インフルエンザを処置するための組成物および方法
本願は、インフルエンザの処置に有用な組成物および方法を提供する。本明細書で記載している組成物および方法は、インフルエンザに対して免疫原特性を呈するペプチド類およびペプチド組み合わせ剤の開発に基づいている。一部の実施態様において、ペプチド組み合わせ剤は、多くのインフルエンザウイルス株、例えば季節型インフルエンザウイルス株、さらには新型のブタ起源の汎発流行性Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスに対しても防御応答を誘導する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願
本願は、２００８年６月１９日付、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０８／６７４７１号および２００９年５月２９日付、米国仮出願第６１／１８２６１４号に対し優先権およびその利益を主張する。これらの優先権出願の内容については、出典明示で援用する。
【０００２】
背景
インフルエンザは、オルトミクソウイルス（Orthomyxoviridae）科のウイルスに起因する呼吸器系の一般的な感染疾患である。ウイルスの変異度が高いため、典型的には、年ごとに株の変異を考慮に入れて再処方したワクチンによる予防接種が必要とされる。合衆国で毎年開発されるワクチン組成物は、米国食品医薬品局ワクチンおよび関連生物製剤諮問委員会により決定される。同様に、世界保健機構（ＷＨＯ）は、新たなインフルエンザ変異株を検出するため、研究機関の世界的な監視ネットワークを運営している、例えば、Lavanchy, Vaccine17:S24 (1999)参照。選択は、最近単離されたインフルエンザウイルスの抗原分析、抗原変異型の拡散パターンおよび最近ワクチン接種した個体の抗体応答に基づく。
【０００３】
Ａ型およびＢ型インフルエンザウイルスは、汎発流行性ヒト疾患を誘発する２型のインフルエンザウイルスである。Ａ型インフルエンザウイルスは、２種の表面抗原：血球凝集素（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）に基づいてさらに亜型に分類される。Ｂ型インフルエンザウイルスは、亜型には分類されない。１９７７年以来、Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルス、Ａ型インフルエンザ（Ｈ３Ｎ２）ウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスが世界的規模で循環している。ワクチン接種は、深刻な病気のハイリスク患者に対しインフルエンザ感染および関連合併症を予防し、またはインフルエンザを弱毒化する一つの最も有効な方法として認められている。不活化インフルエンザウイルスから調製された抗原の接種は、特異抗体の産生を刺激する。ワクチンを調製する元のウイルス株または密接に関連した株に対してのみ予防効力が示される。
【０００４】
年ごとのワクチンは、来るべき冬に流行すると考えられるインフルエンザウイルスを代表する３種のウイルス株（通常、Ａ型２種およびＢ型１種）を含む。出現している最新のインフルエンザウイルス株の抗原的特徴は、年ごとのワクチンに含ませる株の選択についての基礎となる情報を提供する。ＷＨＯは、毎年の世界的な疫学的状況を検討し、必要ならば、最新の疫学的証拠に基づいて新たな株を推奨する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
作り直すにしても、特定の季節の間に世界中の人々に活発に感染する種々の株を全てワクチンに含ませるのは不可能である。さらに、インフルエンザ感染の季節的な増加に応えるため十分なワクチン投与量を処方および製造するのには比較的長い期間も必要とする。典型的には、ワクチンの製造には６か月を超える期間を要し得る。結果的に、新型であるかまたは見逃されていたインフルエンザ株が、その６か月の間に目覚ましく拡散し、大流行に至ることもあり得る。２００９年４月には、ブタ起源の新型インフルエンザＡ型（Ｈ１Ｎ１）ウイルスが初めて検出された。それは、先に記載したＨ１Ｎ１亜型とは異なり、４種類が組み合わさったウイルスである。ウイルスが最初に急激な増加を示したのはメキシコであったが、流行は国境を越えて合衆国およびカナダへと急速に拡散し、現在ではほぼ全世界の国々が新たな症例を報告している。当業界では、インフルエンザを処置するための改良された組成物および方法が依然として要望されている。特に、ＷＨＯが推奨する季節型インフルエンザ株および新たに出現した流行性インフルエンザ株、例えばブタ起源の新たなＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスの両方に対して広範な免疫原性を有する組成物が要望される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要約
本願は、インフルエンザの処置に有用な組成物および方法を提供する。本明細書で記載している組成物および方法は、インフルエンザに対して免疫原特性を呈するペプチド類およびペプチド組み合わせ剤の開発に基づいている。
【０００７】
一部の実施態様において、ペプチド組み合わせ剤は、多くのインフルエンザウイルス株、例えば季節型インフルエンザウイルス株、さらには新型のブタ起源の流行性Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスに対しても防御応答を誘導する。
【０００８】
実施態様によっては、組成物を（例、筋肉注射により）非経口投与する場合もある。一部の実施態様では、非経口組成物は、非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む。若干の実施態様では、非経口組成物は、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを含む。若干の実施態様では、非経口組成物中に存在するＴＬＲ−４アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、小胞に物理的に随伴している。
【０００９】
現行では、インフルエンザワクチンは上述の非経口投与経路（例、筋肉注射）に限られているが、我々は、経口投与時に防御応答を誘導する組成物を同定した。従って、実施態様によっては、組成物を経口投与する場合もある。一部の実施態様では、経口組成物はビロソーム(bilosome)を含む。実施態様によっては、経口組成物がＴＬＲ−３アゴニストアジュバントを含む場合もある。若干の実施態様では、経口組成物中に存在するＴＬＲ−３アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、ビロソームに物理的に随伴している。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ〜Ｂは、競合マイクロ中和検定法により検出された例示的なペプチド組成物の特異性を示す。ヒト血清を希釈し、選択されたペプチド組成物、それに続いてインフルエンザウイルスとインキュベーションした。インキュベーション後、ＭＤＣＫ（メイディン−ダービーイヌ腎臓）細胞を添加し、プレートを１８〜２２時間後に展開した。（Ａ）ヒト血清を用いて、インフルエンザ New Caledonia（A/NC/20/99）に対して競合マイクロ中和を測定した。（Ｂ）ヒト血清を用いて、インフルエンザ Wisconsin（A/Wis/67/05）に対して競合マイクロ中和を測定した。
【図２】図２は、細胞１００万個当たりのスポット形成細胞（ＳＦＣ）数として表される、ＩＦＮγ−ＥＬＩＳＰＯＴ検定法により検出される例示的ペプチド組成物により誘導された細胞性免疫応答を示す。インフルエンザワクチン接種個体からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、選択されたペプチドの存在下で培養した。プレートを２日後に展開し、各ウェルにおけるスポット数を拡大し、計数した。
【図３】図３は、非ワクチン接種対照動物の場合と比較した、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐによるワクチン接種動物において１×１０６プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＨ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃した後の１０日間におけるメジアンの１日発熱数を示す。動物の体温が４０℃またはそれを超えるたびごとに発熱数として計数した。１群につき４動物間におけるメジアンの発熱数を３時間ごとに計算した。対照およびワクチン接種動物は、同等の出発体温を有していた（第０日目参照）。
【図４】図４は、非ワクチン接種対照動物の場合と比較した、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐによるワクチン接種動物において１×１０６ｐｆｕのＨ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃した後の１０日間における体重減少を示す。
【図５】図５は、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐで免疫化したフェレットからの直腸洗浄試料（上方パネル）および鼻腔洗浄試料（下方パネル）で観察されたインフルエンザウイルスに対し指向した粘膜ＩｇＡ応答（FluViral）を示す。各動物におけるワクチン接種前応答に対する増加倍率としてデータを表し、異なる試料中に存在するＩｇＡの総量について正規化した。市販のインフルエンザワクチン（FLUVIRAL）により得られた比較データも示す。
【図６】図６は、ペプチド組成物ＳＦＶ２で免疫化したフェレットからの血清で観察されたＢ型インフルエンザ（Ohio）からの組換えＨＡタンパク質に対し指向した血清ＩｇＡ応答を示す。各動物に関するワクチン接種前およびワクチン接種後血清試料からのＥＬＩＳＡにより測定された応答（光学密度として記録）を、それぞれ一対の左および右縦棒に示す。強い陽性応答は、動物＃４８５０および＃４８６０で観察され得る。
【図７】図７は、脂質付加ペプチド組成物ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａにより誘導された広範な反応性細胞（ＣＴＬ）免疫性を示す。成熟年齢（＞１２か月）のＨＬＡ（A*0201）トランスジェニックマウスに、Ａ型インフルエンザの核タンパク質における可変領域を標的とする組成物で３回ワクチン接種を行った。また、この組成物はミョウバンアジュバントを含んでいた。対照群にはアジュバントのみを与えた。脾臓細胞を、多様な亜型からの互いに異なるインフルエンザ株で感染させた：Ｈ３Ｎ２（A/HK/1/18, A/VICtoria/3/75）およびＨ１Ｎ１（A/NC/20/99, A/PR/8/34）。スポットは、ウイルス株のそれぞれに特異的なＩＦＮγ−分泌Ｔ細胞の頻度を表し、エラーバーは、各群（ｎ＝３）におけるマウス間の標準偏差を表し得る。結果は、左から右へと次の通りに示される：Ｈ３Ｎ２（A/HK/1/18）、Ｈ３Ｎ２（A/VICtoria/3/75）、Ｈ１Ｎ１（A/NC/20/99）およびＨ１Ｎ１（A/PR/8/34）。
【図８】図８は、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバント（ポリＩ：Ｃ）含有または不含有で経口投与されたペプチド組成物に対する免疫応答を示す。マウス（１群当たりｎ＝４）を４回（第０、３、１４および１７日目）経口的に免疫化した。脾臓細胞をワクチン接種後に採取し、同じペプチド組成物によりインビトロで刺激を加えた。ＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴ検定法を用いて、応答を測定した。図８に示すとおり、アジュバントを与えられた動物は、ワクチンのみを与えられた動物よりかなり大きな応答を示した。
【図９】図９は、配列番号１６、１7および１８の配列を示す。
【図１０】図１０Ａ〜Ｂは、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットで測定されたＡ型インフルエンザの次の亜型：（A/Solomon Island/03/06）Ｈ１Ｎ１または（A/Wisconsin/67/05）Ｈ３Ｎ２からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質に対し指向した（ＥＬＩＳＡにより測定される）血清ＩｇＧ応答を示す。免疫化後血清は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットについてｒＨＡ Solomon（Ａ）およびWisconsin（Ｂ）の両方でのＥＬＩＳＡにおいて顕著な免疫応答を示した。Ｂ型インフルエンザ（B/Malaysia/2506/04）からのｒＨＡに対してＩｇＧ応答は検出されなかった（データは示さず）。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１１】図１１は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化し、次いでウイルス攻撃にさらしたフェレットの鼻腔洗浄試料からのウイルス量を示す。動物に、ペプチド組成物ＳＦＶ２を接種し、２×１０５ｐｆｕのＨ１Ｎ１（A/Solomon Island/03/06）で攻撃し、鼻腔洗浄試料からのウイルス量を、ウイルス血症ピークでのプラーク検定法により測定した（第２日目）。各記号は、個々の動物で測定されたウイルス量を表す。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１２】図１２は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットにおける潜在的な汎発流行性インフルエンザ株に対する体液性免疫を示す。ワクチン接種の２週間後（ウイルス攻撃前）動物から血清を集め、試料を、ＥＬＩＳＡにより単離された推定的汎発流行性ブタ（H1N1/California/2009）からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質との反応性について試験した。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１３】図１３は、典型的なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントＰＨＡＤ（アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.からのリン酸化ヘキサアシル二糖）の化学構造を示す。
【図１４】図１４は、別の典型例のＴＬＲ−４アゴニストアジュバントであるジ［３−デオキシ−Ｄ−マンノ−オクツロソニル］脂質Ａ（アンモニウム塩）（アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.から）の化学構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
本願全体を通して、以下のパラグラフで定義している幾つかの用語を用いる。
【００１２】
本明細書で使用している「免疫応答」の語は、動物で誘導された応答をいう。免疫応答は、細胞性免疫、体液性免疫を指し得るかまたはその両方を含み得る。免疫応答はまた、免疫系の一部分に限定され得る。例えば、実施態様によっては、免疫原性組成物が高いＩＦＮγ応答を誘導し得る場合もある。実施態様によっては、免疫原性組成物が（例、鼻腔および／または直腸洗浄液で測定される）粘膜性ＩｇＡ応答を誘導し得ることもある。一部の実施態様では、免疫原性組成物は、（例、血清で測定される）全身的ＩｇＧ応答を誘導し得る。
【００１３】
本明細書で使用している「免疫原性」の語は、非宿主体（例、インフルエンザウイルス）に対して宿主動物において免疫応答を生じさせ得ることを意味する。一部の実施態様では、この免疫応答が、特異的感染性生物（例、インフルエンザウイルス）に対するワクチンにより誘導される防御免疫性の基礎を形成する。
【００１４】
本明細書で使用している「ペプチド」の語は、ペプチド結合により連結された少なくとも３個のアミノ酸の連なりをいう。一般に、ペプチドにおけるアミノ酸数に対する上限は無い。ペプチドは、一般的に天然アミノ酸のみを含む。しかしながら、非天然アミノ酸（すなわち、天然には存在しないが、ポリペプチド鎖に組み込まれ得るアミノ酸）も含まれ得る。また、本発明ペプチドにおけるアミノ酸の１つまたはそれ以上は、例えば、化学的部分、例えば炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、コンジュゲーション用のリンカー、官能基化、または他の修飾手段などの付加により修飾され得る。様々な実施態様では、修飾（複数も可）により、さらに安定したペプチド（例、インビボ半減期の増大）が得られる。適切な修飾は、ペプチドの閉環、Ｄ−アミノ酸の組み込みなどを含み得る。様々な実施態様では、修飾（複数も可）により、免疫原性のさらに高いペプチドが誘導される。適切な修飾は、１個または複数の脂質（例、限定ではないが、パルミトイル、ミリストイル、ステアロイル、ラウロイル、オクタノイル、デカノイルなど）の共有結合、担体タンパク質（例、限定ではないが、ツベルクリン（ＰＰＤ）の精製タンパク質誘導体、破傷風トキソイド、コレラ毒素およびそのＢサブユニット、卵アルブミン、ウシ血清アルブミン、大豆トリプシン阻害剤、ムラミルジペプチドおよびその類似体、サイトカインまたはそのフラグメントなど）への融合などを含み得る。
【００１５】
本明細書で使用している「相同性パーセンテージ」の語は、本願で定義している最適アラインメント後の２配列間における配列同一性のパーセンテージをいう。下記要領で一致が最大になるように整列させたとき２配列におけるアミノ酸の配列が同一である場合、２つのアミノ酸配列は「同一で」あると言われる。２つのアミノ酸配列間における配列比較は、典型的には一領域または「比較領域」にわたって最適整列させた２配列の配列を比較して、配列類似性領域を同定および比較することにより行われる。比較のための配列の最適アラインメントは、Smith および Waterman, Ad. App. Math. 2:482 (1981) の局所相同性アルゴリズム、Neddleman および Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970) の相同性アラインメントアルゴリズム、Pearson および Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピューター化インプリメンテーション、または目視検査により実施され得る。
【００１６】
「配列同一性パーセンテージ」は、ある比較領域にわたって最適整列させた２配列を比較することにより決定され、その場合、比較領域におけるアミノ酸配列部分は、２配列の最適アラインメントのためのリファレンス配列（付加または欠失を含まない）と比較して付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。同一アミノ酸残基が両配列で現れている位置の数を測定して一致した位置の数を得、一致した位置の数を比較領域における位置の総数で割り、結果を１００倍して配列同一性のパーセンテージを得ることにより、パーセンテージを計算する。上記で与えたこの配列同一性の定義は、通常当業者により使用される定義である。定義それ自体は、アルゴリズムの助けを必要とするものではない。アルゴリズムは、配列同一性を計算するというよりも、配列の最適アラインメントを簡易化するのに有効であるに過ぎない。この定義から、２つの比較配列間における配列同一性についての十分に特定された唯一の値であって、最適アラインメントについて得られた値に対応する値が存在するということになる。
【００１７】
本明細書で使用している「治療有効量」の語は、処置されている対象において有意義な成果を示すのに十分な量をいう。免疫原性組成物の治療有効量は、例えば、所望の生物学的エンドポイント、組成物の性質、投与経路、処置されている対象の健康状態、サイズおよび／または年齢などの因子により変動し得る。
【００１８】
本明細書で使用している「処置する」（または「処置している」、「処置された」、「処置」など）の語は、インフルエンザ、インフルエンザの一症状または複数症状またはインフルエンザに罹患し易い状態を緩和、軽減、改変、改善、改良するかまたはそれらに影響を及ぼすことを目的として、インフルエンザに罹患しているか、インフルエンザの症状を呈するか、またはインフルエンザに罹患し易い状態である対象への免疫原性組成物の投与を指す。実施態様によっては、「処置する」の語が、対象のワクチン接種を指す場合もある。
【００１９】
実施態様の詳細な記載
本願は、インフルエンザを処置するのに有用な組成物および方法を提供する。本明細書に記載している組成物および方法は、インフルエンザに対して免疫原特性を呈するペプチド類およびペプチド組み合わせ剤の開発に基づくものである。
【００２０】
実施態様によっては、ペプチド組み合わせ剤が、インフルエンザの多くの株、例えば季節型インフルエンザ株、さらには新型のブタ起源の汎発流行性Ａ型インフルエンザウイルスに対して防御応答を誘導する。
【００２１】
一部の実施態様では、組成物を（例、筋肉注射により）非経口投与する。実施態様の中には、組成物がＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを含む。若干の実施態様では、組成物は、非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む。若干の実施態様では、組成物中に存在するＴＬＲ−４アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、小胞に物理的に随伴している。
【００２２】
現行では、インフルエンザワクチンは上述の非経口投与経路（例、筋肉注射）に限られているが、我々は、経口投与時に防御応答を誘導する組成物を同定した。従って、実施態様によっては、組成物を経口投与する場合もある。実施態様によっては、組成物がＴＬＲ−３アゴニストアジュバントを含む場合もある。一部の実施態様では、組成物はビロソームを含む。若干の実施態様では、組成物中に存在するＴＬＲ−３アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、ビロソームに物理的に随伴している。
【００２３】
Ｉ．ペプチド類
一態様において、本願は、単独で、または組み合わせて使用することにより、インフルエンザ処置用の免疫原性組成物を製造し得るペプチド類を提供する。これらのペプチド類の中には、免疫原性組成物中に含まれ得るものもあり、また本願はこれらのペプチド類の順列と組み合わせを含む組成物を包含するものとする。下記II項では、具体例としてのペプチド組み合わせ剤を記載する。
【００２４】
Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型１（Ｈ１）ペプチド類
実施例における表２〜６は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型１（Ｈ１）タンパク質から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表２〜５および配列リストに示されているところによると、ペプチドのうちの幾つかは一般的共通配列の変異型である。
【００２５】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号２（表２参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号２の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号２の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５または２６連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２６】
一部の実施態様において、本願は、配列番号３（表３参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号３の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号３の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２または３３の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２７】
一部の実施態様において、本願は、配列番号４（表４参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号４の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、または４の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜２）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。
【００２８】
一部の実施態様において、本願は、配列番号５（表５参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号５の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２９】
一部の実施態様において、本願は、配列番号６（表６参照）の少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチド類を提供する。実施態様によっては、相同性は、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。
【００３０】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。幾つかの実施態様において、本願は、配列番号６の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。すなわち、ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含み得る。ペプチドはまた、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号６の全配列を含み得る。他の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号６により構成され得る。さらに別の実施態様では、ペプチドは、配列番号６により構成され得る。
【００３１】
前記に加えて、本願はまた、配列番号１６（図９参照）の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む種類のペプチドを提供するもので、この場合ペプチドは、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む。この種類は、上記の他のＨ１ペプチドを包含する。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００３２】
実施態様によっては、前述のＨ１ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様では、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００３３】
Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）ペプチド類
実施例における表９〜１１は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）タンパク質から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表９〜１１および配列リストに示されているとおり、これらのペプチドは、配列番号１７（図９参照）の共通配列の全変異型である。
【００３４】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１７の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１７の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。
【００３５】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号９（表９参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号９の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様では、免疫原性組成物は、配列番号９の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号９のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３６】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１０（表１０参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１０の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１０の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号１０のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３７】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１１（表１１参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号１１のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３８】
実施態様によっては、前述のＨ３ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００３９】
実施例における表７は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）タンパク質から誘導された別のペプチドのアミノ酸配列を記載している。本願は、配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む種類のペプチドを提供するもので、この場合ペプチドは、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む。若干の実施例において、ペプチドは、配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様では、ペプチドは、配列番号７の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号７の全配列を含み得る。他の実施態様において、ペプチドは、本質的に配列番号７により構成され得る。さらに別の実施態様では、ペプチドは、配列番号７により構成され得る。若干の実施態様において、ペプチドは、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含み得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００４０】
Ｂ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）ペプチド類
実施例における表８および１２は、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）タンパク質から誘導された幾つかのペプチド類のアミノ酸配列を記載している。
【００４１】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１８（図９参照）の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドを提供し、その際ペプチドは、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むものとする。一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、３０、３５、４０または４５の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００４２】
一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号１２（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１２の全配列を含み得る。一部の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号１２により構成され得る。一部の実施態様では、ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００４３】
幾つかの実施態様において、ペプチドは、配列番号１３（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１３の全配列を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号１３により構成され得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００４４】
幾つかの実施態様において、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性は、高く、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第１および／または第２領域における相同性は、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、２０、３５、４０または４５の連続アミノ酸に及び得る。
【００４５】
一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号８（表８参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号８の全配列を含み得る。他の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号８の配列により構成されるかまたはそのものにより構成され得る。
【００４６】
実施態様によっては、前述のＢ型ＨＡペプチドのいずれかが、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００４７】
Ａ型インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）ペプチド類
実施例における表１３および１４は、Ａ型インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表１３におけるペプチドは、配列番号１４の共通配列の変異型である。表１４におけるペプチドは、配列番号１５の共通配列の変異型である。
【００４８】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１４（表１３参照）の配列を含むペプチド類を提供するが、それらのペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含んでいる。配列番号１４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１４の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、配列番号１４のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。
【００４９】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１５（表１４参照）の配列を含むペプチド類を提供するが、それらのペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含んでいる。配列番号１５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１５の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１５のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。
【００５０】
実施態様によっては、前述のＮＰペプチドのいずれかが、３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含むペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００５１】
他のインフルエンザペプチド類
本願は、複数のインフルエンザタンパク質からの配列を含む他のペプチド類を提供する。すなわち、若干の実施態様において、本願は、配列番号１（表１参照）のアミノ酸配列を含むペプチド類を提供する。表１および配列リストで示されているとおり、配列番号１は共通配列である。共通配列は、Ｂ型インフルエンザＨＡタンパク質およびＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３タンパク質における配列から誘導された。配列番号１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。また、実施態様によっては、ペプチドが３０未満のアミノ酸を含み得ることは言うまでもない。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含むペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００５２】
