マラリア治療用のフェロキンとアーテミシニン誘導体との組合せ
本発明は、遊離塩基、塩、水和物または溶媒和物の形態におけるフェロキンとおよびアーテミシニン誘導体とを含む組合せに関する。本発明は、薬学的に許容される塩のうちの１つの形態におけるフェロキン、フェロキン水和物またはフェロキン溶媒和物とおよび少なくとも１種のアーテミシニン誘導体とを含む医薬組成物にも関する。本発明はさらに、マラリアを治療または予防するための薬剤を調製するための組合せの使用に関する。最後に、本発明はマラリアを治療または予防するためのキットに関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗マラリア活性成分、すなわちフェロキンとアーテミシニン誘導体の新規な組合せに関し、この様な組合せを含みマラリアの治療および／または予防に有用である医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは世界における主な感染性死亡原因の１つであり、年間５億人を超える人が罹患し、そのうち年間３００万人が死亡する。この疫病は主にサハラ以南のアフリカ、東南アジアおよびラテンアメリカを襲う。
【０００３】
ハマダラカ属のカにより運ばれるプラスモディウム属の原虫の４種類（熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐ．ｖｉｖａｘ）および卵形マラリア原虫（Ｐ．ｏｖａｌｅ））がマラリアを伝播する。アフリカにおいて蔓延している熱帯熱マラリア原虫は最も悪性の原虫でありこの疾患の致死的病態の原因である。
【０００４】
最近数年間にわたり認められたこの疾患の著しい増加はいくつかの要因によるものであり、このなかには、熱帯熱マラリア原虫の多くの株の、クロロキン、メフロキン、アモジアキン、その他のピリメタミンなどの慣用の医薬製品に対する耐性がある。
【０００５】
１９７２年に植物、青蒿（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ）（チンハオス（ｑｉｎｇｈａｏｓｕ））から単離され、中国において数世紀にわたり使用されたアーテミシニンは強力な抗マラリア活性を有する。アーテメター（ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アーテエター（ａｒｔｅｅｔｈｅｒ）およびアーテスネート（ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）などの薬理学的特徴を増強した誘導体もまた市販されている。
【０００６】
今日、アーテミシニンおよびこの誘導体は熱帯熱マラリア原虫に対して最も効果的な活性成分の１つである。しかし、単剤療法におけるアーテミシニンまたはこの誘導体の使用は耐性原虫株の選択における原因要素となることがある。
【０００７】
今や科学会は活性成分の組合せ、特にアーテミシニンまたはこの誘導体と他の抗マラリア活性成分との組合せの使用を推奨している。このＡＣＴ（アーテミシニンを基とする併用療法（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ−ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ））と呼ばれるこの多剤療法は、２００２年から世界保健機関（ＷＨＯ）によって推奨されている。これは多くの利益：耐性株における治療効果の改善、耐性の出現に対する２つの活性成分の保護、疾患の伝染および耐性伝播の減少を提供する。
【０００８】
アーテスネートとアモジアキンの合剤（Ａｒｓｕｃａｍ（登録商標））と同様に、Ｃｏａｒｔｅｍ（登録商標）の名称で市販されているアーテメターとルメファントリン（ｌｕｍｅｆａｎｔｒｉｎｅ）の合剤も例えば提案されている。
【０００９】
ＷＨＯにより支援されている戦略に従って、抗マラリア活性成分の新規の組合せの探索は継続されるべきである。
【００１０】
文献において記載されている種々の抗マラリア活性成分において、フェロキンは熱帯熱マラリア原虫のクロロキン耐性株に対して活性のある分子である。フェロキンは、フェロセン−クロロキンまたはフェロクロロキンとも呼ばれ、７−クロロ−４［（｛２−［（Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノ）メチル］フェロセニル｝メチル）アミノ］キノリンに相当する。これはフェロセン環に結合した４−アミノキノリンの誘導体である。この分子は特に特許ＥＰ ０８２４５３６およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４０，３７１５−３７１８、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，１９９８，４２，５４０−５４４、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，５８９，５９−６５およびＪ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍ．，２００４，６８９，４６７８−４６８２において記載されている。
【発明の開示】
【００１１】
クロロキンとアーテスネートの組合せは満足できる程度の効果は達成せず（Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．，２００３，６９（１），１９−２５およびＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ，２００３，９７，４２９−４３３）、耐性株、特にクロロキン耐性株の出現を誘発するが、フェロキンとアーテミシニン誘導体、特にアーテスネート、アーテメターまたはアーテエターの組合せはマラリアの治療および／または予防ならびに、これら２つの活性成分を単剤療法で投与した場合のこれらに耐性のある原虫株の出現を未然に防ぎ、減少させ、またさらに避けることに特に効果的であることが、今や驚くべきことに見いだされた。
【００１２】
