マンノース−６−リン酸塩組成物および線維性障害治療におけるその使用法
【課題】高い濃度で創傷治癒に改善創傷治癒を促進し、瘢痕形成も予防または軽減するマンノース−６−リン酸塩は、高濃度での効果は劣り、対照と比較してもさらに悪化するため、高い濃度で創傷治癒に効果のある組成を提案。
【解決手段】マンノース−６−リン酸塩を、ｐＨ調整により、ｐＨ６〜ｐＨ８の懸濁剤または液剤として、好ましくはｐＨ６．５〜ｐＨ７．５の懸濁剤または液剤として、また、好ましくは６５〜３００ｍＭの懸濁剤または液剤として製剤化し、懸濁剤は、粘性ヒアルロン酸ゲルとして作成した組成物は、創傷治癒に有効であり、特に瘢痕形成の予防または軽減に有効。
【解決手段】マンノース−６−リン酸塩を、ｐＨ調整により、ｐＨ６〜ｐＨ８の懸濁剤または液剤として、好ましくはｐＨ６．５〜ｐＨ７．５の懸濁剤または液剤として、また、好ましくは６５〜３００ｍＭの懸濁剤または液剤として製剤化し、懸濁剤は、粘性ヒアルロン酸ゲルとして作成した組成物は、創傷治癒に有効であり、特に瘢痕形成の予防または軽減に有効。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は線維性障害の予防または軽減の分野に属し、特に、創傷治癒における瘢痕形成の予防または軽減の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
普通ヒトおよびその他の哺乳動物の創傷はかなり速く治癒するが、醜い瘢痕組織が形成されることが多く、問題となっている。瘢痕化およびその他の諸線維性障害は臨床上重要な問題であって、機能や成長に逆効果を及ぼすことも多く、時には美容の観点からも望ましくない外観をもたらすことがある。
【０００３】
成人の創傷治癒は、急性炎症、収縮およびコラーゲン沈着、迅速な創傷閉鎖および感染の最小化のために最適化されたと思われる諸反応を特徴とする。瘢痕化は、ときとして身体のほぼすべての器官および組織において、例えば眼、中枢神経系、筋肉、関節などにおいて問題となる。同様のプロセスが、内科および外科の多くの領域でよく見られるその他の線維性障害に到ることもある。例えば、腹部手術がもとで腹腔内線維癒着および／または狭窄症が起こることが多く、一方線維性網膜症、緑内症手術がもとで起きる瘢痕化、増殖性硝子体網膜症、ケロイド、例えば表水胞症皮などの皮膚疾患、皮膚硬化症、全身性硬化症、肺線維症、糸状体腎炎、また、例えば卒中または神経手術がもとで起きる中枢神経系の瘢痕化、ならびに肝硬変なども医療上重大な問題である。従って医療上の主たる目的は、瘢痕化およびその他の諸線維性障害を低減することならびに理想的にそれらを予防することにある。
【０００４】
ＷＯ９３／１８７７７（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ）には、線維性障害の治療にマンノース−６−リン酸塩を使用する方法が記載されている。マンノース−６−リン酸塩により創傷治癒は促進され、瘢痕形成も予防または軽減される。この特許出願では、マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）は、例えばヒアルロン酸などを含めた種々の担体を使用しながら、従来のいかなる方法によっても製剤化できることを示唆している。そこで示唆されるＭ６Ｐ濃度は１０〜６０ｍＭである。最良の結果は濃度２０ｍＭで得られると報告されているが、一方濃度１００ｍＭでは結果は劣り、対照と比較してもさらに悪化した。ＷＯ９３／１８７７７特許出願で得られた結果を改善することが課題である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９３／１８７７７号
【発明の概要】
【０００６】
Ｍ６Ｐ液剤およびＭ６Ｐ懸濁剤のｐＨが６．５〜８の範囲内にあるとき、Ｍ６Ｐがより高い濃度で創傷治癒に改善が見られることが今回判明した。
【０００７】
従って本発明は、そのｐＨ値が６．５〜８の範囲内にあって、Ｍ６Ｐそれ自体もしくはＭ６Ｐの生物学的前駆体もしくはＭ６Ｐ残基を少なくとも一個含むポリマーであるようなＭ６Ｐ供与化合物の液剤または懸濁剤を提供することにある。その濃度は、通例５０〜４００ｍＭであり、典型的な例では６５〜３００ｍＭ、好ましくは６５〜１２０ｍＭ、さらに好ましくは８０〜１２０ｍＭである。濃度とは別に、ｐＨ値は６．５〜７．５であることが好ましく、７〜７．４であれば最も好ましい。
【０００８】
所望のｐＨ値を得るためには、普通例えば水酸化ナトリウムなどのアルカリを添加することが必要となる。要するに、例えば生理食塩水（ｐＨ７．４）中１００ｍＭのＭ６Ｐを溶解すると酸性が強すぎるためｐＨ値を高める必要がある。Ｍ６Ｐモル濃度が低いマンノース−６−リン酸一ナトリウムの液剤は、仮に濃度を６０ｍＭ未満とすると、ｐＨ調整をしない限りそのｐＨ値は普通６．５〜７である。しかし、このような液剤も、ｐＨ値が異なっている場合、より高いｐＨ値を得るためにｐＨ６．５〜８の範囲内において、アルカリでｐＨ調整することを必要とすることにより、本発明の範囲内に含めるものとする。いかなるものであれ疑わしきものを除去するために、ｐＨ調整していないＭ６Ｐの液剤または懸濁剤は本発明の範囲から明らかに除外されることを、ここに確認する。
【０００９】
マンノース−６−リン酸塩特異的受容体を含有する組成物もまた本発明の組成物から除外される。マンノース−６−リン酸塩特異的受容体がマンノース−６−リン酸塩と結合してしまい、その有効性を減少させる。このようなマンノース−６−リン酸塩特異的受容体の除外は、二量体および四量体の状態のマンノース−６−リン酸塩特異的受容体の分離、ならびに受容体のオリゴマー化がリガンド結合の影響を受けるかどうかを探るために受容体試料を５ｍＭのマンノース−６−リン酸塩とｐＨ７．５でインキュベートする実験について開示しているＷａｈｅｅｄ他の参考文献Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２９，２４４９−２４５５（１９９０年）に基づくものである。
【００１０】
発明は組成物それ自体、並びに、諸線維性障害の予防または軽減、特にヒトおよび動物の創傷治癒に対する使用に関する。
【００１１】