II．ペプチドの組み合わせ
一態様において、本願は、Ｉ項記載のペプチドの組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。以下の具体例としての組み合わせは非限定的なものであり、本願が、Ｉ項記載のペプチドの順列と組み合わせを全て包含することは、言うまでもない。また、他のペプチド類（既存のインフルエンザワクチンから見出される伝統的インフルエンザタンパク質抗原を含む）も本明細書記載の免疫原性組成物のいずれかに付加され得ることは、言うまでもない。実施態様によっては、免疫原性組成物中の各ペプチドが独立して免疫原性を示す場合もある。
【００５３】
実施態様によっては、少なくとも１つのペプチドが、非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含むこともある。実施態様によっては、各ペプチドが、非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含むこともある。実施態様によっては、組成物の少なくとも２つのペプチドが単一タンパク質内に存在することもある。
【００５４】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチドおよび１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５５】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５６】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５７】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチド、１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５８】
実施態様によっては、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＮＰペプチドが上述の組み合わせのいずれか１つに含まれることもあり得る。
【００５９】
若干の実施態様において、本願は、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、および配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドを含む免疫原性組成物を提供し、この場合第３ペプチドは、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むものとする。一部の実施態様では、第１および第３ペプチドは、１００未満のアミノ酸を含み、第２ペプチドは、３０未満のアミノ酸を含む。
【００６０】
実施態様によっては、さらに配列番号１４または１５のアミノ酸配列を含む第４ペプチドが含まれる場合もあり、この第４ペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むものとする。
【００６１】
具体例としての第１ペプチド（Ａ型インフルエンザＨＡ Ｈ１）
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００６２】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号２（表２参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号２の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号２の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５または２６の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６３】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号３（表３参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号３の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号３の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２または３３の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６４】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号４（表４参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号４の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３または４の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜２）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。
【００６５】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号５（表５参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号５の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６６】
若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６（表６参照）の少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様では、相同性は、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含み得る。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸を含み得る。すなわち、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含み得る。第１ペプチドはまた、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含み得る。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の全配列を含み得る。他の実施態様では、第１ペプチドは、本質的に配列番号６により構成され得る。さらに別の実施態様では、第１ペプチドは、配列番号６により構成され得る。
【００６７】
実施態様によっては、上述の第１ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第１ペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００６８】
具体例としての第２ペプチド（Ａ型インフルエンザＨＡ Ｈ３）
一部の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１７の配列を含み得る。配列番号１７の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。
【００６９】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号９（表９参照）の配列を含み得る。配列番号９の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号９の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号９のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７０】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１０（表１０参照）の配列を含み得る。配列番号１０の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１０の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１０のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７１】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１１（表１１参照）の配列を含み得る。配列番号１１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１１のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７２】
実施態様によっては、上述の第２ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第２ペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００７３】
具体例としての第３ペプチド（Ｂ型インフルエンザＨＡ）
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、３０、３５、４０または４５の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００７４】
一部の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１２（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、相同性のレベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１２の全配列を含み得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号１２により構成され得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００７５】
一部の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１３（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、相同性のレベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１３の全配列を含み得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号１３により構成され得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１３により構成され得る。
【００７６】
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含み得る。一部の実施態様では、相同性は、さらに高く、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第１および／または第２領域における相同性は、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、２０、３５、４０または４５の連続アミノ酸に及び得る。
【００７７】
若干の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号８の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号８の全配列を含み得る。他の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号８の配列により構成されるかまたはそのものにより構成され得る。
【００７８】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含み得、その一方は、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方は配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含んでいる。一部の実施態様において、相同性のレベルは、一方または両方のペプチドにおいて少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。
【００７９】
実施態様によっては、前述の第３ペプチドのいずれかが、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第３ペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００８０】
具体例としての第４ペプチド（Ａ型インフルエンザＮＰ）
一部の実施態様において、所望による第４ペプチドは、配列番号１４（表１３参照）の配列を含み得る。配列番号１４の共通配列により特定される変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第４ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１４の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第４ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また免疫原性組成物が、本質的に配列番号１４のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第４ペプチドを含み得ることは言うまでもない。
【００８１】
一部の実施態様において、所望による第４ペプチドは、配列番号１５（表１４参照）の配列を含み得る。配列番号１５の共通配列により特定される変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第４ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１５の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第４ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また免疫原性組成物が、本質的に配列番号１５のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第４ペプチドを含み得ることは言うまでもない。
【００８２】
実施態様によっては、前述の第４ペプチドのいずれかが、３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第４ペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００８３】
具体例としてのペプチドの組み合わせ
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８４】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８５】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８６】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６を含む第１ペプチド、配列番号８を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８７】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、本質的に配列番号６により構成される第１ペプチド、本質的に配列番号８により構成される第３ペプチドおよびそれぞれ本質的に配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ本質的に配列番号１４の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ本質的に配列番号１５の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８８】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６により構成される第１ペプチド、配列番号８により構成される第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８９】
III．ペプチド合成
本明細書で記載しているペプチド類は、当業界で公知の方法（組換え技法を含む）を用いて合成され得る。様々な実施形態において、ペプチド類は、固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ）により合成され得る。ＳＰＰＳでは、リンカー分子により酸に不安定な結合を介してＣ−末端アミノ酸を固相（典型的には架橋樹脂、例えばポリスチレンまたはポリエチレングリコール含有樹脂）に結合させる。使用する固相は、一般的に合成に使用する溶媒に不溶性であるため、比較的簡単かつ迅速に過剰の試薬および副生成物を洗い流せる。酸中では安定しているが、塩基により除去可能な保護基（例、Ｆｍｏｃ基）でＮ−末端を保護する。塩基安定性の酸分解性基により側鎖官能基を保護する。そこで、ＳＰＳＳ技術では、Ｃ−末端を固相に結合させた状態で、Ｎ−α−保護アミノ酸を伸長中のペプチド鎖に組み込ませる。実施例１は、典型的なＳＰＳＳ工程について説明している。
【００９０】
一般に、この工程は自動化され得、市販の装置を用いることにより、２０またはそれより長いアミノ酸長のペプチドを常用的に合成することができる。長いペプチド（例、４０アミノ酸より長い）を製造するとき、適切な保護基を用いることによりライゲーションされ得る一連のフラグメント中でのペプチド生成が有利であることが立証され得る。
【００９１】
本明細書で記載しているとおり、ある種のペプチド組成物は、単一ペプチド配列の多くの変異型を含み得る（例、同一配列における２またはそれ以上の位置における２またはそれより多い異なるアミノ酸を伴う）。所定のセットにおける各変異型は個々に合成され得るが、典型的には単一合成において変異型のサブセットまたは１セット全体を合成する方が有利である。様々な実施態様において、これは、スプリット−コンバイン方法を用いて達成され得る。すなわち、所定の位置に２つの異なるアミノ酸の一方を含むように変異型のセットが設計された場合、樹脂は２つの等しい部分に分離され得、各部分が２つのアミノ酸の一方とカップリングすることにより、２つの特徴的なペプチド鎖を形成し得る。一旦カップリングが完了すると、２つの部分は、後続のアミノ酸が両鎖に付加され得るように再び組み立てられ得る。別法として、選択の対象となる２つのアミノ酸が同一反応に加えられるワンポット法が使用され得る。典型的には、２つのアミノ酸は当モル量で加えられる。しかしながら、環境によっては（例えば、それぞれの反応速度論が著しく異なる場合）、非当モル量の方が好ましい場合もあり得る。次いで、ペプチド反応は、Kaiser ニンヒドリン試験を用いることにより完全性について監視され得る。
【００９２】
以下の参考文献は、若干の典型的なペプチド混合物の製造方法を記載している：Houghten, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:5131 (1985); Geysen et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998 (1984) および米国特許第5,010,175号。
【００９３】
ＩＶ．アジュバント
一部の実施態様では、免疫原組成物は、１種またはそれ以上のアジュバントを含み得る。当業界で周知のとおり、アジュバントは、免疫応答の増強剤である。アジュバントについては、当業界では熟知されている（例、"Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach", Pharmaceutical Biotechnology, 第６巻、Powell および Newman 編、Plenum Press、ニューヨークおよびロンドン、１９９５参照）。
【００９４】
アジュバントの例としては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、スクアレン、スクアランおよびミョウバン（水酸化アルミニウム）があり、これらは当業界ではよく知られた材料であり、数社から市販されている。一部の実施態様において、アルミニウムまたはカルシウム塩類（例、水酸化またはリン酸塩類）はアジュバントとして使用され得る。ミョウバン（水酸化アルミニウム）は、多くの既存のワクチンで使用されてきた。典型的には、１用量当たり約４０〜約７００μｇのアルミニウムが含有され得る。
【００９５】
様々な実施態様において、水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンもまたアジュバントとして使用され得る。例えば、油相は、スクアレンまたはスクアランおよび界面活性剤を含み得る。様々な実施態様では、非イオン性界面活性剤、例えばソルビタンおよびマンニドのモノ−およびジ−Ｃ１２−Ｃ２４−脂肪酸エステルなどが使用され得る。油相は、好ましくは免疫原性ペプチド（複数も可）を約０.２〜約１５重量％の割合で含み得る（例、約０.２〜１％）。ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１７２１０号は、具体例としてのエマルジョンを報告している。
【００９６】
ＱＳ２１と称するアジュバントは、南米産樹木キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮に由来するアジュバント活性を有する免疫学的活性サポニンフラクションであり、その製造方法は、米国特許第５０５７５４０号に開示されている。キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）サポニンの半合成および合成誘導体、例えば米国特許第５９７７０８１および６０８０７２５号記載のものも有用である。
【００９７】
ＴＬＲは、ドロソフィラ・トル（ショウジョウバエ、Drosophila Toll）受容体と相同的なタンパク質の一群であり、病原体に関連した分子パターンを認識することから、身体が自己および非自己分子を区別するのを助ける。ウイルス病原体に共通した物質は、病原体関連分子パターンとしてＴＬＲにより認識される。例えば、ＴＬＲ−３は２本鎖ＲＮＡにおけるパターンを認識し、ＴＬＲ−４はリポ多糖類におけるパターンを認識し、ＴＬＲ−７／８は、ウイルス性および細菌性ＲＮＡおよびＤＮＡにおいてアデノシンを含むパターンを認識する。ＴＬＲが上記パターン認識により誘導されたとき、炎症および自然および獲得免疫応答の活性化に至る一連のシグナリング事象が起こる。様々なＴＬＲにより認識される分子パターンを含む若干の合成リガンドが、アジュバントとして開発されており、本明細書記載の免疫原性組成物中に含まれ得る。
【００９８】
例えば、ポリリボイノシン酸：ポリリボシチジン酸またはポリ（Ｉ：Ｃ）（カリフォルニア、サンディエゴの InvivoGen から入手可能）は、２本鎖ＲＮＡ（ウイルス感染に随伴した分子パターン）の合成類似体であり、ＴＬＲ−３についてのアゴニストである典型的なアジュバントである（例、Field et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 58:1004 (1967) および Levy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 62:357 (1969) 参照）。下記実施例１１は、典型的な経口ペプチド組成物でのこのアジュバントの使用に伴う利点を立証している。一部の実施態様では、ポリ（Ｉ：Ｃ）を他の薬剤と組み合わせることにより、安定性が改善され得る（例、リボヌクレアーゼの活性を介した分解の縮小による）。例えば、米国特許第3,952,097、4,024,241 および 4,349,538号は、ポリ−Ｌ−リシンとのポリ（Ｉ：Ｃ）複合体について報告している。また、ポリ（Ｉ：Ｃ）へのポリ−アルギニンの付加は、リボヌクレアーゼの活性による分解を縮小させることが示された。米国特許公開第２００９００４１８０９号は、ＴＬＲ−３アゴニストとして作用し得る１個または複数個のロックト核酸（ＬＮＡ）ヌクレオシドを伴う２本鎖核酸について報告している。当業者であれば、他の適切なＴＬＲ−３アゴニストアジュバントについても同定できるはずである。
【００９９】
弱毒化脂質Ａ誘導体（ＡＬＤ）、例えばモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ−ＭＰＬ）は、ＴＬＲ−４についてのアゴニストである典型的なアジュバントである。ＡＬＤは、分子の呈する作用が、脂質Ａの有害な作用を低減化または相違させた形となるように改変または構築された脂質Ａ様分子である。これらの有害な作用には、ニワトリ胚５０％致死量検定法（ＣＥＬＤ５０）において評価される発熱性、局所 Shwarzman 反応性および毒性がある。ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬは、米国特許第４４３６７２７および４９１２０９４号にそれぞれ記載されている。元来、ＭＰＬは、強力ではあるが高毒性の免疫系調節剤である、腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の一構成成分である、脂質Ａから誘導されたものである。３Ｄ−ＭＰＬは、３位の還元末端グルコサミンにエステル結合しているアシル残基が選択的に除去された点がＭＰＬとは異なる。ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬは、脂肪酸鎖長の変動を伴う若干の脂肪酸置換パターン、すなわち、ヘプタアシル、ヘキサアシル、ペンタアシルなどの混合物を含み得るものとする。すなわち、ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬの様々な形態およびそれらの混合物も本開示に包含される。
【０１００】
一部の実施態様において、これらのＡＬＤは、例えば２％スクアレン／Tween（登録商標）８０エマルジョン中で、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）と組み合され得る（例、英国特許第２１２２２０４号参照）。ＭＰＬは、ＰＨＡＤ（リン酸化ヘキサアシル二糖）としてアラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc. から入手可能である。図１３は、ＰＨＡＤの化学構造を示す。下記実施例１３は、典型的非経口ペプチド組成物でのこのアジュバントの使用に伴う利点を立証している。図１４には、別の典型的なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントであるジ［３−デオキシ−Ｄ−マンノ−オクツロソニル］−脂質Ａ（アンモニウム塩）の構造が示されている（同じく、アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.製）。当業者であれば、他の適切なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを同定できるはずである。例えば、他のリポ多糖類は、国際公開第９８／０１１３９号、米国特許第６００５０９９号および欧州特許第７２９４７３号に記載されている。
【０１０１】
イミキモド（１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］キノリン−４−アミン）は、同じく本明細書記載の免疫原性組成物中に有利な形で含まれ得るＴＬＲ−７／８の低分子アゴニストである。
【０１０２】
Ｖ．小胞
実施態様によっては、組成物中の１または複数ペプチドを小胞と組み合わせる場合もあり得る。当業界で周知のとおり、小胞は、一般的に両親媒性分子（例、脂肪酸、脂質、ステロイドなど）を含む１または複数の脂質二重層により取り囲まれた水性区画を有する。小胞の水性コアには、１または複数のペプチドが存在し得る。ペプチドはまた、その疎水性によって、二重層とも（例、疎水性相互作用および／または水素またはイオン結合を介して）会合され得る。いかなる小胞でも本明細書記載の免疫原性組成物で使用され得ること、また脂質二重層の両親媒性分子はイオン性および／または非イオン性であり得ることは、言うまでもない。
【０１０３】
実施態様によっては、小胞が、非イオン性両親媒性物質（例、非イオン性界面活性剤）を含むこともあり得る。適切な両親媒特性をもつ非イオン性界面活性剤であれば全て、かかる小胞の形成に使用され得る。限定ではないが、適切な界面活性剤の例には、グリセリン基剤のエステル結合界面活性剤がある。上記グリセリンエステルは、例えば各アシル部分に少なくとも１０個の炭素原子を含む、２つの高級脂肪族アシル基の１つを含み得る。上記グリセリンエステルに基づいた界面活性剤は、複数のグリセリン単位、例えば５個以下のグリセリン単位を含み得る。グリセリンモノエステル、例えばＣ１２−Ｃ２０アルカノイルまたはアルケノイル部分、例えばカプロイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、オレイルまたはステアロイルを含むものが使用され得る。具体例としての界面活性剤は、１−モノパルミトイルグリセリンである。
【０１０４】
エーテル結合界面活性剤もまた、非イオン性界面活性剤として使用され得る。例えば、グリセリンまたは炭素原子４個以下の低級脂肪族グリコールを有するグリコール、例えばエチレングリコールに基づくエーテル結合界面活性剤が適切である。上記グリコールに基づく界面活性剤は、複数のグリコール単位、例えば５個以下のグリコール単位を含み得る（例、ジグリコールセチルエーテルおよび／またはポリオキシエチレン−３−ラウリルエーテル）。グリコールまたはグリセリンモノエーテル類、例えばＣ１２−Ｃ２０アルカニルまたはアルケニル部分、例えばカプリル、ラウリル、ミリスチル、セチル、オレイルまたはステアリルを含むものが使用され得る。使用され得るエチレンオキシド縮合生成物には、ＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０６８８２号に開示されたものがある（例、ポリオキシエチレン高級脂肪族エーテルおよびアミン界面活性剤）。具体例としてのエーテル結合界面活性剤には、１−モノセチルグリセリンエーテルおよびジグリコールセチルエーテルがある。
【０１０５】
一部の実施態様において、非イオン性界面活性剤を含む小胞は、例えば小胞を負に帯電させるため、さらにイオン性両親媒性物質を含み得る。例えば、これにより、小胞の安定化および有効な分散が促進され得る。限定はされないが、酸性物質、例えば高級アルカンおよびアルケン酸（例、パルミチン酸、オレイン酸）または例えばジアルキルホスフェート類などのリン酸を含む酸性基を含む他の化合物（例、ジセチルホスフェート、またはホスファチジン酸またはホスファチジルセリン）および硫酸モノエステル類、例えば高級アルキルスルフェート（例、セチルスルフェート）は全てこの目的に使用され得る。イオン性両親媒性物質は、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の重量にして１〜３０％の量で含まれる。例えば、２〜２０重量％または５〜１５重量％である。
【０１０６】
一部の実施態様において、小胞成分は、二重層を形成し得る高分子量の適切な疎水性材料と混合され得る（例えば、ステロイド、例えばコレステロールなどのステロール）。一部の実施態様では、ステロイドの存在は、小胞の物理特性を左右する脂質二重層の形成を促進し得る。ステロイドは、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の２０〜１２０重量％の量で含まれる。例えば、２５〜９０重量％または３５〜７５重量％である。
【０１０７】
一部の実施態様において、小胞はビロソームであり得る（例、米国特許第５８７６７２１号参照）。本明細書で使用している「ビロソーム」は、非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送促進分子を含む小胞である。米国特許第５８７６７２１号の記載によると、様々な分子が輸送エンハンサーとして使用され得る。例えば、側鎖のＣ２３炭素原子がカルボン酸および／またはその誘導体をもつコレステロール誘導体は、輸送エンハンサーとして使用され得る。上記誘導体には、限定されるわけではないが、「胆汁酸類」コール酸およびケノデオキシコール酸、それらのグリシンまたはタウリンとの複合生成物、例えばグリココール酸およびタウロコール酸、デオキシコール酸およびウルソデオキシコール酸を含む誘導体、およびこれらの酸のそれぞれの塩類がある。
【０１０８】
他の輸送エンハンサーには、アシルオキシ化アミノ酸、例えばアシルカルニチンおよびその塩類がある。例えば、Ｃ６−２０アルカノイルまたはアルケノイル部分を含むアシルカルニチン、例えばパルミトイルカルニチンは、輸送エンハンサーとして使用され得る。本明細書で使用しているアシルオキシ化アミノ酸の語は、第１級、第２級および第３級アミノ酸並びにα、βおよびγアミノ酸を包含するものとする。アシルカルニチン類は、アシルオキシ化γアミノ酸の例である。
【０１０９】
免疫原性組成物に含まれるビロソームが、複数タイプの輸送エンハンサー、例えば１種または複数の異なる胆汁酸塩類および１種または複数のアシルカルニチン類を含み得ることは言うまでもない。
【０１１０】
また、ビロソームにイオン性両親媒性物質を組み込むことにより、例えばビロソームを負に帯電させ得ることは言うまでもない。例えば、これにより、ビロソームの安定化および有効な分散が促進され得る。限定はされないが、酸性物質、例えば高級アルカンおよびアルケン酸（例、パルミチン酸、オレイン酸）または例えばジアルキルホスフェート類などのリン酸を含む酸性基を含む他の化合物（例、ジセチルホスフェート、またはホスファチジン酸またはホスファチジルセリン）および硫酸モノエステル類、例えば高級アルキルスルフェート（例、セチルスルフェート）は全てこの目的に使用され得る。
【０１１１】
一部の実施態様において、ビロソーム成分は、二重層を形成し得る高分子量の適切な疎水性材料と混合され得る（例えば、ステロイド、例えばコレステロールなどのステロール）。一部の実施態様では、ステロイドの存在は、ビロソームの物理特性を左右する脂質二重層の形成を促進し得る。
【０１１２】
ビロソーム内に存在する輸送エンハンサー（複数も可）は、一般的に非イオン性界面活性剤の４０〜４００重量％の量で存在する（例、６０〜１００重量％または７０〜９０重量％）。ステロイドは、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の２０〜１２０重量％の量で含まれる（例、２５〜９０重量％または３５〜７５重量％）。イオン性両親媒性物質は、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の１〜３０重量％の量で含まれる（例、２〜２０重量％または５〜１５重量％）。
【０１１３】
非イオン性界面活性剤を含む小胞の製造については、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ１９９３／０１９７８１号で報告されているものなど、多くの公知技術がある。これらの公知方法のいずれであっても、適切な小胞の製造に使用され得、ビロソームはこれらの技術のいずれかを改変することにより製造され得るものとする。典型的な技術は、非イオン性界面活性剤の薄膜を、有機溶媒、例えば炭化水素または塩素化炭化水素溶媒、例えばクロロホルムからの回転式蒸発法により製造する、回転式薄膜蒸発方法である、例えば、Russell および Alexander, J.Immunol. 140:1274 (1988)参照。次いで、生成した薄膜を、輸送エンハンサーの存在下、重炭酸緩衝液中で再水和する。
【０１１４】
ビロソームの製造に適合化され得る別の小胞製造方法は、Collins et al., J. Pharm. Pharmacol. 42:53 (1990)に開示された方法である。この方法では、非イオン性界面活性剤、ステロイド（使用する場合）およびイオン性両親媒性物質（使用する場合）の混合物を融解し、水性緩衝液の存在下で激しく混合しながら水和する。輸送エンハンサーは、混合物中の他の構成成分により封入されるか（すなわち、共融解による）、またはペプチドの封入に使用される工程中同時に小胞に組み込まれ得る。
【０１１５】
別の方法では、剪断力の存在下で水和させる。上記剪断力の適用に使用され得る装置は、公知の適切な装置である（例、ＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０６８８２号参照）。また、音波処理および超音波処理は、小胞の形成またはそれらの粒子サイズの改変に有効な手段である。
【０１１６】
