プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性の低い治療用ヒトアルブミン溶液、およびそれを得る方法
【課題】プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性の低い治療用ヒトアルブミン溶液、およびそれを得る方法
【解決手段】本発明は、アルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量のアンチトロンビンを有することを特徴とする、プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性が低く、長期間にわたり安定性を有するヒト由来の精製アルブミン溶液、並びにヒト血漿の分画中におけるアンチトロンビンの部分的抽出によるその製造方法を開示するものである。
【解決手段】本発明は、アルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量のアンチトロンビンを有することを特徴とする、プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性が低く、長期間にわたり安定性を有するヒト由来の精製アルブミン溶液、並びにヒト血漿の分画中におけるアンチトロンビンの部分的抽出によるその製造方法を開示するものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、長期にわたり安定しており、低いプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を有する治療用ヒトアルブミン溶液に関し、かつヒト由来の精製アルブミン溶液のプレカリクレインアクチベータ活性を下げる方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
凝固因子ＸＩＩ（ハーゲマン因子）は、約８００００の分子量を有するタンパク質であり、活性型では約２８０００の分子量を有する断片から成る。この活性型因子ＸＩＩ（ｆＸＩＩａ）はプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）として働く。
【０００３】
血液凝固メカニズムにおけるその役割とは別に、ＰＫＡはプレカリクレインに作用し、キニノゲンからブラジキニンへの変換に不利に影響を及ぼすカリクレインへの変換を触媒する。ブラジキニンは、低血圧症を起こし得る強力な血管拡張薬である。生成されたカリクレインは、このプロセスにフィードバックするＰＫＡの生成も触媒する。
【０００４】
精製ヒト血漿アルブミン溶液は治療的に有用であり、とりわけ心臓血管外科における血液量の増加に広く用いられている。
【０００５】
しかし、ヒトアルブミン溶液の急速な補液によって起こる降圧効果は副作用反応の一つであり、特定の症例では重篤であり、アルブミンの補液に伴って頻繁に起こる。
【０００６】
ＰＫＡは、アルブミン精製プロセスで異物面に接触することによりＸＩＩ因子から生成するために、このヒトアルブミン溶液に混在物として存在する可能性があり、前記溶液におけるその含有量は３５ＵＩ／ｍｌ未満のレベルに制限されている（欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ））。
【０００７】
製造日に低いＰＫＡレベルである市販のアルブミンのバッチにおいて、設定された安定期間内の貯蔵中にＰＫＡレベルが時間とともに増加することがわかっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
この現況技術を出発として、発明者は、低いプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を有しており、予め設定された長期にわたる貯蔵期間内のいかなる時点でもプレカリクレインアクチベータが非常に低レベルである治療用ヒトアルブミン溶液を臨床的に利用できるように、設定された貯蔵期間における市販のアルブミン溶液中のＰＫＡレベルの顕著な安定性も確保している治療用ヒトアルブミン溶液を見出すことを考えた。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明者は、広範囲にわたる研究および調査を行った後、最終製品のアルブミンにおけるアンチトロンビン量に制限を加えること、特にアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上のアンチトロンビンを含有させることで、ヒトアルブミン溶液においてＰＫＡ活性の発生が期待でき、同時に長期にわたり高度の安定性を得られることを発見し、本発明に到った。
【００１０】
本発明によるアルブミン溶液は、ヒト血漿の分画段階におけるアンチトロンビンの部分的抽出により得られ、具体的には、例えば血漿、寒冷沈降反応の上清、フラクションＩ上清またはフラクションＩＩ＋ＩＩＩ上清からのクロマトグラフ抽出により得られる。
【００１１】
例えば、溶出液が最終製品のアルブミン中でアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の濃度の活性アンチトロンビンを検出するのに十分なアンチトロンビンを含むようにクロマトグラフ段階を制御するパラメーターを操る、例えばクロマトグラフィーのロード関係を変更することによって、このアンチトロンビンの部分的抽出を行ってもよい。
【００１２】
好ましい実施形態では、アルブミンの最終バッチをもたらす全量の一部だけにクロマトグラフ抽出を行った後、この抽出を受けた材料を、抽出を受けていない材料と混合する。これは、アンチトロンビンを抽出した血漿、（寒冷沈降物、ＦｒＩまたはＦｒＩＩ＋ＩＩＩの）上清またはフラクション（ＦｒＩＶまたはＦｒＶ）を前記の抽出を受けていないものと混合することによって行うことができる。この混合物は、最終製品のアルブミン中でアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上のアンチトロンビン濃度を検出するのに十分な割合にあるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明によるアルブミン溶液の実例を、単なる実施例として以下に示す。
【実施例１】
【００１４】
アルブミンをＦｒＶから調製し、アンチトロンビンをＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清からヘパリンアガロースアフィニティークロマトグラフィーにより抽出した。
表１は、クロマトグラフィーによりアンチトロンビンを抽出したＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清の体積パーセント％の関数として、アルブミン（２０％濃度の最終製品）中のアンチトロンビン含有量を示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】
０、５０、８０および１００％の上清フラクションにおいてアンチトロンビンをそれぞれ抽出し、アンチトロンビンを抽出していない対応量のＦＩＩ＋ＦＩＩＩと混合した。
【００１７】
