アデノシン三リン酸産生促進剤及びアデノシン三リン酸産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤
【課題】安全性の高い天然抽出物の中からアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とするＡＴＰ産生促進剤、及び当該ＡＴＰ産生促進剤を含有するＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供する。
【解決手段】ＡＴＰ産生促進剤に、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有せしめる。
【解決手段】ＡＴＰ産生促進剤に、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有せしめる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進剤及びアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤に関し、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進し得るＡＴＰ産生促進剤及びＡＴＰの産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
労働や運動により発生し蓄積する疲労を回復し、また労働や運動前に服用して労働や運動による疲労を予防することのできる抗疲労剤として、特定のビタミン類を有効成分とする錠剤やドリンク剤等の形態で市販されており、特にドリンク剤の需要は年々増加傾向にある。
【０００３】
一方で、脂肪は、高カロリー、高エネルギーの栄養素であるが、脂肪の構成成分である脂肪酸は、細胞内のミトコンドリアに取り込まれて、β酸化、ＴＣＡサイクル及び酸化的リン酸化反応を経て、多量の酸素を使用してアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）が産生され、エネルギーとして利用される。そのため、このＡＴＰの産生量が低下することによって、労働や運動等の活動に必要なエネルギーが不足し、その結果として疲労を招くと考えられており、細胞内のミトコンドリアにおけるＡＴＰの産生を促進することによって、疲労回復効果を向上することができると考えられる。
【０００４】
このような考えに基づいて、従来、ＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、モモ、センキュウ、サンザシ、カミツレ、マチルスオドラチシマ、トウキ、ワイルドタイム、サンショウ、クスノハガシワ、シャクヤク、オニイチゴ、ケイヒ、ショウブ、タイソウ等の各植物からの抽出物（特許文献１参照）、ナンヨウスギ属植物からの抽出物（特許文献２参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−０８４２１６号公報
【特許文献２】特開２００７−１０６７４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、安全性の高い天然抽出物の中からＡＴＰ産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とするＡＴＰ産生促進剤、及び当該ＡＴＰ産生促進剤を含有するＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤を提供する。上記発明に係るアデノシン三リン酸産生促進剤は、特に肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生を促進することができる。
【０００８】
また、本発明は、上記アデノシン三リン酸産生促進剤を含有することを特徴とする肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生量の低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、安全性の高い天然抽出物を有効成分として含有するＡＴＰ産生促進剤、及び当該ＡＴＰ産生促進剤を含有するＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について説明する。
本発明のＡＴＰ産生促進剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する。
【００１１】
本発明において「抽出物」には、所定の天然物を抽出原料として用いて得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１２】
〔カキ抽出物の製造〕
カキは、世界中の海域に分布するオストレア属又はクラスオストレア属に属する二枚貝であって、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るカキとしては、イタボガキ（学名：Ostrea denseramellosa）フランスガキ（学名：Ostrea edulis）、オリンピアガキ（学名：Ostrea lurida）、マガキ（学名：Crassostrea gigas）、イワガキ（学名：Crassostrea nippona）、アメリカガキ（学名：Crassostrea virginica）、ポルトガルガキ（Crassostrea angulata）等を例示することができるが、これらに限定されるものではない。
【００１３】
カキ抽出物に含有されるＡＴＰ産生促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、カキからこの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１４】
例えば、殻から剥いたカキ（カキ肉）を所望により乾燥し、粉砕することなくそのまま抽出溶媒による抽出に供することにより、ＡＴＰ産生促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって洗浄等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。前処理を行うことにより、カキの抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、例えば、４０〜１００℃、好ましくは６０〜１００℃の熱水、エタノール、エタノール水溶液等を例示することができる。
【００１６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
エタノール水溶液を抽出溶媒として使用する場合、エタノールと水との混合比は適宜調整することができる。