本発明は、世界各国の特許法が容認する範囲において、上記組成物を医学的に使用することを含むものである。従って、欧州においては、本発明は、諸線維性障害の予防または治療のための、特に創傷治癒のための薬剤の製造に当組成物を使用することを含んでいる。米国およびオーストラリアにおいては、本発明は、予期される線維性障害部位または実際の線維性障害部位、特に創傷部位に対し、上記疾患の予防または治療に有効量の、特に創傷における瘢痕形成を阻止するのに有効量の本発明の組成物を適用することを含めた、ヒトまたは動物における諸線維性障害の予防法または治療法が含まれる。
【００１２】
本発明は眼の創傷の治療用として特に重要であって、従って眼に好適なゲル剤もしくは軟膏剤を一定量適用するためのまたは点眼薬を一定量適用するためのディスペンサを提供するものであり、そのディスペンサは本発明の組成物を収容する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】唯一の図面は、横座標（ｘ軸）のｐＨに対して縦座標（ｙ軸）にＭ６Ｐ添加前のｐＨが７．４であるリン酸緩衝食塩水中に溶解したマンノース−６−リン酸一ナトリウムのモル濃度を示したプロットである。
【００１４】
好ましい実施の態様の説明
Ｍ６Ｐは遊離リン酸、または製剤上許容し得る遊離リン酸の１もしくは２つの基を持つ塩、例えばナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩もしくはバリウム塩などの状態で存在することができる。また、少なくとも一個のＭ６Ｐ残基、好ましくは少なくとも二個のＭ６Ｐ残基を含むポリマーの状態でも存在することができる。二糖Ｍ６Ｐ残基または多糖Ｍ６Ｐ残基は、隣接するＭ６Ｐ残基またはその他の糖残基と１，４−または１，６−結合することができる。Ｍ６Ｐモノマーが２０個までのポリマーが予想され、好ましくはモノマー１０個までのポリマーが予想される。Ｍ６Ｐ残基が一個のポリマーの骨格から、また、Ｍ６ＰおよびＨＡのポリマーの骨格から懸垂しているようなものも含め、その他のポリマーの状態も考えられる。また、Ｍ６Ｐはときとして生物学的前駆体の状態、すなわちｉｎ ｓｉｔｕで（身体に適用後）Ｍ６Ｐに転化する化合物の状態であることもある。これは、例えばＭ６Ｐの糖アルコール基を適切な酸と結合させてエステルを生成することによって達成することができ、このような場合このエステル結合はＭ６Ｐのリン酸塩結合より容易に加水分解され得る。加水分解条件下、酵素条件下またはその他の治療対象となる線維性障害状態の身体の適切な部位、特に皮膚の創傷部位において支配的な条件下でＭ６Ｐを放出する化合物のその他の形態については化学者等には明白であろうし、また、それらは本発明の目的であるＭ６Ｐの定義に含まれる。以下簡潔にするために、主としてＭ６Ｐそれ自体を参照することによって本発明を説明する。同様の原理は、必要な変更を加えることにより前述したその他のＭ６Ｐ共与化合物にも当てはまる。
【００１５】
Ｍ６Ｐ化合物は、それが液剤であれまたは懸濁剤であれ、何らかの適合性のアルカリによって、特に水酸化ナトリウムによってｐＨ調整され、その濃度が好ましくは２０ｍＭ以上、特に５０ｍＭ以上、また、最も好ましくは６５〜３００ｍＭとなるように製剤化される。最適濃度は８０〜１２０ｍＭ、特に約１００ｍＭであると思われる。Ｍ６Ｐの好ましい形態はナトリウム塩であるが、濃度についてはＭ６Ｐのその他の形態にも当てはまる。ポリマーの場合、モル濃度はＭ６Ｐ残基と関係するであろうし、生物学的前駆体の場合には、Ｍ６Ｐ当量のモル濃度に基づくであろう。例えば、１モルの前駆体が１モルのＭ６Ｐを遊離させる場合は、前駆体のモル濃度は前述のとおりであり、一方１モルの前駆体が２モルのＭ６Ｐを遊離させる場合は、前駆体のモル濃度は半減する。
【００１６】
もしｐＨ調整をしなければ、これら製剤の多くは望ましくない酸性のｐＨ値を有することになろう。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中でさえ、６５ｍＭのＭ６Ｐ一ナトリウムのｐＨ値は６．４５程度まで低くなる。Ｍ６Ｐ濃度を高めてもさらに低いｐＨ値しか得られない。このように、図面で詳説される、ｐＨ７．４のＰＢＳに溶解したＭ６Ｐ一ナトリウムを使用した特別の場合には、曲線の上方にあってｐＨ６．５を境にして右側を占める領域Ｂは、ｐＨ調整しなければｐＨ６．５未満となりうるＭ６Ｐ（６０ｍＭ以上）の濃度を表している。曲線の上方にあってｐＨ６．５から左側を占める領域Ａは、ｐＨ調整しなければｐＨ６．５を上回るであろうＭ６Ｐ（６０ｍＭ未満）の濃度を表している。従って、濃度６０ｍＭ以上のＭ６Ｐ一ナトリウムを溶解したＰＢＳ溶液は、ｐＨ値を６．５以上に高めるためにｐＨ調整が必要となる。濃度が比較的低いＭ６Ｐ一ナトリウムのＰＢＳ溶液の場合は、ｐＨ調整しなくとも６．５以上のｐＨ値が得られるが、より好ましい範囲のｐＨ７．０〜７．５のｐＨ値を得るためにｐＨ値を高めるのが好ましく、従って本発明は、Ｍ６Ｐの濃度にかかわらずｐＨ値を高めることを要件とする。Ｍ６Ｐはアルカリ性のｐＨ値で加水分解されるため、ｐＨ値の上限は約８であるが、高くても７．５程度が良いと言えよう。
【００１７】
Ｍ６Ｐにヒアルロン酸（ＨＡ）を添加した製剤は創傷治癒によい効果をもたらす。すなわち、ＨＡは単に不活性担体として作用するだけでなく、明白な効果を及ぼす補助成分としても作用する。ＨＡを単独で使用しても創傷治癒を促進しないので、これは驚くべき効果である。ＷＯ９３／１８７７７の研究結果とは反対に、粘性の懸濁剤として製剤化したＨＡ中のＭ６Ｐ濃度が高くなると、創傷治癒に卓越した効果が得られる。ｐＨ調整したＭ６Ｐをヒアルロン酸（ＨＡ）を添加して製剤化した場合、Ｍ６Ｐの供給を高めることができる。
【００１８】
ＨＡの分子量は、７００，０００〜３０００，０００の範囲にわたる種々の平均分子量のいずれであってもよいが、好ましくは７５０，０００〜２２５０，０００であり、最も好ましくは１０００，０００〜１７５０，０００である。好適な粘性が得られるように製剤化されるため、一般にＨＡの平均分子量が大きくなればなるほど、必要とされるＨＡの濃度は低くなる。しかし、ＨＡの分子量が小さければ小さいほど製造は一層容易になる。平均分子量が１．３×１０６のＨＡを使用することが好ましい。平均分子量が１×１０６〜１．５×１０６のＨＡの濃度は、重量で組成物総量の０．５〜２％の範囲にあることが好ましい。ゲルの粘性は、２０，０００〜５０，０００センチポワズの範囲内であることが好ましく、特に２０，０００〜３０，０００センチポワズの範囲内であることが好ましい。
【００１９】