したがって、本発明の主題は、フェロキン（遊離塩基型を下記に示す分子（１）、式中、Ｆｅはフェロセン環を表す。）とアーテミシニン誘導体の新規の組合せである。
【００１３】
【化１】
【００１４】
本発明による組合せにおいて、フェロキンは遊離塩基の型であってもよく、また塩、水和物または溶媒和物（これは、１つまたはそれ以上の水または溶媒の分子とフェロキンの会合物または結合物とそれぞれ定義される。）の型であってもよい。フェロキンは、有利には遊離塩基型において使用される。
【００１５】
本発明による組合せに含まれるアーテミシニン誘導体は有利にはアーテスネート（ＩＩ）またはアーテメター（ＩＩＩ）から成る。
【００１６】
【化２】
【００１７】
本発明の主題は、活性成分としてフェロキン（Ｉ）とおよびアーテミシニン誘導体、有利にはアーテスネート（ＩＩ）またはアーテメター（ＩＩＩ）との組合せを含む医薬組成物でもある。
【００１８】
この様な医薬組成物は、フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とおよび少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量、さらに少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む。前記賦形剤は、当業者に既知の一般的賦形剤から所望の投与の方法および医薬形態に従って選択される。
【００１９】
適切な単位投与形態は、錠剤、ソフトまたは硬ゼラチンカプセル、粉末、顆粒および経口溶液または懸濁液などの経口投与形態、舌下、頬側用、気管内用、眼内もしくは鼻腔投与用または吸入投与用の形態、局所、経皮、皮下、筋肉内または静脈内投与用の形態、直腸内投与用の形態ならびにインプラントを含む。局所適用には、本発明による化合物は、クリーム、ゲル、軟膏またはローション剤中に使用できる。
【００２０】
好ましい投与経路は、経口投与、直腸内投与および注射投与である。
【００２１】
例えば、錠剤の形態において固体組成物を調製する場合、活性成分を、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、アラビアゴム、マンニトール、微細結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスカルメロースなどの１種またはそれ以上の医薬用賦形剤と混合する。錠剤は、ショ糖、セルロース誘導体または被覆に適する他の物質によって被覆することができる。錠剤は、直接圧縮、乾式造粒、湿式造粒またはホットメルトなどの種々の技術により製造することができる。
【００２２】
活性成分を希釈剤と混合し、得られた混合物をソフトまたは硬ゼラチンカプセルに注入することによりゼラチンカプセルの形態における製剤を得ることもまたできる。
【００２３】
非経口投与用には、例えばプロピレングリコールまたはブチレングリコールなどの薬理学的に相容性の分散剤および／または湿潤剤を含む水性懸濁液、等浸透圧食塩水溶液または滅菌済み注射可能溶液を使用する。
【００２４】
経口投与用には、本発明による組合せの２つの活性成分それぞれの日用量は以下のとおりである：
フェロキン：１人１日あたり５０から１６００ｍｇ、好ましくは２００から１２００ｍｇ、さらに好ましくは４００から８００ｍｇ；
アーテミシニン誘導体：１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは２から６ｍｇ／ｋｇ／日、さらに好ましくは約４ｍｇ／ｋｇ／日。
【００２５】
さらに高いまたは低い投与量が適当である特定のケースもある。この様な投与量も本発明の文脈から逸脱しない。通常の習慣に従って、各患者に適する投与量は投与方法ならびにこの患者の体重および応答に応じて医師により決定される。
【００２６】
本発明による組合せは、２つの活性成分のそれぞれを１日１回またはそれ以上、好ましくは１日１回３日間連続して投与することを意図する。この限定した投与期間は、アーテミシニン誘導体を用いる単剤療法に推奨される７日間と比較して、患者の治療への忠実さを改善させ、したがって、長期的には原虫の耐性を誘発する治療の早期中断を回避することにおいて、特に有利である。
【００２７】
２つの活性成分のそれぞれの投与は同時にあるいは別々にまたは時間をおいて（逐次投与）行うことができる。
【００２８】
同時に投与を行う場合は、２つの活性成分は、経口投与に適する錠剤またはゼラチンカプセルなどの１つの医薬形態内で組み合わせることができる（固定組合せ）。
【００２９】
本発明による組合せの２つの活性成分はまた、その投与が同時であるかどうかにかかわらず、別の医薬形態内に含むこともできる。この結果、本発明による組合せは、第１にフェロキンまたはフェロキンの塩、水和物もしくは溶媒化合物および第２にアーテスネートまたはアーテメターなどの少なくとも１種のアーテミシニン誘導体を含むキットの形態であることができ、前記フェロキンと前記アーテミシニン誘導体は別々の区画中にあり、同時に、別々に、または時間をおいての投与（逐次投与）することが意図される。
【００３０】
例として、錠剤の形態におけるフェロキンの単位投与形態は下記の成分を含むことができる：
フェロキン ５０ｍｇ
マンニトール ２２４ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム ６ｍｇ
コーンスターチ １５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ｍｇ
【００３１】
同様に例として、錠剤の形態においてアーテスネートの単位投与形態はアーテスネート５０または１００ｍｇと、例えばラクトース、クロスカルメロース、無水コロイド状シリカ、微細結晶性セルロースおよびステアリン酸マグネシウムの一般的賦形剤を含むことができる。
【００３２】
本発明の主題は、マラリアの治療および／または予防の方法でもあり、これは、フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物または溶媒化合物の治療有効量および少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量を患者に投与することを含み、上記のように、前記投与量は既同時または他に逐次的に前記患者に投与する。
