アシルグリセロール並びにその窒素−及び硫黄含有類似物の治療上の使用
本発明は、アシルグリセロール、並びにその窒素−及び硫黄含有類似体の治療上の使用、特に脳虚血の治療における使用に関する。本発明は、更に、該誘導体の調製方法、新規化合物、特にアシルグリセロール、その窒素−及び硫黄含有類似体、並びにその調製方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アシルグリセロール、並びにその窒素−及び硫黄含有類似体の治療上の使用、特に脳虚血の治療における使用に関する。本発明は、更に、該誘導体の調製方法、新規化合物、特にアシルグリセロール、その窒素−及び硫黄含有類似体、並びにその調製方法に関する。
【０００２】
本発明の化合物は、有利な抗酸化剤及び抗炎症医薬特性を有する。本発明は、また、該化合物及びそれを含む医薬組成物を使用する治療的処置の方法を記載する。特に、本発明の化合物は、発作の予防又は治療に有用である。
【０００３】
フランスでは、脳血管性疾患（年間１５０，０００件の新規症例）は、死因の第３位であり、成人における身体障害の主要原因である。虚血性及び出血性発作は、全ての脳血管性発作において、それぞれ８０％及び２０％を占める。脳虚血性発作は、脳血管性疾患の死亡率及び罹患率を減少させるために取り組まれなければならない、重要な治療上の問題である。虚血の急性期の治療ばかりでなく、虚血の予防において進歩があった。したがって、危険因子を同定し管理することは、この病理の治療において必須であることを留意することが重要である。
【０００４】
薬剤に基づく脳虚血の治療は、異なる戦略に基づく。第１の戦略は、危険因子（高血圧、高コレステロール血症、糖尿病、心房細動など）の予防、又は特に抗血小板薬又は抗凝血薬の助けを借りる血栓症の予防により、脳虚血発作の発症を予防することを含む（Adams 2002)。
【０００５】
第２の戦略は、虚血の急性期を治療して、その長期の影響を減衰させることを含む(Lutsep 及び Clark 2001)。
【０００６】
脳虚血の病態生理学は、下記のように記載されることができる：ニューロンが壊死している虚血性病巣と無傷の神経組織との間の中間領域である虚血性境界域は、病態生理学的カスケードの部位であり、これは、再灌流が起きないか又は神経保護が不十分である場合、数日間かけて神経細胞死を起こす。最初の現象は、最初の数時間以内に起こり、多量のグルタミン酸を放出し、神経細胞脱分極及び細胞性浮腫を起こす。細胞内へのカルシウムの流入は、ミトコンドリアの損傷を誘導し、それはフリーラジカルを放出し、酵素を誘導して神経細胞膜の分解を促進する。カルシウム流入及びフリーラジカル産生は、次に、ＮＦ−κＢのような特定の転写因子を活性化する。該活性化は、内皮接着タンパク質の誘導、虚血病巣の多核好中球浸潤、ミクログリア活性化、酸化窒素（ＮＯ）II型シンターゼ又はII型シクロオキシゲナーゼのような酵素の誘導のような炎症過程を誘導する。これらの炎症過程は、細胞に毒性のあるＮＯ又はプロスタノイドの放出を起こす。ともにこれらの過程は、結果として非可逆的病変を誘導するアポトーシスの現象となる（Dirnagl, Iadecolaら, 1999）。
【０００７】
予防的神経保護の概念は、虚血抵抗性を示す動物モデルにおける実験データに基づく。事実、脳虚血を実験的に誘導する前に異なる手順を適用すると、後者の重篤度が減衰される。種々の刺激が脳虚抵抗性を誘導することができ、前条件付け（遷延虚血に先立つ短期虚血）、熱ストレス、低用量の細菌性リポ多糖類の投与である（Bordet, Deplanqueら, 2000）。
【０００８】
該刺激は、抵抗性機構を誘導し、それは保護機構を誘発する信号を活性化する。異なる誘発機構が同定されており、サイトカイン、炎症性経路、フリーラジカル、ＮＯ、ＡＴＰ−依存性カリウムチャンネル、アデノシンである。初期現象の発生と虚血抵抗性との間で観察される遅滞時間は、タンパク質合成の必要性に由来する。多様な種類のタンパク質が虚血抵抗性を誘導することを示しており、熱ショックタンパク質、抗酸化酵素及び抗アポトーシス性タンパク質である（Nandagopal, Dawsonら, 2001）。
【０００９】
したがって、アテローム動脈硬化、糖尿病、肥満などのような脳血管性発作の危険因子の進展を防止することができ、予防的神経保護ばかりでなく、脳虚血の急性期における積極的な神経保護を提供することができる化合物の真の必要性がある。
【００１０】
ＰＰＡＲ（α、β、γ）は、ホルモン活性化核内受容体ファミリーに属する。これらのリガンドによる結合で活性化される場合、これらはレチノイド−Ｘ−受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体化され、標的遺伝子のプロモーター配列に位置する「ペルオキシソーム増殖因子応答要素」（ＰＰＲＥ）と結合する。したがってＰＰＡＲのＰＰＲＥへの結合は、標的遺伝子の発現を誘導する（Fruchart, Staelsら, 2001）。
【００１１】
ＰＰＡＲは、多種多様な器官に分布されており、これらはＰＰＡＲβを除いて全てある程度の組織特異性を示すが、その発現は遍在すると思われる。ＰＰＡＲαの発現は、肝臓及び腸管腔において特に多く、ＰＰＡＲγは、主に脂肪組織及び脾臓に発現する。３つのサブタイプ（α、β、γ）は、中枢神経系に発現する。オリゴデンドロサイト及びアストロサイトのような細胞は、とりわけＰＰＡＲαサブタイプを発現する（Kainu, Wikstromら, 1994）。
【００１２】
ＰＰＡＲの標的遺伝子は、脂質及び糖の代謝を制御する。しかし、最近の発見は、ＰＰＡＲが他の生物学的過程に関与していることを示唆している。それらのリガンドによるＰＰＡＲの活性化は、遺伝子の転写活性における変化を誘導し、それは、炎症性過程、抗酸化酵素、血管形成、細胞の増殖及び分化、アポトーシス、ｉＮＯＳ、ＭＭＰａｓｅ及びＴＩＭＰの活性を調節する（Smith, Dipretaら, 2001) (Clark 2002)。
【００１３】
フリーラジカルは、アレルギー、腫瘍のイニシエーション及びプロモーション、循環器疾患（アテローム性動脈硬化、虚血）、遺伝的及び代謝的障害（糖尿病）、感染性及び変性疾患（プリオンなど）及び眼の疾患を含む極めて広範囲の病理において役割を果たす(Mates, Perez-Gomez1ら, 1999)。
【００１４】
活性酸素種（ＲＯＳ）は、正常な細胞機能中に産生される。ＲＯＳは、ヒドロキシルラジカル（ＯＨ）、スーパーオキシドアニオン（Ｏ2-）、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）及び酸化窒素（ＮＯ）を含む。該種は非常に不安定であり、それらの高い化学反応性のため、細胞の生物学的機能にとって脅威となる。それらは、脂質の過酸化、特定の酵素の酸化、及びタンパク質の分解をもたらす極めて広範囲に及ぶタンパク質の酸化を誘導する。脂質の過酸化に対する保護は、過酸化生成物がＤＮＡの損傷を引き起こしうるため、好気性生物において必須のプロセスである。したがって、天然の抗酸化剤防御によるラジカル種の産生、処理及び除去の間の平衡の調節解除又は変更によって、細胞又は生物に有害であるプロセスが確立される。
【００１５】
ＲＯＳは、酵素成分と非酵素成分を含む抗酸化剤系を介して処理される。酵素系は、下記の性質を有する幾つかの酵素から構成される：
【００１６】
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）は、スーパーオキシドラジカルを過酸化物に変換することにより破壊する。次に過酸化物を別の酵素系に作用させる。低濃度のＳＯＤは好気的呼吸により連続して産生される。ヒトにおいて３種のＳＯＤが同定されており、それぞれ補助因子としてＣｕ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｎ又はＮｉを含有する。３つの形態のヒトＳＯＤが下記のように分布され、細胞基質Ｃｕ−Ｚｎ ＳＯＤ、ミトコンドリアＭｎ−ＳＯ及び細胞外ＳＯＤである。
【００１７】
カタラーゼは、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を水とＯ2に変換するのに非常に効率的である。過酸化水素は、好気性生物において酵素的に異化される。カタラーゼは、また、種々のヒドロペルオキシド（ＲＯＯＨ）の還元に触媒作用を及ぼす。
【００１８】
グルタチオンペルオキシダーゼは、セレンを補助因子として使用し、グルタチオンを使用してヒドロペルオキシド（ＲＯＯＨ及びＨ2Ｏ2）の還元に触媒作用を及ぼし、それにより酸化損傷から細胞を保護する。
【００１９】
細胞の非酵素的抗酸化剤防御は、食事中に合成されるか又は供給される分子を含む。
【００２０】
抗酸化剤分子は、異なる細胞区画に存在する。例えば、解毒酵素はフリーラジカルを除去し、細胞の寿命にとって必須である。３つの最も重要な種類の抗酸化剤化合物は、カロチノイド、ビタミンＣ及びビタミンＥである（Gilgun-Sherki, Melamedら, 2001）。
【００２１】
脳虚血及びその結果として起こる影響により誘導されるアポトーシスの現象を回避するため、本発明者たちは、前記の危険因子の進展を防止することができ、予防的神経保護活性を行うばかりでなく、脳虚血の急性期における積極的な神経保護を提供することができる新規化合物を開発した。
【００２２】
発明者たちは、また、ＰＰＡＲ活性化剤、抗酸化剤及び抗炎症の特性を同時に示す本発明の化合物を示し、したがって該化合物は、脳虚血における重要な治療的又は予防的潜在能力を有する。
【００２３】
したがって本発明は、脳虚血の予防的又は治療的処置に有用な、有利な薬理学的性質を示す化合物のファミリーを提案する。本発明は、また、該誘導体の製造方法を提供する。
【００２４】
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
【００２５】
【化２】
【００２６】
〔式中、
Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基を表し、
Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子、ＣＯ−Ｒ基、又は式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基を表し（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）、
Ｒは、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基であり、
Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、
ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、
Ｒ′は、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子、好ましくは１０〜２３個の炭素原子及び場合により酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である〕により表される。
【００２７】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ基は、同一であるか又は異なって、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、1〜２０個の炭素原子、さらにより好ましくは７〜１７個の炭素原子、またさらに好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ基は、また、同一であるか又は異なって、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル又はヘキシル基のような、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキルを表すことができる。
【００２８】
本発明の特別の態様において、式（Ｉ）により表される化合物は、置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの１又は２個がＣＯＣＨ3基であることを特徴とする。
【００２９】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ′基は、同一であるか又は異なって、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１２〜２３個の炭素原子、さらに好ましくは１３〜２０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。有利には、Ｒ′は、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１４〜１７個の炭素原子、よりさらに有利には１４個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。
【００３０】
Ｒ又はＲ′の飽和長鎖アルキル基の具体的な例は、特にＣ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ15Ｈ31、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35基である。Ｒ又はＲ′の不飽和長鎖アルキル基の具体的な例は、特にＣ14Ｈ25、Ｃ14Ｈ27、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45基、又はエイコサペンタン酸（ＥＰＡ）Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）及びドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）のアルキル鎖である。
【００３１】
分岐長鎖アルキル基の例は、特に（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）−（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2又は（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3基〔ｘは、１〜１１と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕である。
【００３２】
アルキル基Ｒ又はＲ′は、また、環状基を含んでもよい。環状基の例は、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルである。
【００３３】
前記で示されるように、アルキル基Ｒ又はＲ′は、同一であるか又は異なって、場合により１個以上の置換基で置換されていることができる。置換基は、好ましくはハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）及び−ＯＨ、＝Ｏ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、−ＣＨ2−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ3、−ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3及びＣＯＯＺ基（Ｚは、水素原子又は好ましくは１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）からなる群より選択される。
【００３４】
本発明は、また、該化合物の光学及び幾何異性体、そのラセミ体、塩、水和物、並びにこれらの混合物に関する。
【００３５】
式（Ｉａ）により表される化合物は、Ｒ１、Ｒ２又はＲ３基のうちのただ１個が水素原子を表す、本発明の式（Ｉ）に対応する化合物である。
【００３６】
式（Ｉｂ）により表される化合物は、Ｒ１、Ｒ２又はＲ３基のうちの２個が水素原子を表す、本発明の式（Ｉ）に対応する化合物である。
【００３７】
本発明の特別の態様によると、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子又はとりわけＣＯ−Ｒ基を表す。
【００３８】
本発明は、また、式（Ｉ）により表される化合物のプロドラッグを包含し、それは、被検者に投与された後、式（Ｉ）により表される化合物に変換される、及び／又は式（Ｉ）により表される化合物と同様の治療上の活性を示す、式（Ｉ）により表される化合物の代謝産物に変換される。
【００３９】
本発明は、また、脳虚血又は脳出血性発作のような脳血管病変を治療する医薬組成物の調製のための、式（Ｉ）により表される化合物の使用に関する。
【００４０】
本発明は、また、上記で定義された一般式（Ｉ）により表される化合物を、可能であれば別の治療活性剤と共に、薬学的に許容されうる支持体中に含む医薬組成物に関わる。特に、該組成物は、脳虚血又は脳出血性発作のような脳血管病変を治療することが意図される。
【００４１】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基では、Ｘは、好ましくは硫黄又はセレン原子、有利には硫黄原子を表す。
【００４２】
更に、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎは、好ましくは０〜３の間に含まれ、とりわけ０〜２の間に含まれ、特に０と等しい。
【００４３】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ′は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される、１個以上、好ましくは０、１又は２個、より好ましくは０又は１個のヘテロ基を含んでもよい。
【００４４】
本発明のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基の特定の例は、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である。
【００４５】
この点について、本発明は、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基を含む式（Ｉ）により表される新規化合物を開発した。したがって本発明は、その目的として、
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
から選択される式（Ｉ）により表される化合物を有する。
【００４６】
本発明の精神において好ましい他の化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄若しくはセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和及び直鎖のアルキル基である）を表す、上記の一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００４７】
この点において、本発明の特定の化合物は、Ｒ２が式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（式中、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、上記で定義された基である）を有する基であるものである。
【００４８】
本発明の他の特定の化合物は、Ｇ基が有利には酸素原子又はＮ−Ｒ４基、好ましくは酸素原子を表す一般式（Ｉ）により表される化合物である。更に、ＧがＮ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表す。該化合物において、Ｒ２は有利には、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す。
【００４９】
別の態様において、本発明の特定の化合物は、Ｇ基が硫黄原子を表す一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００５０】
本発明の他の特定の化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの２個が、同一であるか又は異なって、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表す）であるものである。
【００５１】
本発明の他の好ましい化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、同一であるか又は異なって、好ましくは同一で、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１７個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和及び直鎖のアルキル基であり、ここでｎは、好ましくは０〜３に間に含まれ、特に０と等しい）を表す、一般式（Ｉ）により表される化合物である。より詳細には、他の好ましい化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である、一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００５２】
本発明の好ましい化合物の例は、図１Ａ及び１Ｂで提示される。
【００５３】
本発明の別の目的は、上記記載の式（Ｉ）により表される少なくとも１個の化合、特に下記：
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
から選択される式（Ｉ）を有する少なくとも１個の化合物を、薬学的に許容されうる支持体中に含むあらゆる医薬組成物に関する。
【００５４】
有利には、脳血管性の病理、より詳細には脳虚血又は脳血管性発作の治療又は予防のための医薬組成物である。事実、驚くべき事に、式（Ｉ）で表される化合物は、同時に、ＰＰＡＲ活性化剤、抗酸化剤、及び抗炎症性特性を示し、かつ脳虚血において予防的及び治療的神経保護活性を示すことが見出された。
【００５５】
本発明は、また、ヒト又は動物の治療又は予防方法の実施が意図される医薬組成物の調製における、上記で定義された化合物の使用に関する。
【００５６】
本発明は、更に、脳血管病変、より詳細には脳虚血を治療する方法であって、被検者に、特にヒトに式（Ｉ）により表される化合物又は上記で定義された医薬組成物の有効用量を投与することを含む方法に関する。
【００５７】
有利には、使用される式（Ｉ）により表される化合物は、上記と同義のものである。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、有利には、１つ以上の薬学的に許容されうる賦形剤又はビヒクルを含む。例としては、当業者に既知である、薬学的に適合されうる生理的な等張性の緩衝されている食塩水などが挙げられる。本組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、界面活性剤、防腐剤などから選択される、１つ以上の作用物質又はビヒクルを含んでいてもよい。製剤（液体及び／又は注射用及び／又は固体）に使用してよい作用物質又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油などが含まれる。組成物は、可能であれば、持続性及び／又は遅延性放出を可能にする医薬剤形又は装置により、注射用懸濁剤、ゲル剤、油剤、錠剤、坐剤、散剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、エアゾールなどとして配合されうる。この種類の処方には、セルロース、カーボネート又はデンプンのような作用物質が有利に使用される。
【００５９】
本発明の化合物又は組成物は、異なる方法及び異なる剤形で投与されてよい。例えば、これらは、経口経路により、非経口的に、吸入により、あるいは例えば、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、動脈内経路などのような注射により、全身的に投与してよい。注射には、本化合物は一般に、液体懸濁剤の剤形に調製され、これはシリンジにより、又は例えば点滴により注入してよい。この点に関して、本化合物は一般に、当業者には知られている、薬学的に適合されうる生理的な等張性の緩衝された食塩水などに溶解される。例えば、本組成物は、分散剤、可溶化剤、乳化剤、安定剤、界面活性剤、防腐剤、緩衝剤などから選択される、１つ以上の作用物質又はビヒクルを含んでいてもよい。液体及び／又は注射用処方に使用することができる作用物質又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油、リポソームなどを含んでもよい。
【００６０】
したがって本組成物は、ゲル剤、油剤、錠剤、坐剤、粉剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、エアゾールなどの剤形で、可能であれば徐放及び／又は遅延放出を可能にする医薬剤形又は装置により投与してよい。この種類の処方には、セルロース、カーボネート又はデンプンのような作用物質が有利に使用される。
【００６１】
本化合物は、使用される作用物質又はビヒクルが、好ましくは水、ゼラチン、ゴム、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、油、ポリアルキレングリコールなどからなる群より選択される場合には、経口投与してもよい。
【００６２】
非経口投与には、本化合物は、特に水、油又はポリアルキレングリコールを含む、好ましくは液剤、懸濁剤又は乳剤の剤形で投与されるが、ここには保存料、安定剤、乳化剤などの他に、浸透圧を調整するための塩、緩衝剤などを加えることもできる。
【００６３】
注入速度及び／又は注入用量は、患者、病理、投与の様式などに応じて当業者により調整されてよいことが理解される。典型的には、本化合物は、１用量当たり１μg〜２ｇ、好ましくは１用量当たり０．１mg〜１ｇの範囲の用量で投与される。用量は、場合に応じて、１日に１回又は１日に数回投与してもよい。更には、本発明の組成物は、また、他の活性物質又は活性剤を含んでいてもよい。
【００６４】
本発明は、また、式（Ｉ）により表される上記化合物の製造方法に関する。
【００６５】
本発明の化合物は、当業者に既知の化学反応の組合せを利用して、市販の製品から調製してもよい。本発明は、また、上記で定義された化合物の製造方法に関する。
【００６６】
本発明の第１の方法では、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素又は硫黄原子であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、それぞれ酸素又は硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｃｌ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）からなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物から、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で得られる。
【００６７】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、異なる方法で得てもよい。
【００６８】
第１の実施態様では、グリセロール分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ１〔式中、Ａ１は、例えば、ＯＨ、Ｃｌ及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）からなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させる。該反応により、いわゆる対称化合物（ここで、Ｒ１及びＲ３は、同じ意味を有する）が合成できる。該反応は、例えば、(Feuge, Grosら, 1953), (Gangadhar, Subbaraoら, 1989), (Han, Choら, 1999) 又は (Robinson 1960)で記載されているプロトコールを適用することにより実施してもよい。