Ｍ６Ｐは、（ａ）創傷に無害であり（「生体適合性」）、（ｂ）非炎症性であって（創傷部位に炎症を起こさない）、さらに（ｃ）創傷部位に吸収され得る（「生体吸収性」または「生体再吸収性」）ようなポリマーと共に、本発明の組成物に製剤化される。本発明の組成物は、前述した好ましい範囲内にある一定濃度のＭ６Ｐを、適用から少なくとも３日間にわたって、好ましくは少なくとも７日間にわたって放出することができるはずである。このような好適なポリマーの例として、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリガラクチド、ポリラクチド、およびポリ炭酸メチレンが挙げられる。一方、メチルセルロースやポリアクリル酸は炎症を引き起こすため不適当である。
【００２０】
本発明の組成物は、考えられるいかなる形態にも調製することができる。例えば、ゲル剤、クリーム剤、ローション剤または軟膏剤として局所投与するのに適合させることができる。これらは従来の方法で製剤化され、水性または油脂性の賦形剤または担体を含み、さらに創傷治療において一般的な防腐薬およびその他の作用薬もふくむことができる。また、例えば生理食塩水（０．９％ｗ／ｖＮａＣｌ）など、従来の溶媒のいずれか適切なものと共に処方することができる、滅菌の注射可能なまたは注入可能な液剤として処方することもできる。しかし、Ｍ６Ｐとヒアルロン酸（ＨＡ）の配合剤に特有の形態は粘性のゲル剤であることは、理解されよう。
【００２１】
本発明の組成物を適用する方法として特に簡便な方法は、例えばコラーゲン、アルギン酸ナトリウムまたはポリ塩化ビニルの包帯、硬膏、吸収パッド、またはポリマー包帯もしくはヒドロゲル包帯などの、含浸またはコーティングを施した創傷用包帯による方法である。包帯は普通滅菌条件下で、使用に備えた状態で保管される。内臓への治療の場合、担体としてのポリマーと本発明の組成物を含むインプラントが提案される。
【００２２】
本発明は、手術によって生じたものであるかどうかに関わらず、主として重症の擦過傷、裂傷および熱傷を含めた皮膚の創傷に関連するが、例えば皮膚の光線傷害、ケロイド、肥厚性瘢痕、腱傷害、挫滅損傷（crush injury）、緑内症手術の結果起こる増殖性硝子体網膜症および瘢痕化などその他の外傷、例えば卒中または神経手術の結果起こり瘢痕組織を残す中枢神経系（ＣＮＳ）損傷、例えば腹膜癒着または腹部もしくは骨盤の大手術の結果起こる癒着などの組織癒着、例えば表皮水疱症などの水疱を起こしている皮膚疾患における瘢痕化、皮膚硬化症、全身性硬化症、肝臓および肺線維症、ならびに例えばＷＯ９１／０４７４８（Ｌａ Ｊｏｌｌａ）に関連して言及されるような疾患などにも適用できる。
【００２３】
本発明の特に重要な態様は、眼に関連した線維性障害にいたる組織異常症、特に、術後の緑内症性再発、または眼組織の剥離が網膜の収縮としわを伴って線維形成する場所に起きる網膜上膜形成、または損傷の結果起こる角膜の瘢痕化などにいたる組織異常症の治療にある。本発明は、特にＭ６Ｐの滅菌点眼液剤を含む。それらの液剤は、点眼薬供給ノズルを備えた圧搾可能プラスチックボトルなどのディスペンサから適用されるか、またはふたに容器内部に延びるスポイトを取付けた、ふた付き容器から適用される。ゲル剤や軟膏剤は、眼製剤で一般に使用されている小径のノズルを備えたチューブから投薬することができる。
【００２４】
本発明の別の重要な態様は、皮膚創傷、ならびに例えばケロイドや肥厚性瘢痕などの皮膚創傷に関連して起こる線維性障害の治療にある。本発明の製剤は創傷治癒を促進し、また、瘢痕形成を減じる。腱や靭帯の治癒も本発明によって改善される。
【００２５】
本発明の組成物の投与形態は、例えば、創傷に対して局所的に（内側および／またはその周囲に）適用する様式であるが、患部組織により良く到達させるために、妥当である場合には、
例えば腱注射などの皮下もしくは皮内もしくは組織内注射、または移植が必要となることもある。極端な場合、筋内注射、静脈注射または眼球内注射が得策であることもある。Ｍ６Ｐは、少なくとも治療開始後最初の３日間患部に適用することが好ましく、一日少なくとも２回適用することが好ましい。
【００２６】
本発明を次に述べる例によってより詳しく説明する。「Ｂｉｏｃｌｕｓｉｖｅ」は登録商標である。Ｍ６Ｐは終始一ナトリウム塩として使用した。
【実施例】
【００２７】
ラットにおけるマンノース−６−リン酸塩の創傷治癒効果
方法
体重２５０ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの雄の背面皮膚を、長さ１ｃｍ、筋肉層に達する深さで、直線状に４箇所、切り始めから切り終りまで同じ太さになるように（full thickness）切開した。中線から両側に１ｃｍ、頭蓋底部から５ｃｍおよび８ｃｍの部位を切開した。中線とは、頭部から尾部にかけて背骨に沿って引かれる、動物の身体の縦軸の線である。従って、創傷は背骨に対して長さ方向に平行であった。創傷が二次治癒するように未縫合のまま放置した。どの時点でも、各治療群には少なくとも４匹の動物を使用した。どの動物にも必ず対照となる創傷を負わせた。「治療群」とは、同一群内の各動物が受けた治療を指す。特に治療される各創傷の動物上の位置は、なんらかの位置効果があることを考慮して、実験を繰り返すごとにローテーションした。各時点において４匹の動物を無作為で二つの治療群の各々に割り当て、創傷を負わせる前（第０日目）および創傷を負わせた後の第０日目から第７日目までの毎日、１００μｌの注射剤を注射した（創傷の両脇に５０μｌずつ）。対照とする創傷にはＰＢＳのみを注射した。創傷
を負わせた後第８０日目に、創傷を採取した。創傷の採取は周囲組織から切徐して行った。各創傷は二分され、創傷の半片は市販の包埋媒体「ＯＣＴ」に入れて急速に凍結し、冷凍切片として免疫染色用とし、他の半片はワックス包埋して組織学的に使用する目的でホルムアルデヒド中で固定した。ワックス切片をヘマトキシリンとエオシンを用いて、また、ピクロシリアスレッド（picrosirius red）、ならびにマッソンリールの３色（Massons Lille trichrome）を用いて規定通りの手順で染色し、瘢痕の質が評価できるようにコラーゲン線維の厚さ、密度および配向を見た。
【００２８】
組織学的に使用する切片（創傷一つ当たり４〜１０個）を採取し、訓練を受け認可された研究員が目視アナログスケール（visual analogue scale）に従ってスコアリングした。目視アナログスケールとは１０ｃｍの線であって、一端（０）は正常な皮膚を表し、他端（１０）は最もひどい瘢痕を表す。二人の訓練を受けた研究員のスコアを平均して一つのスコアとし、次いでそれを各創傷に割り当て、創傷の数（ｎ）分のスコアの平均値を求めた。