【００３３】
本発明による組合せは、熱帯熱マラリア原虫型の原虫プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ株（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｎｃｋｅｉ ｖｉｎｃｋｅｉ）を感染させたマウスにおけるインビボ生化学試験の対象となっており、これによりマラリアの治療への効果を明らかにすることが可能となった。
【００３４】
アーテスネートを用いて実施した以下の試験を例として示す。アーテミシニン誘導体は全て同じ代謝産物（ジヒドロアーテミシニン）を有し、一般に半減期が短いことから、アーテスネートで得られた本試験の結果はアーテメターまたはアーテエターなどの他のアーテミシニン誘導体に一般化することができる。
【００３５】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイを感染させたマウスにおけるフェロキン、アーテスネートおよびこれら２つの化合物の組合せのインビボ活性の測定
【００３６】
１．使用したインビボ試験の記載
８週１日齢のメスＳｗｉｓｓマウスにプラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ型の原虫（Ｒｏｄｈａｉｎ，１９５２）を接種させる。マウスはあらかじめ２週間気候馴化させておく。マウスには食物および飲料を自由摂取させる。
【００３７】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ株は、リン酸緩衝食塩水（０．９％）中に懸濁した寄生赤血球１０７個を毎週マウスに感染させることにより維持する。
【００３８】
治療第１日目（Ｄ０）、感染（リン酸緩衝食塩水（０．９％）中に懸濁した寄生赤血球１０７個）１時間後、適切ならば、フェロキン、アーテスネートまたはこれら２つの活性成分の混合物をマウスに経口投与する。続く３日間（Ｄ１からＤ３）この投与を繰り返す（Ｐｅｔｅｒ，１９８７）。２つの製品を組み合わせて投与する場合は、アーテスネートを最初に投与し、２番目に４５分後にフェロキンを投与する。第４日目、マウスの尾から血液スメアを採取する。試料をプレート上に固定する。顕微鏡下で寄生された血液細胞の数を数える。パラサイテミアは、１０００細胞の試料あたりの試料中に含まれる感染赤血球の百分率で表す。投与あたり６または７匹のマウスを使用する。
【００３９】
Ｄ４における塗沫標本で原虫の痕跡を示さないマウスは、原虫のあらゆる可能な急増を検出するために１０日目、１７日目、２４日目、３１日目、３８日目、４５日目、５２日目および５９日目に再度検査する。
【００４０】
化合物の投与用の希釈懸濁液の調製
−フェロキン懸濁液の調製
（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏのフェロキン、バッチＭＹ１８．００８８）
フェロキンをメチルセルロース（０／５（Ｗ／Ｗ））およびポリソルベート８０（０／５（Ｗ／Ｗ））と混合する。調製物は冷暗所（４℃）において少なくとも７日間、周囲温度において４時間安定である。フェロキンの最終懸濁液の濃度範囲は０．１から１００ｍｇ／ｍｌである。
−アーテスネート懸濁液の調製
（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏのアーテスネート、バッチ１．０４）
アーテスネートをメチルセルロース（０／５（Ｗ／Ｗ））およびポリソルベート８０（０／５（Ｗ／Ｗ））と混合する。調製物は周囲温度の暗所において４時間安定である。アーテスネートの最終懸濁液の濃度範囲は０．８から２０ｍｇ／ｍｌである。
【００４１】
２．単独投与時のアーテスネートおよびフェロキンのＩＣ５０値および治癒量の決定
ＩＣ５０値の決定法
ＩＣ５０は、感染（Ｄ０）および４日間の治療（Ｄ０、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３）後の４日目（Ｄ４）において血液パラサイテミアを５０％阻害するｍｇ／ｋｇ／日での濃度と定義する。０％阻害は感染後未治療のマウスにおいて観察されるパラサイテミアの平均に相当する。１００％阻害は、０．１％未満の非常に少ないまたはゼロパラサイテミアに相当する。ＩＣ５０値は、濃度の対数で表される投与量−応答曲線を直線内挿することにより決定する。
【００４２】
フェロキンのＩＣ５０は、１から１０ｍｇ／ｋｇ／日の濃度の投与後に決定する。使用する濃度は、０、１、１．４７、２．１、３．２、４．６、６．８および１０ｍｇ／ｋｇ／日で４日間である。
【００４３】
アーテスネートのＩＣ５０は、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の濃度の投与後に決定する。使用する濃度は、０、１、１．６、２．５、３．９、６．１、９．５および１５ｍｇ／ｋｇ／日で４日間である。
【００４４】
得られたＩＣ５０を下記の表１に示す：
【００４５】
【表１】
【００４６】
フェロキンについては、治癒量は１０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００４７】
アーテスネートについては、本試験において治癒量に達しなかった、したがって、治癒量は１５ｍｇ／ｋｇ／日より多い。
【００４８】
アーテスネートおよびフェロキンの非治癒量（最適より少ない）、したがってこれは２つの化合物の試験でそれぞれに得られたＩＣ５０値に近い値での相互作用の試験を実施することは重要である。
【００４９】
フェロキンはＩＣ５０値に近い治癒量（治療マウスの完全生存）を有している。アーテスネートについては、治癒量とＩＣ５０値の間の差が大きく、したがってＩＣ５０値より多い投与量を使用することができる。したがって、４日間のフェロキン３ｍｇ／ｋｇ／日およびアーテスネート６ｍｇ／ｋｇ／日の同時および単独投与を、組合せの試験において考慮した。
【００５０】