１または複数ペプチドは、いかなる方法にせよ小胞と組み合され得る。例えば、回転式薄膜蒸発技術の場合、これは、輸送エンハンサーと一緒にペプチドの存在下で薄膜を水和させることにより達成され得る。他の方法では、１または複数ペプチドを、水相に存在するペプチドを急速冷凍、次いで凍結乾燥により封入する脱水−再水和方法により予め成形しておいた小胞と組み合わせることもあり得る、例えば、Kirby および Gregoriadis, Biotechnology 2:979 (1984)参照。別法として、小胞をペプチドと混合し、液体窒素中で繰り返し急速冷凍し、例えば６０℃程度の温度（すなわち、関連界面活性剤の転移温度より高温）に温める、冷凍解凍技術が使用され得る、例えば、Pick, Arch. Biochem. Biophys. 212:195 (1981)参照。ペプチド封入に加えて、脱水−再水和方法および冷凍−解凍技術によると、小胞へ追加的輸送エンハンサーを同時に組み込むこともできる。
【０１１７】
これらの方法のそれぞれにおいて、小胞形成混合物を融解状態で維持するのに十分な程度高温で、小胞成分の懸濁液を数回多孔質ポリカーボネート膜から押し出して成形し得る。この方法は、均一サイズを有する小胞が製造され得るという利点を有する。本発明により使用され得る小胞（ビロソームを含む）は、いかなる直径のものでもよい。一部の実施態様では、組成物は、約１０ｎｍ〜約１０μｍの範囲の直径を有する小胞を含み得る。一部の実施態様では、小胞は、約１００ｎｍ〜約５μｍの直径を有する。一部の実施態様では、小胞は、約５００ｎｍ〜約２μｍの直径を有する。一部の実施態様では、小胞は、約８００ｎｍ〜約１.５μｍの直径を有する。
【０１１８】
ＶＩ．投薬量および投与
本発明方法は、成人および小児を含むヒトにおけるインフルエンザの処置に有用である。しかしながら、一般に、それらは動物でも使用され得る。一部の実施態様において、本発明方法は、獣医適用、例えばイヌおよびネコ適用に使用され得る。所望ならば、本発明方法はまた、家畜、例えばヒツジ、鳥類、ウシ、ブタおよびウマの品種にも使用され得る。
【０１１９】
本明細書記載の組成物は、一般に、免疫応答を誘導するのに必要であるかまたは十分である量および時間で投与される。投薬レジメンは、一定の期間にわたる単一用量または複数用量により構成され得る。投与されるペプチド組成物の正確な量は、対象ごとに変動し得、幾つかの因子によって異なり得る。すなわち、一般に、使用される正確な用量は、担当医により決定され、対象の体重および投与経路並びに対象の年齢および症状の重症度および感染の危険性に左右されるものとする。一部の実施態様では、免疫原性組成物中のペプチドの用量は、約０.０１〜５０ｍｇの範囲であり得る。例えば、一部の実施態様では、範囲は、０.１〜５ｍｇ、例えば０.１〜２ｍｇであり得る。実施例１４は、０.２または１ｍｇペプチド用量の２回の連続筋肉注射（第０日および第２８日目）を含む具体例としての投与スキームを記載している。
【０１２０】
一般に、組成物は、任意の経路により対象に投与され得る。実施例における結果は、本明細書記載の免疫原性ペプチド組成物が、伝統的非経口経路により、または経口的に投与されたとき防御応答を誘導し得ることを立証している。すなわち、実施態様によっては、組成物は、経口的に（頬側、舌下経路および胃洗浄または他の人工栄養手段を含む）投与される場合もあり得る。上記の経口送達は、固体または液体組成物の例えば錠剤、カプセル、多重粒子、ゲル、フィルム、小卵(ovule)、エリキシル、液剤、懸濁液などの形態を用いて達成され得る。一部の実施態様において、液体組成物を用いたとき、組成物は、胃のｐＨを中和するために塩基性組成物（例、重炭酸溶液）と連係的に投与され得る。一部の実施態様において、塩基性組成物は、ペプチド組成物の前および／または後に投与され得る。一部の実施態様において、塩基性組成物は、投与前にペプチド組成物と組み合わされるか、またはペプチド組成物と同時に摂取され得る。
【０１２１】
いかなる注射形態よりも経口送達が有利であることを考えると、経口経路は特に望ましいものであると認められる。また、公知インフルエンザワクチンが全て、これまで非経口投与されてきたという事実を考えると、結果は驚くべきものであると認められる。本明細書記載の免疫原性組成物が、現行のインフルエンザワクチンで使用されている標準タンパク質抗原よりもかなり短いペプチドを含むという事実に照らし合わせると、経口送達による防御応答の誘導能力は、特に予想外のことである。事実、免疫原としての短いペプチドの使用およびタンパク質ワクチンの経口送達の両方に対して当業界では長い間偏見があった。
【０１２２】
一部の実施態様において、経口組成物は、１または複数のペプチド、ビロソームおよびアジュバントを含む。一部の実施態様において、アジュバントはＴＬＲ−３アゴニストである。一部の実施態様において、アジュバントは、ビロソームと混合され得る。実施態様によっては、アジュバントをビロソームと（例、ビロソームの製造に使用される工程中にアジュバントを１または複数のペプチドおよび／またはビロソーム成分と組み込むことにより）会合させる場合もあり得る。
【０１２３】
一部の実施態様において、組成物は、例えば注射による非経口送達用に処方され得る。上記実施態様では、投与は、例えば、静脈内、筋肉内、皮内または皮下経路であるか、または注入または無針注射技術によるものであり得る。上記非経口投与の場合、組成物は、慣用的凍結乾燥組成物で調製および維持され、投与前に医薬上許容される食塩溶液、例えば０.９％食塩溶液により再構成され得る。注射可能組成物のｐＨは、当業界で周知のとおり、医薬上許容される酸、例えばメタンスルホン酸で調節され得る。使用され得る他の許容される賦形剤および溶媒には、リンゲル液およびＵ.Ｓ.Ｐがある。さらに、滅菌した固定油類も、溶媒または懸濁媒質として常用されている。この目的の場合、合成モノ−またはジグリセリドを含め、刺激の強くない固定油であれば使用され得る。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸は、注射可能物質の製造に使用される。注射可能組成物は、例えば、細菌保持フィルターに通してろ過するか、または使用前に滅菌水または他の滅菌注射可能媒質に溶解または分散され得る滅菌固体組成物形態で殺菌剤を組み込むことにより滅菌され得る。
【０１２４】
一部の実施態様において、非経口組成物は、１または複数のペプチド、非イオン性界面活性剤を含む小胞およびアジュバントを含む。一部の実施態様において、アジュバントはＴＬＲ−４アゴニストである。実施態様によっては、アジュバントを小胞と混合する場合もあり得る。実施態様によっては、アジュバントを小胞と（例、小胞の製造に使用される工程中にアジュバントを１または複数のペプチドおよび／または小胞成分と組み込むことにより）会合させる場合もあり得る。
【０１２５】
また組成物は、鼻腔経路または吸入により投与され得、好都合には、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用し、または使用せず、与圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーから乾燥粉末形態またはエーロゾル噴霧形態で送達される。与圧式エーロゾルの場合、用量単位は、バルブを取り付けて計量された量を送達することにより決定され得る。与圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーは、例えば溶媒としてエタノールと噴射剤の混合物を用いた、抗体の溶液または懸濁液を含み得、さらに滑沢剤、例えばソルビタントリオレエートを含み得る。吸入器または吹き入れ器で使用されるカプセルおよびカートリッジ（例えばゼラチンでできている）は、ペプチド組成物および適切な粉末基剤、例えば乳糖または澱粉の粉末ミックスを含むように製剤化され得る。
【０１２６】
直腸投与用組成物は、好ましくは、ペプチド（複数も可）を、周囲温度では固体であるが、体温では液体であるため、直腸円蓋部で溶解し、抗体を放出する適切な非刺激性賦形剤または担体、例えばカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ロウと混合することにより製造され得る坐薬である。また、当業界で周知のとおり、停留浣腸および直腸カテーテルも使用され得る。また、増粘性担体、例えばヒドロキシプロピルセルロースは、直腸内における組成物の保持を促すため、直腸投与に適切な本発明担体である。一般的に、組成物に加えられる担体の量は、組成物の保持を最大にするように選択される。特に、体積は、直腸円蓋部における投与された組成物の保持を危うくするほど大きくするべきではない。
【０１２７】
ＶII．具体例としての組成物
一部の実施態様において、本開示は、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントおよび非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む小胞を含む免疫原組成物を提供する。実施態様によっては、これらの組成物を経口投与する場合もあり得る。若干の実施態様では、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントはポリ（Ｉ：Ｃ）を含む。一部の実施態様において、輸送エンハンサーは、胆汁酸、その誘導体またはこれらのいずれかの塩（例、デオキシコール酸ナトリウム）である。若干の実施態様において、非イオン性界面活性剤は、グリセリンエステル（例、１−モノパルミトイルグリセリン）である。実施態様によっては、小胞がさらにイオン性両親媒性物質（例、ジセチルホスフェート）を含む場合もある。実施態様によっては、小胞がさらにステロイド（例、コレステロール）を含む場合もある。一部の実施態様において、小胞は、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む。実施態様によっては、組成物がさらにミョウバンを含むこともある。
【０１２８】
一部の実施態様において、本開示は、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントおよび非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む免疫原組成物を提供する。実施態様によっては、これらの組成物を非経口投与（例、筋肉注射により）する場合もあり得る。若干の実施態様において、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントは、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む。若干の実施態様において、非イオン性界面活性剤はグリセリンエステル（例、１−モノパルミトイルグリセリン）である。実施態様によっては、小胞がさらにイオン性両親媒性物質（例、ジセチルホスフェート）を含む場合もある。実施態様によっては、小胞がさらにステロイド（例、コレステロール）を含む場合もある。一部の実施態様において、小胞は、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェートおよびコレステロールを含む。実施態様によっては、組成物がさらにミョウバンを含むこともある。
【０１２９】
一部の実施態様において、前述の免疫原性組成物は、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド、および配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む。
【０１３０】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む。
【０１３１】
一部の実施態様では、第２ペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む。実施態様によっては、ｎ＝４である。
【０１３２】
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む。一部の実施態様において、組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方は、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む。若干の実施態様では、組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
一部の実施態様において、組成物は、それぞれが配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。実施態様によっては、ｎ＝４である。
【０１３４】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む。組成物は、それぞれが配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝４）の異なる第２ペプチドを含む。組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。また、組成物は、それぞれが配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｍ（ｍ＝４）の異なる第４ペプチドを含む。
【０１３５】
上述の組成物は、季節型インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置に使用される。
【０１３６】
実施態様の中には、上述の組成物を、ブタ起源のＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスにより誘発されるインフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置に使用する場合もある。
【実施例】
【０１３７】
実施例
以下の実施例では、本明細書記載のある種の組成物および方法の具体的な製造および実践方法について記載している。これらの実施例は説明を目的としているのに過ぎず、本明細書記載の組成物および方法の範囲に対し制限を設ける意図など無いことは言うまでもない。
【実施例１】
【０１３８】
実施例１：ペプチド合成
本明細書記載のペプチドは、全て固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ）により合成された。概して、リンカー分子により酸に不安定な結合を介してＣ−末端アミノ酸を架橋ポリスチレン（またはＰＥＧに基づく）樹脂に結合させた。この樹脂は、合成に使用する溶媒に不溶性であるため、比較的簡単かつ迅速に過剰の試薬および副生成物を洗い流せる。酸中では安定しているが、塩基により除去可能なＦｍｏｃ基でＮ−末端を保護した。塩基安定性の酸分解性基により側鎖官能基を保護した。次いで、鎖の一端を固相に結合させた状態で、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を伸長中のペプチド鎖に組み込ませることにより合成を実施した。
【０１３９】
次の方法は、本明細書記載のペプチドの製造に使用した典型的ＳＰＰＳ法である。各カップリングを開始するため、ＮｏｖａＰＥＧ樹脂結合アミノ酸／ペプチド上のＦｍｏｃ基を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジンで除去した。次いで、それをすすぎ、そのα−カルボキシル基を２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートで活性化しておいた保護アミノ酸を加えた。活性化アミノ酸および樹脂結合アミノ酸を塩基の存在下で反応させることにより、新たなペプチド結合を形成させた。ペプチドを段階的方法で合成しながら、可溶性試薬、例えばカップリング試薬、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、塩基、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および脱ブロック化試薬、ピペリジンを全て、ろ過によりペプチド−固体支持体マトリックスから除去し、各カップリング段階の最後にすすいだ。目的ペプチドが樹脂上で会合するまで、この工程を反復した。少なくとも８５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む開裂溶液により樹脂から開裂し、ペプチドから保護基を脱保護した後、粗ペプチドをエーテルからの沈殿により集め、次いで遠心分離にかけた。次いで、ペプチドを精製し、ＨＰＬＣおよび質量分析法により特性検定した。
【０１４０】
本明細書で記載しているとおり、ある種のペプチド組成物は、単一ペプチド配列の多くの変異型を含み得る（例、同一配列における２またはそれ以上の位置における２またはそれより多い異なるアミノ酸を伴う）。所定のセットにおける各変異型は個々に合成され得るが、典型的には単一合成において変異型のサブセットまたは１セット全部を合成する方が有利である。例えば、これは、スプリット−コンバイン方法を用いて達成され得る。すなわち、所定の位置に２つの異なるアミノ酸の一方を含むように変異型のセットが設計された場合、樹脂は２つの等しい部分に分離され得、各部分が２つのアミノ酸の一方とカップリングすることにより、２つの特徴的なペプチド鎖を形成し得る。一旦カップリングが完了すると、２つの部分は、後続のアミノ酸が両鎖に付加され得るように再び組み立てられ得る。別法として、選択の対象となる２つのアミノ酸が同一反応に加えられるワンポット法が使用され得る。典型的には、２つのアミノ酸は当モル量で加えられる。しかしながら、環境によっては（例えば、それぞれの反応速度論が著しく異なる場合）、非当モル量の方が好ましい場合もあり得る。次いで、ペプチド反応は、Kaiser ニンヒドリン試験を用いることにより完全性について監視され得る。
【実施例２】
【０１４１】
実施例２：競合マイクロ中和検定法
この実施例では、インフルエンザ中和抗体に対する様々なペプチド組成物の結合能力を評価した。異なるペプチド組成物（図１および下表１〜９参照）を、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）で８０μｇ／ｍｌに希釈し、５０μｌを９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Nunc）における異なるウェルに加えた。各ペプチド組成物は、適用可能な場合変異型の完全な補体を含んでいた（例、表１に示された８個のＩＮＦ−ＨＡ−３−Ｖ３ペプチド変異型、表４に示された４個のＩＮＦ−Ｈ１−４−Ｖ４ペプチド変異型など）。市販の抗インフルエンザ血清およびヒト血清を、ＩＭＤＭ中で１／４０に希釈し、５０μｌを各ウェルに添加した後、プレートを３７℃で１時間インキュベーションした。ＩＭＤＭ中１×１０５ｐｆｕを含むインフルエンザウイルス株 Wisconsin（Ａ／Ｗｉｓ／６７／０５）または New Caledonia（Ａ／ＮＣ／２０／９９）５０μｌを、各ウェルに添加し、プレートを３７℃でさらに１時間インキュベーションした。これに続いて、２％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補った５×１０４のメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を各ウェルに添加した。どのプレートも４細胞および４ウイルス対照ウェルを含んでいた。プレートを３７℃で１８〜２２時間インキュベーションした。細胞を１ウェル当たり７０％エタノール５０μｌにより１０分間固定し、室温で風乾した。プレートを０.０５％Tween-20 含有ＰＢＳで５回洗浄し、ウェルを１０％ＦＣＳで遮断した。４℃で９０分後、ブロック緩衝液中で１／５００に希釈しておいたＡ型インフルエンザヌクレオキャプシド抗原（Chemicon）に指向したモノクローナル抗体５０μｌを、各ウェルに添加した。４℃で１時間さらにインキュベーションした後、プレートを５回洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧペルオキシダーゼ結合アフィニティー精製抗体（１／１００００）１００μｌを３０分間４℃で各ウェルに添加した。プレートを５回洗浄し、１００μｌのオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ：Sigma、セントルイス、ミズーリ）により展開し、２０分後１ＮのＨＣｌにより酵素反応を止めた。ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Bio-Rad）により波長４９０ｎｍでＯＤを測定することにより、反応を定量した。表１、２、３、４、５、６、７、８および９のペプチド（複数も可）を含む組成物に関する結果を図１に示す。
【０１４２】
図１に示したとおり、光学密度（ＯＤ）測定によりＥＬＩＳＡで定量したところによると、市販または免疫血清を添加することにより、インビトロでの細胞のインフルエンザウイルス感染は阻害され得る。すなわち、約０.６のＯＤ値（ウイルス対照参照）は、免疫血清の存在下では約０.２まで低下する（ウイルス＋血清対照参照）。様々なペプチド組成物と血清をインキュベーションすることにより、ペプチドが血清中に存在する中和抗体とある程度結合するため、それらの中和活性は打ち消され得る（例、約０.３またはそれより高いＯＤ値）。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【実施例３】
【０１４３】
実施例３：ＥＬＩＳＰＯＴ検定法
この実施例では、ＥＬＩＳＰＯＴ検定法でヒトＰＢＭＣの活性化（ＩＦＮγ産生量により測定される）を測定することにより、実施例１のペプチド組成物の免疫原性を試験した。マルチスクリーン−ＨＴＳプレート（Millipore、ベッドフォード、マサチューセッツ）を、４℃で一晩、ＰＢＳ中の抗マウスＩＦＮγ抗体（ｍＡｂ ＡＮ１８、Mabtech、マリーモント、オハイオ）１０μｇ／ｍｌで被覆した。次いで、プレートをＰＢＳで洗浄し、室温で１時間、１０％ＦＣＳおよび１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを含むＩＭＤＭで遮断した。培地を除去し、ペプチド組成物（４０μｇ／ｍｌ、図２および表１〜９参照）と混合したインフルエンザワクチン接種済ヒト対象からの２×１０５の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（２００μｌ／ウェル）を、２日間各ウェルに加えた。インキュベーション後、細胞を取り出し、ＰＢＳ＋０.０５％Tween 20 で洗浄し、室温で２時間１μｇ／ｍｌのビオチニル化抗マウスＩＦＮγ抗体（ｍＡｂ Ｒ４−６Ａ２−Biotin、Mabtech）とインキュベーションした。洗浄後、ＰＢＳ＋０.５％ＦＣＳ中の１／１０００ストレプトアビジン−ＡＬＰ−ＰＱ（Mabtech）１００μｌ／ウェルを加え、室温で１時間インキュベーションした。プレートを上記と同様に洗浄し、室温で２０分間１ウェル当たり１００μｌのＢＣＩＰ／ＮＢＴアルカリ性ホスファターゼ（Moss Inc）により展開した。水道水でプレートをすすぐことにより反応を止めた。各ウェルにおけるスポットの数を拡大および計数した。表１、２、３、４、５、６、７、８および９のペプチド（複数も可）を含む組成物に関する結果を図２に示す。
【０１４４】
図２に示されているとおり、ある種のペプチドがこの検定法において強い応答を発したことから、これらの組成物は免疫原性であることが確認された。
【実施例４】
【０１４５】
実施例４：他のペプチド類
この実施例における表１０〜１４は、本明細書記載の組成物および方法で使用され得る他の具体例としてのペプチド類を記載している。
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【実施例５】
【０１４６】
実施例５：ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐ
ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐは、表１５に示したペプチドの混合物を含む。
【表１５】
【実施例６】
【０１４７】
実施例６：ペプチド組成物ＩＮＦ−６３Ｐ
ペプチド組成物ＩＮＦ−６３Ｐは、表１６に示したペプチドの混合物を含む。
【表１６】
【実施例７】
【０１４８】
実施例７：ペプチド組成物ＳＦＶ２
ペプチド組成物ＳＦＶ２は、表１７に示したペプチドの混合物を含む。
【表１７】
【実施例８】
【０１４９】
実施例８：ビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物
この実施例では、ペプチド組成物の経口送達用に実施例９および１１で使用したビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物の製法を記載する。脂質類（モノパルミトイル−グリセリン、コレステロールおよびジセチルホスフェート）を、クロロホルムに溶かし、薄膜状に乾燥し、次いで実施例５のＩＮＦ−６１Ｐペプチドおよびデオキシコール酸ナトリウム（「胆汁酸塩」）により再水和した。動的光散乱法を用いることによりサイズについて、またニンヒドリン試験を用いることにより封入効率について、生成したビロソームを評価した。次いで、負荷ビロソームの容量を調節することにより、所望量のペプチドを含む組成物を製造した。下記に記載しているとおり、これらの負荷ビロソームは、経口投与したときでさえ、フェレットおよびマウスに免疫原性ペプチド組成物を送達することができた。
【実施例９】
【０１５０】
実施例９：ビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物によるフェレットの経口インフルエンザ免疫化
この実施例では、フェレットにおけるある種の免疫原性ペプチド組成物のインビボ試験について記載する。インフルエンザウイルス感染のフェレットモデルは、インフルエンザワクチン候補評価用の最も優れた標準哺乳類モデルである。事実、フェレットは、Ａ型およびＢ型インフルエンザの全ての主要な亜型の臨床単離株により感染し、人体で観察されるのと類似した病気の臨床経過（体温上昇および症例によっては体重減少を含む）を呈し得る。
【０１５１】
若干の研究者らは、筋肉（ＩＭ）注射により接種される現時点で認可されているインフルエンザワクチンが、血球凝集反応阻害活性を併せもつ中和性ＩｇＧ抗体を誘導することを立証した。これらの既存のワクチンによる細胞性免疫の誘導、および防御におけるその役割は不明である。下記で検討しているとおり、我々は、経口投与された免疫原性ペプチド組成物がＩｇＡ抗体を全身的（血清）および粘膜（直腸および鼻腔洗浄試料）において誘導することを示した。インフルエンザ感染は粘膜表面を介して起こるため、ＩｇＡ応答（粘膜免疫応答の顕著な特徴）は、全身的ＩｇＧ応答よりも有効であり得る。実施例１３で示すところによると、免疫原性ペプチド組成物を標準的非経口経路（例、ＩＭ注射による）により投与したとき、全身的ＩｇＧ応答が得られた。
【０１５２】
ワクチン接種および攻撃実験を行うため、血球凝集反応阻害検定法により血清陰性として予めスクリーニングされた雄のフェレットを選択した。ペプチドが０.５ｍｌの量で含まれるように経口送達用組成物を処方した。全フェレットに対し免疫化の３日前に採血し、血清、血漿およびＰＢＭＣを集めた。ＩＮＦ−６１Ｐ組成物を与えたフェレットを、第０、３、１４および１７日目に絶食後胃洗浄により経口的に免疫化した。市販ワクチン対照については、第０および１７日目に、FLUVIRAL ワクチンを四頭筋へ筋肉注射した。
【０１５３】
第２７日目、血清を得るためフェレットを採血し、唾液および直腸洗浄液を集めた。次いで、ＰＢＳ（０.５ｍｌ／鼻孔）で２×１０６ｐｆｕ／ｍｌに希釈したインフルエンザウイルスにより鼻腔内経路で全フェレットを攻撃した。ウイルス攻撃後１０日間、鼻腔洗浄液を集め、全動物を秤量し、感染の臨床徴候について毎日監視した（体温については、各動物の体内の移植体により電子工学的に測定した）。動物を殺す時点で、血清、血漿、ＰＢＭＣおよび（場合によっては）総血球数（ＣＢＣ）を得るため採血し、脾臓を集め、単核細胞について処理した。
【０１５４】
図３に示すとおり、免疫原性ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐ（実施例５参照）を動物に接種し、Ｈ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃したとき、動物が発熱数の減少を呈したことから、組成物ＩＮＦ−６１Ｐの防御効果が立証された。さらに、ＩＮＦ−６１Ｐワクチン接種動物（図４参照）は、ウイルス攻撃後の日々に対照マウスと比べて、それほど目立った体重減少を呈しなかった。
【０１５５】
図５に描いているとおり、組成物ＩＮＦ−６１Ｐは、直腸洗浄液（上方パネル）および鼻腔洗浄液（下方パネル）試料で見られる粘膜ＩｇＡ応答を誘導した。ＩＮＦ−６１Ｐを接種された動物の大多数（３／４）は、直腸または鼻腔洗浄液試料においてワクチン接種前応答に対しＩｇＡ力価の少なくとも２倍の増加を呈した。予想通り、標準ＭＩ注射により接種された市販のワクチンは、全身的（血清）ＩｇＧ応答を誘導した（データは示さず）。しかしながら、図５で示すとおり、それはＩｇＡ応答を一切誘導しなかった。
【０１５６】
ＳＦＶ２ペプチド（実施例７参照）を含む免疫原性ペプチド組成物でこの実験を再現したときも、同様の結果（データは示さず）が観察された。注目すべきことに、Ｂ型インフルエンザからの組換えＨＡタンパク質に対し指向した血清ＩｇＡは、組成物ＳＦＶ２を接種された動物でも検出された（図６参照）。
【実施例１０】
【０１５７】
実施例１０：皮下投与されたＩＮＦ−０９Ｌ−Ａ組成物の免疫応答試験
この実施例では、マウスにおいて表１３のペプチド組成物（ＩＮＦ−ＮＰ１−Ｖ１）の修正版（ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａ）を皮下投与することにより誘導された免疫応答について記載する。ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａペプチド組成物は、各ペプチドのＮ−末端にＫＳＳリンカーを含む点が表１３に示されたＩＮＦ−ＮＰ１−Ｖ１組成物とは異なっていた。Ｎ−末端リシン部分は、各ペプチドの二重脂質化(lipidate)に用いられた。
【０１５８】
成熟年齢に達した（＞１２か月）ＨＬＡ（Ａ＊０２０１）トランスジェニックマウスに、ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａペプチド組成物によるワクチン接種を３回行った。１６の変異型は全て投与された組成物に含まれていた。組成物はまた、ミョウバンアジュバントを含んでいた。対照群には、アジュバントのみを与えた。多くの亜型からのインフルエンザ分岐株：H3N2 (A/HK/1/18, A/VICtoria/3/75)およびH1N1 (A/NC/20/99, A/PR/8/34)により脾臓細胞を感染させた。ＥＬＩＳＰＯＴ検定法（方法については実施例３参照）においてＩＦＮγ分泌性Ｔ細胞の頻度を定量することにより、Ｔ細胞応答を測定した。スポットは、ウイルス株のそれぞれに特異的なＩＦＮγ分泌性Ｔ細胞の頻度を表し、エラーバーは、各群（ｎ＝３）でのマウス間における標準偏差を表す。結果を、左から右に向って次の通り示す：H3N2（A/HK/1/18）、H3N2（A/VICtoria/3/75）、H1N1（A/NC/20/99）および H1N1（A/PR/8/34）。図７に示すとおり、ペプチド組成物は、広範な細胞性（ＣＴＬ）免疫反応を誘導した。
【実施例１１】
【０１５９】
実施例１１：経口投与されたペプチド組成物により誘導される免疫応答に対するアジュバントの効果
この実施例では、アジュバントの使用および不使用時におけるペプチド組成物をマウスに経口投与することにより誘導される免疫応答を比較する。
【０１６０】
ＴＬＲ−３に基づくアジュバント（ポリＩ：Ｃ）と組み合わせて、または組み合わせずにビロソームに封入したペプチド組成物を、マウス（ｎ＝４）に与えた。マウスを４回経口的に免疫化した（第０、３、１４および１７日目）。ワクチン接種後、脾臓細胞を採取し、ペプチド組成物中に存在する４種の個々のペプチドによりインビトロで別々に刺激を加えた。ＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴ（方法については実施例３参照）を用いて、応答を測定した。各ペプチド攻撃に関する結果を図８で比較する。図８に示すとおり、アジュバントと組み合わせたペプチド組成物を投与された動物は、ペプチド組成物を単独で与えられた動物よりも大きな応答を示した。
【実施例１２】
【０１６１】
実施例１２：小胞ＳＦＶ２組成物
この実施例では、ペプチド組成物の筋肉（ＩＭ）注射用として実施例１３で使用された組成物の製造について記載する。小胞は、次の脂質により構成された：１−モノパルミトイルグリセリン（非イオン性界面活性剤）、コレステロール（ステロイド）およびジセチルホスフェート（イオン性両親媒性物質）。具体的には、５：４：１モル比の脂質類（２７０ｍｇの１−モノパルミトイルグリセリン（ＭＰＧ）、２５５ｍｇのコレステロール（ＣＨＯ）および９０ｍｇのジセチルホスフェート（ＤＣＰ））を、確実に粉末が平底２５ｍｌガラス製ビーカーの側面に付着しないようにしながら、ガラス製ビーカーに入れた。ビーカーをクランプで締め、アルミホイルで覆い、時々ビーカー中で渦状に撹拌しながら、脂質を１３５℃で１０分間加熱した油浴中で溶かした。組成物によっては、合成ＴＬＲ−４アゴニスト、ＰＨＡＤ（Avanti Polar Lipids, Inc. からのリン酸化ヘキサアシル二糖、図１３に示す）を、他の脂質と共溶解する場合もあれば、ＰＨＡＤをペプチド組成物ＳＦＶ２（実施例７に記載）と共に加える場合もあった。１０ｍｌのペプチド組成物ＳＦＶ２（４００μｇ／ｍｌ）およびＰＨＡＤ（１００μｇ／ｍｌ）の生成した混合物を、加熱水浴中３０℃で５分間、重炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ８.５）中でプレインキュベーションした。ペプチド溶液を８０００ｒｐｍでホモジナイゼーションし、次いで、溶解した脂質溶液に移しかえ、その時点からホモジナイゼーションを３０℃で１０分間続行した（別法として、加熱した脂質溶液を抗原溶液に移しかえ、それに続いてホモジナイゼーションすることも可能であったと思われる）。最後に、緩衝液中の４００ｍＭのショ糖溶液１０ｍｌを、小胞／ペプチド溶液に加え、３０秒間ボルテックスした。小胞（ペプチド併用または併用せず）を等分してバイアルに充填し（０.５ｍｌ／バイアル）、凍結乾燥した。凍結乾燥した小胞（ペプチド併用または併用せず）を、投与前０.５ｍｌの食塩水中で再水和し、ミョウバン（水酸化アルミニウム）に吸収させた。
【実施例１３】
【０１６２】
実施例１３：小胞ＳＦＶ２組成物によるフェレットの非経口的免疫化
この実施例では、フェレットにおける実施例１２の小胞ＳＦＶ２組成物のインビボ試験について記載する。ワクチン接種および攻撃実験を行うため、血球凝集反応阻害検定法により血清陰性として予めスクリーニングされた雄のフェレットを選択した。ペプチドが０.５ｍｌの量で含まれるように筋肉注射用組成物を実施例１２記載の要領で処方した。全フェレットに対し免疫化の３日前に採血を実施し、血清、血漿およびＰＢＭＣを集めた。第０および２８日目に、ＳＦＶ２ペプチド組成物を併用または併用していない小胞で筋肉注射（ＩＭ）によりフェレットを免疫化した。市販ワクチン対照については、第０および２８日目に、VAXIGRIP 市販ワクチンを四頭筋へ筋肉注射した。この市販ワクチンは、２００８年〜２００９年の時期におけるＡ型およびＢ型株について３価の不活化インフルエンザワクチンである（具体的には、A/Brisbane/59/2007 H1N1; A/Brisbane/10/2007 H3N2 および B/Florida/4/2006 株）。この試験についての実験群を表１８に要約する。
【表１８】
【０１６３】
第２８日目、フェレットから採血し、血清試料を集めた。次いで、ＰＢＳ（０.５ｍｌ／鼻孔）で２×１０５ｐｆｕ／ｍｌに希釈したインフルエンザウイルスにより鼻腔内経路で全フェレットを攻撃した。ウイルス攻撃後１０日間、鼻腔洗浄液を集め、全動物を秤量し、感染の臨床徴候について毎日監視した（体温については、各動物の体内の移植体により電子工学的に測定した）。動物を殺す時点で、血清、血漿、ＰＢＭＣおよび（場合によっては）総血球数（ＣＢＣ）を得るため採血し、脾臓を集め、単核細胞について処理した。
【０１６４】
図１０Ａ〜Ｂに示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、体液性応答を誘導する。免疫後血清は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットについて rHA Solomon (A) および Wisconsin (B)の両方でのＥＬＩＳＡにおいて顕著な免疫応答を示した。VAXIGRIP 処置動物は、ＥＬＩＳＡにおいて小さな免疫応答を示しただけであり、空小胞（すなわち、ＳＦＶ２ペプチドを併用していない）で処置した動物は、反応性を全く示さなかった。動物群のいずれにおいても、ｒＨＡ Malaysia に対するＩｇＧ応答は全く検出されなかった（データは示さず）。
【０１６５】
図１１に示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、ウイルス攻撃に対し防御作用を示す。動物に実施例１２の免疫原性ペプチド組成物ＳＦＶ２を接種し、２×１０５ｐｆｕのＨ１Ｎ１（A/Solomon Island/03/06）で攻撃を加え、鼻腔洗浄試料からのウイルス量を、ウイルス血症のピーク時（第２日目）でのプラーク検定法により測定した。各記号は、個々の動物で測定されたウイルス量を表す。ＳＦＶ２ワクチンを接種された動物は、空小胞で処置された対照動物と比べ、鼻腔洗浄試料においてウイルス量の著しい低下（ｐ＜０.０５）を呈した。同じく標準ＩＭ注射により接種される市販の季節型インフルエンザワクチンは、鼻腔洗浄試料においてウイルス量の低下を呈しなかった。
【０１６６】