【００２９】
Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用に対するｐＨの効果
ＰＢＳ溶液に溶解したＭ６Ｐ液剤のｐＨを測定したところ、
酸性の溶液となっていることが判明した。ｐＨは濃度依存性で、最高濃度の溶液で最も酸性が強かった。Ｍ６Ｐの濃度が１００ｍＭおよび３００ｍＭのとき、溶液のｐＨはそれぞれ６．２および５．５であった。観察されたＭ６Ｐの創傷治癒に対する初期抑制効果は、モル浸透圧濃度によるものでなくｐＨ値の低さによるのかどうかを決定するために、実験を行った。
【００３０】
Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用に及ぼすｐＨ値の影響を、生理学的ｐＨ値にて一定範囲の濃度のＭ６Ｐをラットに投与して調査した。Ｍ６Ｐを、適量の滅菌二重蒸留水（double-distilled water）の半量に溶解し、１０ＭのＮａＯＨを極少量、約１０μｌ添加してそのｐＨを７．４に調整した。微調整は１Ｍ ＮａＯＨを用いて行い、ｐＨをｐＨ計でチェックした。次いで、２倍濃度の滅菌ＰＢＳを用いて必要量の液剤を調製した。ｐＨを再チェックし、ｐＨが依然７．４のままであることを確認した。次いで、使用前にこの液剤を濾過滅菌した。前述したように、Ｍ６Ｐを皮内注射によって創傷に投与した。創傷を負わせる前（第０日）および創傷を負わせた後の７日間、毎日Ｍ６Ｐをすべての濃度で適用した。１時点当たり４匹の動物を二つの治療群に無作為に割り当て、四つの創傷を、それぞれＰＢＳのみ、１０ｍＭＭ６Ｐ、２０ｍＭＭ６Ｐおよび３００ｍＭＭ６Ｐの注射
剤で、またはそれぞれＰＢＳのみ、５０ｍＭＭ６Ｐ、１００ｍＭＭ６Ｐおよび２００ｍＭＭ６Ｐの注射剤で治療した。創傷を負わせた後第１日目、第３日目、第７日目および第８０日目に、創傷を採取した。
【００３１】
高濃度のＭ６Ｐであっても創傷治癒に有害な影響は一切なく、概ね、高濃度のＭ６Ｐは瘢痕化を最も縮小させるという結果になった。Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用は、２０ｍＭ濃度のＭ６Ｐを適用した時点で明らかであったが、濃度を１００ｍＭまで高めると瘢痕の質はさらに改善された。１００ｍＭを上まわる濃度では、瘢痕化のそれ以上の一貫した改善は観察されなかったが、治癒過程になんら有害な影響も見られなかった。このことから、先に報告されたような高濃度のＭ６Ｐにおける効果の低減はモル浸透圧濃度に起因するものではなく、最適以下のｐＨを使用したことに起因することが分かり、また、本発明のｐＨ調整後の最適用量は１００ｍＭであることが分かる。
【００３２】
創傷後７日間では、血管形成の減少、創傷のフィブロネクチン濃度の減少、ならびに単核細胞およびマクロファージの浸潤の減少がすべて、ｐＨ７．４のＭ６Ｐで治療した創傷に観察された。これらの影響は用量依存性であって、すなわち用量が増すとその影響も大きく、創傷部位のＴＧＦβ活性の減少と一致
した。創傷後３日間では、創傷のフィブロネクチン濃度はＭ６Ｐで治療した創傷において最も高く、一方ＰＢＳのみで治療した創傷はこの時点でフィブロネクチンをほとんど含有していなかった。このような影響は、Ｍ６Ｐで治療した創傷において治癒速度が速くなることと一致する。
【００３３】
モル濃度を一定にし（１００ｍＭ）、ｐＨ値を変えながら（５．５、７．４、９．５）同様な方法でさらに実験をすすめた。
【００３４】
Ｍ６Ｐが有効な抗瘢痕化剤であること、また、液剤のｐＨがｉｎ ｖｉｖｏでのこの分子の活性に決定的に重要であることが立証された。最も有効な治療は、約１００ｍＭのＭ６Ｐを有意量、創傷後長期間（第０日から第７日まで）にわたって投与することであると思われる。
【００３５】
これらの実施例の主な結果を以下に表で表す。
【００３６】
目視アナログスケールを用いた平均スコア
創傷後８０日目に採取した組織切片の瘢痕の質について、二人の訓練を受けた観察者が、基準点無しの、０＝正常な皮膚および１０＝最悪の瘢痕とする１０ｃｍ目視アナログスケールを用い、そのスコアを記録した。
【００３７】
【表１】
【技術分野】
【０００１】
本発明は線維性障害の予防または軽減の分野に属し、特に、創傷治癒における瘢痕形成の予防または軽減の分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
普通ヒトおよびその他の哺乳動物の創傷はかなり速く治癒するが、醜い瘢痕組織が形成されることが多く、問題となっている。瘢痕化およびその他の諸線維性障害は臨床上重要な問題であって、機能や成長に逆効果を及ぼすことも多く、時には美容の観点からも望ましくない外観をもたらすことがある。
【０００３】
成人の創傷治癒は、急性炎症、収縮およびコラーゲン沈着、迅速な創傷閉鎖および感染の最小化のために最適化されたと思われる諸反応を特徴とする。瘢痕化は、ときとして身体のほぼすべての器官および組織において、例えば眼、中枢神経系、筋肉、関節などにおいて問題となる。同様のプロセスが、内科および外科の多くの領域でよく見られるその他の線維性障害に到ることもある。例えば、腹部手術がもとで腹腔内線維癒着および／または狭窄症が起こることが多く、一方線維性網膜症、緑内症手術がもとで起きる瘢痕化、増殖性硝子体網膜症、ケロイド、例えば表水胞症皮などの皮膚疾患、皮膚硬化症、全身性硬化症、肺線維症、糸状体腎炎、また、例えば卒中または神経手術がもとで起きる中枢神経系の瘢痕化、ならびに肝硬変なども医療上重大な問題である。従って医療上の主たる目的は、瘢痕化およびその他の諸線維性障害を低減することならびに理想的にそれらを予防することにある。
【０００４】
ＷＯ９３／１８７７７（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ Ｌｔｄ）には、線維性障害の治療にマンノース−６−リン酸塩を使用する方法が記載されている。マンノース−６−リン酸塩により創傷治癒は促進され、瘢痕形成も予防または軽減される。この特許出願では、マンノース−６−リン酸塩（Ｍ６Ｐ）は、例えばヒアルロン酸などを含めた種々の担体を使用しながら、従来のいかなる方法によっても製剤化できることを示唆している。そこで示唆されるＭ６Ｐ濃度は１０〜６０ｍＭである。最良の結果は濃度２０ｍＭで得られると報告されているが、一方濃度１００ｍＭでは結果は劣り、対照と比較してもさらに悪化した。ＷＯ９３／１８７７７特許出願で得られた結果を改善することが課題である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９３／１８７７７号