ＦＩＩ＋ＩＩＩ上清から１００％のアンチトロンビンを抽出したとき、アンチトロンビンはアルブミン（最終製品）で全く検出されない（本方法の検出限界を下回る値である）ことがわかった。また、ＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清から８０％のアンチトロンビンを抽出し、（アンチトロンビンを抽出していない）残りの２０％と混合したとき、２０％アルブミン溶液ｍｌあたり０．００７８ｍｇのアンチトロンビンが検出されることがわかった。
【００１８】
表２は、このＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清で得られるアンチトロンビンの抽出率に関連した２０％アルブミン溶液（最終製品）における５℃でのＰＫＡ活性（ＵＩ）の経時進行を示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】
ＦＩＩ＋ＩＩＩ上清から１００％のアンチトロンビンを抽出したプロセスでは、アルブミン（最終製品）中のＰＫＡ活性レベルが最初から高く、１２カ月で欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）による制限に迫るほど上昇することがわかった。逆に、制御され、または部分的にアンチトロンビンの抽出を行ったプロセスでは、アルブミン溶液中のＰＫＡ活性レベルは低いか、または検出されないレベルのままである。
本明細書の説明は単なる実施例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。本発明は、その知見を用いて当業者が実施可能で本発明の範囲に含まれる均等物および変形例を十分考慮した上で、付記の特許請求の範囲のみにより定義される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、長期にわたり安定しており、低いプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を有する治療用ヒトアルブミン溶液に関し、かつヒト由来の精製アルブミン溶液のプレカリクレインアクチベータ活性を下げる方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
凝固因子ＸＩＩ（ハーゲマン因子）は、約８００００の分子量を有するタンパク質であり、活性型では約２８０００の分子量を有する断片から成る。この活性型因子ＸＩＩ（ｆＸＩＩａ）はプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）として働く。
【０００３】
血液凝固メカニズムにおけるその役割とは別に、ＰＫＡはプレカリクレインに作用し、キニノゲンからブラジキニンへの変換に不利に影響を及ぼすカリクレインへの変換を触媒する。ブラジキニンは、低血圧症を起こし得る強力な血管拡張薬である。生成されたカリクレインは、このプロセスにフィードバックするＰＫＡの生成も触媒する。
【０００４】
精製ヒト血漿アルブミン溶液は治療的に有用であり、とりわけ心臓血管外科における血液量の増加に広く用いられている。
【０００５】
しかし、ヒトアルブミン溶液の急速な補液によって起こる降圧効果は副作用反応の一つであり、特定の症例では重篤であり、アルブミンの補液に伴って頻繁に起こる。
【０００６】
ＰＫＡは、アルブミン精製プロセスで異物面に接触することによりＸＩＩ因子から生成するために、このヒトアルブミン溶液に混在物として存在する可能性があり、前記溶液におけるその含有量は３５ＵＩ／ｍｌ未満のレベルに制限されている（欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ））。
【０００７】
製造日に低いＰＫＡレベルである市販のアルブミンのバッチにおいて、設定された安定期間内の貯蔵中にＰＫＡレベルが時間とともに増加することがわかっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
この現況技術を出発として、発明者は、低いプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を有しており、予め設定された長期にわたる貯蔵期間内のいかなる時点でもプレカリクレインアクチベータが非常に低レベルである治療用ヒトアルブミン溶液を臨床的に利用できるように、設定された貯蔵期間における市販のアルブミン溶液中のＰＫＡレベルの顕著な安定性も確保している治療用ヒトアルブミン溶液を見出すことを考えた。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明者は、広範囲にわたる研究および調査を行った後、最終製品のアルブミンにおけるアンチトロンビン量に制限を加えること、特にアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上のアンチトロンビンを含有させることで、ヒトアルブミン溶液においてＰＫＡ活性の発生が期待でき、同時に長期にわたり高度の安定性を得られることを発見し、本発明に到った。
【００１０】
本発明によるアルブミン溶液は、ヒト血漿の分画段階におけるアンチトロンビンの部分的抽出により得られ、具体的には、例えば血漿、寒冷沈降反応の上清、フラクションＩ上清またはフラクションＩＩ＋ＩＩＩ上清からのクロマトグラフ抽出により得られる。
【００１１】
例えば、溶出液が最終製品のアルブミン中でアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の濃度の活性アンチトロンビンを検出するのに十分なアンチトロンビンを含むようにクロマトグラフ段階を制御するパラメーターを操る、例えばクロマトグラフィーのロード関係を変更することによって、このアンチトロンビンの部分的抽出を行ってもよい。
【００１２】
好ましい実施形態では、アルブミンの最終バッチをもたらす全量の一部だけにクロマトグラフ抽出を行った後、この抽出を受けた材料を、抽出を受けていない材料と混合する。これは、アンチトロンビンを抽出した血漿、（寒冷沈降物、ＦｒＩまたはＦｒＩＩ＋ＩＩＩの）上清またはフラクション（ＦｒＩＶまたはＦｒＶ）を前記の抽出を受けていないものと混合することによって行うことができる。この混合物は、最終製品のアルブミン中でアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上のアンチトロンビン濃度を検出するのに十分な割合にあるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明によるアルブミン溶液の実例を、単なる実施例として以下に示す。
【実施例１】
【００１４】
アルブミンをＦｒＶから調製し、アンチトロンビンをＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清からヘパリンアガロースアフィニティークロマトグラフィーにより抽出した。
表１は、クロマトグラフィーによりアンチトロンビンを抽出したＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清の体積パーセント％の関数として、アルブミン（２０％濃度の最終製品）中のアンチトロンビン含有量を示す。
【００１５】
【表１】
【００１６】
０、５０、８０および１００％の上清フラクションにおいてアンチトロンビンをそれぞれ抽出し、アンチトロンビンを抽出していない対応量のＦＩＩ＋ＦＩＩＩと混合した。
【００１７】