図１２に示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、潜在的な汎発流行性インフルエンザ株に対して体液性免疫を誘導する。２回目の接種（攻撃前）の２週間後に血清を動物から集め、ＥＬＩＳＡにより推定的汎発流行性ブタ（H1N1/California/2009）単離株からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質との反応性について試料を試験した。ＳＦＶ２を接種された動物は、空小胞で処置された対照動物と比べて、ｒＨＡ H1N1/California（汎発流行性ブタＨ１Ｎ１）に対して高い血清ＩｇＧ反応性を呈した。図１２におけるデータは、市販の季節型インフルエンザワクチンを接種された動物からの血清が、この新規インフルエンザ株に対して反応し得なかったことを示す。
【実施例１４】
【０１６７】
実施例１４：投与スキーム
この実施例では、ヒトにおける実施例１２の小胞ＳＦＶ２組成物を用いた典型的投与スキームについて記載する。以下の処置群を特色とする部分盲検無作為化プラセボ対照試験を実施する：
・処置群１：抗原用量１、小胞ＳＦＶ２組成物（１ｍｇペプチド）に相当する２回の筋肉注射、第０日および２８日目に投与（ｎ＝５０）。
・処置群２：用量２、ＮＡＭ１と組み合わせたＳＦＶ２（０.２ｍｇペプチド）に相当する２回の筋肉注射、第０日および２８日目に投与（ｎ＝５０）。
・処置群３：リン酸緩衝食塩水の２回の筋肉注射、プラセボ群、第０日および２８日目に投与（ｎ＝２５）。
【０１６８】
対象を２：２：１の割合で無作為化する。
【０１６９】
短期認容性を投与後７日目に評価する。自発的に報告された有害事象を投与後２８日間に収集する。深刻な有害事象および医学的に重要な事象を、１６８日（±１４日）の全追跡期間にわたって収集する。各注射の前後および１６８日の追跡期間の最後に生物学的安全性を評価する。
【０１７０】
第０日、２８日（±３日）、５６日（±７日）目および１６８日（±１４日）の追跡期間の最後に集めた血清試料において、免疫原性を評価する。免疫学的リードアウトは、血清ＨＩ抗体（血球凝集阻害検定法）、ｒＨＡ-特異的血清ＩｇＧ（ＥＬＩＳＡ）およびマイクロ中和検定法により測定される中和抗体である。細胞性（ＣＴＬ）免疫性評価に関しては、Ｔ細胞応答をＥＬＩＳＰＯＴおよび細胞内サイトカイン染色法により評価する。
【０１７１】
配列リスト
３７ＣＦＲ１.５２（ｅ）（５）に従って、テキストファイル形態（「Sequence Listing.txt」という題で２００９年６月１８日に作成、１４キロバイト）で本願と共に提出された配列リストについては、出典明示により援用する。
【０１７２】
他の実施態様
本発明の他の実施態様については、当業者であれば、本明細書に開示した本発明の詳細または実施例を考慮に入れることにより、容易に想到できるはずである。詳細な説明および実施例は、単なる具体例としてみなすべきであり、本発明の真の範囲は請求の範囲によってのみ示されているものとする。本明細書で引用した参考文献の内容については、出典明示により援用する。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【背景技術】
【０００１】
関連出願
本願は、２００８年６月１９日付、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ０８／６７４７１号および２００９年５月２９日付、米国仮出願第６１／１８２６１４号に対し優先権およびその利益を主張する。これらの優先権出願の内容については、出典明示で援用する。
【０００２】
背景
インフルエンザは、オルトミクソウイルス（Orthomyxoviridae）科のウイルスに起因する呼吸器系の一般的な感染疾患である。ウイルスの変異度が高いため、典型的には、年ごとに株の変異を考慮に入れて再処方したワクチンによる予防接種が必要とされる。合衆国で毎年開発されるワクチン組成物は、米国食品医薬品局ワクチンおよび関連生物製剤諮問委員会により決定される。同様に、世界保健機構（ＷＨＯ）は、新たなインフルエンザ変異株を検出するため、研究機関の世界的な監視ネットワークを運営している、例えば、Lavanchy, Vaccine17:S24 (1999)参照。選択は、最近単離されたインフルエンザウイルスの抗原分析、抗原変異型の拡散パターンおよび最近ワクチン接種した個体の抗体応答に基づく。
【０００３】
Ａ型およびＢ型インフルエンザウイルスは、汎発流行性ヒト疾患を誘発する２型のインフルエンザウイルスである。Ａ型インフルエンザウイルスは、２種の表面抗原：血球凝集素（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（Ｎ）に基づいてさらに亜型に分類される。Ｂ型インフルエンザウイルスは、亜型には分類されない。１９７７年以来、Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルス、Ａ型インフルエンザ（Ｈ３Ｎ２）ウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスが世界的規模で循環している。ワクチン接種は、深刻な病気のハイリスク患者に対しインフルエンザ感染および関連合併症を予防し、またはインフルエンザを弱毒化する一つの最も有効な方法として認められている。不活化インフルエンザウイルスから調製された抗原の接種は、特異抗体の産生を刺激する。ワクチンを調製する元のウイルス株または密接に関連した株に対してのみ予防効力が示される。
【０００４】
年ごとのワクチンは、来るべき冬に流行すると考えられるインフルエンザウイルスを代表する３種のウイルス株（通常、Ａ型２種およびＢ型１種）を含む。出現している最新のインフルエンザウイルス株の抗原的特徴は、年ごとのワクチンに含ませる株の選択についての基礎となる情報を提供する。ＷＨＯは、毎年の世界的な疫学的状況を検討し、必要ならば、最新の疫学的証拠に基づいて新たな株を推奨する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
作り直すにしても、特定の季節の間に世界中の人々に活発に感染する種々の株を全てワクチンに含ませるのは不可能である。さらに、インフルエンザ感染の季節的な増加に応えるため十分なワクチン投与量を処方および製造するのには比較的長い期間も必要とする。典型的には、ワクチンの製造には６か月を超える期間を要し得る。結果的に、新型であるかまたは見逃されていたインフルエンザ株が、その６か月の間に目覚ましく拡散し、大流行に至ることもあり得る。２００９年４月には、ブタ起源の新型インフルエンザＡ型（Ｈ１Ｎ１）ウイルスが初めて検出された。それは、先に記載したＨ１Ｎ１亜型とは異なり、４種類が組み合わさったウイルスである。ウイルスが最初に急激な増加を示したのはメキシコであったが、流行は国境を越えて合衆国およびカナダへと急速に拡散し、現在ではほぼ全世界の国々が新たな症例を報告している。当業界では、インフルエンザを処置するための改良された組成物および方法が依然として要望されている。特に、ＷＨＯが推奨する季節型インフルエンザ株および新たに出現した流行性インフルエンザ株、例えばブタ起源の新たなＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスの両方に対して広範な免疫原性を有する組成物が要望される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
要約
本願は、インフルエンザの処置に有用な組成物および方法を提供する。本明細書で記載している組成物および方法は、インフルエンザに対して免疫原特性を呈するペプチド類およびペプチド組み合わせ剤の開発に基づいている。
【０００７】
一部の実施態様において、ペプチド組み合わせ剤は、多くのインフルエンザウイルス株、例えば季節型インフルエンザウイルス株、さらには新型のブタ起源の流行性Ａ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスに対しても防御応答を誘導する。
【０００８】
実施態様によっては、組成物を（例、筋肉注射により）非経口投与する場合もある。一部の実施態様では、非経口組成物は、非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む。若干の実施態様では、非経口組成物は、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを含む。若干の実施態様では、非経口組成物中に存在するＴＬＲ−４アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、小胞に物理的に随伴している。
【０００９】
現行では、インフルエンザワクチンは上述の非経口投与経路（例、筋肉注射）に限られているが、我々は、経口投与時に防御応答を誘導する組成物を同定した。従って、実施態様によっては、組成物を経口投与する場合もある。一部の実施態様では、経口組成物はビロソーム(bilosome)を含む。実施態様によっては、経口組成物がＴＬＲ−３アゴニストアジュバントを含む場合もある。若干の実施態様では、経口組成物中に存在するＴＬＲ−３アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、ビロソームに物理的に随伴している。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１Ａ〜Ｂは、競合マイクロ中和検定法により検出された例示的なペプチド組成物の特異性を示す。ヒト血清を希釈し、選択されたペプチド組成物、それに続いてインフルエンザウイルスとインキュベーションした。インキュベーション後、ＭＤＣＫ（メイディン−ダービーイヌ腎臓）細胞を添加し、プレートを１８〜２２時間後に展開した。（Ａ）ヒト血清を用いて、インフルエンザ New Caledonia（A/NC/20/99）に対して競合マイクロ中和を測定した。（Ｂ）ヒト血清を用いて、インフルエンザ Wisconsin（A/Wis/67/05）に対して競合マイクロ中和を測定した。
【図２】図２は、細胞１００万個当たりのスポット形成細胞（ＳＦＣ）数として表される、ＩＦＮγ−ＥＬＩＳＰＯＴ検定法により検出される例示的ペプチド組成物により誘導された細胞性免疫応答を示す。インフルエンザワクチン接種個体からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、選択されたペプチドの存在下で培養した。プレートを２日後に展開し、各ウェルにおけるスポット数を拡大し、計数した。
【図３】図３は、非ワクチン接種対照動物の場合と比較した、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐによるワクチン接種動物において１×１０６プラーク形成単位（ｐｆｕ）のＨ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃した後の１０日間におけるメジアンの１日発熱数を示す。動物の体温が４０℃またはそれを超えるたびごとに発熱数として計数した。１群につき４動物間におけるメジアンの発熱数を３時間ごとに計算した。対照およびワクチン接種動物は、同等の出発体温を有していた（第０日目参照）。
【図４】図４は、非ワクチン接種対照動物の場合と比較した、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐによるワクチン接種動物において１×１０６ｐｆｕのＨ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃した後の１０日間における体重減少を示す。
【図５】図５は、ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐで免疫化したフェレットからの直腸洗浄試料（上方パネル）および鼻腔洗浄試料（下方パネル）で観察されたインフルエンザウイルスに対し指向した粘膜ＩｇＡ応答（FluViral）を示す。各動物におけるワクチン接種前応答に対する増加倍率としてデータを表し、異なる試料中に存在するＩｇＡの総量について正規化した。市販のインフルエンザワクチン（FLUVIRAL）により得られた比較データも示す。
【図６】図６は、ペプチド組成物ＳＦＶ２で免疫化したフェレットからの血清で観察されたＢ型インフルエンザ（Ohio）からの組換えＨＡタンパク質に対し指向した血清ＩｇＡ応答を示す。各動物に関するワクチン接種前およびワクチン接種後血清試料からのＥＬＩＳＡにより測定された応答（光学密度として記録）を、それぞれ一対の左および右縦棒に示す。強い陽性応答は、動物＃４８５０および＃４８６０で観察され得る。
【図７】図７は、脂質付加ペプチド組成物ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａにより誘導された広範な反応性細胞（ＣＴＬ）免疫性を示す。成熟年齢（＞１２か月）のＨＬＡ（A*0201）トランスジェニックマウスに、Ａ型インフルエンザの核タンパク質における可変領域を標的とする組成物で３回ワクチン接種を行った。また、この組成物はミョウバンアジュバントを含んでいた。対照群にはアジュバントのみを与えた。脾臓細胞を、多様な亜型からの互いに異なるインフルエンザ株で感染させた：Ｈ３Ｎ２（A/HK/1/18, A/VICtoria/3/75）およびＨ１Ｎ１（A/NC/20/99, A/PR/8/34）。スポットは、ウイルス株のそれぞれに特異的なＩＦＮγ−分泌Ｔ細胞の頻度を表し、エラーバーは、各群（ｎ＝３）におけるマウス間の標準偏差を表し得る。結果は、左から右へと次の通りに示される：Ｈ３Ｎ２（A/HK/1/18）、Ｈ３Ｎ２（A/VICtoria/3/75）、Ｈ１Ｎ１（A/NC/20/99）およびＨ１Ｎ１（A/PR/8/34）。
【図８】図８は、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバント（ポリＩ：Ｃ）含有または不含有で経口投与されたペプチド組成物に対する免疫応答を示す。マウス（１群当たりｎ＝４）を４回（第０、３、１４および１７日目）経口的に免疫化した。脾臓細胞をワクチン接種後に採取し、同じペプチド組成物によりインビトロで刺激を加えた。ＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴ検定法を用いて、応答を測定した。図８に示すとおり、アジュバントを与えられた動物は、ワクチンのみを与えられた動物よりかなり大きな応答を示した。
【図９】図９は、配列番号１６、１7および１８の配列を示す。
【図１０】図１０Ａ〜Ｂは、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットで測定されたＡ型インフルエンザの次の亜型：（A/Solomon Island/03/06）Ｈ１Ｎ１または（A/Wisconsin/67/05）Ｈ３Ｎ２からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質に対し指向した（ＥＬＩＳＡにより測定される）血清ＩｇＧ応答を示す。免疫化後血清は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットについてｒＨＡ Solomon（Ａ）およびWisconsin（Ｂ）の両方でのＥＬＩＳＡにおいて顕著な免疫応答を示した。Ｂ型インフルエンザ（B/Malaysia/2506/04）からのｒＨＡに対してＩｇＧ応答は検出されなかった（データは示さず）。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１１】図１１は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化し、次いでウイルス攻撃にさらしたフェレットの鼻腔洗浄試料からのウイルス量を示す。動物に、ペプチド組成物ＳＦＶ２を接種し、２×１０５ｐｆｕのＨ１Ｎ１（A/Solomon Island/03/06）で攻撃し、鼻腔洗浄試料からのウイルス量を、ウイルス血症ピークでのプラーク検定法により測定した（第２日目）。各記号は、個々の動物で測定されたウイルス量を表す。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１２】図１２は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットにおける潜在的な汎発流行性インフルエンザ株に対する体液性免疫を示す。ワクチン接種の２週間後（ウイルス攻撃前）動物から血清を集め、試料を、ＥＬＩＳＡにより単離された推定的汎発流行性ブタ（H1N1/California/2009）からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質との反応性について試験した。市販のインフルエンザワクチン（VAXIGRIP）により得られた比較データも提供する。
【図１３】図１３は、典型的なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントＰＨＡＤ（アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.からのリン酸化ヘキサアシル二糖）の化学構造を示す。
【図１４】図１４は、別の典型例のＴＬＲ−４アゴニストアジュバントであるジ［３−デオキシ−Ｄ−マンノ−オクツロソニル］脂質Ａ（アンモニウム塩）（アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.から）の化学構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
定義
本願全体を通して、以下のパラグラフで定義している幾つかの用語を用いる。
【００１２】
本明細書で使用している「免疫応答」の語は、動物で誘導された応答をいう。免疫応答は、細胞性免疫、体液性免疫を指し得るかまたはその両方を含み得る。免疫応答はまた、免疫系の一部分に限定され得る。例えば、実施態様によっては、免疫原性組成物が高いＩＦＮγ応答を誘導し得る場合もある。実施態様によっては、免疫原性組成物が（例、鼻腔および／または直腸洗浄液で測定される）粘膜性ＩｇＡ応答を誘導し得ることもある。一部の実施態様では、免疫原性組成物は、（例、血清で測定される）全身的ＩｇＧ応答を誘導し得る。
【００１３】
本明細書で使用している「免疫原性」の語は、非宿主体（例、インフルエンザウイルス）に対して宿主動物において免疫応答を生じさせ得ることを意味する。一部の実施態様では、この免疫応答が、特異的感染性生物（例、インフルエンザウイルス）に対するワクチンにより誘導される防御免疫性の基礎を形成する。
【００１４】
本明細書で使用している「ペプチド」の語は、ペプチド結合により連結された少なくとも３個のアミノ酸の連なりをいう。一般に、ペプチドにおけるアミノ酸数に対する上限は無い。ペプチドは、一般的に天然アミノ酸のみを含む。しかしながら、非天然アミノ酸（すなわち、天然には存在しないが、ポリペプチド鎖に組み込まれ得るアミノ酸）も含まれ得る。また、本発明ペプチドにおけるアミノ酸の１つまたはそれ以上は、例えば、化学的部分、例えば炭水化物基、リン酸基、ファルネシル基、イソファルネシル基、脂肪酸基、コンジュゲーション用のリンカー、官能基化、または他の修飾手段などの付加により修飾され得る。様々な実施態様では、修飾（複数も可）により、さらに安定したペプチド（例、インビボ半減期の増大）が得られる。適切な修飾は、ペプチドの閉環、Ｄ−アミノ酸の組み込みなどを含み得る。様々な実施態様では、修飾（複数も可）により、免疫原性のさらに高いペプチドが誘導される。適切な修飾は、１個または複数の脂質（例、限定ではないが、パルミトイル、ミリストイル、ステアロイル、ラウロイル、オクタノイル、デカノイルなど）の共有結合、担体タンパク質（例、限定ではないが、ツベルクリン（ＰＰＤ）の精製タンパク質誘導体、破傷風トキソイド、コレラ毒素およびそのＢサブユニット、卵アルブミン、ウシ血清アルブミン、大豆トリプシン阻害剤、ムラミルジペプチドおよびその類似体、サイトカインまたはそのフラグメントなど）への融合などを含み得る。
【００１５】
本明細書で使用している「相同性パーセンテージ」の語は、本願で定義している最適アラインメント後の２配列間における配列同一性のパーセンテージをいう。下記要領で一致が最大になるように整列させたとき２配列におけるアミノ酸の配列が同一である場合、２つのアミノ酸配列は「同一で」あると言われる。２つのアミノ酸配列間における配列比較は、典型的には一領域または「比較領域」にわたって最適整列させた２配列の配列を比較して、配列類似性領域を同定および比較することにより行われる。比較のための配列の最適アラインメントは、Smith および Waterman, Ad. App. Math. 2:482 (1981) の局所相同性アルゴリズム、Neddleman および Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970) の相同性アラインメントアルゴリズム、Pearson および Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピューター化インプリメンテーション、または目視検査により実施され得る。
【００１６】
「配列同一性パーセンテージ」は、ある比較領域にわたって最適整列させた２配列を比較することにより決定され、その場合、比較領域におけるアミノ酸配列部分は、２配列の最適アラインメントのためのリファレンス配列（付加または欠失を含まない）と比較して付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含み得る。同一アミノ酸残基が両配列で現れている位置の数を測定して一致した位置の数を得、一致した位置の数を比較領域における位置の総数で割り、結果を１００倍して配列同一性のパーセンテージを得ることにより、パーセンテージを計算する。上記で与えたこの配列同一性の定義は、通常当業者により使用される定義である。定義それ自体は、アルゴリズムの助けを必要とするものではない。アルゴリズムは、配列同一性を計算するというよりも、配列の最適アラインメントを簡易化するのに有効であるに過ぎない。この定義から、２つの比較配列間における配列同一性についての十分に特定された唯一の値であって、最適アラインメントについて得られた値に対応する値が存在するということになる。
【００１７】
本明細書で使用している「治療有効量」の語は、処置されている対象において有意義な成果を示すのに十分な量をいう。免疫原性組成物の治療有効量は、例えば、所望の生物学的エンドポイント、組成物の性質、投与経路、処置されている対象の健康状態、サイズおよび／または年齢などの因子により変動し得る。
【００１８】
本明細書で使用している「処置する」（または「処置している」、「処置された」、「処置」など）の語は、インフルエンザ、インフルエンザの一症状または複数症状またはインフルエンザに罹患し易い状態を緩和、軽減、改変、改善、改良するかまたはそれらに影響を及ぼすことを目的として、インフルエンザに罹患しているか、インフルエンザの症状を呈するか、またはインフルエンザに罹患し易い状態である対象への免疫原性組成物の投与を指す。実施態様によっては、「処置する」の語が、対象のワクチン接種を指す場合もある。
【００１９】
実施態様の詳細な記載
本願は、インフルエンザを処置するのに有用な組成物および方法を提供する。本明細書に記載している組成物および方法は、インフルエンザに対して免疫原特性を呈するペプチド類およびペプチド組み合わせ剤の開発に基づくものである。
【００２０】
実施態様によっては、ペプチド組み合わせ剤が、インフルエンザの多くの株、例えば季節型インフルエンザ株、さらには新型のブタ起源の汎発流行性Ａ型インフルエンザウイルスに対して防御応答を誘導する。
【００２１】
一部の実施態様では、組成物を（例、筋肉注射により）非経口投与する。実施態様の中には、組成物がＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを含む。若干の実施態様では、組成物は、非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む。若干の実施態様では、組成物中に存在するＴＬＲ−４アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、小胞に物理的に随伴している。
【００２２】
現行では、インフルエンザワクチンは上述の非経口投与経路（例、筋肉注射）に限られているが、我々は、経口投与時に防御応答を誘導する組成物を同定した。従って、実施態様によっては、組成物を経口投与する場合もある。実施態様によっては、組成物がＴＬＲ−３アゴニストアジュバントを含む場合もある。一部の実施態様では、組成物はビロソームを含む。若干の実施態様では、組成物中に存在するＴＬＲ−３アゴニストアジュバントの少なくとも一部分が、ビロソームに物理的に随伴している。
【００２３】
Ｉ．ペプチド類
一態様において、本願は、単独で、または組み合わせて使用することにより、インフルエンザ処置用の免疫原性組成物を製造し得るペプチド類を提供する。これらのペプチド類の中には、免疫原性組成物中に含まれ得るものもあり、また本願はこれらのペプチド類の順列と組み合わせを含む組成物を包含するものとする。下記II項では、具体例としてのペプチド組み合わせ剤を記載する。
【００２４】
Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型１（Ｈ１）ペプチド類
実施例における表２〜６は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型１（Ｈ１）タンパク質から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表２〜５および配列リストに示されているところによると、ペプチドのうちの幾つかは一般的共通配列の変異型である。
【００２５】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号２（表２参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号２の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号２の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５または２６連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２６】
一部の実施態様において、本願は、配列番号３（表３参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号３の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号３の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２または３３の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２７】
一部の実施態様において、本願は、配列番号４（表４参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号４の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、または４の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜２）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。
【００２８】
一部の実施態様において、本願は、配列番号５（表５参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。配列番号５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸も全て包含されるものとする。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号５の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらのペプチド類のうちの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００２９】
一部の実施態様において、本願は、配列番号６（表６参照）の少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチド類を提供する。実施態様によっては、相同性は、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。
【００３０】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。幾つかの実施態様において、本願は、配列番号６の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸を含むペプチド類を提供する。すなわち、ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含み得る。ペプチドはまた、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号６の全配列を含み得る。他の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号６により構成され得る。さらに別の実施態様では、ペプチドは、配列番号６により構成され得る。
【００３１】
前記に加えて、本願はまた、配列番号１６（図９参照）の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む種類のペプチドを提供するもので、この場合ペプチドは、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む。この種類は、上記の他のＨ１ペプチドを包含する。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００３２】
実施態様によっては、前述のＨ１ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様では、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００３３】
Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）ペプチド類
実施例における表９〜１１は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）タンパク質から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表９〜１１および配列リストに示されているとおり、これらのペプチドは、配列番号１７（図９参照）の共通配列の全変異型である。
【００３４】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１７の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１７の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。
【００３５】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号９（表９参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号９の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様では、免疫原性組成物は、配列番号９の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号９のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３６】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１０（表１０参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１０の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１０の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号１０のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３７】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１１（表１１参照）の配列を含むペプチド類を提供する。配列番号１１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチド類を含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。本願はまた、配列番号１１のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供するものとする。
【００３８】
実施態様によっては、前述のＨ３ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００３９】
実施例における表７は、Ａ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）亜型３（Ｈ３）タンパク質から誘導された別のペプチドのアミノ酸配列を記載している。本願は、配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む種類のペプチドを提供するもので、この場合ペプチドは、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む。若干の実施例において、ペプチドは、配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様では、ペプチドは、配列番号７の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号７の全配列を含み得る。他の実施態様において、ペプチドは、本質的に配列番号７により構成され得る。さらに別の実施態様では、ペプチドは、配列番号７により構成され得る。若干の実施態様において、ペプチドは、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含み得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００４０】
Ｂ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）ペプチド類
実施例における表８および１２は、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素（ＨＡ）タンパク質から誘導された幾つかのペプチド類のアミノ酸配列を記載している。
【００４１】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１８（図９参照）の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドを提供し、その際ペプチドは、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むものとする。一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、３０、３５、４０または４５の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００４２】
一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号１２（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１２の全配列を含み得る。一部の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号１２により構成され得る。一部の実施態様では、ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００４３】
幾つかの実施態様において、ペプチドは、配列番号１３（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号１３の全配列を含み得る。若干の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号１３により構成され得る。若干の実施態様では、ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００４４】
幾つかの実施態様において、ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性は、高く、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第１および／または第２領域における相同性は、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、２０、３５、４０または４５の連続アミノ酸に及び得る。
【００４５】
一部の実施態様において、ペプチドは、配列番号８（表８参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、ペプチドは、配列番号８の全配列を含み得る。他の実施態様では、ペプチドは、本質的に配列番号８の配列により構成されるかまたはそのものにより構成され得る。
【００４６】
実施態様によっては、前述のＢ型ＨＡペプチドのいずれかが、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、若干の実施態様において、特定領域のいずれか１つを含むペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれ得る。
【００４７】