【００６９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、また、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（この式（Ｉ）の特定の形の化合物は、式IVにより表される化合物と称される）、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物から、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で得てもよい。該反応は、例えば、(Daubert, Spieglら, 1943)、(Feuge 及び Lovegren 1956)、(Katoch, Trivediら, 1999)、(Strawn, Martellら, 1989)又は(Strawn, Martellら, 1989)において記載されているプロトコールに従って有利に実施される。
【００７０】
上記で記載された式IVに対応する化合物は、以下を含む方法により調製してよい：
【００７１】
ａ）一般式（II）：
【００７２】
【化３】
【００７３】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（III）：
【００７４】
【化４】
【００７５】
〔式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること；及び
【００７６】
ｂ）化合物（III）を、酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、ホウ酸、硫酸など）により脱保護することによって、上記で定義された一般式（IV）に対応する化合物を得ること。
【００７７】
本発明の別の特定の方法により、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（化合物IV）から、以下の工程により得てもよい：
【００７８】
ａ）化合物（IV）を、化合物ＰｘＥ（ここで、Ｐｘは、保護基であり；そしてＥは、例えば、ＯＨ及びハロゲンからなる群より選択される反応性基である）と反応させることにより、一般式（Ｖ）〔式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物を得る工程。有利には、本反応は、GaffneyとReese (1997) に記載された方法を適用することにより実行してよい（ここで、ＰｘＥは、化合物９−フェニルキサンテン−９−オール又は９−クロロ−９−フェニルキサンテンを表すことができる）。
【００７９】
【化５】
【００８０】
ｂ）式（Ｖ）を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（VI）〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＰｘは、保護基である〕に対応する化合物を得る工程。
【００８１】
【化６】
【００８２】
ｃ）化合物（VI）を当業者に既知の従来の方法で脱保護することにより、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得る工程。
【００８３】
別の特定の発明の方法によると、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、以下を含む方法により得られる：
【００８４】
ａ）式（VII）：
【００８５】
【化７】
【００８６】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（VIII）：
【００８７】
【化８】
【００８８】
〔式中、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること；及び
【００８９】
ｂ）式（VIII）により表される化合物を酸性媒体中で、又は接触水素化により脱保護することによって、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物を得ること。
【００９０】
有利には、上記の工程は、(Bodai, Novakら, 1999)、(Paris, Garmaiseら, 1980)、(Scriba 1993) 又は (Seltzman, Flemingら, 2000) で記載されているプロトコールに従って実施してよい。
【００９１】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得てもよい：
【００９２】
【化９】
【００９３】
ａ）化合物（IX）を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、第１の化合物とは独立に、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第２の化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【００９４】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９５】
該方法は、有利には、(Aveta, Brandtら, 1986)で記載されたプロトコールに従って実施される。
【００９６】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子であり、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得てもよい：
【００９７】
ａ）化合物（IX）を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と化学量論量で、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【００９８】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９９】
式（IX）により表される化合物は、以下を含む方法により調製してもよい：
【０１００】
ａ）２−ハロゲノマロン酸ジメチルをトリチルチオールと反応させることにより、式Ｘにより表される化合物を得ること。
【０１０１】
【化１０】
【０１０２】
ｂ）アセテート官能基を当業者に既知の還元剤で還元すること。
【０１０３】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を表す〕により表される化合物は、また、下記の方法で得てもよい（ダイアグラム１も参照すること）：
【０１０４】
ａ）式Ｖを有する化合物を、式：ＬＧ−Ｅ〔式中、Ｅは、ハロゲンを表し、そしてＬＧは、例えば、メシル、トシルなどからなる群より選択される反応性基である〕の化合物と反応させて、一般式XI〔式中、Ｐｘは、保護基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０５】
ｂ）式XIを有する化合物を、式：Ａｃ−Ｓ-Ｂ+〔式中、Ａｃは、短アシル基、好ましくはアセチル基を表し、そしてＢは、例えば、ナトリウム又はカリウム、好ましくはカリウムからなる群より選択される対イオンである〕の化合物と反応させて、式XIIにより表される化合物を得ること。該反応は、有利には、(Gronowitz, Herslofら, 1978)で記載されたプロトコールを適用して実施される。
【０１０６】
ｃ）化合物（XII）の硫黄原子を当業者に既知の条件で脱保護して、一般式（XIII）により表される化合物を得ること。
【０１０７】
ｄ）一般式（XIII）により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させて、一般式（XIV）〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０８】
ｅ）式（XIV）の化合物を当業者に既知の従来の条件で脱保護して、本発明の式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、硫黄原子であり、（ii）Ｒ３は、水素原子であり、そして（iii）Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０９】
ｆ）本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を、本発明の式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、硫黄原子であり、（ii）Ｒ３は、水素原子であり、そして（iii）Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物（特に、上記工程ｅ）で得られる化合物）と、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物とを、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させて得ること。
【０１１０】
【化１１】
【０１１１】
別の実施態様によると、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、下記の方法で得てもよい：
【０１１２】
ａ）本発明の一般式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、酸素原子であり、（ii）Ｒ２は、水素原子を表し、そして（iii）Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、上記で定義されたＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を、ヨウ素と、当業者に既知の活性化剤の存在下で反応させて、式（XV）〔式中、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物を得ること。
【０１１３】
【化１２】
【０１１４】
ｂ）式（XV）を有する化合物を、チオカルボン酸と、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【０１１５】
式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（化合物XVI）から、以下の方法により得られる：
【０１１６】
化合物XVIを、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、第１の化合物とは独立に、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第２の化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【０１１７】
該方法は、有利には、(Terradas 1993）で記載されたプロトコールに従って実施される。
【０１１８】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１及びＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＲ３は、水素原子である〕により表される化合物は、化合物XIIと式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物とを化学量論量で、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより得てもよい。
【０１１９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIａ）は、異なる方法で得てもよい。
【０１２０】
第１の方法では、２−アミノプロパン−１，３−ジオールの分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させる。
【０１２１】
該反応は、例えば、(Shaban 1977), (Kurfurst, Roigら, 1993)、(Harada, Morieら, 1996)、(Khanolkar, Abadjiら, 1996)、(Daniher 及び Bashkin 1998) 及び (Putnam 及び Bashkin 2000)で記載されたプロトコールを適用して実施してよい。
【０１２２】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIａ）は、また、以下の方法により得てもよい：
【０１２３】
ａ）式（XVII）により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることによって、一般式（XVIII）：
【０１２４】
【化１３】
【０１２５】
により表される化合物を得ること。
【０１２６】
【化１４】
【０１２７】
ｂ）化合物（XVIII）を脱保護すること。
【０１２８】
該方法は、有利には、(Harada, Morieら, 1996)で記載されたプロトコールに従って実施される。
【０１２９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子ではない）であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIｂ）は、以下の方法により得てもよい：
【０１３０】
ａ）式（XVII）を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることによって、一般式（XVIII）：
【０１３１】
【化１５】
【０１３２】
により表される化合物を得ること。
【０１３３】
【化１６】
【０１３４】
ｂ）化合物（XVIII）を、Ｒ４−Ａ４型（ここで、Ａ４は、Ｃｌ又はＢｒからなる群より選択される反応性基である）の化合物と、塩基性媒体中で反応させること。
【０１３５】
ｃ）化合物（XVIII）を脱保護すること。
【０１３６】
本発明の実行可能性、実現性及び他の利点は、以下の実施例において更に詳述されるが、これらの実施例は、説明の目的で与えられるものであり、限定を目的とするものではない。
【０１３７】
実施例：
文書のより容易な理解のために、活性の測定及び評価に関わる実施例で使用される本発明の化合物は、次にのように省略され、例えば「Ｅｘ４ｇ」は、その調製が実施例４ｇで記載されている本発明の化合物を示す。
【０１３８】
０．２mm厚のMERCKシリカゲル６０Ｆ254で被覆されたプレートで薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実施した。保持因子はＲｆと省略される。
粒径４０〜６３μm（Merck参照番号９３８５−５０００）を有するシリカゲル６０でカラムクロマトグラフィーを実施した。
キャピラリー法によりBuchiＢ５４０装置で融点（ＭＰ）を測定した。赤外線（ＩＲ）スペクトルをBruker Fourier変換スペクトロメーター（Vector 22）で記録した。
Bruker ＡＣ３００スペクトロメーター（３００MHz）で核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを記録した。各信号は、その化学シフト、強度、多重度（注：一重項はｓ、広帯一重項はｓｌ、二重項はｄ、分離二重項はｄｄ、三重項はｔ、分離三重項はｔｄ、五重項はquint及び多重項はｍ）、及びその結合定数（Ｊ）により同定された。
Perkin Elmer Sciex API 1（ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化質量分析（ElectroSpray lonization Mass Spectrometry））又はApplied Biosystems Voyager DE-STR製のMALDI-TOF型（マトリックス補助レーザー脱着／イオン化−飛行時間（Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization - Time Of Flight））により質量スペクトル（ＭＳ）を測定した。
【０１３９】
実施例１：脂肪酸誘導体の調製
実施例１ａ：テトラデシルチオ酢酸の調製
水酸化カリウム（３４．３０ｇ、０．６１１mol）、メルカプト酢酸（２０．９ml、０．２９４mol）及び１−ブロモテトラデカン（５０ml、０．１８４mol）をこの順序でメタノール（４００ml）に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。次に水（８００ml）に溶解した濃塩酸溶液（６０ml）を反応混合物に加えた。テトラデシルチオ酢酸が沈殿した。この混合物を室温で一晩撹拌した。次に沈殿物を濾過し、水で５回洗浄して、デシケーター中で乾燥した。この生成物をメタノール中で再結晶した。
【０１４０】
【表１】
【０１４１】
実施例１ｂ：４−（ドデシルチオ）ブタン酸の調製
ドデカンチオール（２．０１ｇ、１０mmol）及びブロモ酪酸エチル（１．９７１ｇ、１０mmol）を不活性雰囲気下、室温で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウム（１．３６ｇ、２１mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を還流下で３時間加熱した。エタノールを真空下で留去した。残渣を水にとって、酸性にした。形成された沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥した。
【０１４２】
【表２】
【０１４３】
実施例１ｃ：６−（デシルチオ）ヘキサン酸の調製
デカンチオール（４．５７ｇ、２５mmol）及び４−ブロモ酪酸（５ｇ、２５mmol）を不活性雰囲気下、室温で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウムをゆっくりと加えた。反応混合物を３時間還流した。エタノールを真空下で留去した。残渣を水にとって、酸性にした。形成された沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥した。
【０１４４】
【表３】
【０１４５】
実施例１ｄ：テトラデシルセレノ酢酸の調製
二セレン化テトラデシルの調製
セレン（１．１９ｇ、１５mmol）を不活性雰囲気下、ＴＨＦ／水の１：１混合物（５０ml）に加えた。氷浴中で反応混合物を冷却後、四水素化ホウ素ナトリウム（１．３２５ｇ、３５mmol）をゆっくりと加えた。セレンの第２部（１．１９ｇ、１５mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次に還流下で加熱することにより、全ての試薬を溶解した。テトラヒドロフラン２５mlに溶解したブロモテトラデカン（９ml、３０mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次にジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。生成物を、更に精製することなく使用した。
【０１４６】
【表４】
【０１４７】
テトラデシルセレノ酢酸の調製
不活性雰囲気で、二セレン化ジテトラデシル（８．５ｇ、１７mmol）をテトラヒドロフラン／水（１５０ml／５０ml）の混合物に溶解して、氷浴中で冷却した。四水素化ホウ素ナトリウム（２．９ｇ、６１mmol）をゆっくりと加え（溶液が白くなる）、続いてテトラヒドロフラン／水の混合物（２５ml／２５ml）に溶解したブロモ酢酸（８．５ｇ、６１mmol）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。次に反応混合物をエーテルで抽出して、水相を酸性にした。得られた沈殿物を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１４８】
【表５】
【０１４９】
実施例１ｅ：テトラデシルスルホキシ酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５ｇ、１７．４mmol）をメタノール／ジクロロメタン（１６０ml／８０ml）の混合物に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却し、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（Oxone）（登録商標）（１２．８ｇ、２１mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に形成された沈殿物を水切りし、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１５０】
【表６】
【０１５１】
実施例１ｆ：６−（デシルスルホキシ）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｅ）に従って調製した。
【０１５２】
【表７】
【０１５３】
実施例１ｇ：テトラデシルスルホニル酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５ｇ、１７．４mmol）をメタノール／ジクロロメタン（１６０ml／８０ml）の混合物に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却し、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（Oxone）（登録商標）（２１．８ｇ、３５mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に形成された沈殿物を水切りし、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１５４】
【表８】
【０１５５】
実施例１ｈ：６−（デシルスルホニル）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｇ）に従って調製した。
【０１５６】
【表９】
【０１５７】
実施例１ｉ：ドコシルチオ酢酸の調製
本生成物は、メルカプト酢酸及びブロモドコサンから上述の手順（実施例１ａ）に従って得た。
【０１５８】
【表１０】
【０１５９】
実施例２：モノアシルグリセロールの調製
実施例２ａ：1−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−テトラデシルチオアセチル−２，３−イソプロピリデングリセロールの調製
氷浴に浸したフラスコ中で、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（４ｇ、１３．８６mmol）をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、次にＥＤＣｌ（２．６５８ｇ、１３．８６mmol）、ジメチルアミノピリジン（１．６９４ｇ、１３．８６mmol）及びソルケタール（１．７２ml、１３．８６mmol）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ塩酸水溶液、次に１０％重炭酸ナトリウム水溶液、そして最後に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で留去した。残留油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン １：９）により精製した。生成物を、黄色の油状物として得た。
【０１６０】
【表１１】
【０１６１】
1−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−テトラデシルチオアセチル−２，３−イソプロピリデングリセロール（４．１６３ｇ、１０．３５６mmol）を酢酸（６０ml）に溶解し、室温で撹拌した。１１日間の反応後、反応混合物を水に希釈し、次に酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を留去した。得られた白色の粉末をヘプタン中で再結晶した。
【０１６２】
【表１２】
【０１６３】
実施例２ｂ：１−パルミトイルグリセロールの調製
この化合物は、ソルケタール及びパルミチン酸から出発して上述の手順（実施例２ａ）に従って合成した。
【０１６４】
１−パルミトイル−（２，３−イソプロピリデン）グリセロール
【０１６５】
【表１３】
【０１６６】
１−パルミトイルグリセロール
【０１６７】
【表１４】
【０１６８】
実施例２ｃ：２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ベンジリデングリセロールの調製
グリセロール（３０ｇ、０．３２６mol）、ベンズアルデヒド（３４．５ｇ、０．３２６mol）及びｐ−トルエンスルホン酸（５０mg）をトルエン３５０mlに溶解して、デーン・シュターク（Dean-Stark）装置で１８時間還流した。反応混合物を乾燥した。残留生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：シクロヘキサン／酢酸エチル ８：２〜７：３）により精製し、再結晶した。
【０１６９】
【表１５】
【０１７０】
２−テトラデシルチオアセチル−１，３−ベンジリデングリセロールの調製
氷浴に浸したフラスコ中で、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（０．８００ｇ、２．７７４mmol）をテトラヒドロフラン（７５ml）に溶解し、続いてＥＤＣｌ（０．５３２ｇ、２．７７４mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．３３９ｇ、２．７７４mmol）及び１，３−ベンジリデングリセロール（０．５ｇ、２．７７４mmol）をこの順序で加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ塩酸、次に１０％炭酸カリウム溶液、そして最後に飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥した。残渣を石油エーテルにとった。形成された沈殿物を濾過し、次にシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン ２：８）により精製して、目的化合物を白色の粉末として生成した。
【０１７１】
【表１６】
【０１７２】
２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
２−テトラデシルチオアセチル−１，３−ベンジリデングリセロール（０．５７６ｇ、１．２７８mmol）をジオキサンとホウ酸トリエチルの５０：５０（V/V）混合物に溶解し、続いてホウ酸（０．３１７ｇ、５．１１２mmol）を加えた。反応混合物を１００℃で４時間加熱した。ホウ酸２当量（０．１５８ｇ、２．５５６mmol）を加え、続いて反応の５．５時間後及び７時間後に２当量を加えた。反応２４時間後、ホウ酸トリエチルを留去した。残渣を酢酸エチルにとって、水で洗浄した。水相を重炭酸ナトリウムで中和し、次にジクロロメタンで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン ５：５）により精製した。
【０１７３】
【表１７】
【０１７４】
実施例３：１，３−ジアシルグリセロールの調製
実施例３ａ：１，３−ジパルミトイルグリセロールの調製
グリセロール（１０ｇ、０．１０９mol、１当量）、パルミチン酸（５５．６９ｇ、０．２１７mol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４４．７７ｇ、０．２１７mol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２６．５１ｇ、０．２１７mol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。形成されたジシクロヘキシル尿素を濾過し、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン）により精製した。
【０１７５】
【表１８】
【０１７６】
実施例３ｂ：１，３−ジリノレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びリノール酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１７７】
【表１９】
【０１７８】
実施例３ｃ：１，３−ジステアリルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びステアリン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１７９】