３．プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ原虫株におけるフェロキン／アーテスネート組合せのインビボ抗マラリア活性の測定
【００５１】
３．１．パラサイテミア百分率の決定
４日間のフェロキン３ｍｇ／ｋｇ／日およびアーテスネート６ｍｇ／ｋｇ／日の組合せおよび単独投与を感染マウスについて実施し、治療を受けない群と比較した。表２は感染４日後に観察された平均パラサイテミア（感染赤血球の百分率）を示す。
【００５２】
【表２】
【００５３】
表２に示すように、４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンと６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネートの組合せ投与は、２つの製品の単独投与と比較して感染動物のパラサイテミアを有意に減少させることができる。
【００５４】
３．２マウスの死亡率の決定
感染後５日目から毎日、死亡したマウスの数を数え、死亡率を決定する（死亡マウスの数 対 考察した群のマウスの数）。治癒量は、群の全てのマウスが生存するようになる最初の投与量である。
【００５５】
図１に示すように、動物の生存期間は、単独投与（４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンまたは６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネート）と比較して、化合物の適量より少ない投与量（４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンと６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネート）の組合せ投与により改善される。
【００５６】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイに感染させたマウスにおいてインビボで得られた結果は、２つの活性成分間に拮抗作用が存在しないことを明らかに示し、本発明によるアーテスネート（または一般的なアーテミシニン誘導体）とフェロキンの組合せがマラリアの治療に対して有益であることを証明している。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】感染後５日目以後の動物の生存百分率を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗マラリア活性成分、すなわちフェロキンとアーテミシニン誘導体の新規な組合せに関し、この様な組合せを含みマラリアの治療および／または予防に有用である医薬組成物にも関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは世界における主な感染性死亡原因の１つであり、年間５億人を超える人が罹患し、そのうち年間３００万人が死亡する。この疫病は主にサハラ以南のアフリカ、東南アジアおよびラテンアメリカを襲う。
【０００３】
ハマダラカ属のカにより運ばれるプラスモディウム属の原虫の４種類（熱帯熱マラリア原虫（Ｐ．ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐ．ｍａｌａｒｉａｅ）、三日熱マラリア原虫（Ｐ．ｖｉｖａｘ）および卵形マラリア原虫（Ｐ．ｏｖａｌｅ））がマラリアを伝播する。アフリカにおいて蔓延している熱帯熱マラリア原虫は最も悪性の原虫でありこの疾患の致死的病態の原因である。
【０００４】
最近数年間にわたり認められたこの疾患の著しい増加はいくつかの要因によるものであり、このなかには、熱帯熱マラリア原虫の多くの株の、クロロキン、メフロキン、アモジアキン、その他のピリメタミンなどの慣用の医薬製品に対する耐性がある。
【０００５】
１９７２年に植物、青蒿（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｎｎｕａ）（チンハオス（ｑｉｎｇｈａｏｓｕ））から単離され、中国において数世紀にわたり使用されたアーテミシニンは強力な抗マラリア活性を有する。アーテメター（ａｒｔｅｍｅｔｈｅｒ）、アーテエター（ａｒｔｅｅｔｈｅｒ）およびアーテスネート（ａｒｔｅｓｕｎａｔｅ）などの薬理学的特徴を増強した誘導体もまた市販されている。
【０００６】
今日、アーテミシニンおよびこの誘導体は熱帯熱マラリア原虫に対して最も効果的な活性成分の１つである。しかし、単剤療法におけるアーテミシニンまたはこの誘導体の使用は耐性原虫株の選択における原因要素となることがある。
【０００７】
今や科学会は活性成分の組合せ、特にアーテミシニンまたはこの誘導体と他の抗マラリア活性成分との組合せの使用を推奨している。このＡＣＴ（アーテミシニンを基とする併用療法（Ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ−ｂａｓｅｄ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ））と呼ばれるこの多剤療法は、２００２年から世界保健機関（ＷＨＯ）によって推奨されている。これは多くの利益：耐性株における治療効果の改善、耐性の出現に対する２つの活性成分の保護、疾患の伝染および耐性伝播の減少を提供する。
【０００８】
アーテスネートとアモジアキンの合剤（Ａｒｓｕｃａｍ（登録商標））と同様に、Ｃｏａｒｔｅｍ（登録商標）の名称で市販されているアーテメターとルメファントリン（ｌｕｍｅｆａｎｔｒｉｎｅ）の合剤も例えば提案されている。
【０００９】
ＷＨＯにより支援されている戦略に従って、抗マラリア活性成分の新規の組合せの探索は継続されるべきである。
【００１０】
