グリコペギレ−ション法およびその方法により生成されたタンパク質／ペプチド
【課題】 貧血症、腎臓透析患者を治療するに有効なペプチドをグリコペギレーション法（グリコＰＥＧ化）により提供することである。
【解決手段】 一つもしくはそれ以上のグリコシル基をペプチドに付加もしくは除去すること、および／または修飾基をペプチドに付加する方法により、ペプチド分子を改造する。
【解決手段】 一つもしくはそれ以上のグリコシル基をペプチドに付加もしくは除去すること、および／または修飾基をペプチドに付加する方法により、ペプチド分子を改造する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチドが式：
【化１】
式中、ＡＡはペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり；
Ｘ１−Ｘ２は該ＡＡに共有結合したサッカリドであり、ここで
Ｘ１は第１グリコシル残基であり；そして
Ｘ２はＸ１に共有結合した第２グリコシル残基であり、ここでＸ１およびＸ２は単糖およびオリゴ糖残基から選択され、
（ａ）Ｘ２またはその糖サブユニットを該ペプチドから除去し、これにより短縮化グリカンを形成する、
を有する、ポリ（エチレングリコ−ル）からなるペプチドの無細胞の生体外改造方法。
【請求項２】
前記短縮化グリカンがＳｉａ残基を除去することにより形成される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ペプチドが式：
【化２】
式中、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ１７は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され；そして、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘは、整数０、１および２から独立して選択される、
を有する請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴ糖残基がＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−Ｓｉａ及びＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌから選ばれる員である請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも一つの員がａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘが１もしくは２から選ばれる請求項３記載の方法。
【請求項６】
前記工程（ａ）の除去することがａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘが０である短縮化グリカンを生成する、請求項３記載の方法。
【請求項７】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ７は（マンノ−ス）ｚおよび（マンノ−ス）ｚ−（Ｘ8）から独立して選択される員であり、
ここで、Ｘ8は単糖およびオリゴ糖から選択されるグリコシル部分であり；そしてｚは１および２０の間の整数であり、ここでｚが３以上である時、各（マンノ−ス）zは直鎖および分岐構造から独立して選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
Ｘ4がＧｌｃＮＡｃおよびキシロ−ズからなる基から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項９】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ７が（マンノ−ス）Ｕであり、ここでｕは１と２０の間の整数から選択され、そしてｕが３以上である時、各（マンノ−ス）ｕは直鎖および分岐構造から独立して選択される、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
前記ペプチドが式：
【化３】
式中、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数である、
を有する、請求項３記載の方法。
【請求項１１】
前記ペプチドが式：
【化４】
式中、Ｘ９およびＸ１０は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され、そしてｍ、ｎおよびｆは０および１から独立して選択される整数である、
を有する、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記ペプチドが式：
【化５】
式中、Ｘ１６は
【化６】
ここでｓおよびｉは０および１から独立して選択される整数である、
から選択される員である、
を有する、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記ペプチドが式：
【化７】
式中、Ｘ１３、Ｘ１４およびＸ１５は、独立して選択されるグリコシル残基であり；そして
ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐは整数０および１から独立して選択される、
を有する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
少なくともｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐの一つが１である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
Ｘ14およびＸ15がＧｌｃＮＡｃおよびＳｉａから独立して選択される員であり、そしてｉおよびｋは整数０および１から独立して選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
ｉおよびｋの少なくとも１つは１で、そしてもしｋが１であればｇ，ｈおよびｊは０である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
さらに、（ｂ）短縮化グリカンを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移するのに適する条件下で接触させ、これによりポリ（エチレングリコ−ル）からなる前記ペプチドを改造する、ことからなる請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記グリコシル供与体がこれに共有結合した修飾基からなる請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
（ｃ）Ｘ１を除去し、これによりＡＡを露出することからなる請求項１記載の方法。
【請求項２０】
