フラジェリンの欠失変異体と使用方法
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストと、少なくとも１つのインフルエンザ抗原の少なくとも一部とを含む組成物を、被検体における免疫応答、特に被検体における保護免疫応答を刺激する方法に使用可能である。組成物は粒子と会合可能であり、比較的低用量でウイルス感染に対する防御免疫を与える方法に使用可能である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２９からの挿入または欠失を含めて、配列番号２９（Ｒ３）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約５０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項２】
８４、９１、９５、３２２、３２６からなる群から選択される配列番号２９の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３】
配列番号３０からの挿入または欠失を含めて、配列番号３０（Ｒ３Ｄ０）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約５０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項４】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３０の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項３に記載のアミノ酸配列。
【請求項５】
配列番号３１からの挿入または欠失を含めて、配列番号３１（Ｄ３Ｎ）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約６０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項６】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３１の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項５に記載のアミノ酸配列。
【請求項７】
配列番号３２からの挿入または欠失を含めて、配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓ）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約６０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項８】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３２の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項７に記載のアミノ酸配列。
【請求項９】
配列番号２９（Ｒ３）、配列番号３０（Ｒ３Ｄ０）、配列番号３１（Ｄ３Ｎ）、配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓ）、配列番号３３（Ｄ１）からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーに示されるようなアミノ酸配列。
【請求項１０】
配列番号２８（ＲＯコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、３９、４６、５０、３７８、３８２からなる群から選択される配列番号２８の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項１１】
抗原がウイルスタンパク質抗原である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ウイルスタンパク質抗原がインフルエンザウイルスタンパク質抗原である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
インフルエンザ抗原が少なくとも１つの内在性膜タンパク質抗原を含む、請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
内在性膜タンパク質抗原が、赤血球凝集素膜タンパク質、ノイラミニダーゼ膜タンパク質、マトリクス２膜タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーの少なくとも一部を含む、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
赤血球凝集素膜タンパク質が、配列番号２２８〜２８１、２８３〜２９５、４５６、４８１、４９９、６６２、６６５、８１３、８２６〜８３１からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つのマトリクス２膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
内在性膜タンパク質が少なくとも４つのマトリクス２膜タンパク質を含む、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
マトリクス２膜タンパク質が、配列番号２９６、２９８、３００〜３２１、３２３〜３３６、４８５、５０７、６６６からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
配列番号２９（Ｒ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、抗原が配列番号２９のアミノ酸残基１９０と１９１の間であり、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２１】
配列番号２９（Ｄ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２２】
配列番号３０（Ｒ３Ｄ０コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、抗原が配列番号３０のアミノ酸残基１４５と１４６の間であり、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２３】
配列番号３０（ＲＯ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも２つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、少なくとも１つの抗原が配列番号３０のアミノ酸残基１４５と１４６の間であり、少なくとも１つの他の抗原が配列番号３０のアミノ酸残基３１８に融合され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２４】
抗原が別個の抗原である、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
抗原が類似の抗原である、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
配列番号２９（Ｒ３−２ｘＡｇコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも２つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、少なくとも１つの抗原が配列番号２９のアミノ酸残基１９０と１９１の間であり、少なくとも１つの他の抗原が配列番号２９のアミノ酸残基４０５に融合され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２７】
抗原が別個の抗原である、請求項２６に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
抗原が類似の抗原である、請求項２６に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
配列番号３１（Ｄ３Ｎコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３０】
配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３１】
配列番号３３（Ｄ１コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３２】
融合タンパク質配列番号４５１〜４５３、４５５、４５７、４６０、４６３〜４６５、４６８、４７０〜４７４、５００〜５０６、５１１〜５１８、６６０および６６４を含む組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて免疫応答を刺激する方法であって、約１０．０μｇ用量、約５．０μｇ用量、約３．０μｇ用量、約２．５μｇ用量、約１．０μｇ用量、約０．５μｇ用量、約０．３μｇ用量、約０．２５μｇ用量、約０．１μｇ用量、約０．０５μｇ用量、約０．０２５μｇ用量、約０．０１μｇ用量からなる群から選択される少なくとも１つの用量で、融合タンパク質をヒトに投与する、方法。