Ａ型インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）ペプチド類
実施例における表１３および１４は、Ａ型インフルエンザ核タンパク質（ＮＰ）から誘導された幾つかのペプチドのアミノ酸配列を記載している。表１３におけるペプチドは、配列番号１４の共通配列の変異型である。表１４におけるペプチドは、配列番号１５の共通配列の変異型である。
【００４８】
幾つかの実施態様において、本願は、配列番号１４（表１３参照）の配列を含むペプチド類を提供するが、それらのペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含んでいる。配列番号１４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１４の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、配列番号１４のアミノ酸配列により本質的に構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。
【００４９】
一部の実施態様において、本願は、配列番号１５（表１４参照）の配列を含むペプチド類を提供するが、それらのペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含んでいる。配列番号１５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１５の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１５のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。
【００５０】
実施態様によっては、前述のＮＰペプチドのいずれかが、３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含むペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００５１】
他のインフルエンザペプチド類
本願は、複数のインフルエンザタンパク質からの配列を含む他のペプチド類を提供する。すなわち、若干の実施態様において、本願は、配列番号１（表１参照）のアミノ酸配列を含むペプチド類を提供する。表１および配列リストで示されているとおり、配列番号１は共通配列である。共通配列は、Ｂ型インフルエンザＨＡタンパク質およびＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３タンパク質における配列から誘導された。配列番号１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらのペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なるペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成されるペプチド類を提供することは言うまでもない。また、実施態様によっては、ペプチドが３０未満のアミノ酸を含み得ることは言うまでもない。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含むペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００５２】
II．ペプチドの組み合わせ
一態様において、本願は、Ｉ項記載のペプチドの組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。以下の具体例としての組み合わせは非限定的なものであり、本願が、Ｉ項記載のペプチドの順列と組み合わせを全て包含することは、言うまでもない。また、他のペプチド類（既存のインフルエンザワクチンから見出される伝統的インフルエンザタンパク質抗原を含む）も本明細書記載の免疫原性組成物のいずれかに付加され得ることは、言うまでもない。実施態様によっては、免疫原性組成物中の各ペプチドが独立して免疫原性を示す場合もある。
【００５３】
実施態様によっては、少なくとも１つのペプチドが、非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含むこともある。実施態様によっては、各ペプチドが、非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含むこともある。実施態様によっては、組成物の少なくとも２つのペプチドが単一タンパク質内に存在することもある。
【００５４】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチドおよび１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５５】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５６】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５７】
一部の実施態様において、本願は、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ１ペプチド、１または複数のＡ型インフルエンザＨＡ Ｈ３ペプチドおよび１または複数のＢ型インフルエンザＨＡペプチドを含む免疫原性組成物を提供する。
【００５８】
実施態様によっては、Ｉ項からの１または複数のＡ型インフルエンザＮＰペプチドが上述の組み合わせのいずれか１つに含まれることもあり得る。
【００５９】
若干の実施態様において、本願は、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、および配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドを含む免疫原性組成物を提供し、この場合第３ペプチドは、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むものとする。一部の実施態様では、第１および第３ペプチドは、１００未満のアミノ酸を含み、第２ペプチドは、３０未満のアミノ酸を含む。
【００６０】
実施態様によっては、さらに配列番号１４または１５のアミノ酸配列を含む第４ペプチドが含まれる場合もあり、この第４ペプチドは、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むものとする。
【００６１】
具体例としての第１ペプチド（Ａ型インフルエンザＨＡ Ｈ１）
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００６２】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号２（表２参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号２の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号２の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５または２６の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６３】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号３（表３参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号３の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号３の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２または３３の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６４】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号４（表４参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号４の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号４の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３または４の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜２）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。
【００６５】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号５（表５参照）の少なくとも２０の連続アミノ酸を含み得る。配列番号５の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つの２０連続アミノ酸が含まれるものとする。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号５の少なくとも２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９の連続アミノ酸を含み得る。本願はまた、これらの第１ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む２、３、４、５、６、７または８の異なる第１ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。
【００６６】
若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６（表６参照）の少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様では、相同性は、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含み得る。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも５０、６０、７０または８０の連続アミノ酸を含み得る。すなわち、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含み得る。第１ペプチドはまた、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含み得る。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の全配列を含み得る。他の実施態様では、第１ペプチドは、本質的に配列番号６により構成され得る。さらに別の実施態様では、第１ペプチドは、配列番号６により構成され得る。
【００６７】
実施態様によっては、上述の第１ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第１ペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００６８】
具体例としての第２ペプチド（Ａ型インフルエンザＨＡ Ｈ３）
一部の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１７の配列を含み得る。配列番号１７の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。
【００６９】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号９（表９参照）の配列を含み得る。配列番号９の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号９の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号９のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７０】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１０（表１０参照）の配列を含み得る。配列番号１０の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１０の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１０のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７１】
若干の実施態様において、第２ペプチドは、配列番号１１（表１１参照）の配列を含み得る。配列番号１１の共通配列により特定された変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第２ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原性組成物を提供する。すなわち、若干の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１１の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第２ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また本願が、本質的に配列番号１１のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第２ペプチドを提供することは言うまでもない。
【００７２】
実施態様によっては、上述の第２ペプチドのいずれかが３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第２ペプチドが、さらに大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００７３】
具体例としての第３ペプチド（Ｂ型インフルエンザＨＡ）
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、３０、３５、４０または４５の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。
【００７４】
一部の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１２（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、相同性のレベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１２の全配列を含み得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号１２により構成され得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１２により構成され得る。
【００７５】
一部の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１３（表１２参照）の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。一部の実施態様において、相同性のレベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、配列番号１３の全配列を含み得る。若干の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号１３により構成され得る。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１３により構成され得る。
【００７６】
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含み得る。一部の実施態様では、相同性は、さらに高く、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様では、第１および／または第２領域における相同性は、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２５、２０、３５、４０または４５の連続アミノ酸に及び得る。
【００７７】
若干の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号８の全配列と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み得る。若干の実施態様では、相同性レベルは、少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。若干の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号８の全配列を含み得る。他の実施態様では、第３ペプチドは、本質的に配列番号８の配列により構成されるかまたはそのものにより構成され得る。
【００７８】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含み得、その一方は、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方は配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含んでいる。一部の実施態様において、相同性のレベルは、一方または両方のペプチドにおいて少なくとも８５％、９０％、９５％または９９％であり得る。
【００７９】
実施態様によっては、前述の第３ペプチドのいずれかが、１００未満のアミノ酸、例えば９０、８０、７０、６０、５０または４０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第３ペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００８０】
具体例としての第４ペプチド（Ａ型インフルエンザＮＰ）
一部の実施態様において、所望による第４ペプチドは、配列番号１４（表１３参照）の配列を含み得る。配列番号１４の共通配列により特定される変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第４ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１４の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第４ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また免疫原性組成物が、本質的に配列番号１４のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第４ペプチドを含み得ることは言うまでもない。
【００８１】
一部の実施態様において、所望による第４ペプチドは、配列番号１５（表１４参照）の配列を含み得る。配列番号１５の共通配列により特定される変異型配列のいずれか１つが含まれるものとする。本願はまた、これらの第４ペプチドの２つまたはそれ以上を含む免疫原組成物を提供する。すなわち、一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号１５の配列を含む２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６の異なる第４ペプチドを含み得る。若干の実施態様において、免疫原性組成物は、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含み得る。実施態様によっては、ｎ＝１である。実施態様によっては、ｎ＝２である。実施態様によっては、ｎ＝３である。実施態様によっては、ｎ＝４である。また免疫原性組成物が、本質的に配列番号１５のアミノ酸配列により構成されるかまたはそのものにより構成される第４ペプチドを含み得ることは言うまでもない。
【００８２】
実施態様によっては、前述の第４ペプチドのいずれかが、３０未満のアミノ酸を含むこともあり得る。しかしながら、本明細書で検討しているところによると、実施態様によっては、特定領域のいずれか１つを含む第４ペプチドはまた、大きなペプチド内に含まれることもあり得る。
【００８３】
具体例としてのペプチドの組み合わせ
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８４】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８５】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む第１ペプチド、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８６】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６を含む第１ペプチド、配列番号８を含む第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８７】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、本質的に配列番号６により構成される第１ペプチド、本質的に配列番号８により構成される第３ペプチドおよびそれぞれ本質的に配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ本質的に配列番号１４の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ本質的に配列番号１５の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８８】
一部の実施態様において、免疫原性組成物は、配列番号６により構成される第１ペプチド、配列番号８により構成される第３ペプチドおよびそれぞれ配列番号９、１０または１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み得る。一実施態様では、第２ペプチドは、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される。一実施態様では、ｎ＝４である。一実施態様では、組成物はさらに、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様において、組成物はさらに、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列により構成される２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。一実施態様では、ｍ＝４である。
【００８９】
III．ペプチド合成
本明細書で記載しているペプチド類は、当業界で公知の方法（組換え技法を含む）を用いて合成され得る。様々な実施形態において、ペプチド類は、固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ）により合成され得る。ＳＰＰＳでは、リンカー分子により酸に不安定な結合を介してＣ−末端アミノ酸を固相（典型的には架橋樹脂、例えばポリスチレンまたはポリエチレングリコール含有樹脂）に結合させる。使用する固相は、一般的に合成に使用する溶媒に不溶性であるため、比較的簡単かつ迅速に過剰の試薬および副生成物を洗い流せる。酸中では安定しているが、塩基により除去可能な保護基（例、Ｆｍｏｃ基）でＮ−末端を保護する。塩基安定性の酸分解性基により側鎖官能基を保護する。そこで、ＳＰＳＳ技術では、Ｃ−末端を固相に結合させた状態で、Ｎ−α−保護アミノ酸を伸長中のペプチド鎖に組み込ませる。実施例１は、典型的なＳＰＳＳ工程について説明している。
【００９０】
一般に、この工程は自動化され得、市販の装置を用いることにより、２０またはそれより長いアミノ酸長のペプチドを常用的に合成することができる。長いペプチド（例、４０アミノ酸より長い）を製造するとき、適切な保護基を用いることによりライゲーションされ得る一連のフラグメント中でのペプチド生成が有利であることが立証され得る。
【００９１】
本明細書で記載しているとおり、ある種のペプチド組成物は、単一ペプチド配列の多くの変異型を含み得る（例、同一配列における２またはそれ以上の位置における２またはそれより多い異なるアミノ酸を伴う）。所定のセットにおける各変異型は個々に合成され得るが、典型的には単一合成において変異型のサブセットまたは１セット全体を合成する方が有利である。様々な実施態様において、これは、スプリット−コンバイン方法を用いて達成され得る。すなわち、所定の位置に２つの異なるアミノ酸の一方を含むように変異型のセットが設計された場合、樹脂は２つの等しい部分に分離され得、各部分が２つのアミノ酸の一方とカップリングすることにより、２つの特徴的なペプチド鎖を形成し得る。一旦カップリングが完了すると、２つの部分は、後続のアミノ酸が両鎖に付加され得るように再び組み立てられ得る。別法として、選択の対象となる２つのアミノ酸が同一反応に加えられるワンポット法が使用され得る。典型的には、２つのアミノ酸は当モル量で加えられる。しかしながら、環境によっては（例えば、それぞれの反応速度論が著しく異なる場合）、非当モル量の方が好ましい場合もあり得る。次いで、ペプチド反応は、Kaiser ニンヒドリン試験を用いることにより完全性について監視され得る。
【００９２】
以下の参考文献は、若干の典型的なペプチド混合物の製造方法を記載している：Houghten, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:5131 (1985); Geysen et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998 (1984) および米国特許第5,010,175号。
【００９３】
ＩＶ．アジュバント
一部の実施態様では、免疫原組成物は、１種またはそれ以上のアジュバントを含み得る。当業界で周知のとおり、アジュバントは、免疫応答の増強剤である。アジュバントについては、当業界では熟知されている（例、"Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach", Pharmaceutical Biotechnology, 第６巻、Powell および Newman 編、Plenum Press、ニューヨークおよびロンドン、１９９５参照）。
【００９４】
アジュバントの例としては、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、スクアレン、スクアランおよびミョウバン（水酸化アルミニウム）があり、これらは当業界ではよく知られた材料であり、数社から市販されている。一部の実施態様において、アルミニウムまたはカルシウム塩類（例、水酸化またはリン酸塩類）はアジュバントとして使用され得る。ミョウバン（水酸化アルミニウム）は、多くの既存のワクチンで使用されてきた。典型的には、１用量当たり約４０〜約７００μｇのアルミニウムが含有され得る。
【００９５】
様々な実施態様において、水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンもまたアジュバントとして使用され得る。例えば、油相は、スクアレンまたはスクアランおよび界面活性剤を含み得る。様々な実施態様では、非イオン性界面活性剤、例えばソルビタンおよびマンニドのモノ−およびジ−Ｃ１２−Ｃ２４−脂肪酸エステルなどが使用され得る。油相は、好ましくは免疫原性ペプチド（複数も可）を約０.２〜約１５重量％の割合で含み得る（例、約０.２〜１％）。ＰＣＴ公開第ＷＯ９５／１７２１０号は、具体例としてのエマルジョンを報告している。
【００９６】
ＱＳ２１と称するアジュバントは、南米産樹木キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮に由来するアジュバント活性を有する免疫学的活性サポニンフラクションであり、その製造方法は、米国特許第５０５７５４０号に開示されている。キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）サポニンの半合成および合成誘導体、例えば米国特許第５９７７０８１および６０８０７２５号記載のものも有用である。
【００９７】
ＴＬＲは、ドロソフィラ・トル（ショウジョウバエ、Drosophila Toll）受容体と相同的なタンパク質の一群であり、病原体に関連した分子パターンを認識することから、身体が自己および非自己分子を区別するのを助ける。ウイルス病原体に共通した物質は、病原体関連分子パターンとしてＴＬＲにより認識される。例えば、ＴＬＲ−３は２本鎖ＲＮＡにおけるパターンを認識し、ＴＬＲ−４はリポ多糖類におけるパターンを認識し、ＴＬＲ−７／８は、ウイルス性および細菌性ＲＮＡおよびＤＮＡにおいてアデノシンを含むパターンを認識する。ＴＬＲが上記パターン認識により誘導されたとき、炎症および自然および獲得免疫応答の活性化に至る一連のシグナリング事象が起こる。様々なＴＬＲにより認識される分子パターンを含む若干の合成リガンドが、アジュバントとして開発されており、本明細書記載の免疫原性組成物中に含まれ得る。
【００９８】
例えば、ポリリボイノシン酸：ポリリボシチジン酸またはポリ（Ｉ：Ｃ）（カリフォルニア、サンディエゴの InvivoGen から入手可能）は、２本鎖ＲＮＡ（ウイルス感染に随伴した分子パターン）の合成類似体であり、ＴＬＲ−３についてのアゴニストである典型的なアジュバントである（例、Field et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 58:1004 (1967) および Levy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 62:357 (1969) 参照）。下記実施例１１は、典型的な経口ペプチド組成物でのこのアジュバントの使用に伴う利点を立証している。一部の実施態様では、ポリ（Ｉ：Ｃ）を他の薬剤と組み合わせることにより、安定性が改善され得る（例、リボヌクレアーゼの活性を介した分解の縮小による）。例えば、米国特許第3,952,097、4,024,241 および 4,349,538号は、ポリ−Ｌ−リシンとのポリ（Ｉ：Ｃ）複合体について報告している。また、ポリ（Ｉ：Ｃ）へのポリ−アルギニンの付加は、リボヌクレアーゼの活性による分解を縮小させることが示された。米国特許公開第２００９００４１８０９号は、ＴＬＲ−３アゴニストとして作用し得る１個または複数個のロックト核酸（ＬＮＡ）ヌクレオシドを伴う２本鎖核酸について報告している。当業者であれば、他の適切なＴＬＲ−３アゴニストアジュバントについても同定できるはずである。
【００９９】
弱毒化脂質Ａ誘導体（ＡＬＤ）、例えばモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａ（３Ｄ−ＭＰＬ）は、ＴＬＲ−４についてのアゴニストである典型的なアジュバントである。ＡＬＤは、分子の呈する作用が、脂質Ａの有害な作用を低減化または相違させた形となるように改変または構築された脂質Ａ様分子である。これらの有害な作用には、ニワトリ胚５０％致死量検定法（ＣＥＬＤ５０）において評価される発熱性、局所 Shwarzman 反応性および毒性がある。ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬは、米国特許第４４３６７２７および４９１２０９４号にそれぞれ記載されている。元来、ＭＰＬは、強力ではあるが高毒性の免疫系調節剤である、腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の一構成成分である、脂質Ａから誘導されたものである。３Ｄ−ＭＰＬは、３位の還元末端グルコサミンにエステル結合しているアシル残基が選択的に除去された点がＭＰＬとは異なる。ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬは、脂肪酸鎖長の変動を伴う若干の脂肪酸置換パターン、すなわち、ヘプタアシル、ヘキサアシル、ペンタアシルなどの混合物を含み得るものとする。すなわち、ＭＰＬおよび３Ｄ−ＭＰＬの様々な形態およびそれらの混合物も本開示に包含される。
【０１００】
一部の実施態様において、これらのＡＬＤは、例えば２％スクアレン／Tween（登録商標）８０エマルジョン中で、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）と組み合され得る（例、英国特許第２１２２２０４号参照）。ＭＰＬは、ＰＨＡＤ（リン酸化ヘキサアシル二糖）としてアラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc. から入手可能である。図１３は、ＰＨＡＤの化学構造を示す。下記実施例１３は、典型的非経口ペプチド組成物でのこのアジュバントの使用に伴う利点を立証している。図１４には、別の典型的なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントであるジ［３−デオキシ−Ｄ−マンノ−オクツロソニル］−脂質Ａ（アンモニウム塩）の構造が示されている（同じく、アラバマ、アラバスターのAvanti Polar Lipids, Inc.製）。当業者であれば、他の適切なＴＬＲ−４アゴニストアジュバントを同定できるはずである。例えば、他のリポ多糖類は、国際公開第９８／０１１３９号、米国特許第６００５０９９号および欧州特許第７２９４７３号に記載されている。
【０１０１】
イミキモド（１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］キノリン−４−アミン）は、同じく本明細書記載の免疫原性組成物中に有利な形で含まれ得るＴＬＲ−７／８の低分子アゴニストである。
【０１０２】
Ｖ．小胞
実施態様によっては、組成物中の１または複数ペプチドを小胞と組み合わせる場合もあり得る。当業界で周知のとおり、小胞は、一般的に両親媒性分子（例、脂肪酸、脂質、ステロイドなど）を含む１または複数の脂質二重層により取り囲まれた水性区画を有する。小胞の水性コアには、１または複数のペプチドが存在し得る。ペプチドはまた、その疎水性によって、二重層とも（例、疎水性相互作用および／または水素またはイオン結合を介して）会合され得る。いかなる小胞でも本明細書記載の免疫原性組成物で使用され得ること、また脂質二重層の両親媒性分子はイオン性および／または非イオン性であり得ることは、言うまでもない。
【０１０３】
実施態様によっては、小胞が、非イオン性両親媒性物質（例、非イオン性界面活性剤）を含むこともあり得る。適切な両親媒特性をもつ非イオン性界面活性剤であれば全て、かかる小胞の形成に使用され得る。限定ではないが、適切な界面活性剤の例には、グリセリン基剤のエステル結合界面活性剤がある。上記グリセリンエステルは、例えば各アシル部分に少なくとも１０個の炭素原子を含む、２つの高級脂肪族アシル基の１つを含み得る。上記グリセリンエステルに基づいた界面活性剤は、複数のグリセリン単位、例えば５個以下のグリセリン単位を含み得る。グリセリンモノエステル、例えばＣ１２−Ｃ２０アルカノイルまたはアルケノイル部分、例えばカプロイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、オレイルまたはステアロイルを含むものが使用され得る。具体例としての界面活性剤は、１−モノパルミトイルグリセリンである。
【０１０４】
エーテル結合界面活性剤もまた、非イオン性界面活性剤として使用され得る。例えば、グリセリンまたは炭素原子４個以下の低級脂肪族グリコールを有するグリコール、例えばエチレングリコールに基づくエーテル結合界面活性剤が適切である。上記グリコールに基づく界面活性剤は、複数のグリコール単位、例えば５個以下のグリコール単位を含み得る（例、ジグリコールセチルエーテルおよび／またはポリオキシエチレン−３−ラウリルエーテル）。グリコールまたはグリセリンモノエーテル類、例えばＣ１２−Ｃ２０アルカニルまたはアルケニル部分、例えばカプリル、ラウリル、ミリスチル、セチル、オレイルまたはステアリルを含むものが使用され得る。使用され得るエチレンオキシド縮合生成物には、ＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０６８８２号に開示されたものがある（例、ポリオキシエチレン高級脂肪族エーテルおよびアミン界面活性剤）。具体例としてのエーテル結合界面活性剤には、１−モノセチルグリセリンエーテルおよびジグリコールセチルエーテルがある。
【０１０５】
一部の実施態様において、非イオン性界面活性剤を含む小胞は、例えば小胞を負に帯電させるため、さらにイオン性両親媒性物質を含み得る。例えば、これにより、小胞の安定化および有効な分散が促進され得る。限定はされないが、酸性物質、例えば高級アルカンおよびアルケン酸（例、パルミチン酸、オレイン酸）または例えばジアルキルホスフェート類などのリン酸を含む酸性基を含む他の化合物（例、ジセチルホスフェート、またはホスファチジン酸またはホスファチジルセリン）および硫酸モノエステル類、例えば高級アルキルスルフェート（例、セチルスルフェート）は全てこの目的に使用され得る。イオン性両親媒性物質は、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の重量にして１〜３０％の量で含まれる。例えば、２〜２０重量％または５〜１５重量％である。
【０１０６】
一部の実施態様において、小胞成分は、二重層を形成し得る高分子量の適切な疎水性材料と混合され得る（例えば、ステロイド、例えばコレステロールなどのステロール）。一部の実施態様では、ステロイドの存在は、小胞の物理特性を左右する脂質二重層の形成を促進し得る。ステロイドは、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の２０〜１２０重量％の量で含まれる。例えば、２５〜９０重量％または３５〜７５重量％である。