文献において記載されている種々の抗マラリア活性成分において、フェロキンは熱帯熱マラリア原虫のクロロキン耐性株に対して活性のある分子である。フェロキンは、フェロセン−クロロキンまたはフェロクロロキンとも呼ばれ、７−クロロ−４［（｛２−［（Ｎ，Ｎ−ジメチル−アミノ）メチル］フェロセニル｝メチル）アミノ］キノリンに相当する。これはフェロセン環に結合した４−アミノキノリンの誘導体である。この分子は特に特許ＥＰ ０８２４５３６およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，４０，３７１５−３７１８、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，１９９８，４２，５４０−５４４、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９９，５８９，５９−６５およびＪ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍ．，２００４，６８９，４６７８−４６８２において記載されている。
【発明の開示】
【００１１】
クロロキンとアーテスネートの組合せは満足できる程度の効果は達成せず（Ａｍ．Ｊ．Ｔｒｏｐ．Ｍｅｄ．Ｈｙｇ．，２００３，６９（１），１９−２５およびＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ，２００３，９７，４２９−４３３）、耐性株、特にクロロキン耐性株の出現を誘発するが、フェロキンとアーテミシニン誘導体、特にアーテスネート、アーテメターまたはアーテエターの組合せはマラリアの治療および／または予防ならびに、これら２つの活性成分を単剤療法で投与した場合のこれらに耐性のある原虫株の出現を未然に防ぎ、減少させ、またさらに避けることに特に効果的であることが、今や驚くべきことに見いだされた。
【００１２】
したがって、本発明の主題は、フェロキン（遊離塩基型を下記に示す分子（１）、式中、Ｆｅはフェロセン環を表す。）とアーテミシニン誘導体の新規の組合せである。
【００１３】
【化１】
【００１４】
本発明による組合せにおいて、フェロキンは遊離塩基の型であってもよく、また塩、水和物または溶媒和物（これは、１つまたはそれ以上の水または溶媒の分子とフェロキンの会合物または結合物とそれぞれ定義される。）の型であってもよい。フェロキンは、有利には遊離塩基型において使用される。
【００１５】
本発明による組合せに含まれるアーテミシニン誘導体は有利にはアーテスネート（ＩＩ）またはアーテメター（ＩＩＩ）から成る。
【００１６】
【化２】
【００１７】
本発明の主題は、活性成分としてフェロキン（Ｉ）とおよびアーテミシニン誘導体、有利にはアーテスネート（ＩＩ）またはアーテメター（ＩＩＩ）との組合せを含む医薬組成物でもある。
【００１８】
この様な医薬組成物は、フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物とおよび少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量、さらに少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む。前記賦形剤は、当業者に既知の一般的賦形剤から所望の投与の方法および医薬形態に従って選択される。
【００１９】
適切な単位投与形態は、錠剤、ソフトまたは硬ゼラチンカプセル、粉末、顆粒および経口溶液または懸濁液などの経口投与形態、舌下、頬側用、気管内用、眼内もしくは鼻腔投与用または吸入投与用の形態、局所、経皮、皮下、筋肉内または静脈内投与用の形態、直腸内投与用の形態ならびにインプラントを含む。局所適用には、本発明による化合物は、クリーム、ゲル、軟膏またはローション剤中に使用できる。
【００２０】
好ましい投与経路は、経口投与、直腸内投与および注射投与である。
【００２１】
例えば、錠剤の形態において固体組成物を調製する場合、活性成分を、ゼラチン、デンプン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、アラビアゴム、マンニトール、微細結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クロスカルメロースなどの１種またはそれ以上の医薬用賦形剤と混合する。錠剤は、ショ糖、セルロース誘導体または被覆に適する他の物質によって被覆することができる。錠剤は、直接圧縮、乾式造粒、湿式造粒またはホットメルトなどの種々の技術により製造することができる。
【００２２】
活性成分を希釈剤と混合し、得られた混合物をソフトまたは硬ゼラチンカプセルに注入することによりゼラチンカプセルの形態における製剤を得ることもまたできる。
【００２３】
非経口投与用には、例えばプロピレングリコールまたはブチレングリコールなどの薬理学的に相容性の分散剤および／または湿潤剤を含む水性懸濁液、等浸透圧食塩水溶液または滅菌済み注射可能溶液を使用する。
【００２４】
経口投与用には、本発明による組合せの２つの活性成分それぞれの日用量は以下のとおりである：
フェロキン：１人１日あたり５０から１６００ｍｇ、好ましくは２００から１２００ｍｇ、さらに好ましくは４００から８００ｍｇ；
アーテミシニン誘導体：１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは２から６ｍｇ／ｋｇ／日、さらに好ましくは約４ｍｇ／ｋｇ／日。
【００２５】
さらに高いまたは低い投与量が適当である特定のケースもある。この様な投与量も本発明の文脈から逸脱しない。通常の習慣に従って、各患者に適する投与量は投与方法ならびにこの患者の体重および応答に応じて医師により決定される。
【００２６】
本発明による組合せは、２つの活性成分のそれぞれを１日１回またはそれ以上、好ましくは１日１回３日間連続して投与することを意図する。この限定した投与期間は、アーテミシニン誘導体を用いる単剤療法に推奨される７日間と比較して、患者の治療への忠実さを改善させ、したがって、長期的には原虫の耐性を誘発する治療の早期中断を回避することにおいて、特に有利である。
【００２７】
２つの活性成分のそれぞれの投与は同時にあるいは別々にまたは時間をおいて（逐次投与）行うことができる。
【００２８】
同時に投与を行う場合は、２つの活性成分は、経口投与に適する錠剤またはゼラチンカプセルなどの１つの医薬形態内で組み合わせることができる（固定組合せ）。
【００２９】