【請求項３３】
ヒトに対する組成物の投与によって、ヒトの抗原源への曝露による感染に対する防御免疫を得る、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン０、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含む（Ｒ３、Ｄ３、Ｒ３−２ｘＡｇ）、組成物。
【請求項３５】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部と抗原が融合タンパク質の成分である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
抗原が、アミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間で天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部に融合される（Ｒ３）、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
抗原が、天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合される（Ｄ３）、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合された少なくとも１つの別の抗原の少なくとも一部をさらに含む（Ｒ３−２ＸＡｇ）、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
抗原および別の抗原が類似である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
抗原および別の抗原が別個である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４２】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含む（Ｒ３Ｄ０；Ｒ０３）、組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部と抗原が融合タンパク質の成分である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
抗原が、アミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間で天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部に融合される（Ｒ３Ｄ０）、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン１に融合された少なくとも１つの別の抗原の少なくとも一部をさらに含む（Ｒ０３）、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含む（Ｄ３Ｎ）、組成物。
【請求項４８】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部を、天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合させることをさらに含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０の少なくとも一部を配列に含む（Ｄ３ＮＣｓ）、組成物。
【請求項５０】
カルボキシ−ドメイン０の一部に融合された少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含み、天然に生じるフラジェリンの一部がカルボキシ−ドメイン０の一部を欠いている（Ｄ３ＮＣｓ）、組成物。
【請求項５２】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１およびカルボキシ−ドメイン１（Ｄ１）を配列に含む、組成物。
【請求項５３】
カルボキシ−ドメイン１と融合された少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン０、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含むタンパク質部分（Ｒ３、Ｄ３、Ｒ３−２ｘＡｇ）を形成するステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項５５】
宿主細胞が原核宿主細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
宿主細胞が真核宿主細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
第２の核酸配列がタンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に連結される（Ｄ３）、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
タンパク質部分をコードする核酸配列のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間に少なくとも１つの抗原を含む第２の核酸配列を作動的に連結するステップをさらに含む（Ｒ３）、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ａ）タンパク質部分をコードする核酸のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２との間に少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を作動的に連結させることで、第２のタンパク質部分を形成するステップと、
ｂ）少なくとも１つの別の抗原をコードする第３の核酸配列を、第２のタンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に作動的に連結する（Ｒ３−２ｘＡｇ）ステップと、をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が、第２の核酸配列でコードされる抗原と類似である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が、第２の核酸配列でコードされる抗原とは別個である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
抗原がインフルエンザ抗原である、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
インフルエンザ抗原が赤血球凝集素インフルエンザウイルス抗原である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
インフルエンザ抗原がマトリクス２インフルエンザウイルス抗原である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含むタンパク質部分（Ｒ３Ｄ０、Ｒ０３）を形成するステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項６７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２との間に作動的に連結させる（Ｒ３Ｄ０）ステップをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
少なくとも１つの別の抗原をコードする第３の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に作動的に連結させる（Ｒ０３）ステップをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が第２の核酸配列でコードされる抗原と類似である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が第２の核酸配列でコードされる抗原とは別個である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含むタンパク質部分を形成する（Ｄ３Ｎ）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７２】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含み、なおかつカルボキシ−ドメイン０の一部を欠いたタンパク質部分を形成する（Ｄ３ＮＣｓ）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７４】
