ジフェニルピリミジン化合物及びこれを有効成分として含有するエリスロポエチン産生促進剤
【課題】低分子性のＥＰＯ（エリスロポエチン）産生促進作用を有する化合物の提供。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］で表されるジフェニルピリミジン化合物。および、それを有効成分とするＥＰＯ産生促進剤、さらには貧血の予防及び／又は治療剤。
【解決手段】次の一般式（１）：
［式中、Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］で表されるジフェニルピリミジン化合物。および、それを有効成分とするＥＰＯ産生促進剤、さらには貧血の予防及び／又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なエリスロポエチン産生促進剤に関する。さらに詳細にはエリスロポエチン産生低下に起因する疾患、例えば貧血の予防及び／又は治療剤に関する。また本発明は、エリスロポエチン産生促進作用を有する新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ：ＥＰＯ）は、赤芽球前駆細胞から成熟赤血球への成熟と分化に関与する糖タンパク質ホルモンであり、天然に存在する１６５アミノ酸からなる単量体ポリペプチドである（非特許文献１）。
【０００３】
ヒトのＥＰＯは、赤血球の増殖・分化において必須であり、赤血球産生の低下を特徴とする血液疾患の治療に有用である。臨床的には、ＥＰＯは、慢性腎不全（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ：ＣＲＦ）患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血の治療（非特許文献２〜４）、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者において使用されている（非特許文献５）。また、ＥＰＯは慢性貧血における有効性も認められている。
【０００４】
ＥＰＯは、成人では主に腎臓で産生されるが、それ以外では、中枢神経系のアストロサイト及びニューロンにおいても産生され、ＥＰＯ及びＥＰＯ受容体は脳−末梢境界の毛細血管において発現している。さらに、ＥＰＯを全身投与すると、ＥＰＯは血液脳関門を通過して、脳及び脊髄虚血、機械的外傷、てんかん、興奮毒及び神経炎症に応答したニューロン細胞の喪失を減少させることが報告されている（非特許文献６〜１０）。
【０００５】
ＥＰＯのようなタンパク質を用いた療法においては、プロテアーゼによる分解を受けやすいことによる血漿半減期の短さ（非特許文献１１、１２）や、循環における化合物の治療有効濃度を維持するために、静脈内注射を頻回行わねばならないなどの問題がある。また、静脈内注射に代わる投与経路として皮下注射があるが、投与部位からの吸収が遅いため、徐放効果は有るものの、血漿中濃度が静脈内注射に比べて有意に低くなる。そこで、同等の治療効果を挙げるためには静脈内注射の場合と同様の回数を注射しなければならず、患者への負担となる。また、ヒト血清ＥＰＯは糖タンパク質であって、ＥＰＯ表面に結合した糖鎖の構造は複雑であり、そのグリコシル化は広範かつ多様であることから、サイズの不均一性を示し、組換えヒトＥＰＯではヒト血清ＥＰＯを再現よく作製することができない、などの問題もある。
【０００６】
従って、上記に示したような貧血を含むＥＰＯ産生低下に起因する疾患の治療において生体利用性の低いＥＰＯでなく、内因性ＥＰＯを増加させる方法及び化合物が当該技術分野において必要とされている。
【０００７】
一方、ＥＰＯの産生量は、転写因子である低酸素誘導性因子（ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ：ＨＩＦ）を介して酸素濃度により制御されていることが知られている（非特許文献１３）。すなわち、通常大気下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によりプロリン残基がヒドロキシル化されたＨＩＦサブユニット（ＨＩＦ−１α）がユビキチン−プロテアソーム系により分解され、ＥＰＯの産生は促進されないが、低酸素下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によるＨＩＦ−１αのプロリン残基のヒドロキシル化が抑制され、その結果、安定化されたＨＩＦ−１αは細胞質から核内に移行し、ＨＩＦ−１βと二量体を形成してＥＰＯ遺伝子のｈｙｐｏｘｉａ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｌｅｍｅｎｔ（ＨＲＥ）配列に結合して転写を促進し、ＥＰＯの産生を促進する。
【０００８】
このようなＥＰＯ産生機構を利用した２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素などのＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼに対する酵素阻害剤が、ＥＰＯ産生促進剤として報告されている（特許文献１〜４）。
【０００９】
しかしながら、ＨＩＦにより発現が制御されている遺伝子には、ＥＰＯをコードする遺伝子だけではなく、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードする遺伝子なども挙げられる。ＶＥＧＦは血管新生促進作用を有しており、この機能を介して悪性腫瘍を悪化させる原因となり得ることも報告されている（非特許文献１４、１５）。また、貧血は癌による化学治療によっても引き起こされ、貧血治療薬はそのような化学療法を受けている癌患者に投与されることも考えられることから（非特許文献６）、癌を悪化させるＶＥＧＦなどの発現も促進する可能性のあるＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害作用を有する化合物には、そのような危険性も内包される。
【００１０】
ＥＰＯの産生は、ＥＰＯの５’側に位置するプロモーター及び３’側に位置するエンハンサーにより制御されており、ＨＩＦはエンハンサー中のＨＲＥ配列に結合し、ＥＰＯの産生を促進すると考えられている。加えて、ＧＡＴＡ−２、ＮＦκＢなどもＥＰＯ産生を制御するとされており（非特許文献１６、１７）、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害以外の作用機構でもＥＰＯ産生促進は達成できると考えられる。このようなことからＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害に依存しないＥＰＯ産生促進作用を有する化合物は、貧血治療において有用であると考えられる。
【００１１】
また、前述のように、ＥＰＯは赤芽球前駆細胞の増殖及び成熟を促進するが、ＥＰＯの産生を介さずに赤芽球前駆細胞の成熟・分化を促進する作用を有する化合物も貧血治療薬として有用である。ＥＰＯの有する血球増殖促進作用を増強する活性を有する化合物やＥＰＯのシグナル伝達の重要な制御機構のひとつである脱リン酸化を触媒する造血細胞ホスファターゼに対して阻害作用を有する化合物が報告されているが（特許文献５〜７）、その活性は必ずしも十分とは言えない。また、ＥＰＯ受容体に作用する合成ペプチド、ヘマタイドが報告されているが（非特許文献１８）、ＥＰＯと同等の活性発現には高用量の投与が必要であり、経口投与に適さないという問題点がある。
【００１２】
従って、ＥＰＯ産生促進作用を持つ経口投与可能な低分子性の貧血治療剤が、今後の貧血治療において有用であると考えられる。
【００１３】
一方、本発明に関連するジフェニルピリミジン骨格を有する化合物には、種々の薬理作用が報告されている。例えば、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する疾患を治療（特許文献８）、動脈硬化症に有用なアポＡＩ発現亢進剤（特許文献９）、除草剤（特許文献１０、１１、１２）、脳血管疾患治療剤（特許文献１３）、糖尿病治療に有用なＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（特許文献１４、非特許文献１９）、血管新生阻害剤（特許文献１５）、ニューモシスチスカリニ肺炎症治療剤（非特許文献２０、２１）等に使用できることが各文献に記載されている。しかしながら、これらの文献には本発明化合物のようなＥＰＯの産生を亢進する作用や貧血治療に関しての記載や示唆はなく、ジフェニルピリミジン骨格を有する貧血治療剤は全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２００６−１３７７６３号公報
【特許文献２】ＷＯ２００３／５３９９７号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００５／１１６９６号パンフレット
【特許文献４】ＷＯ２００７／３８５７１号パンフレット
【特許文献５】特表２０００−５３６３６５号公報
【特許文献６】特開平１１−１７１７７４号公報
【特許文献７】特開２００２−２７５１５９号公報
【特許文献８】ＷＯ２００６／４４６０５号パンフレット
【特許文献９】特開２００１−３３５４７６号公報
【特許文献１０】特開平２−２７５８６５号公報
【特許文献１１】特開昭５７−１３１７０２号公報
【特許文献１２】特開昭６０−０７２８０８号公報
【特許文献１３】特開昭６１−０４０２７２号公報
【特許文献１４】ＷＯ２００３／６８７５７号パンフレット
【特許文献１５】ＷＯ１９９６／３２３８４号パンフレット
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Lin F-K, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 7580-7584 (1985)
【非特許文献２】Eschbach JW, et al., N. Engl. J. Med, 316: 73-78(1987)
【非特許文献３】Eschbach JW, et al., Ann. Intern. Med., 111: 992 (1989)
【非特許文献４】Lim VS, et al., Ann. Intern. Med., 110: 108-114 (1989)
【非特許文献５】Danna RP, et al., Erythropoietin in Clinical Applications-An International Perspective, New York: Marcel Dekker; p301-324 (1990)
【非特許文献６】Sakanaka M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 95, 4635-4640 (1998)
【非特許文献７】Celik M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 99, 2258-2263 (2002)
【非特許文献８】Brines ML, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 97, 10526-10531 (2000)
【非特許文献９】Calapai G, et al., Eur. J. Pharmacol., 401, 349-356 (2000)
【非特許文献１０】Siren A-L, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 98, 4044-4049 (2001)
【非特許文献１１】Spivack JL and Hogans BB, Blood, 73: 90 (1989)
【非特許文献１２】McMahon FG, et al., Blood, 76: 1718 (1990)
【非特許文献１３】Jelkman W, Internal Medicine 43, 649-659 (2004)
【非特許文献１４】Maxwell PH, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94, 15, 8104-8109 (1997)
【非特許文献１５】Fang J, et al., Cancer Res., 61, 15, 5731-5735 (2001)
【非特許文献１６】Imagawa S, et al., Blood 89, 1430-1439 (1997)
【非特許文献１７】La Ferla K, et al., FASEB J, 16, 1811-1813 (2002)
【非特許文献１８】Stead RB, et al., Blood 108, 1830-1834 (2006)
【非特許文献１９】Jens-Uwe P, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14, 1491-1493 (2004)
【非特許文献２０】Boykin DW, et al., Eur. J. Med. Chem., 32, 965-972 (1997)
【非特許文献２１】Boykin DW, et al., Eur. J. Med. Chem., 31, 767-773 (1996)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、低分子性のＥＰＯ産生促進作用を有する化合物を提供することにある。さらに詳細には、貧血の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記実情に鑑み、本発明者らは、ＥＰＯ産生促進作用を持つ化合物を鋭意探索した結果、下記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物が、ヒト肝臓癌由来のＨｅｐＧ２細胞を用いた試験においてＥＰＯ産生を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１８】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１９】
【化１】
【００２０】
［式中、
Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］
で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤に関する。
【００２１】
より詳細には、本発明は次の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）、