【表２０】
【０１８０】
実施例３ｄ：１，３−ジオレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びオレイン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１８１】
【表２１】
【０１８２】
実施例３ｅ：１，３−ジテトラデカノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びテトラデカン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１８３】
【表２２】
【０１８４】
実施例３ｆ：１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１８５】
【表２３】
【０１８６】
実施例３ｇ：１−オレイル−３−パルミトイルグリセロールの調製
１−パルミチン酸グリセロール（実施例２ｂ）（５．５１６ｇ、０．０１７mol）をジクロロメタン（５００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（５．１６５ｇ、０．０２５mol）、ジメチルアミノピリジン（３．０５８ｇ、０．０２５mol）及びオレイン酸（４．７１４ｇ、０．０１７mol）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、真空下で濾液を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン）により精製すして、目的化合物を白色の固体として得た。
【０１８７】
【表２４】
【０１８８】
実施例３ｈ：１，３−ジアセチルグリセロールの調製
グリセロール（３０ｇ、０．３２６mol）をジクロロメタン（３００ml）に加え、続いてピリジン（７９ml、０．９７７mol）を加え、次に無水酢酸（６１．５ml、０．６５１mol）を滴加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。混合物をジクロロメタンにとった。有機相を、１Ｎ塩酸で、次に１０％重炭酸ナトリウムで、次に飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固して無色の油状物を得て、それを更に精製しないで使用した。
収率：３４％
ＩＲ：νＣＯエステル１７４２cm-1
【０１８９】
実施例３ｉ：１，３−ジオクタノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びオクタン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１９０】
【表２５】
【０１９１】
実施例３ｊ：１，３−ジウンデカノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びウンデカン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１９２】
【表２６】
【０１９３】
実施例４：１，２，３−トリアシルグリセロールの調製
実施例４ａ：１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
グリセロール（１ｇ、１０．８６mmol）をジクロロメタン（２００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．８４ｇ、３８．０１mol）、ジメチルアミノピリジン（４．６４ｇ、３８．０１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（９．４０ｇ、３２．５８mmol）を加えた。この混合物を室温で撹拌した。４８時間の反応後、ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製した。１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールを、白色の粉末として得た。
【０１９４】
【表２７】
【０１９５】
実施例４ｂ：１，２，３−トリ−（４−ドデシルチオ）ブタノイルグリセロールの調製
この化合物は、４−（ドデシルチオ）ブタン酸（実施例１ｂ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０１９６】
【表２８】
【０１９７】
実施例４ｃ：１，２，３−トリ−（６−デシルチオ）ヘキサノイルグリセロールの調製
この化合物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０１９８】
【表２９】
【０１９９】
実施例４ｄ：１，２，３−トリテトラデシルスルホキシアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホキシ酢酸（実施例１ｅ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２００】
【表３０】
【０２０１】
実施例４ｅ：１，２，３−トリ−（テトラデシルスルホニル）アセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホニル酢酸（実施例１ｇ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２０２】
【表３１】
【０２０３】
実施例４ｆ：１，２，３−トリ−テトラデシルセレノアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルセレノ酢酸（実施例１ｄ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２０４】
【表３２】
【０２０５】
実施例４ｇ：１，３−ジパルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ジパルミトイルグリセロール（実施例３ａ）（５．６４ｇ、９．９mmol、１当量）、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５．７４ｇ、１９．８mmol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１ｇ、１９．８mmol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２．４２ｇ、１９．８mmol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。形成されたジシクロヘキシル尿素を濾過し、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製した。
【０２０６】
【表３３】
【０２０７】
実施例４ｈ：１，３−ジリノレイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジリノレイルグリセロール（実施例３ｂ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。生成物を、無色の粘性油状物として得た。
【０２０８】
【表３４】
【０２０９】
実施例４ｉ：１，３−ジステアリル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジステアリルグリセロール（化合物３ｃ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２１０】
【表３５】
【０２１１】
実施例４ｊ：１，３−オレオイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジオレオイルグリセロール（化合物３ｄ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。生成物を、無色の粘性油状物として得た。
【０２１２】
【表３６】
【０２１３】
実施例４ｋ：１，３−ジテトラデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジテトラデカノイルグリセロール（化合物３ｅ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２１４】
【表３７】
【０２１５】
実施例４ｌ：１−パルミトイル−２，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−パルミチン酸グリセロール（実施例２ｂ）（４．８０４ｇ、１４mol）をジクロロメタン（３００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．４９８ｇ、３６mmol）、ジメチルアミノピリジン（４．４３９ｇ、０．０３６mol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（８．３８６ｇ、２９mmol）を加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を乾燥した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製して、目的化合物を白色の粉末として得た。
【０２１６】
【表３８】
【０２１７】
実施例４ｍ：１−オレイル−３−パルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−オレイル−３−パルミトイルグリセロール（実施例３ｇ）（２ｇ、３mmol）をジクロロメタン（１５０ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．０４０ｇ、５mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．６１６ｇ、５mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１．４５５ｇ、５mmol）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製して、目的化合物を油状物として得た。
【０２１８】
【表３９】
【０２１９】
実施例４ｎ：１，３−ジパルミトイル−２−ドコシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジパルミトイルグリセロール（実施例３ａ）及びドコシルチオ酢酸（実施例１ｉ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２０】
【表４０】
【０２２１】
実施例４ｏ：１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロール（実施例３ｆ）及びパルミチン酸から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２２】
【表４１】
【０２２３】
実施例４ｐ：１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジアセチルグリセロール（実施例３ｈ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２４】
【表４２】
【０２２５】
実施例４ｑ：１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジオクタノイルグリセロール（実施例３ｉ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２６】
【表４３】
【０２２７】
実施例４ｒ：１，３−ッジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジウンデカノイルグリセロール（実施例３ｊ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２８】
【表４４】
【０２２９】
実施例５：２−アミノグリセロール誘導体の調製
実施例５ａ：２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオールの調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（２．８７８ｇ、１０mmol）及び２−アミノ−１，３−プロパンジオール（１ｇ、１１mmol）をフラスコに入れて、１９０℃で１時間加熱した。室温まで冷却後、媒体をクロロホルムにとって、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、次に留去して、黄土色の固体残渣を形成した。この残渣をジエチルエーテル中で１２時間撹拌した。生成物を、濾過により、白色の粉末の形態で単離した。
【０２３０】
【表４５】
【０２３１】
実施例５ｂ：２−テトラデシルチオアセトアミド−１，３−ジテトラデシルチオアセチルオキシプロパンの調製
２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオール（実施例５ａ）（１ｇ、２．７７mmol）をジクロロメタン（１８０ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．４２７ｇ、６．９１mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．８４５ｇ、６．９１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１．９９５ｇ、６．９１mmol）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ７：３）により精製した。目的化合物を、白色の粉末として得た。
【０２３２】
【表４６】
【０２３３】
実施例６：２−チオグリセロール誘導体の調製
実施例６ａ：２−（テトラデシルチオ）チオ酢酸の調製
Ｓ−トリフェニルメチル２−（テトラデシルチオ）チオアセテートの調製
トリフェニルメチルチオール（９．５８ｇ、３５mmol）をジクロロメタンに溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．１５ｇ、３５mmol）、ジメチルアミノピリジン（４．２４ｇ、３５mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１０ｇ、３５mmol）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシルカルボジイミドを濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を乾燥した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン １：９）により精製した。
【０２３４】
【表４７】
【０２３５】
２−（テトラデシルチオ）チオ酢酸の調製
Ｓ−トリフェニルメチル２−（テトラデシルチオ）チオアセテート（４．７１５ｇ、９mmol）をジクロロメタン（１５０ml）中の酢酸水銀（５．４９５ｇ、１７mmol）の懸濁液に、冷却中で加えた。反応混合物を１８時間撹拌した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、高温ジクロロメタンで洗浄した。濾液を留去して、粉末状の残渣を得て、それを無水エタノールにとって、濾過した。濾液を濃縮すると、黄色の油状物を得て、それを更に精製しないで使用した。
Ｒｆ（ジクロロメタン／メタノール ９：１）：０．５８
【０２３６】
実施例６ｂ：２−ヨード−１，３−ジテトラデシルチオアセトキシプロパンの調製
１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロール（実施例３ｆ）（２ｇ、３mmol）をトルエン（１８０ml）に溶解し、次にイミダゾール（０．５３８ｇ、８mmol）、トリフェニルホスフィン（２．０７２ｇ、８mmol）及びヨウ素（１．６０４ｇ、６mmol）を加えた。反応混合物を室温で撹拌し、反応の進行を、薄層クロマトグラフィーで追跡した。２０時間の反応の後、亜硫酸ナトリウムで飽和された溶液を、媒体が完全に平衡するまで加えた。媒体を沈降させ、水相をトルエンで抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を留去した。得られた残渣（４．４ｇ）をPuriflashカラム（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン １：９、次に３：７）のクロマトグラフィーにより精製した。
【０２３７】
【表４８】
【０２３８】
実施例６ｃ：１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオプロパンの調製
２−ヨード−１，３−ジテトラデシルチオアセトキシプロパン（実施例６ｂ）（２００mg、０．２７mmol）及び２−（テトラデシルチオ）チオール酢酸（実施例６ａ）（８２mg、０．２７mmol）を蒸留テトラヒドロフラン（３０ml）に溶解した。反応混合物を氷浴で冷却し、その後水素化ナトリウム（２２mg、０．５４mmol）を加えた。この混合物を室温で撹拌した。４８時間後、水素化ナトリウムを加水分解し、テトラヒドロフランを留去した。媒体を酢酸エチルで抽出し、有機相を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、留去した。得られた黄色の油状残渣（１６４mg）を、ショートシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ５：５）により精製して、目的化合物を黄色の油状物として得た。
【０２３９】
【表４９】
【０２４０】
実施例７：インビトロ実験のための本発明の化合物の調製方法
下記実施例で記載されるインビトロ実験を実施するために、本発明の化合物を下記で記載されるように乳剤の形態で調製した。
【０２４１】
Spoonerらにより記載されたように（Spooner, Clarkら, 1988）、本発明の化合物及びホスファチジルコリン（ＰＣ）を含む乳剤を調製した。本発明の化合物をＰＣと４：１（m/m）比でクロロホルム中で混合し、この混合物を窒素下で乾燥し、次に一晩真空留去し、得られた粉末を、０．０１Ｍ ＥＤＴＡを含む０．１６Ｍ ＫＣｌにとって、この脂質粒子を超音波により３７℃で３０分間分散させた。このようにして形成されたリポソームを次に超遠心分離（ＸＬ８０超遠心分離機、Beckman Coulter, Villepinte, France）により２５，０００rpmで４５分間分離することにより、１００nmを超えてキロミクロンに近い大きさを有するリポソームを回収した。陰性対照として使用するために、ＰＣだけからなるリポソームを同時に調製した。
本発明の化合物におけるリポソームの組成は、酵素比色トリグリセリド測定法キットを用いて推定した。この測定法は、脂質較正物質のＣＦＡＳ、参照番号７５９３５０（Boehringer Mannheim GmbH, Germany）で作製した標準曲線に対して実行した。この標準曲線は、１６〜５００μg/mlの範囲の濃度を包含した。滴定プレート（９６ウェル）上に１ウェルにつき各試料希釈液又は較正標準液１００μlを滴下した。次にトリグリセリド試薬、参照番号７０１９１２（Boehringer Mannheim GmbH, Germany）２００μlを各ウェルに加え、プレート全体を３７℃で３０分間インキュベートした。光学密度（ＯＤ）は、分光光度計で４９２nmで読みとった。各試料におけるトリグリセリド濃度は、一次関数：ｙ＝ａｘ＋ｂ〔式中、ｙは、ＯＤを表し、そしてｘは、トリグリセリド濃度を表す〕としてプロットした標準曲線から計算した。
【０２４２】
このようにして調製された、本発明の化合物を含有するリポソームを、実施例９、１０及び１１に記載されているインビトロ実験で使用した。
【０２４３】
実施例８：本発明の化合物の抗酸化特性の評価
Ａ−銅又はアゾビス（２−アミノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）により誘導されたＬＤＬ酸化に対する保護
ＬＤＬの酸化は、アテローム動脈硬化の発症及び進展において主要な役割を演じる、重要な変性である（Jurgens, Hoffら, 1987）。以下のプロトコールにより、化合物の抗酸化特性を証明することができる。他に記載がなければ、全ての試薬はシグマ（Sigma）（St Quentin, France）製である。
ＬＤＬは、Lebeauらで記載された（Lebeau, Furmanら, 2000）ように調製した。試験化合物の溶液は、最終濃度が、１％（V/V）の総エタノール濃度で０．１〜１００μMの範囲になるように、エタノール中１０〜２Ｍで調製し、ＰＢＳで希釈した。
【０２４４】
酸化の前に、透析によりＬＤＬ調製物からＥＤＴＡを除去した。次に、１６．６μM ＣｕＳＯ4又は２mM ＡＡＰＨ １００μlを、ＬＤＬ（１２５μgタンパク質/ml）８００μl及び試験化合物溶液１００μlに加えることにより、酸化反応を３０℃で行った。追跡すべき種であるジエンの形成は、銅（又はＡＡＰＨ）の存在下又は不在下、本化合物により処理した試料中の２３４nmの光学密度により測定した。２３４nmの光学密度は、１０分毎に８時間、サーモスタット付き分光光度計（Kontron Uvikon 930）で測定した。分析は三重に行った。対照試料に対して遅滞期潜伏時間をシフトするならば、化合物は抗酸化活性を有すると考えた。発明者たちは、本発明の化合物が、ＬＤＬ酸化（銅により誘導）を遅延させることを証明したが、このことは、本発明の化合物が、固有の抗酸化活性を有することを示している。図２は、本発明の化合物により得られた結果の一例を表す。
図２ａは、ＬＤＬと本発明の試験化合物とのインキュベーションが、共役ジエンの形成を遅延させたこと示す。ＬＤＬを１０-4Mの本発明の化合物Ｅｘ４ｇ（上記の実施例４ｇで記載された本発明の化合物）と共にインキュベートしたときに２８２分に達した共役ジエン形成の遅延期と比較すると、遅延期は銅単独では１０４分であった。本発明の化合物Ｅｘ４ａも、また、遅延期を２７０分まで伸ばした。該２個の化合物は、それぞれ１７０及び１６０％の遅延期の増加を誘導した。化合物Ｅｘ４ｈ、４ｑ、４ｏ及び２ａは、それぞれ４３、５４、３７及び６７％の遅延期の増加を誘導した。この共役ジエン形成の遅延は、抗酸化剤の特徴である。本発明の化合物Ｅｘ４ｇ及び４ａは、最も顕著な固有の抗酸化特性をもつ化合物であった。
図２ａは、銅の存在下での本発明の化合物とＬＤＬとのインキュベーションが、共役ジエンの形成速度を遅らせたことを示す。この速度は、銅単独では３nmol/分/mg ＬＤＬであり、そして１０-4Mで化合物Ｅｘ４ａを用いると１nmol/分/mg ＬＤＬに減少し、これは酸化速度の６６％の減速に相当する。本発明の化合物Ｅｘ４ｈ及びＥｘ４ｇも、ＬＤＬ酸化速度を遅くし、この場合は、それぞれ２．５及び１．８nmol/分/mg ＬＤＬであった。本発明の化合物Ｅｘ４ｑ、４ｏ及び２ａを用いるＬＤＬのインキュベーションは、ＬＤＬ酸化速度を有意に変えなかった。
本発明の化合物Ｅｘ４ａ、４ｇ及び４ｈは、固有の抗酸化特性を有し、また、銅誘導ＬＤＬ酸化の速度の減速を促した。
図２ｃは、ＬＤＬと銅とのインキュベーションにより、ＬＤＬ １mg当たり４９６nmolの共役ジエンが形成されたことを示す。化合物Ｅｘ４ａ（１０−４M）とのインキュベーションにより、形成された共役ジエンの最大量の６０％の減少となった。化合物Ｅｘ４ｇ及び４ｈ（１０-4M）も、共役ジエンの形成を抑制した。該化合物とＬＤＬとのインキュベーションにより、形成された共役ジエンの最大量の、それぞれ３１及び２４％の減少となった。
【０２４５】
Ｂ−脂質過酸化反応に対して本発明の化合物により与えられる保護の評価：
試験した本発明の化合物は、その調製が上記の実施例に記載されている化合物である。
ＬＤＬ酸化は、ＴＢＡＲＳ法により測定した。
【０２４６】
上述のものと同じ原理により、ＬＤＬをＣｕＳＯ4の存在下で酸化させて、脂質の過酸化を以下のように評価した：
ＴＢＡＲＳは、分光光度法により測定し、脂質ヒドロペルオキシド化は、ヨウ化物のヨウ素への脂質過酸化物依存性酸化を利用して測定した。結果は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のnmolとして、又はnmolヒドロペルオキシド/mgタンパク質として表される。
結合ジエン形成の抑制を測定することにより上記で得られた結果は、ＬＤＬ脂質過酸化を測定する実験により確認した。また本発明の化合物によって、銅（酸化剤）により誘導された脂質の過酸化に対するＬＤＬの効率的な保護ができた。
【０２４７】
実施例９：細胞培養物に及ぼす本発明の抗酸化特性の測定
Ａ−培養プロトコール：
ニューロン、ニューロブラストーマ（ヒト）及びＰＣ１２細胞（ラット）がこの種の試験に使用した細胞株であった。ＰＣ１２細胞は、ラットのクロム親和性細胞種から調製し、Greene 及び Tischler により特徴づけられた（Greene 及び Tischler, 1976）。これらの細胞は、通常、神経細胞の分化、信号伝達及び神経細胞死の試験に使用される。ＰＣ１２細胞を前述された（Farinelli, Parkら, 1996）ように、１０％ウマ血清及び５％ウシ胎仔血清を補足した完全なＲＰＭＩ培地（Invitrogen）中で増殖した。
内皮及び平滑筋細胞の初代培養物も使用した。細胞はプロモセル（Promocell）（Promocell GmBH, Heidelberg）から得て、供給業者の指示書に従って培養した。
細胞を５〜３００μMの範囲の異なる用量の化合物で２４時間処理した。次に細胞を回収し、標的遺伝子の発現の増加を定量ＰＣＲで評価した。
【０２４８】
Ｂ−ｍＲＮＡ測定：
ｍＲＮＡは、本発明の化合物で処理したか、又はしなかった細胞培養物から抽出した。抽出は、Absolutely RNA RT-PCR ミニプレップキット（Stratagene, France）の試薬で供給業者により指示されたとおりに実行した。次にｍＲＮＡは、分光法により測定して、Light Cycler System (Roche, France) Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green Iキット（Roche）を用いる、定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。抗酸化酵素スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）をコードする遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。□−アクチン及びシクロフィリンに特異的なプライマー対を対照プローブとして使用した。
【０２４９】
定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した抗酸化酵素遺伝子のｍＲＮＡ発現の増加は、細胞が本発明の化合物で処理されたとき、使用した異なる細胞の種類で実証された。
【０２５０】
Ｃ−酸化ストレスの制御：
培養細胞における酸化種の測定：
化合物の抗酸化特性も、蛍光標識を用いて評価し、その酸化は、蛍光信号の出現により追跡した。発光した蛍光信号の強度の減少は、化合物で処理された細胞において下記の方法で測定した：上記のように培養されたＰＣ１２細胞（ブラック９６ウェルプレート、透明底、Falcon）を、血清無含有培地で、用量を増加させるＨ2Ｏ2（０．２５mM〜１mM）と共に２及び２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、培地を除去し、細胞をＰＢＳ中の１０μMジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート溶液（ＤＣＦＤＡ、Molecular Probes, Eugene, USA）と共に３７℃、５％ＣＯ2雰囲気で３０分間インキュベートした。次に細胞をＰＢＳですすいだ。酸化標識により発光している蛍光を、蛍光計（Tecan Ultra 384）により、励起波長４９５nm及び発光波長５３５nmで測定した。結果は、酸化対照に対する保護の百分率として表す。
蛍光強度は、未処理細胞よりも本発明の化合物とインキュベートした細胞において低かった。これらの所見は、本発明の化合物が、酸化ストレスに曝された細胞において酸化種の産生の抑制を促進することを示す。予め述べた抗酸化特性も、培養された細胞における抗ラジカル保護の誘導に有効である。