タンパク質部分から欠けているカルボキシ−ドメイン０の一部がＶＰＮＶＬＳＬＬＡ（配列番号６９３）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１およびカルボキシ−ドメイン１を配列に含むタンパク質部分を形成する（Ｄ１）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結するステップをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物であって、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと抗原とがナノ粒子と会合し、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、組成物。
【請求項７９】
モル比が、約０．５、約０．１、約０．０５、約０．０１、約０．００５、約０．００１、約０．０００５、約０．０００１、約０．００００５、約０．００００１からなる群から選択される、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８１】
抗原がナノ粒子の内面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８２】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子の外面と会合し、抗原がナノ粒子の内面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８３】
ナノ粒子の平均直径が、約２０ナノメートル、約２５ナノメートル、約３０ナノメートル、約４０ナノメートル、約５０ナノメートル、約７５ナノメートル、約１００ナノメートル、約１２５ナノメートル、約１５０ナノメートル、約１７５ナノメートル、約２００ナノメートルからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８４】
ナノ粒子が、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコライド）およびビスアシルオキシプロピルシステインからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８５】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが、Ｔｏｌｌ様受容体２アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８６】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがＴｏｌｌ様受容体５アゴニストである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがフラジェリンである、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
フラジェリンが、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）フラジェリン、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）フラジェリン、サルモネラミュンヘン（Ｓ． ｍｕｅｎｃｈｅｎ）フラジェリン、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）フラジェリン、緑膿菌（Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリン、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）フラジェリンからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
フラジェリンがヒンジ領域の少なくとも一部を欠いている、請求項８７に記載の組成物。
【請求項９０】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストおよび抗原とナノ粒子との会合が共有結合である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９１】
共有結合が非極性結合である、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９２】
共有結合が極性結合である、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９３】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストおよび抗原とナノ粒子との会合が非共有結合である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９４】
非共有結合が、水素結合、ファンデルワールス相互作用、イオン結合、疎水性相互作用、双極子−双極子相互作用からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが細胞のＴｏｌｌ様受容体に結合できるだけの十分な大きさのものである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９６】
ナノ粒子の大きさが細胞への侵入を可能にするものである、請求項９５に記載の組成物。
【請求項９７】
粒度が細胞への部分的な侵入を可能にするものである、請求項９５に記載の組成物。
【請求項９８】
抗原と会合した粒子の一部が、細胞の細胞外表面に残っている、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
抗原がタンパク質抗原である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項１００】
タンパク質抗原が、細菌タンパク質抗原、ウイルスタンパク質抗原、寄生虫タンパク質抗原、マイコプラズマタンパク質抗原、腫瘍タンパク質抗原、アレルゲンタンパク質抗原からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
タンパク質抗原がウイルスタンパク質抗原である、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０２】
ウイルスタンパク質抗原が、インフルエンザウイルスタンパク質抗原、呼吸器多核体ウイルスタンパク質抗原、フラビウイルスタンパク質抗原からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１０１に記載の組成物。
【請求項１０３】
ウイルスタンパク質抗原が、インフルエンザウイルスタンパク質抗原である、請求項１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
インフルエンザ抗原が少なくとも１つの内在性膜タンパク質抗原を含む、請求項１０３に記載の組成物。
【請求項１０５】
内在性膜タンパク質抗原が、赤血球凝集素膜タンパク質、ノイラミニダーゼ膜タンパク質、マトリクス２膜タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーの少なくとも一部を含む、請求項１０４に記載の組成物。
【請求項１０６】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
３つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部が粒子と会合している、請求項１０６に記載の組成物。
【請求項１０８】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つのマトリクス２膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０９】
内在性膜タンパク質が少なくとも４つのマトリクス２膜タンパク質を含む、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１０】
ナノ粒子が生分解性である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項１１１】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体７アゴニスト、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニスト、少なくとも１つの抗原を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物であって、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストと抗原とがナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、組成物。