４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物９）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）、
５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１１）、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）
からなる群から選択される前記ＥＰＯ産生促進剤を提供するものである。
【００２２】
また、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。
【００２３】
また、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用（ｕｓｅ）に関する。より詳細には、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用（ｕｓｅ）を提供するものである。
【００２４】
さらに、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法（ｍｅｔｈｏｄ）に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法（ｍｅｔｈｏｄ）を提供するものである。
【００２５】
また、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法を提供するものである。ここで、「接触」とは、本明細書中で使用するとき、インビトロ又はインビボにおいて、本発明のジフェニルピリミジン化合物等が、細胞による前記化合物等の取り込み作用又は細胞表面での相互作用などにより、増殖、分化、生理活性物質の分泌などの細胞の機能を調節するように前記化合物等を細胞に添加することを意味する。
【００２６】
別の観点からは、本発明は、次の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）
からなる群から選択される、ジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。
【００２７】
さらに、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の１種又は２種以上の化合物、及び医薬として許容される担体とを含有してなるＥＰＯの産生を促進させるための医薬組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００２８】
本発明は、優れたＥＰＯ産生促進作用を有している、ジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を見出したものであり、ＥＰＯ産生を促進することにより症状が改善される疾患（例えば、慢性腎不全患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者の貧血、慢性貧血、鉄欠乏性貧血、再生不良性貧血、溶血性貧血、巨赤芽球性貧血などの貧血）の予防及び／又は治療のための医薬組成物として有用である。また、本発明は、ＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の化合物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００３０】
本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００３１】
本明細書中で使用するとき、「ハロゲン原子」とは、ハロゲノ基を意味し、具体的にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子等である。
【００３２】
本明細書中で使用するとき、「アルキル基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ1-6アルキル基」としては、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、４−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、３−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、１−メチルペンチル基、３，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基等の炭素数１〜６個の直鎖又は分枝状のアルキル基が挙げられる。
【００３３】
本明細書中で使用するとき、「アルコキシ基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ1-6アルコキシ基」としては、具体的にはメチルオキシ基、エチルオキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、sec−ブチルオキシ基、tert−ブチルオキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、４−メチルブチルオキシ基、１−エチルプロピルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、３，３−ジメチルブチルオキシ基、２，２−ジメチルブチルオキシ基、１，１−ジメチルブチルオキシ基、１，２−ジメチルブチルオキシ基、１，３−ジメチルブチルオキシ基、２，３−ジメチルブチルオキシ基、１−エチルブチルオキシ基、２−エチルブチルオキシ基等の炭素数１〜６の直鎖又は分枝状のアルコキシ基が挙げられる。
【００３４】
本明細書中で使用するとき、「ハロアルキル基」とは、同一若しくは異なった１個〜置換可能な最大数のハロゲン原子で置換されているアルキル基を意味する。従って、「ハロＣ1-6アルキル基」としては、具体的には、例えば、モノフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、モノクロロメチル基、モノブロモメチル基、モノヨードメチル基又は２，２，２−トリフルオロエチル基等が挙げられる。
【００３５】
その他、ここに定義のない基については、通常の定義に従う。
【００３６】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「ハロゲン原子」としては、フッ素原子が好ましい。
【００３７】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「Ｃ1-6アルコキシ基」としては、「Ｃ1-4アルコキシ基」が好ましく、メチルオキシ基、イソプロピルオキシ基がより好ましい。
【００３８】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「ハロＣ1-6アルキル基」としては、「ハロＣ1-4アルキル基」が好ましく、トリフルオロメチル基がより好ましい。
【００３９】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の具体例として、下記化合物を挙げることができる。
【００４０】
【表１】
【００４１】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のジフェニルピリミジン化合物のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００４２】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の医薬として許容される塩としては、具体的には、化合物を塩基性化合物として扱う場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との酸付加塩等が挙げられ、化合物を酸性化合物として扱う場合には、無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等）や有機塩（例えば、ピリジニウム塩、ピコリニウム塩、トリエチルアンモニウム塩等）が挙げられる。
【００４３】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノールなどのアルコールとの溶媒和物）が挙げられる。
【００４４】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物は、公知の方法により製造することができる。例えば、以下に示す方法、あるいはこれに準じた方法により製造することができるが、これに限定されるものではない。また、必要に応じて官能基を保護して各反応を行ってもよい。保護、脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。
【００４５】
［１］ジフェニルピリミジン化合物（１）の製造
【００４６】
【化２】
【００４７】
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、前記と同じものを示し、Ｒ8、Ｒ9は、水酸基、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基を示し、Ｘ1、Ｘ2はハロゲン原子を示す。］
【００４８】
［工程１、２］ジフェニルピリミジン化合物（１）は、ジハロゲノピリジン化合物（Ｉ）とボロン酸誘導体（ａ）及び（ｂ）を、触媒、塩基の存在下、溶媒中で鈴木−宮浦カップリング反応に付すことにより製造することができる。
【００４９】
ここで用いる溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピペリドン、メタノール、エタノール、水等が挙げられる。また、これらの溶媒を組み合わせて用いてもよい。触媒としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ビスベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン］パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン］パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）等が挙げられる。また、これらの触媒に必要に応じて、トリ（tert−ブチル）ホスフィン、トリフェニルホスフィン、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン、トリ（２−フリル）ホスフィン、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン等の配位子を組み合わせてもよい。塩基としては、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、フッ化セシウム、トリエチルアミン等が挙げられる。反応条件は、室温〜２００℃で３０分〜４日間であり、好ましくは室温〜１００℃で４〜２４時間反応すればよい。また、本反応は中間体（ＩＩ）を単離する多段階反応でも、工程１及び工程２を連続して行うワンポット反応でもよい。
【００５０】
［２］Ｒ1がアミノ基であるジフェニルピリミジン化合物（１ａ）の製造
【００５１】
【化３】
【００５２】
［式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、前記と同じものを示す。］
【００５３】
［工程３］Ｒ1がアミノ基である２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン化合物（１ａ）は、カルコン誘導体（ＩＩＩ）を塩基の存在下、溶媒中でグアニジンと反応することによって製造することもできる。
【００５４】
ここで用いる塩基としては、塩基としては、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等が挙げられる。溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、水等を単独又は組み合わせて使用することができる。反応条件は、使用するカルコン誘導体（ＩＩＩ）によって異なるが、一般に０〜１５０℃、好ましくは０〜１００℃にて５分〜３日、好ましくは１〜２４時間反応させることによって目的のジフェニルピリミジン化合物（１ａ）が得られる。
【００５５】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００５６】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００５７】
本発明のＥＰＯ産生亢進剤、又は貧血治療剤は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５８】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５９】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００６０】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００６１】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００６２】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００６３】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００６４】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり１ｍｇから１０００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００６５】
次に、実施例、試験例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６６】
実施例１：４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）の製造
【００６７】
【化４】
【００６８】
３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン１４９ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−トルエン（１：１）の混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜１：１）で精製し表題化合物８３ｍｇ（８０％）を黄色結晶性粉末として得た。
【００６９】