【０２５１】
Ｄ−脂質の過酸化の測定：
異なる細胞株（上記の細胞モデル）及び初代細胞培養物を前記のように処理した。処理の後、細胞上清を回収し、細胞を溶解し、タンパク質濃度の測定のために回収した。脂質の過酸化を下記のように検出した：脂質の過酸化は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のようなアルデヒドの脂質過酸化と反応する、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）を用いて測定した。処理の後、細胞上清を収集し（９００μl）、ブチル化ヒドロキシトルエン９０μlを加えた（Morliere, Moysanら, 1991）。１５％トリクロロ酢酸を含有する０．２５Ｍ炭酸カリウム中のＴＢＡの０．３７５％溶液１ミリリットルもこの反応媒体に加えた。この混合物を８０℃で１５分間加熱し、氷上で冷却して、有機相をブタノールで抽出した。有機相は、シマヅ１５０１分光蛍光計（島津製作所、京都、日本）で、分光蛍光法（λｅｘ＝５１５nm及びλｅｍ＝５５０nm）により分析した。ＴＢＡＲＳを、テトラ−エトキシプロパンを標準として使用してＭＤＡ当量として表した。結果を、タンパク質濃度に対して標準化した。
本発明の化合物で処理された細胞において観察された脂質の過酸化の減少は、前記の結果を確認する。
本発明の化合物は、有利には、酸化ストレスの影響を遅延及び／又は抑制する、固有の抗酸化特性を示す。発明者たちは、また、本発明の化合物が、抗酸化酵素をコードする遺伝子の発現を誘導することができることも示す。これらの本発明の化合物の特定の特徴は、細胞が酸化ストレスと有効に戦うことを可能にし、したがってフリーラジカル誘発損傷から保護することを可能にする。
【０２５２】
実施例１０：本発明の化合物によるインビトロでのＰＰＡＲ活性の評価
異常脂肪血症及び糖尿病の治療に外来で広く使用されている２つの主な医薬分類であるフィブラート系及びグリタゾン系（glitazones）により活性化される、ＰＰＡＲサブファミリーの核内受容体は、脂質及びブドウ糖のホメオスタシスにおいて重要な役割を演じる。下記の実験データは、本発明の化合物がＰＰＡＲαをインビトロで活性化することを示す。
【０２５３】
ＰＰＡＲ活性化を、酵母菌ｇａｌ４転写因子のＤＮＡ結合ドメイン及び異なるＰＰＡＲのリガンド結合ドメインから構成されるキメラの転写活性を測定することにより、ＲＫ１３線維芽細胞の細胞株又は血液細胞ＨｅｐＧ２においてインビトロで試験した。下記の例は、ＨｅｐＧ２細胞で示す。
【０２５４】
Ａ−培養プロトコール：
ＨｅｐＧ２細胞は、ＥＣＡＣＣ（Porton Down, UK）から得て、１０％（V/V）ウシ胎仔血清、１００U/mlペニシリン（Gibco, Paisley, UK）及び２mM Ｌ−グルタミン（Gibco, Paisley, UK）を補足したＤＭＥＭ培地で増殖させた。培地は２日毎に取り換えた。細胞は、空気９５％／ＣＯ2 ５％の加湿した雰囲気中、３７℃で保持した。
【０２５５】
Ｂ−トランスフェクションに使用したプラスミドの記載：
プラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３、ｐＲＬ−ＣＭＶ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ及びｐＧａｌ４−ｆは、Raspeらにより記載された（Raspe、Madsenら, 1999）。ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα及びｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲβ作成体は、マウスＰＰＡＲα及びヒトＰＰＡＲβ核内受容体のＤＥＦドメインに対応するＰＣＲ増幅ＤＮＡ断片をそれぞれｐＧａｌ４−ｆベクター中にクローン化することにより得た。
【０２５６】
Ｃ−トランスフェクション：
ＨｅｐＧ２細胞を２４ウエル培養皿に５×１０4細胞／ウエルで接種し、前述のプロトコール（Raspe, Madsen ら, 1999）に従って、レポータープラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３（５０ng／ウエル）、発現ベクターｐＧａｌ４−ｆ、ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲβ（１００ng／ウエル）及びトランスフェクション効率制御ベクターｐＲＬ−ＣＭＶ（１ng／ウエル）で２時間トランスフェクトし、次に試験化合物で３６時間インキュベートした。実験の終了時に、細胞を溶解し（Gibco, Paisley, UK）、ルシフェラーゼ活性を、供給者の使用説明書に従って、Dual-Luciferase（商標）Reporter Assay Systemキット（Promega, Madison, WI, USA）により測定した。次に、供給業者による指示によりBio-Rad Protein Assay（Bio-Rad, Munich, Germany）で細胞抽出物中のタンパク含有量を求めた。
【０２５７】
発明者は、本発明の化合物で処理され、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲαプラスミドでトランスフェクトされた細胞のルシフェラーゼ活性が増加したことを示す。該ルシフェラーゼ活性誘導は、本発明の化合物がＰＰＡＲ□の活性化剤であることを示す。図３は、本発明の化合物により得られた結果の例を示す。
図３：Ｇａｌ４−／ＰＰＡＲαプラスミドでトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞を、異なる濃度の本発明の化合物（５、１５、５０及び１００μM）と共に２４時間、並びに異なる濃度のビヒクル（ＰＣ）と共にインキュベートした。結果は、異なる処理の後での誘導係数（未処理細胞と比較した発光信号）として表す。誘導係数が高いほど、ＰＰＡＲ□アゴニスト活性が強力である。結果は、本発明の化合物Ｅｘ２ａが１００μMで最大６２倍の発光信号の誘導を生じ、５０μMでは４１、１５μMでは３１、５μMでは１７であったことを示す。本発明の化合物Ｅｘ４ａは、また、１００μMで４１、５０μMで３０、１５μMで１８、５μMで９である誘導係数の用量依存的増加を示した。本発明の化合物Ｅｘ４ｐは、また、発光信号の増加を誘導し、ＰＰＡＲα核内受容体に対する活性が明らかとなった。化合物Ｅｘ４ｐの誘導係数は、１００μMで３５、５０μMで４４、１５μMで３６、５μMで２４であった。一方、細胞をビヒクル（ＰＣリポソーム）と共にインキュベートした場合、有意な誘導は観察されなかった。
これらの結果は、試験された本発明の化合物が有意なＰＰＡＲ□リガンド活性を示し、したがってそれらの転写活性を可能にすることを示す。
【０２５８】
実施例１１：本発明の化合物の抗炎症特性の評価
炎症反応は、脳虚血のような多くの神経疾患において観察される。炎症は、また、神経変性の重要な因子である。発作では、グリア細胞の最初の反応の１つは、サイトカイン及びフリーラジカルを放出することである。このサイトカイン及びフリーラジカルの放出により、脳における炎症性反応を生じ、これが神経細胞死を引き起こす可能性がある（Rothwell 1997）。
【０２５９】
細胞株及び初代細胞を、上記のように培養した。
リポ多糖類（ＬＰＳ）細菌性内毒素（Escherichia coli 0111 :B4）（Sigma, France）を蒸留水で再構成し、４℃で保存した。細胞をＬＰＳ １μg/mlで２４時間処理した。他の因子からの干渉を避けるため、培地を完全に交換した。
ＴＮＦ−αは、ストレス（例えば、酸化ストレス）に対する炎症反応における重要な因子である。ＬＰＳの用量の増加による刺激に応答するＴＮＦ−α分泌を評価するため、刺激を受けた細胞の培地を除去し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡ−ＴＮＦ−αキット（Immunotech, France）により測定した。試料を５０倍に希釈して、標準曲線（Chang, Hudsonら, 2000）の範囲内にした。
化合物の抗炎症特性を下記のように特徴付けした：
細胞培地を完全に交換し、細胞を試験化合物と共に２時間インキュベートし、その後、ＬＰＳを最終濃度１μg/mlで培地に加えた。２４時間のインキュベーションの後、細胞上清を回収し、直接処理しない場合は、−８０℃で保存した。細胞を溶解し、タンパク質を、供給業者の指示書によりBio-Rad Protein Assayキット（Bio-Rad, Munich, Germany）で定量した。
【０２６０】
試験化合物による処理で誘導されたＴＮＦ−α分泌の減少の測定値は、pg/ml/μgタンパク質として、かつ対照に対する百分率として表される。これらの結果は、本発明の化合物が、抗炎症特性を有することを示す。
【０２６１】
実施例１２：脳虚血−再灌流モデルにおける本発明の化合物の神経保護作用の評価
Ａ−予防モデル：
１−動物の処置
１．１動物及び化合物の投与
体重２００〜３５０ｇのウィスターラットをこの実験に使用した。
動物を、１２時間の明／暗サイクル、２０℃±３℃の温度で維持した。水及び食餌は適宜に入手可能であった。食物摂取量及び体重増加を記録した。
【０２６２】
中大脳動脈の閉塞により誘導される虚血の前に、動物を、ビヒクル（０．５％カルボキシセルロース（ＣＭＣ）及び０．１％ツイーン）に懸濁した本発明の化合物（６００mg/kg/日）を用いるか、又はビヒクルのみを用いる胃管栄養法により１４日間処置した。
使用したカルボキシメチルセルロースは、中間粘度のカルボキシメチルセルロースのナトリウム塩である（Ref. C4888, Sigma-Aldrich, France）。使用されたツイーンは、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである（Tween 80, Ref. P8074, Sigma-Aldrich, France)。
【０２６３】
１．２中大脳動脈の腔内閉塞による虚血誘導−再灌流：
動物を抱水クローラル３００mg/kgの腹腔内注入により麻酔した。直腸プローブを挿入し、体温を３７℃±０．５℃に維持した。試験を通して、血圧を監視した。
【０２６４】
外科用顕微鏡下で、頸の中央部の切開により右頸動脈を露出した。翼突口蓋動脈をその起点で結紮し、動脈切開を外頸動脈で行って、ナイロン製のモノフィラメントを挿入できるようにし、それを、総頸動脈まで穏やか進め、次に内頸動脈内に進めて、中大脳動脈の起点を閉塞するようにした。１時間後にフィラメントを抜いて再灌流を可能にした。
【０２６５】
２−脳梗塞量の測定：
再灌流の２４時間後、本発明の化合物で予め処置したか、又は処置していない動物を、ペントバルビタールの過剰投与により麻酔をかけた。
【０２６６】
脳を急速に凍結し、薄切りにした。切片をクレシルバイオレットで染色した。脳切片の未染色の帯域は、梗塞により損傷を受けたと考えた。領域（梗塞及び２つの半球）を測定し、梗塞及び２つの半球の量を計算し、修正梗塞量を次の式：（修正梗塞量＝梗塞量−（右半球の量−左半球の量））により決定して、脳浮腫を補償した。
本発明の化合物で処置した動物の脳切片の分析によって、未処置の動物と比較して、梗塞量の著しい減少が明らかとなった。虚血の前に、本発明の化合物を動物に投与すると（予防効果）、これらは神経保護を誘導することができた。
【０２６７】
図４ａ及び４ｂは、本発明の化合物により得られた結果の一例を示す。
図４ａの例は、修正梗塞量の合計（後虚血病巣サイズ）が１８６mm3であったことを示す。動物を、虚血誘導の前に、化合物Ｅｘ４ａ（実施例４ａで記載された本発明の化合物）を用いて３００mg/kg/日を１日に２回、経口により１４日間処置した場合、病巣の大きさが対照動物の病巣の大きさに対して２２％（１４５mm3）減少した。
未修正梗塞量を描写している図４ｂの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の２２％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは作用がない（病巣の有意な減少がない）ことからなることを示している。
【０２６８】
３−抗酸化酵素活性の測定：
ラットの脳を冷凍し、粉砕し、粉末まで小さくし、次に食塩水に再懸濁した。次に、下記の著者により記載されているように、異なる酵素活性を測定した：スーパーオキシドジスムターゼ（Flohe 及び Otting 1984）；グルタチオンペルオキシダーゼ（Paglia 及び Valentine 1967）；グルタチオンレダクターゼ（Spooner, Delidesら, 1981）；グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（Habig 及び Jakoby 1981）；カタラーゼ（Aebi 1984）。
該異なる酵素活性は、本発明の化合物で処置された動物の脳調製物において増加された。
【０２６９】
Ｂ−治療的又は急性期処置モデル：
１−中大脳動脈の腔内閉塞による虚血誘導/再灌流：
前記のような動物をこの実験に使用した。動物を抱水クローラル３００mg/kgの腹腔内注入により麻酔した。直腸プローブを挿入し、体温を３７℃±０．５℃に維持した。試験を通して、血圧を監視した。
【０２７０】
外科用顕微鏡下で、頸の中央部の切開により右頸動脈を露出した。翼突口蓋動脈をその起点で結紮し、動脈切開を外頸動脈で行って、ナイロン製のモノフィラメントを挿入できるようにし、それを、総頸動脈まで穏やか進め、次に内頸動脈内に進めて、中大脳動脈の起点を閉塞するようにした。１時間後にフィラメントを抜いて再灌流を可能にした。
【０２７１】
２−動物の処置：
最初に虚血−再灌流に付した動物を、再灌流の後、本発明の化合物を用いて経口（前記のようなＣＭＣ−ツイーンビビクル）により１回以上（６００mg/kg/日又は３００mg/kg/日を１日二回）処置した。
【０２７２】
３−脳梗塞量の測定：
再灌流の２４、４８又は７２時間後、化合物で予め処置したか、又は処置していない動物を、ペントバルビタールの過剰投与により麻酔をかけた。
脳を急速に凍結し、薄切りにした。切片をクレシルバイオレットで染色した。脳切片の未染色の帯域は、梗塞により損傷を受けたと考えた。領域（梗塞及び２つの半球）を測定し、梗塞及び２つの半球の量を計算し、修正梗塞量を次の式：（修正梗塞量＝梗塞量−（右半球の量−左半球の量））により決定して、脳浮腫を補償した。
治療的処置の場合（急性期の処置）、本発明の化合物で処置された動物は、未処置の動物よりも脳損傷が少なかった。事実、虚血−再灌流の後、本発明の化合物を１回以上投与した場合、梗塞量は少なかった。図４ｃ〜４ｆは、本発明の化合物により得られた結果の一例を示す。
図４ｃの結果は、虚血の後、本発明の化合物Ｅｘ４ａ（６００mg/kg/日）で２４時間処置された動物が、対照動物よりも２７％小さい病巣を発症した（梗塞量：処置動物１３２mm3対対照１８０mm3）ことを示す。
未修正梗塞量を描写している図４ｄの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の２５％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは作用がない（病巣の有意な減少がない）ことからなることを示している。
図４ｅの結果は、虚血の後、本発明の化合物Ｅｘ４ａ（６００mg/kg/日）で７２時間処置された動物が、対照動物よりも４０％小さい病巣を発症した（修正梗塞量：処置動物１１０mm3対対照１８０mm3）ことを示す。
未修正梗塞量を描写している図４ｆの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の３２％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは（病巣の２３％減少）であることからなることを示している。
【０２７３】
異なる実験モデルにおける本発明の化合物の使用は、該化合物が固有の抗酸化活性を示し、酸化ストレスの作用を遅延かつ減少することができ、更に、抗酸化酵素をコードする遺伝子の発現も誘導し、その抗酸化特性と一緒になって、フリーラジカルからの保護を強化することを示す。加えて、本発明の化合物は、抗炎症活性を示し、ＰＰＡＲ□求核受容体を活性化することができる。
最後に、本発明の化合物の動物虚血−再灌流モデルにおける使用は、保護的であり、治療的でもある処置の両方の有益な神経保護作用を明らかにした。
【０２７４】
【表５０】
【０２７５】
【表５１】
【図面の簡単な説明】
【０２７６】
【図１Ａ】本発明のアシルグリセロールの構造である（実施例２ａ、２ｃ、４ａ〜ｒ）。
【図１Ｂ】本発明の特定の化合物の構造である（実施例５ａ〜ｂ、６〜ｃ）。
【図２】銅（Ｃｕ）によるＬＤＬ酸化に対する本発明の化合物の抗酸化特性の評価である。ａは、経時的な又は遅延期における共役ジエン形成である。ｂは、ジエン形成の速度である。ｃは、形成された共役ジエンの最大量である。
【図３】Ｇａｌ４／ＰＰＡＲαトランス活性化系における本発明の化合物のＰＰＡＲαアゴニスト特性の評価である。
【図４−１】本発明の化合物の神経保護作用の評価である。ａは、予防的神経保護作用である。ｂは、脳の異なる領域における予防的神経保護作用である。ｃは、治療的作用である（急性期２４時間）。ｄは、脳の異なる領域における治療的作用である（急性期２４時間）。
【図４−２】本発明の化合物の神経保護作用の評価である。ｅは、治療的神経保護作用である（急性期７２時間）。ｆは、脳の異なる領域における治療的神経保護作用である（急性期７２時間）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アシルグリセロール、並びにその窒素−及び硫黄含有類似体の治療上の使用、特に脳虚血の治療における使用に関する。本発明は、更に、該誘導体の調製方法、新規化合物、特にアシルグリセロール、その窒素−及び硫黄含有類似体、並びにその調製方法に関する。
【０００２】
本発明の化合物は、有利な抗酸化剤及び抗炎症医薬特性を有する。本発明は、また、該化合物及びそれを含む医薬組成物を使用する治療的処置の方法を記載する。特に、本発明の化合物は、発作の予防又は治療に有用である。
【０００３】
フランスでは、脳血管性疾患（年間１５０，０００件の新規症例）は、死因の第３位であり、成人における身体障害の主要原因である。虚血性及び出血性発作は、全ての脳血管性発作において、それぞれ８０％及び２０％を占める。脳虚血性発作は、脳血管性疾患の死亡率及び罹患率を減少させるために取り組まれなければならない、重要な治療上の問題である。虚血の急性期の治療ばかりでなく、虚血の予防において進歩があった。したがって、危険因子を同定し管理することは、この病理の治療において必須であることを留意することが重要である。
【０００４】
薬剤に基づく脳虚血の治療は、異なる戦略に基づく。第１の戦略は、危険因子（高血圧、高コレステロール血症、糖尿病、心房細動など）の予防、又は特に抗血小板薬又は抗凝血薬の助けを借りる血栓症の予防により、脳虚血発作の発症を予防することを含む（Adams 2002)。
【０００５】
第２の戦略は、虚血の急性期を治療して、その長期の影響を減衰させることを含む(Lutsep 及び Clark 2001)。
【０００６】
脳虚血の病態生理学は、下記のように記載されることができる：ニューロンが壊死している虚血性病巣と無傷の神経組織との間の中間領域である虚血性境界域は、病態生理学的カスケードの部位であり、これは、再灌流が起きないか又は神経保護が不十分である場合、数日間かけて神経細胞死を起こす。最初の現象は、最初の数時間以内に起こり、多量のグルタミン酸を放出し、神経細胞脱分極及び細胞性浮腫を起こす。細胞内へのカルシウムの流入は、ミトコンドリアの損傷を誘導し、それはフリーラジカルを放出し、酵素を誘導して神経細胞膜の分解を促進する。カルシウム流入及びフリーラジカル産生は、次に、ＮＦ−κＢのような特定の転写因子を活性化する。該活性化は、内皮接着タンパク質の誘導、虚血病巣の多核好中球浸潤、ミクログリア活性化、酸化窒素（ＮＯ）II型シンターゼ又はII型シクロオキシゲナーゼのような酵素の誘導のような炎症過程を誘導する。これらの炎症過程は、細胞に毒性のあるＮＯ又はプロスタノイドの放出を起こす。ともにこれらの過程は、結果として非可逆的病変を誘導するアポトーシスの現象となる（Dirnagl, Iadecolaら, 1999）。
【０００７】
予防的神経保護の概念は、虚血抵抗性を示す動物モデルにおける実験データに基づく。事実、脳虚血を実験的に誘導する前に異なる手順を適用すると、後者の重篤度が減衰される。種々の刺激が脳虚抵抗性を誘導することができ、前条件付け（遷延虚血に先立つ短期虚血）、熱ストレス、低用量の細菌性リポ多糖類の投与である（Bordet, Deplanqueら, 2000）。
【０００８】
該刺激は、抵抗性機構を誘導し、それは保護機構を誘発する信号を活性化する。異なる誘発機構が同定されており、サイトカイン、炎症性経路、フリーラジカル、ＮＯ、ＡＴＰ−依存性カリウムチャンネル、アデノシンである。初期現象の発生と虚血抵抗性との間で観察される遅滞時間は、タンパク質合成の必要性に由来する。多様な種類のタンパク質が虚血抵抗性を誘導することを示しており、熱ショックタンパク質、抗酸化酵素及び抗アポトーシス性タンパク質である（Nandagopal, Dawsonら, 2001）。
【０００９】
したがって、アテローム動脈硬化、糖尿病、肥満などのような脳血管性発作の危険因子の進展を防止することができ、予防的神経保護ばかりでなく、脳虚血の急性期における積極的な神経保護を提供することができる化合物の真の必要性がある。
【００１０】
ＰＰＡＲ（α、β、γ）は、ホルモン活性化核内受容体ファミリーに属する。これらのリガンドによる結合で活性化される場合、これらはレチノイド−Ｘ−受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体化され、標的遺伝子のプロモーター配列に位置する「ペルオキシソーム増殖因子応答要素」（ＰＰＲＥ）と結合する。したがってＰＰＡＲのＰＰＲＥへの結合は、標的遺伝子の発現を誘導する（Fruchart, Staelsら, 2001）。
【００１１】
ＰＰＡＲは、多種多様な器官に分布されており、これらはＰＰＡＲβを除いて全てある程度の組織特異性を示すが、その発現は遍在すると思われる。ＰＰＡＲαの発現は、肝臓及び腸管腔において特に多く、ＰＰＡＲγは、主に脂肪組織及び脾臓に発現する。３つのサブタイプ（α、β、γ）は、中枢神経系に発現する。オリゴデンドロサイト及びアストロサイトのような細胞は、とりわけＰＰＡＲαサブタイプを発現する（Kainu, Wikstromら, 1994）。
【００１２】
ＰＰＡＲの標的遺伝子は、脂質及び糖の代謝を制御する。しかし、最近の発見は、ＰＰＡＲが他の生物学的過程に関与していることを示唆している。それらのリガンドによるＰＰＡＲの活性化は、遺伝子の転写活性における変化を誘導し、それは、炎症性過程、抗酸化酵素、血管形成、細胞の増殖及び分化、アポトーシス、ｉＮＯＳ、ＭＭＰａｓｅ及びＴＩＭＰの活性を調節する（Smith, Dipretaら, 2001) (Clark 2002)。
【００１３】
フリーラジカルは、アレルギー、腫瘍のイニシエーション及びプロモーション、循環器疾患（アテローム性動脈硬化、虚血）、遺伝的及び代謝的障害（糖尿病）、感染性及び変性疾患（プリオンなど）及び眼の疾患を含む極めて広範囲の病理において役割を果たす(Mates, Perez-Gomez1ら, 1999)。
【００１４】
活性酸素種（ＲＯＳ）は、正常な細胞機能中に産生される。ＲＯＳは、ヒドロキシルラジカル（ＯＨ）、スーパーオキシドアニオン（Ｏ2-）、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）及び酸化窒素（ＮＯ）を含む。該種は非常に不安定であり、それらの高い化学反応性のため、細胞の生物学的機能にとって脅威となる。それらは、脂質の過酸化、特定の酵素の酸化、及びタンパク質の分解をもたらす極めて広範囲に及ぶタンパク質の酸化を誘導する。脂質の過酸化に対する保護は、過酸化生成物がＤＮＡの損傷を引き起こしうるため、好気性生物において必須のプロセスである。したがって、天然の抗酸化剤防御によるラジカル種の産生、処理及び除去の間の平衡の調節解除又は変更によって、細胞又は生物に有害であるプロセスが確立される。
【００１５】
ＲＯＳは、酵素成分と非酵素成分を含む抗酸化剤系を介して処理される。酵素系は、下記の性質を有する幾つかの酵素から構成される：
【００１６】
スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）は、スーパーオキシドラジカルを過酸化物に変換することにより破壊する。次に過酸化物を別の酵素系に作用させる。低濃度のＳＯＤは好気的呼吸により連続して産生される。ヒトにおいて３種のＳＯＤが同定されており、それぞれ補助因子としてＣｕ、Ｚｎ、Ｆｅ、Ｍｎ又はＮｉを含有する。３つの形態のヒトＳＯＤが下記のように分布され、細胞基質Ｃｕ−Ｚｎ ＳＯＤ、ミトコンドリアＭｎ−ＳＯ及び細胞外ＳＯＤである。
【００１７】
カタラーゼは、過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）を水とＯ2に変換するのに非常に効率的である。過酸化水素は、好気性生物において酵素的に異化される。カタラーゼは、また、種々のヒドロペルオキシド（ＲＯＯＨ）の還元に触媒作用を及ぼす。
【００１８】
グルタチオンペルオキシダーゼは、セレンを補助因子として使用し、グルタチオンを使用してヒドロペルオキシド（ＲＯＯＨ及びＨ2Ｏ2）の還元に触媒作用を及ぼし、それにより酸化損傷から細胞を保護する。
【００１９】
細胞の非酵素的抗酸化剤防御は、食事中に合成されるか又は供給される分子を含む。
【００２０】
抗酸化剤分子は、異なる細胞区画に存在する。例えば、解毒酵素はフリーラジカルを除去し、細胞の寿命にとって必須である。３つの最も重要な種類の抗酸化剤化合物は、カロチノイド、ビタミンＣ及びビタミンＥである（Gilgun-Sherki, Melamedら, 2001）。
【００２１】
脳虚血及びその結果として起こる影響により誘導されるアポトーシスの現象を回避するため、本発明者たちは、前記の危険因子の進展を防止することができ、予防的神経保護活性を行うばかりでなく、脳虚血の急性期における積極的な神経保護を提供することができる新規化合物を開発した。
【００２２】
発明者たちは、また、ＰＰＡＲ活性化剤、抗酸化剤及び抗炎症の特性を同時に示す本発明の化合物を示し、したがって該化合物は、脳虚血における重要な治療的又は予防的潜在能力を有する。
【００２３】
したがって本発明は、脳虚血の予防的又は治療的処置に有用な、有利な薬理学的性質を示す化合物のファミリーを提案する。本発明は、また、該誘導体の製造方法を提供する。
【００２４】
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
【００２５】
【化２】
【００２６】
〔式中、
Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基を表し、
Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子、ＣＯ−Ｒ基、又は式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基を表し（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）、
Ｒは、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基であり、
Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、
ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、
Ｒ′は、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子、好ましくは１０〜２３個の炭素原子及び場合により酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である〕により表される。