【請求項１１２】
Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニストおよびＴｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストをさらに含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１３】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが細胞のＴｏｌｌ様受容体に結合できるだけの十分な大きさのものである、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１４】
ナノ粒子の大きさが、細胞へのナノ粒子の侵入を可能にするものである、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
細胞外ｐＨに対する細胞内でのｐＨの変化によって、少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子から解離する、請求項１１４に記載の組成物。
【請求項１１６】
Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストとＴｏｌｌ様受容体５アゴニストのモル濃度の合計と抗原モル濃度からなるモル比が約１以下である、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１７】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、を含む少なくとも１つの粒子を含む組成物であって、別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストならびに、任意に抗原が、粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストが粒子の外面と会合する、組成物。
【請求項１１８】
粒子が、ナノ粒子、リポソーム、ウイルス粒子、真菌粒子、誘導体化多糖、誘導体化タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１１７に記載の組成物。
【請求項１１９】
ナノ粒子組成物の製造方法であって、
ａ）少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部を、少なくとも１つのナノ粒子の少なくとも一部と組み合わせ、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストとナノ粒子との会合を形成するステップと、
ｂ）少なくとも１つの抗原の少なくとも一部を、ナノ粒子に会合したＴｏｌｌ様受容体アゴニストと組み合わせることで、ナノ粒子組成物を形成するステップと、を含み、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、製造方法。
【請求項１２０】
ナノ粒子組成物の製造方法であって、
ａ）少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部をナノ粒子と会合させるステップと、
ｂ）Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部を、ナノ粒子内に含有するステップと、
ｃ）Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含有するナノ粒子を、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と組み合わせることで、ナノ粒子組成物を形成するステップと、を含む、製造方法。
【請求項１２１】
被検体における免疫応答を刺激する方法であって、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含み、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと抗原とがナノ粒子と会合し、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、方法。
【請求項１２２】
被検体における免疫応答を刺激する方法であって、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体７アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含み、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストと抗原とがナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、方法。
【請求項１２３】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニストおよびＴｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部をさらに含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含む、被検体における免疫応答を刺激する方法であって、別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストならびに、任意に抗原が、ナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の表面と会合している、方法。
【請求項１２５】
抗原およびＴｏｌｌ様受容体５アゴニストが、ナノ粒子の外面と会合する、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１】
配列番号２９からの挿入または欠失を含めて、配列番号２９（Ｒ３）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約５０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項２】
８４、９１、９５、３２２、３２６からなる群から選択される配列番号２９の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項１に記載のアミノ酸配列。
【請求項３】
配列番号３０からの挿入または欠失を含めて、配列番号３０（Ｒ３Ｄ０）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約５０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項４】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３０の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項３に記載のアミノ酸配列。
【請求項５】
配列番号３１からの挿入または欠失を含めて、配列番号３１（Ｄ３Ｎ）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約６０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項６】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３１の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項５に記載のアミノ酸配列。
【請求項７】
配列番号３２からの挿入または欠失を含めて、配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓ）に示すような近接アミノ酸配列との同一性が少なくとも約６０．０％であるアミノ酸配列であって、単離されたアミノ酸配列がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、アミノ酸配列。
【請求項８】
３９、４６、５０、２７７、２８１からなる群から選択される配列番号３２の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換されている、請求項７に記載のアミノ酸配列。
【請求項９】
配列番号２９（Ｒ３）、配列番号３０（Ｒ３Ｄ０）、配列番号３１（Ｄ３Ｎ）、配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓ）、配列番号３３（Ｄ１）からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーに示されるようなアミノ酸配列。