【発明の概要】
【０００６】
Ｍ６Ｐ液剤およびＭ６Ｐ懸濁剤のｐＨが６．５〜８の範囲内にあるとき、Ｍ６Ｐがより高い濃度で創傷治癒に改善が見られることが今回判明した。
【０００７】
従って本発明は、そのｐＨ値が６．５〜８の範囲内にあって、Ｍ６Ｐそれ自体もしくはＭ６Ｐの生物学的前駆体もしくはＭ６Ｐ残基を少なくとも一個含むポリマーであるようなＭ６Ｐ供与化合物の液剤または懸濁剤を提供することにある。その濃度は、通例５０〜４００ｍＭであり、典型的な例では６５〜３００ｍＭ、好ましくは６５〜１２０ｍＭ、さらに好ましくは８０〜１２０ｍＭである。濃度とは別に、ｐＨ値は６．５〜７．５であることが好ましく、７〜７．４であれば最も好ましい。
【０００８】
所望のｐＨ値を得るためには、普通例えば水酸化ナトリウムなどのアルカリを添加することが必要となる。要するに、例えば生理食塩水（ｐＨ７．４）中１００ｍＭのＭ６Ｐを溶解すると酸性が強すぎるためｐＨ値を高める必要がある。Ｍ６Ｐモル濃度が低いマンノース−６−リン酸一ナトリウムの液剤は、仮に濃度を６０ｍＭ未満とすると、ｐＨ調整をしない限りそのｐＨ値は普通６．５〜７である。しかし、このような液剤も、ｐＨ値が異なっている場合、より高いｐＨ値を得るためにｐＨ６．５〜８の範囲内において、アルカリでｐＨ調整することを必要とすることにより、本発明の範囲内に含めるものとする。いかなるものであれ疑わしきものを除去するために、ｐＨ調整していないＭ６Ｐの液剤または懸濁剤は本発明の範囲から明らかに除外されることを、ここに確認する。
【０００９】
マンノース−６−リン酸塩特異的受容体を含有する組成物もまた本発明の組成物から除外される。マンノース−６−リン酸塩特異的受容体がマンノース−６−リン酸塩と結合してしまい、その有効性を減少させる。このようなマンノース−６−リン酸塩特異的受容体の除外は、二量体および四量体の状態のマンノース−６−リン酸塩特異的受容体の分離、ならびに受容体のオリゴマー化がリガンド結合の影響を受けるかどうかを探るために受容体試料を５ｍＭのマンノース−６−リン酸塩とｐＨ７．５でインキュベートする実験について開示しているＷａｈｅｅｄ他の参考文献Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２９，２４４９−２４５５（１９９０年）に基づくものである。
【００１０】
発明は組成物それ自体、並びに、諸線維性障害の予防または軽減、特にヒトおよび動物の創傷治癒に対する使用に関する。
【００１１】
本発明は、世界各国の特許法が容認する範囲において、上記組成物を医学的に使用することを含むものである。従って、欧州においては、本発明は、諸線維性障害の予防または治療のための、特に創傷治癒のための薬剤の製造に当組成物を使用することを含んでいる。米国およびオーストラリアにおいては、本発明は、予期される線維性障害部位または実際の線維性障害部位、特に創傷部位に対し、上記疾患の予防または治療に有効量の、特に創傷における瘢痕形成を阻止するのに有効量の本発明の組成物を適用することを含めた、ヒトまたは動物における諸線維性障害の予防法または治療法が含まれる。
【００１２】
本発明は眼の創傷の治療用として特に重要であって、従って眼に好適なゲル剤もしくは軟膏剤を一定量適用するためのまたは点眼薬を一定量適用するためのディスペンサを提供するものであり、そのディスペンサは本発明の組成物を収容する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】唯一の図面は、横座標（ｘ軸）のｐＨに対して縦座標（ｙ軸）にＭ６Ｐ添加前のｐＨが７．４であるリン酸緩衝食塩水中に溶解したマンノース−６−リン酸一ナトリウムのモル濃度を示したプロットである。
【００１４】
好ましい実施の態様の説明
Ｍ６Ｐは遊離リン酸、または製剤上許容し得る遊離リン酸の１もしくは２つの基を持つ塩、例えばナトリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩もしくはバリウム塩などの状態で存在することができる。また、少なくとも一個のＭ６Ｐ残基、好ましくは少なくとも二個のＭ６Ｐ残基を含むポリマーの状態でも存在することができる。二糖Ｍ６Ｐ残基または多糖Ｍ６Ｐ残基は、隣接するＭ６Ｐ残基またはその他の糖残基と１，４−または１，６−結合することができる。Ｍ６Ｐモノマーが２０個までのポリマーが予想され、好ましくはモノマー１０個までのポリマーが予想される。Ｍ６Ｐ残基が一個のポリマーの骨格から、また、Ｍ６ＰおよびＨＡのポリマーの骨格から懸垂しているようなものも含め、その他のポリマーの状態も考えられる。また、Ｍ６Ｐはときとして生物学的前駆体の状態、すなわちｉｎ ｓｉｔｕで（身体に適用後）Ｍ６Ｐに転化する化合物の状態であることもある。これは、例えばＭ６Ｐの糖アルコール基を適切な酸と結合させてエステルを生成することによって達成することができ、このような場合このエステル結合はＭ６Ｐのリン酸塩結合より容易に加水分解され得る。加水分解条件下、酵素条件下またはその他の治療対象となる線維性障害状態の身体の適切な部位、特に皮膚の創傷部位において支配的な条件下でＭ６Ｐを放出する化合物のその他の形態については化学者等には明白であろうし、また、それらは本発明の目的であるＭ６Ｐの定義に含まれる。以下簡潔にするために、主としてＭ６Ｐそれ自体を参照することによって本発明を説明する。同様の原理は、必要な変更を加えることにより前述したその他のＭ６Ｐ共与化合物にも当てはまる。
【００１５】
Ｍ６Ｐ化合物は、それが液剤であれまたは懸濁剤であれ、何らかの適合性のアルカリによって、特に水酸化ナトリウムによってｐＨ調整され、その濃度が好ましくは２０ｍＭ以上、特に５０ｍＭ以上、また、最も好ましくは６５〜３００ｍＭとなるように製剤化される。最適濃度は８０〜１２０ｍＭ、特に約１００ｍＭであると思われる。Ｍ６Ｐの好ましい形態はナトリウム塩であるが、濃度についてはＭ６Ｐのその他の形態にも当てはまる。ポリマーの場合、モル濃度はＭ６Ｐ残基と関係するであろうし、生物学的前駆体の場合には、Ｍ６Ｐ当量のモル濃度に基づくであろう。例えば、１モルの前駆体が１モルのＭ６Ｐを遊離させる場合は、前駆体のモル濃度は前述のとおりであり、一方１モルの前駆体が２モルのＭ６Ｐを遊離させる場合は、前駆体のモル濃度は半減する。
【００１６】
