証する。
【００４０】
実施例５
［ＤｙＤＯＴＰ］4-３．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．２５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図５）は、グアニジン可動プロトンの共鳴に対するＤｙ（III）イオンの影響がＹｂ（III）イオンの使用の場合とで反対の数学的符号を有することを示す。
【００４１】
実施例６
［ＴｍＤＯＴＰ］4-１．２mM及び２．４mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトル
スペクトル（図６）は、３０〜４０ppm間隔（ＳＲ２．４mM）で照射を実施することができるこの錯体の、グアニジン可動プロトンの共鳴周波数に対する顕著な影響を示す。
【００４２】
実施例７
ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の６．２５μM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から８４００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、［ＴｍＤＯＴＰ］4の濃度に対する飽和移動（ＳＴ％）の依存性
この図は、約４０μMのＳＲ単位濃度で５％のＳＴ効果を計測するために使用することができるこの系の相当な感度を示す。
【００４３】
実施例８
ポリアルギニン（ＤＰ２７０）の０．１１mM及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-２mMの溶液、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から６０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、飽和移動（ＳＴ％）のｐＨ依存性
効果は、主にグアニジンプロトンの交換速度の低下のせいで、酸性ｐＨで相当に低下する。
【００４４】
実施例９
ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と［ＴｍＤＯＴＰ］4-との相互作用（３１２Ｋ、ｐＨ７．４）
図８は、ＨＳＡ１mMのみの溶液の場合（□）及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-を３mM量で添加した場合（■）の、１．３ppmと１０ppmとの間のＮＭＲスペクトルの周波数を照射することによって計測した飽和移動を示す。Ａｒｇタンパク質残基のグアニジンプロトンの照射に起因して、最大移動が観察される周波数が約２ppmシフトしている。
【００４５】
実施例１０
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とＣｏ（ｅｎ）33+との相互作用
図１０は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-及びＣｏ（ｅｎ）33+の１：１溶液の場合の、２９８Ｋ、ｐＨ５．７、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の濃度依存性を示す。これらの実験条件下、０．１mMのＳＲ単位濃度で５％のＣＥＳＴ効果が得られた。生理的温度及びｐＨでは、第一級アミンプロトンの高い交換速度のせいで最大効果はわずか９％である。
【００４６】
実施例１１
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１１は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-の４mM溶液の場合の、３１２Ｋ、ｐＨ６、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、シクレンと［ＴｍＤＯＴＰ］4-との濃度比に対するＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の依存性を示す。約３〜４：１の基質／ＳＲ単位濃度比の場合に最大効果を観察することができる。より低い基質濃度では、効果は、主として照射されるプロトンの数の少なさのせいで低下するが、より高い濃度では、主としてシクレンの遊離画分の増大のせいで低下し、その後、可動プロトンシグナルが反磁性区域にシフトする。
【００４７】
実施例１２
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１２は、［シクレン］／［ＴｍＤＯＴＰ］4-濃度比を３：１に維持しながら３１２Ｋ、ｐＨ６、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）の［ＴｍＤＯＴＰ］4-濃度依存性を示す。
【００４８】
図は、約６０μMのＳＲ単位濃度で５％のＳＴ効果を計測するために使用することができるこの系の相当な感度を示す。
【００４９】
実施例１３
［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用
図１３は、シクレン（１２mM）及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-（４mM）の３：１溶液の場合の、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から２１，０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、ＣＥＳＴ効果（ＳＴ％）のｐＨ依存性を示す。
【００５０】
移動効果は、アミンプロトン交換速度のｐＨ依存性を反映する。換言するならば、遅すぎる場合には低下し（ｐＨ＜５）、速すぎる場合には融合状態に近づく（ｐＨ＞７）。
【００５１】
実施例１４
図１４のヒストグラムは、ＳＲ単位［ＴｍＤＯＴＰ］4-と相互作用する一連の基質に関して、３１２Ｋ、ｐＨ７．４、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＳＴ％値を比較したものである。［ＴｍＤＯＴＰ］4-の濃度はすべての場合で４mMであるが、基質の濃度は、先に評価した最適濃度比にしたがって異なる。Triaza＝１，４，７−トリアザシクロノナン１０：１；Hexaaza＝１，４，７，１０，１３，１６−ヘキサアザシクロオクタデカン２：１；シクレン３：１；シクラム２：１及びポリアルギニン０．０５５：１
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ６、５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図２】図２は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間１０秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図３】図３は、［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図４】図４は、［ＹｂＤＯＴＰ］4-２．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．５mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図５】図５は、［ＤｙＤＯＴＰ］4-３．５mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．２５mM溶液、ｐＨ６．５、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図６】図６は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-１．２mM及び２．４mMの存在下におけるポリアルギニン（ＤＰ２２７）の０．１mM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＣＥＳＴスペクトルを示す図である。
