本発明は、アポトーシスの間に生成されるタンパク質断片を観察して哺乳類細胞のこの過程を観察するための方法及び材料を提供する。本発明の実施態様を用いて、例えば、アポトーシスを観察してアポトーシス誘導薬剤に対する哺乳類の癌細胞の感受性を調べてもよい。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類細胞のアポトーシスを検出する方法であって、
(a) アポトーシスの間に生成されるタンパク質断片に結合する抗体に細胞を接触させる工程、このとき該抗体がＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片に結合するものであり、
(b) アポトーシスの間に生成されるタンパク質断片に結合する抗体の量を決定する工程、そして、
(c) 工程(b)において結合した抗体の量を、アポトーシスのない哺乳類細胞においてタンパク質断片に結合する抗体の量と比較する工程を含み、このとき工程(B)の量がアポトーシスのない細胞の量よりも大きい場合に、アポトーシスが検出される方法。
【請求項２】
前記細胞のアポトーシスがデスレセプター４(配列番号：５)、デスレセプター５(配列番号：６)又はＦａｓ(配列番号：８)によって引き起こされる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記細胞のアポトーシスが、Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(配列番号：７)、ＦａｓＬ(配列番号：９)、Ｆａｓアゴニスト抗体、ＤＲ4アゴニスト抗体又はＤＲ5アゴニスト抗体に細胞を接触させることによって引き起こされる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
Ａｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(配列番号：７)、ＦａｓＬ(配列番号：９)、Ｆａｓアゴニスト抗体、ＤＲ４アゴニスト抗体又はＤＲ５アゴニスト抗体の投与を含む療法の有効性に関する情報を得るためにアポトーシスの検出を使用する工程をさらに含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
抗体がＡＰ２-α(配列番号：１)のタンパク質断片に結合し、抗体が結合したＡＰ２αのタンパク質断片が６４ｋＤａ又は３３ｋＤａである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
体が結合したタンパク質断片が配列番号：１のＤＶＦＤ又は配列番号：１のＧＰＡＡを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記細胞が、ヒトの大腸、結腸直腸、肺、胸部、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、脳、メラノーマ、白血病又は骨髄腫の癌細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
ＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片が、イムノブロッティング、酵素結合免疫吸着アッセイ又は免疫組織化学を用いて観察される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
哺乳類の細胞における少なくとも一つのｍＲＮＡの発現を調べることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
哺乳類細胞を一又は複数の試験薬剤にさらした後に、該細胞を抗体と接触させて、哺乳類細胞におけるアポトーシスの検出によって、該一又は複数の試験薬剤を哺乳類細胞におけるアポトーシスのインデューサとして同定されるようにすることをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ヒト癌細胞のアポトーシスを誘導する治療薬に応答する可能性がある、又は応答するヒト癌細胞を同定するための方法であって、
ヒト癌細胞を治療薬にさらす工程、
ＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片の存在について、治療薬にさらされたヒト癌細胞を調べる工程、
ヒト癌細胞のタンパク質断片の量をリガンドにさらされていないコントロールのヒト癌細胞のタンパク質断片の量と比較する工程を含み、
このとき、
治療薬にさらされたヒト癌細胞に存在するタンパク質断片の量が治療薬にさらされていないコントロールのヒト癌細胞のタンパク質断片の量より大きい場合に、アポトーシスが観察され、ヒト癌細胞のアポトーシスの観察によってヒト癌細胞を該治療薬に応答する可能性があるか、又は応答するものと識別する方法。
【請求項１２】
前記治療薬がデスレセプター４(配列番号：５)、デスレセプター５(配列番号：６)又はＦａｓ(配列番号：８)のシグナル伝達を誘導する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片がイムノブロッティング、酵素結合免疫吸着アッセイ又は免疫組織化学を用いて観察される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ヒト癌細胞において少なくとも１つのｍＲＮＡの発現を調べることをさらに含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
ヒト癌細胞において少なくとも２つの異なるｍＲＮＡの発現を調べることをさらに含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記ヒト癌細胞が、大腸、結腸直腸、肺、胸部、前立腺、膀胱、腎臓、卵巣、脳、メラノーマ、白血病又は骨髄腫の癌細胞である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
ヒト癌細胞のアポトーシスがＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(配列番号：７)、ＦａｓＬ(配列番号：９)、Ｆａｓアゴニスト抗体、ＤＲ４アゴニスト抗体又はＤＲ５アゴニスト抗体に細胞を接触させることによって引き起こされる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
ヒト癌細胞が、生検から得られ、１か月未満の間インビトロ培養において成長させたものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
タンパク質断片が配列番号：１のＤＶＦＤ又は配列番号：１のＧＰＡＡを含むＡＰ２-αのタンパク質断片である、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
哺乳類細胞におけるアポトーシスを観察するためのキットであって、
a) ＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片を結合する一次抗体と、
b) ＡＰ２-α(配列番号：１)、クラスリン重鎖(配列番号：２)、ＡＰ１／２β(配列番号：３)又はダイナミン(配列番号：４)のタンパク質断片を結合する二次抗体と、このとき、一次及び二次抗体は同じタンパク質を結合しないものであり、
c) (a)及び(b)のための容器と、
d) キットの抗体を哺乳類細胞のアポトーシスを観察するために用いるための指示書
とを具備するキット。

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２００９−５４１７４１（Ｐ２００９−５４１７４１Ａ）
【公表日】平成２１年１１月２６日（２００９．１１．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１６５５９（Ｐ２００９−５１６５５９）
【出願日】平成１９年６月２０日（２００７．６．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１４３８２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４９４８６
【国際公開日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【出願人】（５９６１６８３１７）ジェネンテック・インコーポレーテッド (372)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＴＥＣＨ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】