本発明は、伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に結合したグルコース調節ペプチドを含む組成物、その組成物をコードする単離した核酸、それを含むベクター及び宿主細胞、並びにそのような組成物の作出方法、そしてグルコース調節ペプチド関連疾患、障害及び症状の治療におけるそれら組成物の使用に関する。本開示は、グルコース調節ペプチドを投与することにより改善される、回復する、又は阻害される、任意の疾患、障害、又は状態の治療に有用である可能性のある組成物及び方法を対象とする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
表１から選択されたアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるグルコース調節ペプチド（ＧＰ）を含む単離した融合タンパク質であって、前記グルコース調節ペプチドは少なくとも約２００アミノ酸残基の伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に結合しており、そして該ＸＴＥＮが、
（ａ）該ＸＴＥＮ配列が、表３から選択された同等の長さのアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を示す、少なくとも約２００の連続したアミノ酸を含み；
（ｂ）−９又はそれを超えるスコアに基づくＴＥＰＩＴＯＰＥアルゴリズムによってＸＴＥＮ配列中にあるエピトープの予測を行った場合に、該ＸＴＥＮ配列は予測されるＴ細胞エピトープを含まず；
（ｃ）１０未満の部分列スコアを有し；及び
（ｄ）グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、グルタミン酸（Ｅ）及びプロリン（Ｐ）残基の総和が、ＸＴＥＮの全アミノ酸残基の約９０％より多くを構成することを特徴とする、
単離した融合タンパク質。
【請求項２】
該グルコース調節ペプチドがヒトグルコース調節ペプチドである、請求項１に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項３】
第二のＸＴＥＮ配列をさらに含む単離した融合タンパク質であって、かつ、該融合タンパク質が表７に示した多重ＸＴＥＮ配置をとる、請求項１又は２に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項４】
該グルコース調節ペプチドペプチド及び該ＸＴＥＮがスペーサーを介して結合しており、ここで該スペーサー配列が１〜約５０までのアミノ酸残基を含み、そして該スペーサーが開裂配列を任意に含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の単離した融合タンパク質。
【請求項５】
該融合タンパク質が、ＸＴＥＮをもたない対応する天然のグルコース調節ペプチドと同じ標的受容体に結合し、かつ、前記融合タンパク質が、ＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドの結合親和性の少なくとも約０．１％〜約３０％またはそれを超える値を保持する、請求項１〜４のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項６】
表３６、表３７、及び表３８から選択されたアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の単離した融合タンパク質及び薬学上許容可能な担体を含む医薬組成物。
【請求項８】
式Ｉに従って配置される、請求項１のいずれかに記載の単離したタンパク質であって、
（ＸＴＥＮ）_ｘ−ＧＰ−（ＸＴＥＮ）_ｙ （Ｉ）
式中、各出現について独立して：
（ａ）ｘは０又は１のいずれかであり；及び
（ｂ）ｙは０又は１のいずれかであり、
ここでｘ＋ｙ≧１である、
単離したタンパク質。
【請求項９】
該ＸＴＥＮを、該グルコース調節ペプチドのＮ末端又はＣ末端を介してグルコース調節ペプチドに融合させた、請求項１〜６のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項１０】
ヒトグルコース調節ペプチド、並びに表５から選択され、それぞれ１つ以上のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性がある、第一の及び第二のＸＴＥＮを含む、請求項１〜６及び８〜９のいずれかに記載の単離した融合タンパク質。
【請求項１１】
請求項１〜６及び８〜１０のいずれかに記載の単離した融合タンパク質であって、
（ｉ）対象に投与した場合のＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと比較して、同等のモル用量で対象に投与した場合に、該融合タンパク質がより長い終末相半減期を有する；
（ｉｉ）他の点では同等な投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；
（ｉｉｉ）他の点では同等な投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、少ないモル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の治療効果を達成する；
（ｉｖ）他の点では同等なモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、該融合タンパク質を低頻度で投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；
（ｖ）他の点では同等なモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、該融合タンパク質を低頻度で投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の治療効果を達成する；
（ｖｉ）他の点では同等な投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、より少ない累積モル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を達成する；又は
（ｖｉｉ）他の点では同等な投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも、より少ない累積モル量の該融合タンパク質を投与した場合に、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等の治療効果を達成する、ことを特徴とする、
単離した融合タンパク質。
【請求項１２】
１つ以上の伸張組換えポリペプチド（ＸＴＥＮ）に融合させたグルコース調節ペプチドを含む融合タンパク質の生産方法であって、
（ａ）請求項１又は６に記載の融合タンパク質をコードする組換えポリヌクレオチド分子を含む宿主細胞を準備すること；