【００１８】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２０】
〔ローヤルゼリー蛋白加水分解物の製造〕
ローヤルゼリー蛋白加水分解物は、ローヤルゼリーに水及び蛋白質分解酵素（プロテアーゼ）を添加し、加温及び加圧下で反応させることにより製造することができる。
【００２１】
ローヤルゼリーは、ミツバチ科ヨーロッパミツバチ（学名：Apis melifera L.）のうちの若い働き蜂の咽頭腺からの分泌物であり、女王蜂となる幼虫や成虫となった女王蜂に給餌されるものである。
【００２２】
ローヤルゼリーに添加される水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが挙げられる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が挙げられる。したがって、本発明においてローヤルゼリーに添加される水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
ローヤルゼリーに添加されるプロテアーゼとしては、ローヤルゼリー中のタンパク質を分解し得るものであれば特に限定されるものではなく、例えば、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼ等を例示することができ、これらのうち、中性プロテアーゼを好適に用いることができる。
【００２４】
ローヤルゼリーに添加する水の添加量は、特に限定されるものではなく、ローヤルゼリー１質量部に対して２〜１０質量部程度であればよい。また、プロテアーゼの添加量は、使用するプロテアーゼの種類にもよるが、例えば、プロテアーゼとして中性プロテアーゼ（デナチームＡＰ，ナガセケムテックス社製）を使用した場合、ローヤルゼリー１質量部に対して０．００５〜０．０２質量部程度であればよい。
【００２５】
反応時における加温条件としては、例えば、４０〜８０℃程度であればよく、特に５０℃程度であるのが好ましい。また、加圧条件としては、例えば、５０〜１５０ＭＰａ程度であればよく、特に６０ＭＰａ程度であるのが好ましい。
【００２６】
このようにして得られる酵素分解液に１，３−ブチレングリコールを添加し、所定期間冷所に放置し、生成したオリや沈殿を濾過することで、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を得ることができる。
【００２７】
このようにして得られたローヤルゼリー蛋白加水分解物は、そのままＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用してもよいし、当該ローヤルゼリー蛋白加水分解物を常法により希釈、濃縮、乾燥した希釈物、濃縮物、乾燥物、又は得られた乾燥物を所定の粒径に粉砕した粉砕物を上記有効成分として使用してもよい。
【００２８】
〔ヒハツ抽出物及び高麗人参抽出物の製造〕
ヒハツ（学名：Piper longum Linn.）は、東南アジアに広く分布するコショウ科コショウ属に属する常緑のつる性植物であり、これらの地域から容易に入手することができる。また、ヒハツの果穂は、多肉質の太い円筒状であり、香辛料として利用されている。抽出原料として使用し得るヒハツの構成部位としては、例えば果穂、根、葉、茎、花等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、特に果穂を使用するのが好ましい。
【００２９】
高麗人参（学名：Panax ginseng C.A. Meyer，別名：朝鮮人参，オタネニンジン）は、中国、日本の東北地方等で栽培されているウコギ科トチバニンジン属に属する多年生草本であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るオタネニンジンの構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、好ましくは根部である。
【００３０】
ヒハツ及び／又は高麗人参からの抽出物に含有されるＡＴＰ産生促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記植物からこの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００３１】
例えば、上記植物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、ＡＴＰ産生促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記天然物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３２】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３３】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３４】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３５】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００３６】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３７】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３８】
〔黒ニンニク粉砕物の製造〕
黒ニンニクは、ニンニクを熟成させることにより得ることができるものであり、ニンニク（学名：Allium sativum）は、青森、中国等で栽培されているネギ科ネギ属に属する多年草の根茎部であって、これらの地域から容易に入手することができる。
【００３９】
黒ニンニクは、玄米を発酵させてなる玄米発酵物（例えば、米酢、黒酢、酒、味噌、しょうゆ等）にニンニクを漬け込み、そのニンニクを、遠赤外線を熱源として備える蒸し器にて３０〜７０℃で２５０〜３５０時間蒸してニンニクを熟成させることにより得ることができる。
【００４０】
このようにして得られた黒ニンニクを２００℃程度に加温しながら５〜６０ＭＰａに加圧した後、瞬時に減圧して常圧にする。これにより、黒ニンニクを粉砕してなり、多孔質構造を有する黒ニンニク粉砕物を製造することができる。
【００４１】
以上のようにして得られるカキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物は、ＡＴＰ産生促進作用を有しているため、その作用を利用してＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができる。
【００４２】