本発明による組合せの２つの活性成分はまた、その投与が同時であるかどうかにかかわらず、別の医薬形態内に含むこともできる。この結果、本発明による組合せは、第１にフェロキンまたはフェロキンの塩、水和物もしくは溶媒化合物および第２にアーテスネートまたはアーテメターなどの少なくとも１種のアーテミシニン誘導体を含むキットの形態であることができ、前記フェロキンと前記アーテミシニン誘導体は別々の区画中にあり、同時に、別々に、または時間をおいての投与（逐次投与）することが意図される。
【００３０】
例として、錠剤の形態におけるフェロキンの単位投与形態は下記の成分を含むことができる：
フェロキン ５０ｍｇ
マンニトール ２２４ｍｇ
クロスカルメロースナトリウム ６ｍｇ
コーンスターチ １５ｍｇ
ヒドロキシプロピルメチルセルロース ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ３ｍｇ
【００３１】
同様に例として、錠剤の形態においてアーテスネートの単位投与形態はアーテスネート５０または１００ｍｇと、例えばラクトース、クロスカルメロース、無水コロイド状シリカ、微細結晶性セルロースおよびステアリン酸マグネシウムの一般的賦形剤を含むことができる。
【００３２】
本発明の主題は、マラリアの治療および／または予防の方法でもあり、これは、フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物または溶媒化合物の治療有効量および少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量を患者に投与することを含み、上記のように、前記投与量は既同時または他に逐次的に前記患者に投与する。
【００３３】
本発明による組合せは、熱帯熱マラリア原虫型の原虫プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ株（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｎｃｋｅｉ ｖｉｎｃｋｅｉ）を感染させたマウスにおけるインビボ生化学試験の対象となっており、これによりマラリアの治療への効果を明らかにすることが可能となった。
【００３４】
アーテスネートを用いて実施した以下の試験を例として示す。アーテミシニン誘導体は全て同じ代謝産物（ジヒドロアーテミシニン）を有し、一般に半減期が短いことから、アーテスネートで得られた本試験の結果はアーテメターまたはアーテエターなどの他のアーテミシニン誘導体に一般化することができる。
【００３５】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイを感染させたマウスにおけるフェロキン、アーテスネートおよびこれら２つの化合物の組合せのインビボ活性の測定
【００３６】
１．使用したインビボ試験の記載
８週１日齢のメスＳｗｉｓｓマウスにプラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ型の原虫（Ｒｏｄｈａｉｎ，１９５２）を接種させる。マウスはあらかじめ２週間気候馴化させておく。マウスには食物および飲料を自由摂取させる。
【００３７】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ株は、リン酸緩衝食塩水（０．９％）中に懸濁した寄生赤血球１０７個を毎週マウスに感染させることにより維持する。
【００３８】
治療第１日目（Ｄ０）、感染（リン酸緩衝食塩水（０．９％）中に懸濁した寄生赤血球１０７個）１時間後、適切ならば、フェロキン、アーテスネートまたはこれら２つの活性成分の混合物をマウスに経口投与する。続く３日間（Ｄ１からＤ３）この投与を繰り返す（Ｐｅｔｅｒ，１９８７）。２つの製品を組み合わせて投与する場合は、アーテスネートを最初に投与し、２番目に４５分後にフェロキンを投与する。第４日目、マウスの尾から血液スメアを採取する。試料をプレート上に固定する。顕微鏡下で寄生された血液細胞の数を数える。パラサイテミアは、１０００細胞の試料あたりの試料中に含まれる感染赤血球の百分率で表す。投与あたり６または７匹のマウスを使用する。
【００３９】
Ｄ４における塗沫標本で原虫の痕跡を示さないマウスは、原虫のあらゆる可能な急増を検出するために１０日目、１７日目、２４日目、３１日目、３８日目、４５日目、５２日目および５９日目に再度検査する。
【００４０】
化合物の投与用の希釈懸濁液の調製
−フェロキン懸濁液の調製
（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏのフェロキン、バッチＭＹ１８．００８８）
フェロキンをメチルセルロース（０／５（Ｗ／Ｗ））およびポリソルベート８０（０／５（Ｗ／Ｗ））と混合する。調製物は冷暗所（４℃）において少なくとも７日間、周囲温度において４時間安定である。フェロキンの最終懸濁液の濃度範囲は０．１から１００ｍｇ／ｍｌである。
−アーテスネート懸濁液の調製
（Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏのアーテスネート、バッチ１．０４）
アーテスネートをメチルセルロース（０／５（Ｗ／Ｗ））およびポリソルベート８０（０／５（Ｗ／Ｗ））と混合する。調製物は周囲温度の暗所において４時間安定である。アーテスネートの最終懸濁液の濃度範囲は０．８から２０ｍｇ／ｍｌである。
【００４１】
２．単独投与時のアーテスネートおよびフェロキンのＩＣ５０値および治癒量の決定
ＩＣ５０値の決定法
ＩＣ５０は、感染（Ｄ０）および４日間の治療（Ｄ０、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３）後の４日目（Ｄ４）において血液パラサイテミアを５０％阻害するｍｇ／ｋｇ／日での濃度と定義する。０％阻害は感染後未治療のマウスにおいて観察されるパラサイテミアの平均に相当する。１００％阻害は、０．１％未満の非常に少ないまたはゼロパラサイテミアに相当する。ＩＣ５０値は、濃度の対数で表される投与量−応答曲線を直線内挿することにより決定する。
【００４２】