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.94 (6 H, s), 4.00 (12 H, s), 7.38 (4 H, s), 7.92 (1 H, s), 9.27 (1 H, s)
【００７０】
実施例２：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）の製造
【００７１】
【化５】
【００７２】
［工程１］３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン３７０ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３．０ｍｇ（０．００２６ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、トルエン−テトラヒドロフラン−メタノールの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１５〜１：８）で精製し、ヘキサンで結晶化し、４−クロロ−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン９１ｍｇ（６５％）を得た。
【００７３】
［工程２］４−クロロ−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン７０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸５０ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）の混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を１Ｎ塩酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−ヘキサンで結晶化し、表題化合物３７ｍｇ（４０％）を淡赤色結晶性粉末として得た。
【００７４】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.75 (3 H, s), 3.93 (6 H, s), 7.67 (2 H, s), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.48 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.66 (1 H, s), 9.31 (1 H, s), 13.19 (1 H, br. s)
【００７５】
実施例３：２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）の製造
【００７６】
【化６】
【００７７】
［工程１］アルゴン雰囲気下、２，４−ジクロロピリミジン３７２ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸８３ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム５８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬを、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン（１：１：２）８ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、４−クロロ−２−（４−カルボキシフェニル）ピリミジン１０６ｍｇ（９０％）を白色固体として得た。
【００７８】
［工程２］アルゴン雰囲気下、４−クロロ−２−（４−カルボキシフェニル）ピリミジン４６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシフェニルフェニルボロン酸６４ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム２３ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン（１：４：１）１．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−エーテルで結晶化し、表題化合物３０ｍｇ（４１％）を白色結晶性粉末として得た。
【００７９】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.78 (3 H, s), 3.93 (6 H, s), 7.86 (2 H, s), 8.04 (1 H, d, J = 5.3 Hz), 8.14 (2 H, d, J = 8.5 Hz), 8.45 (2 H, d, J = 8.5 Hz), 8.99 (1 H, d, J = 5.3 Hz)
【００８０】
実施例４：４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）の製造
【００８１】
【化７】
【００８２】
［工程１］アルゴン雰囲気下、２，４−ジクロロピリミジン３７２ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム５８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．３ｍＬを、トルエン−メタノール（２：１）３ｍＬの混合溶媒中、７０℃で１５時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜１：５）で精製し、４−クロロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン１４４ｍｇを白色固体として得た。
【００８３】
［工程２］アルゴン雰囲気下、４−クロロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸５７ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３９ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬを、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン−水（２：４：２：１）９ｍＬの混合溶液中、８０℃、１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３〜酢酸エチルのみ）で生成し、得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−エーテルで結晶化し、表題化合物５．７ｍｇ（４６％）を白色固体として得た。
【００８４】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.78 (3 H, s), 3.96 (6 H, s), 7.65 (2 H, s), 8.10 (d, J = 5.4 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.62 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.97 (1 H, d, J = 5.4 Hz)
【００８５】
実施例５：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）の製造
【００８６】
【化８】
【００８７】
［工程１］４−フルオロフェニルボロン酸７０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジブロモピリミジン３７５ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００６２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０〜）で精製し、４−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン１３７ｍｇ（４７％）を得た。
【００８８】
［工程２］４−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン１３７ｍｇ、４−カルボキシフェニルボロン酸１００ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン−水（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製した。得られた個体をクロロホルム−メタノール−ヘキサンで結晶化し、表題化合物２２ｍｇ（２段階１３％）を淡赤色結晶性粉末として得た。
【００８９】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.44 (2 H, dd, J = 8.8 Hz, 3JHF = 8.8 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.47 (2 H, dd, J = 8.8 Hz, 4JHF = 5.6 Hz), 8.49 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.71 (1 H, s), 9.34 (1 H, s), 13.23 (1 H, br. s)
【００９０】
実施例６：４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）の製造
【００９１】
【化９】
【００９２】
［工程１］フェニルボロン酸１２２ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン４５０ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１２ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム１０６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜）で精製し、４−クロロ−６−フェニルピリミジン１０８ｍｇ（５７％）を得た。
［工程２］４−クロロ−６−フェニルピリミジン５４ｍｇ、４−カルボキシフェニルボロン酸５５ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム６０ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ）、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた個体をメタノール−エーテル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物３５ｍｇ（２段階２５％）を白色結晶性粉末として得た。
【００９３】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.58-7.62 (3 H, m), 8.12 (2 H, d, J = 8.2 Hz), 8.39 (2 H, dd, J = 7.0, 2.0 Hz), 8.50 (2 H, d, J = 8.2 Hz), 8.71 (1 H, s), 9.35 (1 H, s), 13.20 (1 H, s)
【００９４】
実施例７：４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）の製造
【００９５】
【化１０】
【００９６】
実施例６の工程１で製造した４−クロロ−６−フェニルピリミジン５４ｍｇ、４−フルオロフェニルボロン酸４８ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：クロロホルム＝１：５）で精製し、表題化合物３３ｍｇ（２６％）を白色結晶性粉末として得た。
【００９７】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ：7.23 (2 H, dd, J = 8.9 Hz, 3JHF = 8.9 Hz), 7.53-7.58 (3 H, m), 8.06 (1 H, d, J = 1.3 Hz), 8.16 (2 H, dd, J = 7.0, 2.4 Hz), 8.17 (2 H, dd, J = 8.9 Hz, 4JHF = 5.2 Hz), 9.30 (1 H, d, J = 1.3 Hz)
【００９８】
実施例８：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）の製造
【００９９】
【化１１】
【０１００】
［工程１］４−イソプロポキシフェニルボロン酸９０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン２２０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（エーテル：ヘキサン＝１：３０〜１：１０）で精製し、４−クロロ−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン１１０ｍｇ（８８％）を得た。
【０１０１】
［工程２］４−クロロ−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン１１０ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸７５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１０ｍｇ（０．００８７ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン−水（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた固体をクロロホルム−メタノール−ヘキサンで結晶化し、表題化合物８４ｍｇ（５７％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１０２】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ：1.40 (6 H, d, J = 6.1 Hz), 4.68 (1 H, qq, J = 6.1, 6.1 Hz), 7.03 (2 H, d, J = 8.8 Hz), 8.08 (1 H, s), 8.12 (2 H, d, J = 8.8 Hz), 8.20 (2 H, d, J = 8.7 Hz), 8.23 (2 H, d, J = 8.7 Hz), 9.28 (1 H, s)
【０１０３】
実施例９：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）の製造