もしｐＨ調整をしなければ、これら製剤の多くは望ましくない酸性のｐＨ値を有することになろう。リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中でさえ、６５ｍＭのＭ６Ｐ一ナトリウムのｐＨ値は６．４５程度まで低くなる。Ｍ６Ｐ濃度を高めてもさらに低いｐＨ値しか得られない。このように、図面で詳説される、ｐＨ７．４のＰＢＳに溶解したＭ６Ｐ一ナトリウムを使用した特別の場合には、曲線の上方にあってｐＨ６．５を境にして右側を占める領域Ｂは、ｐＨ調整しなければｐＨ６．５未満となりうるＭ６Ｐ（６０ｍＭ以上）の濃度を表している。曲線の上方にあってｐＨ６．５から左側を占める領域Ａは、ｐＨ調整しなければｐＨ６．５を上回るであろうＭ６Ｐ（６０ｍＭ未満）の濃度を表している。従って、濃度６０ｍＭ以上のＭ６Ｐ一ナトリウムを溶解したＰＢＳ溶液は、ｐＨ値を６．５以上に高めるためにｐＨ調整が必要となる。濃度が比較的低いＭ６Ｐ一ナトリウムのＰＢＳ溶液の場合は、ｐＨ調整しなくとも６．５以上のｐＨ値が得られるが、より好ましい範囲のｐＨ７．０〜７．５のｐＨ値を得るためにｐＨ値を高めるのが好ましく、従って本発明は、Ｍ６Ｐの濃度にかかわらずｐＨ値を高めることを要件とする。Ｍ６Ｐはアルカリ性のｐＨ値で加水分解されるため、ｐＨ値の上限は約８であるが、高くても７．５程度が良いと言えよう。
【００１７】
Ｍ６Ｐにヒアルロン酸（ＨＡ）を添加した製剤は創傷治癒によい効果をもたらす。すなわち、ＨＡは単に不活性担体として作用するだけでなく、明白な効果を及ぼす補助成分としても作用する。ＨＡを単独で使用しても創傷治癒を促進しないので、これは驚くべき効果である。ＷＯ９３／１８７７７の研究結果とは反対に、粘性の懸濁剤として製剤化したＨＡ中のＭ６Ｐ濃度が高くなると、創傷治癒に卓越した効果が得られる。ｐＨ調整したＭ６Ｐをヒアルロン酸（ＨＡ）を添加して製剤化した場合、Ｍ６Ｐの供給を高めることができる。
【００１８】
ＨＡの分子量は、７００，０００〜３０００，０００の範囲にわたる種々の平均分子量のいずれであってもよいが、好ましくは７５０，０００〜２２５０，０００であり、最も好ましくは１０００，０００〜１７５０，０００である。好適な粘性が得られるように製剤化されるため、一般にＨＡの平均分子量が大きくなればなるほど、必要とされるＨＡの濃度は低くなる。しかし、ＨＡの分子量が小さければ小さいほど製造は一層容易になる。平均分子量が１．３×１０６のＨＡを使用することが好ましい。平均分子量が１×１０６〜１．５×１０６のＨＡの濃度は、重量で組成物総量の０．５〜２％の範囲にあることが好ましい。ゲルの粘性は、２０，０００〜５０，０００センチポワズの範囲内であることが好ましく、特に２０，０００〜３０，０００センチポワズの範囲内であることが好ましい。
【００１９】
Ｍ６Ｐは、（ａ）創傷に無害であり（「生体適合性」）、（ｂ）非炎症性であって（創傷部位に炎症を起こさない）、さらに（ｃ）創傷部位に吸収され得る（「生体吸収性」または「生体再吸収性」）ようなポリマーと共に、本発明の組成物に製剤化される。本発明の組成物は、前述した好ましい範囲内にある一定濃度のＭ６Ｐを、適用から少なくとも３日間にわたって、好ましくは少なくとも７日間にわたって放出することができるはずである。このような好適なポリマーの例として、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリガラクチド、ポリラクチド、およびポリ炭酸メチレンが挙げられる。一方、メチルセルロースやポリアクリル酸は炎症を引き起こすため不適当である。
【００２０】
本発明の組成物は、考えられるいかなる形態にも調製することができる。例えば、ゲル剤、クリーム剤、ローション剤または軟膏剤として局所投与するのに適合させることができる。これらは従来の方法で製剤化され、水性または油脂性の賦形剤または担体を含み、さらに創傷治療において一般的な防腐薬およびその他の作用薬もふくむことができる。また、例えば生理食塩水（０．９％ｗ／ｖＮａＣｌ）など、従来の溶媒のいずれか適切なものと共に処方することができる、滅菌の注射可能なまたは注入可能な液剤として処方することもできる。しかし、Ｍ６Ｐとヒアルロン酸（ＨＡ）の配合剤に特有の形態は粘性のゲル剤であることは、理解されよう。
【００２１】
本発明の組成物を適用する方法として特に簡便な方法は、例えばコラーゲン、アルギン酸ナトリウムまたはポリ塩化ビニルの包帯、硬膏、吸収パッド、またはポリマー包帯もしくはヒドロゲル包帯などの、含浸またはコーティングを施した創傷用包帯による方法である。包帯は普通滅菌条件下で、使用に備えた状態で保管される。内臓への治療の場合、担体としてのポリマーと本発明の組成物を含むインプラントが提案される。
【００２２】
本発明は、手術によって生じたものであるかどうかに関わらず、主として重症の擦過傷、裂傷および熱傷を含めた皮膚の創傷に関連するが、例えば皮膚の光線傷害、ケロイド、肥厚性瘢痕、腱傷害、挫滅損傷（crush injury）、緑内症手術の結果起こる増殖性硝子体網膜症および瘢痕化などその他の外傷、例えば卒中または神経手術の結果起こり瘢痕組織を残す中枢神経系（ＣＮＳ）損傷、例えば腹膜癒着または腹部もしくは骨盤の大手術の結果起こる癒着などの組織癒着、例えば表皮水疱症などの水疱を起こしている皮膚疾患における瘢痕化、皮膚硬化症、全身性硬化症、肝臓および肺線維症、ならびに例えばＷＯ９１／０４７４８（Ｌａ Ｊｏｌｌａ）に関連して言及されるような疾患などにも適用できる。
【００２３】
本発明の特に重要な態様は、眼に関連した線維性障害にいたる組織異常症、特に、術後の緑内症性再発、または眼組織の剥離が網膜の収縮としわを伴って線維形成する場所に起きる網膜上膜形成、または損傷の結果起こる角膜の瘢痕化などにいたる組織異常症の治療にある。本発明は、特にＭ６Ｐの滅菌点眼液剤を含む。それらの液剤は、点眼薬供給ノズルを備えた圧搾可能プラスチックボトルなどのディスペンサから適用されるか、またはふたに容器内部に延びるスポイトを取付けた、ふた付き容器から適用される。ゲル剤や軟膏剤は、眼製剤で一般に使用されている小径のノズルを備えたチューブから投薬することができる。
【００２４】
本発明の別の重要な態様は、皮膚創傷、ならびに例えばケロイドや肥厚性瘢痕などの皮膚創傷に関連して起こる線維性障害の治療にある。本発明の製剤は創傷治癒を促進し、また、瘢痕形成を減じる。腱や靭帯の治癒も本発明によって改善される。
【００２５】