【００２７】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ基は、同一であるか又は異なって、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、1〜２０個の炭素原子、さらにより好ましくは７〜１７個の炭素原子、またさらに好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ基は、また、同一であるか又は異なって、特にメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル又はヘキシル基のような、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキルを表すことができる。
【００２８】
本発明の特別の態様において、式（Ｉ）により表される化合物は、置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうちの１又は２個がＣＯＣＨ3基であることを特徴とする。
【００２９】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ′基は、同一であるか又は異なって、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１２〜２３個の炭素原子、さらに好ましくは１３〜２０個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。有利には、Ｒ′は、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１４〜１７個の炭素原子、よりさらに有利には１４個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。
【００３０】
Ｒ又はＲ′の飽和長鎖アルキル基の具体的な例は、特にＣ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ15Ｈ31、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35基である。Ｒ又はＲ′の不飽和長鎖アルキル基の具体的な例は、特にＣ14Ｈ25、Ｃ14Ｈ27、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45基、又はエイコサペンタン酸（ＥＰＡ）Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）及びドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）のアルキル鎖である。
【００３１】
分岐長鎖アルキル基の例は、特に（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）−（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2又は（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3基〔ｘは、１〜１１と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕である。
【００３２】
アルキル基Ｒ又はＲ′は、また、環状基を含んでもよい。環状基の例は、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルである。
【００３３】
前記で示されるように、アルキル基Ｒ又はＲ′は、同一であるか又は異なって、場合により１個以上の置換基で置換されていることができる。置換基は、好ましくはハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）及び−ＯＨ、＝Ｏ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、−ＣＨ2−ＯＨ、−Ｏ−ＣＨ3、−ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3及びＣＯＯＺ基（Ｚは、水素原子又は好ましくは１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）からなる群より選択される。
【００３４】
本発明は、また、該化合物の光学及び幾何異性体、そのラセミ体、塩、水和物、並びにこれらの混合物に関する。
【００３５】
式（Ｉａ）により表される化合物は、Ｒ１、Ｒ２又はＲ３基のうちのただ１個が水素原子を表す、本発明の式（Ｉ）に対応する化合物である。
【００３６】
式（Ｉｂ）により表される化合物は、Ｒ１、Ｒ２又はＲ３基のうちの２個が水素原子を表す、本発明の式（Ｉ）に対応する化合物である。
【００３７】
本発明の特別の態様によると、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子又はとりわけＣＯ−Ｒ基を表す。
【００３８】
本発明は、また、式（Ｉ）により表される化合物のプロドラッグを包含し、それは、被検者に投与された後、式（Ｉ）により表される化合物に変換される、及び／又は式（Ｉ）により表される化合物と同様の治療上の活性を示す、式（Ｉ）により表される化合物の代謝産物に変換される。
【００３９】
本発明は、また、脳虚血又は脳出血性発作のような脳血管病変を治療する医薬組成物の調製のための、式（Ｉ）により表される化合物の使用に関する。
【００４０】
本発明は、また、上記で定義された一般式（Ｉ）により表される化合物を、可能であれば別の治療活性剤と共に、薬学的に許容されうる支持体中に含む医薬組成物に関わる。特に、該組成物は、脳虚血又は脳出血性発作のような脳血管病変を治療することが意図される。
【００４１】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基では、Ｘは、好ましくは硫黄又はセレン原子、有利には硫黄原子を表す。
【００４２】
更に、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎは、好ましくは０〜３の間に含まれ、とりわけ０〜２の間に含まれ、特に０と等しい。
【００４３】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ′は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される、１個以上、好ましくは０、１又は２個、より好ましくは０又は１個のヘテロ基を含んでもよい。
【００４４】
本発明のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基の特定の例は、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である。
【００４５】
この点について、本発明は、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基を含む式（Ｉ）により表される新規化合物を開発した。したがって本発明は、その目的として、
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
から選択される式（Ｉ）により表される化合物を有する。
【００４６】
本発明の精神において好ましい他の化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄若しくはセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和及び直鎖のアルキル基である）を表す、上記の一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００４７】
この点において、本発明の特定の化合物は、Ｒ２が式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（式中、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、上記で定義された基である）を有する基であるものである。
【００４８】
本発明の他の特定の化合物は、Ｇ基が有利には酸素原子又はＮ−Ｒ４基、好ましくは酸素原子を表す一般式（Ｉ）により表される化合物である。更に、ＧがＮ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表す。該化合物において、Ｒ２は有利には、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す。
【００４９】
別の態様において、本発明の特定の化合物は、Ｇ基が硫黄原子を表す一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００５０】
本発明の他の特定の化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの２個が、同一であるか又は異なって、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表す）であるものである。
【００５１】
本発明の他の好ましい化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、同一であるか又は異なって、好ましくは同一で、上記で定義されたＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１７個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和及び直鎖のアルキル基であり、ここでｎは、好ましくは０〜３に間に含まれ、特に０と等しい）を表す、一般式（Ｉ）により表される化合物である。より詳細には、他の好ましい化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である、一般式（Ｉ）により表される化合物である。
【００５２】
本発明の好ましい化合物の例は、図１Ａ及び１Ｂで提示される。
【００５３】
本発明の別の目的は、上記記載の式（Ｉ）により表される少なくとも１個の化合、特に下記：
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
から選択される式（Ｉ）を有する少なくとも１個の化合物を、薬学的に許容されうる支持体中に含むあらゆる医薬組成物に関する。
【００５４】
有利には、脳血管性の病理、より詳細には脳虚血又は脳血管性発作の治療又は予防のための医薬組成物である。事実、驚くべき事に、式（Ｉ）で表される化合物は、同時に、ＰＰＡＲ活性化剤、抗酸化剤、及び抗炎症性特性を示し、かつ脳虚血において予防的及び治療的神経保護活性を示すことが見出された。
【００５５】
本発明は、また、ヒト又は動物の治療又は予防方法の実施が意図される医薬組成物の調製における、上記で定義された化合物の使用に関する。
【００５６】
本発明は、更に、脳血管病変、より詳細には脳虚血を治療する方法であって、被検者に、特にヒトに式（Ｉ）により表される化合物又は上記で定義された医薬組成物の有効用量を投与することを含む方法に関する。
【００５７】
有利には、使用される式（Ｉ）により表される化合物は、上記と同義のものである。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、有利には、１つ以上の薬学的に許容されうる賦形剤又はビヒクルを含む。例としては、当業者に既知である、薬学的に適合されうる生理的な等張性の緩衝されている食塩水などが挙げられる。本組成物は、分散剤、可溶化剤、安定剤、界面活性剤、防腐剤などから選択される、１つ以上の作用物質又はビヒクルを含んでいてもよい。製剤（液体及び／又は注射用及び／又は固体）に使用してよい作用物質又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油などが含まれる。組成物は、可能であれば、持続性及び／又は遅延性放出を可能にする医薬剤形又は装置により、注射用懸濁剤、ゲル剤、油剤、錠剤、坐剤、散剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、エアゾールなどとして配合されうる。この種類の処方には、セルロース、カーボネート又はデンプンのような作用物質が有利に使用される。
【００５９】
本発明の化合物又は組成物は、異なる方法及び異なる剤形で投与されてよい。例えば、これらは、経口経路により、非経口的に、吸入により、あるいは例えば、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、動脈内経路などのような注射により、全身的に投与してよい。注射には、本化合物は一般に、液体懸濁剤の剤形に調製され、これはシリンジにより、又は例えば点滴により注入してよい。この点に関して、本化合物は一般に、当業者には知られている、薬学的に適合されうる生理的な等張性の緩衝された食塩水などに溶解される。例えば、本組成物は、分散剤、可溶化剤、乳化剤、安定剤、界面活性剤、防腐剤、緩衝剤などから選択される、１つ以上の作用物質又はビヒクルを含んでいてもよい。液体及び／又は注射用処方に使用することができる作用物質又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油、リポソームなどを含んでもよい。
【００６０】
したがって本組成物は、ゲル剤、油剤、錠剤、坐剤、粉剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、エアゾールなどの剤形で、可能であれば徐放及び／又は遅延放出を可能にする医薬剤形又は装置により投与してよい。この種類の処方には、セルロース、カーボネート又はデンプンのような作用物質が有利に使用される。
【００６１】
本化合物は、使用される作用物質又はビヒクルが、好ましくは水、ゼラチン、ゴム、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、油、ポリアルキレングリコールなどからなる群より選択される場合には、経口投与してもよい。
【００６２】
非経口投与には、本化合物は、特に水、油又はポリアルキレングリコールを含む、好ましくは液剤、懸濁剤又は乳剤の剤形で投与されるが、ここには保存料、安定剤、乳化剤などの他に、浸透圧を調整するための塩、緩衝剤などを加えることもできる。
【００６３】
注入速度及び／又は注入用量は、患者、病理、投与の様式などに応じて当業者により調整されてよいことが理解される。典型的には、本化合物は、１用量当たり１μg〜２ｇ、好ましくは１用量当たり０．１mg〜１ｇの範囲の用量で投与される。用量は、場合に応じて、１日に１回又は１日に数回投与してもよい。更には、本発明の組成物は、また、他の活性物質又は活性剤を含んでいてもよい。
【００６４】
本発明は、また、式（Ｉ）により表される上記化合物の製造方法に関する。
【００６５】
本発明の化合物は、当業者に既知の化学反応の組合せを利用して、市販の製品から調製してもよい。本発明は、また、上記で定義された化合物の製造方法に関する。
【００６６】
本発明の第１の方法では、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素又は硫黄原子であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、それぞれ酸素又は硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｃｌ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）からなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物から、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で得られる。
【００６７】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、異なる方法で得てもよい。
【００６８】
第１の実施態様では、グリセロール分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ１〔式中、Ａ１は、例えば、ＯＨ、Ｃｌ及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）からなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させる。該反応により、いわゆる対称化合物（ここで、Ｒ１及びＲ３は、同じ意味を有する）が合成できる。該反応は、例えば、(Feuge, Grosら, 1953), (Gangadhar, Subbaraoら, 1989), (Han, Choら, 1999) 又は (Robinson 1960)で記載されているプロトコールを適用することにより実施してもよい。
【００６９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、また、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（この式（Ｉ）の特定の形の化合物は、式IVにより表される化合物と称される）、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物から、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で得てもよい。該反応は、例えば、(Daubert, Spieglら, 1943)、(Feuge 及び Lovegren 1956)、(Katoch, Trivediら, 1999)、(Strawn, Martellら, 1989)又は(Strawn, Martellら, 1989)において記載されているプロトコールに従って有利に実施される。
【００７０】
上記で記載された式IVに対応する化合物は、以下を含む方法により調製してよい：
【００７１】
ａ）一般式（II）：
【００７２】
【化３】
【００７３】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（III）：
【００７４】
【化４】
【００７５】
〔式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること；及び
【００７６】
ｂ）化合物（III）を、酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、ホウ酸、硫酸など）により脱保護することによって、上記で定義された一般式（IV）に対応する化合物を得ること。
【００７７】
本発明の別の特定の方法により、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（化合物IV）から、以下の工程により得てもよい：
【００７８】
ａ）化合物（IV）を、化合物ＰｘＥ（ここで、Ｐｘは、保護基であり；そしてＥは、例えば、ＯＨ及びハロゲンからなる群より選択される反応性基である）と反応させることにより、一般式（Ｖ）〔式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物を得る工程。有利には、本反応は、GaffneyとReese (1997) に記載された方法を適用することにより実行してよい（ここで、ＰｘＥは、化合物９−フェニルキサンテン−９−オール又は９−クロロ−９−フェニルキサンテンを表すことができる）。
【００７９】
【化５】
【００８０】
ｂ）式（Ｖ）を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（VI）〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＰｘは、保護基である〕に対応する化合物を得る工程。
【００８１】
【化６】
【００８２】
ｃ）化合物（VI）を当業者に既知の従来の方法で脱保護することにより、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得る工程。
【００８３】
別の特定の発明の方法によると、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、以下を含む方法により得られる：
【００８４】
ａ）式（VII）：
【００８５】
【化７】
【００８６】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより、一般式（VIII）：
【００８７】
【化８】
【００８８】
〔式中、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること；及び
【００８９】
ｂ）式（VIII）により表される化合物を酸性媒体中で、又は接触水素化により脱保護することによって、一般式（Ｉ）〔式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物を得ること。
【００９０】
有利には、上記の工程は、(Bodai, Novakら, 1999)、(Paris, Garmaiseら, 1980)、(Scriba 1993) 又は (Seltzman, Flemingら, 2000) で記載されているプロトコールに従って実施してよい。
【００９１】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得てもよい：
【００９２】
【化９】
【００９３】
ａ）化合物（IX）を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、第１の化合物とは独立に、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第２の化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【００９４】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９５】
該方法は、有利には、(Aveta, Brandtら, 1986)で記載されたプロトコールに従って実施される。
【００９６】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子であり、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得てもよい：
【００９７】
ａ）化合物（IX）を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３〔式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と化学量論量で、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【００９８】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９９】
式（IX）により表される化合物は、以下を含む方法により調製してもよい：
【０１００】
ａ）２−ハロゲノマロン酸ジメチルをトリチルチオールと反応させることにより、式Ｘにより表される化合物を得ること。
【０１０１】
【化１０】
【０１０２】
ｂ）アセテート官能基を当業者に既知の還元剤で還元すること。
【０１０３】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を表す〕により表される化合物は、また、下記の方法で得てもよい（ダイアグラム１も参照すること）：
【０１０４】
ａ）式Ｖを有する化合物を、式：ＬＧ−Ｅ〔式中、Ｅは、ハロゲンを表し、そしてＬＧは、例えば、メシル、トシルなどからなる群より選択される反応性基である〕の化合物と反応させて、一般式XI〔式中、Ｐｘは、保護基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０５】
ｂ）式XIを有する化合物を、式：Ａｃ−Ｓ-Ｂ+〔式中、Ａｃは、短アシル基、好ましくはアセチル基を表し、そしてＢは、例えば、ナトリウム又はカリウム、好ましくはカリウムからなる群より選択される対イオンである〕の化合物と反応させて、式XIIにより表される化合物を得ること。該反応は、有利には、(Gronowitz, Herslofら, 1978)で記載されたプロトコールを適用して実施される。
【０１０６】
ｃ）化合物（XII）の硫黄原子を当業者に既知の条件で脱保護して、一般式（XIII）により表される化合物を得ること。
【０１０７】
ｄ）一般式（XIII）により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させて、一般式（XIV）〔式中、Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０８】
ｅ）式（XIV）の化合物を当業者に既知の従来の条件で脱保護して、本発明の式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、硫黄原子であり、（ii）Ｒ３は、水素原子であり、そして（iii）Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を得ること。
【０１０９】
ｆ）本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を、本発明の式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、硫黄原子であり、（ii）Ｒ３は、水素原子であり、そして（iii）Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物（特に、上記工程ｅ）で得られる化合物）と、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物とを、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させて得ること。
【０１１０】
【化１１】
【０１１１】
別の実施態様によると、本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、硫黄原子であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、下記の方法で得てもよい：
【０１１２】
ａ）本発明の一般式（Ｉ）〔式中、（ｉ）Ｇは、酸素原子であり、（ii）Ｒ２は、水素原子を表し、そして（iii）Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、上記で定義されたＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物を、ヨウ素と、当業者に既知の活性化剤の存在下で反応させて、式（XV）〔式中、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕を有する化合物を得ること。
【０１１３】
【化１２】
【０１１４】
ｂ）式（XV）を有する化合物を、チオカルボン酸と、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【０１１５】
式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す〕により表される化合物は、式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物（化合物XVI）から、以下の方法により得られる：
【０１１６】
化合物XVIを、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第１の化合物と反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、第１の化合物とは独立に、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する第２の化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させること。
【０１１７】
該方法は、有利には、(Terradas 1993）で記載されたプロトコールに従って実施される。