【０１０７】
一部の実施態様において、小胞はビロソームであり得る（例、米国特許第５８７６７２１号参照）。本明細書で使用している「ビロソーム」は、非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送促進分子を含む小胞である。米国特許第５８７６７２１号の記載によると、様々な分子が輸送エンハンサーとして使用され得る。例えば、側鎖のＣ２３炭素原子がカルボン酸および／またはその誘導体をもつコレステロール誘導体は、輸送エンハンサーとして使用され得る。上記誘導体には、限定されるわけではないが、「胆汁酸類」コール酸およびケノデオキシコール酸、それらのグリシンまたはタウリンとの複合生成物、例えばグリココール酸およびタウロコール酸、デオキシコール酸およびウルソデオキシコール酸を含む誘導体、およびこれらの酸のそれぞれの塩類がある。
【０１０８】
他の輸送エンハンサーには、アシルオキシ化アミノ酸、例えばアシルカルニチンおよびその塩類がある。例えば、Ｃ６−２０アルカノイルまたはアルケノイル部分を含むアシルカルニチン、例えばパルミトイルカルニチンは、輸送エンハンサーとして使用され得る。本明細書で使用しているアシルオキシ化アミノ酸の語は、第１級、第２級および第３級アミノ酸並びにα、βおよびγアミノ酸を包含するものとする。アシルカルニチン類は、アシルオキシ化γアミノ酸の例である。
【０１０９】
免疫原性組成物に含まれるビロソームが、複数タイプの輸送エンハンサー、例えば１種または複数の異なる胆汁酸塩類および１種または複数のアシルカルニチン類を含み得ることは言うまでもない。
【０１１０】
また、ビロソームにイオン性両親媒性物質を組み込むことにより、例えばビロソームを負に帯電させ得ることは言うまでもない。例えば、これにより、ビロソームの安定化および有効な分散が促進され得る。限定はされないが、酸性物質、例えば高級アルカンおよびアルケン酸（例、パルミチン酸、オレイン酸）または例えばジアルキルホスフェート類などのリン酸を含む酸性基を含む他の化合物（例、ジセチルホスフェート、またはホスファチジン酸またはホスファチジルセリン）および硫酸モノエステル類、例えば高級アルキルスルフェート（例、セチルスルフェート）は全てこの目的に使用され得る。
【０１１１】
一部の実施態様において、ビロソーム成分は、二重層を形成し得る高分子量の適切な疎水性材料と混合され得る（例えば、ステロイド、例えばコレステロールなどのステロール）。一部の実施態様では、ステロイドの存在は、ビロソームの物理特性を左右する脂質二重層の形成を促進し得る。
【０１１２】
ビロソーム内に存在する輸送エンハンサー（複数も可）は、一般的に非イオン性界面活性剤の４０〜４００重量％の量で存在する（例、６０〜１００重量％または７０〜９０重量％）。ステロイドは、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の２０〜１２０重量％の量で含まれる（例、２５〜９０重量％または３５〜７５重量％）。イオン性両親媒性物質は、存在するとすれば、典型的には非イオン性界面活性剤の１〜３０重量％の量で含まれる（例、２〜２０重量％または５〜１５重量％）。
【０１１３】
非イオン性界面活性剤を含む小胞の製造については、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ１９９３／０１９７８１号で報告されているものなど、多くの公知技術がある。これらの公知方法のいずれであっても、適切な小胞の製造に使用され得、ビロソームはこれらの技術のいずれかを改変することにより製造され得るものとする。典型的な技術は、非イオン性界面活性剤の薄膜を、有機溶媒、例えば炭化水素または塩素化炭化水素溶媒、例えばクロロホルムからの回転式蒸発法により製造する、回転式薄膜蒸発方法である、例えば、Russell および Alexander, J.Immunol. 140:1274 (1988)参照。次いで、生成した薄膜を、輸送エンハンサーの存在下、重炭酸緩衝液中で再水和する。
【０１１４】
ビロソームの製造に適合化され得る別の小胞製造方法は、Collins et al., J. Pharm. Pharmacol. 42:53 (1990)に開示された方法である。この方法では、非イオン性界面活性剤、ステロイド（使用する場合）およびイオン性両親媒性物質（使用する場合）の混合物を融解し、水性緩衝液の存在下で激しく混合しながら水和する。輸送エンハンサーは、混合物中の他の構成成分により封入されるか（すなわち、共融解による）、またはペプチドの封入に使用される工程中同時に小胞に組み込まれ得る。
【０１１５】
別の方法では、剪断力の存在下で水和させる。上記剪断力の適用に使用され得る装置は、公知の適切な装置である（例、ＰＣＴ公開第ＷＯ８８／０６８８２号参照）。また、音波処理および超音波処理は、小胞の形成またはそれらの粒子サイズの改変に有効な手段である。
【０１１６】
１または複数ペプチドは、いかなる方法にせよ小胞と組み合され得る。例えば、回転式薄膜蒸発技術の場合、これは、輸送エンハンサーと一緒にペプチドの存在下で薄膜を水和させることにより達成され得る。他の方法では、１または複数ペプチドを、水相に存在するペプチドを急速冷凍、次いで凍結乾燥により封入する脱水−再水和方法により予め成形しておいた小胞と組み合わせることもあり得る、例えば、Kirby および Gregoriadis, Biotechnology 2:979 (1984)参照。別法として、小胞をペプチドと混合し、液体窒素中で繰り返し急速冷凍し、例えば６０℃程度の温度（すなわち、関連界面活性剤の転移温度より高温）に温める、冷凍解凍技術が使用され得る、例えば、Pick, Arch. Biochem. Biophys. 212:195 (1981)参照。ペプチド封入に加えて、脱水−再水和方法および冷凍−解凍技術によると、小胞へ追加的輸送エンハンサーを同時に組み込むこともできる。
【０１１７】
これらの方法のそれぞれにおいて、小胞形成混合物を融解状態で維持するのに十分な程度高温で、小胞成分の懸濁液を数回多孔質ポリカーボネート膜から押し出して成形し得る。この方法は、均一サイズを有する小胞が製造され得るという利点を有する。本発明により使用され得る小胞（ビロソームを含む）は、いかなる直径のものでもよい。一部の実施態様では、組成物は、約１０ｎｍ〜約１０μｍの範囲の直径を有する小胞を含み得る。一部の実施態様では、小胞は、約１００ｎｍ〜約５μｍの直径を有する。一部の実施態様では、小胞は、約５００ｎｍ〜約２μｍの直径を有する。一部の実施態様では、小胞は、約８００ｎｍ〜約１.５μｍの直径を有する。
【０１１８】
ＶＩ．投薬量および投与
本発明方法は、成人および小児を含むヒトにおけるインフルエンザの処置に有用である。しかしながら、一般に、それらは動物でも使用され得る。一部の実施態様において、本発明方法は、獣医適用、例えばイヌおよびネコ適用に使用され得る。所望ならば、本発明方法はまた、家畜、例えばヒツジ、鳥類、ウシ、ブタおよびウマの品種にも使用され得る。
【０１１９】
本明細書記載の組成物は、一般に、免疫応答を誘導するのに必要であるかまたは十分である量および時間で投与される。投薬レジメンは、一定の期間にわたる単一用量または複数用量により構成され得る。投与されるペプチド組成物の正確な量は、対象ごとに変動し得、幾つかの因子によって異なり得る。すなわち、一般に、使用される正確な用量は、担当医により決定され、対象の体重および投与経路並びに対象の年齢および症状の重症度および感染の危険性に左右されるものとする。一部の実施態様では、免疫原性組成物中のペプチドの用量は、約０.０１〜５０ｍｇの範囲であり得る。例えば、一部の実施態様では、範囲は、０.１〜５ｍｇ、例えば０.１〜２ｍｇであり得る。実施例１４は、０.２または１ｍｇペプチド用量の２回の連続筋肉注射（第０日および第２８日目）を含む具体例としての投与スキームを記載している。
【０１２０】
一般に、組成物は、任意の経路により対象に投与され得る。実施例における結果は、本明細書記載の免疫原性ペプチド組成物が、伝統的非経口経路により、または経口的に投与されたとき防御応答を誘導し得ることを立証している。すなわち、実施態様によっては、組成物は、経口的に（頬側、舌下経路および胃洗浄または他の人工栄養手段を含む）投与される場合もあり得る。上記の経口送達は、固体または液体組成物の例えば錠剤、カプセル、多重粒子、ゲル、フィルム、小卵(ovule)、エリキシル、液剤、懸濁液などの形態を用いて達成され得る。一部の実施態様において、液体組成物を用いたとき、組成物は、胃のｐＨを中和するために塩基性組成物（例、重炭酸溶液）と連係的に投与され得る。一部の実施態様において、塩基性組成物は、ペプチド組成物の前および／または後に投与され得る。一部の実施態様において、塩基性組成物は、投与前にペプチド組成物と組み合わされるか、またはペプチド組成物と同時に摂取され得る。
【０１２１】
いかなる注射形態よりも経口送達が有利であることを考えると、経口経路は特に望ましいものであると認められる。また、公知インフルエンザワクチンが全て、これまで非経口投与されてきたという事実を考えると、結果は驚くべきものであると認められる。本明細書記載の免疫原性組成物が、現行のインフルエンザワクチンで使用されている標準タンパク質抗原よりもかなり短いペプチドを含むという事実に照らし合わせると、経口送達による防御応答の誘導能力は、特に予想外のことである。事実、免疫原としての短いペプチドの使用およびタンパク質ワクチンの経口送達の両方に対して当業界では長い間偏見があった。
【０１２２】
一部の実施態様において、経口組成物は、１または複数のペプチド、ビロソームおよびアジュバントを含む。一部の実施態様において、アジュバントはＴＬＲ−３アゴニストである。一部の実施態様において、アジュバントは、ビロソームと混合され得る。実施態様によっては、アジュバントをビロソームと（例、ビロソームの製造に使用される工程中にアジュバントを１または複数のペプチドおよび／またはビロソーム成分と組み込むことにより）会合させる場合もあり得る。
【０１２３】
一部の実施態様において、組成物は、例えば注射による非経口送達用に処方され得る。上記実施態様では、投与は、例えば、静脈内、筋肉内、皮内または皮下経路であるか、または注入または無針注射技術によるものであり得る。上記非経口投与の場合、組成物は、慣用的凍結乾燥組成物で調製および維持され、投与前に医薬上許容される食塩溶液、例えば０.９％食塩溶液により再構成され得る。注射可能組成物のｐＨは、当業界で周知のとおり、医薬上許容される酸、例えばメタンスルホン酸で調節され得る。使用され得る他の許容される賦形剤および溶媒には、リンゲル液およびＵ.Ｓ.Ｐがある。さらに、滅菌した固定油類も、溶媒または懸濁媒質として常用されている。この目的の場合、合成モノ−またはジグリセリドを含め、刺激の強くない固定油であれば使用され得る。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸は、注射可能物質の製造に使用される。注射可能組成物は、例えば、細菌保持フィルターに通してろ過するか、または使用前に滅菌水または他の滅菌注射可能媒質に溶解または分散され得る滅菌固体組成物形態で殺菌剤を組み込むことにより滅菌され得る。
【０１２４】
一部の実施態様において、非経口組成物は、１または複数のペプチド、非イオン性界面活性剤を含む小胞およびアジュバントを含む。一部の実施態様において、アジュバントはＴＬＲ−４アゴニストである。実施態様によっては、アジュバントを小胞と混合する場合もあり得る。実施態様によっては、アジュバントを小胞と（例、小胞の製造に使用される工程中にアジュバントを１または複数のペプチドおよび／または小胞成分と組み込むことにより）会合させる場合もあり得る。
【０１２５】
また組成物は、鼻腔経路または吸入により投与され得、好都合には、適切な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、ヒドロフルオロアルカン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用し、または使用せず、与圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーから乾燥粉末形態またはエーロゾル噴霧形態で送達される。与圧式エーロゾルの場合、用量単位は、バルブを取り付けて計量された量を送達することにより決定され得る。与圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーは、例えば溶媒としてエタノールと噴射剤の混合物を用いた、抗体の溶液または懸濁液を含み得、さらに滑沢剤、例えばソルビタントリオレエートを含み得る。吸入器または吹き入れ器で使用されるカプセルおよびカートリッジ（例えばゼラチンでできている）は、ペプチド組成物および適切な粉末基剤、例えば乳糖または澱粉の粉末ミックスを含むように製剤化され得る。
【０１２６】
直腸投与用組成物は、好ましくは、ペプチド（複数も可）を、周囲温度では固体であるが、体温では液体であるため、直腸円蓋部で溶解し、抗体を放出する適切な非刺激性賦形剤または担体、例えばカカオバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤ロウと混合することにより製造され得る坐薬である。また、当業界で周知のとおり、停留浣腸および直腸カテーテルも使用され得る。また、増粘性担体、例えばヒドロキシプロピルセルロースは、直腸内における組成物の保持を促すため、直腸投与に適切な本発明担体である。一般的に、組成物に加えられる担体の量は、組成物の保持を最大にするように選択される。特に、体積は、直腸円蓋部における投与された組成物の保持を危うくするほど大きくするべきではない。
【０１２７】
ＶII．具体例としての組成物
一部の実施態様において、本開示は、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントおよび非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む小胞を含む免疫原組成物を提供する。実施態様によっては、これらの組成物を経口投与する場合もあり得る。若干の実施態様では、ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントはポリ（Ｉ：Ｃ）を含む。一部の実施態様において、輸送エンハンサーは、胆汁酸、その誘導体またはこれらのいずれかの塩（例、デオキシコール酸ナトリウム）である。若干の実施態様において、非イオン性界面活性剤は、グリセリンエステル（例、１−モノパルミトイルグリセリン）である。実施態様によっては、小胞がさらにイオン性両親媒性物質（例、ジセチルホスフェート）を含む場合もある。実施態様によっては、小胞がさらにステロイド（例、コレステロール）を含む場合もある。一部の実施態様において、小胞は、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む。実施態様によっては、組成物がさらにミョウバンを含むこともある。
【０１２８】
一部の実施態様において、本開示は、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントおよび非イオン性界面活性剤を含む小胞を含む免疫原組成物を提供する。実施態様によっては、これらの組成物を非経口投与（例、筋肉注射により）する場合もあり得る。若干の実施態様において、ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントは、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む。若干の実施態様において、非イオン性界面活性剤はグリセリンエステル（例、１−モノパルミトイルグリセリン）である。実施態様によっては、小胞がさらにイオン性両親媒性物質（例、ジセチルホスフェート）を含む場合もある。実施態様によっては、小胞がさらにステロイド（例、コレステロール）を含む場合もある。一部の実施態様において、小胞は、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェートおよびコレステロールを含む。実施態様によっては、組成物がさらにミョウバンを含むこともある。
【０１２９】
一部の実施態様において、前述の免疫原性組成物は、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド、および配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む。
【０１３０】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む。一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む。
【０１３１】
一部の実施態様では、第２ペプチドは、配列番号１１のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、組成物は、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む。実施態様によっては、ｎ＝４である。
【０１３２】
一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む。一部の実施態様において、第３ペプチドは、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む。一部の実施態様において、組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方は、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む。若干の実施態様では、組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
一部の実施態様において、組成物は、それぞれが配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む。実施態様によっては、ｎ＝４である。
【０１３４】
一部の実施態様において、第１ペプチドは、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む。組成物は、それぞれが配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝４）の異なる第２ペプチドを含む。組成物は、２つの異なる第３ペプチドを含んでおり、その一方は配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。また、組成物は、それぞれが配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｍ（ｍ＝４）の異なる第４ペプチドを含む。
【０１３５】
上述の組成物は、季節型インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置に使用される。
【０１３６】
実施態様の中には、上述の組成物を、ブタ起源のＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスにより誘発されるインフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置に使用する場合もある。
【実施例】
【０１３７】
実施例
以下の実施例では、本明細書記載のある種の組成物および方法の具体的な製造および実践方法について記載している。これらの実施例は説明を目的としているのに過ぎず、本明細書記載の組成物および方法の範囲に対し制限を設ける意図など無いことは言うまでもない。
【実施例１】
【０１３８】
実施例１：ペプチド合成
本明細書記載のペプチドは、全て固相ペプチド合成法（ＳＰＰＳ）により合成された。概して、リンカー分子により酸に不安定な結合を介してＣ−末端アミノ酸を架橋ポリスチレン（またはＰＥＧに基づく）樹脂に結合させた。この樹脂は、合成に使用する溶媒に不溶性であるため、比較的簡単かつ迅速に過剰の試薬および副生成物を洗い流せる。酸中では安定しているが、塩基により除去可能なＦｍｏｃ基でＮ−末端を保護した。塩基安定性の酸分解性基により側鎖官能基を保護した。次いで、鎖の一端を固相に結合させた状態で、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ保護アミノ酸を伸長中のペプチド鎖に組み込ませることにより合成を実施した。
【０１３９】
次の方法は、本明細書記載のペプチドの製造に使用した典型的ＳＰＰＳ法である。各カップリングを開始するため、ＮｏｖａＰＥＧ樹脂結合アミノ酸／ペプチド上のＦｍｏｃ基を、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジンで除去した。次いで、それをすすぎ、そのα−カルボキシル基を２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートで活性化しておいた保護アミノ酸を加えた。活性化アミノ酸および樹脂結合アミノ酸を塩基の存在下で反応させることにより、新たなペプチド結合を形成させた。ペプチドを段階的方法で合成しながら、可溶性試薬、例えばカップリング試薬、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、塩基、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および脱ブロック化試薬、ピペリジンを全て、ろ過によりペプチド−固体支持体マトリックスから除去し、各カップリング段階の最後にすすいだ。目的ペプチドが樹脂上で会合するまで、この工程を反復した。少なくとも８５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む開裂溶液により樹脂から開裂し、ペプチドから保護基を脱保護した後、粗ペプチドをエーテルからの沈殿により集め、次いで遠心分離にかけた。次いで、ペプチドを精製し、ＨＰＬＣおよび質量分析法により特性検定した。
【０１４０】
本明細書で記載しているとおり、ある種のペプチド組成物は、単一ペプチド配列の多くの変異型を含み得る（例、同一配列における２またはそれ以上の位置における２またはそれより多い異なるアミノ酸を伴う）。所定のセットにおける各変異型は個々に合成され得るが、典型的には単一合成において変異型のサブセットまたは１セット全部を合成する方が有利である。例えば、これは、スプリット−コンバイン方法を用いて達成され得る。すなわち、所定の位置に２つの異なるアミノ酸の一方を含むように変異型のセットが設計された場合、樹脂は２つの等しい部分に分離され得、各部分が２つのアミノ酸の一方とカップリングすることにより、２つの特徴的なペプチド鎖を形成し得る。一旦カップリングが完了すると、２つの部分は、後続のアミノ酸が両鎖に付加され得るように再び組み立てられ得る。別法として、選択の対象となる２つのアミノ酸が同一反応に加えられるワンポット法が使用され得る。典型的には、２つのアミノ酸は当モル量で加えられる。しかしながら、環境によっては（例えば、それぞれの反応速度論が著しく異なる場合）、非当モル量の方が好ましい場合もあり得る。次いで、ペプチド反応は、Kaiser ニンヒドリン試験を用いることにより完全性について監視され得る。
【実施例２】
【０１４１】
実施例２：競合マイクロ中和検定法
この実施例では、インフルエンザ中和抗体に対する様々なペプチド組成物の結合能力を評価した。異なるペプチド組成物（図１および下表１〜９参照）を、イスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）で８０μｇ／ｍｌに希釈し、５０μｌを９６ウェル平底マイクロタイタープレート（Nunc）における異なるウェルに加えた。各ペプチド組成物は、適用可能な場合変異型の完全な補体を含んでいた（例、表１に示された８個のＩＮＦ−ＨＡ−３−Ｖ３ペプチド変異型、表４に示された４個のＩＮＦ−Ｈ１−４−Ｖ４ペプチド変異型など）。市販の抗インフルエンザ血清およびヒト血清を、ＩＭＤＭ中で１／４０に希釈し、５０μｌを各ウェルに添加した後、プレートを３７℃で１時間インキュベーションした。ＩＭＤＭ中１×１０５ｐｆｕを含むインフルエンザウイルス株 Wisconsin（Ａ／Ｗｉｓ／６７／０５）または New Caledonia（Ａ／ＮＣ／２０／９９）５０μｌを、各ウェルに添加し、プレートを３７℃でさらに１時間インキュベーションした。これに続いて、２％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を補った５×１０４のメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞を各ウェルに添加した。どのプレートも４細胞および４ウイルス対照ウェルを含んでいた。プレートを３７℃で１８〜２２時間インキュベーションした。細胞を１ウェル当たり７０％エタノール５０μｌにより１０分間固定し、室温で風乾した。プレートを０.０５％Tween-20 含有ＰＢＳで５回洗浄し、ウェルを１０％ＦＣＳで遮断した。４℃で９０分後、ブロック緩衝液中で１／５００に希釈しておいたＡ型インフルエンザヌクレオキャプシド抗原（Chemicon）に指向したモノクローナル抗体５０μｌを、各ウェルに添加した。４℃で１時間さらにインキュベーションした後、プレートを５回洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧペルオキシダーゼ結合アフィニティー精製抗体（１／１００００）１００μｌを３０分間４℃で各ウェルに添加した。プレートを５回洗浄し、１００μｌのオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ：Sigma、セントルイス、ミズーリ）により展開し、２０分後１ＮのＨＣｌにより酵素反応を止めた。ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Bio-Rad）により波長４９０ｎｍでＯＤを測定することにより、反応を定量した。表１、２、３、４、５、６、７、８および９のペプチド（複数も可）を含む組成物に関する結果を図１に示す。
【０１４２】
図１に示したとおり、光学密度（ＯＤ）測定によりＥＬＩＳＡで定量したところによると、市販または免疫血清を添加することにより、インビトロでの細胞のインフルエンザウイルス感染は阻害され得る。すなわち、約０.６のＯＤ値（ウイルス対照参照）は、免疫血清の存在下では約０.２まで低下する（ウイルス＋血清対照参照）。様々なペプチド組成物と血清をインキュベーションすることにより、ペプチドが血清中に存在する中和抗体とある程度結合するため、それらの中和活性は打ち消され得る（例、約０.３またはそれより高いＯＤ値）。
【表１】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
【表６】
【表７】
【表８】
【表９】
【実施例３】
【０１４３】
実施例３：ＥＬＩＳＰＯＴ検定法
この実施例では、ＥＬＩＳＰＯＴ検定法でヒトＰＢＭＣの活性化（ＩＦＮγ産生量により測定される）を測定することにより、実施例１のペプチド組成物の免疫原性を試験した。マルチスクリーン−ＨＴＳプレート（Millipore、ベッドフォード、マサチューセッツ）を、４℃で一晩、ＰＢＳ中の抗マウスＩＦＮγ抗体（ｍＡｂ ＡＮ１８、Mabtech、マリーモント、オハイオ）１０μｇ／ｍｌで被覆した。次いで、プレートをＰＢＳで洗浄し、室温で１時間、１０％ＦＣＳおよび１００Ｕ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシンを含むＩＭＤＭで遮断した。培地を除去し、ペプチド組成物（４０μｇ／ｍｌ、図２および表１〜９参照）と混合したインフルエンザワクチン接種済ヒト対象からの２×１０５の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（２００μｌ／ウェル）を、２日間各ウェルに加えた。インキュベーション後、細胞を取り出し、ＰＢＳ＋０.０５％Tween 20 で洗浄し、室温で２時間１μｇ／ｍｌのビオチニル化抗マウスＩＦＮγ抗体（ｍＡｂ Ｒ４−６Ａ２−Biotin、Mabtech）とインキュベーションした。洗浄後、ＰＢＳ＋０.５％ＦＣＳ中の１／１０００ストレプトアビジン−ＡＬＰ−ＰＱ（Mabtech）１００μｌ／ウェルを加え、室温で１時間インキュベーションした。プレートを上記と同様に洗浄し、室温で２０分間１ウェル当たり１００μｌのＢＣＩＰ／ＮＢＴアルカリ性ホスファターゼ（Moss Inc）により展開した。水道水でプレートをすすぐことにより反応を止めた。各ウェルにおけるスポットの数を拡大および計数した。表１、２、３、４、５、６、７、８および９のペプチド（複数も可）を含む組成物に関する結果を図２に示す。
【０１４４】
図２に示されているとおり、ある種のペプチドがこの検定法において強い応答を発したことから、これらの組成物は免疫原性であることが確認された。
【実施例４】
【０１４５】
実施例４：他のペプチド類
この実施例における表１０〜１４は、本明細書記載の組成物および方法で使用され得る他の具体例としてのペプチド類を記載している。
【表１０】
【表１１】
【表１２】
【表１３】
【表１４】
【実施例５】
【０１４６】
実施例５：ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐ
ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐは、表１５に示したペプチドの混合物を含む。
【表１５】
【実施例６】
【０１４７】
実施例６：ペプチド組成物ＩＮＦ−６３Ｐ
ペプチド組成物ＩＮＦ−６３Ｐは、表１６に示したペプチドの混合物を含む。
【表１６】
【実施例７】
【０１４８】
実施例７：ペプチド組成物ＳＦＶ２
ペプチド組成物ＳＦＶ２は、表１７に示したペプチドの混合物を含む。
【表１７】
【実施例８】
【０１４９】
実施例８：ビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物
この実施例では、ペプチド組成物の経口送達用に実施例９および１１で使用したビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物の製法を記載する。脂質類（モノパルミトイル−グリセリン、コレステロールおよびジセチルホスフェート）を、クロロホルムに溶かし、薄膜状に乾燥し、次いで実施例５のＩＮＦ−６１Ｐペプチドおよびデオキシコール酸ナトリウム（「胆汁酸塩」）により再水和した。動的光散乱法を用いることによりサイズについて、またニンヒドリン試験を用いることにより封入効率について、生成したビロソームを評価した。次いで、負荷ビロソームの容量を調節することにより、所望量のペプチドを含む組成物を製造した。下記に記載しているとおり、これらの負荷ビロソームは、経口投与したときでさえ、フェレットおよびマウスに免疫原性ペプチド組成物を送達することができた。
【実施例９】
【０１５０】
実施例９：ビロソームＩＮＦ−６１Ｐ組成物によるフェレットの経口インフルエンザ免疫化
この実施例では、フェレットにおけるある種の免疫原性ペプチド組成物のインビボ試験について記載する。インフルエンザウイルス感染のフェレットモデルは、インフルエンザワクチン候補評価用の最も優れた標準哺乳類モデルである。事実、フェレットは、Ａ型およびＢ型インフルエンザの全ての主要な亜型の臨床単離株により感染し、人体で観察されるのと類似した病気の臨床経過（体温上昇および症例によっては体重減少を含む）を呈し得る。
【０１５１】
若干の研究者らは、筋肉（ＩＭ）注射により接種される現時点で認可されているインフルエンザワクチンが、血球凝集反応阻害活性を併せもつ中和性ＩｇＧ抗体を誘導することを立証した。これらの既存のワクチンによる細胞性免疫の誘導、および防御におけるその役割は不明である。下記で検討しているとおり、我々は、経口投与された免疫原性ペプチド組成物がＩｇＡ抗体を全身的（血清）および粘膜（直腸および鼻腔洗浄試料）において誘導することを示した。インフルエンザ感染は粘膜表面を介して起こるため、ＩｇＡ応答（粘膜免疫応答の顕著な特徴）は、全身的ＩｇＧ応答よりも有効であり得る。実施例１３で示すところによると、免疫原性ペプチド組成物を標準的非経口経路（例、ＩＭ注射による）により投与したとき、全身的ＩｇＧ応答が得られた。
【０１５２】
ワクチン接種および攻撃実験を行うため、血球凝集反応阻害検定法により血清陰性として予めスクリーニングされた雄のフェレットを選択した。ペプチドが０.５ｍｌの量で含まれるように経口送達用組成物を処方した。全フェレットに対し免疫化の３日前に採血し、血清、血漿およびＰＢＭＣを集めた。ＩＮＦ−６１Ｐ組成物を与えたフェレットを、第０、３、１４および１７日目に絶食後胃洗浄により経口的に免疫化した。市販ワクチン対照については、第０および１７日目に、FLUVIRAL ワクチンを四頭筋へ筋肉注射した。
【０１５３】
第２７日目、血清を得るためフェレットを採血し、唾液および直腸洗浄液を集めた。次いで、ＰＢＳ（０.５ｍｌ／鼻孔）で２×１０６ｐｆｕ／ｍｌに希釈したインフルエンザウイルスにより鼻腔内経路で全フェレットを攻撃した。ウイルス攻撃後１０日間、鼻腔洗浄液を集め、全動物を秤量し、感染の臨床徴候について毎日監視した（体温については、各動物の体内の移植体により電子工学的に測定した）。動物を殺す時点で、血清、血漿、ＰＢＭＣおよび（場合によっては）総血球数（ＣＢＣ）を得るため採血し、脾臓を集め、単核細胞について処理した。
【０１５４】
図３に示すとおり、免疫原性ペプチド組成物ＩＮＦ−６１Ｐ（実施例５参照）を動物に接種し、Ｈ３Ｎ２（A/Wisconsin/2005）ウイルスで攻撃したとき、動物が発熱数の減少を呈したことから、組成物ＩＮＦ−６１Ｐの防御効果が立証された。さらに、ＩＮＦ−６１Ｐワクチン接種動物（図４参照）は、ウイルス攻撃後の日々に対照マウスと比べて、それほど目立った体重減少を呈しなかった。
【０１５５】
図５に描いているとおり、組成物ＩＮＦ−６１Ｐは、直腸洗浄液（上方パネル）および鼻腔洗浄液（下方パネル）試料で見られる粘膜ＩｇＡ応答を誘導した。ＩＮＦ−６１Ｐを接種された動物の大多数（３／４）は、直腸または鼻腔洗浄液試料においてワクチン接種前応答に対しＩｇＡ力価の少なくとも２倍の増加を呈した。予想通り、標準ＭＩ注射により接種された市販のワクチンは、全身的（血清）ＩｇＧ応答を誘導した（データは示さず）。しかしながら、図５で示すとおり、それはＩｇＡ応答を一切誘導しなかった。
【０１５６】
ＳＦＶ２ペプチド（実施例７参照）を含む免疫原性ペプチド組成物でこの実験を再現したときも、同様の結果（データは示さず）が観察された。注目すべきことに、Ｂ型インフルエンザからの組換えＨＡタンパク質に対し指向した血清ＩｇＡは、組成物ＳＦＶ２を接種された動物でも検出された（図６参照）。
【実施例１０】
【０１５７】
実施例１０：皮下投与されたＩＮＦ−０９Ｌ−Ａ組成物の免疫応答試験
この実施例では、マウスにおいて表１３のペプチド組成物（ＩＮＦ−ＮＰ１−Ｖ１）の修正版（ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａ）を皮下投与することにより誘導された免疫応答について記載する。ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａペプチド組成物は、各ペプチドのＮ−末端にＫＳＳリンカーを含む点が表１３に示されたＩＮＦ−ＮＰ１−Ｖ１組成物とは異なっていた。Ｎ−末端リシン部分は、各ペプチドの二重脂質化(lipidate)に用いられた。
【０１５８】
成熟年齢に達した（＞１２か月）ＨＬＡ（Ａ＊０２０１）トランスジェニックマウスに、ＩＮＦ−０９Ｌ−Ａペプチド組成物によるワクチン接種を３回行った。１６の変異型は全て投与された組成物に含まれていた。組成物はまた、ミョウバンアジュバントを含んでいた。対照群には、アジュバントのみを与えた。多くの亜型からのインフルエンザ分岐株：H3N2 (A/HK/1/18, A/VICtoria/3/75)およびH1N1 (A/NC/20/99, A/PR/8/34)により脾臓細胞を感染させた。ＥＬＩＳＰＯＴ検定法（方法については実施例３参照）においてＩＦＮγ分泌性Ｔ細胞の頻度を定量することにより、Ｔ細胞応答を測定した。スポットは、ウイルス株のそれぞれに特異的なＩＦＮγ分泌性Ｔ細胞の頻度を表し、エラーバーは、各群（ｎ＝３）でのマウス間における標準偏差を表す。結果を、左から右に向って次の通り示す：H3N2（A/HK/1/18）、H3N2（A/VICtoria/3/75）、H1N1（A/NC/20/99）および H1N1（A/PR/8/34）。図７に示すとおり、ペプチド組成物は、広範な細胞性（ＣＴＬ）免疫反応を誘導した。
【実施例１１】
【０１５９】
実施例１１：経口投与されたペプチド組成物により誘導される免疫応答に対するアジュバントの効果
この実施例では、アジュバントの使用および不使用時におけるペプチド組成物をマウスに経口投与することにより誘導される免疫応答を比較する。
【０１６０】
ＴＬＲ−３に基づくアジュバント（ポリＩ：Ｃ）と組み合わせて、または組み合わせずにビロソームに封入したペプチド組成物を、マウス（ｎ＝４）に与えた。マウスを４回経口的に免疫化した（第０、３、１４および１７日目）。ワクチン接種後、脾臓細胞を採取し、ペプチド組成物中に存在する４種の個々のペプチドによりインビトロで別々に刺激を加えた。ＩＦＮγＥＬＩＳＰＯＴ（方法については実施例３参照）を用いて、応答を測定した。各ペプチド攻撃に関する結果を図８で比較する。図８に示すとおり、アジュバントと組み合わせたペプチド組成物を投与された動物は、ペプチド組成物を単独で与えられた動物よりも大きな応答を示した。
【実施例１２】
【０１６１】
実施例１２：小胞ＳＦＶ２組成物