本発明の組成物の投与形態は、例えば、創傷に対して局所的に（内側および／またはその周囲に）適用する様式であるが、患部組織により良く到達させるために、妥当である場合には、
例えば腱注射などの皮下もしくは皮内もしくは組織内注射、または移植が必要となることもある。極端な場合、筋内注射、静脈注射または眼球内注射が得策であることもある。Ｍ６Ｐは、少なくとも治療開始後最初の３日間患部に適用することが好ましく、一日少なくとも２回適用することが好ましい。
【００２６】
本発明を次に述べる例によってより詳しく説明する。「Ｂｉｏｃｌｕｓｉｖｅ」は登録商標である。Ｍ６Ｐは終始一ナトリウム塩として使用した。
【実施例】
【００２７】
ラットにおけるマンノース−６−リン酸塩の創傷治癒効果
方法
体重２５０ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの雄の背面皮膚を、長さ１ｃｍ、筋肉層に達する深さで、直線状に４箇所、切り始めから切り終りまで同じ太さになるように（full thickness）切開した。中線から両側に１ｃｍ、頭蓋底部から５ｃｍおよび８ｃｍの部位を切開した。中線とは、頭部から尾部にかけて背骨に沿って引かれる、動物の身体の縦軸の線である。従って、創傷は背骨に対して長さ方向に平行であった。創傷が二次治癒するように未縫合のまま放置した。どの時点でも、各治療群には少なくとも４匹の動物を使用した。どの動物にも必ず対照となる創傷を負わせた。「治療群」とは、同一群内の各動物が受けた治療を指す。特に治療される各創傷の動物上の位置は、なんらかの位置効果があることを考慮して、実験を繰り返すごとにローテーションした。各時点において４匹の動物を無作為で二つの治療群の各々に割り当て、創傷を負わせる前（第０日目）および創傷を負わせた後の第０日目から第７日目までの毎日、１００μｌの注射剤を注射した（創傷の両脇に５０μｌずつ）。対照とする創傷にはＰＢＳのみを注射した。創傷
を負わせた後第８０日目に、創傷を採取した。創傷の採取は周囲組織から切徐して行った。各創傷は二分され、創傷の半片は市販の包埋媒体「ＯＣＴ」に入れて急速に凍結し、冷凍切片として免疫染色用とし、他の半片はワックス包埋して組織学的に使用する目的でホルムアルデヒド中で固定した。ワックス切片をヘマトキシリンとエオシンを用いて、また、ピクロシリアスレッド（picrosirius red）、ならびにマッソンリールの３色（Massons Lille trichrome）を用いて規定通りの手順で染色し、瘢痕の質が評価できるようにコラーゲン線維の厚さ、密度および配向を見た。
【００２８】
組織学的に使用する切片（創傷一つ当たり４〜１０個）を採取し、訓練を受け認可された研究員が目視アナログスケール（visual analogue scale）に従ってスコアリングした。目視アナログスケールとは１０ｃｍの線であって、一端（０）は正常な皮膚を表し、他端（１０）は最もひどい瘢痕を表す。二人の訓練を受けた研究員のスコアを平均して一つのスコアとし、次いでそれを各創傷に割り当て、創傷の数（ｎ）分のスコアの平均値を求めた。
【００２９】
Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用に対するｐＨの効果
ＰＢＳ溶液に溶解したＭ６Ｐ液剤のｐＨを測定したところ、
酸性の溶液となっていることが判明した。ｐＨは濃度依存性で、最高濃度の溶液で最も酸性が強かった。Ｍ６Ｐの濃度が１００ｍＭおよび３００ｍＭのとき、溶液のｐＨはそれぞれ６．２および５．５であった。観察されたＭ６Ｐの創傷治癒に対する初期抑制効果は、モル浸透圧濃度によるものでなくｐＨ値の低さによるのかどうかを決定するために、実験を行った。
【００３０】
Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用に及ぼすｐＨ値の影響を、生理学的ｐＨ値にて一定範囲の濃度のＭ６Ｐをラットに投与して調査した。Ｍ６Ｐを、適量の滅菌二重蒸留水（double-distilled water）の半量に溶解し、１０ＭのＮａＯＨを極少量、約１０μｌ添加してそのｐＨを７．４に調整した。微調整は１Ｍ ＮａＯＨを用いて行い、ｐＨをｐＨ計でチェックした。次いで、２倍濃度の滅菌ＰＢＳを用いて必要量の液剤を調製した。ｐＨを再チェックし、ｐＨが依然７．４のままであることを確認した。次いで、使用前にこの液剤を濾過滅菌した。前述したように、Ｍ６Ｐを皮内注射によって創傷に投与した。創傷を負わせる前（第０日）および創傷を負わせた後の７日間、毎日Ｍ６Ｐをすべての濃度で適用した。１時点当たり４匹の動物を二つの治療群に無作為に割り当て、四つの創傷を、それぞれＰＢＳのみ、１０ｍＭＭ６Ｐ、２０ｍＭＭ６Ｐおよび３００ｍＭＭ６Ｐの注射
剤で、またはそれぞれＰＢＳのみ、５０ｍＭＭ６Ｐ、１００ｍＭＭ６Ｐおよび２００ｍＭＭ６Ｐの注射剤で治療した。創傷を負わせた後第１日目、第３日目、第７日目および第８０日目に、創傷を採取した。
【００３１】
高濃度のＭ６Ｐであっても創傷治癒に有害な影響は一切なく、概ね、高濃度のＭ６Ｐは瘢痕化を最も縮小させるという結果になった。Ｍ６Ｐの抗瘢痕化作用は、２０ｍＭ濃度のＭ６Ｐを適用した時点で明らかであったが、濃度を１００ｍＭまで高めると瘢痕の質はさらに改善された。１００ｍＭを上まわる濃度では、瘢痕化のそれ以上の一貫した改善は観察されなかったが、治癒過程になんら有害な影響も見られなかった。このことから、先に報告されたような高濃度のＭ６Ｐにおける効果の低減はモル浸透圧濃度に起因するものではなく、最適以下のｐＨを使用したことに起因することが分かり、また、本発明のｐＨ調整後の最適用量は１００ｍＭであることが分かる。
【００３２】
創傷後７日間では、血管形成の減少、創傷のフィブロネクチン濃度の減少、ならびに単核細胞およびマクロファージの浸潤の減少がすべて、ｐＨ７．４のＭ６Ｐで治療した創傷に観察された。これらの影響は用量依存性であって、すなわち用量が増すとその影響も大きく、創傷部位のＴＧＦβ活性の減少と一致
した。創傷後３日間では、創傷のフィブロネクチン濃度はＭ６Ｐで治療した創傷において最も高く、一方ＰＢＳのみで治療した創傷はこの時点でフィブロネクチンをほとんど含有していなかった。このような影響は、Ｍ６Ｐで治療した創傷において治癒速度が速くなることと一致する。
【００３３】
モル濃度を一定にし（１００ｍＭ）、ｐＨ値を変えながら（５．５、７．４、９．５）同様な方法でさらに実験をすすめた。
【００３４】