【０１１８】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１及びＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＲ３は、水素原子である〕により表される化合物は、化合物XIIと式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２〔式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物とを化学量論量で、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることにより得てもよい。
【０１１９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIａ）は、異なる方法で得てもよい。
【０１２０】
第１の方法では、２−アミノプロパン−１，３−ジオールの分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させる。
【０１２１】
該反応は、例えば、(Shaban 1977), (Kurfurst, Roigら, 1993)、(Harada, Morieら, 1996)、(Khanolkar, Abadjiら, 1996)、(Daniher 及び Bashkin 1998) 及び (Putnam 及び Bashkin 2000)で記載されたプロトコールを適用して実施してよい。
【０１２２】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIａ）は、また、以下の方法により得てもよい：
【０１２３】
ａ）式（XVII）により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることによって、一般式（XVIII）：
【０１２４】
【化１３】
【０１２５】
により表される化合物を得ること。
【０１２６】
【化１４】
【０１２７】
ｂ）化合物（XVIII）を脱保護すること。
【０１２８】
該方法は、有利には、(Harada, Morieら, 1996)で記載されたプロトコールに従って実施される。
【０１２９】
本発明の式（Ｉ）〔式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子ではない）であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕により表される化合物（化合物XVIｂ）は、以下の方法により得てもよい：
【０１３０】
ａ）式（XVII）を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ〔式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌからなる群より選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である〕を有する化合物と、可能であれば、当業者に既知のカップリング剤又は活性化剤の存在下で反応させることによって、一般式（XVIII）：
【０１３１】
【化１５】
【０１３２】
により表される化合物を得ること。
【０１３３】
【化１６】
【０１３４】
ｂ）化合物（XVIII）を、Ｒ４−Ａ４型（ここで、Ａ４は、Ｃｌ又はＢｒからなる群より選択される反応性基である）の化合物と、塩基性媒体中で反応させること。
【０１３５】
ｃ）化合物（XVIII）を脱保護すること。
【０１３６】
本発明の実行可能性、実現性及び他の利点は、以下の実施例において更に詳述されるが、これらの実施例は、説明の目的で与えられるものであり、限定を目的とするものではない。
【０１３７】
実施例：
文書のより容易な理解のために、活性の測定及び評価に関わる実施例で使用される本発明の化合物は、次にのように省略され、例えば「Ｅｘ４ｇ」は、その調製が実施例４ｇで記載されている本発明の化合物を示す。
【０１３８】
０．２mm厚のMERCKシリカゲル６０Ｆ254で被覆されたプレートで薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を実施した。保持因子はＲｆと省略される。
粒径４０〜６３μm（Merck参照番号９３８５−５０００）を有するシリカゲル６０でカラムクロマトグラフィーを実施した。
キャピラリー法によりBuchiＢ５４０装置で融点（ＭＰ）を測定した。赤外線（ＩＲ）スペクトルをBruker Fourier変換スペクトロメーター（Vector 22）で記録した。
Bruker ＡＣ３００スペクトロメーター（３００MHz）で核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを記録した。各信号は、その化学シフト、強度、多重度（注：一重項はｓ、広帯一重項はｓｌ、二重項はｄ、分離二重項はｄｄ、三重項はｔ、分離三重項はｔｄ、五重項はquint及び多重項はｍ）、及びその結合定数（Ｊ）により同定された。
Perkin Elmer Sciex API 1（ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化質量分析（ElectroSpray lonization Mass Spectrometry））又はApplied Biosystems Voyager DE-STR製のMALDI-TOF型（マトリックス補助レーザー脱着／イオン化−飛行時間（Matrix-Assisted Laser Desorption/lonization - Time Of Flight））により質量スペクトル（ＭＳ）を測定した。
【０１３９】
実施例１：脂肪酸誘導体の調製
実施例１ａ：テトラデシルチオ酢酸の調製
水酸化カリウム（３４．３０ｇ、０．６１１mol）、メルカプト酢酸（２０．９ml、０．２９４mol）及び１−ブロモテトラデカン（５０ml、０．１８４mol）をこの順序でメタノール（４００ml）に加えた。この混合物を室温で一晩撹拌した。次に水（８００ml）に溶解した濃塩酸溶液（６０ml）を反応混合物に加えた。テトラデシルチオ酢酸が沈殿した。この混合物を室温で一晩撹拌した。次に沈殿物を濾過し、水で５回洗浄して、デシケーター中で乾燥した。この生成物をメタノール中で再結晶した。
【０１４０】
【表１】
【０１４１】
実施例１ｂ：４−（ドデシルチオ）ブタン酸の調製
ドデカンチオール（２．０１ｇ、１０mmol）及びブロモ酪酸エチル（１．９７１ｇ、１０mmol）を不活性雰囲気下、室温で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウム（１．３６ｇ、２１mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を還流下で３時間加熱した。エタノールを真空下で留去した。残渣を水にとって、酸性にした。形成された沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥した。
【０１４２】
【表２】
【０１４３】
実施例１ｃ：６−（デシルチオ）ヘキサン酸の調製
デカンチオール（４．５７ｇ、２５mmol）及び４−ブロモ酪酸（５ｇ、２５mmol）を不活性雰囲気下、室温で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウムをゆっくりと加えた。反応混合物を３時間還流した。エタノールを真空下で留去した。残渣を水にとって、酸性にした。形成された沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥した。
【０１４４】
【表３】
【０１４５】
実施例１ｄ：テトラデシルセレノ酢酸の調製
二セレン化テトラデシルの調製
セレン（１．１９ｇ、１５mmol）を不活性雰囲気下、ＴＨＦ／水の１：１混合物（５０ml）に加えた。氷浴中で反応混合物を冷却後、四水素化ホウ素ナトリウム（１．３２５ｇ、３５mmol）をゆっくりと加えた。セレンの第２部（１．１９ｇ、１５mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次に還流下で加熱することにより、全ての試薬を溶解した。テトラヒドロフラン２５mlに溶解したブロモテトラデカン（９ml、３０mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次にジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。生成物を、更に精製することなく使用した。
【０１４６】
【表４】
【０１４７】
テトラデシルセレノ酢酸の調製
不活性雰囲気で、二セレン化ジテトラデシル（８．５ｇ、１７mmol）をテトラヒドロフラン／水（１５０ml／５０ml）の混合物に溶解して、氷浴中で冷却した。四水素化ホウ素ナトリウム（２．９ｇ、６１mmol）をゆっくりと加え（溶液が白くなる）、続いてテトラヒドロフラン／水の混合物（２５ml／２５ml）に溶解したブロモ酢酸（８．５ｇ、６１mmol）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。次に反応混合物をエーテルで抽出して、水相を酸性にした。得られた沈殿物を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１４８】
【表５】
【０１４９】
実施例１ｅ：テトラデシルスルホキシ酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５ｇ、１７．４mmol）をメタノール／ジクロロメタン（１６０ml／８０ml）の混合物に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却し、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（Oxone）（登録商標）（１２．８ｇ、２１mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に形成された沈殿物を水切りし、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１５０】
【表６】
【０１５１】
実施例１ｆ：６−（デシルスルホキシ）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｅ）に従って調製した。
【０１５２】
【表７】
【０１５３】
実施例１ｇ：テトラデシルスルホニル酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５ｇ、１７．４mmol）をメタノール／ジクロロメタン（１６０ml／８０ml）の混合物に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却し、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（Oxone）（登録商標）（２１．８ｇ、３５mmol）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に形成された沈殿物を水切りし、水で数回洗浄し、乾燥した。
【０１５４】
【表８】
【０１５５】
実施例１ｈ：６−（デシルスルホニル）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｇ）に従って調製した。
【０１５６】
【表９】
【０１５７】
実施例１ｉ：ドコシルチオ酢酸の調製
本生成物は、メルカプト酢酸及びブロモドコサンから上述の手順（実施例１ａ）に従って得た。
【０１５８】
【表１０】
【０１５９】
実施例２：モノアシルグリセロールの調製
実施例２ａ：1−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−テトラデシルチオアセチル−２，３−イソプロピリデングリセロールの調製
氷浴に浸したフラスコ中で、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（４ｇ、１３．８６mmol）をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、次にＥＤＣｌ（２．６５８ｇ、１３．８６mmol）、ジメチルアミノピリジン（１．６９４ｇ、１３．８６mmol）及びソルケタール（１．７２ml、１３．８６mmol）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ塩酸水溶液、次に１０％重炭酸ナトリウム水溶液、そして最後に飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で留去した。残留油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／シクロヘキサン １：９）により精製した。生成物を、黄色の油状物として得た。
【０１６０】
【表１１】
【０１６１】
1−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−テトラデシルチオアセチル−２，３−イソプロピリデングリセロール（４．１６３ｇ、１０．３５６mmol）を酢酸（６０ml）に溶解し、室温で撹拌した。１１日間の反応後、反応混合物を水に希釈し、次に酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を留去した。得られた白色の粉末をヘプタン中で再結晶した。
【０１６２】
【表１２】
【０１６３】
実施例２ｂ：１−パルミトイルグリセロールの調製
この化合物は、ソルケタール及びパルミチン酸から出発して上述の手順（実施例２ａ）に従って合成した。
【０１６４】
１−パルミトイル−（２，３−イソプロピリデン）グリセロール
【０１６５】
【表１３】
【０１６６】
１−パルミトイルグリセロール
【０１６７】
【表１４】
【０１６８】
実施例２ｃ：２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ベンジリデングリセロールの調製
グリセロール（３０ｇ、０．３２６mol）、ベンズアルデヒド（３４．５ｇ、０．３２６mol）及びｐ−トルエンスルホン酸（５０mg）をトルエン３５０mlに溶解して、デーン・シュターク（Dean-Stark）装置で１８時間還流した。反応混合物を乾燥した。残留生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：シクロヘキサン／酢酸エチル ８：２〜７：３）により精製し、再結晶した。
【０１６９】
【表１５】
【０１７０】
２−テトラデシルチオアセチル−１，３−ベンジリデングリセロールの調製
氷浴に浸したフラスコ中で、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（０．８００ｇ、２．７７４mmol）をテトラヒドロフラン（７５ml）に溶解し、続いてＥＤＣｌ（０．５３２ｇ、２．７７４mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．３３９ｇ、２．７７４mmol）及び１，３−ベンジリデングリセロール（０．５ｇ、２．７７４mmol）をこの順序で加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ塩酸、次に１０％炭酸カリウム溶液、そして最後に飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥した。残渣を石油エーテルにとった。形成された沈殿物を濾過し、次にシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン ２：８）により精製して、目的化合物を白色の粉末として生成した。
【０１７１】
【表１６】
【０１７２】
２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
２−テトラデシルチオアセチル−１，３−ベンジリデングリセロール（０．５７６ｇ、１．２７８mmol）をジオキサンとホウ酸トリエチルの５０：５０（V/V）混合物に溶解し、続いてホウ酸（０．３１７ｇ、５．１１２mmol）を加えた。反応混合物を１００℃で４時間加熱した。ホウ酸２当量（０．１５８ｇ、２．５５６mmol）を加え、続いて反応の５．５時間後及び７時間後に２当量を加えた。反応２４時間後、ホウ酸トリエチルを留去した。残渣を酢酸エチルにとって、水で洗浄した。水相を重炭酸ナトリウムで中和し、次にジクロロメタンで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、乾燥した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン ５：５）により精製した。
【０１７３】
【表１７】
【０１７４】
実施例３：１，３−ジアシルグリセロールの調製
実施例３ａ：１，３−ジパルミトイルグリセロールの調製
グリセロール（１０ｇ、０．１０９mol、１当量）、パルミチン酸（５５．６９ｇ、０．２１７mol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４４．７７ｇ、０．２１７mol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２６．５１ｇ、０．２１７mol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。形成されたジシクロヘキシル尿素を濾過し、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン）により精製した。
【０１７５】
【表１８】
【０１７６】
実施例３ｂ：１，３−ジリノレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びリノール酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１７７】
【表１９】
【０１７８】
実施例３ｃ：１，３−ジステアリルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びステアリン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１７９】
【表２０】
【０１８０】
実施例３ｄ：１，３−ジオレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びオレイン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１８１】
【表２１】
【０１８２】
実施例３ｅ：１，３−ジテトラデカノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びテトラデカン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１８３】
【表２２】
【０１８４】
実施例３ｆ：１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１８５】
【表２３】
【０１８６】
実施例３ｇ：１−オレイル−３−パルミトイルグリセロールの調製
１−パルミチン酸グリセロール（実施例２ｂ）（５．５１６ｇ、０．０１７mol）をジクロロメタン（５００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（５．１６５ｇ、０．０２５mol）、ジメチルアミノピリジン（３．０５８ｇ、０．０２５mol）及びオレイン酸（４．７１４ｇ、０．０１７mol）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、真空下で濾液を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン）により精製すして、目的化合物を白色の固体として得た。
【０１８７】
【表２４】
【０１８８】
実施例３ｈ：１，３−ジアセチルグリセロールの調製
グリセロール（３０ｇ、０．３２６mol）をジクロロメタン（３００ml）に加え、続いてピリジン（７９ml、０．９７７mol）を加え、次に無水酢酸（６１．５ml、０．６５１mol）を滴加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。混合物をジクロロメタンにとった。有機相を、１Ｎ塩酸で、次に１０％重炭酸ナトリウムで、次に飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発乾固して無色の油状物を得て、それを更に精製しないで使用した。
収率：３４％
ＩＲ：νＣＯエステル１７４２cm-1
【０１８９】
実施例３ｉ：１，３−ジオクタノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びオクタン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、無色の油状物として得た。
【０１９０】
【表２５】
【０１９１】
実施例３ｊ：１，３−ジウンデカノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びウンデカン酸から上述の手順（実施例３ａ）に従って得た。生成物を、白色の粉末として得た。
【０１９２】
【表２６】
【０１９３】
実施例４：１，２，３−トリアシルグリセロールの調製
実施例４ａ：１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
グリセロール（１ｇ、１０．８６mmol）をジクロロメタン（２００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．８４ｇ、３８．０１mol）、ジメチルアミノピリジン（４．６４ｇ、３８．０１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（９．４０ｇ、３２．５８mmol）を加えた。この混合物を室温で撹拌した。４８時間の反応後、ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製した。１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールを、白色の粉末として得た。
【０１９４】
【表２７】
【０１９５】
実施例４ｂ：１，２，３−トリ−（４−ドデシルチオ）ブタノイルグリセロールの調製
この化合物は、４−（ドデシルチオ）ブタン酸（実施例１ｂ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０１９６】
【表２８】
【０１９７】
実施例４ｃ：１，２，３−トリ−（６−デシルチオ）ヘキサノイルグリセロールの調製
この化合物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０１９８】
【表２９】
【０１９９】
実施例４ｄ：１，２，３−トリテトラデシルスルホキシアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホキシ酢酸（実施例１ｅ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２００】
【表３０】
【０２０１】
実施例４ｅ：１，２，３−トリ−（テトラデシルスルホニル）アセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホニル酢酸（実施例１ｇ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２０２】
【表３１】
【０２０３】
実施例４ｆ：１，２，３−トリ−テトラデシルセレノアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルセレノ酢酸（実施例１ｄ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）に従って得た。
【０２０４】
【表３２】
【０２０５】
実施例４ｇ：１，３−ジパルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ジパルミトイルグリセロール（実施例３ａ）（５．６４ｇ、９．９mmol、１当量）、テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（５．７４ｇ、１９．８mmol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１ｇ、１９．８mmol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２．４２ｇ、１９．８mmol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。形成されたジシクロヘキシル尿素を濾過し、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製した。
【０２０６】
【表３３】
【０２０７】
実施例４ｈ：１，３−ジリノレイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジリノレイルグリセロール（実施例３ｂ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。生成物を、無色の粘性油状物として得た。
【０２０８】
【表３４】
【０２０９】
実施例４ｉ：１，３−ジステアリル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジステアリルグリセロール（化合物３ｃ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２１０】
【表３５】
【０２１１】
実施例４ｊ：１，３−オレオイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジオレオイルグリセロール（化合物３ｄ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。生成物を、無色の粘性油状物として得た。
【０２１２】
【表３６】
【０２１３】
実施例４ｋ：１，３−ジテトラデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジテトラデカノイルグリセロール（化合物３ｅ）及びテトラデシルチオ酢酸（化合物１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２１４】
【表３７】
【０２１５】
実施例４ｌ：１−パルミトイル−２，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−パルミチン酸グリセロール（実施例２ｂ）（４．８０４ｇ、１４mol）をジクロロメタン（３００ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．４９８ｇ、３６mmol）、ジメチルアミノピリジン（４．４３９ｇ、０．０３６mol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（８．３８６ｇ、２９mmol）を加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を乾燥した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製して、目的化合物を白色の粉末として得た。
【０２１６】
【表３８】
【０２１７】
実施例４ｍ：１−オレイル−３−パルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−オレイル−３−パルミトイルグリセロール（実施例３ｇ）（２ｇ、３mmol）をジクロロメタン（１５０ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．０４０ｇ、５mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．６１６ｇ、５mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１．４５５ｇ、５mmol）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ４：６）により精製して、目的化合物を油状物として得た。
【０２１８】
【表３９】