【０１０４】
【化１２】
【０１０５】
［工程１］４−トリフルオロメチルフェニルボロン酸９５ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン２２０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム１１０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：２：２：２）３．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、４−クロロ−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（６２％）を得た。
【０１０６】
［工程２］４−クロロ−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸６０ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム６５ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）を、水-メタノール-THF(１：２：２)２．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物７５ｍｇ（７０％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１０７】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.96 (2 H, d, J = 7.9 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 7.0 Hz), 8.46 (2 H, d, J = 7.0 Hz), 8.60 (2 H, d, J = 7.9 Hz), 8.80 (1 H, s), 9.40 (1 H, s)
【０１０８】
実施例１０：２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）の製造
【０１０９】
【化１３】
【０１１０】
カルコン２０８ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、グアニジン一塩酸９６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム１２０ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を、水−エタノール（１：３）４ｍＬの混合溶媒中、還流下、６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、エーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル：ヘキサン＝１：５）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物１２０ｍｇ（４９％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１１１】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 5.18 (2 H, br. s), 7.48 (1 H, s), 7.48-7.54 (6 H, m), 8.04-8.09 (4 H, m)
【０１１２】
製造例１：４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物９）の製造
【０１１３】
【化１４】
【０１１４】
４，６−ジクロロピリミジン３８ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）、４−フルオロフェニルボロン酸７５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３．０ｍｇ（０．００２６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム５５ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）を、水−トルエン−テトラヒドロフラン−メタノール（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶液中、８０℃で６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮し、表題化合物４２ｍｇ（６３％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１１５】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 7.23 (4 H, dd. J = 8.6 Hz, 3JHF = 8.6 Hz), 8.02 (1 H, d, J = 1.0 Hz), 8.16 (4 H, dd, J = 8.6 hz, 4JHF = 5.4 Hz), 9.28 (1 H, d, J = 1.0 Hz)
【０１１６】
製造例２：５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１１）の製造
【０１１７】
【化１５】
【０１１８】
５−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン１００ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸１９３ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム８０ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム５１７ｍｇ（４．９ｍｍｏｌ）を、水−トルエン−エタノール（５：１５：３）１１．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２〜１：１）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物１３０ｍｇ（８６％）を淡黄色針状晶として得た。
【０１１９】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 4.08 (2 H, br. s), 7.48 (2 H, br. d, J = 7.1 Hz), 7.54 (4 H, dd, J = 7.1, 7.1 Hz), 7.81 (4 H, br. d, J = 7.1 Hz), 8.80 (1 H, s)
【０１２０】
［試験例］
試験例に使用した化合物は、実施例又は製造例に記載の方法で製造したものを使用した。
【０１２１】
試験例
本発明のジフェニルピリミジン化合物によるＥＰＯ産生促進活性は、ＥＰＯプロモーター活性に基づいて測定した。
＜材料と方法＞
ｐＧＬ３ ｂａｓｉｃ（プロメガ）のルシフェラーゼ遺伝子にヒトＥＰＯの５’プロモーター領域、及び３’エンハンサー領域を連結したベクターをリポフェクションによってヒト肝臓癌由来である細胞株ＨｅｐＧ２に遺伝子導入した。得られた安定発現株（ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃ）を被検化合物の評価に使用した。次に、ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃは、１０％ウシ胎児血清を含む最小必須培地（ＭＥＭ）（シグマ）を用いて９６ウェルプレートの各ウェルに５×１０3細胞ずつ播種した。その後、ＤＭＳＯに溶解した被検化合物を最終濃度１０μＭとなるように各ウェルに添加し、培地量を１ウェルあたり１００μｌとした。酸素濃度を４％としたＣＯ2インキュベーターで２４時間インキュベート後、ＥＰＯプロモーター活性として、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（プロメガ）を１００μｌ／ウェルで添加し、直ちに、ＡＲＶＯ（パーキンエルマー）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。上記方法は、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍに添付された取扱説明書に準じた。
【０１２２】
化合物を添加しない未刺激状態でのＥＰＯプロモーター活性を１００％とし、各化合物により誘導されたＥＰＯプロモーター活性（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）を求めた。結果を表２に示す。
【０１２３】
【表２】
【０１２４】
＜結果＞
被検化合物を濃度１０μＭ添加することにより、ＥＰＯ産生促進が認められた（表２参照）。このことから、これらの化合物にはＥＰＯ産生促進作用があることが明らかとなり、貧血治療剤として有用であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
本発明は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＥＰＯ産生促進作用を有していることを初めて見出し、優れたＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、低分子性の新たな貧血の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なエリスロポエチン産生促進剤に関する。さらに詳細にはエリスロポエチン産生低下に起因する疾患、例えば貧血の予防及び／又は治療剤に関する。また本発明は、エリスロポエチン産生促進作用を有する新規化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
エリスロポエチン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ：ＥＰＯ）は、赤芽球前駆細胞から成熟赤血球への成熟と分化に関与する糖タンパク質ホルモンであり、天然に存在する１６５アミノ酸からなる単量体ポリペプチドである（非特許文献１）。
【０００３】
ヒトのＥＰＯは、赤血球の増殖・分化において必須であり、赤血球産生の低下を特徴とする血液疾患の治療に有用である。臨床的には、ＥＰＯは、慢性腎不全（ｃｈｒｏｎｉｃ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ：ＣＲＦ）患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血の治療（非特許文献２〜４）、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者において使用されている（非特許文献５）。また、ＥＰＯは慢性貧血における有効性も認められている。
【０００４】
ＥＰＯは、成人では主に腎臓で産生されるが、それ以外では、中枢神経系のアストロサイト及びニューロンにおいても産生され、ＥＰＯ及びＥＰＯ受容体は脳−末梢境界の毛細血管において発現している。さらに、ＥＰＯを全身投与すると、ＥＰＯは血液脳関門を通過して、脳及び脊髄虚血、機械的外傷、てんかん、興奮毒及び神経炎症に応答したニューロン細胞の喪失を減少させることが報告されている（非特許文献６〜１０）。
【０００５】
ＥＰＯのようなタンパク質を用いた療法においては、プロテアーゼによる分解を受けやすいことによる血漿半減期の短さ（非特許文献１１、１２）や、循環における化合物の治療有効濃度を維持するために、静脈内注射を頻回行わねばならないなどの問題がある。また、静脈内注射に代わる投与経路として皮下注射があるが、投与部位からの吸収が遅いため、徐放効果は有るものの、血漿中濃度が静脈内注射に比べて有意に低くなる。そこで、同等の治療効果を挙げるためには静脈内注射の場合と同様の回数を注射しなければならず、患者への負担となる。また、ヒト血清ＥＰＯは糖タンパク質であって、ＥＰＯ表面に結合した糖鎖の構造は複雑であり、そのグリコシル化は広範かつ多様であることから、サイズの不均一性を示し、組換えヒトＥＰＯではヒト血清ＥＰＯを再現よく作製することができない、などの問題もある。
【０００６】
従って、上記に示したような貧血を含むＥＰＯ産生低下に起因する疾患の治療において生体利用性の低いＥＰＯでなく、内因性ＥＰＯを増加させる方法及び化合物が当該技術分野において必要とされている。
【０００７】
一方、ＥＰＯの産生量は、転写因子である低酸素誘導性因子（ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ：ＨＩＦ）を介して酸素濃度により制御されていることが知られている（非特許文献１３）。すなわち、通常大気下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によりプロリン残基がヒドロキシル化されたＨＩＦサブユニット（ＨＩＦ−１α）がユビキチン−プロテアソーム系により分解され、ＥＰＯの産生は促進されないが、低酸素下では、２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素によるＨＩＦ−１αのプロリン残基のヒドロキシル化が抑制され、その結果、安定化されたＨＩＦ−１αは細胞質から核内に移行し、ＨＩＦ−１βと二量体を形成してＥＰＯ遺伝子のｈｙｐｏｘｉａ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｅｌｅｍｅｎｔ（ＨＲＥ）配列に結合して転写を促進し、ＥＰＯの産生を促進する。
【０００８】
このようなＥＰＯ産生機構を利用した２−オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼ酵素などのＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼに対する酵素阻害剤が、ＥＰＯ産生促進剤として報告されている（特許文献１〜４）。
【０００９】
しかしながら、ＨＩＦにより発現が制御されている遺伝子には、ＥＰＯをコードする遺伝子だけではなく、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードする遺伝子なども挙げられる。ＶＥＧＦは血管新生促進作用を有しており、この機能を介して悪性腫瘍を悪化させる原因となり得ることも報告されている（非特許文献１４、１５）。また、貧血は癌による化学治療によっても引き起こされ、貧血治療薬はそのような化学療法を受けている癌患者に投与されることも考えられることから（非特許文献６）、癌を悪化させるＶＥＧＦなどの発現も促進する可能性のあるＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害作用を有する化合物には、そのような危険性も内包される。