Ｍ６Ｐが有効な抗瘢痕化剤であること、また、液剤のｐＨがｉｎ ｖｉｖｏでのこの分子の活性に決定的に重要であることが立証された。最も有効な治療は、約１００ｍＭのＭ６Ｐを有意量、創傷後長期間（第０日から第７日まで）にわたって投与することであると思われる。
【００３５】
これらの実施例の主な結果を以下に表で表す。
【００３６】
目視アナログスケールを用いた平均スコア
創傷後８０日目に採取した組織切片の瘢痕の質について、二人の訓練を受けた観察者が、基準点無しの、０＝正常な皮膚および１０＝最悪の瘢痕とする１０ｃｍ目視アナログスケールを用い、そのスコアを記録した。
【００３７】
【表１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルカリでｐＨ６．５〜８にｐＨ調製され、マンノース−６−リン酸塩特異的受容体を含有する組成物を除くマンノース−６−リン酸のナトリウム塩の液剤または懸濁剤を含む組成物。
【請求項２】
ｐＨが６．５〜７．５である請求の範囲第１項に記載の組成物。
【請求項３】
ｐＨが７〜７．５である請求の範囲第２項に記載の組成物。
【請求項４】
マンノース−６−リン酸のナトリウム塩の濃度が５０〜４００ｍＭである請求の範囲第１項から第３項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
濃度が６５〜３００ｍＭである請求の範囲第４項に記載の組成物。
【請求項６】
濃度が８０〜１２０ｍＭである請求の範囲第５項に記載の組成物。
【請求項７】
創傷内またはその周囲に保持するに好適な粘性のゲル剤を提供できるだけの、有効濃度のヒアルロン酸をさらに含む請求の範囲第１項から第６項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
滅菌状態にある請求の範囲第１項から第７項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
創傷治癒に使用することを目的とした請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
眼の創傷治癒に使用することを目的とした請求の範囲第８項に記載の組成物。
【請求項１１】
請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物をコーティングまたは含浸させた創傷用包帯。
【請求項１２】
眼に投与することを目的としてゲル剤、軟膏剤または点眼剤として製剤化された請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
眼に好適なゲル剤もしくは軟膏剤を一定量投与するための、または点眼剤を一定量投与するためのディスペンサであって、請求の範囲第１２項に記載の組成物を収容するディスペンサ。
【請求項１４】
創傷に投与する薬剤の製造における、請求の範囲第１項から第１２項のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
眼に投与する薬剤の製造における、請求の範囲第１２項に記載の組成物の使用。
【請求項１】
アルカリでｐＨ６．５〜８にｐＨ調製され、マンノース−６−リン酸塩特異的受容体を含有する組成物を除くマンノース−６−リン酸のナトリウム塩の液剤または懸濁剤を含む組成物。
【請求項２】
ｐＨが６．５〜７．５である請求の範囲第１項に記載の組成物。
【請求項３】
ｐＨが７〜７．５である請求の範囲第２項に記載の組成物。
【請求項４】
マンノース−６−リン酸のナトリウム塩の濃度が５０〜４００ｍＭである請求の範囲第１項から第３項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
濃度が６５〜３００ｍＭである請求の範囲第４項に記載の組成物。
【請求項６】
濃度が８０〜１２０ｍＭである請求の範囲第５項に記載の組成物。
【請求項７】
創傷内またはその周囲に保持するに好適な粘性のゲル剤を提供できるだけの、有効濃度のヒアルロン酸をさらに含む請求の範囲第１項から第６項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
滅菌状態にある請求の範囲第１項から第７項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
創傷治癒に使用することを目的とした請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
眼の創傷治癒に使用することを目的とした請求の範囲第８項に記載の組成物。
【請求項１１】
請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物をコーティングまたは含浸させた創傷用包帯。
【請求項１２】
眼に投与することを目的としてゲル剤、軟膏剤または点眼剤として製剤化された請求の範囲第１項から第８項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
眼に好適なゲル剤もしくは軟膏剤を一定量投与するための、または点眼剤を一定量投与するためのディスペンサであって、請求の範囲第１２項に記載の組成物を収容するディスペンサ。
【請求項１４】
創傷に投与する薬剤の製造における、請求の範囲第１項から第１２項のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１５】
眼に投与する薬剤の製造における、請求の範囲第１２項に記載の組成物の使用。
【図１】
【公開番号】特開２００９−２２１２２０（Ｐ２００９−２２１２２０Ａ）
【公開日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１２９９８７（Ｐ２００９−１２９９８７）
【出願日】平成２１年５月２９日（２００９．５．２９）
【分割の表示】特願平１０−５０９４７２の分割
【原出願日】平成９年７月３１日（１９９７．７．３１）
【出願人】（５０９１２７９８５）ビー・テイー・ジー・インターナシヨナル・リミテツド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月２９日（２００９．５．２９）
【分割の表示】特願平１０−５０９４７２の分割
【原出願日】平成９年７月３１日（１９９７．７．３１）
【出願人】（５０９１２７９８５）ビー・テイー・ジー・インターナシヨナル・リミテツド (1)
【Ｆターム（参考）】
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