【図７】図７は、ポリアルギニン（ＤＰ２２７）の６．２５μM溶液、ｐＨ７．２、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から８４００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、［ＴｍＤＯＴＰ］4の濃度に対する飽和移動（ＳＴ％）の依存性を示す図である。
【図８】図８は、ポリアルギニン（ＤＰ２７０）の０．１１mM及び［ＴｍＤＯＴＰ］4-２mMの溶液、３１２Ｋ、７．０５Ｔ、水から６０００Hzの照射周波数、照射時間４秒での、飽和移動（ＳＴ％）のｐＨ依存性を示す図である。
【図９】図９は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と［ＴｍＤＯＴＰ］4-との相互作用（３１２Ｋ、ｐＨ７．４）を示す図である。
【図１０】図１０は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とＣｏ（ｅｎ）33+との相互作用を示す図である。
【図１１】図１１は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１２】図１２は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１３】図１３は、［ＴｍＤＯＴＰ］4-とシクレンとの相互作用を示す図である。
【図１４】図１４は、ＳＲ単位［ＴｍＤＯＴＰ］4-と相互作用する一連の基質に関する、３１２Ｋ、ｐＨ７．４、７．０５Ｔ、照射時間４秒でのＳＴ％値の比較を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鉄（II）（高スピン配置）、鉄（III）、コバルト（II）、ロジウム（II）、銅（II）、ニッケル（II）、セリウム（III）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、ジスプロシウム（III）、エルビウム（III）、テルビウム（III）、ホルミウム（III）、ツリウム（III）、イッテルビウム（III）及びユーロピウム（III）から選択される金属を含有する常磁性キレート（ＳＲ）に結合した、可動プロトンを含有する基質（ＳＨ）を含む、常磁性ＣＥＳＴ剤。
【請求項２】
前記ＳＨ基質が反磁性であり、直鎖状及び環式ポリアミン、ポリアミノ酸、タンパク質、多糖類、ポリアミドアミン、ペルアミド化ポリアミノ酸、アミド基を含むデンドリマー、ポリシクロデキストリン、多糖類及びアルギネートから選択される、請求項１記載の剤。
【請求項３】
前記基質が、ポリアルギニン、アルブミン及びシクレンから選択される、請求項２記載の剤。
【請求項４】
前記常磁性キレートが、［ＬｎＤＯＴＰ］4-である、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤。
【請求項５】
リポソーム、ナノ粒子、マイクロエマルション及びタンパク質キャビティから選択される生体適合性系の中で区画化されている、請求項１〜４のいずれか１項記載の剤。
【請求項６】
基質と前記キレートとの間の結合が静電気的であり、ＳＲ−基質会合の見かけ熱力学的定数（ＫA）が１０よりも大きい、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【請求項７】
ＳＨがＳＲと共有結合している、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【請求項８】
式：
【化１】
で示される、請求項７記載の剤。
【請求項９】
請求項１〜８記載の剤を適切な賦形剤と混合した状態で含有する診断組成物。
【請求項１】
鉄（II）（高スピン配置）、鉄（III）、コバルト（II）、ロジウム（II）、銅（II）、ニッケル（II）、セリウム（III）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、ジスプロシウム（III）、エルビウム（III）、テルビウム（III）、ホルミウム（III）、ツリウム（III）、イッテルビウム（III）及びユーロピウム（III）から選択される金属を含有する常磁性キレート（ＳＲ）に結合した、可動プロトンを含有する基質（ＳＨ）を含む、常磁性ＣＥＳＴ剤。
【請求項２】
前記ＳＨ基質が反磁性であり、直鎖状及び環式ポリアミン、ポリアミノ酸、タンパク質、多糖類、ポリアミドアミン、ペルアミド化ポリアミノ酸、アミド基を含むデンドリマー、ポリシクロデキストリン、多糖類及びアルギネートから選択される、請求項１記載の剤。
【請求項３】
前記基質が、ポリアルギニン、アルブミン及びシクレンから選択される、請求項２記載の剤。
【請求項４】
前記常磁性キレートが、［ＬｎＤＯＴＰ］4-である、請求項１〜３のいずれか１項記載の剤。
【請求項５】
リポソーム、ナノ粒子、マイクロエマルション及びタンパク質キャビティから選択される生体適合性系の中で区画化されている、請求項１〜４のいずれか１項記載の剤。
【請求項６】
基質と前記キレートとの間の結合が静電気的であり、ＳＲ−基質会合の見かけ熱力学的定数（ＫA）が１０よりも大きい、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【請求項７】
ＳＨがＳＲと共有結合している、請求項１〜５のいずれか１項記載の剤。
【請求項８】
式：
【化１】
で示される、請求項７記載の剤。
【請求項９】
請求項１〜８記載の剤を適切な賦形剤と混合した状態で含有する診断組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００６−５２２７６１（Ｐ２００６−５２２７６１Ａ）
【公表日】平成１８年１０月５日（２００６．１０．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０５０２７（Ｐ２００６−５０５０２７）
【出願日】平成１６年４月６日（２００４．４．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００３６８４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８９４２４
【国際公開日】平成１６年１０月２１日（２００４．１０．２１）
【出願人】（５０１０９４４０９）
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＡＣＣＯ ＩＭＡＧＩＮＧ Ｓ．ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１０月５日（２００６．１０．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年４月６日（２００４．４．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００３６８４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８９４２４
【国際公開日】平成１６年１０月２１日（２００４．１０．２１）
【出願人】（５０１０９４４０９）
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＡＣＣＯ ＩＭＡＧＩＮＧ Ｓ．ｐ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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