【請求項１０】
配列番号２８（ＲＯコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、３９、４６、５０、３７８、３８２からなる群から選択される配列番号２８の少なくとも１つのアミノ酸残基がアラニン残基で置換され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項１１】
抗原がウイルスタンパク質抗原である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ウイルスタンパク質抗原がインフルエンザウイルスタンパク質抗原である、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
インフルエンザ抗原が少なくとも１つの内在性膜タンパク質抗原を含む、請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
内在性膜タンパク質抗原が、赤血球凝集素膜タンパク質、ノイラミニダーゼ膜タンパク質、マトリクス２膜タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーの少なくとも一部を含む、請求項１３に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
赤血球凝集素膜タンパク質が、配列番号２２８〜２８１、２８３〜２９５、４５６、４８１、４９９、６６２、６６５、８１３、８２６〜８３１からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項１５に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つのマトリクス２膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
内在性膜タンパク質が少なくとも４つのマトリクス２膜タンパク質を含む、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
マトリクス２膜タンパク質が、配列番号２９６、２９８、３００〜３２１、３２３〜３３６、４８５、５０７、６６６からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１７に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
配列番号２９（Ｒ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、抗原が配列番号２９のアミノ酸残基１９０と１９１の間であり、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２１】
配列番号２９（Ｄ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２２】
配列番号３０（Ｒ３Ｄ０コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、抗原が配列番号３０のアミノ酸残基１４５と１４６の間であり、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２３】
配列番号３０（ＲＯ３コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも２つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、少なくとも１つの抗原が配列番号３０のアミノ酸残基１４５と１４６の間であり、少なくとも１つの他の抗原が配列番号３０のアミノ酸残基３１８に融合され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２４】
抗原が別個の抗原である、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
抗原が類似の抗原である、請求項２３に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
配列番号２９（Ｒ３−２ｘＡｇコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも２つの抗原の少なくとも一部とを含む融合タンパク質であって、少なくとも１つの抗原が配列番号２９のアミノ酸残基１９０と１９１の間であり、少なくとも１つの他の抗原が配列番号２９のアミノ酸残基４０５に融合され、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項２７】
抗原が別個の抗原である、請求項２６に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
抗原が類似の抗原である、請求項２６に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
配列番号３１（Ｄ３Ｎコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３０】
配列番号３２（Ｄ３ＮＣｓコンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３１】
配列番号３３（Ｄ１コンストラクト）に示すような少なくとも１つのアミノ酸配列と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを配列に含む融合タンパク質であって、融合タンパク質がＴｏｌｌ様受容体５を活性化する、融合タンパク質。
【請求項３２】
融合タンパク質配列番号４５１〜４５３、４５５、４５７、４６０、４６３〜４６５、４６８、４７０〜４７４、５００〜５０６、５１１〜５１８、６６０および６６４を含む組成物をヒトに投与するステップを含む、ヒトにおいて免疫応答を刺激する方法であって、約１０．０μｇ用量、約５．０μｇ用量、約３．０μｇ用量、約２．５μｇ用量、約１．０μｇ用量、約０．５μｇ用量、約０．３μｇ用量、約０．２５μｇ用量、約０．１μｇ用量、約０．０５μｇ用量、約０．０２５μｇ用量、約０．０１μｇ用量からなる群から選択される少なくとも１つの用量で、融合タンパク質をヒトに投与する、方法。
【請求項３３】
ヒトに対する組成物の投与によって、ヒトの抗原源への曝露による感染に対する防御免疫を得る、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン０、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含む（Ｒ３、Ｄ３、Ｒ３−２ｘＡｇ）、組成物。
【請求項３５】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部と抗原が融合タンパク質の成分である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
抗原が、アミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間で天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部に融合される（Ｒ３）、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
抗原が、天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合される（Ｄ３）、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合された少なくとも１つの別の抗原の少なくとも一部をさらに含む（Ｒ３−２ＸＡｇ）、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
抗原および別の抗原が類似である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
抗原および別の抗原が別個である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４２】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含む（Ｒ３Ｄ０；Ｒ０３）、組成物。
【請求項４３】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部と抗原が融合タンパク質の成分である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