【０２１９】
実施例４ｎ：１，３−ジパルミトイル−２−ドコシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジパルミトイルグリセロール（実施例３ａ）及びドコシルチオ酢酸（実施例１ｉ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２０】
【表４０】
【０２２１】
実施例４ｏ：１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロール（実施例３ｆ）及びパルミチン酸から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２２】
【表４１】
【０２２３】
実施例４ｐ：１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジアセチルグリセロール（実施例３ｈ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２４】
【表４２】
【０２２５】
実施例４ｑ：１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジオクタノイルグリセロール（実施例３ｉ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２６】
【表４３】
【０２２７】
実施例４ｒ：１，３−ッジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジウンデカノイルグリセロール（実施例３ｊ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）に従って得た。
【０２２８】
【表４４】
【０２２９】
実施例５：２−アミノグリセロール誘導体の調製
実施例５ａ：２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオールの調製
テトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（２．８７８ｇ、１０mmol）及び２−アミノ−１，３−プロパンジオール（１ｇ、１１mmol）をフラスコに入れて、１９０℃で１時間加熱した。室温まで冷却後、媒体をクロロホルムにとって、水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、次に留去して、黄土色の固体残渣を形成した。この残渣をジエチルエーテル中で１２時間撹拌した。生成物を、濾過により、白色の粉末の形態で単離した。
【０２３０】
【表４５】
【０２３１】
実施例５ｂ：２−テトラデシルチオアセトアミド−１，３−ジテトラデシルチオアセチルオキシプロパンの調製
２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオール（実施例５ａ）（１ｇ、２．７７mmol）をジクロロメタン（１８０ml）に溶解した。次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．４２７ｇ、６．９１mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．８４５ｇ、６．９１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１．９９５ｇ、６．９１mmol）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ７：３）により精製した。目的化合物を、白色の粉末として得た。
【０２３２】
【表４６】
【０２３３】
実施例６：２−チオグリセロール誘導体の調製
実施例６ａ：２−（テトラデシルチオ）チオ酢酸の調製
Ｓ−トリフェニルメチル２−（テトラデシルチオ）チオアセテートの調製
トリフェニルメチルチオール（９．５８ｇ、３５mmol）をジクロロメタンに溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．１５ｇ、３５mmol）、ジメチルアミノピリジン（４．２４ｇ、３５mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）（１０ｇ、３５mmol）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシルカルボジイミドを濾過し、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を乾燥した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン １：９）により精製した。
【０２３４】
【表４７】
【０２３５】
２−（テトラデシルチオ）チオ酢酸の調製
Ｓ−トリフェニルメチル２−（テトラデシルチオ）チオアセテート（４．７１５ｇ、９mmol）をジクロロメタン（１５０ml）中の酢酸水銀（５．４９５ｇ、１７mmol）の懸濁液に、冷却中で加えた。反応混合物を１８時間撹拌した。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、高温ジクロロメタンで洗浄した。濾液を留去して、粉末状の残渣を得て、それを無水エタノールにとって、濾過した。濾液を濃縮すると、黄色の油状物を得て、それを更に精製しないで使用した。
Ｒｆ（ジクロロメタン／メタノール ９：１）：０．５８
【０２３６】
実施例６ｂ：２−ヨード−１，３−ジテトラデシルチオアセトキシプロパンの調製
１，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロール（実施例３ｆ）（２ｇ、３mmol）をトルエン（１８０ml）に溶解し、次にイミダゾール（０．５３８ｇ、８mmol）、トリフェニルホスフィン（２．０７２ｇ、８mmol）及びヨウ素（１．６０４ｇ、６mmol）を加えた。反応混合物を室温で撹拌し、反応の進行を、薄層クロマトグラフィーで追跡した。２０時間の反応の後、亜硫酸ナトリウムで飽和された溶液を、媒体が完全に平衡するまで加えた。媒体を沈降させ、水相をトルエンで抽出した。有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を留去した。得られた残渣（４．４ｇ）をPuriflashカラム（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン １：９、次に３：７）のクロマトグラフィーにより精製した。
【０２３７】
【表４８】
【０２３８】
実施例６ｃ：１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオプロパンの調製
２−ヨード−１，３−ジテトラデシルチオアセトキシプロパン（実施例６ｂ）（２００mg、０．２７mmol）及び２−（テトラデシルチオ）チオール酢酸（実施例６ａ）（８２mg、０．２７mmol）を蒸留テトラヒドロフラン（３０ml）に溶解した。反応混合物を氷浴で冷却し、その後水素化ナトリウム（２２mg、０．５４mmol）を加えた。この混合物を室温で撹拌した。４８時間後、水素化ナトリウムを加水分解し、テトラヒドロフランを留去した。媒体を酢酸エチルで抽出し、有機相を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、留去した。得られた黄色の油状残渣（１６４mg）を、ショートシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン ５：５）により精製して、目的化合物を黄色の油状物として得た。
【０２３９】
【表４９】
【０２４０】
実施例７：インビトロ実験のための本発明の化合物の調製方法
下記実施例で記載されるインビトロ実験を実施するために、本発明の化合物を下記で記載されるように乳剤の形態で調製した。
【０２４１】
Spoonerらにより記載されたように（Spooner, Clarkら, 1988）、本発明の化合物及びホスファチジルコリン（ＰＣ）を含む乳剤を調製した。本発明の化合物をＰＣと４：１（m/m）比でクロロホルム中で混合し、この混合物を窒素下で乾燥し、次に一晩真空留去し、得られた粉末を、０．０１Ｍ ＥＤＴＡを含む０．１６Ｍ ＫＣｌにとって、この脂質粒子を超音波により３７℃で３０分間分散させた。このようにして形成されたリポソームを次に超遠心分離（ＸＬ８０超遠心分離機、Beckman Coulter, Villepinte, France）により２５，０００rpmで４５分間分離することにより、１００nmを超えてキロミクロンに近い大きさを有するリポソームを回収した。陰性対照として使用するために、ＰＣだけからなるリポソームを同時に調製した。
本発明の化合物におけるリポソームの組成は、酵素比色トリグリセリド測定法キットを用いて推定した。この測定法は、脂質較正物質のＣＦＡＳ、参照番号７５９３５０（Boehringer Mannheim GmbH, Germany）で作製した標準曲線に対して実行した。この標準曲線は、１６〜５００μg/mlの範囲の濃度を包含した。滴定プレート（９６ウェル）上に１ウェルにつき各試料希釈液又は較正標準液１００μlを滴下した。次にトリグリセリド試薬、参照番号７０１９１２（Boehringer Mannheim GmbH, Germany）２００μlを各ウェルに加え、プレート全体を３７℃で３０分間インキュベートした。光学密度（ＯＤ）は、分光光度計で４９２nmで読みとった。各試料におけるトリグリセリド濃度は、一次関数：ｙ＝ａｘ＋ｂ〔式中、ｙは、ＯＤを表し、そしてｘは、トリグリセリド濃度を表す〕としてプロットした標準曲線から計算した。
【０２４２】
このようにして調製された、本発明の化合物を含有するリポソームを、実施例９、１０及び１１に記載されているインビトロ実験で使用した。
【０２４３】
実施例８：本発明の化合物の抗酸化特性の評価
Ａ−銅又はアゾビス（２−アミノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）により誘導されたＬＤＬ酸化に対する保護
ＬＤＬの酸化は、アテローム動脈硬化の発症及び進展において主要な役割を演じる、重要な変性である（Jurgens, Hoffら, 1987）。以下のプロトコールにより、化合物の抗酸化特性を証明することができる。他に記載がなければ、全ての試薬はシグマ（Sigma）（St Quentin, France）製である。
ＬＤＬは、Lebeauらで記載された（Lebeau, Furmanら, 2000）ように調製した。試験化合物の溶液は、最終濃度が、１％（V/V）の総エタノール濃度で０．１〜１００μMの範囲になるように、エタノール中１０〜２Ｍで調製し、ＰＢＳで希釈した。
【０２４４】
酸化の前に、透析によりＬＤＬ調製物からＥＤＴＡを除去した。次に、１６．６μM ＣｕＳＯ4又は２mM ＡＡＰＨ １００μlを、ＬＤＬ（１２５μgタンパク質/ml）８００μl及び試験化合物溶液１００μlに加えることにより、酸化反応を３０℃で行った。追跡すべき種であるジエンの形成は、銅（又はＡＡＰＨ）の存在下又は不在下、本化合物により処理した試料中の２３４nmの光学密度により測定した。２３４nmの光学密度は、１０分毎に８時間、サーモスタット付き分光光度計（Kontron Uvikon 930）で測定した。分析は三重に行った。対照試料に対して遅滞期潜伏時間をシフトするならば、化合物は抗酸化活性を有すると考えた。発明者たちは、本発明の化合物が、ＬＤＬ酸化（銅により誘導）を遅延させることを証明したが、このことは、本発明の化合物が、固有の抗酸化活性を有することを示している。図２は、本発明の化合物により得られた結果の一例を表す。
図２ａは、ＬＤＬと本発明の試験化合物とのインキュベーションが、共役ジエンの形成を遅延させたこと示す。ＬＤＬを１０-4Mの本発明の化合物Ｅｘ４ｇ（上記の実施例４ｇで記載された本発明の化合物）と共にインキュベートしたときに２８２分に達した共役ジエン形成の遅延期と比較すると、遅延期は銅単独では１０４分であった。本発明の化合物Ｅｘ４ａも、また、遅延期を２７０分まで伸ばした。該２個の化合物は、それぞれ１７０及び１６０％の遅延期の増加を誘導した。化合物Ｅｘ４ｈ、４ｑ、４ｏ及び２ａは、それぞれ４３、５４、３７及び６７％の遅延期の増加を誘導した。この共役ジエン形成の遅延は、抗酸化剤の特徴である。本発明の化合物Ｅｘ４ｇ及び４ａは、最も顕著な固有の抗酸化特性をもつ化合物であった。
図２ａは、銅の存在下での本発明の化合物とＬＤＬとのインキュベーションが、共役ジエンの形成速度を遅らせたことを示す。この速度は、銅単独では３nmol/分/mg ＬＤＬであり、そして１０-4Mで化合物Ｅｘ４ａを用いると１nmol/分/mg ＬＤＬに減少し、これは酸化速度の６６％の減速に相当する。本発明の化合物Ｅｘ４ｈ及びＥｘ４ｇも、ＬＤＬ酸化速度を遅くし、この場合は、それぞれ２．５及び１．８nmol/分/mg ＬＤＬであった。本発明の化合物Ｅｘ４ｑ、４ｏ及び２ａを用いるＬＤＬのインキュベーションは、ＬＤＬ酸化速度を有意に変えなかった。
本発明の化合物Ｅｘ４ａ、４ｇ及び４ｈは、固有の抗酸化特性を有し、また、銅誘導ＬＤＬ酸化の速度の減速を促した。
図２ｃは、ＬＤＬと銅とのインキュベーションにより、ＬＤＬ １mg当たり４９６nmolの共役ジエンが形成されたことを示す。化合物Ｅｘ４ａ（１０−４M）とのインキュベーションにより、形成された共役ジエンの最大量の６０％の減少となった。化合物Ｅｘ４ｇ及び４ｈ（１０-4M）も、共役ジエンの形成を抑制した。該化合物とＬＤＬとのインキュベーションにより、形成された共役ジエンの最大量の、それぞれ３１及び２４％の減少となった。
【０２４５】
Ｂ−脂質過酸化反応に対して本発明の化合物により与えられる保護の評価：
試験した本発明の化合物は、その調製が上記の実施例に記載されている化合物である。
ＬＤＬ酸化は、ＴＢＡＲＳ法により測定した。
【０２４６】
上述のものと同じ原理により、ＬＤＬをＣｕＳＯ4の存在下で酸化させて、脂質の過酸化を以下のように評価した：
ＴＢＡＲＳは、分光光度法により測定し、脂質ヒドロペルオキシド化は、ヨウ化物のヨウ素への脂質過酸化物依存性酸化を利用して測定した。結果は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のnmolとして、又はnmolヒドロペルオキシド/mgタンパク質として表される。
結合ジエン形成の抑制を測定することにより上記で得られた結果は、ＬＤＬ脂質過酸化を測定する実験により確認した。また本発明の化合物によって、銅（酸化剤）により誘導された脂質の過酸化に対するＬＤＬの効率的な保護ができた。
【０２４７】
実施例９：細胞培養物に及ぼす本発明の抗酸化特性の測定
Ａ−培養プロトコール：
ニューロン、ニューロブラストーマ（ヒト）及びＰＣ１２細胞（ラット）がこの種の試験に使用した細胞株であった。ＰＣ１２細胞は、ラットのクロム親和性細胞種から調製し、Greene 及び Tischler により特徴づけられた（Greene 及び Tischler, 1976）。これらの細胞は、通常、神経細胞の分化、信号伝達及び神経細胞死の試験に使用される。ＰＣ１２細胞を前述された（Farinelli, Parkら, 1996）ように、１０％ウマ血清及び５％ウシ胎仔血清を補足した完全なＲＰＭＩ培地（Invitrogen）中で増殖した。
内皮及び平滑筋細胞の初代培養物も使用した。細胞はプロモセル（Promocell）（Promocell GmBH, Heidelberg）から得て、供給業者の指示書に従って培養した。
細胞を５〜３００μMの範囲の異なる用量の化合物で２４時間処理した。次に細胞を回収し、標的遺伝子の発現の増加を定量ＰＣＲで評価した。
【０２４８】
Ｂ−ｍＲＮＡ測定：
ｍＲＮＡは、本発明の化合物で処理したか、又はしなかった細胞培養物から抽出した。抽出は、Absolutely RNA RT-PCR ミニプレップキット（Stratagene, France）の試薬で供給業者により指示されたとおりに実行した。次にｍＲＮＡは、分光法により測定して、Light Cycler System (Roche, France) Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green Iキット（Roche）を用いる、定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。抗酸化酵素スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ及びグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）をコードする遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。□−アクチン及びシクロフィリンに特異的なプライマー対を対照プローブとして使用した。
【０２４９】
定量ＲＴ−ＰＣＲで測定した抗酸化酵素遺伝子のｍＲＮＡ発現の増加は、細胞が本発明の化合物で処理されたとき、使用した異なる細胞の種類で実証された。
【０２５０】
Ｃ−酸化ストレスの制御：
培養細胞における酸化種の測定：
化合物の抗酸化特性も、蛍光標識を用いて評価し、その酸化は、蛍光信号の出現により追跡した。発光した蛍光信号の強度の減少は、化合物で処理された細胞において下記の方法で測定した：上記のように培養されたＰＣ１２細胞（ブラック９６ウェルプレート、透明底、Falcon）を、血清無含有培地で、用量を増加させるＨ2Ｏ2（０．２５mM〜１mM）と共に２及び２４時間インキュベートした。インキュベーションの後、培地を除去し、細胞をＰＢＳ中の１０μMジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート溶液（ＤＣＦＤＡ、Molecular Probes, Eugene, USA）と共に３７℃、５％ＣＯ2雰囲気で３０分間インキュベートした。次に細胞をＰＢＳですすいだ。酸化標識により発光している蛍光を、蛍光計（Tecan Ultra 384）により、励起波長４９５nm及び発光波長５３５nmで測定した。結果は、酸化対照に対する保護の百分率として表す。
蛍光強度は、未処理細胞よりも本発明の化合物とインキュベートした細胞において低かった。これらの所見は、本発明の化合物が、酸化ストレスに曝された細胞において酸化種の産生の抑制を促進することを示す。予め述べた抗酸化特性も、培養された細胞における抗ラジカル保護の誘導に有効である。
【０２５１】
Ｄ−脂質の過酸化の測定：
異なる細胞株（上記の細胞モデル）及び初代細胞培養物を前記のように処理した。処理の後、細胞上清を回収し、細胞を溶解し、タンパク質濃度の測定のために回収した。脂質の過酸化を下記のように検出した：脂質の過酸化は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のようなアルデヒドの脂質過酸化と反応する、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）を用いて測定した。処理の後、細胞上清を収集し（９００μl）、ブチル化ヒドロキシトルエン９０μlを加えた（Morliere, Moysanら, 1991）。１５％トリクロロ酢酸を含有する０．２５Ｍ炭酸カリウム中のＴＢＡの０．３７５％溶液１ミリリットルもこの反応媒体に加えた。この混合物を８０℃で１５分間加熱し、氷上で冷却して、有機相をブタノールで抽出した。有機相は、シマヅ１５０１分光蛍光計（島津製作所、京都、日本）で、分光蛍光法（λｅｘ＝５１５nm及びλｅｍ＝５５０nm）により分析した。ＴＢＡＲＳを、テトラ−エトキシプロパンを標準として使用してＭＤＡ当量として表した。結果を、タンパク質濃度に対して標準化した。
本発明の化合物で処理された細胞において観察された脂質の過酸化の減少は、前記の結果を確認する。
本発明の化合物は、有利には、酸化ストレスの影響を遅延及び／又は抑制する、固有の抗酸化特性を示す。発明者たちは、また、本発明の化合物が、抗酸化酵素をコードする遺伝子の発現を誘導することができることも示す。これらの本発明の化合物の特定の特徴は、細胞が酸化ストレスと有効に戦うことを可能にし、したがってフリーラジカル誘発損傷から保護することを可能にする。
【０２５２】
実施例１０：本発明の化合物によるインビトロでのＰＰＡＲ活性の評価
異常脂肪血症及び糖尿病の治療に外来で広く使用されている２つの主な医薬分類であるフィブラート系及びグリタゾン系（glitazones）により活性化される、ＰＰＡＲサブファミリーの核内受容体は、脂質及びブドウ糖のホメオスタシスにおいて重要な役割を演じる。下記の実験データは、本発明の化合物がＰＰＡＲαをインビトロで活性化することを示す。
【０２５３】
ＰＰＡＲ活性化を、酵母菌ｇａｌ４転写因子のＤＮＡ結合ドメイン及び異なるＰＰＡＲのリガンド結合ドメインから構成されるキメラの転写活性を測定することにより、ＲＫ１３線維芽細胞の細胞株又は血液細胞ＨｅｐＧ２においてインビトロで試験した。下記の例は、ＨｅｐＧ２細胞で示す。
【０２５４】
Ａ−培養プロトコール：
ＨｅｐＧ２細胞は、ＥＣＡＣＣ（Porton Down, UK）から得て、１０％（V/V）ウシ胎仔血清、１００U/mlペニシリン（Gibco, Paisley, UK）及び２mM Ｌ−グルタミン（Gibco, Paisley, UK）を補足したＤＭＥＭ培地で増殖させた。培地は２日毎に取り換えた。細胞は、空気９５％／ＣＯ2 ５％の加湿した雰囲気中、３７℃で保持した。
【０２５５】
Ｂ−トランスフェクションに使用したプラスミドの記載：
プラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３、ｐＲＬ−ＣＭＶ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ及びｐＧａｌ４−ｆは、Raspeらにより記載された（Raspe、Madsenら, 1999）。ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα及びｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲβ作成体は、マウスＰＰＡＲα及びヒトＰＰＡＲβ核内受容体のＤＥＦドメインに対応するＰＣＲ増幅ＤＮＡ断片をそれぞれｐＧａｌ４−ｆベクター中にクローン化することにより得た。
【０２５６】
Ｃ−トランスフェクション：
ＨｅｐＧ２細胞を２４ウエル培養皿に５×１０4細胞／ウエルで接種し、前述のプロトコール（Raspe, Madsen ら, 1999）に従って、レポータープラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３（５０ng／ウエル）、発現ベクターｐＧａｌ４−ｆ、ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲβ（１００ng／ウエル）及びトランスフェクション効率制御ベクターｐＲＬ−ＣＭＶ（１ng／ウエル）で２時間トランスフェクトし、次に試験化合物で３６時間インキュベートした。実験の終了時に、細胞を溶解し（Gibco, Paisley, UK）、ルシフェラーゼ活性を、供給者の使用説明書に従って、Dual-Luciferase（商標）Reporter Assay Systemキット（Promega, Madison, WI, USA）により測定した。次に、供給業者による指示によりBio-Rad Protein Assay（Bio-Rad, Munich, Germany）で細胞抽出物中のタンパク含有量を求めた。
【０２５７】
発明者は、本発明の化合物で処理され、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲαプラスミドでトランスフェクトされた細胞のルシフェラーゼ活性が増加したことを示す。該ルシフェラーゼ活性誘導は、本発明の化合物がＰＰＡＲ□の活性化剤であることを示す。図３は、本発明の化合物により得られた結果の例を示す。
図３：Ｇａｌ４−／ＰＰＡＲαプラスミドでトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞を、異なる濃度の本発明の化合物（５、１５、５０及び１００μM）と共に２４時間、並びに異なる濃度のビヒクル（ＰＣ）と共にインキュベートした。結果は、異なる処理の後での誘導係数（未処理細胞と比較した発光信号）として表す。誘導係数が高いほど、ＰＰＡＲ□アゴニスト活性が強力である。結果は、本発明の化合物Ｅｘ２ａが１００μMで最大６２倍の発光信号の誘導を生じ、５０μMでは４１、１５μMでは３１、５μMでは１７であったことを示す。本発明の化合物Ｅｘ４ａは、また、１００μMで４１、５０μMで３０、１５μMで１８、５μMで９である誘導係数の用量依存的増加を示した。本発明の化合物Ｅｘ４ｐは、また、発光信号の増加を誘導し、ＰＰＡＲα核内受容体に対する活性が明らかとなった。化合物Ｅｘ４ｐの誘導係数は、１００μMで３５、５０μMで４４、１５μMで３６、５μMで２４であった。一方、細胞をビヒクル（ＰＣリポソーム）と共にインキュベートした場合、有意な誘導は観察されなかった。
これらの結果は、試験された本発明の化合物が有意なＰＰＡＲ□リガンド活性を示し、したがってそれらの転写活性を可能にすることを示す。
【０２５８】
実施例１１：本発明の化合物の抗炎症特性の評価
炎症反応は、脳虚血のような多くの神経疾患において観察される。炎症は、また、神経変性の重要な因子である。発作では、グリア細胞の最初の反応の１つは、サイトカイン及びフリーラジカルを放出することである。このサイトカイン及びフリーラジカルの放出により、脳における炎症性反応を生じ、これが神経細胞死を引き起こす可能性がある（Rothwell 1997）。
【０２５９】
細胞株及び初代細胞を、上記のように培養した。
リポ多糖類（ＬＰＳ）細菌性内毒素（Escherichia coli 0111 :B4）（Sigma, France）を蒸留水で再構成し、４℃で保存した。細胞をＬＰＳ １μg/mlで２４時間処理した。他の因子からの干渉を避けるため、培地を完全に交換した。
ＴＮＦ−αは、ストレス（例えば、酸化ストレス）に対する炎症反応における重要な因子である。ＬＰＳの用量の増加による刺激に応答するＴＮＦ−α分泌を評価するため、刺激を受けた細胞の培地を除去し、ＴＮＦ−αをＥＬＩＳＡ−ＴＮＦ−αキット（Immunotech, France）により測定した。試料を５０倍に希釈して、標準曲線（Chang, Hudsonら, 2000）の範囲内にした。
化合物の抗炎症特性を下記のように特徴付けした：
細胞培地を完全に交換し、細胞を試験化合物と共に２時間インキュベートし、その後、ＬＰＳを最終濃度１μg/mlで培地に加えた。２４時間のインキュベーションの後、細胞上清を回収し、直接処理しない場合は、−８０℃で保存した。細胞を溶解し、タンパク質を、供給業者の指示書によりBio-Rad Protein Assayキット（Bio-Rad, Munich, Germany）で定量した。
【０２６０】
試験化合物による処理で誘導されたＴＮＦ−α分泌の減少の測定値は、pg/ml/μgタンパク質として、かつ対照に対する百分率として表される。これらの結果は、本発明の化合物が、抗炎症特性を有することを示す。
【０２６１】
実施例１２：脳虚血−再灌流モデルにおける本発明の化合物の神経保護作用の評価
Ａ−予防モデル：
１−動物の処置
１．１動物及び化合物の投与
体重２００〜３５０ｇのウィスターラットをこの実験に使用した。
動物を、１２時間の明／暗サイクル、２０℃±３℃の温度で維持した。水及び食餌は適宜に入手可能であった。食物摂取量及び体重増加を記録した。
【０２６２】
中大脳動脈の閉塞により誘導される虚血の前に、動物を、ビヒクル（０．５％カルボキシセルロース（ＣＭＣ）及び０．１％ツイーン）に懸濁した本発明の化合物（６００mg/kg/日）を用いるか、又はビヒクルのみを用いる胃管栄養法により１４日間処置した。
使用したカルボキシメチルセルロースは、中間粘度のカルボキシメチルセルロースのナトリウム塩である（Ref. C4888, Sigma-Aldrich, France）。使用されたツイーンは、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートである（Tween 80, Ref. P8074, Sigma-Aldrich, France)。
【０２６３】
１．２中大脳動脈の腔内閉塞による虚血誘導−再灌流：
動物を抱水クローラル３００mg/kgの腹腔内注入により麻酔した。直腸プローブを挿入し、体温を３７℃±０．５℃に維持した。試験を通して、血圧を監視した。
【０２６４】