さらに、ＡＡを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、前記少なくとも１つのグリコシル供与体をＡＡへ転移するのに適する条件下で接触させ、これによりポリ（エチレングリコ−ル）からなる前記ペプチドを改造することからなる、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのグリコシル供与体は、それに共有結合した修飾基からなる請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記修飾基がポリ（エチレングリコ−ル）である請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリ（エチレングリコ−ル）は本質的に均一分散である分子量分布を有する請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
さらに（ｅ）工程（ｂ）の前に、転移後修飾の間にサッカリドへ付加する基ｇあ除去されることからなる、請求項１７記載の方法。
【請求項２５】
前記除去される基が燐酸塩、硫酸塩、炭酸塩およびそれらのエステルから選択される員である請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
ペプチドが式：
【化８】
式中、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨおよび架橋剤から選択される員である、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
ペプチドが式：
【化９】
式中、Ｘ１１およびＸ１２は、独立して選択されるグリコシル部分であり；そしてｒおよびｘは０および１から独立して選択される整数である、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ11およびＸ12は（マンノ−ス）qであり、ここでqは１および２０の間の整数から選択され、そしてqが３以上である時は、（マンノ−ス）qは直鎖および分岐構造から選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
医薬品的に受容可能な希釈剤および請求項１記載の改造されたペプチドからなる医薬品的複合体。
【請求項３０】
ペプチドが式：
【化１０】
式中、ＡＡはペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり；
Ｘ１は、単糖およびオリゴ糖残基から選択される、ＡＡに共有結合したグリコシル残基であり；そして
ｕは０および１から選択される整数である、
を有し、さらにペプチドを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移させるのに適する条件下で接触させ、これにより該ペプチドを改造することからなる、請求項１記載の方法。
【請求項３１】
前記少なくとも１つのグリコシル供与体が、それに共有結合した修飾基からなる請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記修飾基はポリ（エチレングリコ−ル）である請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
前記ポリ（エチレングリコ−ル）が本質的に均一分散である分子量分布を有する請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
医薬品的に受容可能な希釈剤および請求項３０記載の改造されたペプチドからなる医薬品的複合体。
【請求項１】
ペプチドが式：
【化１】
式中、ＡＡはペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり；
Ｘ１−Ｘ２は該ＡＡに共有結合したサッカリドであり、ここで
Ｘ１は第１グリコシル残基であり；そして
Ｘ２はＸ１に共有結合した第２グリコシル残基であり、ここでＸ１およびＸ２は単糖およびオリゴ糖残基から選択され、
（ａ）Ｘ２またはその糖サブユニットを該ペプチドから除去し、これにより短縮化グリカンを形成する、
を有する、ポリ（エチレングリコ−ル）からなるペプチドの無細胞の生体外改造方法。
【請求項２】
前記短縮化グリカンがＳｉａ残基を除去することにより形成される請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ペプチドが式：
【化２】
式中、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７およびＸ１７は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され；そして、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘは、整数０、１および２から独立して選択される、
を有する請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴ糖残基がＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−Ｓｉａ及びＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌから選ばれる員である請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも一つの員がａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘが１もしくは２から選ばれる請求項３記載の方法。
【請求項６】
前記工程（ａ）の除去することがａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘが０である短縮化グリカンを生成する、請求項３記載の方法。
【請求項７】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ７は（マンノ−ス）ｚおよび（マンノ−ス）ｚ−（Ｘ8）から独立して選択される員であり、
ここで、Ｘ8は単糖およびオリゴ糖から選択されるグリコシル部分であり；そしてｚは１および２０の間の整数であり、ここでｚが３以上である時、各（マンノ−ス）zは直鎖および分岐構造から独立して選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
Ｘ4がＧｌｃＮＡｃおよびキシロ−ズからなる基から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項９】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ７が（マンノ−ス）Ｕであり、ここでｕは１と２０の間の整数から選択され、そしてｕが３以上である時、各（マンノ−ス）ｕは直鎖および分岐構造から独立して選択される、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
前記ペプチドが式：
【化３】
式中、ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数である、
を有する、請求項３記載の方法。
【請求項１１】
前記ペプチドが式：
【化４】
式中、Ｘ９およびＸ１０は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され、そしてｍ、ｎおよびｆは０および１から独立して選択される整数である、
を有する、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記ペプチドが式：