また、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物は、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進する作用を有しているため、その作用を利用して、肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤の有効成分として使用することもできる。肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患としては、例えば、高アンモニア血症等が挙げられる。
【００４３】
本発明のＡＴＰ産生促進剤又は肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上のみからなるものでもよいし、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を製剤化したものでもよい。
【００４４】
カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上は、他の組成物（例えば、飲食品等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４５】
なお、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、必要に応じて、ＡＴＰ産生促進作用を有する天然抽出物等を、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４６】
本発明のＡＴＰ産生促進剤の患者に対する投与方法としては、静脈内投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のＡＴＰ産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４７】
本発明のＡＴＰ産生促進剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上が有するＡＴＰ産生促進作用を通じて、ＡＴＰの産生を促進することができ、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができる。これにより、運動や労働等によって蓄積した疲労を回復することができる。また、特に、肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患（例えば、高アンモニア血症等）を予防・治療することができる。ただし、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、これらの用途以外にもＡＴＰ産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
なお、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４９】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限されるものではない。なお、下記の試験例においては、試料としてカキ抽出物（丸善製薬社製，商品名：カキエキスパウダー，試料１）、ローヤルゼリー蛋白加水分解物（丸善製薬社製，商品名：脱蛋白ローヤルゼリー粉末，試料２）、ヒハツ抽出物（丸善製薬社製，商品名：ヒハツエキスパウダーＭＦ，試料３）、高麗人参抽出物（丸善製薬社製，商品名：高麗人参エキスパウダーＦ，試料４）及び黒ニンニク粉砕物（丸善製薬社製，商品名：熟成黒にんにく爆砕パウダー，試料５）を使用した。
【００５０】
〔試験例１〕ＡＴＰ産生促進作用試験
カキ抽出物（試料１）、ローヤルゼリー蛋白加水分解物（試料２）、ヒハツ抽出物（試料３）、高麗人参抽出物（試料４）及び黒ニンニク粉砕物（試料５）について、以下のようにしてＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【００５１】
正常ヒト肝細胞（Hepatocyte）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００５２】
培養終了後、培地を抜き、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに試料を溶解した試料溶液（試料１〜５，試料濃度は下記表１を参照）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、２時間培養した。
【００５３】
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定することにより評価した。すなわち、培養終了後、ＡＴＰ測定試薬（商品名：『細胞の』ＡＴＰ測定試薬，東洋ビーネット社製）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、反応後の化学発光量を、化学発光測定装置（Bio-Tex Instruments, Inc.社製，製品名：KL-800）を用いて測定した。得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。
【００５４】
ＡＴＰ産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料無添加時の化学発光量」を表し、Ｂは「試料添加時の化学発光量」を表す。
結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
【００５６】
表１に示すように、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物（試料１〜５）は、いずれも肝細胞においてＡＴＰの産生を促進し得ることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進剤は、運動や労働により蓄積した疲労の回復に大きく貢献できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進剤及びアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤に関し、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進し得るＡＴＰ産生促進剤及びＡＴＰの産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
労働や運動により発生し蓄積する疲労を回復し、また労働や運動前に服用して労働や運動による疲労を予防することのできる抗疲労剤として、特定のビタミン類を有効成分とする錠剤やドリンク剤等の形態で市販されており、特にドリンク剤の需要は年々増加傾向にある。