【００１０】
ＥＰＯの産生は、ＥＰＯの５’側に位置するプロモーター及び３’側に位置するエンハンサーにより制御されており、ＨＩＦはエンハンサー中のＨＲＥ配列に結合し、ＥＰＯの産生を促進すると考えられている。加えて、ＧＡＴＡ−２、ＮＦκＢなどもＥＰＯ産生を制御するとされており（非特許文献１６、１７）、ＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害以外の作用機構でもＥＰＯ産生促進は達成できると考えられる。このようなことからＨＩＦプロリルヒドロキシラーゼ酵素活性阻害に依存しないＥＰＯ産生促進作用を有する化合物は、貧血治療において有用であると考えられる。
【００１１】
また、前述のように、ＥＰＯは赤芽球前駆細胞の増殖及び成熟を促進するが、ＥＰＯの産生を介さずに赤芽球前駆細胞の成熟・分化を促進する作用を有する化合物も貧血治療薬として有用である。ＥＰＯの有する血球増殖促進作用を増強する活性を有する化合物やＥＰＯのシグナル伝達の重要な制御機構のひとつである脱リン酸化を触媒する造血細胞ホスファターゼに対して阻害作用を有する化合物が報告されているが（特許文献５〜７）、その活性は必ずしも十分とは言えない。また、ＥＰＯ受容体に作用する合成ペプチド、ヘマタイドが報告されているが（非特許文献１８）、ＥＰＯと同等の活性発現には高用量の投与が必要であり、経口投与に適さないという問題点がある。
【００１２】
従って、ＥＰＯ産生促進作用を持つ経口投与可能な低分子性の貧血治療剤が、今後の貧血治療において有用であると考えられる。
【００１３】
一方、本発明に関連するジフェニルピリミジン骨格を有する化合物には、種々の薬理作用が報告されている。例えば、ｍＲＮＡのナンセンス突然変異に関する疾患を治療（特許文献８）、動脈硬化症に有用なアポＡＩ発現亢進剤（特許文献９）、除草剤（特許文献１０、１１、１２）、脳血管疾患治療剤（特許文献１３）、糖尿病治療に有用なＤＰＰ−ＩＶ阻害剤（特許文献１４、非特許文献１９）、血管新生阻害剤（特許文献１５）、ニューモシスチスカリニ肺炎症治療剤（非特許文献２０、２１）等に使用できることが各文献に記載されている。しかしながら、これらの文献には本発明化合物のようなＥＰＯの産生を亢進する作用や貧血治療に関しての記載や示唆はなく、ジフェニルピリミジン骨格を有する貧血治療剤は全く知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】特開２００６−１３７７６３号公報
【特許文献２】ＷＯ２００３／５３９９７号パンフレット
【特許文献３】ＷＯ２００５／１１６９６号パンフレット
【特許文献４】ＷＯ２００７／３８５７１号パンフレット
【特許文献５】特表２０００−５３６３６５号公報
【特許文献６】特開平１１−１７１７７４号公報
【特許文献７】特開２００２−２７５１５９号公報
【特許文献８】ＷＯ２００６／４４６０５号パンフレット
【特許文献９】特開２００１−３３５４７６号公報
【特許文献１０】特開平２−２７５８６５号公報
【特許文献１１】特開昭５７−１３１７０２号公報
【特許文献１２】特開昭６０−０７２８０８号公報
【特許文献１３】特開昭６１−０４０２７２号公報
【特許文献１４】ＷＯ２００３／６８７５７号パンフレット
【特許文献１５】ＷＯ１９９６／３２３８４号パンフレット
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Lin F-K, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 7580-7584 (1985)
【非特許文献２】Eschbach JW, et al., N. Engl. J. Med, 316: 73-78(1987)
【非特許文献３】Eschbach JW, et al., Ann. Intern. Med., 111: 992 (1989)
【非特許文献４】Lim VS, et al., Ann. Intern. Med., 110: 108-114 (1989)
【非特許文献５】Danna RP, et al., Erythropoietin in Clinical Applications-An International Perspective, New York: Marcel Dekker; p301-324 (1990)
【非特許文献６】Sakanaka M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 95, 4635-4640 (1998)
【非特許文献７】Celik M, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 99, 2258-2263 (2002)
【非特許文献８】Brines ML, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 97, 10526-10531 (2000)
【非特許文献９】Calapai G, et al., Eur. J. Pharmacol., 401, 349-356 (2000)
【非特許文献１０】Siren A-L, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 98, 4044-4049 (2001)
【非特許文献１１】Spivack JL and Hogans BB, Blood, 73: 90 (1989)
【非特許文献１２】McMahon FG, et al., Blood, 76: 1718 (1990)
【非特許文献１３】Jelkman W, Internal Medicine 43, 649-659 (2004)
【非特許文献１４】Maxwell PH, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94, 15, 8104-8109 (1997)
【非特許文献１５】Fang J, et al., Cancer Res., 61, 15, 5731-5735 (2001)
【非特許文献１６】Imagawa S, et al., Blood 89, 1430-1439 (1997)
【非特許文献１７】La Ferla K, et al., FASEB J, 16, 1811-1813 (2002)
【非特許文献１８】Stead RB, et al., Blood 108, 1830-1834 (2006)
【非特許文献１９】Jens-Uwe P, et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 14, 1491-1493 (2004)
【非特許文献２０】Boykin DW, et al., Eur. J. Med. Chem., 32, 965-972 (1997)
【非特許文献２１】Boykin DW, et al., Eur. J. Med. Chem., 31, 767-773 (1996)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明の目的は、低分子性のＥＰＯ産生促進作用を有する化合物を提供することにある。さらに詳細には、貧血の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記実情に鑑み、本発明者らは、ＥＰＯ産生促進作用を持つ化合物を鋭意探索した結果、下記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物が、ヒト肝臓癌由来のＨｅｐＧ２細胞を用いた試験においてＥＰＯ産生を促進することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１８】
すなわち本発明は、次の一般式（１）：
【００１９】
【化１】
【００２０】
［式中、
Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］
で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤に関する。
【００２１】
より詳細には、本発明は次の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）、
４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物９）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）、
５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１１）、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）
からなる群から選択される前記ＥＰＯ産生促進剤を提供するものである。
【００２２】
また、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。
【００２３】
また、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用（ｕｓｅ）に関する。より詳細には、本発明は、ＥＰＯ産生促進用の製剤を製造するための、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用（ｕｓｅ）を提供するものである。
【００２４】
さらに、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法（ｍｅｔｈｏｄ）に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ＥＰＯの産生促進が必要とされる患者に投与することを特徴とする、ＥＰＯ産生の促進方法（ｍｅｔｈｏｄ）を提供するものである。
【００２５】
また、本発明は、前記一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法に関する。より詳細には、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を細胞に接触させて、当該細胞におけるＥＰＯの産生を促進させる方法を提供するものである。ここで、「接触」とは、本明細書中で使用するとき、インビトロ又はインビボにおいて、本発明のジフェニルピリミジン化合物等が、細胞による前記化合物等の取り込み作用又は細胞表面での相互作用などにより、増殖、分化、生理活性物質の分泌などの細胞の機能を調節するように前記化合物等を細胞に添加することを意味する。
【００２６】
別の観点からは、本発明は、次の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）
からなる群から選択される、ジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。
【００２７】
さらに、本発明は、前記した化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の１種又は２種以上の化合物、及び医薬として許容される担体とを含有してなるＥＰＯの産生を促進させるための医薬組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００２８】
本発明は、優れたＥＰＯ産生促進作用を有している、ジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を見出したものであり、ＥＰＯ産生を促進することにより症状が改善される疾患（例えば、慢性腎不全患者における貧血、自己貯血及び未熟児貧血、ＡＩＤＳ及び化学療法を受けている癌患者の貧血、慢性貧血、鉄欠乏性貧血、再生不良性貧血、溶血性貧血、巨赤芽球性貧血などの貧血）の予防及び／又は治療のための医薬組成物として有用である。また、本発明は、ＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の化合物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００３０】
本発明における用語の定義は以下のとおりである。
【００３１】
本明細書中で使用するとき、「ハロゲン原子」とは、ハロゲノ基を意味し、具体的にはフッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子等である。
【００３２】
本明細書中で使用するとき、「アルキル基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ1-6アルキル基」としては、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、４−メチルブチル基、１−エチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、３−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、１−メチルペンチル基、３，３−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基等の炭素数１〜６個の直鎖又は分枝状のアルキル基が挙げられる。
【００３３】
本明細書中で使用するとき、「アルコキシ基」は、直鎖又は分枝状であってもよい。従って、「Ｃ1-6アルコキシ基」としては、具体的にはメチルオキシ基、エチルオキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、sec−ブチルオキシ基、tert−ブチルオキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、４−メチルブチルオキシ基、１−エチルプロピルオキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、イソヘキシルオキシ基、３−メチルペンチルオキシ基、２−メチルペンチルオキシ基、１−メチルペンチルオキシ基、３，３−ジメチルブチルオキシ基、２，２−ジメチルブチルオキシ基、１，１−ジメチルブチルオキシ基、１，２−ジメチルブチルオキシ基、１，３−ジメチルブチルオキシ基、２，３−ジメチルブチルオキシ基、１−エチルブチルオキシ基、２−エチルブチルオキシ基等の炭素数１〜６の直鎖又は分枝状のアルコキシ基が挙げられる。
【００３４】