外科用顕微鏡下で、頸の中央部の切開により右頸動脈を露出した。翼突口蓋動脈をその起点で結紮し、動脈切開を外頸動脈で行って、ナイロン製のモノフィラメントを挿入できるようにし、それを、総頸動脈まで穏やか進め、次に内頸動脈内に進めて、中大脳動脈の起点を閉塞するようにした。１時間後にフィラメントを抜いて再灌流を可能にした。
【０２６５】
２−脳梗塞量の測定：
再灌流の２４時間後、本発明の化合物で予め処置したか、又は処置していない動物を、ペントバルビタールの過剰投与により麻酔をかけた。
【０２６６】
脳を急速に凍結し、薄切りにした。切片をクレシルバイオレットで染色した。脳切片の未染色の帯域は、梗塞により損傷を受けたと考えた。領域（梗塞及び２つの半球）を測定し、梗塞及び２つの半球の量を計算し、修正梗塞量を次の式：（修正梗塞量＝梗塞量−（右半球の量−左半球の量））により決定して、脳浮腫を補償した。
本発明の化合物で処置した動物の脳切片の分析によって、未処置の動物と比較して、梗塞量の著しい減少が明らかとなった。虚血の前に、本発明の化合物を動物に投与すると（予防効果）、これらは神経保護を誘導することができた。
【０２６７】
図４ａ及び４ｂは、本発明の化合物により得られた結果の一例を示す。
図４ａの例は、修正梗塞量の合計（後虚血病巣サイズ）が１８６mm3であったことを示す。動物を、虚血誘導の前に、化合物Ｅｘ４ａ（実施例４ａで記載された本発明の化合物）を用いて３００mg/kg/日を１日に２回、経口により１４日間処置した場合、病巣の大きさが対照動物の病巣の大きさに対して２２％（１４５mm3）減少した。
未修正梗塞量を描写している図４ｂの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の２２％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは作用がない（病巣の有意な減少がない）ことからなることを示している。
【０２６８】
３−抗酸化酵素活性の測定：
ラットの脳を冷凍し、粉砕し、粉末まで小さくし、次に食塩水に再懸濁した。次に、下記の著者により記載されているように、異なる酵素活性を測定した：スーパーオキシドジスムターゼ（Flohe 及び Otting 1984）；グルタチオンペルオキシダーゼ（Paglia 及び Valentine 1967）；グルタチオンレダクターゼ（Spooner, Delidesら, 1981）；グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（Habig 及び Jakoby 1981）；カタラーゼ（Aebi 1984）。
該異なる酵素活性は、本発明の化合物で処置された動物の脳調製物において増加された。
【０２６９】
Ｂ−治療的又は急性期処置モデル：
１−中大脳動脈の腔内閉塞による虚血誘導/再灌流：
前記のような動物をこの実験に使用した。動物を抱水クローラル３００mg/kgの腹腔内注入により麻酔した。直腸プローブを挿入し、体温を３７℃±０．５℃に維持した。試験を通して、血圧を監視した。
【０２７０】
外科用顕微鏡下で、頸の中央部の切開により右頸動脈を露出した。翼突口蓋動脈をその起点で結紮し、動脈切開を外頸動脈で行って、ナイロン製のモノフィラメントを挿入できるようにし、それを、総頸動脈まで穏やか進め、次に内頸動脈内に進めて、中大脳動脈の起点を閉塞するようにした。１時間後にフィラメントを抜いて再灌流を可能にした。
【０２７１】
２−動物の処置：
最初に虚血−再灌流に付した動物を、再灌流の後、本発明の化合物を用いて経口（前記のようなＣＭＣ−ツイーンビビクル）により１回以上（６００mg/kg/日又は３００mg/kg/日を１日二回）処置した。
【０２７２】
３−脳梗塞量の測定：
再灌流の２４、４８又は７２時間後、化合物で予め処置したか、又は処置していない動物を、ペントバルビタールの過剰投与により麻酔をかけた。
脳を急速に凍結し、薄切りにした。切片をクレシルバイオレットで染色した。脳切片の未染色の帯域は、梗塞により損傷を受けたと考えた。領域（梗塞及び２つの半球）を測定し、梗塞及び２つの半球の量を計算し、修正梗塞量を次の式：（修正梗塞量＝梗塞量−（右半球の量−左半球の量））により決定して、脳浮腫を補償した。
治療的処置の場合（急性期の処置）、本発明の化合物で処置された動物は、未処置の動物よりも脳損傷が少なかった。事実、虚血−再灌流の後、本発明の化合物を１回以上投与した場合、梗塞量は少なかった。図４ｃ〜４ｆは、本発明の化合物により得られた結果の一例を示す。
図４ｃの結果は、虚血の後、本発明の化合物Ｅｘ４ａ（６００mg/kg/日）で２４時間処置された動物が、対照動物よりも２７％小さい病巣を発症した（梗塞量：処置動物１３２mm3対対照１８０mm3）ことを示す。
未修正梗塞量を描写している図４ｄの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の２５％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは作用がない（病巣の有意な減少がない）ことからなることを示している。
図４ｅの結果は、虚血の後、本発明の化合物Ｅｘ４ａ（６００mg/kg/日）で７２時間処置された動物が、対照動物よりも４０％小さい病巣を発症した（修正梗塞量：処置動物１１０mm3対対照１８０mm3）ことを示す。
未修正梗塞量を描写している図４ｆの結果は、梗塞全体で観察された本発明の化合物ＥＸ４ａの治療的及び神経保護的特徴が、皮質梗塞のレベルでは神経保護作用（病巣の３２％減少）があるが、線条体梗塞のレベルでは（病巣の２３％減少）であることからなることを示している。
【０２７３】
異なる実験モデルにおける本発明の化合物の使用は、該化合物が固有の抗酸化活性を示し、酸化ストレスの作用を遅延かつ減少することができ、更に、抗酸化酵素をコードする遺伝子の発現も誘導し、その抗酸化特性と一緒になって、フリーラジカルからの保護を強化することを示す。加えて、本発明の化合物は、抗炎症活性を示し、ＰＰＡＲ□求核受容体を活性化することができる。
最後に、本発明の化合物の動物虚血−再灌流モデルにおける使用は、保護的であり、治療的でもある処置の両方の有益な神経保護作用を明らかにした。
【０２７４】
【表５０】
【０２７５】
【表５１】
【図面の簡単な説明】
【０２７６】
【図１Ａ】本発明のアシルグリセロールの構造である（実施例２ａ、２ｃ、４ａ〜ｒ）。
【図１Ｂ】本発明の特定の化合物の構造である（実施例５ａ〜ｂ、６〜ｃ）。
【図２】銅（Ｃｕ）によるＬＤＬ酸化に対する本発明の化合物の抗酸化特性の評価である。ａは、経時的な又は遅延期における共役ジエン形成である。ｂは、ジエン形成の速度である。ｃは、形成された共役ジエンの最大量である。
【図３】Ｇａｌ４／ＰＰＡＲαトランス活性化系における本発明の化合物のＰＰＡＲαアゴニスト特性の評価である。
【図４−１】本発明の化合物の神経保護作用の評価である。ａは、予防的神経保護作用である。ｂは、脳の異なる領域における予防的神経保護作用である。ｃは、治療的作用である（急性期２４時間）。ｄは、脳の異なる領域における治療的作用である（急性期２４時間）。
【図４−２】本発明の化合物の神経保護作用の評価である。ｅは、治療的神経保護作用である（急性期７２時間）。ｆは、脳の異なる領域における治療的神経保護作用である（急性期７２時間）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脳血管病変を処置する医薬組成物の調製のための化合物の使用であって、化合物が下記の一般式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、
Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基を表し、
Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子、ＣＯ−Ｒ基、又は式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基を表し（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）、
Ｒは、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基であり、
Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、
ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、
Ｒ′は、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個、好ましくは１０〜２３個の炭素原子及び可能であれば酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である〕により表される化合物の使用。
【請求項２】
脳血管病変が脳虚血又は出血性発作である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、1〜２０個の炭素原子、好ましくは７〜１７個の炭素原子、さらにより好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表すことを特徴とする、請求項１及び２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１２〜２３個の炭素原子、さらにより好ましくは１３〜２０個の炭素原子、有利には１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表すことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、Ｃ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、エイコサペンタン酸（ＥＰＡ）Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）及びドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）のアルキル鎖、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3〔ｘは、１〜１１と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、Ｃ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）、Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3〔ｘは、１〜１１と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基を表すことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、１４個の炭素原子を含む、飽和した直鎖のアルキル基であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
アルキル基が、ハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）及びＯＨ、＝Ｏ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＣＮ、ＣＨ2−ＯＨ、Ｏ−ＣＨ3、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3及びＣＯＯＺ基（ここで、Ｚは、水素原子又は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）からなる群より選択される、同一であるか又は異なる１個以上の置換基により置換されていることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
Ｘが、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１１】
Ｇ基が、酸素原子又はＮ−Ｒ４基を表し、そしてＧが、Ｎ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表すことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項記載の使用。
【請求項１２】
ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎが、０〜３の間に含まれ、とりわけ０〜２の間に含まれ、特に０と等しいことを特徴とする、前請求項１〜１１のいずれか１項記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和した直鎖のアルキル基である）を表す、請求項１〜１２のいずれか１項記載の式（Ｉ）の使用。
【請求項１４】
Ｒ２が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０と等しい）に対応する基、特に式：ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基であることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１項記載の使用。
【請求項１５】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、水素原子又はＣＯ−Ｒ基を表すことを特徴とする、請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基を表すことを特徴とする、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの２個が、同一であるか又は異って、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０と等しい）であり、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基であることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項記載の使用。
【請求項１８】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、同一であるか又は異なって、好ましくは同一であって、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０〜３の間に含まれ、特に０と等しい）であることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項記載の使用。
【請求項１９】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基を表すことを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項記載の使用。
【請求項２０】
置換基Ｒ１、Ｒ２又はＲ３のうちの１又は２個が、ＣＯＣＨ3基であることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項記載の使用。
【請求項２１】
Ｇ基が硫黄原子を表すことを特徴とする、請求項１〜１０及び１２〜２０のいずれか１項記載の使用。
【請求項２２】
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
からなる群より選択される、請求項１で定義された式（Ｉ）により表される化合物。
【請求項２３】
請求項２２で同定された一般式（Ｉ）により表される少なくとも１個の化合物を、薬学的に許容されうるビヒクル中に含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項２４】
脳血管病変、より詳細には、脳虚血又は発作の処置を意図する、請求項１〜２３記載の医薬組成物。
【請求項１】
脳血管病変を処置する医薬組成物の調製のための化合物の使用であって、化合物が下記の一般式（Ｉ）：
【化１】
〔式中、
Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基を表し、
Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基であり、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子、ＣＯ−Ｒ基、又は式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基を表し（ここで、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）、
Ｒは、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基であり、
Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、
ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、
Ｒ′は、飽和又はそうではない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個、好ましくは１０〜２３個の炭素原子及び可能であれば酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基からなる群より選択される１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である〕により表される化合物の使用。
【請求項２】
脳血管病変が脳虚血又は出血性発作である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、1〜２０個の炭素原子、好ましくは７〜１７個の炭素原子、さらにより好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表すことを特徴とする、請求項１及び２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１２〜２３個の炭素原子、さらにより好ましくは１３〜２０個の炭素原子、有利には１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表すことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、Ｃ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、エイコサペンタン酸（ＥＰＡ）Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）及びドコサヘキサン酸（ＤＨＡ）Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）のアルキル鎖、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3〔ｘは、１〜１１と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、Ｃ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ12Ｈ25、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）、Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3〔ｘは、１〜１１と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ′は、１〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″は、１〜５と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、ｎ″′は、０〜２２と等しいか、又はその間に含まれる整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下、好ましくは２０以下である〕からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
Ｒ基が、同一であるか又は異なって、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基を表すことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
Ｒ′基が、同一であるか又は異なって、１４個の炭素原子を含む、飽和した直鎖のアルキル基であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
アルキル基が、ハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）及びＯＨ、＝Ｏ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＣＮ、ＣＨ2−ＯＨ、Ｏ−ＣＨ3、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3及びＣＯＯＺ基（ここで、Ｚは、水素原子又は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）からなる群より選択される、同一であるか又は異なる１個以上の置換基により置換されていることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
Ｘが、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１１】
Ｇ基が、酸素原子又はＮ−Ｒ４基を表し、そしてＧが、Ｎ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表すことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項記載の使用。
【請求項１２】
ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎが、０〜３の間に含まれ、とりわけ０〜２の間に含まれ、特に０と等しいことを特徴とする、前請求項１〜１１のいずれか１項記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、さらにより好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和した直鎖のアルキル基である）を表す、請求項１〜１２のいずれか１項記載の式（Ｉ）の使用。
【請求項１４】
Ｒ２が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０と等しい）に対応する基、特に式：ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基であることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１項記載の使用。
【請求項１５】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、水素原子又はＣＯ−Ｒ基を表すことを特徴とする、請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基を表すことを特徴とする、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基のうちの２個が、同一であるか又は異って、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０と等しい）であり、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基であることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項記載の使用。
【請求項１８】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、同一であるか又は異なって、好ましくは同一であって、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、そして／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和した直鎖のアルキル基であり、より好ましくは式中、ｎは、０〜３の間に含まれ、特に０と等しい）であることを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項記載の使用。
【請求項１９】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基を表すことを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項記載の使用。
【請求項２０】
置換基Ｒ１、Ｒ２又はＲ３のうちの１又は２個が、ＣＯＣＨ3基であることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項記載の使用。
【請求項２１】
Ｇ基が硫黄原子を表すことを特徴とする、請求項１〜１０及び１２〜２０のいずれか１項記載の使用。
【請求項２２】
１，３−ジテトラデシルチオアセチル−２−パルミトイルグリセロール；
１，３−ジアセチル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジオクタノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；
１，３−ジウンデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロール；及び
１，３−ジテトラデシルチオアセトキシ−２−（２−テトラデシルチオ）メチルカルボニルチオ−プロパン
からなる群より選択される、請求項１で定義された式（Ｉ）により表される化合物。
【請求項２３】
請求項２２で同定された一般式（Ｉ）により表される少なくとも１個の化合物を、薬学的に許容されうるビヒクル中に含むことを特徴とする、医薬組成物。
【請求項２４】
脳血管病変、より詳細には、脳虚血又は発作の処置を意図する、請求項１〜２３記載の医薬組成物。
【図２】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【図３】
【図４−１】
【図４−２】
【公表番号】特表２００６−５１７９５４（Ｐ２００６−５１７９５４Ａ）
【公表日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０２１２８（Ｐ２００６−５０２１２８）
【出願日】平成１６年２月２日（２００４．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０００２２９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２４１
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０３０６７１１１）
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＦＩＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月３日（２００６．８．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年２月２日（２００４．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００４／０００２２９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２４１
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０３０６７１１１）
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＦＩＴ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]