この実施例では、ペプチド組成物の筋肉（ＩＭ）注射用として実施例１３で使用された組成物の製造について記載する。小胞は、次の脂質により構成された：１−モノパルミトイルグリセリン（非イオン性界面活性剤）、コレステロール（ステロイド）およびジセチルホスフェート（イオン性両親媒性物質）。具体的には、５：４：１モル比の脂質類（２７０ｍｇの１−モノパルミトイルグリセリン（ＭＰＧ）、２５５ｍｇのコレステロール（ＣＨＯ）および９０ｍｇのジセチルホスフェート（ＤＣＰ））を、確実に粉末が平底２５ｍｌガラス製ビーカーの側面に付着しないようにしながら、ガラス製ビーカーに入れた。ビーカーをクランプで締め、アルミホイルで覆い、時々ビーカー中で渦状に撹拌しながら、脂質を１３５℃で１０分間加熱した油浴中で溶かした。組成物によっては、合成ＴＬＲ−４アゴニスト、ＰＨＡＤ（Avanti Polar Lipids, Inc. からのリン酸化ヘキサアシル二糖、図１３に示す）を、他の脂質と共溶解する場合もあれば、ＰＨＡＤをペプチド組成物ＳＦＶ２（実施例７に記載）と共に加える場合もあった。１０ｍｌのペプチド組成物ＳＦＶ２（４００μｇ／ｍｌ）およびＰＨＡＤ（１００μｇ／ｍｌ）の生成した混合物を、加熱水浴中３０℃で５分間、重炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ８.５）中でプレインキュベーションした。ペプチド溶液を８０００ｒｐｍでホモジナイゼーションし、次いで、溶解した脂質溶液に移しかえ、その時点からホモジナイゼーションを３０℃で１０分間続行した（別法として、加熱した脂質溶液を抗原溶液に移しかえ、それに続いてホモジナイゼーションすることも可能であったと思われる）。最後に、緩衝液中の４００ｍＭのショ糖溶液１０ｍｌを、小胞／ペプチド溶液に加え、３０秒間ボルテックスした。小胞（ペプチド併用または併用せず）を等分してバイアルに充填し（０.５ｍｌ／バイアル）、凍結乾燥した。凍結乾燥した小胞（ペプチド併用または併用せず）を、投与前０.５ｍｌの食塩水中で再水和し、ミョウバン（水酸化アルミニウム）に吸収させた。
【実施例１３】
【０１６２】
実施例１３：小胞ＳＦＶ２組成物によるフェレットの非経口的免疫化
この実施例では、フェレットにおける実施例１２の小胞ＳＦＶ２組成物のインビボ試験について記載する。ワクチン接種および攻撃実験を行うため、血球凝集反応阻害検定法により血清陰性として予めスクリーニングされた雄のフェレットを選択した。ペプチドが０.５ｍｌの量で含まれるように筋肉注射用組成物を実施例１２記載の要領で処方した。全フェレットに対し免疫化の３日前に採血を実施し、血清、血漿およびＰＢＭＣを集めた。第０および２８日目に、ＳＦＶ２ペプチド組成物を併用または併用していない小胞で筋肉注射（ＩＭ）によりフェレットを免疫化した。市販ワクチン対照については、第０および２８日目に、VAXIGRIP 市販ワクチンを四頭筋へ筋肉注射した。この市販ワクチンは、２００８年〜２００９年の時期におけるＡ型およびＢ型株について３価の不活化インフルエンザワクチンである（具体的には、A/Brisbane/59/2007 H1N1; A/Brisbane/10/2007 H3N2 および B/Florida/4/2006 株）。この試験についての実験群を表１８に要約する。
【表１８】
【０１６３】
第２８日目、フェレットから採血し、血清試料を集めた。次いで、ＰＢＳ（０.５ｍｌ／鼻孔）で２×１０５ｐｆｕ／ｍｌに希釈したインフルエンザウイルスにより鼻腔内経路で全フェレットを攻撃した。ウイルス攻撃後１０日間、鼻腔洗浄液を集め、全動物を秤量し、感染の臨床徴候について毎日監視した（体温については、各動物の体内の移植体により電子工学的に測定した）。動物を殺す時点で、血清、血漿、ＰＢＭＣおよび（場合によっては）総血球数（ＣＢＣ）を得るため採血し、脾臓を集め、単核細胞について処理した。
【０１６４】
図１０Ａ〜Ｂに示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、体液性応答を誘導する。免疫後血清は、ペプチド組成物ＳＦＶ２の筋肉内投与により免疫化したフェレットについて rHA Solomon (A) および Wisconsin (B)の両方でのＥＬＩＳＡにおいて顕著な免疫応答を示した。VAXIGRIP 処置動物は、ＥＬＩＳＡにおいて小さな免疫応答を示しただけであり、空小胞（すなわち、ＳＦＶ２ペプチドを併用していない）で処置した動物は、反応性を全く示さなかった。動物群のいずれにおいても、ｒＨＡ Malaysia に対するＩｇＧ応答は全く検出されなかった（データは示さず）。
【０１６５】
図１１に示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、ウイルス攻撃に対し防御作用を示す。動物に実施例１２の免疫原性ペプチド組成物ＳＦＶ２を接種し、２×１０５ｐｆｕのＨ１Ｎ１（A/Solomon Island/03/06）で攻撃を加え、鼻腔洗浄試料からのウイルス量を、ウイルス血症のピーク時（第２日目）でのプラーク検定法により測定した。各記号は、個々の動物で測定されたウイルス量を表す。ＳＦＶ２ワクチンを接種された動物は、空小胞で処置された対照動物と比べ、鼻腔洗浄試料においてウイルス量の著しい低下（ｐ＜０.０５）を呈した。同じく標準ＩＭ注射により接種される市販の季節型インフルエンザワクチンは、鼻腔洗浄試料においてウイルス量の低下を呈しなかった。
【０１６６】
図１２に示すとおり、組成物ＳＦＶ２のＩＭは、潜在的な汎発流行性インフルエンザ株に対して体液性免疫を誘導する。２回目の接種（攻撃前）の２週間後に血清を動物から集め、ＥＬＩＳＡにより推定的汎発流行性ブタ（H1N1/California/2009）単離株からの組換え血球凝集素（ｒＨＡ）タンパク質との反応性について試料を試験した。ＳＦＶ２を接種された動物は、空小胞で処置された対照動物と比べて、ｒＨＡ H1N1/California（汎発流行性ブタＨ１Ｎ１）に対して高い血清ＩｇＧ反応性を呈した。図１２におけるデータは、市販の季節型インフルエンザワクチンを接種された動物からの血清が、この新規インフルエンザ株に対して反応し得なかったことを示す。
【実施例１４】
【０１６７】
実施例１４：投与スキーム
この実施例では、ヒトにおける実施例１２の小胞ＳＦＶ２組成物を用いた典型的投与スキームについて記載する。以下の処置群を特色とする部分盲検無作為化プラセボ対照試験を実施する：
・処置群１：抗原用量１、小胞ＳＦＶ２組成物（１ｍｇペプチド）に相当する２回の筋肉注射、第０日および２８日目に投与（ｎ＝５０）。
・処置群２：用量２、ＮＡＭ１と組み合わせたＳＦＶ２（０.２ｍｇペプチド）に相当する２回の筋肉注射、第０日および２８日目に投与（ｎ＝５０）。
・処置群３：リン酸緩衝食塩水の２回の筋肉注射、プラセボ群、第０日および２８日目に投与（ｎ＝２５）。
【０１６８】
対象を２：２：１の割合で無作為化する。
【０１６９】
短期認容性を投与後７日目に評価する。自発的に報告された有害事象を投与後２８日間に収集する。深刻な有害事象および医学的に重要な事象を、１６８日（±１４日）の全追跡期間にわたって収集する。各注射の前後および１６８日の追跡期間の最後に生物学的安全性を評価する。
【０１７０】
第０日、２８日（±３日）、５６日（±７日）目および１６８日（±１４日）の追跡期間の最後に集めた血清試料において、免疫原性を評価する。免疫学的リードアウトは、血清ＨＩ抗体（血球凝集阻害検定法）、ｒＨＡ-特異的血清ＩｇＧ（ＥＬＩＳＡ）およびマイクロ中和検定法により測定される中和抗体である。細胞性（ＣＴＬ）免疫性評価に関しては、Ｔ細胞応答をＥＬＩＳＰＯＴおよび細胞内サイトカイン染色法により評価する。
【０１７１】
配列リスト
３７ＣＦＲ１.５２（ｅ）（５）に従って、テキストファイル形態（「Sequence Listing.txt」という題で２００９年６月１８日に作成、１４キロバイト）で本願と共に提出された配列リストについては、出典明示により援用する。
【０１７２】
他の実施態様
本発明の他の実施態様については、当業者であれば、本明細書に開示した本発明の詳細または実施例を考慮に入れることにより、容易に想到できるはずである。詳細な説明および実施例は、単なる具体例としてみなすべきであり、本発明の真の範囲は請求の範囲によってのみ示されているものとする。本明細書で引用した参考文献の内容については、出典明示により援用する。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、および
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
第１ペプチドが、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
第１ペプチドが、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
第１ペプチドが、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
第１ペプチドが、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
第１ペプチドが、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
組成物が、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
組成物が、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
組成物が、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜２）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
組成物が、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１７】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
第１ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
第２ペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
第２ペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２３】
第２ペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２４】
組成物が、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２５】
組成物が、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２６】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２７】
ｎ＝４である、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２８】
第２ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２９】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３０】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３１】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３２】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３３】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３４】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３５】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方が、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３６】
第３ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３７】
組成物が、さらに配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３８】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項３９】
ｎ＝４である、請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
第４ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項４１】
組成物が、さらに配列番号１５のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４２】
組成物が、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項４１記載の組成物。
【請求項４３】
ｎ＝４である、請求項４２記載の組成物。
【請求項４４】
第４ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項４１記載の組成物。
【請求項４５】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４６】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４７】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４８】
第１ペプチドが配列番号６を含み、第３ペプチドが配列番号８を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４９】
ｎ＝４である、請求項４５〜４８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５０】
第１ペプチドが本質的に配列番号６により構成され、第３ペプチドが本質的に配列番号８により構成され、組成物が、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項５１】
組成物が、さらにそれぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項５０記載の組成物。
【請求項５２】
ｎおよび／またはｍ＝２である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５３】
ｎおよび／またはｍ＝３である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５４】
ｎおよび／またはｍ＝４である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５５】
各ペプチドが免疫原性である、請求項１〜５４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５６】
少なくとも１つのペプチドが、さらに非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含む、請求項１〜５５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５７】
各ペプチドが、さらに非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含む、請求項１〜５６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５８】
少なくとも２つのペプチドが、単一タンパク質内に存在する、請求項１〜５７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５９】
第１および第３ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含み、第２ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１〜５８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６０】
組成物が、さらにアジュバントを含む、請求項１〜５９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６１】
アジュバントがミョウバンである、請求項１〜６０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６２】
アジュバントが、南米産樹木キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮に由来するアジュバント活性を有する免疫学的活性サポニンフラクションである、請求項１〜６１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６３】
アジュバントがＴＬＲ−３アゴニストである、請求項１〜６２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６４】
アジュバントが、ポリリボイノシン酸：ポリリボシチジン酸である、請求項６３記載の組成物。
【請求項６５】
アジュバントがＴＬＲ−４アゴニストである、請求項１〜６４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６６】
アジュバントが、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む、請求項６５記載の組成物。
【請求項６７】
アジュバントがＴＬＲ−７／８アゴニストである、請求項１〜６６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６８】
アジュバントが、１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］キノリン−４−アミンである、請求項６７記載の組成物。
【請求項６９】
少なくとも１つのペプチドが小胞と会合している、請求項１〜６８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７０】
小胞が非イオン性界面活性剤を含む、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
小胞がグリセリンエステルを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７２】
小胞がグリコールまたはグリセリンエーテルを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７３】
小胞が、粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７４】
小胞が、側鎖のＣ２３炭素原子がカルボン酸をもつコレステロール誘導体を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７５】
小胞が、コール酸、ケノデオキシコール酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７６】
小胞が、グリコール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７７】
小胞が、アシルオキシ化アミノ酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７８】
小胞が、Ｃ６−２０アルカノイルまたはアルケノイル部分を含むアシルカルニチンまたはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７９】
小胞が、イオン性界面活性剤を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８０】
小胞が、アルカンまたはアルケン酸を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８１】
小胞がホスフェートを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８２】
小胞が、ジセチルホスフェート、ホスファチジン酸またはホスファチジルセリンを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８３】
小胞が、硫酸モノエステルを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８４】
小胞がセチルスルフェートを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８５】
小胞がステロイドを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８６】
小胞がコレステロールを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８７】
小胞が、約１０ｎｍ〜約１０μｍの範囲の直径を有する、請求項７３記載の組成物。
【請求項８８】
小胞が、約８００ｎｍ〜約１.５μｍの範囲の直径を有する、請求項７３記載の組成物。
【請求項８９】
少なくとも１つのペプチドが、小胞の水性コア内に封入されている、請求項７３記載の組成物。
【請求項９０】
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項９１】
ペプチドが、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９２】
ペプチドが、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９３】
ペプチドが、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９４】
ペプチドが、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９５】
組成物が、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９６】
組成物が、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９７】
組成物が、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜２）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９８】
組成物が、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９９】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１００】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０１】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０２】
ペプチドが、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０３】
ペプチドが、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０４】
ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０５】
ペプチドが、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０６】
ペプチドが配列番号６を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０７】
ペプチドが、本質的に配列番号６により構成される、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０８】
ペプチドが、配列番号６により構成される、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１１０】
配列番号１７のアミノ酸配列を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１１１】
ペプチドが、配列番号９のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１２】
ペプチドが、配列番号１０のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１３】
ペプチドが、配列番号１１のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１４】
組成物が、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１５】
組成物が、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１６】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１７】
組成物が、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎの異なるペプチドを含む、請求項１１６記載の組成物。
【請求項１１８】
ｎ＝４である、請求項１１４〜１１７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１２０】
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１２１】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２２】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２３】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２４】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２５】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２６】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２７】
ペプチドが配列番号８を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２８】
ペプチドが、本質的に配列番号８により構成される、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２９】
ペプチドが配列番号８により構成される、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３０】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、さらに配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む異なるペプチドを含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３１】
ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３２】
配列番号１４のアミノ酸配列を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１３３】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１３２記載の組成物。
【請求項１３４】
ｎ＝４である、請求項１３３記載の組成物。
【請求項１３５】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１３２記載の組成物。
【請求項１３６】
配列番号１５のアミノ酸配列を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１３７】
組成物が、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１３６記載の組成物。
【請求項１３８】
ｎ＝４である、請求項１３７記載の組成物。
【請求項１３９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１３６記載の組成物。
【請求項１４０】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１４１】
組成物が、それぞれ配列番号１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１４０記載の組成物。
【請求項１４２】
ｎ＝４である、請求項１４１記載の組成物。
【請求項１４３】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１４０記載の組成物。
【請求項１４４】
配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１４５】
領域が、配列番号７の領域と少なくとも９０％の相同性を有する、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４６】
領域が、配列番号７の領域と少なくとも９５％の相同性を有する、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４７】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４８】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４９】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５０】
ペプチドが配列番号７を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５１】
ペプチドが、本質的に配列番号７により構成される、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５２】
ペプチドが配列番号７により構成される、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５３】
ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５４】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１〜１５３のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に投与することを含む方法。
【請求項１５５】
組成物を経口投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５６】
組成物を非経口投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５７】
組成物を筋肉注射により投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５８】
組成物を鼻腔内経路または吸入により投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５９】
組成物を直腸投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６０】
個体が、季節型インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６１】
個体が、ブタ起源のＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスにより誘発されるインフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６２】
ＴＬＲ−３アゴニストアジュバント；
非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む小胞；
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド；
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド；
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド；および
配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項１６３】
ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントがポリ（Ｉ：Ｃ）を含む、請求項１６２記載の組成物。
【請求項１６４】
輸送エンハンサーが、胆汁酸、その誘導体またはこれらのいずれかの塩である、請求項１６２〜１６３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６５】
輸送エンハンサーがデオキシコール酸ナトリウムである、請求項１６４記載の組成物。
【請求項１６６】
非イオン性界面活性剤がグリセリンエステルである、請求項１６２〜１６５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６７】
非イオン性界面活性剤が１−モノパルミトイルグリセリンである、請求項１６６記載の組成物。
【請求項１６８】
小胞が、さらにイオン性両親媒性物質を含む、請求項１６２〜１６７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６９】
イオン性両親媒性物質がジセチルホスフェートである、請求項１６８記載の組成物。
【請求項１７０】
小胞がさらにステロイドを含む、請求項１６２〜１６９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７１】
ステロイドがコレステロールである、請求項１７０記載の組成物。
【請求項１７２】
小胞が、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む、請求項１６２記載の組成物。
【請求項１７３】
組成物がさらにミョウバンを含む、請求項１６２〜１７２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７４】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１６２〜１７３のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に経口投与することを含む方法。
【請求項１７５】
ＴＬＲ−４アゴニストアジュバント；
非イオン性界面活性剤を含む小胞；
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド；
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド；
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド；および
配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項１７６】
ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントが、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む、請求項１７５記載の組成物。
【請求項１７７】
非イオン性界面活性剤がグリセリンエステルである、請求項１７５〜１７６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７８】
非イオン性界面活性剤が１−モノパルミトイルグリセリンである、請求項１７７記載の組成物。
【請求項１７９】
小胞がさらにイオン性両親媒性物質を含む、請求項１７５〜１７８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８０】
イオン性両親媒性物質がジセチルホスフェートである、請求項１７９記載の組成物。
【請求項１８１】
小胞がさらにステロイドを含む、請求項１７５〜１８０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８２】
ステロイドがコレステロールである、請求項１８１記載の組成物。
【請求項１８３】
小胞が、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む、請求項１７５記載の組成物。
【請求項１８４】
組成物がさらにミョウバンを含む、請求項１７５〜１８３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８５】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に非経口投与することを含む方法。
【請求項１８６】
組成物を筋肉注射により投与する、請求項１８５記載の方法。
【請求項１８７】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８８】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８９】
第２ペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９０】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９１】
ｎ＝４である、請求項１９０記載の組成物。