【０００３】
一方で、脂肪は、高カロリー、高エネルギーの栄養素であるが、脂肪の構成成分である脂肪酸は、細胞内のミトコンドリアに取り込まれて、β酸化、ＴＣＡサイクル及び酸化的リン酸化反応を経て、多量の酸素を使用してアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）が産生され、エネルギーとして利用される。そのため、このＡＴＰの産生量が低下することによって、労働や運動等の活動に必要なエネルギーが不足し、その結果として疲労を招くと考えられており、細胞内のミトコンドリアにおけるＡＴＰの産生を促進することによって、疲労回復効果を向上することができると考えられる。
【０００４】
このような考えに基づいて、従来、ＡＴＰ産生促進作用を有するものとして、モモ、センキュウ、サンザシ、カミツレ、マチルスオドラチシマ、トウキ、ワイルドタイム、サンショウ、クスノハガシワ、シャクヤク、オニイチゴ、ケイヒ、ショウブ、タイソウ等の各植物からの抽出物（特許文献１参照）、ナンヨウスギ属植物からの抽出物（特許文献２参照）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−０８４２１６号公報
【特許文献２】特開２００７−１０６７４１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、安全性の高い天然抽出物の中からＡＴＰ産生促進作用を有するものを見出し、それを有効成分とするＡＴＰ産生促進剤、及び当該ＡＴＰ産生促進剤を含有するＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を解決するために、本発明は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤を提供する。上記発明に係るアデノシン三リン酸産生促進剤は、特に肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生を促進することができる。
【０００８】
また、本発明は、上記アデノシン三リン酸産生促進剤を含有することを特徴とする肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生量の低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、安全性の高い天然抽出物を有効成分として含有するＡＴＰ産生促進剤、及び当該ＡＴＰ産生促進剤を含有するＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明について説明する。
本発明のＡＴＰ産生促進剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有する。
【００１１】
本発明において「抽出物」には、所定の天然物を抽出原料として用いて得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１２】
〔カキ抽出物の製造〕
カキは、世界中の海域に分布するオストレア属又はクラスオストレア属に属する二枚貝であって、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るカキとしては、イタボガキ（学名：Ostrea denseramellosa）フランスガキ（学名：Ostrea edulis）、オリンピアガキ（学名：Ostrea lurida）、マガキ（学名：Crassostrea gigas）、イワガキ（学名：Crassostrea nippona）、アメリカガキ（学名：Crassostrea virginica）、ポルトガルガキ（Crassostrea angulata）等を例示することができるが、これらに限定されるものではない。
【００１３】
カキ抽出物に含有されるＡＴＰ産生促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、天然物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、カキからこの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００１４】
例えば、殻から剥いたカキ（カキ肉）を所望により乾燥し、粉砕することなくそのまま抽出溶媒による抽出に供することにより、ＡＴＰ産生促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって洗浄等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。前処理を行うことにより、カキの抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１５】
抽出溶媒としては、例えば、４０〜１００℃、好ましくは６０〜１００℃の熱水、エタノール、エタノール水溶液等を例示することができる。
【００１６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１７】
エタノール水溶液を抽出溶媒として使用する場合、エタノールと水との混合比は適宜調整することができる。
【００１８】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００２０】
〔ローヤルゼリー蛋白加水分解物の製造〕
ローヤルゼリー蛋白加水分解物は、ローヤルゼリーに水及び蛋白質分解酵素（プロテアーゼ）を添加し、加温及び加圧下で反応させることにより製造することができる。
【００２１】
ローヤルゼリーは、ミツバチ科ヨーロッパミツバチ（学名：Apis melifera L.）のうちの若い働き蜂の咽頭腺からの分泌物であり、女王蜂となる幼虫や成虫となった女王蜂に給餌されるものである。
【００２２】
ローヤルゼリーに添加される水としては、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが挙げられる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が挙げられる。したがって、本発明においてローヤルゼリーに添加される水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２３】
ローヤルゼリーに添加されるプロテアーゼとしては、ローヤルゼリー中のタンパク質を分解し得るものであれば特に限定されるものではなく、例えば、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼ等を例示することができ、これらのうち、中性プロテアーゼを好適に用いることができる。
【００２４】