【化５】
式中、Ｘ１６は
【化６】
ここでｓおよびｉは０および１から独立して選択される整数である、
から選択される員である、
を有する、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前記ペプチドが式：
【化７】
式中、Ｘ１３、Ｘ１４およびＸ１５は、独立して選択されるグリコシル残基であり；そして
ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐは整数０および１から独立して選択される、
を有する、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
少なくともｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐの一つが１である、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
Ｘ14およびＸ15がＧｌｃＮＡｃおよびＳｉａから独立して選択される員であり、そしてｉおよびｋは整数０および１から独立して選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
ｉおよびｋの少なくとも１つは１で、そしてもしｋが１であればｇ，ｈおよびｊは０である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
さらに、（ｂ）短縮化グリカンを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移するのに適する条件下で接触させ、これによりポリ（エチレングリコ−ル）からなる前記ペプチドを改造する、ことからなる請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記グリコシル供与体がこれに共有結合した修飾基からなる請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
（ｃ）Ｘ１を除去し、これによりＡＡを露出することからなる請求項１記載の方法。
【請求項２０】
さらに、ＡＡを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、前記少なくとも１つのグリコシル供与体をＡＡへ転移するのに適する条件下で接触させ、これによりポリ（エチレングリコ−ル）からなる前記ペプチドを改造することからなる、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１つのグリコシル供与体は、それに共有結合した修飾基からなる請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
前記修飾基がポリ（エチレングリコ−ル）である請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記ポリ（エチレングリコ−ル）は本質的に均一分散である分子量分布を有する請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
さらに（ｅ）工程（ｂ）の前に、転移後修飾の間にサッカリドへ付加する基ｇあ除去されることからなる、請求項１７記載の方法。
【請求項２５】
前記除去される基が燐酸塩、硫酸塩、炭酸塩およびそれらのエステルから選択される員である請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
ペプチドが式：
【化８】
式中、ＺはＯ、Ｓ、ＮＨおよび架橋剤から選択される員である、請求項１記載の方法。
【請求項２７】
ペプチドが式：
【化９】
式中、Ｘ１１およびＸ１２は、独立して選択されるグリコシル部分であり；そしてｒおよびｘは０および１から独立して選択される整数である、請求項１記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ11およびＸ12は（マンノ−ス）qであり、ここでqは１および２０の間の整数から選択され、そしてqが３以上である時は、（マンノ−ス）qは直鎖および分岐構造から選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
医薬品的に受容可能な希釈剤および請求項１記載の改造されたペプチドからなる医薬品的複合体。
【請求項３０】
ペプチドが式：
【化１０】
式中、ＡＡはペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり；
Ｘ１は、単糖およびオリゴ糖残基から選択される、ＡＡに共有結合したグリコシル残基であり；そして
ｕは０および１から選択される整数である、
を有し、さらにペプチドを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラ−ゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移させるのに適する条件下で接触させ、これにより該ペプチドを改造することからなる、請求項１記載の方法。
【請求項３１】
前記少なくとも１つのグリコシル供与体が、それに共有結合した修飾基からなる請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記修飾基はポリ（エチレングリコ−ル）である請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
前記ポリ（エチレングリコ−ル）が本質的に均一分散である分子量分布を有する請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
医薬品的に受容可能な希釈剤および請求項３０記載の改造されたペプチドからなる医薬品的複合体。
【公表番号】特表２００７−５２５９４１（Ｐ２００７−５２５９４１Ａ）
【公表日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１００２７（Ｐ２００６−５１００２７）
【出願日】平成１６年４月９日（２００４．４．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１４９４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０９９２３１
【国際公開日】平成１６年１１月１８日（２００４．１１．１８）
【出願人】（５０００６２２５４）ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド (19)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年４月９日（２００４．４．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１１４９４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０９９２３１
【国際公開日】平成１６年１１月１８日（２００４．１１．１８）
【出願人】（５０００６２２５４）ネオス テクノロジーズ インコーポレイテッド (19)
【Ｆターム（参考）】
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