抗原が、アミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間で天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部に融合される（Ｒ３Ｄ０）、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン１に融合された少なくとも１つの別の抗原の少なくとも一部をさらに含む（Ｒ０３）、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含む（Ｄ３Ｎ）、組成物。
【請求項４８】
少なくとも１つの抗原の少なくとも一部を、天然に生じるフラジェリンタンパク質の当該一部のカルボキシ−ドメイン０に融合させることをさらに含む、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０の少なくとも一部を配列に含む（Ｄ３ＮＣｓ）、組成物。
【請求項５０】
カルボキシ−ドメイン０の一部に融合された少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含み、天然に生じるフラジェリンの一部がカルボキシ−ドメイン０の一部を欠いている（Ｄ３ＮＣｓ）、組成物。
【請求項５２】
天然に生じるフラジェリンタンパク質の一部を含む組成物であって、当該一部が、アミノ−ドメイン１およびカルボキシ−ドメイン１（Ｄ１）を配列に含む、組成物。
【請求項５３】
カルボキシ−ドメイン１と融合された少なくとも１つの抗原の少なくとも一部をさらに含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン０、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含むタンパク質部分（Ｒ３、Ｄ３、Ｒ３−２ｘＡｇ）を形成するステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項５５】
宿主細胞が原核宿主細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
宿主細胞が真核宿主細胞である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
第２の核酸配列がタンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に連結される（Ｄ３）、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
タンパク質部分をコードする核酸配列のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２の間に少なくとも１つの抗原を含む第２の核酸配列を作動的に連結するステップをさらに含む（Ｒ３）、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ａ）タンパク質部分をコードする核酸のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２との間に少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を作動的に連結させることで、第２のタンパク質部分を形成するステップと、
ｂ）少なくとも１つの別の抗原をコードする第３の核酸配列を、第２のタンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に作動的に連結する（Ｒ３−２ｘＡｇ）ステップと、をさらに含む、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が、第２の核酸配列でコードされる抗原と類似である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が、第２の核酸配列でコードされる抗原とは別個である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
抗原がインフルエンザ抗原である、請求項５４に記載の方法。
【請求項６４】
インフルエンザ抗原が赤血球凝集素インフルエンザウイルス抗原である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
インフルエンザ抗原がマトリクス２インフルエンザウイルス抗原である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含むタンパク質部分（Ｒ３Ｄ０、Ｒ０３）を形成するステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項６７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸のアミノ−ドメイン２とカルボキシ−ドメイン２との間に作動的に連結させる（Ｒ３Ｄ０）ステップをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
少なくとも１つの別の抗原をコードする第３の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列の３’末端に作動的に連結させる（Ｒ０３）ステップをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が第２の核酸配列でコードされる抗原と類似である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
第３の核酸配列でコードされる別の抗原が第２の核酸配列でコードされる抗原とは別個である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１、カルボキシ−ドメイン０を配列に含むタンパク質部分を形成する（Ｄ３Ｎ）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７２】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１、アミノ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン２、カルボキシ−ドメイン１を配列に含み、なおかつカルボキシ−ドメイン０の一部を欠いたタンパク質部分を形成する（Ｄ３ＮＣｓ）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７４】
タンパク質部分から欠けているカルボキシ−ドメイン０の一部がＶＰＮＶＬＳＬＬＡ（配列番号６９３）である、請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結させるステップをさらに含む、請求項７３に記載の方法。
【請求項７６】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストの製造方法であって、
ａ）タンパク質の一部を天然に生じるフラジェリンから分離することで、アミノ−ドメイン１およびカルボキシ−ドメイン１を配列に含むタンパク質部分を形成する（Ｄ１）ステップと、
ｂ）このタンパク質部分をコードする核酸配列を宿主細胞に形質転換するステップと、
ｃ）この宿主細胞を培養することで、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストを製造するステップと、を含む、製造方法。
【請求項７７】
少なくとも１つの抗原をコードする第２の核酸配列を、タンパク質部分をコードする核酸配列に作動的に連結するステップをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と少なくとも１つの抗原の少なくとも一部とを含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物であって、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと抗原とがナノ粒子と会合し、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、組成物。
【請求項７９】
モル比が、約０．５、約０．１、約０．０５、約０．０１、約０．００５、約０．００１、約０．０００５、約０．０００１、約０．００００５、約０．００００１からなる群から選択される、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８１】
抗原がナノ粒子の内面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８２】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子の外面と会合し、抗原がナノ粒子の内面と会合する、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８３】
ナノ粒子の平均直径が、約２０ナノメートル、約２５ナノメートル、約３０ナノメートル、約４０ナノメートル、約５０ナノメートル、約７５ナノメートル、約１００ナノメートル、約１２５ナノメートル、約１５０ナノメートル、約１７５ナノメートル、約２００ナノメートルからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８４】