フェロキンのＩＣ５０は、１から１０ｍｇ／ｋｇ／日の濃度の投与後に決定する。使用する濃度は、０、１、１．４７、２．１、３．２、４．６、６．８および１０ｍｇ／ｋｇ／日で４日間である。
【００４３】
アーテスネートのＩＣ５０は、１から１５ｍｇ／ｋｇ／日の濃度の投与後に決定する。使用する濃度は、０、１、１．６、２．５、３．９、６．１、９．５および１５ｍｇ／ｋｇ／日で４日間である。
【００４４】
得られたＩＣ５０を下記の表１に示す：
【００４５】
【表１】
【００４６】
フェロキンについては、治癒量は１０ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００４７】
アーテスネートについては、本試験において治癒量に達しなかった、したがって、治癒量は１５ｍｇ／ｋｇ／日より多い。
【００４８】
アーテスネートおよびフェロキンの非治癒量（最適より少ない）、したがってこれは２つの化合物の試験でそれぞれに得られたＩＣ５０値に近い値での相互作用の試験を実施することは重要である。
【００４９】
フェロキンはＩＣ５０値に近い治癒量（治療マウスの完全生存）を有している。アーテスネートについては、治癒量とＩＣ５０値の間の差が大きく、したがってＩＣ５０値より多い投与量を使用することができる。したがって、４日間のフェロキン３ｍｇ／ｋｇ／日およびアーテスネート６ｍｇ／ｋｇ／日の同時および単独投与を、組合せの試験において考慮した。
【００５０】
３．プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイ原虫株におけるフェロキン／アーテスネート組合せのインビボ抗マラリア活性の測定
【００５１】
３．１．パラサイテミア百分率の決定
４日間のフェロキン３ｍｇ／ｋｇ／日およびアーテスネート６ｍｇ／ｋｇ／日の組合せおよび単独投与を感染マウスについて実施し、治療を受けない群と比較した。表２は感染４日後に観察された平均パラサイテミア（感染赤血球の百分率）を示す。
【００５２】
【表２】
【００５３】
表２に示すように、４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンと６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネートの組合せ投与は、２つの製品の単独投与と比較して感染動物のパラサイテミアを有意に減少させることができる。
【００５４】
３．２マウスの死亡率の決定
感染後５日目から毎日、死亡したマウスの数を数え、死亡率を決定する（死亡マウスの数 対 考察した群のマウスの数）。治癒量は、群の全てのマウスが生存するようになる最初の投与量である。
【００５５】
図１に示すように、動物の生存期間は、単独投与（４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンまたは６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネート）と比較して、化合物の適量より少ない投与量（４日間の３ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのフェロキンと６ｍｇ／ｋｇ／日の投与量でのアーテスネート）の組合せ投与により改善される。
【００５６】
プラスモジウム・ビンケイ・ビンケイに感染させたマウスにおいてインビボで得られた結果は、２つの活性成分間に拮抗作用が存在しないことを明らかに示し、本発明によるアーテスネート（または一般的なアーテミシニン誘導体）とフェロキンの組合せがマラリアの治療に対して有益であることを証明している。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】感染後５日目以後の動物の生存百分率を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分として、遊離塩基、塩、水和物または溶媒和物の形態におけるフェロキンおよびアーテミシニン誘導体を含む組合せ。
【請求項２】
アーテミシニン誘導体がアーテスネート、アーテエターまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
アーテミシニン誘導体がアーテスネートまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項１または２のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項４】
フェロキンの日用量が１人１日あたり５０から１６００ｍｇ、好ましくは２００から１２００ｍｇ、および好ましくは４００から８００ｍｇであることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項５】
アーテミシニン誘導体の日用量が１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは２から６ｍｇ／ｋｇ／日、および好ましくは約４ｍｇ／ｋｇ／日であることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
連続する２日から４日の間投与することが意図されることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
活性成分のそれぞれを同時または逐次的に投与することが意図されることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項８】
フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物の治療有効量および少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量ならびに少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項９】