ＦＩＩ＋ＩＩＩ上清から１００％のアンチトロンビンを抽出したとき、アンチトロンビンはアルブミン（最終製品）で全く検出されない（本方法の検出限界を下回る値である）ことがわかった。また、ＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清から８０％のアンチトロンビンを抽出し、（アンチトロンビンを抽出していない）残りの２０％と混合したとき、２０％アルブミン溶液ｍｌあたり０．００７８ｍｇのアンチトロンビンが検出されることがわかった。
【００１８】
表２は、このＦｒＩＩ＋ＩＩＩ上清で得られるアンチトロンビンの抽出率に関連した２０％アルブミン溶液（最終製品）における５℃でのＰＫＡ活性（ＵＩ）の経時進行を示す。
【００１９】
【表２】
【００２０】
ＦＩＩ＋ＩＩＩ上清から１００％のアンチトロンビンを抽出したプロセスでは、アルブミン（最終製品）中のＰＫＡ活性レベルが最初から高く、１２カ月で欧州薬局方（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）による制限に迫るほど上昇することがわかった。逆に、制御され、または部分的にアンチトロンビンの抽出を行ったプロセスでは、アルブミン溶液中のＰＫＡ活性レベルは低いか、または検出されないレベルのままである。
本明細書の説明は単なる実施例に過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。本発明は、その知見を用いて当業者が実施可能で本発明の範囲に含まれる均等物および変形例を十分考慮した上で、付記の特許請求の範囲のみにより定義される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト由来の精製アルブミン溶液におけるプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を下げ、長期にわたりこれを安定化させる方法であって、前記最終製品のアルブミンがアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量の活性アンチトロンビンを有するように、ヒト血漿の分画中にアンチトロンビンを部分的に抽出することを特徴とする方法。
【請求項２】
クロマトグラフィーにより前記アンチトロンビンの部分的な、制御された抽出を行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出を前記血漿について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項４】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出を寒冷沈降反応の上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項５】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出をフラクションＩ上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項６】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出をフラクションＩＩおよびＩＩＩ上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項７】
前記アンチトロンビンをアフィニティークロマトグラフィーで抽出することを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項８】
前記アンチトロンビンをイオン交換クロマトグラフィーで抽出することを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項９】
プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性が低く、長期にわたり安定性を有するヒト由来の精製アルブミン溶液であって、アルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量の活性アンチトロンビンを有することを特徴とするヒト由来の精製アルブミン溶液。
【請求項１】
ヒト由来の精製アルブミン溶液におけるプレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性を下げ、長期にわたりこれを安定化させる方法であって、前記最終製品のアルブミンがアルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量の活性アンチトロンビンを有するように、ヒト血漿の分画中にアンチトロンビンを部分的に抽出することを特徴とする方法。
【請求項２】
クロマトグラフィーにより前記アンチトロンビンの部分的な、制御された抽出を行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出を前記血漿について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項４】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出を寒冷沈降反応の上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項５】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出をフラクションＩ上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項６】
前記アンチトロンビンのクロマトグラフ抽出をフラクションＩＩおよびＩＩＩ上清について行うことを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項７】
前記アンチトロンビンをアフィニティークロマトグラフィーで抽出することを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項８】
前記アンチトロンビンをイオン交換クロマトグラフィーで抽出することを特徴とする、請求項１に記載のアルブミンを得る方法。
【請求項９】
プレカリクレインアクチベータ（ＰＫＡ）活性が低く、長期にわたり安定性を有するヒト由来の精製アルブミン溶液であって、アルブミンに対して０．０３ｍｇ／ｇ以上の含有量の活性アンチトロンビンを有することを特徴とするヒト由来の精製アルブミン溶液。
【公開番号】特開２００６−３６７７１（Ｐ２００６−３６７７１Ａ）
【公開日】平成１８年２月９日（２００６．２．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２０８１６３（Ｐ２００５−２０８１６３）
【出願日】平成１７年７月１９日（２００５．７．１９）
【出願人】（５０５２７１０３５）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年２月９日（２００６．２．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月１９日（２００５．７．１９）
【出願人】（５０５２７１０３５）
【Ｆターム（参考）】
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