ナノ粒子が、ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコライド）およびビスアシルオキシプロピルシステインからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８５】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが、Ｔｏｌｌ様受容体２アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体４アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８６】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストがＴｏｌｌ様受容体５アゴニストである、請求項８５に記載の組成物。
【請求項８７】
Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがフラジェリンである、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
フラジェリンが、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）フラジェリン、大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）フラジェリン、サルモネラミュンヘン（Ｓ． ｍｕｅｎｃｈｅｎ）フラジェリン、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）フラジェリン、緑膿菌（Ｐ． ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）フラジェリン、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌ． ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）フラジェリンからなる群から選択される少なくとも１つのメンバーを含む、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
フラジェリンがヒンジ領域の少なくとも一部を欠いている、請求項８７に記載の組成物。
【請求項９０】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストおよび抗原とナノ粒子との会合が共有結合である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９１】
共有結合が非極性結合である、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９２】
共有結合が極性結合である、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９３】
Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストおよび抗原とナノ粒子との会合が非共有結合である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９４】
非共有結合が、水素結合、ファンデルワールス相互作用、イオン結合、疎水性相互作用、双極子−双極子相互作用からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項９３に記載の組成物。
【請求項９５】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが細胞のＴｏｌｌ様受容体に結合できるだけの十分な大きさのものである、請求項７８に記載の組成物。
【請求項９６】
ナノ粒子の大きさが細胞への侵入を可能にするものである、請求項９５に記載の組成物。
【請求項９７】
粒度が細胞への部分的な侵入を可能にするものである、請求項９５に記載の組成物。
【請求項９８】
抗原と会合した粒子の一部が、細胞の細胞外表面に残っている、請求項９７に記載の組成物。
【請求項９９】
抗原がタンパク質抗原である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項１００】
タンパク質抗原が、細菌タンパク質抗原、ウイルスタンパク質抗原、寄生虫タンパク質抗原、マイコプラズマタンパク質抗原、腫瘍タンパク質抗原、アレルゲンタンパク質抗原からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
タンパク質抗原がウイルスタンパク質抗原である、請求項１００に記載の組成物。
【請求項１０２】
ウイルスタンパク質抗原が、インフルエンザウイルスタンパク質抗原、呼吸器多核体ウイルスタンパク質抗原、フラビウイルスタンパク質抗原からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１０１に記載の組成物。
【請求項１０３】
ウイルスタンパク質抗原が、インフルエンザウイルスタンパク質抗原である、請求項１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
インフルエンザ抗原が少なくとも１つの内在性膜タンパク質抗原を含む、請求項１０３に記載の組成物。
【請求項１０５】
内在性膜タンパク質抗原が、赤血球凝集素膜タンパク質、ノイラミニダーゼ膜タンパク質、マトリクス２膜タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーの少なくとも一部を含む、請求項１０４に記載の組成物。
【請求項１０６】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０７】
３つの赤血球凝集素膜タンパク質の少なくとも一部が粒子と会合している、請求項１０６に記載の組成物。
【請求項１０８】
内在性膜タンパク質が、少なくとも１つのマトリクス２膜タンパク質の少なくとも一部を含む、請求項１０５に記載の組成物。
【請求項１０９】
内在性膜タンパク質が少なくとも４つのマトリクス２膜タンパク質を含む、請求項１０８に記載の組成物。
【請求項１１０】
ナノ粒子が生分解性である、請求項７８に記載の組成物。
【請求項１１１】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体７アゴニスト、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニスト、少なくとも１つの抗原を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物であって、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストと抗原とがナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、組成物。
【請求項１１２】
Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニストおよびＴｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストをさらに含む、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１３】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストが細胞のＴｏｌｌ様受容体に結合できるだけの十分な大きさのものである、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１４】
ナノ粒子の大きさが、細胞へのナノ粒子の侵入を可能にするものである、請求項１１３に記載の組成物。
【請求項１１５】
細胞外ｐＨに対する細胞内でのｐＨの変化によって、少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストがナノ粒子から解離する、請求項１１４に記載の組成物。
【請求項１１６】
Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストとＴｏｌｌ様受容体５アゴニストのモル濃度の合計と抗原モル濃度からなるモル比が約１以下である、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１７】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、を含む少なくとも１つの粒子を含む組成物であって、別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストならびに、任意に抗原が、粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストが粒子の外面と会合する、組成物。