ローヤルゼリーに添加する水の添加量は、特に限定されるものではなく、ローヤルゼリー１質量部に対して２〜１０質量部程度であればよい。また、プロテアーゼの添加量は、使用するプロテアーゼの種類にもよるが、例えば、プロテアーゼとして中性プロテアーゼ（デナチームＡＰ，ナガセケムテックス社製）を使用した場合、ローヤルゼリー１質量部に対して０．００５〜０．０２質量部程度であればよい。
【００２５】
反応時における加温条件としては、例えば、４０〜８０℃程度であればよく、特に５０℃程度であるのが好ましい。また、加圧条件としては、例えば、５０〜１５０ＭＰａ程度であればよく、特に６０ＭＰａ程度であるのが好ましい。
【００２６】
このようにして得られる酵素分解液に１，３−ブチレングリコールを添加し、所定期間冷所に放置し、生成したオリや沈殿を濾過することで、ローヤルゼリー蛋白加水分解物を得ることができる。
【００２７】
このようにして得られたローヤルゼリー蛋白加水分解物は、そのままＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用してもよいし、当該ローヤルゼリー蛋白加水分解物を常法により希釈、濃縮、乾燥した希釈物、濃縮物、乾燥物、又は得られた乾燥物を所定の粒径に粉砕した粉砕物を上記有効成分として使用してもよい。
【００２８】
〔ヒハツ抽出物及び高麗人参抽出物の製造〕
ヒハツ（学名：Piper longum Linn.）は、東南アジアに広く分布するコショウ科コショウ属に属する常緑のつる性植物であり、これらの地域から容易に入手することができる。また、ヒハツの果穂は、多肉質の太い円筒状であり、香辛料として利用されている。抽出原料として使用し得るヒハツの構成部位としては、例えば果穂、根、葉、茎、花等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、特に果穂を使用するのが好ましい。
【００２９】
高麗人参（学名：Panax ginseng C.A. Meyer，別名：朝鮮人参，オタネニンジン）は、中国、日本の東北地方等で栽培されているウコギ科トチバニンジン属に属する多年生草本であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るオタネニンジンの構成部位としては、例えば、葉部、茎部、花部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられ、これらのうち１種又は２種以上を抽出原料として使用することができるが、好ましくは根部である。
【００３０】
ヒハツ及び／又は高麗人参からの抽出物に含有されるＡＴＰ産生促進作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、上記植物からこの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００３１】
例えば、上記植物を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、ＡＴＰ産生促進作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記天然物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００３２】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００３３】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００３４】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３５】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００３６】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３７】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでもＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３８】
〔黒ニンニク粉砕物の製造〕
黒ニンニクは、ニンニクを熟成させることにより得ることができるものであり、ニンニク（学名：Allium sativum）は、青森、中国等で栽培されているネギ科ネギ属に属する多年草の根茎部であって、これらの地域から容易に入手することができる。
【００３９】
黒ニンニクは、玄米を発酵させてなる玄米発酵物（例えば、米酢、黒酢、酒、味噌、しょうゆ等）にニンニクを漬け込み、そのニンニクを、遠赤外線を熱源として備える蒸し器にて３０〜７０℃で２５０〜３５０時間蒸してニンニクを熟成させることにより得ることができる。
【００４０】
このようにして得られた黒ニンニクを２００℃程度に加温しながら５〜６０ＭＰａに加圧した後、瞬時に減圧して常圧にする。これにより、黒ニンニクを粉砕してなり、多孔質構造を有する黒ニンニク粉砕物を製造することができる。
【００４１】
以上のようにして得られるカキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物は、ＡＴＰ産生促進作用を有しているため、その作用を利用してＡＴＰ産生促進剤の有効成分として使用することができる。
【００４２】
また、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物は、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進する作用を有しているため、その作用を利用して、肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤の有効成分として使用することもできる。肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患としては、例えば、高アンモニア血症等が挙げられる。
【００４３】
本発明のＡＴＰ産生促進剤又は肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患の予防・治療剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上のみからなるものでもよいし、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を製剤化したものでもよい。
【００４４】
カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上は、他の組成物（例えば、飲食品等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。