【請求項１９２】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９３】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９４】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方が、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９５】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９６】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９７】
ｎ＝４である、請求項１９６記載の組成物。
【請求項１９８】
第１ペプチドが配列番号６のアミノ酸１〜８８を含み、
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み、
組成物が２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、そして
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｍ（ｍ＝４）の異なる第４ペプチドを含む、
請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１】
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド、
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド、および
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項２】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
第１ペプチドが、配列番号１６の２０〜５０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
第１ペプチドが、配列番号１６の５０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
第１ペプチドが、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
第１ペプチドが、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
第１ペプチドが、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
第１ペプチドが、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
組成物が、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
組成物が、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
組成物が、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜２）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
組成物が、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なる第１ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１７】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
第１ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
第２ペプチドが、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
第２ペプチドが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２３】
第２ペプチドが、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２４】
組成物が、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２５】
組成物が、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２６】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２７】
ｎ＝４である、請求項２４〜２６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２８】
第２ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項２９】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３０】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３１】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３２】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３３】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３４】
第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３５】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方が、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３６】
第３ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３７】
組成物が、さらに配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３８】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項３９】
ｎ＝４である、請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
第４ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項３７記載の組成物。
【請求項４１】
組成物が、さらに配列番号１５のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４２】
組成物が、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項４１記載の組成物。
【請求項４３】
ｎ＝４である、請求項４２記載の組成物。
【請求項４４】
第４ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項４１記載の組成物。
【請求項４５】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４６】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４７】
第１ペプチドが、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含み、第３ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４８】
第１ペプチドが配列番号６を含み、第３ペプチドが配列番号８を含み、組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４９】
ｎ＝４である、請求項４５〜４８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５０】
第１ペプチドが本質的に配列番号６により構成され、第３ペプチドが本質的に配列番号８により構成され、組成物が、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎ（ただし、ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項５１】
組成物が、さらにそれぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む２ｍ（ただし、ｍ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項５０記載の組成物。
【請求項５２】
ｎおよび／またはｍ＝２である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５３】
ｎおよび／またはｍ＝３である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５４】
ｎおよび／またはｍ＝４である、請求項５１記載の組成物。
【請求項５５】
各ペプチドが免疫原性である、請求項１〜５４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５６】
少なくとも１つのペプチドが、さらに非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含む、請求項１〜５５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５７】
各ペプチドが、さらに非インフルエンザタンパク質からの２０またはそれより多い連続アミノ酸を伴う領域を含む、請求項１〜５６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５８】
少なくとも２つのペプチドが、単一タンパク質内に存在する、請求項１〜５７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５９】
第１および第３ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含み、第２ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１〜５８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６０】
組成物が、さらにアジュバントを含む、請求項１〜５９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６１】
アジュバントがミョウバンである、請求項１〜６０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６２】
アジュバントが、南米産樹木キラヤ・サポナリア・モリナ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮に由来するアジュバント活性を有する免疫学的活性サポニンフラクションである、請求項１〜６１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６３】
アジュバントがＴＬＲ−３アゴニストである、請求項１〜６２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６４】
アジュバントが、ポリリボイノシン酸：ポリリボシチジン酸である、請求項６３記載の組成物。
【請求項６５】
アジュバントがＴＬＲ−４アゴニストである、請求項１〜６４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６６】
アジュバントが、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む、請求項６５記載の組成物。
【請求項６７】
アジュバントがＴＬＲ−７／８アゴニストである、請求項１〜６６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６８】
アジュバントが、１−イソブチル−１Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］キノリン−４−アミンである、請求項６７記載の組成物。
【請求項６９】
少なくとも１つのペプチドが小胞と会合している、請求項１〜６８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７０】
小胞が非イオン性界面活性剤を含む、請求項６９記載の組成物。
【請求項７１】
小胞がグリセリンエステルを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７２】
小胞がグリコールまたはグリセリンエーテルを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７３】
小胞が、粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む、請求項７０記載の組成物。
【請求項７４】
小胞が、側鎖のＣ２３炭素原子がカルボン酸をもつコレステロール誘導体を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７５】
小胞が、コール酸、ケノデオキシコール酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７６】
小胞が、グリコール酸、タウロコール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７７】
小胞が、アシルオキシ化アミノ酸またはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７８】
小胞が、Ｃ６−２０アルカノイルまたはアルケノイル部分を含むアシルカルニチンまたはその塩を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項７９】
小胞が、イオン性界面活性剤を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８０】
小胞が、アルカンまたはアルケン酸を含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８１】
小胞がホスフェートを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８２】
小胞が、ジセチルホスフェート、ホスファチジン酸またはホスファチジルセリンを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８３】
小胞が、硫酸モノエステルを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８４】
小胞がセチルスルフェートを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８５】
小胞がステロイドを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８６】
小胞がコレステロールを含む、請求項７３記載の組成物。
【請求項８７】
小胞が、約１０ｎｍ〜約１０μｍの範囲の直径を有する、請求項７３記載の組成物。
【請求項８８】
小胞が、約８００ｎｍ〜約１.５μｍの範囲の直径を有する、請求項７３記載の組成物。
【請求項８９】
少なくとも１つのペプチドが、小胞の水性コア内に封入されている、請求項７３記載の組成物。
【請求項９０】
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項９１】
ペプチドが、配列番号２の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９２】
ペプチドが、配列番号３の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９３】
ペプチドが、配列番号４の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９４】
ペプチドが、配列番号５の少なくとも２０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９５】
組成物が、それぞれ配列番号２の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９６】
組成物が、それぞれ配列番号３の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９７】
組成物が、それぞれ配列番号４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜２）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９８】
組成物が、それぞれ配列番号５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜３）の異なるペプチドを含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項９９】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１００】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０１】
ペプチドが、配列番号６の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０２】
ペプチドが、配列番号６と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０３】
ペプチドが、配列番号６と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０４】
ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８１を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０５】
ペプチドが、配列番号６のアミノ酸８２〜８８を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０６】
ペプチドが配列番号６を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０７】
ペプチドが、本質的に配列番号６により構成される、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０８】
ペプチドが、配列番号６により構成される、請求項９０記載の組成物。
【請求項１０９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項９０記載の組成物。
【請求項１１０】
配列番号１７のアミノ酸配列を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１１１】
ペプチドが、配列番号９のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１２】
ペプチドが、配列番号１０のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１３】
ペプチドが、配列番号１１のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１４】
組成物が、それぞれ配列番号９の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１５】
組成物が、それぞれ配列番号１０の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１６】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１１７】
組成物が、それぞれ本質的に配列番号１１の異なるアミノ酸配列により構成される２ｎの異なるペプチドを含む、請求項１１６記載の組成物。
【請求項１１８】
ｎ＝４である、請求項１１４〜１１７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１１０記載の組成物。
【請求項１２０】
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１２１】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２２】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも４０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２３】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２４】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２５】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２６】
ペプチドが、配列番号８と少なくとも９５％の相同性を有する領域を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２７】
ペプチドが配列番号８を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２８】
ペプチドが、本質的に配列番号８により構成される、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１２９】
ペプチドが配列番号８により構成される、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３０】
ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、組成物が、さらに配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む異なるペプチドを含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３１】
ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１２０記載の組成物。
【請求項１３２】
配列番号１４のアミノ酸配列を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１３３】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１３２記載の組成物。
【請求項１３４】
ｎ＝４である、請求項１３３記載の組成物。
【請求項１３５】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１３２記載の組成物。
【請求項１３６】
配列番号１５のアミノ酸配列を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１３７】
組成物が、それぞれ配列番号１５の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１３６記載の組成物。
【請求項１３８】
ｎ＝４である、請求項１３７記載の組成物。
【請求項１３９】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１３６記載の組成物。
【請求項１４０】
配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１４１】
組成物が、それぞれ配列番号１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なるペプチドを含む、請求項１４０記載の組成物。
【請求項１４２】
ｎ＝４である、請求項１４１記載の組成物。
【請求項１４３】
ペプチドが、３０未満のアミノ酸を含む、請求項１４０記載の組成物。
【請求項１４４】
配列番号７の少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含むペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含むペプチドを含む免疫原性組成物。
【請求項１４５】
領域が、配列番号７の領域と少なくとも９０％の相同性を有する、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４６】
領域が、配列番号７の領域と少なくとも９５％の相同性を有する、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４７】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４８】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも６０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１４９】
ペプチドが、配列番号７の少なくとも８０の連続アミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５０】
ペプチドが配列番号７を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５１】
ペプチドが、本質的に配列番号７により構成される、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５２】
ペプチドが配列番号７により構成される、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５３】
ペプチドが、１００未満のアミノ酸を含む、請求項１４４記載の組成物。
【請求項１５４】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１〜１５３のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に投与することを含む方法。
【請求項１５５】
組成物を経口投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５６】
組成物を非経口投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５７】
組成物を筋肉注射により投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５８】
組成物を鼻腔内経路または吸入により投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１５９】
組成物を直腸投与する、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６０】
個体が、季節型インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６１】
個体が、ブタ起源のＡ型インフルエンザ（Ｈ１Ｎ１）ウイルスにより誘発されるインフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している、請求項１５４記載の方法。
【請求項１６２】
ＴＬＲ−３アゴニストアジュバント；
非イオン性界面活性剤および粘膜を通る脂質様分子の輸送を促す輸送エンハンサーを含む小胞；
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド；
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド；
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド；および
配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項１６３】
ＴＬＲ−３アゴニストアジュバントがポリ（Ｉ：Ｃ）を含む、請求項１６２記載の組成物。
【請求項１６４】
輸送エンハンサーが、胆汁酸、その誘導体またはこれらのいずれかの塩である、請求項１６２〜１６３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６５】
輸送エンハンサーがデオキシコール酸ナトリウムである、請求項１６４記載の組成物。
【請求項１６６】
非イオン性界面活性剤がグリセリンエステルである、請求項１６２〜１６５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６７】
非イオン性界面活性剤が１−モノパルミトイルグリセリンである、請求項１６６記載の組成物。
【請求項１６８】
小胞が、さらにイオン性両親媒性物質を含む、請求項１６２〜１６７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１６９】
イオン性両親媒性物質がジセチルホスフェートである、請求項１６８記載の組成物。
【請求項１７０】
小胞がさらにステロイドを含む、請求項１６２〜１６９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７１】
ステロイドがコレステロールである、請求項１７０記載の組成物。
【請求項１７２】
小胞が、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む、請求項１６２記載の組成物。
【請求項１７３】
組成物がさらにミョウバンを含む、請求項１６２〜１７２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７４】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１６２〜１７３のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に経口投与することを含む方法。
【請求項１７５】
ＴＬＲ−４アゴニストアジュバント；
非イオン性界面活性剤を含む小胞；
配列番号１６の２０〜１００の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第１ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第１ペプチド；
配列番号１７のアミノ酸配列を含む第２ペプチド；
配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む第３ペプチドであって、Ｂ型インフルエンザ血球凝集素タンパク質からの１００未満の連続アミノ酸を含む第３ペプチド；および
配列番号１４のアミノ酸配列を含む第４ペプチドであって、Ａ型インフルエンザ核タンパク質からの２０未満の連続アミノ酸を含む第４ペプチド
を含む免疫原性組成物。
【請求項１７６】
ＴＬＲ−４アゴニストアジュバントが、モノホスホリル脂質Ａまたは３−脱アシルモノホスホリル脂質Ａを含む、請求項１７５記載の組成物。
【請求項１７７】
非イオン性界面活性剤がグリセリンエステルである、請求項１７５〜１７６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１７８】
非イオン性界面活性剤が１−モノパルミトイルグリセリンである、請求項１７７記載の組成物。
【請求項１７９】
小胞がさらにイオン性両親媒性物質を含む、請求項１７５〜１７８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８０】
イオン性両親媒性物質がジセチルホスフェートである、請求項１７９記載の組成物。
【請求項１８１】
小胞がさらにステロイドを含む、請求項１７５〜１８０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８２】
ステロイドがコレステロールである、請求項１８１記載の組成物。
【請求項１８３】
小胞が、１−モノパルミトイルグリセリン、ジセチルホスフェート、コレステロールおよびデオキシコール酸ナトリウムを含む、請求項１７５記載の組成物。
【請求項１８４】
組成物がさらにミョウバンを含む、請求項１７５〜１８３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８５】
インフルエンザに罹患しているか、またはその危険に瀕している個体の処置方法であって、請求項１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物の治療有効量を個体に非経口投与することを含む方法。
【請求項１８６】
組成物を筋肉注射により投与する、請求項１８５記載の方法。
【請求項１８７】
第１ペプチドが、配列番号６の少なくとも４０の連続アミノ酸を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８８】
第１ペプチドが、配列番号６のアミノ酸１〜８８を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１８９】
第２ペプチドが配列番号１１のアミノ酸配列を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９０】
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９１】
ｎ＝４である、請求項１９０記載の組成物。
【請求項１９２】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位または６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも９０％の相同性を有する領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９３】
第３ペプチドが、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第１領域および６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する第２領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９４】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１８の２〜４９位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含み、他方が、配列番号１８の６８〜１２１位における少なくとも２０の連続アミノ酸と少なくとも８０％の相同性を有する領域を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９５】
組成物が、２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９６】
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第４ペプチドを含む、請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１９７】
ｎ＝４である、請求項１９６記載の組成物。
【請求項１９８】
第１ペプチドが配列番号６のアミノ酸１〜８８を含み、
組成物が、それぞれ配列番号１１の異なるアミノ酸配列を含む、２ｎ（ｎ＝１〜４）の異なる第２ペプチドを含み、
組成物が２つの異なる第３ペプチドを含み、その一方が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、他方が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、そして
組成物が、それぞれ配列番号１４の異なるアミノ酸配列を含む、２ｍ（ｍ＝４）の異なる第４ペプチドを含む、
請求項１６２〜１７３または１７５〜１８４のいずれか１項記載の組成物。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２０１１−５２５１９０（Ｐ２０１１−５２５１９０Ａ）
【公表日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１４８２９（Ｐ２０１１−５１４８２９）
【出願日】平成２１年６月１９日（２００９．６．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４７９１１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５５４８９
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５０４３０３４６９）バリエーション バイオテクノロジーズ インコーポレイティド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月１９日（２００９．６．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４７９１１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５５４８９
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５０４３０３４６９）バリエーション バイオテクノロジーズ インコーポレイティド (1)
【Ｆターム（参考）】
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