本明細書中で使用するとき、「ハロアルキル基」とは、同一若しくは異なった１個〜置換可能な最大数のハロゲン原子で置換されているアルキル基を意味する。従って、「ハロＣ1-6アルキル基」としては、具体的には、例えば、モノフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、モノクロロメチル基、モノブロモメチル基、モノヨードメチル基又は２，２，２−トリフルオロエチル基等が挙げられる。
【００３５】
その他、ここに定義のない基については、通常の定義に従う。
【００３６】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「ハロゲン原子」としては、フッ素原子が好ましい。
【００３７】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「Ｃ1-6アルコキシ基」としては、「Ｃ1-4アルコキシ基」が好ましく、メチルオキシ基、イソプロピルオキシ基がより好ましい。
【００３８】
一般式（１）中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7における「ハロＣ1-6アルキル基」としては、「ハロＣ1-4アルキル基」が好ましく、トリフルオロメチル基がより好ましい。
【００３９】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の具体例として、下記化合物を挙げることができる。
【００４０】
【表１】
【００４１】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、本発明のジフェニルピリミジン化合物のみならず、その医薬として許容される塩、それらの各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形を有する物質、及びこれらの物質のプロドラッグとなる物質を包含している。
【００４２】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の医薬として許容される塩としては、具体的には、化合物を塩基性化合物として扱う場合は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）や有機酸（例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸等）との酸付加塩等が挙げられ、化合物を酸性化合物として扱う場合には、無機塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等）や有機塩（例えば、ピリジニウム塩、ピコリニウム塩、トリエチルアンモニウム塩等）が挙げられる。
【００４３】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物やその医薬として許容される塩の溶媒和物としては、水和物や各種の溶媒和物（例えば、エタノールなどのアルコールとの溶媒和物）が挙げられる。
【００４４】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物は、公知の方法により製造することができる。例えば、以下に示す方法、あるいはこれに準じた方法により製造することができるが、これに限定されるものではない。また、必要に応じて官能基を保護して各反応を行ってもよい。保護、脱保護条件としては一般に用いられる方法（Protective Groups in Organic Synthesis Third Edition, John Wiley & Sons, Inc.）を参考にして行うことができる。
【００４５】
［１］ジフェニルピリミジン化合物（１）の製造
【００４６】
【化２】
【００４７】
［式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、前記と同じものを示し、Ｒ8、Ｒ9は、水酸基、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基を示し、Ｘ1、Ｘ2はハロゲン原子を示す。］
【００４８】
［工程１、２］ジフェニルピリミジン化合物（１）は、ジハロゲノピリジン化合物（Ｉ）とボロン酸誘導体（ａ）及び（ｂ）を、触媒、塩基の存在下、溶媒中で鈴木−宮浦カップリング反応に付すことにより製造することができる。
【００４９】
ここで用いる溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、ジオキサン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピペリドン、メタノール、エタノール、水等が挙げられる。また、これらの溶媒を組み合わせて用いてもよい。触媒としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、トリス（ビスベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）、酢酸パラジウム（ＩＩ）、塩化パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン］パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン］パラジウム（ＩＩ）、ジクロロ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）等が挙げられる。また、これらの触媒に必要に応じて、トリ（tert−ブチル）ホスフィン、トリフェニルホスフィン、トリ（ｏ−トリル）ホスフィン、トリ（２−フリル）ホスフィン、２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル、１，２−ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン等の配位子を組み合わせてもよい。塩基としては、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、フッ化セシウム、トリエチルアミン等が挙げられる。反応条件は、室温〜２００℃で３０分〜４日間であり、好ましくは室温〜１００℃で４〜２４時間反応すればよい。また、本反応は中間体（ＩＩ）を単離する多段階反応でも、工程１及び工程２を連続して行うワンポット反応でもよい。
【００５０】
［２］Ｒ1がアミノ基であるジフェニルピリミジン化合物（１ａ）の製造
【００５１】
【化３】
【００５２】
［式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、前記と同じものを示す。］
【００５３】
［工程３］Ｒ1がアミノ基である２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン化合物（１ａ）は、カルコン誘導体（ＩＩＩ）を塩基の存在下、溶媒中でグアニジンと反応することによって製造することもできる。
【００５４】
ここで用いる塩基としては、塩基としては、酢酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化バリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド等が挙げられる。溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、水等を単独又は組み合わせて使用することができる。反応条件は、使用するカルコン誘導体（ＩＩＩ）によって異なるが、一般に０〜１５０℃、好ましくは０〜１００℃にて５分〜３日、好ましくは１〜２４時間反応させることによって目的のジフェニルピリミジン化合物（１ａ）が得られる。
【００５５】
前記の各反応で得られた中間体及び目的物は、有機合成化学で常用されている精製法、例えば、ろ過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して必要に応じて単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次反応に供することもできる。
【００５６】
さらに、各種の異性体は異性体間の物理化学的性質の差を利用した常法を適用して単離できる。例えば、ラセミ混合物は、例えば、酒石酸等の一般的な光学活性酸とのジアステレオマー塩に導き光学分割する方法、又は、光学活性カラムクロマトグラフィーを用いた方法等の一般的ラセミ分割法により、光学的に純粋な異性体に導くことができる。また、ジアステレオマー混合物は、例えば、分別結晶化又は各種クロマトグラフィー等により分割できる。また、光学活性な化合物は適当な光学活性な原料を用いることにより製造することもできる。
【００５７】
本発明のＥＰＯ産生亢進剤、又は貧血治療剤は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物、その塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有するものであって、医薬組成物として使用することができる。その場合、本発明の化合物を単独で用いてもよいが、通常は医薬として許容される担体、及び／又は希釈剤を配合して使用される。
【００５８】
投与経路は、特に限定されないが、治療目的に応じて適宜選択することができる。例えば、経口剤、注射剤、坐剤、吸入剤等のいずれでもよい。これらの投与形態に適した医薬組成物は、公知の製剤方法を利用することによって製造できる。
【００５９】
経口用固形製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に医薬として許容される賦形剤、更に必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法を利用して、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。添加剤は、当該分野で一般的に使用されているものでよい。例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等が挙げられる。結合剤としては水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００６０】
経口用液体製剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法を利用して内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。矯味剤としては上記に挙げられたものでよく、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００６１】
注射剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物にｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法を利用して皮下、筋肉及び静脈内注射剤を製造することができる。ｐＨ調製剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が挙げられる。
【００６２】
坐剤を調製する場合は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物に公知の坐剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等、更に必要に応じて界面活性剤（例えば、ツイーン（登録商標））等を加えた後、常法を利用して製造することができる。
【００６３】
上記以外に、常法を利用して適宜好ましい製剤とすることもできる。
【００６４】
本発明の一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物の投与量は年齢、体重、症状、投与形態及び投与回数等によって異なるが、通常は成人に対して一般式（１）で表わされる化合物として１日あたり１ｍｇから１０００ｍｇを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【実施例】
【００６５】
次に、実施例、試験例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００６６】
実施例１：４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物１）の製造
【００６７】
【化４】
【００６８】
３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン１４９ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−トルエン（１：１）の混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜１：１）で精製し表題化合物８３ｍｇ（８０％）を黄色結晶性粉末として得た。
【００６９】
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：3.94 (6 H, s), 4.00 (12 H, s), 7.38 (4 H, s), 7.92 (1 H, s), 9.27 (1 H, s)
【００７０】
実施例２：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物２）の製造
【００７１】
【化５】
【００７２】
［工程１］３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン３７０ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３．０ｍｇ（０．００２６ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、トルエン−テトラヒドロフラン−メタノールの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１５〜１：８）で精製し、ヘキサンで結晶化し、４−クロロ−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン９１ｍｇ（６５％）を得た。
【００７３】