（ｂ）該融合タンパク質が発現できる条件下において該宿主細胞を培養すること；及び
（ｃ）該融合タンパク質を回収することを含む、生産方法。
【請求項１３】
該融合タンパク質の該グルコース調節ペプチドが、
（ａ）ヒトグルコース調節ペプチド；又は
（ｂ）表１から選択された配列
と、少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
発現した融合タンパク質中の１つ以上のＸＴＥＮが、表５から選択された配列と少なくとも９０％の配列同一性を有する、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
該融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド分子が、表３５、表３６、及び表３７から選択された核酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を示す核酸配列を含む、請求項１２〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記融合タンパク質の該宿主細胞中での発現を高めるために、該ポリヌクレオチドのコドンを最適化する、請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
該宿主細胞が原核細胞である、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
該宿主細胞の細胞質から、該単離した融合タンパク質を実質的に可溶性の形態で回収する、請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１の融合タンパク質またはその相補体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離した核酸。
【請求項２０】
請求項１９に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸を含み、かつ、原核宿主細胞である、単離した宿主細胞。
【請求項２２】
治療上有効量の、請求項１の融合タンパク質を対象に投与する工程を含む、対象におけるグルコース調節ペプチド（ＧＰ）に関連した状態の治療方法。
【請求項２３】
グルコース調節ぺプチドに関連する疾患が、若年性糖尿病、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、肥満、急性低血糖、急性高血糖、夜間の低血糖、慢性高血糖、グルカゴン産生腫瘍、気道の分泌性疾患、関節炎、骨粗鬆症、中枢神経系疾患、再狭窄、神経変性疾患、腎不全、うっ血性心不全、ネプローゼ症候群、硬変、肺水腫、高血圧、脳卒中、過敏性腸症候群、心筋梗塞、急性冠症候群、術後の異化の変化、冬眠心筋、糖尿病性心筋症、尿のナトリウム排泄が不十分であること、尿のカリウム濃度の過剰、多嚢胞性卵巣症候群、呼吸促迫、腎症、左心室収縮不全、下痢、術後のダンピング症候群、重症疾患多発ニューロパチー（ＣＩＰＮ）、脂質代謝異常、虚血による血流の再灌流から生じる器官組織障害、及び冠動脈性心疾患危険因子（ＣＨＤＲＦ）症候群から選択される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
治療有効量が、同等の量で投与された自然のＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと比較して、少なくとも３倍の長さの融合タンパク質の治療ウィンドウ内で融合タンパク質の濃度を維持することをもたらす、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
治療上効果的な用量計画に則って該融合タンパク質を対象に２回以上連続して投与すると、該融合タンパク質の血中レベルの連続したＣ_ｍａｘのピーク及び／又はＣ_ｍｉｎの谷の間の時間が、ＧＰの確立された治療上の投与計画に則って投与される該融合タンパク質に結合していない対応するグルコース調節ペプチドと比較して長くなる、請求項２２〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
請求項２２〜２５のいずれかに記載の方法であって、
（ｉ）他の点では同等の投与計画で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも少ないモル量の該融合タンパク質を対象に投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等な治療効果を達成する；
（ｉｉ）他の点では同等のモル量で、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドよりも該融合タンパク質を低頻度で投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等な治療効果を達成する；又は
（ｉｉｉ）他の点では同等の投与期間、対象に投与されるＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと比較して、より少ない累積モル量の該融合タンパク質を投与すると、該融合タンパク質がＸＴＥＮをもたない対応するグルコース調節ペプチドと同等な治療効果を達成する、方法。
【請求項２７】
該治療効果が、ＨｂＡ１ｃ濃度、インスリン濃度、刺激Ｃペプチド、空腹時血糖値（ＦＰＧ）、血清サイトカインレベル、ＣＲＰレベル、インスリン分泌、及び経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）、体重、摂取量によに由来するインスリン感受性指標から選択される測定指標である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項７に記載の医薬組成物、該医薬組成物を特定するラベル、および該医薬組成物の保存、再構成、および／または対象への投与についての説明書を含むキット。

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【公表番号】特表２０１２−５２９２９７（Ｐ２０１２−５２９２９７Ａ）
【公表日】平成２４年１１月２２日（２０１２．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１５０８２（Ｐ２０１２−５１５０８２）
【出願日】平成２２年６月８日（２０１０．６．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３７８５５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１４４５０８
【国際公開日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【出願人】（５１１１８８８１９）アムニクス　オペレーティング　インコーポレイテッド (6)
【Ｆターム（参考）】