アーテミシニン誘導体がアーテスネート、アーテエターまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アーテミシニン誘導体がアーテスネートまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項８または９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
経口、直腸内または注射による投与に適することを特徴とする、請求項８から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
マラリアの治療および／または予防のために有用であることを特徴とする、請求項８から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
マラリアの治療または予防において使用するための医薬用製品を調製するための、請求項１から７のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【請求項１４】
第１にフェロキンまたはフェロキンの塩、水和物もしくは溶媒和物を、第２に少なくとも１種のアーテミシニン誘導体を含み、前記フェロキンおよび前記アーテミシニン誘導体が異なる区画内にあり、同時または逐次的な投与を意図される、マラリアの治療または予防用のキット。
【請求項１】
活性成分として、遊離塩基、塩、水和物または溶媒和物の形態におけるフェロキンおよびアーテミシニン誘導体を含む組合せ。
【請求項２】
アーテミシニン誘導体がアーテスネート、アーテエターまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
アーテミシニン誘導体がアーテスネートまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項１または２のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項４】
フェロキンの日用量が１人１日あたり５０から１６００ｍｇ、好ましくは２００から１２００ｍｇ、および好ましくは４００から８００ｍｇであることを特徴とする、請求項１に記載の組合せ。
【請求項５】
アーテミシニン誘導体の日用量が１から１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは２から６ｍｇ／ｋｇ／日、および好ましくは約４ｍｇ／ｋｇ／日であることを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項６】
連続する２日から４日の間投与することが意図されることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項７】
活性成分のそれぞれを同時または逐次的に投与することが意図されることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の組合せ。
【請求項８】
フェロキンまたはフェロキンの薬学的に許容される塩、水和物もしくは溶媒和物の治療有効量および少なくとも１種のアーテミシニン誘導体の治療有効量ならびに少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項９】
アーテミシニン誘導体がアーテスネート、アーテエターまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アーテミシニン誘導体がアーテスネートまたはアーテメターから成ることを特徴とする、請求項８または９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
経口、直腸内または注射による投与に適することを特徴とする、請求項８から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
マラリアの治療および／または予防のために有用であることを特徴とする、請求項８から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
マラリアの治療または予防において使用するための医薬用製品を調製するための、請求項１から７のいずれか一項に記載の組合せの使用。
【請求項１４】
第１にフェロキンまたはフェロキンの塩、水和物もしくは溶媒和物を、第２に少なくとも１種のアーテミシニン誘導体を含み、前記フェロキンおよび前記アーテミシニン誘導体が異なる区画内にあり、同時または逐次的な投与を意図される、マラリアの治療または予防用のキット。
【図１】
【公表番号】特表２００８−５３６９００（Ｐ２００８−５３６９００Ａ）
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０７１２２（Ｐ２００８−５０７１２２）
【出願日】平成１８年４月１８日（２００６．４．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／０００８４２
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１１６４７
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（５０４４５６７９８）サノフイ−アベンテイス (433)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年９月１１日（２００８．９．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月１８日（２００６．４．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００６／０００８４２
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１１６４７
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（５０４４５６７９８）サノフイ−アベンテイス (433)
【Ｆターム（参考）】
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