［工程２］４−クロロ−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン７０ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸５０ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）の混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加え、ジエチルエーテルで洗浄した。水層を１Ｎ塩酸で酸性とし、酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−ヘキサンで結晶化し、表題化合物３７ｍｇ（４０％）を淡赤色結晶性粉末として得た。
【００７４】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.75 (3 H, s), 3.93 (6 H, s), 7.67 (2 H, s), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.48 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.66 (1 H, s), 9.31 (1 H, s), 13.19 (1 H, br. s)
【００７５】
実施例３：２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物３）の製造
【００７６】
【化６】
【００７７】
［工程１］アルゴン雰囲気下、２，４−ジクロロピリミジン３７２ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸８３ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム５８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬを、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン（１：１：２）８ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製し、４−クロロ−２−（４−カルボキシフェニル）ピリミジン１０６ｍｇ（９０％）を白色固体として得た。
【００７８】
［工程２］アルゴン雰囲気下、４−クロロ−２−（４−カルボキシフェニル）ピリミジン４６ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシフェニルフェニルボロン酸６４ｍｇ（０．３０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム２３ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液を、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン（１：４：１）１．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−エーテルで結晶化し、表題化合物３０ｍｇ（４１％）を白色結晶性粉末として得た。
【００７９】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.78 (3 H, s), 3.93 (6 H, s), 7.86 (2 H, s), 8.04 (1 H, d, J = 5.3 Hz), 8.14 (2 H, d, J = 8.5 Hz), 8.45 (2 H, d, J = 8.5 Hz), 8.99 (1 H, d, J = 5.3 Hz)
【００８０】
実施例４：４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン（化合物４）の製造
【００８１】
【化７】
【００８２】
［工程１］アルゴン雰囲気下、２，４−ジクロロピリミジン３７２ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、３，４，５−トリメトキシフェニルボロン酸１０６ｍｇ（０．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム５８ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．３ｍＬを、トルエン−メタノール（２：１）３ｍＬの混合溶媒中、７０℃で１５時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜１：５）で精製し、４−クロロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン１４４ｍｇを白色固体として得た。
【００８３】
［工程２］アルゴン雰囲気下、４−クロロ−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸５７ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３９ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬを、トルエン−メタノール−テトラヒドロフラン−水（２：４：２：１）９ｍＬの混合溶液中、８０℃、１６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水及び１Ｎ塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：３〜酢酸エチルのみ）で生成し、得られた粗生成物をメタノール−クロロホルム−エーテルで結晶化し、表題化合物５．７ｍｇ（４６％）を白色固体として得た。
【００８４】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：3.78 (3 H, s), 3.96 (6 H, s), 7.65 (2 H, s), 8.10 (d, J = 5.4 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.62 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.97 (1 H, d, J = 5.4 Hz)
【００８５】
実施例５：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物５）の製造
【００８６】
【化８】
【００８７】
［工程１］４−フルオロフェニルボロン酸７０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジブロモピリミジン３７５ｍｇ（２．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００６２ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２０〜）で精製し、４−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン１３７ｍｇ（４７％）を得た。
【００８８】
［工程２］４−クロロ−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン１３７ｍｇ、４−カルボキシフェニルボロン酸１００ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１２ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン−水（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製した。得られた個体をクロロホルム−メタノール−ヘキサンで結晶化し、表題化合物２２ｍｇ（２段階１３％）を淡赤色結晶性粉末として得た。
【００８９】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.44 (2 H, dd, J = 8.8 Hz, 3JHF = 8.8 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.47 (2 H, dd, J = 8.8 Hz, 4JHF = 5.6 Hz), 8.49 (2 H, d, J = 8.3 Hz), 8.71 (1 H, s), 9.34 (1 H, s), 13.23 (1 H, br. s)
【００９０】
実施例６：４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物６）の製造
【００９１】
【化９】
【００９２】
［工程１］フェニルボロン酸１２２ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン４５０ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１２ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム１０６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：１０〜）で精製し、４−クロロ−６−フェニルピリミジン１０８ｍｇ（５７％）を得た。
［工程２］４−クロロ−６−フェニルピリミジン５４ｍｇ、４−カルボキシフェニルボロン酸５５ｍｇ（０．３３ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム６０ｍｇ（０．５６ｍｍｏｌ）、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた個体をメタノール−エーテル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物３５ｍｇ（２段階２５％）を白色結晶性粉末として得た。
【００９３】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.58-7.62 (3 H, m), 8.12 (2 H, d, J = 8.2 Hz), 8.39 (2 H, dd, J = 7.0, 2.0 Hz), 8.50 (2 H, d, J = 8.2 Hz), 8.71 (1 H, s), 9.35 (1 H, s), 13.20 (1 H, s)
【００９４】
実施例７：４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン（化合物７）の製造
【００９５】
【化１０】
【００９６】
実施例６の工程１で製造した４−クロロ−６−フェニルピリミジン５４ｍｇ、４−フルオロフェニルボロン酸４８ｍｇ（０．３４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液０．５ｍＬ（１．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：クロロホルム＝１：５）で精製し、表題化合物３３ｍｇ（２６％）を白色結晶性粉末として得た。
【００９７】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ：7.23 (2 H, dd, J = 8.9 Hz, 3JHF = 8.9 Hz), 7.53-7.58 (3 H, m), 8.06 (1 H, d, J = 1.3 Hz), 8.16 (2 H, dd, J = 7.0, 2.4 Hz), 8.17 (2 H, dd, J = 8.9 Hz, 4JHF = 5.2 Hz), 9.30 (1 H, d, J = 1.3 Hz)
【００９８】
実施例８：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン（化合物８）の製造
【００９９】
【化１１】
【０１００】
［工程１］４−イソプロポキシフェニルボロン酸９０ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン２２０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：１：１）３ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（エーテル：ヘキサン＝１：３０〜１：１０）で精製し、４−クロロ−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン１１０ｍｇ（８８％）を得た。
【０１０１】
［工程２］４−クロロ−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン１１０ｍｇ（０．４４ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸７５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム１０ｍｇ（０．００８７ｍｍｏｌ）、２．０Ｍ炭酸ナトリウム水溶液１．０ｍＬ（２．０ｍｍｏｌ）を、メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン−水（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた固体をクロロホルム−メタノール−ヘキサンで結晶化し、表題化合物８４ｍｇ（５７％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１０２】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ：1.40 (6 H, d, J = 6.1 Hz), 4.68 (1 H, qq, J = 6.1, 6.1 Hz), 7.03 (2 H, d, J = 8.8 Hz), 8.08 (1 H, s), 8.12 (2 H, d, J = 8.8 Hz), 8.20 (2 H, d, J = 8.7 Hz), 8.23 (2 H, d, J = 8.7 Hz), 9.28 (1 H, s)
【０１０３】
実施例９：４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン（化合物１０）の製造
【０１０４】
【化１２】
【０１０５】
［工程１］４−トリフルオロメチルフェニルボロン酸９５ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）、４，６−ジクロロピリミジン２２０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム６．０ｍｇ（０．００５２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム１１０ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を、水−メタノール−テトラヒドロフラン−トルエン（１：２：２：２）３．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル：ヘキサン＝１：３）で精製し、４−クロロ−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（６２％）を得た。