【００４５】
なお、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、必要に応じて、ＡＴＰ産生促進作用を有する天然抽出物等を、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４６】
本発明のＡＴＰ産生促進剤の患者に対する投与方法としては、静脈内投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本発明のＡＴＰ産生促進剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４７】
本発明のＡＴＰ産生促進剤は、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上が有するＡＴＰ産生促進作用を通じて、ＡＴＰの産生を促進することができ、特に肝細胞におけるＡＴＰの産生を促進することができる。これにより、運動や労働等によって蓄積した疲労を回復することができる。また、特に、肝細胞におけるＡＴＰ産生量低下に起因する疾患（例えば、高アンモニア血症等）を予防・治療することができる。ただし、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、これらの用途以外にもＡＴＰ産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
なお、本発明のＡＴＰ産生促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４９】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限されるものではない。なお、下記の試験例においては、試料としてカキ抽出物（丸善製薬社製，商品名：カキエキスパウダー，試料１）、ローヤルゼリー蛋白加水分解物（丸善製薬社製，商品名：脱蛋白ローヤルゼリー粉末，試料２）、ヒハツ抽出物（丸善製薬社製，商品名：ヒハツエキスパウダーＭＦ，試料３）、高麗人参抽出物（丸善製薬社製，商品名：高麗人参エキスパウダーＦ，試料４）及び黒ニンニク粉砕物（丸善製薬社製，商品名：熟成黒にんにく爆砕パウダー，試料５）を使用した。
【００５０】
〔試験例１〕ＡＴＰ産生促進作用試験
カキ抽出物（試料１）、ローヤルゼリー蛋白加水分解物（試料２）、ヒハツ抽出物（試料３）、高麗人参抽出物（試料４）及び黒ニンニク粉砕物（試料５）について、以下のようにしてＡＴＰ産生促進作用を試験した。
【００５１】
正常ヒト肝細胞（Hepatocyte）を、１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、コラーゲンコートした９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり１００μＬずつ播種し、一晩培養した。
【００５２】
培養終了後、培地を抜き、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに試料を溶解した試料溶液（試料１〜５，試料濃度は下記表１を参照）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、２時間培養した。
【００５３】
ＡＴＰ産生促進作用は、ホタルルシフェラーゼ発光法を用いて細胞内のＡＴＰ量を測定することにより評価した。すなわち、培養終了後、ＡＴＰ測定試薬（商品名：『細胞の』ＡＴＰ測定試薬，東洋ビーネット社製）を各ｗｅｌｌに１００μＬずつ添加し、反応後の化学発光量を、化学発光測定装置（Bio-Tex Instruments, Inc.社製，製品名：KL-800）を用いて測定した。得られた結果から、下記式によりＡＴＰ産生促進率（％）を算出した。
【００５４】
ＡＴＰ産生促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料無添加時の化学発光量」を表し、Ｂは「試料添加時の化学発光量」を表す。
結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
【００５６】
表１に示すように、カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物（試料１〜５）は、いずれも肝細胞においてＡＴＰの産生を促進し得ることが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）産生促進剤は、運動や労働により蓄積した疲労の回復に大きく貢献できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤。
【請求項２】
肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生を促進することを特徴とする請求項１に記載のアデノシン三リン酸産生促進剤。
【請求項３】
請求項２に記載のアデノシン三リン酸産生促進剤を含有することを特徴とする肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生量の低下に起因する疾患の予防・治療剤。
【請求項１】
カキ抽出物、ローヤルゼリー蛋白加水分解物、ヒハツ抽出物、高麗人参抽出物及び黒ニンニク粉砕物からなる群より選択される１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするアデノシン三リン酸産生促進剤。
【請求項２】
肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生を促進することを特徴とする請求項１に記載のアデノシン三リン酸産生促進剤。
【請求項３】
請求項２に記載のアデノシン三リン酸産生促進剤を含有することを特徴とする肝細胞におけるアデノシン三リン酸の産生量の低下に起因する疾患の予防・治療剤。
【公開番号】特開２０１１−１８４３８１（Ｐ２０１１−１８４３８１Ａ）
【公開日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２７３９（Ｐ２０１０−５２７３９）
【出願日】平成２２年３月１０日（２０１０．３．１０）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年９月２２日（２０１１．９．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１０日（２０１０．３．１０）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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