【請求項１１８】
粒子が、ナノ粒子、リポソーム、ウイルス粒子、真菌粒子、誘導体化多糖、誘導体化タンパク質からなる群から選択される少なくとも１つのメンバーである、請求項１１７に記載の組成物。
【請求項１１９】
ナノ粒子組成物の製造方法であって、
ａ）少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部を、少なくとも１つのナノ粒子の少なくとも一部と組み合わせ、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストとナノ粒子との会合を形成するステップと、
ｂ）少なくとも１つの抗原の少なくとも一部を、ナノ粒子に会合したＴｏｌｌ様受容体アゴニストと組み合わせることで、ナノ粒子組成物を形成するステップと、を含み、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、製造方法。
【請求項１２０】
ナノ粒子組成物の製造方法であって、
ａ）少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部をナノ粒子と会合させるステップと、
ｂ）Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部を、ナノ粒子内に含有するステップと、
ｃ）Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストを含有するナノ粒子を、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と組み合わせることで、ナノ粒子組成物を形成するステップと、を含む、製造方法。
【請求項１２１】
被検体における免疫応答を刺激する方法であって、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含み、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニストと抗原とがナノ粒子と会合し、抗原に対するＴｏｌｌ様受容体アゴニストのモル比が約１以下である、方法。
【請求項１２２】
被検体における免疫応答を刺激する方法であって、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体７アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含み、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニストと抗原とがナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の外面と会合する、方法。
【請求項１２３】
ナノ粒子が、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニストおよびＴｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部をさらに含む、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
少なくとも１つのＴｏｌｌ様受容体５アゴニストの少なくとも一部と、少なくとも１つの抗原の少なくとも一部と、Ｔｏｌｌ様受容体７アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体８アゴニスト、Ｔｏｌｌ様受容体９アゴニストからなる群から選択される少なくとも１つの別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストの少なくとも一部と、を含む少なくとも１つのナノ粒子を含む組成物を被検体に投与するステップを含む、被検体における免疫応答を刺激する方法であって、別のＴｏｌｌ様受容体アゴニストならびに、任意に抗原が、ナノ粒子中に含有され、Ｔｏｌｌ様受容体５アゴニストがナノ粒子の表面と会合している、方法。
【請求項１２５】
抗原およびＴｏｌｌ様受容体５アゴニストが、ナノ粒子の外面と会合する、請求項１２４に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１０Ｄ】
【図１０Ｅ】
【図１０Ｆ】
【図１０Ｇ】
【図１０Ｈ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【図２１】
【図２２Ａ】
【図２２Ｂ】
【図２２Ｃ】
【図２３】
【図２４Ａ】
【図２４Ｂ】
【図２４Ｃ】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８Ａ】
【図２８Ｂ】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７Ａ】
【図３７Ｂ】
【図３８Ａ】
【図３８Ｂ】
【図３９】
【図４０】
【図４１Ａ】
【図４１Ｂ】
【図４１Ｃ】
【図４２Ａ】
【図４２Ｂ】
【図４２Ｃ】
【図４３Ａ】
【図４３Ｂ】
【図４４Ａ】
【図４４Ｂ】
【図４５】
【図４６Ａ】
【図４６Ｂ】
【図４６Ｃ】
【図４６Ｄ】
【図４７Ａ】
【図４７Ｂ】
【図４７Ｃ】
【図４７Ｄ】
【図４８Ａ】
【図４８Ｂ】
【図４８Ｃ】
【図４８Ｄ】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図５０Ａ】
【図５０Ｂ】
【図５１】
【図５２Ａ】
【図５２Ｂ】
【図５３Ａ】
【図５３Ｂ】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１０Ｃ】
【図１０Ｄ】
【図１０Ｅ】
【図１０Ｆ】
【図１０Ｇ】
【図１０Ｈ】
【図１１Ａ】
【図１１Ｂ】
【図１１Ｃ】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１５】
【図１６Ａ】
【図１６Ｂ】
【図１７Ａ】
【図１７Ｂ】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１９Ａ】
【図１９Ｂ】
【図２０】
【図２１】
【図２２Ａ】
【図２２Ｂ】
【図２２Ｃ】
【図２３】
【図２４Ａ】
【図２４Ｂ】
【図２４Ｃ】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８Ａ】
【図２８Ｂ】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７Ａ】
【図３７Ｂ】
【図３８Ａ】
【図３８Ｂ】
【図３９】
【図４０】
【図４１Ａ】
【図４１Ｂ】
【図４１Ｃ】
【図４２Ａ】
【図４２Ｂ】
【図４２Ｃ】
【図４３Ａ】
【図４３Ｂ】
【図４４Ａ】
【図４４Ｂ】
【図４５】
【図４６Ａ】
【図４６Ｂ】
【図４６Ｃ】
【図４６Ｄ】
【図４７Ａ】
【図４７Ｂ】
【図４７Ｃ】
【図４７Ｄ】
【図４８Ａ】
【図４８Ｂ】
【図４８Ｃ】
【図４８Ｄ】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図５０Ａ】
【図５０Ｂ】
【図５１】
【図５２Ａ】
【図５２Ｂ】
【図５３Ａ】
【図５３Ｂ】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【公表番号】特表２０１１−５１９８２８（Ｐ２０１１−５１９８２８Ａ）
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０５０３７（Ｐ２０１１−５０５０３７）
【出願日】平成２１年４月１７日（２００９．４．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００２４２８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２８９５０
【国際公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【出願人】（５０７２０３５２６）バクシネート コーポレーション (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月１７日（２００９．４．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００２４２８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２８９５０
【国際公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【出願人】（５０７２０３５２６）バクシネート コーポレーション (3)
【Ｆターム（参考）】
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