【０１０６】
［工程２］４−クロロ−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン８０ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）、４−カルボキシフェニルボロン酸６０ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム４．０ｍｇ（０．００３５ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム６５ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）を、水-メタノール-THF(１：２：２)２．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に１Ｎ塩酸及び水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物７５ｍｇ（７０％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１０７】
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6)δ：7.96 (2 H, d, J = 7.9 Hz), 8.12 (2 H, d, J = 7.0 Hz), 8.46 (2 H, d, J = 7.0 Hz), 8.60 (2 H, d, J = 7.9 Hz), 8.80 (1 H, s), 9.40 (1 H, s)
【０１０８】
実施例１０：２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１２）の製造
【０１０９】
【化１３】
【０１１０】
カルコン２０８ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、グアニジン一塩酸９６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム１２０ｍｇ（３．０ｍｍｏｌ）を、水−エタノール（１：３）４ｍＬの混合溶媒中、還流下、６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、エーテルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をプレパラティブ薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル：ヘキサン＝１：５）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物１２０ｍｇ（４９％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１１１】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 5.18 (2 H, br. s), 7.48 (1 H, s), 7.48-7.54 (6 H, m), 8.04-8.09 (4 H, m)
【０１１２】
製造例１：４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン（化合物９）の製造
【０１１３】
【化１４】
【０１１４】
４，６−ジクロロピリミジン３８ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）、４−フルオロフェニルボロン酸７５ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム３．０ｍｇ（０．００２６ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム５５ｍｇ（０．５２ｍｍｏｌ）を、水−トルエン−テトラヒドロフラン−メタノール（１：１：１：１）４ｍＬの混合溶液中、８０℃で６時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮し、表題化合物４２ｍｇ（６３％）を白色結晶性粉末として得た。
【０１１５】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 7.23 (4 H, dd. J = 8.6 Hz, 3JHF = 8.6 Hz), 8.02 (1 H, d, J = 1.0 Hz), 8.16 (4 H, dd, J = 8.6 hz, 4JHF = 5.4 Hz), 9.28 (1 H, d, J = 1.0 Hz)
【０１１６】
製造例２：５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン（化合物１１）の製造
【０１１７】
【化１５】
【０１１８】
５−アミノ−４，６−ジクロロピリミジン１００ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸１９３ｍｇ（１．６ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム８０ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム５１７ｍｇ（４．９ｍｍｏｌ）を、水−トルエン−エタノール（５：１５：３）１１．５ｍＬの混合溶媒中、８０℃で１２時間攪拌した。反応終了後、反応液に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで除水後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル：ヘキサン＝１：２〜１：１）で精製した。得られた固体を酢酸エチル−ヘキサンで結晶化し、表題化合物１３０ｍｇ（８６％）を淡黄色針状晶として得た。
【０１１９】
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ： 4.08 (2 H, br. s), 7.48 (2 H, br. d, J = 7.1 Hz), 7.54 (4 H, dd, J = 7.1, 7.1 Hz), 7.81 (4 H, br. d, J = 7.1 Hz), 8.80 (1 H, s)
【０１２０】
［試験例］
試験例に使用した化合物は、実施例又は製造例に記載の方法で製造したものを使用した。
【０１２１】
試験例
本発明のジフェニルピリミジン化合物によるＥＰＯ産生促進活性は、ＥＰＯプロモーター活性に基づいて測定した。
＜材料と方法＞
ｐＧＬ３ ｂａｓｉｃ（プロメガ）のルシフェラーゼ遺伝子にヒトＥＰＯの５’プロモーター領域、及び３’エンハンサー領域を連結したベクターをリポフェクションによってヒト肝臓癌由来である細胞株ＨｅｐＧ２に遺伝子導入した。得られた安定発現株（ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃ）を被検化合物の評価に使用した。次に、ＨｅｐＧ２ ＥＰＯ−ｌｕｃは、１０％ウシ胎児血清を含む最小必須培地（ＭＥＭ）（シグマ）を用いて９６ウェルプレートの各ウェルに５×１０3細胞ずつ播種した。その後、ＤＭＳＯに溶解した被検化合物を最終濃度１０μＭとなるように各ウェルに添加し、培地量を１ウェルあたり１００μｌとした。酸素濃度を４％としたＣＯ2インキュベーターで２４時間インキュベート後、ＥＰＯプロモーター活性として、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（プロメガ）を１００μｌ／ウェルで添加し、直ちに、ＡＲＶＯ（パーキンエルマー）を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。上記方法は、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍに添付された取扱説明書に準じた。
【０１２２】
化合物を添加しない未刺激状態でのＥＰＯプロモーター活性を１００％とし、各化合物により誘導されたＥＰＯプロモーター活性（％ ｏｆ ｃｏｎｔｒｏｌ）を求めた。結果を表２に示す。
【０１２３】
【表２】
【０１２４】
＜結果＞
被検化合物を濃度１０μＭ添加することにより、ＥＰＯ産生促進が認められた（表２参照）。このことから、これらの化合物にはＥＰＯ産生促進作用があることが明らかとなり、貧血治療剤として有用であることがわかった。
【産業上の利用可能性】
【０１２５】
本発明は、一般式（１）で表されるジフェニルピリミジン化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、優れたＥＰＯ産生促進作用を有していることを初めて見出し、優れたＥＰＯ産生促進作用を有する経口投与可能な低分子性の貧血の予防及び／又は治療剤を提供するものである。本発明は、低分子性の新たな貧血の予防及び／又は治療剤を提供し、製薬工業において有用であり、産業上の利用可能性を有している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］
で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤。
【請求項３】
下記の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン、
４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン、
５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン
からなる群から選択されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である請求項１又は２項記載の剤。
【請求項４】
下記の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン
からなる群から選択されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項５】
請求項４記載の化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の１種又は２種以上の化合物、及び医薬として許容される担体とを含有してなる医薬組成物。
【請求項６】
ＥＰＯの産生を促進させるためのものである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
貧血の予防及び／又は治療用である、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１】
次の一般式（１）：
【化１】
［式中、
Ｒ1は、水素原子又はアミノ基を示し、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7は、同一又は異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルコキシ基、ハロＣ1-6アルキル基又はカルボキシル基を示す］
で表されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＥＰＯ産生促進剤。
【請求項２】
一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする貧血の予防及び／又は治療剤。
【請求項３】
下記の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン）、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン、
４，６−ビス（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン、
５−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン
からなる群から選択されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である請求項１又は２項記載の剤。
【請求項４】
下記の化合物群：
４，６−ビス（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
２−（４−カルボキシフェニル）−４−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−フルオロフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−フルオロフェニル）−６−フェニルピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−イソプロポキシフェニル）ピリミジン、
４−（４−カルボキシフェニル）−６−（４−トリフルオロメチルフェニル）ピリミジン、及び
２−アミノ−４，６−ジフェニルピリミジン
からなる群から選択されるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
【請求項５】
請求項４記載の化合物群から選ばれるジフェニルピリミジン化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の１種又は２種以上の化合物、及び医薬として許容される担体とを含有してなる医薬組成物。
【請求項６】
ＥＰＯの産生を促進させるためのものである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
貧血の予防及び／又は治療用である、請求項５に記載の医薬組成物。
【公開番号】特開２０１１−８４４８０（Ｐ２０１１−８４４８０Ａ）
【公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２３６２４１（Ｐ２００９−２３６２４１）
【出願日】平成２１年１０月１３日（２００９．１０．１３）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月１３日（２００９．１０．１３）
【出願人】（０００１６３００６）興和株式会社 (618)
【Ｆターム（参考）】
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